CN104365485A

CN104365485A - 一种光皮桦组培苗生根基质及其生根移栽的方法

Info

Publication number: CN104365485A
Application number: CN201410731267.8A
Authority: CN
Inventors: 牛明月; 林二培; 黄华宏; 董人珲; 童再康; 楼雄珍
Original assignee: Zhejiang A&F University ZAFU
Current assignee: Zhejiang A&F University ZAFU
Priority date: 2014-12-05
Filing date: 2014-12-05
Publication date: 2015-02-25
Anticipated expiration: 2034-12-05
Also published as: CN104365485B

Abstract

一种光皮桦组培苗生根基质及其生根移栽的方法，属于植物无性繁殖技术领域。其特征在于：所述基质为泥炭、珍珠岩和蛭石混合物，并用MS+蔗糖的液体培养基浸湿。其生根移栽主要包括基质的选取与配制、接种、培养、炼苗移栽等步骤。本发明的有益效果是：（1）选用一种基质代替传统的琼脂固体培养基，不影响光皮桦组培苗的正常生长，炼苗移栽成活率达到95%；（2）本方法操作简便，所采用的培养基及基质成本低廉，易于获取，降低了生产成本；（3）由无菌组织培养得到的光皮桦组培苗遗传性状稳定，为光皮桦的遗传改良提供基础。

Description

一种光皮桦组培苗生根基质及其生根移栽的方法

技术领域

本发明属于植物无性繁殖技术领域，具体涉及一种组培苗生根基质及生根移栽方法。

背景技术

光皮桦（Betula luminifera H.Wink.），桦木科（Betulaceae）桦木属（Betula）落叶乔木，广泛分布于我国南方，是一种用途广泛的珍贵阔叶用材树种。光皮桦材质优良，生长速度快，经济价值高，多数种质童期较短（1.5年），在材性、成花等性状上具有丰富变异，是林木遗传研究的优良材料。

组织培养技术已经成为植物品种快繁的主要手段之一，选用光皮桦的优良材料，利用组织培养技术进行无性繁殖，简便、迅速且繁殖速度快，既可保持苗木的优良遗传特性，还可以大规模生产，对光皮桦的良种快繁与推广具有重要意义。

以往光皮桦组织培养都是使用琼脂固体培养基，虽然光皮桦组培再生体系日趋完善，但是通过各地生产实践状况分析发现，琼脂固体培养基上生根的光皮桦组培苗移栽时根部容易损伤、根系易受微生物侵染腐烂，导致其移栽成活率很低，成为光皮桦优良种苗扩繁及大规模应用的瓶颈。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种光皮桦组培苗生根基质，以及利用该基质进行生根移栽的方法。

解决上述技术问题的技术方案是按以下步骤进行的：

一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于主要包括如下步骤：）基质的选取与配制；2）接种；3）培养；4）炼苗移栽；

所述步骤1）中基质的主要组分为泥炭、珍珠岩和蛭石；将基质混匀后用MS+蔗糖的液体培养基浸湿；所述步骤1）中基质的主要组分为泥炭、珍珠岩和蛭石；将基质混匀后用MS+蔗糖的液体培养基浸湿；所述液体培养基的pH值为5.88-5.92。

作为优选，所述液体培养基中蔗糖浓度为30g/L。

作为优选，MS液体培养基的配方为：KNO₃：1900mg/L；NH₄NO₃：1650 mg/L；KH₂PO₄：170 mg/L；MgSO₄·7H₂O：370 mg/L；CaCl₂·2H₂O：440 mg/L；KI：0.83 mg/L；H₃BO₃：6.2 mg/L；MnSO₄·4H₂O：22.3 mg/L；ZnSO₄·7 H₂O：8.6 mg/L；Na₂MoO₄·2H₂O：0.25 mg/L；CuSO₄·5 H₂O：0.025 mg/L；CoCl₂·6H₂O：0.025 mg/L；Na₂.EDTA：37.25 mg/L；FeSO₄·7H₂O：27.85 mg/L；肌醇：100 mg/L；甘氨酸：2 mg/L；盐酸硫胺素：0.1 mg/L；盐酸吡哆醇：0.5 mg/L；烟酸：0.5 mg/L。

作为优选，所述基质中泥炭：珍珠岩：蛭石=3:1:1（体积比）。

所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于：所述基质的配制方法如下：

A：取泥炭、珍珠岩和蛭石，按泥炭：珍珠岩：蛭石=3:1:1的体积比将基质混匀，装进提前洗净晾干的组培瓶中，基质厚度控制在3-4cm；

B：按照MS培养基配方，配好液体培养基，加30g/L的蔗糖，完全溶解后，调节pH值至5.88-5.92；

C：取B中的液体培养基浸湿组培瓶中的基质，盖好瓶盖，灭菌；灭菌条件为121℃ 20min ；

D：灭菌后的培养基确保盖子拧紧后放置在接种室或培养室，冷却后使用。

所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于所述步骤2）中的接种方法为：取光皮桦组培无菌苗，每片叶片留一半，把茎段剪成1.5-2cm的小段，每一段必须包含至少1个腋芽，正向插到基质中，每瓶3-4段，然后盖好瓶盖；上述操作均在无菌条件下进行。

