CN114424748A - 一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法，包括培养基土壤混合物支撑物制备、配制不含琼脂的培养液、配制培养基、试管苗生根培养、试管苗炼苗、试管苗移栽等步骤，解决了传统甘薯脱毒试管苗生根培养中需要使用大量琼脂，存在的增加培养成本、易受污染、缓苗时间长、管理难度大、需要多次移栽等问题，以土壤与泥炭土、细沙混用为支撑物制备甘薯脱毒试管苗的培养基，试管苗直接入土移栽，显著提高脱毒试管苗入土移栽的成活率，降低了试管苗移栽后对环境条件的要求，操作简便，减少移栽次数，缩短了试管苗从移栽至成活的生长周期，降低了生产成本，有利于脱毒甘薯产业化生产。
Description
技术领域
本发明属于甘薯栽培技术领域，具体涉及一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法。
背景技术
甘薯在我国有红薯、白薯、地瓜、山芋、红苕等别名，传入我国已有400多年的历史，它产量高，用途广，适应性强，已成为全球性种植的主要块根作物之一，广泛应用于食品工业、轻化工业和饲料工业。甘薯富含多种营养成分，还含有多种维生素、氨基酸、脱氢表雄甾酮、粘液蛋白等功能因子，俗称“土人参”，经常食用可对某些疾病有很好的预防作用，甚至还能预防癌症的发生，尤其是近年来，随着甘薯低糖、低热、低脂肪的营养学特性以及高居食物榜首的抗癌保健作用逐渐被消费者认知，甘薯食品市场前景广阔。目前我国甘薯种植面积和产量居世界首位，甘薯种植面积占世界的70%-75%，单产达到19T/hm2，是世界平均水平的130%。
甘薯以营养繁殖方式繁殖后代，感染病毒后，病毒植物体内便不断蔓延，最终导致种性退化。据调查，甘薯病毒病导致减产25%左右，有的品种减产高达50%以上。目前，国内外还没有有效防治甘薯病毒病的特效农药，也无高抗病毒病的甘薯品种，利用甘薯脱毒苗是防治甘薯病毒病目前唯一比较有效的途径。
脱毒甘薯试管苗的驯化移栽是甘薯脱毒苗生产过程中极为重要的一部分。目前试管苗常规的生根与移栽方法是：将茎尖(或茎段)接种于以琼脂做支撑物的MS培养基中，培养获得生根试管苗，将培养瓶放置在半遮光的环境开瓶炼苗，然后将试管苗洗去根上琼脂后，移入移栽营养钵基质中，营养钵要放置在环境湿度80%以上，环境温度在22—25℃，待试管苗恢复生长后再移栽到带有拱棚的土壤畦面上，待其生长发杈，形成试管苗种苗，剪枝种植大田繁种。这种移栽方法存在以下缺点：1、在生根培养中需要使用大量琼脂，由此增加了试管苗培养成本；2、由于琼脂支撑的培养基开瓶后易受污染，移栽前试管苗不能进行长时间开瓶炼苗(一般炼苗时间不超过7天)，所以试管苗地上部枝叶不能得到充分锻炼，移栽后易失水萎蔫；3、移栽时需洗去琼脂，清洗时很容易伤害根系，缓苗时间长，同时琼脂在根系的包裹下不易清洗干净，移栽后在土壤中易生杂菌感染根系，造成成活率降低；4、移栽时试管苗是裸根移栽，移栽后根系环境变化剧烈，根系吸收功能差，缓苗时间长，生长弱；5、试管苗移栽后对环境条件要求非常严格，因此必须采取控温控湿措施，保持适宜的温度和湿度条件，特别是要保持空气相对湿度在80-95％以上，这就使移栽后的管理难度大、用工多、成本高；6、试管苗需要经过两次移栽，操作繁琐、费工费时、生产周期长，不利于脱毒甘薯的产业化生产。
发明内容
本发明为了解决上述技术问题，提供一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法，以土壤、泥炭土及细沙混合物为支撑物取代琼脂制备甘薯脱毒试管苗生根的培养基，试管苗直接移栽入土，显著提高脱毒试管苗的成活率，降低了生产成本，有利于脱毒甘薯产业化生产。
