CN101869074A - 一种土党参组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种土党参组培快繁方法，包括：1)外植体的选取与预处理；2)外植体灭菌；3)诱导培养；4)增殖培养；5)生根培养；6)移栽。其中，基本培养基和各阶段培养基中添加物的含量为：(1)基本培养基：选用MS基本培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；(2)诱导培养基：MS+细胞分裂素0.1～5.0mg/L+生长素0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；(3)增殖培养基：MS+细胞分裂素0.1～3.0mg/L+生长素0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；(4)生根培养基：1/2MS+生长素0.1～1.0mg/L+蔗糖或白糖20g/L。本发明的有益效果是：简便易行，培养基成分配方针对性强，组培苗玻璃化率低，操作可行，能有效地使土党参较野生的繁殖率高，遗传稳定性好。

Description

一种土党参组培快繁方法
技术领域
本发明涉及植物组培快繁技术领域，尤其涉及一种土党参组培快繁方法。
背景技术
土党参为桔梗科金钱豹属植物金钱豹(土党参)(Campanumoea javanica B1.Subsp.Japonica(Makino)Hong)或大花金钱豹(Campanumoea javanica Blume)的根。金钱豹(土党参)和大花金钱豹为多年生缠绕藤本植物。生于低山区的向阳坡地上。主要分布于东亚、我国南部和西南部。主根肥大、肉质、米黄色，须根少。具有健脾胃、补肺气、祛痰止咳等功能，治虚劳内伤、肺虚咳嗽、脾虚泄泻、乳汁不多、小儿疳积、遗尿等症。药用植物土党参少有栽培，中药材土党参靠野生采集，生长也较为缓慢，致使该天然资源日趋贫乏，自然条件下，利用种子或根茎进行繁殖，但其种子发芽率低，繁殖率低，种苗质量参差不齐，难以满足生产上对优质种苗的要求。
发明内容
本发明要解决上述现有技术的缺陷，提供一种土党参组培快繁方法。
本发明目的通过以下技术方案来实现：这种土党参组培快繁方法，按如下步骤进行：
1)、外植体的选取与预处理：从土党参植株上剪取长5～10cm的新萌发的嫩枝，剪去叶片，用加有1％(体积比)洗洁精的自来水中漂洗10～30分钟后，用自来水冲洗20～40分钟；
2)、外植体灭菌：将预处理后的嫩枝切成长1～2.cm的带顶芽的茎段或带腋芽的茎段作为外植体，经表面灭菌处理后备用；
3)、诱导培养：在无菌条件下将经表面灭菌后的带顶芽的茎段或带腋芽的茎段外植体的一端或二端切口变褐处切除后，顶芽和带腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基中，在培养条件下培养30～45天后，诱导顶芽和腋芽萌芽，然后诱导出丛生芽并抽长成藤条；
4)、增殖培养：在无菌条件下将藤条切成一节一节接入增殖培养基中进行增殖培养，在培养条件下培养30～45天诱导出丛生芽并抽长成藤条；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行组培苗再增殖培养；
5)、生根培养：将藤条切成一节一节后，接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，藤条抽长成5～7cm、苗基部长出3～5根细根；
6)、移栽：将生根组培苗移栽于穴盘内的育苗袋中，培育1～2个月至成苗。
其中，基本培养基和各阶段培养基中添加物的含量为：
(1)基本培养基：选用MS基本培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；
(2)诱导培养基：MS+细胞分裂素0.1～5.0mg/L+生长素0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(3)增殖培养基：MS+细胞分裂素0.1～3.0mg/L+生长素0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(4)生根培养基：1/2MS+生长素0.1～1.0mg/L+蔗糖或白糖20g/L；
所述的细胞分裂素为BA或KT，生长素为NAA或IAA或IBA。
所述的表面灭菌处理是预处理后的外植体用75％(体积比)酒精表面消毒30～45秒，无菌水冲洗3遍，然后用0.1％(重量比)升汞溶液浸泡振荡灭菌10～15分钟，无菌水洗3～5遍；或预处理后的外植体用75％(体积比)酒精表面消毒30～45秒，无菌水冲洗3遍，然后用2％(体积比)次氯酸钠溶液振荡灭菌10～15分钟，无菌水洗3～5遍。
所述的各组培阶段的培养条件是，培养温度为23～28℃，光照光强为2500～3000Lx，光照时间为10～16h/d。
所述的培养基，包括基本培养基和各阶段培养基中添加物的含量为：
(1)基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；
(2)诱导培养基：MS+细胞分裂素0.5mg/L+生长素0.05mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(3)增殖培养基：MS+细胞分裂素0.1mg/L+生长素0.01mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(4)生根培养基：1/2MS+生长素0.25mg/L+蔗糖或白糖20g/L；