所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于所述步骤3）中的培养条件为：将接种茎段的培养瓶整齐摆放在培养架上，每瓶之间的间隔不少于2cm，以保证充足的光照；培养室条件是：光照强度45 μmol·m^-2·s^-1，光照时间16h，温度25±2℃。

所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于所述步骤4）中炼苗移栽的方法如下：

A：取培养2个月后的组培苗进行在温室内进行炼苗，条件为自然散射光，温度25-28℃，湿度50-70%；

B：将组培瓶移至温室置于自然散射光下，采用逐渐开瓶的方式炼苗5-7d；首先，不打开瓶盖炼苗1-2d，然后将瓶盖由打开1/5至完全打开，若发现植株叶子出现萎蔫，再将瓶盖盖回，使组培苗慢慢适应外界环境，此过程中可适量向瓶内洒些无菌水，防止植株萎蔫；

C：待瓶口完全打开后，直接带基质移出组培苗，分株后移栽于育苗杯或无纺布袋，分株时注意不要伤到根部；移栽前，育苗杯或无纺布袋中加入适量的黄泥、泥炭与珍珠岩混合基质，浇透水备用；

D：移栽后在温室中培养至组培苗成活、生长稳定后，移至温室外，进行正常栽培管理。

所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于所述黄泥、泥炭与珍珠岩混合基质的体积配比为：黄泥：泥炭与珍珠岩=2:1:1。

一种光皮桦组培苗生根基质，其特征在于：该基质为泥炭、珍珠岩和蛭石混合物，并用MS+蔗糖的液体培养基浸湿。

所述的一种光皮桦组培苗生根基质，其特征在于所述基质的体积配比为：泥炭：珍珠岩：蛭石==3:1:1；所述MS+蔗糖的液体培养基pH值5.88-5.92，蔗糖浓度为30g/L。

由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的有益效果是：（1）选用一种基质代替传统的琼脂固体培养基，不影响光皮桦组培苗的正常生长，而炼苗移栽成活率却可以达到95%；（2）本方法操作简便，所采用的培养基及基质成本低廉，易于获取，降低了生产成本；（3）由无菌组织培养得到的光皮桦组培苗遗传性状稳定，为光皮桦的遗传改良提供基础。

附图说明

图1为刚接种的光皮桦带芽茎段；

图2为培养2个月的光皮桦基质生根组培苗；

图3为炼苗后刚移栽的光皮桦组培苗；

图4为移栽后1个月的光皮桦基质生根苗。

具体实施方式

下面通过具体实施例，进一步详细介绍本发明。

实施例1

（1）基质配方和配制

光皮桦组培苗生根基质配方：泥炭：珍珠岩：蛭石=3:1:1（体积比），以MS+30g/L蔗糖的液体培养基浸湿；

具体配制方法

A、按照比例将基质混匀，装进提前洗净晾干的组培瓶中，基质厚度控制在3-4cm；

B、按照MS培养基配方，配好液体培养基，加30g/L的蔗糖，完全溶解后，调节pH值至5.88-5.92；

C、取30 ml左右的液体培养基浸湿组培瓶中的基质，基质的量30 ml左右，盖好盖子，在瓶子上注明标签，高温高压灭菌，灭菌条件为121℃ 20min ；

D、灭菌后的培养基确保盖子拧紧后放置在接种室或培养室，冷却后可以使用，一般不要超过2周；

MS培养基配方如下：大量元素：KNO₃：1900mg/L；NH₄NO₃：1650 mg/L；KH₂PO₄：170 mg/L；MgSO₄·7H₂O：370 mg/L；CaCl₂·2H₂O：440 mg/L；

微量元素：KI：0.83 mg/L；H₃BO₃：6.2 mg/L；MnSO₄·4H₂O：22.3 mg/L；ZnSO₄·7 H₂O：8.6 mg/L；Na₂MoO₄·2H₂O：0.25 mg/L；CuSO₄·5 H₂O：0.025 mg/L；CoCl₂·6H₂O：0.025 mg/L；