本发明所采用的技术方案是：一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法，包括以下步骤：
步骤一、培养基土壤混合物支撑物制备：
先在350ml大口径培养瓶的底部放置4只取苗器，再将混合均匀的培养基支撑物分装在放置好取苗器的培养瓶内，培养基支撑物的高度为1cm备用；
步骤二、配制不含琼脂的培养液：
培养液成分为不含或减半大量元素和微量元素的不含琼脂的MS培养基的组份，按比例混合均匀，并附加0.4mg/L的IBA和15g/L的蔗糖，PH值调至6.0；
步骤三、配制培养基：
将步骤二中配制的培养液添加至步骤一中装好支撑物的培养瓶中，添加培养液10~12ml，盖好瓶盖，在121℃下灭菌20min；
步骤四、试管苗生根培养：
将继代培养的甘薯试管苗切1.5cm的茎段，接种至步骤三中的培养瓶中，每瓶接种4根，每根接种在每只取苗器的正中央，盖好瓶盖，在2000～3000lx光照强度和26℃温度下培养35d，每天光照时间14h；
步骤五、试管苗炼苗：
将步骤四中培养35天的培养瓶放置在半遮光的大棚或拱棚内3天，随后打开瓶盖放置5天，环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上；
步骤六、试管苗移栽：
在安装有防虫网的大棚中起垄，垄宽0.6m，垄高0.3m，在垄上开沟，在沟内浇足底水；从步骤五中炼好苗的培养瓶中，用摄子提取出取苗器，将取苗器上的试管苗及土坨轻轻放置在沟内覆土，半遮光3天，环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上，去除遮光网进行正常管理。
步骤一中使用的培养基支撑物为土壤、泥炭土、细沙组成的混合土壤；选择前茬未使用过除草剂且长期耕作的农田或蔬菜田挖取耕作层土壤，在太阳下晒干、碾碎，土壤颗粒粒径≤2mm；泥炭土同样在太阳下晒干后碾碎，颗粒粒径≤2mm；河沙通过晾晒后过筛，筛选出细沙，细沙粒径≤2mm；然后将备好的土壤、泥炭土、细沙按重量组份2:3:3的比例混合均匀。
选用混合土壤作为培养基支撑物，给试管苗根系发生与生长提供一个长期的黑暗环境，有利于根系适宜土壤环境，土壤里也有促进生根的因素，泥炭土、细沙的添加呈现一种蓬松状态，有利于培养基的透气性，保水性，利于甘薯试管苗的生根。
所述步骤一中的取苗器为底片与立片固定组成的L形一体结构，底片由直角和1/4圆弧组成，立片垂直固定于底片一侧直角边，4只取苗器组合放置在培养瓶内，立片形成十字形中心分隔线，将培养瓶分隔成4格空间。方便分隔栽植脱毒甘薯试管苗，生长发育互不影响，后期移栽时能带土一次移植，由于移栽过程中没有损伤试管苗根系，利于根系在土壤中恢复生长，提高试管苗的成活率；避免因使用琼脂而易受污染、缓苗时间长、管理难度大、需要多次移栽等诸多问题。
其中步骤二中的用土壤混合物为支撑物的MS培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长，其培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要；由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡，使用方便。无琼脂MS培养基的主要成分如表1所示：
表1 无琼脂MS培养基的主要成分
