CN108605831B - 一种了哥王组培苗快速生根的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种了哥王组培苗快速生根的方法，特别是一种野生药用植物了哥王（Wikstroemia indica Linn）组培苗快速生根及瓶外移栽的方法。属于野生药用植物种苗繁殖技术领域。本发明方法包括基质的选取与配制、接种、培养、炼苗移栽四个阶段，具有操作简单、生产成本低、生根快、成活率高等优点，解决了了哥王组培苗生根困难、成活率低等问题。本发明为了哥王工厂化、规模化育苗提供技术支撑，对保护了哥王野生资源、保证药源，实现资源的可持续利用具有重要意义。

Description

一种了哥王组培苗快速生根的方法

技术领域

本发明涉及一种以了哥王组织苗快速生根的方法。特别是一种利用野生药用植物了哥王（Wikstroemia indica Linn）组培苗进行瓶内快速生根基质及生根移栽的方法。属野生药用植物种苗繁殖技术领域。

背景技术

了哥王（Wikstroemia indica Linn, 又名Indian stringbush）属瑞香科荛花属植物，以根、茎、叶及果实入药，有毒，具有清热解毒、消肿散瘀、治瘰疬、肿痛的功效。同时了哥王叶片较小，树冠低矮呈圆形，果实成熟时为红色，是一种很有观赏价值的植物。过去，许多大型制药厂主要依靠野生资源制药，但由于需求量大，许多原丰产地（如井冈山、南岭等）面临资源枯竭。为了保证制药厂原材料供应和持续利用了哥王资源，急需开展了哥王人工培育。

了哥王主要采用播种育苗，无性繁殖技术尚处于研究阶段。据报道，了哥王种子发芽慢，发芽率低（仅为8%左右），种子育苗较难，难以满足生产上对了哥王种苗的需求。利用组培快繁技术进行规模化种苗繁育，对保护了哥王野生资源、保证药源，实现资源的可持续利用、良种快繁与推广具有重要意义。

据文献报道了哥王组织培养都是使用琼脂固体培养基，但是通过生产实践分析发现，琼脂固体培养基上生根易引起基质透气性差、移栽时根系常被损伤、成活率低等问题，成为了哥王种苗扩繁及大规模推广应用的瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于提供一种了哥王组培苗生根基质及生根移栽的方法。本方法通过生根基质选择配制、接种、培养和炼苗移栽等到技术环节的调控，能有效实现了哥王组织苗快速生根。

本发明是通过以下技术方案实现的：

1.一种了哥王（Wikstroemia indica Linn）组培苗快速生根的方法，其特征在于包含下列步骤：

A. 生根基质配制：取珍珠岩和蛭石，按体积比2:1混匀基质，装进洗净晾干的组培瓶中，基质厚度控制在3～4cm；按照1/2MS培养基配方，加30g/L蔗糖和3.0 mg/L IBA，配好液体培养基(pH值5.8～6.0)；取配制好的液体培养基浸湿组培瓶中的基质，盖好瓶盖，灭菌；灭菌条件为121℃ 30 min；

B. 接种：取了哥王组培无菌苗，切取2～3cm生长健壮的新梢（带2个腋芽）正向插入基质中，每瓶接种2-3段，盖好瓶盖。

C．培养：将接种茎段的培养瓶置于培养架上，培养室条件：温度为26（±1）℃，光照强度为1300-1800 lx，光照时间为12 h/d。

D.1）取培养50天后的组培苗采用逐渐开瓶炼苗的方式分别在组培室和温室中炼苗；2）在组培室内将瓶盖打开1/5炼苗10d，随后将其移至温室置于散射光下(白天25～28℃，晚间15～20℃)继续炼苗5～10d，在此期间瓶口由打开1/5 开口逐渐开大，此过程可适量向瓶内洒些无菌水，防止植株萎蔫；3）待瓶口完全打开后，直接带基质移出组培苗，分株后移栽于装有消毒的泥炭土、黄土与河沙(1：1：1)混合基质的育苗杯或无纺布袋，分株时注意不要伤到根部；4）移栽后在温室中培养至组培苗成活、生长稳定后，移至温室外，进行正常栽培管理。

本发明的优点在于：通过采用生根基质选择配制、接种、培养和炼苗移栽相结合的配套技术，能够实现了哥王组培快速生根。本发明技术方法操作简单，成本较低，适宜于实际生产推广应用。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案更清楚明白，本发明用具体实例对了哥王组培苗生根基质选择配制、接种、培养及炼苗移栽等技术的研究筛选过程进行了充分的说明，以证明本研究成果的正确性，但并非说明本发明仅限用于这些例子。