铁盐：Na₂.EDTA：37.25 mg/L；FeSO₄·7H₂O：27.85 mg/L；

有机成分：肌醇：100 mg/L；甘氨酸：2 mg/L；盐酸硫胺素：0.1 mg/L；盐酸吡哆醇：0.5 mg/L；烟酸：0.5 mg/L。

实施例2：

（1）接种

在本实验室内选定一个光皮桦无性系G49-3，2014年7月16日选取该无性系生长健壮的组培苗，组培苗茎段需略有木质化，不能过于幼嫩。在超净工作台上取出幼苗，剪掉近根部较老茎段，每片叶片只留半张，把茎段剪成包含至少一个腋芽的1.5-2cm小段，接进提前配好并灭好菌的基质培养基中，在16h光照，25±2℃温度条件下培养。

（2）炼苗

2014年9月15日，选取高度在5-7cm且生长健壮的基质培养组培苗，在自然散射光，温度25-28℃，湿度50-70%的温室内炼苗；。

温室炼苗1d后，开盖1/5 1h后，发现组培苗叶片出现萎蔫，立即重新盖好瓶盖，约2h后幼苗恢复正常；

重新开盖，向组培瓶内洒少量无菌水，每天逐渐增加开盖程度并注意保湿；

2014年9月19日，打开盖子，尝试让组培苗完全开盖生长；次日发现组培苗未出现萎蔫，生长状况良好。

（3）移栽

2014年9月20日，提前拌好基质装进育苗杯中，浇透水备用，基质配比为黄泥：泥炭与珍珠岩=2:1:1（体积比）；

带基质直接取出组培苗，分株后移栽进育苗杯，做好标记，在温室内培养；

5-7d后，组培苗未出现萎蔫、烂根，生长正常，将其移至室外培养；

30d后，统计发现，幼苗成活率可以达到95 %。

本方法的关键是接种时以基质培养基代替琼脂固体培养基，并确保无菌条件；炼苗初期要时刻观察，一旦幼苗叶片萎蔫应立即盖好瓶盖；移栽初期仍然需要足够的温度和空气湿度。

Claims

1.一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于主要包括如下步骤：1）基质的选取与配制；

2）接种；

3）培养；

4）炼苗移栽；

所述步骤1）中基质的主要组分为泥炭、珍珠岩和蛭石；将基质混匀后用MS+蔗糖的液体培养基浸湿；所述液体培养基的pH值为5.88-5.92。

2.根据权利要求1所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于：所述液体培养基中蔗糖浓度为30g/L；

MS液体培养基的配方为：KNO₃：1900mg/L；NH₄NO₃：1650 mg/L；KH₂PO₄：170 mg/L；MgSO₄·7H₂O：370 mg/L；CaCl₂·2H₂O：440 mg/L；KI：0.83 mg/L；H₃BO₃：6.2 mg/L；MnSO₄·4H₂O：22.3 mg/L；ZnSO₄·7 H₂O：8.6 mg/L；Na₂MoO₄·2H₂O：0.25 mg/L；CuSO₄·5 H₂O：0.025 mg/L；CoCl₂·6H₂O：0.025 mg/L；Na₂.EDTA：37.25 mg/L；FeSO₄·7H₂O：27.85 mg/L；肌醇：100 mg/L；甘氨酸：2 mg/L；盐酸硫胺素：0.1 mg/L；盐酸吡哆醇：0.5 mg/L；烟酸：0.5 mg/L。

3.根据权利要求1所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于：所述基质体积配比为泥炭：珍珠岩：蛭石=3:1:1。

4.根据权利要求1所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于：所述基质的配制方法如下：

5.根据权利要求1所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于所述步骤2）中的接种方法为：取光皮桦组培无菌苗，每片叶片留一半，把茎段剪成1.5-2cm的小段，每一段必须包含至少1个腋芽，正向插到基质中，每瓶3-4段，然后盖好瓶盖；上述操作均在无菌条件下进行。

6.根据权利要求1所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于所述步骤3）中的培养条件为：将接种茎段的培养瓶整齐摆放在培养架上，每瓶之间的间隔不少于2cm，以保证充足的光照；培养室条件是：光照强度45 μmol·m^-2·s^-1，光照时间16h，温度25±2℃。

7.根据权利要求1所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于所述步骤4）中炼苗移栽的方法如下：

A：取培养2个月后的组培苗在温室内进行炼苗，条件为自然散射光，温度25-28℃，湿度50-70%；

8.根据权利要求1所述的一种光皮桦组培苗基质生根移栽的方法，其特征在于所述黄泥、泥炭与珍珠岩混合基质的体积配比为：黄泥：泥炭与珍珠岩=2:1:1。

9.一种光皮桦组培苗生根基质，其特征在于：该基质为泥炭、珍珠岩和蛭石混合物，并用MS+蔗糖的液体培养基浸湿。

10.根据权利要求9所述的一种光皮桦组培苗生根基质，其特征在于所述基质的体积配比为：泥炭：珍珠岩：蛭石==3:1:1；所述MS+蔗糖的液体培养基pH值5.88-5.92，蔗糖浓度为30g/L。