其中步骤二中，IBA是人工合成的植物生长调节剂，是一种活性最强、性状稳定、用量低且不易被降解的生长素类物质，IBA生根剂处理试管苗根部有补充外源激素与促进植物体内内源激素合成的双重功效，提供试管苗生根所需的生根促成物质，而且能促进内源激素的合成，还能促进一个根源基分化形成多个根尖，以诱导不定根原基分生组织细胞分化出簇状根尖，从而促进不定根形成，缩短生根时间，提高生根率。试管苗的组织较幼嫩，对外源激素的敏感度比较高，采用较低质量浓度的激素就能达到较好的效果，另外在生长过程中自身也会产生一定量的内源激素，如果外源激素处理质量浓度过高，就会导致总生长激素过高，从而抑制生根，要严格控制其质量浓度。
其中步骤四和步骤五中，严格控制试管苗生根培养和炼苗的环境条件，试管苗的生长发育离不开环境，环境中起主导作用的因素主要是温度和光照，利用各种措施，为试管苗进入生长发育提供必要的营养和各种酶物质，使幼苗的生长发育全过程处于保护设施内，而达到提前或缩短栽培周期，不需要复杂的设备，方法简便易行。土壤混合物支撑培养的试管苗开瓶后不易发生污染危害，开瓶炼苗可促进试管苗气孔关闭功能的恢复，增强试管苗地上部分的保水能力及提高移栽成活率。
其中步骤六中不需要多次移栽，以土壤混合物为支撑物制备甘薯脱毒试管苗的培养基，可以将试管苗带土坨直接移栽入土，由于移栽过程中没有损伤试管苗根系，利于根系在土壤中恢复生长，带坨移栽的试管苗移栽后根部环境变化小，其根系能保持较强的吸收能力，同时由于移栽前试管苗经过开瓶炼苗，其地上部分得到较充分的锻炼，因而对环境的适应性大大增强，显著提高脱毒试管苗入土移栽的成活率。传统琼脂培养基培育试管苗在移栽的过程会使根系受到损伤从而消耗营养，移栽后种苗需要再次萌发须根，增加缓苗时间，降低繁殖效率。
采用试管苗栽培还便于统一化管理，在同一个生产基地采用相同的符合生产标准的生产模式，采用相同的种苗生产技术、储存、标志及检验方法等，在相同的有利于种苗生长的环境下，如温室大棚、库房、人工气候温室中，采用相同的管理标准生产出符合标准的甘薯脱毒优质品种种苗；高效、节约，实现集约化管理，充分用好土地资源，发挥其最大效益，通过应用先进的农业科学技术、管理措施来增加种苗的产量和效益。
本发明的有益效果为：
本发明解决了传统甘薯脱毒试管苗生根培养中需要使用大量琼脂，存在的增加培养成本、易受污染、缓苗时间长、管理难度大、需要多次移栽等问题，以土壤与泥炭土、细沙混用为支撑物制备甘薯脱毒试管苗的培养基，试管苗直接移栽入土，显著提高脱毒试管苗移栽入土的成活率，降低了试管苗移栽后对环境条件的要求，操作简便，减少移栽次数，缩短了试管苗从移栽至成活的生长周期，降低了生产成本，有利于脱毒甘薯产业化生产。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1、一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法，包括以下步骤：
步骤一、培养基土壤混合物支撑物制备：
选择前茬未使用过除草剂且长期耕作的农田或蔬菜田挖取耕作层土壤，在太阳下晒干、碾碎，土壤颗粒粒径≤2mm；泥炭土同样在太阳下晒干后碾碎，颗粒粒径≤2mm；河沙通过晾晒后过筛，筛选出细沙，细沙粒径≤2mm；然后将备好的土壤、泥炭土、细沙按重量组份2:3:3的比例混合均匀；在350ml大口径培养瓶的底部放置4只取苗器，取苗器为底片与立片固定组成的L形一体结构，底片由直角和1/4圆弧组成，立片垂直固定于底片一侧直角边，再将混合均匀的培养基支撑物分装在放置好取苗器的培养瓶内，培养基支撑物的高度为1cm备用；
步骤二、配制不含琼脂的培养液：
培养液成分为减半大量元素和微量元素的不含琼脂的MS培养基的组份，按比例混合均匀，并附加0.4mg/L的IBA和15g/L的蔗糖，PH值调至6.0；