了哥王组培苗不同生根基质筛选研究

为探索了哥王组培苗生根最适宜基质，本研究分别以珍珠岩、蛭石、珍珠岩：蛭石1:1、珍珠岩：蛭石2:1、琼脂等为生根基质。生根培养容器为100 mL三角瓶，各生根基质均须经高压蒸汽灭菌后备用。其中（1）珍珠岩、蛭石、珍珠岩：蛭石1:1、珍珠岩：蛭石2:1处理均为：先在三角瓶中加40 mL淘洗干净的基质，然后添加培养液（MS+蔗糖30 g/L+IBA 1.0 mg/L，pH值为5.8，下同），以基质能够被培养液完全浸透、而又无过剩溶液溢出为准。（2）琼脂处理：常规固体生根培养基，配方为MS+蔗糖30 g/L+IBA 2.0 mg/L+琼脂8.0 g/L，pH 值为5.8，每瓶40 mL。选取生长一致的了哥王不定芽，切成带顶芽及2个腋芽的3-4cm的单苗，接种至生根基质中，每瓶2-3株无根单苗，每处理接种10瓶。接种后的材料在光照强度1300～1800 lx，光照12 h/d，温度24℃下培养，40 d时观察比较各处理的发根时间、发根数、根系长度和苗的生长情况。

通过试验比较发现：从生根率看，以混合基质珍珠岩:蛭石=2:1生根率最高，达95.8%，显著高于其他的基质；混合基质珍珠岩:蛭石=1:1次之，为89.5%；生根率最低的基质为琼脂，仅为73.6%，与其他处理存在显著差异。从生根时间看，混合基质珍珠岩:蛭石=2:1生根最快，仅需12天已见根系萌出，40天观察发现根系条数显著高于其他处理，主根系粗壮，细根发达。表明混合基质珍珠岩:蛭石=2:1为了哥王组培苗生根最适基质。

表1 了哥王组培苗不同生根基质生根效果比较

注: 同一列上不同的字母，分别表示在P<0.05水平上的差异显著性，下同。

了哥王组培苗生根基本培养基筛选研究

为筛选出了哥王组培苗生根培养中最佳基本培养基种类，本研究以蛭石：珍珠岩（2:1）为生根基质，选取在培养基中生长一致的了哥王不定芽，分别接种至MS、1/2MS、1/4MS、WPM、1/2WPM，5种培养基均添加IBA 2.0 mg/L进行培养。选取生长一致的了哥王不定芽，切成带顶芽及2个腋芽的3-4cm的单苗，接种至生根基质中，每瓶接种2-3株无根单苗，每处理接种10瓶。接种后的材料在光照强度1300～1800 lx，光照12 h/d，温度24℃下培养，40d时观察比较各处理的发根时间、发根数、根系长度和苗的生长情况。

通过比较发现：五种培养基对了哥王组培苗生根均有明显的促进作用，其中以1/2MS效果最佳，表现为接种后10-11天根系就开始萌动，接种40d生根率达94.4%，平均根数为12.8条，根系平均长6.89cm，与其他处理具有极显著差异；以WPM、1/2WPM为基础培养基时，生根慢，生根率低，根系纤细。因此，选择1/2MS作为了哥王组培苗生根培养的最佳基本培养基。

表2 不同基本培养基对了哥王组培苗生根效果比较

生根培养中生长素种类和浓度筛选研究

为了筛选出生根培养中最佳生长素种类和浓度。本研究以蛭石：珍珠岩2:1为生根基质，1/2MS+30g/L蔗糖为基本培养基，分别附加生长素IBA（0、0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L)和NAA（0、0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L)。选取生长一致的了哥王不定芽，切成带顶芽及2个腋芽的3-4cm的单苗，接种至生根基质中，每瓶接入2-3株无根单苗，每个处理10瓶。接种后的材料在光照强度1300～1800 lx，光照12 h/d，温度24℃下培养，40 d时观察比较各处理的发根时间、发根数、根系长度。

通过比较发现：添加IBA和NAA对诱导生根有显著效果。在IBA和NAA添加浓度较低时，在相同浓度下，IBA的效果要好于NAA。在含有3 mg/L IBA的培养基中培养40d时，生根的各项指标均优于含有NAA mg/L时的指标。添加IBA 3.0mg/L，生根率达到97.8%，平均根数14.75条，平均根长7.92cm，生根平均时间仅为9.4d，诱导的主根粗壮、细根发达、植株长势旺盛。因此，MS+IBA3.0 mg/L是适宜的生根培养基。

表3 不同生长调节剂对了哥王组培苗生根的影响

生长调节剂（mg/L）	生根率（%）	生根时间（d）	平均根数（条）	平均根长（cm）
					0	30.2±3.4h	25.3±2.7a	3.31±0.75i	2.51±0.32g
IBA0.5	70.8±2.7f	20.5±1.6b	8.32±0.12f	4.14±0.21e
					IBA1.0	83.3±1.6d	14.2±1.3e	9.96±0.32d	4.82±0.29d
IBA2.0	94.4±1.3b	10.3±1.2g	12.80±0.19b	6.89±0.53b
					IBA3.0	97.8±1.2a	9.4±1.0g	14.75±0.43a	7.92±0.21a
NAA0.5	42.31±2.8g	15.8±1.4d	4.13±0.28h	3.34±0.17f
					NAA1.0	43.75±1.6g	15.4±2.5de	6.43±0.11g	3.88±0.22e
NAA2.0	73.52±3.3e	18.6±1.8c	9.24±0.24e	4.12±0.15e
					NAA3.0	85.62±2.1c	12.4±1.1f	10.65±0.43c	5.91±0.33c