所述的细胞分裂素为BA或KT，生长素为NAA或IAA或IBA。
所述的育苗袋为泥炭、珍珠岩、蛭石以体积比为5∶1∶1的比例配制而成。
所述的土党参为金钱豹(土党参)和大花金钱豹。
本发明的有益效果是：该土党参组培快繁方法，简便易行，培养基成分配方针对性强，组培苗玻璃化率低，操作可行，能有效地使土党参较野生的繁殖率高，遗传稳定性好，为土党参人工培养提高优良种苗，从而提高土党参的产量，扩大来源，可满面足市场上对土党参的需求。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1
1)、外植体的选取与预处理：剪取长5～10cm的新萌发的嫩枝，剪去叶片，用加有1％(体积比)洗洁精的自来水中漂洗10～30分钟后，用自来水冲洗20～40分钟；
2)、外植体灭菌：将预处理后的嫩枝切成长1～2.cm的带顶芽的茎段或带腋芽的茎段作为外植体，经表面灭菌处理后备用；
3)、诱导培养：在无菌条件下将经表面灭菌后的带顶芽的茎段或带腋芽的茎段外植体的一端或二端切口变褐处切除后，顶芽和带腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基中，在培养条件下培养30～45天后，诱导顶芽和腋芽萌芽，然后诱导出丛生芽并抽长成藤条；
4)、增殖培养：在无菌条件下将藤条切成一节一节接入增殖培养基中进行增殖培养，在培养条件下培养30～45天诱导出丛生芽并抽长成藤条；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行组培苗再增殖培养；
5)、生根培养：将藤条切成一节一节后，接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，藤条抽长成5～7cm、苗基部长出3～5根细根；
6)、移栽：将生根组培苗移栽于穴盘内的育苗袋中，培育1～2个月至成苗。
其中，基本培养基和各阶段培养基中添加物的含量为：
(1)基本培养基：选用MS基本培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；
(2)诱导培养基：MS+细胞分裂素0.1～5.0mg/L+生长素0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(3)增殖培养基：MS+细胞分裂素0.1～3.0mg/L+生长素0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(4)生根培养基：1/2MS+生长素0.1～1.0mg/L+蔗糖或白糖20g/L；
所述的细胞分裂素为BA或KT，生长素为NAA或IAA或IBA。
所述的一种土党参组培快繁方法，其特征在于：所述的表面灭菌处理是预处理后的外植体用75％(体积比)酒精表面消毒30～45秒，无菌水冲洗3遍，然后用0.1％(重量比)升汞溶液浸泡振荡灭菌10～15分钟，无菌水洗3～5遍；或预处理后的外植体用75％(体积比)酒精表面消毒30～45秒，无菌水冲洗3遍，然后用2％(体积比)次氯酸钠溶液振荡灭菌10～15分钟，无菌水洗3～5遍。
所述的一种土党参组培快繁方法，其特征在于，所述的各组培阶段的培养条件是，培养
温度为23～28℃，光照光强为2500～3000Lx，光照时间为10～16h/d。
所述的培养基，包括基本培养基和各阶段培养基中添加物的含量为：
(1)基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；
(2)诱导培养基：MS+细胞分裂素0.5mg/L+生长素0.05mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(3)增殖培养基：MS+细胞分裂素0.1mg/L+生长素0.01mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(4)生根培养基：1/2MS+生长素0.25mg/L+蔗糖或白糖20g/L；
所述的细胞分裂素为BA或KT，生长素为NAA或IAA或IBA。
所述的育苗袋为泥炭、珍珠岩、蛭石以体积比为5∶1∶1的比例配制而成。
所述的土党参为金钱豹(土党参)和大花金钱豹。
实施例2：
本例中，基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；诱导培养基：MS+BA 0.1～5.0mg/L+NAA 0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；增殖培养基：MS+BA 0.1～3.0mg/L+NAA 0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；生根培养基：1/2MS+NAA0.1～1.0mg/L+蔗糖或白糖20g/L。
其余步骤，条件均同于实施例1。
实施例3：
本例中，基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；诱导培养基：MS+KT 0.1～5.0mg/L+IAA 0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；增殖培养基：MS+KT 0.1～3.0mg/L+IAA 0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；生根培养基：1/2MS+IAA 0.1～1.0mg/L+蔗糖或白糖20g/L。
其余步骤，条件均同于实施例1。
实施例4：
本例中，基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；诱导培养基：MS+BA 0.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖或白糖30g/L；增殖培养基：MS+BA 0.1mg/L+NAA 0.01mg/L+蔗糖或白糖30g/L；生根培养基：1/2MS+IBA 0.25mg/L+蔗糖或白糖20g/L。
其余步骤，条件均同于实施例1。
实施例5：
本例中，基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；诱导培养基：MS+KT 0.5mg/L+IAA0.05mg/L+蔗糖或白糖30g/L；增殖培养基：MS+KT0.1mg/L+IAA 0.01mg/L+蔗糖或白糖30g/L；生根培养基：1/2MS+IAA 0.25mg/L+蔗糖或白糖20g/L。
其余步骤，条件均同于实施例1。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

Claims (6)

1.一种土党参组培快繁方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：
1)、外植体的选取与预处理：从土党参植株上剪取长5～10cm的新萌发的嫩枝，剪去叶片，用加有1％体积比洗洁精的自来水中漂洗10～30分钟后，用自来水冲洗20～40分钟；
2)、外植体灭菌：将预处理后的嫩枝切成长1～2cm的带顶芽的茎段或带腋芽的茎段作为外植体，经表面灭菌处理后备用；
3)、诱导培养：在无菌条件下将经表面灭菌后的带顶芽的茎段或带腋芽的茎段外植体的一端或二端切口变褐处切除后，顶芽和带腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基中，在培养条件下培养30～45天后，诱导顶芽和腋芽萌芽，然后诱导出丛生芽并抽长成藤条；
4)、增殖培养：在无菌条件下将藤条切成一节一节接入增殖培养基中进行增殖培养，在培养条件下培养30～45天诱导出丛生芽并抽长成藤条；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行组培苗再增殖培养；
5)、生根培养：将藤条切成一节一节后，接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，藤条抽长成5～7cm、苗基部长出3～5根细根；
6)、移栽：将生根组培苗移栽于穴盘内的育苗袋中，培育1～2个月至成苗；
其中，基本培养基和各阶段培养基中添加物的含量为：
(1)基本培养基：选用MS基本培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；
(2)诱导培养基：MS+细胞分裂素0.1～5.0mg/L+生长素0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(3)增殖培养基：MS+细胞分裂素0.1～3.0mg/L+生长素0.0～0.5mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(4)生根培养基：1/2MS+生长素0.1～1.0mg/L+蔗糖或白糖20g/L；
所述的细胞分裂素为BA或KT，生长素为NAA或IAA或IBA。
2.根据权利要求1所述的土党参组培快繁方法，其特征在于：所述的表面灭菌处理是预处理后的外植体用75％体积比酒精表面消毒30～45秒，无菌水冲洗3遍，然后用0.1％重量比升汞溶液浸泡振荡灭菌10～15分钟，无菌水洗3～5遍；或预处理后的外植体用75％体积比酒精表面消毒30～45秒，无菌水冲洗3遍，然后用2％体积比次氯酸钠溶液振荡灭菌10～15分钟，无菌水洗3～5遍。
3.根据权利要求1所述的土党参组培快繁方法，其特征在于，所述的各组培阶段的培养条件是，培养温度为23～28℃，光照光强为2500～3000Lx，光照时间为10～16h/d。
4.根据权利要求1所述的土党参组培快繁方法，其特征在于：所述的培养基，包括基本培养基和各阶段培养基中添加物的含量为：
(1)基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；
(2)诱导培养基：MS+细胞分裂素0.5mg/L+生长素0.05mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(3)增殖培养基：MS+细胞分裂素0.1mg/L+生长素0.01mg/L+蔗糖或白糖30g/L；
(4)生根培养基：1/2MS+生长素0.25mg/L+蔗糖或白糖20g/L；
所述的细胞分裂素为BA或KT，生长素为NAA或IAA或IBA。
5.根据权利要求1所述的土党参组培快繁方法，其特征在于：所述的育苗袋为泥炭、珍珠岩、蛭石以体积比为5∶1∶1的比例配制而成。
6.根据权利要求1所述的土党参组培快繁方法，其特征在于：所述的土党参为金钱豹和大花金钱豹。
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