步骤三、配制培养基：
将步骤二中配制的培养液添加至步骤一中装好支撑物的培养瓶中，添加培养液10~12ml，盖好瓶盖，在121℃下灭菌20min；
步骤四、试管苗生根培养：
将继代培养的甘薯试管苗切1.5cm的茎段，接种至步骤三中的培养瓶中，每瓶接种4根，4只取苗器组合放置在培养瓶内，立片形成十字形中心分隔线，将培养瓶分隔成4格空间，每根接种在每只取苗器的正中央，盖好瓶盖，在2000～3000lx光照强度和26℃温度下培养35d，每天光照时间14h；
步骤五、试管苗炼苗：
将步骤四中培养35天的培养瓶放置在半遮光的大棚或拱棚内3天，随后打开瓶盖放置5天，环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上；
步骤六、试管苗移栽：
在安装有防虫网的大棚中起垄，垄宽0.6m，垄高0.3m，在垄上开沟，在沟内浇底水；从步骤五中炼好苗的培养瓶中，用摄子提取出取苗器，将取苗器上的试管苗及土坨轻轻放置在沟内覆土，半遮光3天，环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上；然后去除遮光网进行正常管理。
实施例2、一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法，包括以下步骤：
步骤一、培养基土壤混合物支撑物制备：
选择前茬未使用过除草剂且长期耕作的农田或蔬菜田挖取耕作层土壤，在太阳下晒干、碾碎，土壤颗粒粒径≤2mm；泥炭土同样在太阳下晒干后碾碎，颗粒粒径≤2mm；河沙通过晾晒后过筛，筛选出细沙，细沙粒径≤2mm；然后将备好的土壤、泥炭土、细沙按重量组份2:3:3的比例混合均匀；在350ml大口径培养瓶的底部放置4只取苗器，取苗器为底片与立片固定组成的L形一体结构，底片由直角和1/4圆弧组成，立片垂直固定于底片一侧直角边，再将混合均匀的培养基支撑物分装在放置好取苗器的培养瓶内，培养基支撑物的高度为1cm备用；
步骤二、配制不含琼脂的培养液：
培养基成分为不含大量元素和微量元素的不含琼脂的MS培养液的组份，按比例混合均匀，并附加0.4mg/L的IBA和15g/L的蔗糖，PH值调至6.0；
步骤三、配制培养基：
将步骤二中配制的培养液添加至步骤一中装好支撑物的培养瓶中，添加培养液10~12ml，盖好瓶盖，在121℃下灭菌20min；
步骤四、试管苗生根培养：
将继代培养的甘薯试管苗切1.5cm的茎段，接种至步骤三中的培养瓶中，每瓶接种4根， 4只取苗器组合放置在培养瓶内，立片形成十字形中心分隔线，将培养瓶分隔成4格空间，每根接种在每只取苗器的正中央，盖好瓶盖，在2000～3000lx光照强度和26℃温度下培养35d，每天光照时间14h；
步骤五、试管苗炼苗：
将步骤四中培养35天的培养瓶放置在半遮光的大棚或拱棚内3天，随后打开瓶盖放置5天，环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上；
步骤六、试管苗移栽：
在安装有防虫网的大棚中起垄，垄宽0.6m，垄高0.3m，在垄上开沟，在沟内浇底水；从步骤五中炼好苗的培养瓶中，用摄子提取出取苗器，将取苗器上的试管苗及土坨轻轻放置在沟内覆土，半遮光3天，环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上；然后去除遮光网进行正常管理。
效果验证试验：
1、试验材料
1.1 供试甘薯品种
在附加0.4mg/L IBA的MS培养基上生长35d的商薯19、普薯32、烟25等甘薯试管苗为试材，当试管苗茎长4cm以上时，取试管苗茎段作试验。