了哥王组培苗生根培养条件研究

为了摸清了哥王组培苗生根培养的最佳培养条件，本研究以蛭石：珍珠岩2:1为生根基质，1/2MS+30g/L蔗糖+3.0 mg/L IBA为基本培养基（pH值5.8～6.0)。设置5种不同的培养温度（18℃、22℃、26℃）、光周期（12h/d、14h/d、16h/d）进行培养。选取生长一致的了哥王不定芽，切成带顶芽及2个腋芽的3-4cm的单苗，接种至生根基质中，每瓶接入4-5株无根单苗，每个处理10瓶。接种后的材料在光照强度1300～1800lx培养，40d时观察比较各处理的生根率、生根时间、发根数、根系长度和苗生长状况。

通过比较发现，处理5、7和8生根培养显著优于其他处理，表现为接种后9-11天就开始生根，平均生根条数12-14条，根长可达5-7cm，植株整体表为生长快，茎杆和主根系粗且发达，苗壮；生根培养效果较好的处理为4、6和9，表现为生根率显著低于处理5、7和8，植株生长较慢，苗较细弱；在所有处理中处理1生根培养效果最差，表现为生长慢，茎细，苗较弱。研究结果表明了哥王生根培养需要较高的温度和较长的光照时间，适宜光照时间为12～14 h/d，光照温度为22～26℃，因考虑成本的问题，建议了哥王生根培养条件为光照时间为12h/d，光照温度为26℃，光照时间12 h/d 较为适宜。

表4 不同培养条件对了哥王组培苗生根培养效果比较

处理

培养条件

生根率(%)

平均生根时间(d)

发根数

平均根长(cm)

苗生长状况

1

18℃+12h/d

72.6±2.4i

17.4±1.3ab

6.83±0.47fg

3.64±0.21g

生长慢，茎细，苗弱

2

18℃+14h/d

80.2±1.6g

15.7±2.1b

6.57±0.32g

4.74±0.41e

生长较慢，茎较细，苗较弱

3

18℃+16h/d

76.4±2.9h

18.1±3.6a

7.14±0.38f

4.43±0.27f

生长慢，茎细，苗弱

4

22℃+12h/d

85.6±1.7e

13.6±2.2c

10.4±0.57d

5.73±0.32c

生长较快，茎较粗，苗较壮

5

22℃+14h/d

92.3±2.6c

11.5±1.8de

12.21±0.41b

6.74±0.41b

生长快，茎粗，苗粗壮

6

22℃+16h/d

82.1±3.1f

12.5±2.5cd

7.54±0.63e

4.27±0.38f

生长较快，茎较粗，苗较壮

7

26℃+12h/d

98.6±1.4a

9.3±1.1f

14.23±0.52a

7.64±0.53a

生长快，茎粗，苗粗壮

8

26℃+14h/d

94.4±3.5b

10.4±1.7ef

12.32±0.76b

5.43±0.42d

生长快，茎粗，苗粗壮

9

26℃+16h/d

89.6±2.1d

10.7±1.9def

11.57±0.33c

4.36±0.23f

生长快，茎粗，苗粗壮

本发明提供了一种了哥王组培苗快速生根及移栽的方法。对于保护了哥王保野生资源，提高人工繁殖效率，促进了哥王种苗规模化、工厂化人工培育具有现实意义。

Claims (1)

1.一种了哥王组培苗快速生根的方法，其特征在于包含下列步骤：

A.生根基质配制：取珍珠岩和蛭石，按体积比2:1混匀基质，装进洗净晾干的组培瓶中，基质厚度控制在3～4cm，按照1/2MS培养基配方，加30g/L蔗糖和3.0mg/LIBA，配好液体培养基，取配制好的液体培养基浸湿组培瓶中的基质，盖好瓶盖，灭菌；灭菌条件为121℃30min；

B.接种：取了哥王组培无菌苗，切取2～3cm生长健壮且带2个腋芽的新梢正向插入基质中，每瓶接种2-3段，盖好瓶盖；

C.培养：将接种茎段的培养瓶置于培养架上，培养室条件：温度为26±1℃，光照强度为1300-1800lx，光照时间为12h/d；

D.1)取培养50天后的组培苗采用逐渐开瓶炼苗的方式分别在组培室和温室中炼苗，2)在组培室内将瓶盖打开1/5炼苗10d，随后将其移至温室置于散射光下，温度控制在白天25～28℃，晚间15～20℃，继续炼苗5～10d，在此期间瓶口由打开1/5开口逐渐开大，此过程可适量向瓶内洒些无菌水，防止植株萎蔫，3)待瓶口完全打开后，直接带基质移出组培苗，分株后移栽于装有消毒的泥炭土、黄土与河沙混合基质的育苗杯或无纺布袋，分株时注意不要伤到根部，4)移栽后在温室中培养至组培苗成活、生长稳定后，移至温室外，进行正常栽培管理；

步骤A中，所述配制好的液体培养基的PH值为5.8～6.0；

步骤D中，所述消毒的泥炭土、黄土与河沙混合基质中，消毒的泥炭土：黄土：河沙＝1：1：1。