1.2 培养基土壤混合物支撑物的制备
取自试验地内，前茬未使用过除草剂且长期耕作的农田挖取耕作层土壤，土质为黏壤土，全盐含量为0.403‰，pH值为8.02，水解氮含量为74.38mg/kg，速效磷含量为38.25mg/kg，速效钾含量226.02mg/kg。土壤在太阳下晒干，碾碎，土壤颗粒粒径≤2mm。选择市场购买的泥炭土和河沙，泥炭土同样在太阳下晒干后碾碎，颗粒粒径≤2mm，河沙通过晾晒后过筛，筛选出细沙，细沙粒径≤2mm。然后将备好的土壤、泥炭土、细沙按重量组份2:3:3的比例混合均匀将土壤、泥炭土、细沙按2：3：3的比例混合后备用。
1.3 培养液的制备
培养液成分为减半大量元素和微量元素的不含琼脂的MS培养液的组份（MS培养液主要成分见表1），按比例混合均匀，并附加0.4mg/L的IBA和15g/L的蔗糖，PH值调至6.0；
2、试验方法
2.1 以土壤混合物为支撑物的培养基对商薯19脱毒试管苗的生长影响试验。
试验设3个处理，处理1：在装有土壤混合物支撑物的培养瓶内加入不含琼脂的培养液，培养液成分为大量元素、微量元素减半的MS培养液，并附加0.4 mg/L IBA和15 g/L的蔗糖，pH值调至6.0。盖好瓶盖，在121℃下灭菌20min；处理2：除培养液成分为不含大量元素和微量元素的培养液之外，其余均同处理1；处理3：MS培养基，培养基中含有0.4 mg/LIBA和15 g/L的蔗糖，并添加7g/L的琼脂作为固化剂，加热溶化后将pH 调至6.0，分装至培养瓶内高1.0cm处，盖好盖后，121℃下灭菌20 min。然后降温后在无菌环境下按不同处理的培养瓶分别接入4根长约1.5cm商薯19试管苗茎段，放入培养室。培养条件为：温度26℃，光照强度2000～3000lx，光照时间14 h。培养35d后，调查各处理试管苗生根及生长情况。
2.2 土壤混合物为支撑物的培养基对不同甘薯品种脱毒试管苗的生长影响试验。
分别以烟25、普薯32脱毒试管苗两个品种为试验对象，每个品种转接到分别以土壤混合物为支撑物的不含大量元素培养基和以琼脂为支撑物的MS培养基上，其它试验方法同2.1。分别调查不同品种试管苗在培养基上的生根及生长情况。
2.3 以土壤混合物为支撑物的培养基培养试管苗的开瓶炼苗和带土坨移栽试验
将商薯19试管苗分别以土壤混合物为支撑物的培养基（培养前在培养瓶内安放4个取苗器）和琼脂为支撑物培养基培养35天后对其进行开瓶炼苗，将培养瓶放置在半遮光的大棚内3天，随后打开瓶盖分别放置5天、8天、10天。环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上，观察试管苗的健良状况。对以土壤混合物为支撑物培养基培养的试管苗分别将开瓶后5天、8天、10天的试管苗进行大棚内移栽。大棚中起垄，在垄上开沟，浇底水。在培养瓶中用摄子提取出取苗器，将取苗器上的试管苗及土坨轻轻放置在沟内覆土，半遮光3天后正常管理，观察其生长及10天后检查其成活率。对以琼脂为支撑物的培养基培养的试管苗洗去培养基后一半试管苗直接移栽至大棚内，方法同带土坨移栽，另一半试管苗用基质（泥炭土）栽至营养钵内，浇透水，放置于半遮光大棚内，环境湿度在80%以上，及时补充水分，培养20天，观察其成活率，然后将成活的营养钵苗同上方法移栽至大棚内10天后观察其成活率。
3、结果与分析
3.1 不同培养基处理对脱毒试管苗生长的影响
表2 不同培养基处理对脱毒试管苗生长的影响
试验结果表明，不同处理对脱毒试管苗的成苗率差异不显著，说明不同处理对试管苗的成活率没有任何影响。从根数上看，处理1根数较处理2根数稍少一点，但差异不显著，处理2根数稍低于处理3的根数，但差异也不显著，处理1和处理3的根数相差较大，差异显著，说明通过以土壤混合物为支撑物的培养基对甘薯试管苗的根数有一定的影响，但随着在以土壤混合物为支撑物的培养基中不添加大量元素后对根数的影响较小。根的长度的生长情况与根的条数情况基本相一致。从叶片数可以看出，处理1的叶片数明显低于处理2和处理3，且处理2和处理3之间差异不明显。说明以土壤混合物为支撑物后，大量元素的的添加量对叶片的生长有一定的影响。从株高上看，处理1和处理2株高差异不显著，但处理3株高明显高于处理1和处理2。说明以土壤混合物为支撑物后明显对株高生长有一定的影响，但株高已达到所需试管苗的高度，因此，以土壤混合物为支撑物的MS培养基可以做为甘薯脱毒试管苗的培养基。从试管苗的茎粗可以看出，处理２的试管苗茎粗明显粗于处理1和处理3，且处理1和处理3之间差异不明显。
综合各项指标可以看出：用土壤混合物做培养基的支撑物时，甘薯脱毒试管苗能够基本上成苗，可以正常移栽，在以土壤混合物做支撑物培养基中不添加大量元素时，试管苗各项素质上较添加大量元素的培养基较优，且比在以琼脂为支撑物的培养基上明显提高了苗的粗度，说明有一定的壮苗作用。因此以不添加大量元素的土壤混合物为支撑物培养基的培养方法是一种行之有效的试管苗培养方法，且此方法不仅提高了试管苗的质量而且培养成本明显降低，并且也有利于试管苗的移栽成活。
3.2 土壤混合物为支撑物的培养基对不同甘薯品种脱毒试管苗的生长影响
表3 土壤混合物为支撑物的培养基对不同甘薯品种脱毒试管苗的生长影响
从不同甘薯品种脱毒试管苗的培养可以看出，烟薯25、普薯32脱毒试管苗在不同支撑物培养基上培养，试管苗成苗率、根数、根长、叶片数等指标差异不明显，且以土壤混合物为支撑物的培养基的株高有一定降低，茎粗有一定的加粗，说明通过以土壤混合物为支撑物的培养基培养后对试管苗的生长情况影响不大，且明显提高了试管苗的健壮程度。
3.3 以土壤混合物、琼脂为支撑物的培养基培养试管苗的开瓶炼苗和带土坨移栽。
表4 不同开瓶炼苗时间对试管苗健康状况及带土坨移栽成活率影响
从上表可以看出，通过不同开瓶炼苗时间，以土壤混合物为支撑物的培养基培养的试管苗5至8天内没有任何影响，10天后由于瓶内培养基内水份的散失有一小部分试管苗失水萎焉。以琼脂为支撑物的培养基培养的试管苗5天时有一小部分叶片失水萎焉，8天后部分叶片萎焉，叶缘干枯，培养基上有杂菌感染，10天后大部分试管苗由于失水死亡。说明在湿度50%的环境下琼脂培养基极易失水，且培养基易受杂菌感染。从营养钵的移栽成活率可以看出，5天的移栽成活率较8天后的移栽成活率高，但也仅为86.3%，移栽大棚后成活率也仅为90.6%，综合成活率仅为78.2%，说明通过洗根、裸根移栽对试管苗损伤较大，大大影响了试管苗的成活率。通过大棚移栽成活率可以看出，以土壤混合物为支撑物培养基培养的试管苗直接带坨移栽后成活率均在92.8%以上，且不同开瓶炼苗时间后的移栽成活率差异不显著；以琼脂为支撑物的培养基培养的试管苗，洗根后直接移栽到大棚，成活率最高仅为62.3%，说明由于洗根对根部的损伤以及裸根直接移栽大棚，还有大棚的环境湿度的影响，对其成活率影响较大。综合以上分析说明以土壤混合物为支撑物的培养基培养的试管苗开瓶炼苗可长达 10d 而不发生污染危害，并可进行带土坨移栽，成活率最高达到94.5%，而且大大缩短了培养时间，降低了生产成本。
4、试验结论
以土壤和泥炭土、细沙混合物为支撑物的培养基中添加减半或不含大量元素、微量元素的MS培养基成分，接种甘薯脱毒试管苗茎段进行生根培养，可以形成正常的试管苗，随着茎杆的加粗，株高的降低表明形成了壮苗，且不同甘薯品种之间差异不明显。并且在培养过程中少用了琼脂，节省去了部分大量、微量元素，并省略了融化琼脂所需要的加热工序。说明这种方法即可以降低试管苗成本，又为简化试管苗的移栽奠定了基础。移栽是植物组织培养快速繁殖技术的关键环节。以无机基质取代琼脂进行试管苗的生根培养, 从而实现试管苗的带土坨移栽, 可以简化试管苗移栽后的管理, 提高移栽成活率并降低成本。该研究结果表明，移栽前进行5-10天的开瓶练苗, 可使其叶片气孔的关闭功能得到充分恢复, 进而增强其地上部的保水能力，将开瓶练苗后的试管苗带土坨直接移入大棚内, 在移栽后不喷雾、不覆膜, 空气相对湿度为50%～60%的较低湿度环境中，移栽成活率达到94.5%。该项研究结果是提供一种以土壤混合物为支撑物甘薯脱毒试管苗生根培养及其移栽方法，显著提高脱毒试管苗移栽的成活率，降低环境条件，操作简便，减少移栽次数，缩短了从移栽至成活的生长周期，降低了生产成本，有利于脱毒甘薯产业化生产。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、培养基土壤混合物支撑物制备：
先在350ml大口径培养瓶的底部放置4只取苗器，再将混合均匀的培养基土壤混合物支撑物分装在放置好取苗器的培养瓶内，培养基支撑物的高度为1cm备用；
步骤二、配制不含琼脂的培养液：
培养液成分为不含或减半大量元素和微量元素的不含琼脂的MS培养基的组份，按比例混合均匀，并附加0.4mg/L的IBA和15g/L的蔗糖，PH值调至6.0；
步骤三、配制培养基：
将步骤二中配制的培养液添加至步骤一中装好支撑物的培养瓶中，添加培养液10~12ml，盖好瓶盖，在121℃下灭菌20min；
步骤四、试管苗生根培养：
将继代培养的甘薯试管苗切1.5cm的茎段，接种至步骤三中的培养瓶中，每瓶接种4根，每根接种在每只取苗器的正中央，盖好瓶盖，在2000～3000lx光照强度和26℃温度下培养35d，每天光照时间14h；
步骤五、试管苗炼苗：
将步骤四中培养35天的培养瓶放置在半遮光的大棚或拱棚内3天，随后打开瓶盖放置5天，环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上；
步骤六、试管苗移栽：
在安装有防虫网的大棚中起垄，垄宽0.6m，垄高0.3m，在垄上开沟，在沟内浇足底水；从步骤五中炼好苗的培养瓶中，用摄子提取出取苗器，将取苗器上的试管苗及土坨轻轻放置在沟内覆土，半遮光3天，环境温度控制在15—25℃，环境湿度控制在50%以上，去除遮光网进行正常管理。
2.根据权利要求1所述的一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法，其特征在于：步骤一中使用的培养基支撑物为土壤、泥炭土、细沙组成的土壤混合物；选择前茬未使用过除草剂且长期耕作的农田或蔬菜田挖取耕作层土壤，在太阳下晒干、碾碎，土壤颗粒粒径≤2mm；泥炭土同样在太阳下晒干后碾碎，颗粒粒径≤2mm；河沙通过晾晒后过筛，筛选出细沙，细沙粒径≤2mm；然后将备好的土壤、泥炭土、细沙按重量组份2:3:3的比例混合均匀。
3.根据权利要求1所述的一种无琼脂甘薯脱毒试管苗的生根培养及其栽培方法，其特征在于：步骤一中的取苗器为底片与立片固定组成的L形一体结构，底片由直角和1/4圆弧组成，立片垂直固定于底片一侧直角边，4只取苗器组合放置在培养瓶内，立片形成十字形中心分隔线，将培养瓶分隔成4格空间。
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |