CN108562744A - 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记 - Google Patents

叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记 Download PDF

Info

Publication number
CN108562744A
CN108562744A CN201710961050.XA CN201710961050A CN108562744A CN 108562744 A CN108562744 A CN 108562744A CN 201710961050 A CN201710961050 A CN 201710961050A CN 108562744 A CN108562744 A CN 108562744A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
seq
cancer
sample
subject
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710961050.XA
Other languages
English (en)
Inventor
D.J.奥香内西
L.格拉索
S.万
Q.曹
E.B.索默斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Morphotek Inc
Original Assignee
Morphotek Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Morphotek Inc filed Critical Morphotek Inc
Publication of CN108562744A publication Critical patent/CN108562744A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57449—Specifically defined cancers of ovaries
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/82—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving vitamins or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明提供了用于评价受试者是否患有表达FRα的癌症的方法或试剂盒，用于预测患有表达FRα的癌症的受试者中卵巢癌的方法或试剂盒，用于评价受试者将发展表达FRα的癌症的风险水平的方法或试剂盒，和将患有表达FRα的癌症的受试者分层为癌症治疗组的方法。本发明涉及确定源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平且将该水平与对照样品中的FRα水平进行比较。

Description

叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记
本申请是申请日为2011年11月4日，申请号为201180064293.4(PCT/US2011/059411)，发明名称为“叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记”的发明专利申请的分案申请。
相关申请
本申请要求2010年11月5日提交的美国临时申请号61/410,497和2011年7月15日提交的美国临时申请号61/508,444的申请日的权益，所述申请中每一篇的完整内容通过引用并入本文。
发明背景
在人中，叶酸的高亲和力受体源于三种同种型：α、β和γ。α和β形式通常通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚与细胞膜结合。它们在细胞外和内吞区室之间再循环，且能够将叶酸转运进入细胞内。FRα的可溶性形式可以通过蛋白酶或磷脂酶对膜锚定的叶酸受体的作用而衍生。
叶酸受体α(也称为FRα、FR-α、FOLR-1或FOLR1)在各种上皮组织中表达，所述上皮组织包括脉络丛、肺、甲状腺、肾、子宫、乳房、输卵管、附睾、和唾液腺。Weitman,SD等人，CancerRes 52:3396-3401(1992)；Weitman SD等人，CancerRes 52:6708-6711。已经在各种癌症中观察到FRα的过表达，所述癌症包括肺癌(例如细支气管肺泡癌、类癌肿瘤、和非小细胞肺癌，如腺癌)；间皮瘤；卵巢癌；肾癌；脑癌(例如间变性室管膜瘤、小脑青少年毛细胞型星形细胞瘤、和脑肿瘤转移)；子宫颈癌；鼻咽癌；中胚层衍生的肿瘤；头颈部鳞状细胞癌；子宫内膜癌；卵巢的子宫内膜样腺癌、浆液性囊腺癌、乳腺癌；膀胱癌；胰腺癌；骨癌(例如高级骨肉瘤)；垂体癌(例如垂体腺瘤)；结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。参见例如，美国专利号7,754,698；美国专利申请号2005/0232919；WO 2009/132081；Bueno R等人J of Thoracicand Cardiovascular Surgery,121(2):225-233(2001)；Elkanat H&Ratnam M.Frontiersin Bioscience,11,506-519(2006)；Fisher R.E.J Nucl Med,49:899-906(2008)；Franklin,WA等人Int J Cancer,增刊8:89-95(1994)；Hartman L.C.等人Int J Cancer121:938-942(2007)；Iwakiri S等人Annals of Surgical Oncology,15(3):889-899；Parker N.等人Analytical Biochemistry,338:284-293(2005)；Weitman,SD等人CancerRes 52:3396-3401(1992)；Saba N.F.等人HeadNeck,31(4):475-481(2009)；Yang R等人Clin Cancer Res 13:2557-2567(2007)。在一些类型的癌症(例如，头颈部鳞状细胞癌)中，FRα表达的更高水平与预后更差相关，而在其他类型的癌症(例如，非小细胞肺癌)中，FRα表达的更高水平与预后更好相关。参见例如，Iwakiri S等人Annals of Surgical Oncology,15(3):889-899；Saba N.F.等人Head Neck,31(4):475-481(2009)。
癌症的更早期检测提高存活率和生活质量。为了提高早期诊断和治疗的可能性，迫切需要用于诊断癌症、用于确定发展癌症的风险水平、和用于预测癌症的进展的非侵入性方法。本发明满足这些对于表达FRα的癌症的需要。
发明概述
本发明提供了评价受试者是否患有表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)的方法，评价在患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)的进展的方法，将表达FRα的癌症的受试者分层为至少四个癌症治疗组之一的方法，评价卵巢癌或肺癌的MORAb-003治疗的效力的方法以及用于评价受试者是否患有表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)或者用于评价在受试者中表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)的进展的试剂盒。
评价受试者是否患有表达FRα的癌症的方法
在第一个方面，本发明提供了评价受试者是否患有表达FRα的癌症的方法，其通过确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平而实现；并且将样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有表达FRα的癌症的指示；其中通过将样品与结合FRα的抗体接触来评价源自受试者的样品中FRα的水平。在特定的实施方案中，样品是尿、血清、血浆或腹水。
在另一个方面，本发明涉及评价受试者是否患有表达FRα的癌症的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者尿样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有表达FRα的癌症的指示。在进一步方面，本发明提供了评价受试者是否患有表达FRα的癌症的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者血清样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有表达FRα的癌症的指示。
在本发明前述方面的各个实施方案中，表达FRα的癌症选自肺癌、间皮瘤、卵巢癌、肾癌、脑癌、子宫颈癌、鼻咽癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂体癌、结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，表达FRα的癌症是非小细胞肺癌，如腺癌。
在另一个方面，本发明涉及评价受试者是否患有卵巢癌的方法，其通过确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平而实现，其中尿样品中不与细胞结合的FRα以高于约9100pg/ml的浓度存在是受试者患有卵巢癌的指示。
在本发明前述方面的各个方面，FRα在尿样品中存在的浓度高于约9500pg/mL、约10,000pg/mL、约11,000pg/mL、约12,000pg/mL、约13,000pg/mL、约14,000pg/mL、约15,000pg/mL、约16,000pg/mL、约17,000pg/mL、约18,000pg/mL、约19,000pg/mL、或约20,000pg/mL是受试者患有卵巢癌的指示。
在各个方面，FRα的水平通过将样品与结合FRα的抗体接触来确定。例如，抗体选自：
(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；
(b)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体；
(c)MOV18抗体；
(d)与MOV18抗体结合相同表位的抗体；
(e)548908抗体；
(f)与548908抗体结合相同表位的抗体；
(g)6D398抗体；
(h)与6D398抗体结合相同表位的抗体；
(i)与26B3抗体结合相同表位的抗体；
(j)包含SEQ ID NO：55(GYFMN)为CDRH1，SEQ ID NO：56(RIFPYNGDTFYNQKFKG)为CDRH2，SEQ ID NO：57(GTHYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：51(RTSENIFSYLA)为CDRL1，SEQ ID NO：52(NAKTLAE)为CDRL2和SEQ ID NO：53(QHHYAFPWT)为CDRL3的抗体；
(k)26B3抗体；
(1)与19D4抗体结合相同表位的抗体；
(m)包含SEQ ID NO：39(HPY MH)为CDRH1，SEQ ID NO：40(RIDPANGNTKYDPKFQG)为CDRH2，SEQ ID NO：41(EEVADYTMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：35(RASESVDTYGNNFIH)为CDRL1，SEQ ID NO：36(LASNLES)为CDRL2和SEQ ID NO：37(QQNNGDPWT)为CDRL3的抗体；
(n)19D4抗体；
(o)与9F3抗体结合相同表位的抗体；
(p)包含SEQ ID NO：31(SGYYWN)为CDRH1，SEQ ID NO：32(YIKSDGSNNYNPSLKN)为CDRH2，SEQ ID NO：33(EWKAMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：27(RASSTVSYSYLH)为CDRL1，SEQ ID NO：28(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：29(QQYSGYPLT)为CDRL3的抗体；
(q)9F3抗体；
(r)与24F12抗体结合相同表位的抗体；
(s)包含SEQ ID NO：47(SYAMS)为CDRH1，SEQ ID NO：48(EIGSGGSYTYYPDTVTG)为CDRH2，SEQ ID NO：49(ETTAGYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：43(SASQGINNFLN)为CDRL1，SEQ ID NO：44(YTSSLHS)为CDRL2和SEQ ID NO：45(QHFSKLPWT)为CDRL3的抗体；
(t)24F12抗体；
(u)包含可变区轻链的抗体，所述可变区轻链选自
LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；
(v)包含可变区重链的抗体，所述可变区重链选自
LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ IDNO：19)；LK26HuVH I.I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)；
(w)包含重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ IDNO：16)的抗体；
(x)包含重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQID NO：16)的抗体；以及
(y)包含重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)的抗体。
在特定的实施方案中，抗体与MORAb-003抗体结合相同表位。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：1
(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3。在另一个实施方案中，抗体是MOV18抗体。在又另一个实施方案中，抗体与MOV18抗体结合相同表位。在进一步实施方案中，抗体包含可变区轻链，所述可变区轻链选自LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。可替代地或组合地，抗体包含可变区重链，所述可变区重链选自LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVHFAIS，N(SEQID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)。在某些实施方案中，抗体包含(i)重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；或者重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。
在特定的实施方案中，通过将样品与选自下列的抗体对接触来评价源自所述受试者的样品中的FRα水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。
在某些实施方案中，所述抗体选自鼠抗体、人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、亲和抗体、高亲合多聚体(avimer)、versabody、纳米抗体和结构域抗体。可替代地或组合地，所述抗体是例如用标记进行标记的，所述标记选自放射标记、生物素标记、发色团标记、荧光团标记或酶标记。
在某些实施方案中，FRα水平通过使用技术确定，所述技术选自western印迹分析、放射免疫测定、免疫荧光定量、免疫沉淀、平衡透析法、免疫扩散法、溶液相测定、电化学发光免疫测定(ECLIA)和ELISA测定。
在本发明的前述方面的各个实施方案中，对照样品是在健康受试者中FRα的标准化对照水平。
在某些实施方案中，在测定样品中FRα的水平之前用胍处理样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前稀释样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前，离心、涡旋或离心和涡旋样品。
在又另一个方面，本发明涉及评价受试者是否患有卵巢癌的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者样品中与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有卵巢癌的指示；其中通过将样品与下列接触来评价源自受试者的样品中FRα的水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。例如，样品可以是尿、血清、血浆或腹水。
评价受试者中表达FRα的癌症的进展的方法
在进一步方面，本发明涉及评价在患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者样品中FRα水平的增加是癌症将迅速进展的指示；并且其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者样品中FRα水平的降低是癌症将缓慢进展或将退化的指示，从而评价在受试者中表达FRα的癌症的进展；其中通过将样品与结合FRα的抗体接触来评价源自受试者的样品中不与细胞结合的FRα水平。在特定的实施方案中，样品是尿、血清、血浆或腹水。
在另一个方面，本发明提供了评价在患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者尿样品中FRα水平的增加是癌症将迅速进展的指示；并且其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者尿样品中FRα水平的降低是癌症将缓慢进展或将退化的指示，从而评价在受试者中表达FRα的癌症的进展。
在进一步方面，本发明提供了评价在患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者血清样品中FRα水平的增加是癌症将迅速进展的指示；并且其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者血清样品中FRα水平的降低是癌症将缓慢进展或将退化的指示，从而评价在受试者中表达FRα的癌症的进展。
在本发明前述方面的各个实施方案中，表达FRα的癌症选自肺癌、间皮瘤、卵巢癌、肾癌、脑癌、子宫颈癌、鼻咽癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂体癌、结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，表达FRα的癌症是非小细胞肺癌，如腺癌。
在另一个方面，本发明涉及评价受试者是否患有卵巢癌的方法，其通过确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平而实现，其中尿样品中不与细胞结合的FRα以高于约9100pg/ml的浓度存在是受试者患有卵巢癌的指示。
在本发明前述方面的各个方面，FRα在尿样品中存在的浓度高于约9500pg/mL、约10,000pg/mL、约11,000pg/mL、约12,000pg/mL、约13,000pg/mL、约14,000pg/mL、约15,000pg/mL、约16,000pg/mL、约17,000pg/mL、约18,000pg/mL、约19,000pg/mL、或约20,000pg/mL是受试者患有卵巢癌的指示。
在各个方面，FRα的水平通过将样品与结合FRα的抗体接触来确定。例如，抗体选自：
(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；
(b)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体；
(c)MOV18抗体；
(d)与MOV18抗体结合相同表位的抗体；
(e)548908抗体；
(f)与548908抗体结合相同表位的抗体；
(g)6D398抗体；
(h)与6D398抗体结合相同表位的抗体；
(i)与26B3抗体结合相同表位的抗体；
(j)包含SEQ ID NO：55(GYFMN)为CDRH1，SEQ ID NO：56(RIFPYNGDTFYNQKFKG)为CDRH2，SEQ ID NO：57(GTHYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：51(RTSENIFSYLA)为CDRL1，SEQ ID NO：52(NAKTLAE)为CDRL2和SEQ ID NO：53(QHHYAFPWT)为CDRL3的抗体；
(k)26B3抗体；
(1)与19D4抗体结合相同表位的抗体；
(m)包含SEQ ID NO：39(HPYMH)为CDRH1，SEQ ID NO：40(RIDPANGNTKYDPKFQG)为CDRH2，SEQ ID NO：41(EEVADYTMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：35(RASESVDTYGNNFIH)为CDRL1，SEQ IDNO：36(LASNLES)为CDRL2和SEQ ID NO：37(QQNNGDPWT)为CDRL3的抗体；
(n)19D4抗体；
(o)与9F3抗体结合相同表位的抗体；
(p)包含SEQ ID NO：31(SGYYWN)为CDRH1，SEQ ID NO：32(YIKSDGSNNYNPSLKN)为CDRH2，SEQ ID NO：33(EWKAMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：27(RASSTVSYSYLH)为CDRL1，SEQ ID NO：28(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：29(QQYSGYPLT)为CDRL3的抗体；
(q)9F3抗体；
(r)与24F12抗体结合相同表位的抗体；
(s)包含SEQ ID NO：47(SYAMS)为CDRH1，SEQ ID NO：48(EIGSGGSYTYYPDTVTG)为CDRH2，SEQ ID NO：49(ETTAGYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：43(SASQGINNFLN)为CDRL1，SEQ ID NO：44(YTSSLHS)为CDRL2和SEQ ID NO：45(QHFSKLPWT)为CDRL3的抗体；
(t)24F12抗体；
(u)包含可变区轻链的抗体，所述可变区轻链选自
LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；
(v)包含可变区重链的抗体，所述可变区重链选自
LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ IDNO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)；
(w)包含重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ IDNO：16)的抗体；
(x)包含重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQID NO：16)的抗体；以及
(y)包含重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)的抗体。
在特定的实施方案中，抗体与MORAb-003抗体结合相同表位。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：1
(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3。在另一个实施方案中，抗体是MOV18抗体。在又另一个实施方案中，抗体与MOV18抗体结合相同表位。在进一步实施方案中，抗体包含可变区轻链，所述可变区轻链选自LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。可替代地或组合地，抗体包含可变区重链，所述可变区重链选自LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVHFAIS，N(SEQID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)。在某些实施方案中，抗体包含(i)重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；或者重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。
在特定的实施方案中，通过将样品与选自下列的抗体对接触来评价源自所述受试者的样品中的FRα水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。
在某些实施方案中，所述抗体选自鼠抗体、人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、亲和抗体、高亲合多聚体、versabody、纳米抗体和结构域抗体。可替代地或组合地，所述抗体是例如用标记进行标记的，所述标记选自放射标记、生物素标记、发色团标记、荧光团标记或酶标记。
在某些实施方案中，FRα的水平通过使用技术确定，所述技术选自western印迹分析、放射免疫测定、免疫荧光定量、免疫沉淀、平衡透析法、免疫扩散法、溶液相测定、电化学发光免疫测定(ECLIA)和ELISA测定。
在本发明的前述方面的各个实施方案中，对照样品是在健康受试者中FRα的标准化对照水平。在另一个实施方案中，对照样品是以前从受试者中获得的样品。
在某些实施方案中，在测定样品中FRα的水平之前用胍处理样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前稀释样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前，离心、涡旋或离心和涡旋样品。
在进一步方面，本发明提供了评价在患有卵巢癌的受试者中卵巢癌的进展的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者样品中FRα水平的增加是卵巢癌将迅速进展的指示；并且其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者样品中FRα水平的降低是卵巢癌将缓慢进展或将退化的指示，从而评价在受试者中卵巢癌的进展；其中通过将样品与下列接触来评价源自受试者样品中的FRα水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。例如，样品可以是尿、血清、血浆或腹水。
将表达FRα的癌症分层为癌症治疗组的方法
在进一步方面，本发明提供了将患有表达FRα的癌症的受试者分层为至少四个癌症治疗组之一的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且基于不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，将受试者分层为至少四个癌症治疗组之一；其中通过将样品与结合FRα的抗体接触来评价源自受试者的样品中不与细胞结合的FRα水平。例如，样品选自尿、血清、血浆或腹水。
在又另一个方面，本发明提供了将患有表达FRα的癌症的受试者分层为至少四个癌症治疗组之一的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且基于在样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，将受试者分层为至少四个癌症治疗组之一。在进一步方面，本发明涉及将患有表达FRα的癌症的受试者分层为至少四个癌症治疗组之一的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且基于在血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，将受试者分层为至少四个癌症治疗组之一。
在本发明前述方面的各个实施方案中，表达FRα的癌症选自肺癌、间皮瘤、卵巢癌、肾癌、脑癌、子宫颈癌、鼻咽癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂体癌、结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，表达FRα的癌症是非小细胞肺癌，如腺癌。
在另一个方面，本发明涉及评价受试者是否患有卵巢癌的方法，其通过确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平而实现，其中尿样品中不与细胞结合的FRα以高于约9100pg/ml的浓度存在是受试者患有卵巢癌的指示。
在本发明前述方面的各个方面，FRα在尿样品中存在的浓度高于约9500pg/mL、约10,000pg/mL、约11,000pg/mL、约12,000pg/mL、约13,000pg/mL、约14,000pg/mL、约15,000pg/mL、约16,000pg/mL、约17,000pg/mL、约18,000pg/mL、约19,000pg/mL、或约20,000pg/mL是受试者患有卵巢癌的指示。
在各个方面，FRα的水平通过将样品与结合FRα的抗体接触来确定。例如，抗体选自：
(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；
(b)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体；
(c)MOV18抗体；
fd)与MOV18抗体结合相同表位的抗体；
(e)548908抗体；
(f)与548908抗体结合相同表位的抗体；
(g)6D398抗体；
(h)与6D398抗体结合相同表位的抗体；
(i)与26B3抗体结合相同表位的抗体；
(j)包含SEQ ID NO：55(GYFMN)为CDRH1，SEQ ID NO：56(RIFPYNGDTFYNQKFKG)为CDRH2，SEQ ID NO：57(GTHYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：51(RTSENIFSYLA)为CDRLI，SEQ ID NO：52(NAKTLAE)为CDRL2和SEQ ID NO：53(QHHYAFPWT)为CDRL3的抗体；
(k)26B3抗体；
(1)与19D4抗体结合相同表位的抗体；
(m)包含SEQ ID NO：39(HPYMH)为CDRH1，SEQ ID NO：40(RIDPANGNTKYDPKFQG)为CDRH2，SEQ ID NO：41(EEVADYTMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：35(RASESVDTYGNNFIH)为CDRL1，SEQ IDNO：36(LASNLES)为CDRL2和SEQ ID NO：37(QQNNGDPWT)为CDRL3的抗体；
(n)19D4抗体；
(o)与9F3抗体结合相同表位的抗体；
(p)包含SEQ ID NO：31(SGYYWN)为CDRH1，SEQ ID NO：32(YIKSDGSNNYNPSLKN)为CDRH2，SEQ ID NO：33(EWKAMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：27(RASSTVSYSYLH)为CDRL1，SEQ ID NO：28(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：29(QQYSGYPLT)为CDRL3的抗体；
(q)9F3抗体；
(r)与24F12抗体结合相同表位的抗体；
(s)包含SEQ ID NO：47(SYAMS)为CDRH1，SEQ ID NO：48(EIGSGGSYTYYPDTVTG)为CDRH2，SEQ ID NO：49(ETTAGYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：43(SASQGINNFLN)为CDRL1，SEQ ID NO：44(YTSSLHS)为CDRL2和SEQ ID NO：45(QHFSKLPWT)为CDRL3的抗体；
(t)24F12抗体；
(u)包含可变区轻链的抗体，所述可变区轻链选自
LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；
(v)包含可变区重链的抗体，所述可变区重链选自
LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ IDNO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)；
(w)包含重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ IDNO：16)的抗体；
(x)包含重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQID NO：16)的抗体；以及
(y)包含重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)的抗体。
在特定的实施方案中，抗体与MORAb-003抗体结合相同表位。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：1
(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3。在另一个实施方案中，抗体是MOV18抗体。在又另一个实施方案中，抗体与MOV18抗体结合相同表位。在进一步实施方案中，抗体包含可变区轻链，所述可变区轻链选自LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。可替代地或组合地，抗体包含可变区重链，所述可变区重链选自LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVHFAIS，N(SEQID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)。在某些实施方案中，抗体包含(i)重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；或者重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。
在特定的实施方案中，通过将样品与选自下列的抗体对接触来评价源自所述受试者的样品中的FRα水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。
在某些实施方案中，所述抗体选自鼠抗体、人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、亲和抗体、高亲合多聚体、versabody、纳米抗体和结构域抗体。可替代地或组合地，所述抗体是例如用标记进行标记的，所述标记选自放射标记、生物素标记、发色团标记、荧光团标记或酶标记。
在某些实施方案中，FRα的水平通过使用技术确定，所述技术选自western印迹分析、放射免疫测定、免疫荧光定量、免疫沉淀、平衡透析法、免疫扩散法、溶液相测定、电化学发光免疫测定(ECLIA)和ELISA测定。
在本发明的前述方面的各个实施方案中，对照样品是在健康受试者中FRα的标准化对照水平。
在某些实施方案中，在测定样品中FRα的水平之前用胍处理样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前稀释样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前，离心、涡旋或离心和涡旋样品。
在特定实施方案中，受试者被分层在I期、II期、III期或IV期卵巢癌中。
在进一步方面，本发明提供了将卵巢癌受试者分层为至少四个癌症治疗组之一的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且基于在样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，将受试者分层为至少四个癌症治疗组之一；其中通过将样品与下列接触来评价源自受试者的样品中FRα的水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。例如，样品可以是尿、血清、血浆或腹水。
监测MORAb-003治疗对卵巢癌或肺癌的效力的方法
在一个方面，本发明提供了在患有卵巢癌或肺癌的受试者中监测卵巢癌或肺癌的MORAb-003治疗的效力的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，其中受试者以前已经施用过MORAb-003；并且将不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者样品中FRα水平的增加是MORAb-003治疗无效的指示；并且其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者样品中FRα水平的降低是MORAb-003治疗有效的指示。在特定的实施方案中，通过将样品与结合FRα的抗体接触来评价源自受试者的样品中不与细胞结合的FRα水平。例如，样品可以是尿、血清、血浆或腹水。
在进一步方面，本发明提供了在患有卵巢癌或肺癌的受试者中监测卵巢癌或肺癌的MORAb-003治疗的效力的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，其中受试者以前已经施用过MORAb-003；并且将源自受试者尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者尿样品中FRα水平的增加是MORAb-003治疗无效的指示；并且其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者尿样品中FRα水平的降低是MORAb-003治疗有效的指示。
在又另一个方面，本发明涉及在患有卵巢癌或肺癌的受试者中监测卵巢癌或肺癌的MORAb-003治疗的效力的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，其中受试者以前已经施用过MORAb-003；并且将源自受试者血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者血清样品中FRα水平的增加是MORAb-003治疗无效的指示；并且其中与对照样品中FRα水平相比，源自受试者血清样品中FRα水平的降低是MORAb-003治疗有效的指示。
在各个方面，FRα的水平通过将样品与结合FRα的抗体接触来确定。例如，抗体选自：
(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；
(b)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体；
(c)MOV18抗体；
(d)与MOV18抗体结合相同表位的抗体；
(e)548908抗体；
(f)与548908抗体结合相同表位的抗体；
(g)6D398抗体；
(h)与6D398抗体结合相同表位的抗体；
(i)与26B3抗体结合相同表位的抗体；
(j)包含SEQ ID NO：55(GYFMN)为CDRH1，SEQ ID NO：56(RIFPYNGDTFYNQKFKG)为CDRH2，SEQ ID NO：57(GTHYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：51(RTSENIFSYLA)为CDRL1，SEQ ID NO：52(NAKTLAE)为CDRL2和SEQ ID NO：53(QHHYAFPWT)为CDRL3的抗体；
(k)26B3抗体；
(1)与19D4抗体结合相同表位的抗体；
(m)包含SEQ ID NO：39(HPYMH)为CDRH1，SEQ ID NO：40(RIDPANGNTKYDPKFQG)为CDRH2，SEQ ID NO：41(EEVADYTMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：35(RASESVDTYGNNFIH)为CDRL1，SEQ IDNO：36(LASNLES)为CDRL2和SEQ ID NO：37(QQNNGDPWT)为CDRL3的抗体；
(n)19D4抗体；
(o)与9F3抗体结合相同表位的抗体；
(p)包含SEQ ID NO：31(SGYYWN)为CDRH1，SEQ ID NO：32(YIKSDGSNNYNPSLKN)为CDRH2，SEQ ID NO：33(EWKAMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：27(RASSTVSYSYLH)为CDRL1，SEQ ID NO：28(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：29(QQYSGYPLT)为CDRL3的抗体；
(q)9F3抗体；
(r)与24F12抗体结合相同表位的抗体；
(s)包含SEQ ID NO：47(SYAMS)为CDRH1，SEQ ID NO：48(EIGSGGSYTYYPDTVTG)为CDRH2，SEQ IDNO：49(ETTAGYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：43(SASQGINNFLN)为CDRL1，SEQ ID NO：44(YTSSLHS)为CDRL2和SEQ ID NO：45(QHFSKLPWT)为CDRL3的抗体；
(t)24F12抗体；
(u)包含可变区轻链的抗体，所述可变区轻链选自
LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；
(v)包含可变区重链的抗体，所述可变区重链选自
LK26HuVH(SEQ ID NO：17)：LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ IDNO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)；
(w)包含重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ IDNO：16)的抗体；
(x)包含重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQID NO：16)的抗体；和
(y)包含重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)的抗体。
在特定的实施方案中，抗体与MORAb-003抗体结合相同表位。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：1
(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SFQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3。在另一个实施方案中，抗体是MOV18抗体。在又另一个实施方案中，抗体与MOV18抗体结合相同表位。在进一步实施方案中，抗体包含可变区轻链，所述可变区轻链选自LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。可替代地或组合地，抗体包含可变区重链，所述可变区重链选自LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVHFAIS，N(SEQID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)。在某些实施方案中，抗体包含(i)重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；或者重链可变区LK26HuVH FAIS,N(SEQID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW,Y(SEQ ID NO：16)。
在特定的实施方案中，通过将样品与选自下列的抗体对接触来评价源自所述受试者的样品中的FRα水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。
在某些实施方案中，所述抗体选自鼠抗体、人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、亲和抗体、高亲合多聚体、versabody、纳米抗体和结构域抗体。可替代地或组合地，所述抗体是例如用标记进行标记的，所述标记选自放射标记、生物素标记、发色团标记、荧光团标记或酶标记。
在某些实施方案中，FRα的水平通过使用技术确定，所述技术选自western印迹分析、放射免疫测定、免疫荧光定量、免疫沉淀、平衡透析法、免疫扩散法、溶液相测定、电化学发光免疫测定(ECLIA)和ELISA测定。
在本发明的前述方面的各个实施方案中，对照样品是在健康受试者中FRα的标准化对照水平。在另一个实施方案中，对照样品是以前从受试者中获得的样品。
在某些实施方案中，在测定样品中FRα的水平之前用胍处理样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前稀释样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前，离心、涡旋或离心和涡旋样品。
预测受试者是否将对MORAb-003治疗响应的方法
在一个方面，本发明提供了预测患有表达FRα的癌症(如卵巢癌或肺癌)的受试者是否将对MORAb-003治疗响应的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示。
在一个方面，本发明提供了预测患有表达FRα的癌症(如卵巢癌或肺癌)的受试者是否将对MORAb-003治疗响应的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者尿样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示。
在进一步方面，本发明提供了预测患有表达FRα的癌症(如卵巢癌或肺癌)的受试者是否将对MORAb-003治疗响应的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者的血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者血清样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示。
在进一步实施方案中，表达FRα的癌症选自肺癌、间皮瘤、卵巢癌、肾癌、脑癌、子宫颈癌、鼻咽癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂体癌、结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，表达FRα的肺癌是非小细胞肺癌，如腺癌。
在进一步的方面，本发明提供了预测患有卵巢癌的受试者是否将对MORAb-003治疗响应的方法，其通过确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平而实现，其中尿样品中不与细胞结合的FRα以高于约9100pg/ml的浓度存在是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示。
在本发明前述方面的各个实施方案中，FRα在尿样品中存在的浓度高于约9500pg/mL、约10,000pg/mL、约11,000pg/mL、约12,000pg/mL、约13,000pg/mL、约14,000pg/mL、约15,000pg/mL、约16,000pg/mL、约17,000pg/mL、约18,000pg/mL、约19,000pg/mL、或约20,000pg/mL是受试者患有卵巢癌的指示。
在本发明前述方面的各个实施方案中，FRα的水平通过将样品与结合FRα的抗体接触来确定。例如，抗体选自：
(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；
(b)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体；
(c)MOV18抗体；
(d)与MOV18抗体结合相同表位的抗体；
(e)548908抗体；
(f)与548908抗体结合相同表位的抗体；
(g)6D398抗体；
(h)与6D398抗体结合相同表位的抗体；
(i)与26B3抗体结合相同表位的抗体；
(j)包含SEQ ID NO：55(GYFMN)为CDRH1，SEQ ID NO：56(RIFPYNGDTFYNQKFKG)为CDRH2，SEQ ID NO：57(GTHYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：51(RTSENIFSYLA)为CDRL1，SEQ ID NO：52(NAKTLAE)为CDRL2和SEQ ID NO：53(QHHYAFPWT)为CDRL3的抗体；
(k)26B3抗体；
(l)与19D4抗体结合相同表位的抗体；
(m)包含SEQ ID NO：39(HPYMH)为CDRH1，SEQ ID NO：40(RIDPANGNTKYDPKFQG)为CDRH2，SEQ ID NO：41(EEVADYTMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：35(RASESVDTYGNNFIH)为CDRL1，SEQ IDNO：36(LASNLES)为CDRL2和SEQ ID NO：37(QQNNGDPWT)为CDRL3的抗体；
(n)19D4抗体；
(o)与9F3抗体结合相同表位的抗体；
(p)包含SEQ ID NO：31(SGYYWN)为CDRH1，SEQ ID NO：32(YIKSDGSNNYNPSLKN)为CDRH2，SEQ ID NO：33(EWKAMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：27(RASSTVSYSYLH)为CDRL1，SEQ ID NO：28(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：29(QQYSGYPLT)为CDRL3的抗体；
(q)9F3抗体；
(r)与24F12抗体结合相同表位的抗体；
(s)包含SEQ ID NO：47(SYAMS)为CDRH1，SEQ ID NO：48(EIGSGGSYTYYPDTVTG)为CDRH2，SEQ ID NO：49(ETTAGYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：43(SASQGINNFLN)为CDRL1，SEQ ID NO：44(YTSSLHS)为CDRL2和SEQ ID NO：45(QHFSKLPWT)为CDRL3的抗体；
(t)24F12抗体；
(u)包含可变区轻链的抗体，所述可变区轻链选自
LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；
(v)包含可变区重链的抗体，所述可变区重链选自
LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ IDNO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)；
(w)包含重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ IDNO：16)的抗体；
(x)包含重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQID NO：16)的抗体；和
(y)包含重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)的抗体。
在特定的实施方案中，抗体与MORAb-003抗体结合相同表位。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：1
(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3。在另一个实施方案中，抗体是MOV18抗体。在又另一个实施方案中，抗体与MOV18抗体结合相同表位。在进一步实施方案中，抗体包含可变区轻链，所述可变区轻链选自LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。可替代地或组合地，抗体包含可变区重链，所述可变区重链选自LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVHFAIS，N(SEQID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)。在某些实施方案中，抗体包含(i)重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；或者重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。
在特定的实施方案中，通过将样品与选自下列的抗体对接触来评价源自所述受试者的样品中的FRα水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。
在某些实施方案中，所述抗体选自鼠抗体、人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、亲和抗体、高亲合多聚体、versabody、纳米抗体和结构域抗体。可替代地或组合地，所述抗体是例如用标记进行标记的，所述标记选自放射标记、生物素标记、发色团标记、荧光团标记或酶标记。
在某些实施方案中，FRα的水平通过使用技术确定，所述技术选自western印迹分析、放射免疫测定、免疫荧光定量、免疫沉淀、平衡透析法、免疫扩散法、溶液相测定、电化学发光免疫测定(ECLIA)和ELISA测定。
在本发明的前述方面的各个实施方案中，对照样品是在健康受试者中FRα的标准化对照水平。
在某些实施方案中，在测定样品中FRα的水平之前用胍处理样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前稀释样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前，离心、涡旋或离心和涡旋样品。
在进一步方面，本发明提供了预测患有表达FRα的癌症(如卵巢癌或肺癌)的受试者是否将对MORAb-003治疗响应的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者样品中与对照样品中FRα水平的差异是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示；其中通过将样品与下列接触来评价源自受试者的样品中FRα的水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。例如，样品可以是尿、血清、血浆或腹水。
在本发明前述方面的各个实施方案中，用于治疗的MORAb-003是(a)包含如SEQ IDNO：7中所述的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO：8中所述的轻链氨基酸序列的抗体；(b)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；或者
(c)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体。
治疗患有卵巢癌或肺癌的受试者的方法
在另一个方面，本发明提供了治疗患有卵巢癌或肺癌的受试者的方法，其通过下列实现：确定在源自所述受试者的样品(例如，尿、血清、血浆或腹水)中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自所述受试者样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有卵巢癌或肺癌的指示；并且将治疗有效量的MORAb-003施用于所述受试者。
在另一个方面，本发明提供了治疗患有卵巢癌或肺癌的受试者的方法，其通过下列实现：确定在源自所述受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自所述受试者尿样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有卵巢癌或肺癌的指示；并且将治疗有效量的MORAb-003施用于所述受试者。
在另一个方面，本发明提供了治疗患有卵巢癌或肺癌的受试者的方法，其通过下列实现：确定在源自所述受试者的血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自所述受试者血清样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有卵巢癌或肺癌的指示；并且将治疗有效量的MORAb-003施用于所述受试者。
在进一步的方面，本发明提供了治疗患有卵巢癌的受试者的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，其中尿样品中不与细胞结合的FRα以高于约9100pg/ml的浓度存在是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示；并且将治疗有效量的MORAb-003施用于所述受试者。
在特定的实施方案中，通过将样品与结合FRα的抗体接触来评价源自所述受试者的样品中不与细胞结合的FRα水平。
在本发明前述方面的各个实施方案中，FRα在尿样品中存在的浓度高于约9500pg/mL、约10,000pg/mL、约11,000pg/mL、约12,000pg/mL、约13,000pg/mL、约14,000pg/mL、约15,000pg/mL、约16,000pg/mL、约17,000pg/mL、约18,000pg/mL、约19,000pg/mL、或约20,000pg/mL是受试者患有卵巢癌的指示。
在本发明前述方面的各个实施方案中，FRα的水平通过将样品与结合FRα的抗体接触来确定。例如，抗体选自：
(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；
(b)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体；
(c)MOV18抗体；
(d)与MOV18抗体结合相同表位的抗体；
fe)548908抗体；
(f)与548908抗体结合相同表位的抗体；
(g)6D398抗体；
(h)与6D398抗体结合相同表位的抗体；
(i)与26B3抗体结合相同表位的抗体；
(j)包含SEQ ID NO：55(GYFMN)为CDRH1，SEQ ID NO：56(RIFPYNGDTFYNQKFKG)为CDRH2，SEQ ID NO：57(GTHYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：51(RTSENIFSYLA)为CDRL1，SEQ ID NO：52(NAKTLAE)为CDRL2和SEQ ID NO：53(QHHYAFPWT)为CDRL3的抗体；
(k)26B3抗体；
(l)与19D4抗体结合相同表位的抗体；
(m)包含SEQ ID NO：39(HPYMH)为CDRH1，SEQ ID NO：40(RIDPANGNTKYDPKFQG)为CDRH2，SEQ ID NO：41(EEVADYTMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：35(RASESVDTYGNNFIH)为CDRL1，SEQ IDNO：36(LASNLES)为CDRL2和SEQ ID NO：37(QQNNGDPWT)为CDRL3的抗体：
(n)19D4抗体；
(o)与9F3抗体结合相同表位的抗体；
(p)包含SEQ ID NO：31(SGYYWN)为CDRH1，SEQ ID NO：32(YIKSDGSNNYNPSLKN)为CDRH2，SEQ ID NO：33(EWKAMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：27(RASSTVSYSYLH)为CDRL1，SEQ ID NO：28(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：29(QQYSGYPLT)为CDRL3的抗体；
(q)9F3抗体；
(r)与24F12抗体结合相同表位的抗体；
(s)包含SEQ ID NO：47(SYAMS)为CDRH1，SEQ ID NO：48(EIGSGGSYTYYPDTVTG)为CDRH2，SEQ ID NO：49(ETTAGYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：43(SASQGINNFLN)为CDRL1，SEQ ID NO：44(YTSSLHS)为CDRL2和SEQ ID NO：45(QHFSKLPWT)为CDRL3的抗体：
(t)24F12抗体；
(u)包含可变区轻链的抗体，所述可变区轻链选自
LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；
(v)包含可变区重链的抗体，所述可变区重链选自
LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ IDNO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)；
(w)包含重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ IDNO：16)的抗体；
(x)包含重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQID NO：16)的抗体；以及
(y)包含重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)的抗体。
在特定的实施方案中，抗体与MORAb-003抗体结合相同表位。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：1
(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3。在另一个实施方案中，抗体是MOV18抗体。在又另一个实施方案中，抗体与MOV18抗体结合相同表位。在进一步实施方案中，抗体包含可变区轻链，所述可变区轻链选自LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)；和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。可替代地或组合地，抗体包含可变区重链，所述可变区重链选自LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVHFAIS，N(SEQID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)。在某些实施方案中，抗体包含(i)重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；或者重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)。
在特定的实施方案中，通过将样品与选自下列的抗体对接触来评价源自所述受试者的样品中的FRα水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。
在某些实施方案中，所述抗体选自鼠抗体、人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、亲和抗体、高亲合多聚体、versabody、纳米抗体和结构域抗体。可替代地或组合地，所述抗体是例如用标记进行标记的，所述标记选自放射标记、生物素标记、发色团标记、荧光团标记或酶标记。
在某些实施方案中，FRα的水平通过使用技术确定，所述技术选自western印迹分析、放射免疫测定、免疫荧光定量、免疫沉淀、平衡透析法、免疫扩散法、溶液相测定、电化学发光免疫测定(ECLIA)和ELISA测定。
在本发明的前述方面的各个实施方案中，对照样品是在健康受试者中FRα的标准化对照水平。
在某些实施方案中，在测定样品中FRα的水平之前用胍处理样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前稀释样品。可替代地或组合地，在测定样品中FRα的水平之前，离心、涡旋或离心和涡旋样品。
在进一步方面，本发明提供了治疗患有卵巢癌或肺癌的受试者的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者样品中与对照样品中FRα水平的差异是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示；其中通过将样品与下列接触来评价源自受试者的样品中FRα的水平：(a)固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；(b)固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；(c)固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4抗体；以及(d)固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。例如，样品可以是尿、血清、血浆或腹水。
在本发明前述方面的各个实施方案中，用于治疗的MORAb-003是(a)包含如SEQ IDNO：7中所述的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO：8中所述的轻链氨基酸序列的抗体；(b)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；或者
(c)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，sEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体。
本发明的试剂盒
在一个方面，本发明提供了用于评价受试者是否患有表达FRα的癌症或者用于评价在受试者中表达FRα的癌症的进展的试剂盒，所述试剂盒包括用于确定在源自受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平的工具；和评价受试者是否患有表达FRα的癌症或者评价表达FRα的癌症的进展的试剂盒的使用说明。例如，表达FRα的癌症选自肺癌、间皮瘤、卵巢癌、肾癌、脑癌、子宫颈癌、鼻咽癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂体癌、结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。在又另一个实施方案中，表达FRα的癌症是非小细胞肺癌，如腺癌。在进一步实施方案中，样品是尿、血清、血浆或腹水。
在进一步实施方案中，工具包含叶酸受体α(FRα)结合剂，例如，抗体。在进一步实施方案中，抗体选自：
(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；
(b)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体：
(c)MOV18抗体；
(d)与MOV18抗体结合相同表位的抗体；
(e)548908抗体；
(f)与548908抗体结合相同表位的抗体；
(g)6D398抗体；
(h)与6D398抗体结合相同表位的抗体；
(i)与26B3抗体结合相同表位的抗体；
(j)包含SEQ ID NO：55(GYFMN)为CDRH1，SEQ ID NO：56(RIFPYNGDTFYNQKFKG)为CDRH2，SEQ ID NO：57(GTHYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：51(RTSENIFSYLA)为CDRL1.SEQ ID NO：52(NAKTLAE)为CDRL2和SEQ ID NO：53(QHHYAFPWT)为CDRL3的抗体；
(k)26B3抗体；
(1)与19D4抗体结合相同表位的抗体；
(m)包含 SEQ ID NO：39(HPYMH)为CDRH1，SEQ ID NO：40(RIDPANGNTKYDPKFQG)为CDRH2.SEQ ID NO：41(EEVADYTMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：35(RASESVDTYGNNFIH)为CDRL1，SEQ ID NO：36(LASNLES)为CDRL2和SEQ ID NO：37(QQNNGDPWT)为CDRL3的抗体；
(n)19D4抗体；
(o)与9F3抗体结合相同表位的抗体；
(p)包含SEQ ID NO：31(SGYYWN)为CDRHI，SEQ ID NO：32(YIKSDGSNNYNPSLKN)为CDRH2，SEQ ID NO：33(EWKAMDY)为CDRH3，SEQ ID NO：27(RASSTVSYSYLL)为CDRL1，SEQ ID NO：28(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：29(QQYSGYPLT)为CDRL3的抗体；
(q)9F3抗体；
(r)与24F12抗体结合相同表位的抗体；
(s)包含SEQ ID NO：47(SYAMS)为CDRH1，SEQ ID NO：48(EIGSGGSYTYYPDTVTG)为CDRH2，SEQ ID NO：49(ETTAGYFDY)为CDRH3，SEQ ID NO：43(SASQGINNFLN)为CDRL1，SEQ ID NO：44(YTSSLHS)为CDRL2和SEQ ID NO：45(QHFSKLPWT)为CDRL3的抗体；
(t)24F12抗体；
(u)包含可变区轻链的抗体，所述可变区轻链选自
LK26HuVK(SEQ ID NO：13)；LK26HuVKY (SEQ ID NO：14)；
LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)：和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；
(v)包含可变区重链的抗体，所述可变区重链选自
LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVHFAIS，N(SEQ ID NO：18)；LK26HuVHSLF(SEQ IDNO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ ID NO：20)；和LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)；
(w)包含重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO：21)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ IDNO：16)的抗体；
(x)包含重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQID NO：16)的抗体；以及
(y)包含重链可变区LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)和轻链可变区LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)的抗体。
在某些实施方案中，所述抗体是标记的，所述标记包括但不限于放射标记、生物素标记、发色团标记、荧光团标记或酶标记。
在又另一个实施方案中，所述试剂盒包括从受试者获得样品的工具。
还通过下述详细说明和附图进一步阐述了本发明。
附图概述
图1是如实施例中所述用于评价尿中FRα的电化学发光免疫测定(ECLIA)方法的图示。与固体载体结合的MOV18抗体结合尿中的FRα。随后通过与Ru-标记的MORAb-003抗体结合而检测FRα。
表2显示了如通过ECLIA测量的卵巢癌受试者和正常对照受试者的尿中FRα水平的分布(参见实施例1)。
图3描述了使用免疫印迹检测卵巢癌患者的尿中的FRα(泳道1上的暗淡条带，泳道2上的清楚条带)(参见实施例5)。
表4显示了如实施例7中所述，在用胍处理尿之后，如通过ECLIA测量的卵巢癌受试者和正常对照受试者的尿中FRα水平的分布。
图5描述了ROC曲线，其显示了如实施例7中所述，在用胍处理尿后尿中FRα水平的ECLIA测量的灵敏度和特异性。曲线下面积(AUC)测量了试验在区分卵巢癌和对照受试者中的精确度。使用9100pg/mL的截止值(其上的测试结果被认为是异常的)。
表6显示了在针对尿肌酸酐水平校正后卵巢癌(OC)和正常对照受试者中FRα水平的分布。卵巢癌患者和对照之间的FRα的肌酸酐校正水平之间存在统计显著性差异(p＝0.007)(参见实施例8)。
图7描述了使用胍处理的尿样品的电化学发光测定(ECLIA)测定的肌酸酐校正的FRα水平的ROC分析(参见实施例8)。
图8是如实施例9中所述用于评价样品中FRα(即，FRα)水平的酶免疫测定(EIA)方法的图示。MOV-18充当捕获抗体，其结合来自生物流体的FRα。通过与生物素化的MORAb-003的结合检测FRα，这使用与辣根过氧化物酶缀合的抗生物素蛋白(抗生物素蛋白-HRP)来检测。
图9描述了如实施例9中所述，使用一步和两步孵育程序测量血清中的FRα而获得的结果。
图10是如实施例11中所述，与酶免疫测定(EIA)方法一起使用用于评价人血浆中FRα水平的捕获和检测抗体的三种不同组合的图示。
图11显示了如实施例11中所述，使用EIA和捕获和检测抗体的三种组合测定的个体受试者的FRα的血浆浓度(pg/mL)。
图12描述了OD值和FRα浓度之间的关系(参见实施例11)。
表13描述了如使用EIA所测定的患有卵巢癌的受试者和正常对照受试者中血浆FRα水平的分布(参见实施例12)。
图14描述了使用EIA和ECLIA测定的FRα血浆浓度之间的相关性(参见实施例12)。
图15显示了血清和尿中的FRα水平的ECLIA量度之间的相关性。肺癌患者的相关性为r＝0.24(上小图)且卵巢癌患者的相关性为r＝-0.76(下小图)(参见实施例13)。
图16显示了使用第1对进行的测定的血清相比于血浆FRα水平的相关性(参见实施例16)。
图17显示了使用第2对进行的测定的血清相比于血浆FRα水平的相关性(参见实施例16)。
图18显示了使用第1对相比于第2对进行的测定的血清FRα水平的相关性(参见实施例16)。
图19显示了使用第1对相比于第2对进行的测定的血浆FRα水平的相关性(参见实施例16)。
图20显示了使用第1对进行的测定的血清FRα水平的日间相关性(参见实施例16)。
发明详述
本发明基于，至少部分基于，下列意外发现：与对照样品相比，在患有表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌的受试者的体液如尿或血清中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)以升高的水平存在。此外，本发明基于，至少部分基于，鉴定表现出评价样品中的FRα水平必要的灵敏度的免疫学测定方法，其中以前这样做的尝试重复失败了。作为结果，本发明提供了用于诊断表达FRα的癌症的方法，其通过评价源自受试者样品中不与细胞结合的FRα的水平而实现。事实上，本发明通过提供能够准确地评价样品中不与细胞结合的FRα水平的免疫学测定方法而克服了在以前开发用于表达FRα的癌症如卵巢癌的基于FRα的诊断测定的尝试过程中观察到的挑战。
相应地，提供了用于评价受试者是否具有表达FRα的癌症或处于发展表达FRα的癌症的风险中和进一步，用于评价表达FRα的癌症的进展的方法和试剂盒。在各个实施方案中，该方法涉及在评价受试者中卵巢癌的存在、程度或发展风险中将样品例如尿和血清中不与细胞结合的FRα的水平与对照水平相比的比较。在特定的实施方案中，本方法涉及MORAb-003抗体、与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体或具有
SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为
CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ IDNO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体在评价样品例如尿或血清中不与细胞结合的FRα的水平中的用途。可替代地或组合地，可以根据本发明的方法使用MOV18抗体或与MOV18抗体结合相同表位的抗体、548908抗体、与548908抗体结合相同表位的抗体、6D398抗体或与548908抗体结合相同表位的抗体。
本发明的各个方面在下面的子部分中进一步详述：
I.定义
本文所用的下列所有术语中的每一个具有与其在本部分中有关的含义。
本文所用的冠词“一个(种)”是指一个(种)或以上(即至少一个(种))的冠词的语法上的对象。例如，“一种要素”是指一种要素或一种以上的要素。
如本文中所使用的，术语“受试者”是指人或非人动物，包括兽医学受试者。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类、小鼠、兔、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物和爬行动物。在优选的实施方案中，受试者是人。
术语“癌症”或“肿瘤”是本领域众所周知的，并且是指例如在受试者中某种细胞的存在，所述细胞具有致癌细胞典型的特征，如失控的增殖，永生性，转移潜能，快速生长和增殖速率，和某些特征性形态特征。癌细胞经常为肿瘤的形式，但是这样的细胞可以单独存在于受试者中，或可以是非肿瘤发生性癌细胞，如白血病细胞。如本文中所使用的，术语“癌症”包括恶性肿瘤前的癌症以及恶性癌症。
如本文所使用的，“表达FRα的癌症”包括任何类型的癌症，其特征在于癌细胞表达FRα。在特定的实施方案中，表达FRα的癌症包括癌状况，其特征在于癌细胞能够以一定方式分泌、脱落、输出或释放FRα，使得在来自受试者的生物样品中可检测到升高水平的FRα。表达FRα的癌症包括但不限于肺癌(例如细支气管肺泡癌、类癌肿瘤、和非小细胞肺癌，如腺癌)；间皮瘤；卵巢癌；肾癌；脑癌(例如间变性室管膜瘤和小脑青少年毛细胞型星形细胞瘤)；子宫颈癌；鼻咽癌；中胚层衍生的肿瘤；头颈部鳞状细胞癌；子宫内膜癌；卵巢的子宫内膜样腺癌、浆液性囊腺癌、乳腺癌；膀胱癌；胰腺癌、骨癌(例如高级骨肉瘤)；垂体癌(例如垂体腺瘤)。参见例如美国专利号7,754,698；美国专利申请号2005/0232919；WO 2009/132081；Bueno R等人J of Thoracic and Cardiovascular Surgery,121(2):225-233(2001)；Elkanat H&Ratnam M.Frontiers in Bioscience,11,506-519(2006)；Franklin,WA等人Int J Cancer,增刊8:89-95(1994)；Hartman L.C.等人Int J Cancer 121:938-942(2007)；Iwakiri S等人Annals of Surgical Oncology,15(3):889-899；Weitman,SD等人Cancer Res 52:3396-3401(1992)；Saba N.F.等人HeadNeck,31(4):475-481(2009)；YangR等人Clin Cancer Res 13:2557-2567(2007)。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，表达FRα的癌症是肺癌，如非小细胞肺癌。在其他实施方案中，表达FRα的癌症是结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。
如本文所使用的，“患有表达FRα的癌症”的受试者是由合格的临床医生(例如，通过本发明的方法)临床诊断具有这样的癌症的受试者，或者表现出一种或多种这样的癌症的迹象或症状(例如，生物体液中升高水平的FRα)且随后由合格的临床医生(例如，通过本发明的方法)临床诊断具有这样的癌症的受试者。充当表达FRα的癌症的动物模型的非人受试者也可以落在术语“患有表达FRα的癌症”的受试者的范围内。
术语“卵巢癌”是指本领域公认的疾病，包括上皮卵巢癌(EOC；占西方国家中卵巢癌的90％以上)、生殖细胞瘤(占卵巢癌的大约2-3％)和间质卵巢癌中的每一种。基于肿瘤组织的分化，将卵巢癌分层为不同的组。在I级中，肿瘤组织分化良好。在II级中，肿瘤组织分化中度良好。在III级中，肿瘤组织分化差。与I级和II级相比，该级与预后较差相关。
基于癌症的传播将卵巢癌分层为不同的阶段。I期通常限于围绕一侧(IA期)或两侧(IB期)卵巢的嚢内，尽管在某些I期(即IC期)癌症中，在腹水、腹膜漂洗液或卵巢表面可以检测到恶性细胞。II期涉及肿瘤从一侧或两侧卵巢向其他骨盆结构扩散或转移。在IIA期中，肿瘤延伸或已经转移到子宫、输卵管或这两者中。IIB期涉及肿瘤向骨盆的延伸。IIC期是IIA期或IIB期，其中在腹水、腹膜漂洗液或卵巢表面可以检测到恶性细胞。在III期中，肿瘤包含至少一种向小肠或网膜的恶性延伸，已经形成显微镜下可见(IIIA期)或肉眼可见(直径<2厘米，IIIB期；直径>2厘米，IIIC期)大小的骨盆外腹膜植入物，或者已经转移到腹膜后或腹股沟淋巴结(IIIC期的另一个指征)。在IV期中，能够检测到远端(即非腹膜)肿瘤转移。
卵巢癌各期的持续时间目前还不知道，但是认为各至少约一年(Richart等人，1969,Am.J.Obstet.Gynecol.105:386)。随着阶段名称增加，预后降低。例如，诊断为I、II、III、IV期卵巢癌的人受试者的5年存活率分别为80％、57％、25％和8％。
每种前述卵巢癌的类型、组和阶段由如本文所使用的术语“卵巢癌”所包括。
如本文所使用的，术语“肺癌”是指涉及失控的细胞生长(其在某些情况下导致转移)的肺组织中的疾病。肺癌是在男性和女性中癌症相关死亡的最常见的原因。大多数原发性肺癌是源自上皮细胞的肺癌。肺癌的主要类型是小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是非小细胞肺癌。
小细胞肺癌或小细胞肺癌(SCLC)是恶性肺癌，其中癌细胞具有平坦形状和稀疏细胞质，因此SCLC有时被称为“燕麦细胞癌”。SCLC通常比NSCLC转移性更强，且有时看到与鳞状细胞癌组合。
如本文所使用的，术语“非小细胞肺癌”也被称为非小细胞肺癌(NSCLC)，是指除小细胞肺癌(SCLC)以外的上皮肺癌。主要有三种子类型：腺癌、鳞状细胞肺癌、和大细胞肺癌。其他较少见的非小细胞肺癌类型包括多形性、类癌肿瘤、唾液腺癌和未分类的癌。腺癌占肺癌的约40％，且是从不吸烟的人中最常见的肺癌类型。鳞状细胞癌占肺癌的约25％。肺鳞状细胞癌在男性中比女性中更常见，且甚至比其他类型的肺癌与吸烟史更加高度相关。肺的鳞状细胞癌至少有四种变体(乳头状、小细胞、透明细胞和基底细胞样)。大细胞肺癌是源自肺中转化的上皮细胞的恶性肿瘤的异质组。大细胞肺癌是缺乏小细胞癌、鳞状细胞癌、或腺癌的光显微特征的癌。
不同分期系统用于SCLC和NSCLC。SCLC被分类为局限于同侧半胸的有限疾病或具有转移超过同侧半胸的广泛疾病。
可以使用肿瘤-节-转移(tumor-nodes-metastasis，TNM)分期系统对NSCLC分类。参见Spira J&Ettinger,D.S.Multidisciplinary management of lung cancer,N Engl JMed,350:382-(2004)(下文称Spira)；Greene FL,Page DL,Fleming ID,Fritz AG,BalchCM,Haller DG,等人(编)，AJCC Cancer Staging Manual.第6版.New York:Springer-Verlag,2002:167-77(下文称Greene)；Sobin LH,Wittekind CH(编)，InternationalUnion Against Cancer.TNM classification of malignant tumours.第6版.New York:Wiley-Liss(2002)(下文称Sobin)。此外，通常根据下列分类方案确定的癌症阶段治疗NSCLC(参见http://www.cancer.gov/cancertopics/pdq/treatment/non-small-cell-lung/Patient/page2#Keypoint10)。
在隐匿(隐藏)期，在痰(从肺部咳出的粘液)中发现癌细胞，但是通过成像或支气管镜检查在肺中没有发现肿瘤，或者肿瘤太小无法检查到。
在0期(原位癌)，在呼吸道的内衬(lining)中发现异常细胞。这些异常细胞可能变为癌症且扩散到附近的正常组织。0期也被称为原位癌。
其中癌症已经形成的I期分为IA和IB期。
在IA期，肿瘤只是在肺中并且是3厘米或更小。
在IB期，癌症还没有扩散到淋巴结，且下列中的一种或多种是真实的：(i)肿瘤大于3厘米，但不超过5厘米；(ii)癌症已经扩散到主支气管且在气管和支气管连接处以下至少2厘米；(ⅲ)癌症已经扩散到覆盖肺的最内层膜；(iv)在气管和支气管连接处的区域，肺的部分已经崩塌或发展出肺炎(肺的炎症)。
在IIA期，癌症已经扩散到胸部和原发肿瘤同一侧的某些淋巴结；癌症是(a)5cm或更小，(b)已经扩散到主支气管，和/或(c)已经扩散到肺内衬的最内层。或者，癌症还没有扩散到淋巴结；癌症是(d)大于5cm但不超过7cm，(e)已经扩散到主支气管，和/或(f)已经扩散到肺内衬的最内层。肺的部分可能已经崩塌或发炎。根据肿瘤大小、发现肿瘤的部位和淋巴结中是否存在癌症，将IIA期分成两个部分。在第一部分中，癌症已经扩散到胸部和肿瘤同一侧的淋巴结。具有癌症的淋巴结在肺内或支气管附近。此外，下列中的一种或多种是真实的：(i)肿瘤不超过5厘米；(ii)癌症已经扩散到主支气管且在气管和支气管连接处以下至少2厘米；(ⅲ)癌症已经扩散到覆盖肺的最内层膜；(iv)在气管和支气管连接处的区域，肺的部分已经崩塌或发展出肺炎(肺的炎症)。在第二部分，癌症还没有扩散到淋巴结，且下列中的一种或多种是真实的：(i)肿瘤大于5厘米，但不超过7厘米；(ii)癌症已经扩散到主支气管且在气管和支气管连接处以下至少2厘米；(ⅲ)癌症已经扩散到覆盖肺的最内层膜；(iv)在气管和支气管连接处的区域，肺的部分已经崩塌或发展出肺炎(肺的炎症)。
在IIB期，癌症已经扩散到胸部和原发肿瘤同一侧的某些淋巴结；癌症是(a)大于5cm但不超过7cm，(b)已经扩散到主支气管，和/或(c)已经扩散到肺内衬的最内层。肺的部分可能已经崩塌或发炎。或者，(d)癌症大于7cm；(e)已经扩散至主支气管，(f)隔膜，(g)胸壁或胸壁的内衬；和/或(h)已经扩散到心脏周围的膜。在相同肺叶可能存在一个或多个分开的肿瘤；癌症可能已经扩散到控制隔膜的神经；全肺可能已经崩塌或发炎。根据肿瘤大小、发现肿瘤的部位和淋巴结中是否存在癌症，将IIB期分成两个部分。在第一部分中，癌症已经扩散到胸部和肿瘤同一侧的淋巴结附近。具有癌症的淋巴结在肺内或支气管附近。此外，下列中的一种或多种是真实的：(i)肿瘤大于5厘米，但不超过7厘米；(ii)癌症已经扩散到主支气管且在气管和支气管连接处以下至少2厘米；(ⅲ)癌症已经扩散到覆盖肺的最内层膜；(iv)在气管和支气管连接处的区域，肺的部分已经崩塌或发展出肺炎(肺的炎症)。在第二部分，癌症还没有扩散到淋巴结，且下列中的一种或多种是真实的：(i)肿瘤大于7厘米；(ii)癌症已经扩散到主支气管(且在气管和支气管连接处以下少于2厘米)，胸壁，隔膜，或控制隔膜的神经；(ⅲ)癌症已经扩散到心脏周围或内衬胸壁的膜；(iv)整个肺已经崩塌或发展出肺炎(肺的炎症)，(ⅴ)在相同肺叶存在一个或多个分开的肿瘤。
根据肿瘤大小、发现肿瘤的部位和哪些淋巴结具有癌症(如果具有)，将IIIA期分成三个部分。在IIIA期的第一部分中，癌症已经扩散到胸部和肿瘤同一侧的淋巴结。具有癌症的淋巴结在胸骨(胸骨)附近或在支气管进肺处。而且，肿瘤可以是任何大小；肺的部分(气管和支气管连接处)或整个肺可能已经崩塌或发展出肺炎(肺的炎症)；在相同肺叶可能存在一个或多个分开的肿瘤；且癌症可能已经扩散到下列中任一种：(i)主支气管，但不是气管和支气管连接的区域，(ⅱ)胸壁，(ⅲ)隔膜和控制它的神经，(iv)肺周围或内衬胸壁的膜，(iv)心脏周围的膜。在IIIA期的第二部分中，癌症已经扩散到胸部和肿瘤同一侧的淋巴结。具有癌症的淋巴结在肺内或支气管附近。而且，肿瘤可以是任何大小；整个肺可能已经崩塌或发展出肺炎(肺的炎症)；在具有癌症的肺的任何叶可能存在一个或多个分开的肿瘤；且癌症可能已经扩散到下列中任一种：(i)主支气管，但不是气管和支气管连接的区域，(ⅱ)胸壁，(ⅲ)隔膜和控制它的神经，(iv)肺周围或内衬胸壁的膜，(v)心脏或其周围的膜，(vi)进入或导出心脏的主要血管，(vi)气管，(vii)食道，(viii)控制喉(声音盒)的神经，(ix)胸骨(胸骨)或骨架，(x)龙骨突(气管和支气管连接处)。在IIIA期的第三部分，癌症还没有扩散到淋巴结，且肿瘤可以是任何大小，且肿瘤已经扩散到下列中的一种或多种：(i)心脏，(ii)进入或导出心脏的主要血管，(iii)气管，(iv)食道，(viii)控制喉(声音盒)的神经，(vi)胸骨(胸骨)或骨架，(vi)龙骨突(气管和支气管连接处)。
根据肿瘤大小、发现肿瘤的部位和哪些淋巴结具有癌症，将IIIB期分成两个部分。在第一部分中，癌症已经扩散到锁骨上的淋巴结或扩散到胸部和肿瘤同一侧的淋巴结；肿瘤可以是任何大小；肺的部分(如气管和支气管连接处)或整个肺可能已经崩塌或发展出肺炎(肺的炎症)；在具有癌症的肺的任何肺叶可能存在一个或多个分开的肿瘤；且癌症可能已经扩散到下列中任一种：(i)主支气管，(ⅱ)胸壁，(ⅲ)隔膜和控制它的神经，(iv)肺周围或内衬胸壁的膜，(iv)心脏或其周围的膜，(v)进入或导出心脏的主要血管，(vi)气管，(vii)食道，(viii)控制喉的神经(声音盒)，(ix)胸骨(胸骨)或骨架，(x)龙骨突(气管和支气管连接处)。在IIIB期的第二部分中，癌症已经扩散到胸部和肿瘤同一侧的淋巴结；具有癌症的淋巴结在胸骨(胸骨)附近或在支气管进肺处；肿瘤可以是任何大小；同一肺的不同肺叶中可能存在分开的肿瘤；且癌症已经扩散到下列中任一种：(i)心脏，(ii)进入或导出心脏的主要血管，(iii)气管，(iv)食道，(viii)控制喉(声音盒)的神经，(vi)胸骨(胸骨)或骨架，(vii)龙骨突(气管和支气管连接处)。
在IV期，肿瘤可以是任何大小且癌症已经扩散到淋巴结。下列中的一种或多种是真实的：在两个肺中存在一个或多个肿瘤；在肺或心脏周围的流体中发现癌症；癌症已经扩散到身体的其他部分，如脑、肝、肾上腺、肾脏、或骨。
因此，在上述发明的各个实施方案中，基于受试者的样品(例如，尿或血清)中不与细胞如正常或癌细胞结合的FRα水平的评价，可以将肺癌分层为前述任何阶段(例如，隐匿、0期、IA期、IB期、IIA期、IIB期、IIIA期、IIIB期或IV期)。
如本文所使用的，术语“叶酸受体α”(也称为FRα、FR-alpha、FOLR-1或FOLR1)是指叶酸的高亲和力受体的α同种型。膜结合的FRα通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚)附着至细胞表面，在细胞外和内吞区室之间再循环，且能够将叶酸运输进入细胞中。FRα表达在多种上皮组织中，包括女性生殖道、胎盘、乳房、肾近端小管、脉络丛、肺和唾液腺的上皮组织。FRα的可溶性形式可以通过蛋白酶或磷脂酶对膜锚定的叶酸受体的作用而衍生。
人FRα的共有核苷酸和氨基酸序列在本文中分别描述为SEQ ID NO:24和25。本文所使用的术语也包括变体，例如，含有至少一个氨基酸取代的天然存在的等位基因变体或序列。
如本文所使用的，术语“不与细胞结合”是指不与细胞(如癌细胞)的细胞膜结合的FRα。在特定的实施方案中，不与细胞结合的FRα不与任何细胞结合，且在生物流体例如尿或血清中是可自由漂浮或溶解的。例如，FRα可能从正常或癌细胞，例如从癌细胞的表面，脱落、分泌或输出至生物流体中。
如本文所使用的，不与细胞结合的叶酸受体α的“水平”是指使用本领域中已知的任何测量蛋白水平的方法所确定的叶酸受体α蛋白的水平。这些方法包括，例如电泳、毛细管电泳、高效液相层析(HPLC)、薄层层析(TLC)、超扩散层析(hyperdiffusionchromatography)、液体或凝胶沉淀素反应、吸收光谱学、比色测定法、分光光度测定法、流式细胞术、免疫扩散(单向或双向)、溶液相测定法、免疫电泳法、Western印迹法、放射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫荧光测定、和电化学发光免疫测定法(下文例举)等。在优选的实施方案中，如本文中更详细描述的，使用基于抗体的技术来确定水平。
通常优选的是，将对于不与细胞结合的FRα特异性的抗体或结合蛋白固定在用于Western印迹和免疫荧光技术的固体载体上。合适的固相载体(supports)或载体(carriers)包括任何能够结合抗原或抗体的载体。众所周知的载体或载体包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龙、淀粉酶、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、辉长岩和磁铁矿。
本领域技术人员将知道许多其他合适的用于结合抗体或抗原的载体，并且能够改造这样的载体以与本发明的一起使用。例如，从受试者样品(例如，尿或血清)中分离的蛋白质可以在聚丙烯酰胺凝胶电泳上电泳，并且固定在固相载体如硝酸纤维素上。随后可用适当的缓冲液洗涤载体，然后用标记的抗体处理。随后可以用缓冲液第二次洗涤固相载体以除去未结合的抗体。随后可通过常规方法检测固体载体上结合的标记的量。使用电泳技术检测蛋白质的方法是本领域技术人员众所周知的(一般参见，R.Scopes(1982)ProteinPurification,Springer-Verlag,N.Y.；Deutscher,(1990)Methods in Enzymology第182卷:Guide to Protein Purification,Academic Press,Inc.,N.Y.)。
其他标准方法包括本领域普通技术人员众所周知的免疫测定技术，且可参见Principles And Practice Of Immunoassay,第2版,Price和Newman编辑,MacMillan(1997)和Antibodies,A Laboratory Manual,Harlow和Lane编辑,Cold Spring HarborLaboratory,第9章(1988),其中每一篇的全部内容通过引用并入本文。
免疫测定中用来测定叶酸受体α表达的水平的抗体可以用可检测标记进行标记。术语“标记”对于结合剂或抗体而言，意在包括通过偶联(即物理连接)可检测物质与结合剂或抗体而对结合剂或抗体的直接标记，以及通过与直接标记的另一种试剂的反应性而对结合剂或抗体的间接标记。间接标记的实例包括使用荧光标记的二抗检测一抗。在一个实施方案中，抗体是标记的，例如放射性标记的、生色团标记的、荧光团标记的、或酶标记的。在另一个实施方案中，抗体是抗体衍生物(例如与底物或蛋白质-配体对(例如生物素-链霉抗生物素蛋白)的蛋白质或配体缀合的抗体，或抗体片段(例如单链抗体，分离的抗体超变结构域)，其特异性结合不与细胞结合的FRα。
在本发明的一个实施方案中，使用蛋白质组方法，例如质谱。质谱是分析技术，其包括将化学化合物电离以产生带电荷的分子(或其片段)，并且测量其质荷比。在典型的质谱程序中，样品获得自受试者，上样至质谱仪，并且通过不同的方法(例如，通过用电子束冲击它们)将其组分(例如，FRα)电离，导致形成带电荷颗粒(离子)。然后当它们经过电磁场时从离子的运动计算出颗粒的质荷比。
例如，基质辅助的激光解吸/电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)或表面增强的激光解吸/电离飞行时间质谱法(SELDI-TOF MS)涉及将样品如尿或血清施加到蛋白质结合芯片上(Wright,G.L.,Jr.,等人(2002)Expert Rev Mol Diagn 2:549；Li,J.,等人(2002)Clin Chem 48:1296；Laronga,C.,等人(2003)Dis Markers 19:229；Petricoin,E.F.,等人(2002)359:572；Adam,B.L.,等人(2002)Cancer Res 62:3609；Tolson,J.,等人(2004)LabInvest 84:845；Xiao,Z.,等人(2001)CancerRes 61:6029)，可以用来检测FRα的水平。
此外，用于确定不与细胞结合的FRα的水平的体内技术包括将针对FRα的标记抗体引入受试者中，所述抗体结合FRα且将其转化为可检测的分子。可以使用标准的成像技术确定受试者中可检测的不与细胞结合的FRα的存在、水平或位置。
如本文所使用的，术语“样品”是指从受试者分离的类似组织、细胞或组织的集合以及受试者中存在的流体、细胞、或组织。在优选的实施方案中，样品是包含不与癌细胞结合的FRα的生物流体。生物流体通常在生理温度下是液体，且可以包括存在于受试者或生物来源、从其获得、从其表达或以其他方式从其提取的天然存在的流体。源自特定组织、器官或局部区域的某些生物流体和某些其他生物流体可以是更加总体或全身位于受试者或生物来源中的。生物流体的实例包括血液、血清和浆膜液体、血浆、淋巴液、尿、脑脊液、唾液、眼部液体、囊液、泪珠、粪便、痰、分泌组织和器官的粘膜分泌物、阴道分泌物、妇科流体、腹水如与非实体瘤有关的那些、胸膜液、心包液、腹膜液、腹部和其他体腔的流体、通过支气管灌洗收集的流体等。在特定的实施方案中，样品是尿或血清。在另一个实施方案中，样品不包括腹水或不是腹水样品。在另一个实施方案中，样品不包括腹膜液或不是腹膜液样品。
在一个实施方案中，样品是从受试者中取出的。在另一个实施方案中，样品存在于受试者中。生物流体也可以包括与受试者或生物来源接触的液体溶液，例如，细胞和器官培养液，包括细胞或器官条件培养液，灌洗液等。
在一些实施方案中，样品的只有部分进行用于确定不与细胞结合的FRα的水平的测定，或样品的各个部分进行用于确定不与细胞结合的FRα的水平的各种测定。此外，在许多实施方案中，样品可以在测定之前通过物理或化学方式预处理。例如，在实施例部分中更详细讨论的实施方案中，样品例如尿样品在测定不与细胞结合的FRα之前进行离心、稀释和/或用增溶物质处理(例如，胍处理)。这样的技术用于增强本发明的测定的准确性、可靠性和重现性。
如本文所使用的，术语“对照样品”是指任何临床相关的对照样品，包括，例如，来自未患卵巢癌的健康受试者的样品，来自具有比待评价的受试者严重性更低或更慢进展的卵巢癌的受试者的样品，来自具有一些其他类型的癌症或疾病的受试者的样品等。对照样品可以包括源自一个或多个受试者的样品。对照样品也可以是在更早时间点从待评价的受试者制备的样品。例如，对照样品可以是在疾病的更早期在表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌发生之前，或者在施用治疗或部分治疗之前从待评价的受试者获得的样品。对照样品也可以是来自动物模型，或来自源自动物模型的组织或细胞系的表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌的样品。可以基于任何适当的统计措施，如例如中央趋势的量度包括平均数、中值或模态值(modal values)确定由一组测量值组成的对照样品中不与细胞结合的FRα的水平。
术语“对照水平”是指公认的或预先确定的FRα水平，其用于和源自受试者的样品中的FRα水平进行比较。在一个实施方案中，FRα的对照水平是基于来自缓慢疾病进展的一个或多个受试者的一份或多份样品中不与细胞结合的FRα的水平。在另一个实施方案中，不与细胞结合的FRα的对照水平是基于来自快速疾病进展的一个或多个受试者的样品中的水平。在另一个实施方案中，FRα的对照水平是基于来自一个或多个不受影响、即非病变的受试者(即不具有表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌的受试者)的一份或多份样品中不与细胞结合的FRα的水平。在又另一个实施方案中，FRα的对照水平是基于在施用卵巢癌治疗之前来自一个或多个受试者的样品中不与细胞结合的FRα的水平。在另一个实施方案中，FRα的对照水平是基于来自一个或多个具有表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌(其没有与测试化合物接触)的受试者的一份或多份样品中不与细胞结合的FRα的水平。在另一个实施方案中，FRα的对照水平是基于来自一个或多个不具有表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌(其与测试化合物接触)的受试者的一份或多份样品中不与细胞结合的FRα的水平。在一个实施方案中，FRα的对照水平是基于来自表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌的动物模型或源自表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌的动物模型的细胞系的一份或多份样品中不与细胞结合的FRα的水平。
在一个实施方案中，对照是标准化的对照，如，例如，使用来自不具有表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌的受试者群体的不与细胞结合的FRα水平的平均值所预先确定的对照。在本发明的还有其他实施方案中，FRα的对照水平是基于源自具有表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌的受试者的一份或多份非癌样品中不与细胞结合的FRα的水平。例如，当剖腹手术或其他医疗程序揭示卵巢的一个部分中卵巢癌的存在时，可以使用卵巢的未受影响部分确定FRα的对照水平，且可以将这种对照水平与卵巢的受影响部分中的FRα水平进行比较。类似地，当活检或其他医疗程序揭示肺的一个部分中肺癌的存在时，可以使用肺的未受影响部分确定FRα的对照水平，且可以将这种对照水平与肺的受影响部分中的FRα水平进行比较。
如本文所使用的，来自受试者的样品(即，测试样品)中不与细胞结合的叶酸受体α的水平与对照样品中不与细胞结合的叶酸受体α的水平之间的差异广泛地是指该两份样品中叶酸受体α水平的任何临床相关和/或统计学显著性差异。在一个示例性实施方案中，基于使用接收者操作特性(ROC)分析(实施例6中提供的实例)确定的截止值选择差异。
在其他实施方案中，差异必须大于用于确定不与细胞结合的FRα水平的方法的检测限值。优选差异至少大于评价方法的标准误差，且优选是评价方法的标准误差的至少约2-、约3-、约4-、约5-、约6-、约7-、约8-、约9-、约10-、约15-、约20-、约25-、约100-、约500-、约1000-倍或更大的差异。可以通过任何适当的比较，包括任何适当的参数或非参数描述性统计或比较评价该差异。例如，不与细胞结合的FRα水平的“增加”可以是指测试样品中的水平比对照样品中的FRα水平高约两倍，更优选约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10或更多倍。增加也可以是指测试样品中的水平比对照样品中的平均FRα水平高优选至少约1.5倍，更优选约2倍、约3倍、约4倍、约5倍或更多标准偏差。同样，不与细胞结合的FRα水平的“降低”可以是指测试样品中的水平比对照样品中的FRα水平低优选至少约两倍，更优选约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10或更多倍。降低也可以是指测试样品中的水平比对照样品中的平均FRα水平低优选至少约1.5倍，更优选约2倍、约3倍、约4倍、约5倍或更多标准偏差。
如本文所使用，术语“接触样品”与FRα结合试剂，例如，抗FRα抗体，包括用试剂或抗体暴露样品或其任何部分，使得样品的至少部分进入与试剂或抗体的接触。样品或其部分在其与试剂或抗体接触的行为之前可以以一些方式改变，如，通过使之经受物理或化学处理(例如，稀释或胍处理)。
如本文所使用，术语“抗体”包括4条多肽链，通过二硫键互连的二条重(H)链和两条轻(L)链，以及任何功能(即，抗原结合)片段、突变体、变体或其衍生物，其保留了Ig分子的重要表位结合特征。这样的突变体、变体、或衍生抗体形式是本领域已知的，且包括分子如Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fd段、Fabc片段、Sc抗体(单链抗体)、双抗体、个体抗体轻链、个体抗体重链、抗体链之间的嵌合融合体等。免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或子类。
每条重链由重链可变区(本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区构成。该重链恒定区由3个结构域构成：CH1、CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区构成。该轻链恒定区由1个结构域CL构成。VH和VL区可进一步再分为高变区，称作互补决定区(CDR)，其中散布有更保守的区，称作构架区(FR)。VH和VL各包含3个CDR和4个FR，按以下顺序从氨基末端至羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。轻链被分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ、或ε，且分别将抗体同种型定义为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。
如本文使用的术语抗体的"抗原结合部分"指保持特异性结合抗原(例如，不结合细胞的FRα)的能力的抗体的一个或多个片段。已显示抗体的抗原结合功能可由全长抗体的片段行使。术语抗体的"抗原结合部分"内包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区由二硫桥连接的2个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)包括VH和VL结构域的dAb；(vi)dAb片段(Ward等人(1989)Nature 341:544-546)，其由VH结构域组成；(vii)由VH或VL结构域组成的dAb；以及(viii)分离的互补决定区(CDR)或(ix)可任选通过合成接头连接的两个或更多个分离的CDR的组合。此外，尽管Fv片段的2个结构域(VL和VH)由各自基因编码，但是其可使用重组方法通过能使其成为单一蛋白质链的合成接头连接，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人(1988)Science 242,423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85,5879-5883)。该单链抗体也意在包括于术语抗体的"抗原结合部分"中。使用本领域技术人员已知的传统技术获得这些抗体片段，且针对与完整抗体相同方式的利用性，对片段加以筛选。抗原结合部分可以通过重组DNA技术或通过完整免疫球蛋白的酶或化学裂解而产生。
如本文所使用的，术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体、和天然存在或根据本领域中众所周知的方法重组产生的抗体。
在一个实施方案中，用于本发明方法中的抗体是双特异性抗体。"双特异性抗体"是具有2对不同重/轻链对和2个不同结合位点的人工杂合抗体。双特异性抗体可通过包括杂交瘤融合或Fab'片段连接在内的多种方法产生。参见例如，Songsivilai和Lachmann,Clin.Exp.Immunol.79:315-321；Kostelny等人(1992)J.Immunol.148,1547-1553。
在另一个实施方案中，用于本发明方法中的抗体是骆驼抗体，其描述于，例如，PCT公开WO 94/04678，其中的全部内容通过引用并入本文。
骆驼抗体的小、单可变结构域(被鉴定为VHH)的区域可以通过基因工程获得，以产生具有针对靶的高度亲和力的小蛋白，从而产生低分子量的、源于抗体的、被称为“骆驼纳米抗体”的蛋白。参见美国专利号5,759,808；还参见Stijlemans等人，2004J.Biol.Chem.279:1256-1261；Dumoulin等人，2003Nature 424:783-788；Pleschberger等人，2003Bioconjugate Chem.14:440-448；Cortez-Retamozo等人，2002Int.J.Cancer 89:456-62和Lauwereys等人，1998EMBO J.17:3512-3520。骆驼抗体和抗体片段的工程改造的文库是市售的，例如，从Ablynx、Ghent、Belgium获得。因此，本发明的特征是对于FRα具有高亲和力的骆驼纳米抗体。
在本发明的其他实施方案中，用于本发明方法中的抗体是双抗体、单链双抗体或双-双抗体。
双抗体是二价的、双特异性的分子，其中，VH和VL结构域在单条多肽链上表达，它们通过短到不允许相同链上两个结构域间配对的接头相连。VH和VL结构域与另一条链的互补结构域配对，由此产生两个抗原结合位点(参见例如，Holliger等人，1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak等人，1994Structure 2:1121-1123)。可通过在相同细胞中表达具有结构VHA-VLB和VHB-VLA(VH-VL构型)或VLA-VHB和VLB-VHA(VL-VH构型)的两条多肽链，来产生双抗体。它们中的大多数可以以可溶形式在细菌中表达。
单链双抗体(scDb)是通过用大约15个氨基酸残基的接头将两条双抗体形成多肽链连接起来而产生的(参见Holliger和Winter,1997 Cancer Immunol.Immunother.,45(3-4):128-30；Wu等人，1996 Immunotechnology,2(1):21-36)。scDb可以以可溶的活性单体形式在细菌中表达(参见Holliger and Winter,1997 Cancer Immunol.Immunother.,45(34):128-30；Wu等人，1996 Immunotechnology,2(1):21-36；Pluckthun和Pack,1997Immunotechnology,3(2):83-105；Ridgway等人，1996Protein Eng.,9(7):617-21)。
双抗体可与Fc融合，产生“双-双抗体”(参见Lu等人，2004 J.Biol.Chem.,279(4):2856-65)。
表现出抗体的功能性质但是其构架和抗原结合部分源于其它多肽(例如除抗体基因编码或抗体基因体内重组产生的那些之外的多肽)的FRα结合分子也可以用于本发明的方法中。这些结合分子的抗原结合结构域(例如FRα结合结构域)是通过定向进化方法产生的。参见美国专利号7,115,396。具有与抗体的可变结构域类似的总体折叠(“免疫球蛋白样”折叠)的分子是合适的支架蛋白。适合用于衍生抗原结合分子的支架蛋白包括纤连蛋白或纤连蛋白二聚体、生腱蛋白、N-钙黏着蛋白、E-钙黏着蛋白、ICAM、肌联蛋白、GCSF-受体、细胞因子受体、糖苷酶抑制剂、抗生素色蛋白、髓磷脂膜粘附分子P0、CD8、CD4、CD2、I类MHC、T-细胞抗原受体、CD1、C2和VCAM-1的I-组结构域、肌球蛋白结合蛋白C的I-组免疫球蛋白结构域、肌球蛋白结合蛋白H的I-组免疫球蛋白结构域、端蛋白的I-组免疫球蛋白结构域、NCAM、颤搐蛋白、神经胶质蛋白、生长激素受体、促红细胞生成素受体、催乳激素受体、干扰素-γ受体、β-半乳糖苷酶/葡糖醛酸酶、β-葡糖醛酸酶、转谷氨酰胺酶、T-细胞抗原受体、过氧化物歧化酶、组织因子结构域、细胞色素F、绿色荧光蛋白、GroEL或甜味蛋白。
当在抗体或抗体片段的上下文中使用时，“特异性结合”代表经由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因的片段编码的结构域与目的蛋白的一个或多个表位的结合，但其基本不识别和结合含有抗原分子的混合群体的样品中的其他分子。通常，如表面等离子共振测定或细胞结合测定所测量的，抗体以小于约1x10-8M的Kd与同源抗原结合。
如本文所使用的，叶酸受体α“结合剂”包括结合不与细胞结合的FRα的抗体以及非抗体结合剂。为了产生非抗体结合剂或结合分子，可以产生克隆文库，其中，对支架蛋白中形成抗原结合表面的区域(例如，在位置和结构上与抗体可变结构域免疫球蛋白折叠的CDR类似的区域)中的序列进行随机化。针对与目的抗原(例如FRα)的特异性结合以及针对其它功能(例如抑制FRα的生物活性)，对文库克隆加以测试。选择的克隆可用作为基础，用于进一步的随机化和选择，以产生对抗原有更高亲和力的衍生物。
产生高亲和力结合分子，例如，使用纤连蛋白III的第10模块(10Fn3)作为支架，其描述于美国专利号6,818,418和7,115,396；Roberts和Szostak,1997Proc.Natl.Acad.SciUSA 94:12297；美国专利号6,261,804；美国专利号6,258,558；和Szostak等人WO98/31700，其中每一个的全部内容通过引用并入本文。
非抗体结合分子可以作为二聚体或多聚体产生，以增加对靶抗原的抗体亲抗原性。例如，抗原结合结构域表达为与抗体的恒定区(Fc)(形成Fc-Fc二聚体)的融合体。参见美国专利号7,115,396，其中的全部内容通过引用并入本文。
“抗原”是由免疫系统所识别的分子；该术语最初来自“抗体生成剂”，且包括与抗体特异性结合的分子。在分子水平上，抗原的特征在于其在抗体的抗原结合位点处被结合的能力。在本发明中，抗原是FRα，如不与细胞FRα或其部分结合的FRα。
如本文所使用的，术语“表位”是指抗原(例如，FRα)能够被抗体结合的分子表面特征。抗原分子，通常是“大”生物聚合物，通常呈现几个表面特征，所述表面特征可以充当特异性抗体的相互作用点。任何这种独特的分子特征构成表位。因此大多数抗原具有被几种不同抗体结合的潜能，其中每种抗体通常对于特定表位是特异性的。在本发明的一个实施方案中，结合剂(例如，抗体)与以不结合细胞的受体形式、但不以膜结合的受体形式存在的FRα上的表位结合。例如，抗体可以结合FRα上MORAB-003结合的表位相同的表位。
如本文所使用的，短语“患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展”包括这种癌症从较不严重状态进展至更严重的状态。这可以包括肿瘤数目和严重度、转移的程度、癌症生长和扩散的速度等的增加。例如，“卵巢癌的进展”包括这种癌症从较不严重状态进展至更严重的状态，如从I期进展到II期，从II期进展到III期等。可替代地，短语“患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展”可以是指表达FRα的癌症从更严重的状态退化至较不严重的状态。例如，在一个实施方案中，“卵巢癌的进展”是指从IV期退化到III期，从III期退化到II期等。在其他实施方案中，“患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展”可以是指从表达FRα的癌症的症状开始测定的存活率，或者是指从表达FRα的癌症诊断时测定的存活率。
如本文所使用的，术语“分层”是指基于，例如，癌症的扩散程度，如本领域普遍接受的分层方法，将表达FRα的癌症(例如，卵巢癌或肺癌)表征为适当阶段。例如，分层包括将表达FRα的癌症表征为I期、II期、III期或IV期。在某些实施方案中，I期是指位于机体的一部分的癌症。在某些实施方案中，II期和III期是指局部晚期的癌症，其中在期与期之间的差异常常对于具体癌症是特定的。最后，IV期是指经常已经转移或扩散到其他器官或整个身体的癌症。
如本文所使用的，术语“存活”是指已经针对癌症进行治疗的受试者生命的继续。在一个实施方案中，存活是指肿瘤复发失败。如本文所使用的，术语“复发”是指在其中肿瘤的主要治疗已经施用的受试者中肿瘤或癌细胞的再次生长。肿瘤可以在初始部位或在机体的另一个部分复发。在一个实施方案中，复发的肿瘤与受试者曾经治疗的初始肿瘤是相同类型的。例如，如果受试者具有卵巢癌肿瘤，进行治疗，且随后发展出另一种卵巢癌肿瘤，那么肿瘤复发。此外，癌症可以在与其初始发生的器官或组织不同的器官或组织中复发。
II.本发明的方法和试剂盒
本发明基于，至少部分基于，下列意外发现：与对照样品相比，在患有表达FRα的癌症的受试者的体液如尿或血清中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)以升高的水平存在。此外，本发明基于，至少部分基于，鉴定表现出评价样品中不与细胞结合的FRα的水平必要的灵敏度的免疫学测定方法，其中以前这样做的尝试已经重复失败了。事实上，本发明通过提供能够准确地评价样品(例如尿或血清)中不与细胞结合的FRα的水平的免疫学测定方法而克服了在以前开发用于表达FRα的癌症如肺癌或卵巢癌的基于FRα的诊断测定的尝试过程中观察到的挑战。
相应地，提供了用于评价受试者是否具有表达FRα的癌症或处于发展表达FRα的癌症的风险中和进一步，用于评价表达FRα的癌症的进展的方法和试剂盒。在各个实施方案中，该方法涉及在评价受试者中卵巢癌的存在、程度或发展风险中将样品例如尿和血清中不与细胞结合的FRα的水平与对照水平相比的比较。
A.诊断方法、预后方法、风险评价方法和分层方法
具体而言，本发明提供了评价受试者是否患有表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)的诊断方法，预测表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)的进展的预后方法，以及用于评价受试者将发展表达FRα的癌症的风险水平的风险评价方法。此外，本发明提供了用于将表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)受试者分层为癌症治疗组的分层方法。此处讨论的本发明的各个方面和实施方案意在是非限制性的，且涵盖提到的特定实施方案的所有可能的组合，其可以适用于本文讨论的或下面要求保护的任何方法和试剂盒。
本发明的方法可以连同技术人员使用的任何其他方法进行实施以诊断表达FRα的癌症，预测表达FRα的癌症的进展，或评价受试者将发展表达FRα的癌症的风险水平。
在一个方面，本发明提供了评价受试者是否患有表达FRα的癌症的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的样品(如尿或血清)中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有表达FRα的癌症的指示。在特定的实施方案中，通过将样品与结合不与细胞结合的FRα的抗体接触来评价源自受试者的样品中的FRα水平，并且所述抗体选自(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；和(b)SEQ ID NO：1
(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SHQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体。在一个实施方案中，样品选自尿和血清。
在另一个方面，本发明提供了评价受试者是否患有表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)的方法，所述方法包括确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者尿样品中叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者尿样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有表达FRα的癌症的指示。
在另一个方面，本发明提供了评价受试者是否患有表达FRα的癌症的方法，其通过下列实现：确定在源自受试者的血清样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自受试者血清样品中叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自受试者血清样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者患有表达FRα的癌症的指示。在特定的实施方案中，受试者没有用提高血清中FRα水平的药剂如类固醇进行治疗。在特定的实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌并且受试者还没有用提高血清中FRα水平的药剂如类固醇进行治疗。
在本发明的方法和试剂盒中，表达FRα的癌症包括特征在于癌细胞表达FRα的癌症。在特定的实施方案中，FRα从癌细胞释放，例如，从癌细胞的表面释放，且释放到受试者的生物流体中。表达FRα的癌症包括肺癌(例如细支气管肺泡癌、类癌肿瘤、和非小细胞肺癌，如腺癌)、间皮瘤、卵巢癌、肾癌、脑癌(例如间变性室管膜瘤和小脑青少年毛细胞型星形细胞瘤)、子宫颈癌、鼻咽癌、中胚层源性肿瘤、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、卵巢的子宫内膜样腺癌、浆液性囊腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌(例如高级骨肉瘤)和垂体癌(例如垂体腺瘤)。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。
在本发明的方法和试剂盒的某些实施方案中，表达FRα的癌症是肺癌。在更特定的实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。在一个这样的实施方案中，NSCLC选自腺癌、鳞状细胞肺癌、大细胞肺癌、多形性NSCLC、类癌肿瘤、唾液腺癌和未分类癌。在优选的实施方案中，NSCLC是腺癌。在可替代的实施方案中，肺癌是小细胞肺癌(SCLC)。在另一个实施方案中，肺癌是细支气管肺泡癌。在又另一个实施方案中，肺癌是肺类癌肿瘤。
本发明也提供了评价受试者是否患有卵巢癌的方法，其通过确定在源自受试者的尿样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平而实现，其中FRα在尿样品中存在的浓度高于约3000a.u./ml是受试者患有卵巢癌的指示。在特定的实施方案中，FRα在尿样品中存在的浓度高于约4000a.u./ml、约5000a.u./ml、约6000a.u./ml、约7000a.u./ml、约8000a.u./ml、约9000a.u./ml、约10,000a.u./ml、约11,000a.u./ml、约12,000a.u./ml、约13,000a.u./ml、约14,000a.u./ml、约15,000a.u./ml、约16,000a.u./ml、约17,000a.u./ml、约18,000a.u./ml、约19,000a.u./ml、约20,000a.u./ml、约21,000a.u./ml、约22,000a.u./ml、约23,000a.u./ml、约24,000a.u./ml、约25,000a.u./ml、约26,000a.u./ml、约27,000a.u./ml、约28,000a.u./ml、约29,000a.u./ml或约30,000a.u./ml是受试者患有卵巢癌的指示。
在又另一个方面，本发明提供了评价受试者是否患有卵巢癌的方法，其通过确定在源自受试者的尿样品中叶酸受体α(FRα)的水平而实现，其中FRα在尿样品中存在的浓度高于约9100pg/ml指示受试者患有卵巢癌或者其中浓度低于约9100pg/ml是受试者没有患有卵巢癌的指示。例如，FRα在尿样品中存在的浓度高于约9500pg/mL、约10,000pg/mL、约11,000pg/mL、约12,000pg/mL、约13,000pg/mL、约14,000pg/mL、约15,000pg/mL、约16,000pg/mL、约17,000pg/mL、约18,000pg/mL、约19,000pg/mL、约20,000pg/mL、约21,000pg/mL、约22,000pg/mL、约23,000pg/mL、约24,000pg/mL、约25,000pg/mL、约26,000pg/mL、约27,000pg/mL、约28,000pg/mL、约29,000pg/mL、约30,000pg/mL、约40,000pg/mL、约50,000pg/mL、约60,000pg/mL、约70,000pg/mL、约80,000pg/ml、约90,000pg/ml、约100,000pg/ml或约150,000pg/ml是受试者患有卵巢癌的指示。
在本发明的前述方面的某些实施方案中，将源自受试者样品(例如，样品如尿样品或血清样品)中不与细胞结合的FRα的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中水平之间的差异是受试者患有表达FRα的癌症(如肺癌或卵巢癌)的指示。在特定实施方案中，该差异构成与对照样品中的FRα水平相比在源自受试者的样品中不与细胞结合的FRα水平的增加，其中这种增加表明表达FRα的癌症的存在或生长。可替代地，差异构成FRα的水平的降低，其中所述降低表明表达FRα的癌症的不存在或退化。如本文所使用的，来自受试者的样品(即，测试样品)中不与细胞结合的叶酸受体α的水平与对照样品中叶酸受体α的水平之间的“差异”广泛地是指该两份样品中叶酸受体α水平的任何临床相关改变(包括增加或降低)和/或统计学显著性差异。在一个示例性实施方案中，基于使用受试者工作特征(ROC)分析(实施例6中提供的实例)确定的截止值选择差异。最佳截止值可能根据采用的测定方法和条件发生改变。在其他实施方案中，差异必须大于用于确定不与细胞结合的FRα水平的方法的检测限值。优选至少大于评价方法的标准误差的差异，且优选是评价方法的标准误差的至少约2-、约3-、约4-、约5-、约6-、约7-、约8-、约9-、约10-、约15-、约20-、约25-、约100-、约500-、约1000-倍或更大的差异。可以通过任何适当的比较，包括任何适当的参数或非参数描述的统计或比较评价该差异。例如，FRα水平的“增加”可以是指超过使用ROC分析确定的截止值的水平。它也可以指测试样品中的水平比对照样品中的FRα水平高2％，更优选高约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约150％、约200％、约300％、约400％、约500％、约600％、约700％、约800％、约900％或约1000％。增加也可以是指测试样品中的水平比对照样品中的平均FRα水平高优选至少约1.5倍，更优选约2倍、约3倍、约4倍、约5倍或更多标准偏差。同样，不与细胞结合的FRα水平的“降低”可以是指测试样品中不超过使用ROC分析测定的截止值的水平。它也可以指测试样品中的水平比对照样品中的FRα水平低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、或约90％。降低也可以是指测试样品中的水平比对照样品中的平均FRα水平低优选至少约1.5倍，更优选约2倍、约3倍、约4倍、约5倍或更多标准偏差。
可用于本发明的方法和试剂盒中的样品包括可以含有可检测水平的不与细胞结合的FRα的任何组织、细胞、活检组织或体液。在一个实施方案中，样品可以是组织、细胞、全血、血浆、口腔刮取物(buccal scrape)、唾液、脑脊髓液、粪便或支气管肺泡灌洗液。在一些实施方案中，样品是表达FRα的肿瘤样品或其中可以发现表达FRα的癌症的组织或细胞样品。在优选实施方案中，所述样品是尿或血清样品。
可通过本领域已知的多种技术包括例如，通过使用活组织检查或通过刮取或擦抹区域或通过使用针抽吸体液来从受试者获取身体样品。用于收集各种身体样品的方法是本领域众所周知的。
根据本领域技术人员已知的方法，适合用于检测和定量FRα蛋白水平的样品可以是新鲜的、冷冻的或固定的。优选将适当的组织样品切片和置于显微镜载玻片上以用于进一步分析。可以溶解和/或匀浆固体样品即组织样品，随后将其作为可溶性提取物进行分析。液体样品也可以进行物理或化学处理。在一些实施方案中，通过离心、涡旋、稀释和/或用增溶物质处理(诸如，例如，胍处理)处理尿样品。
在一个实施方案中，使用例如液氮或二氟二氯甲烷冷冻新获得的活检样品。使用例如OCT封固冷冻的样品以用于切片，在低温保持器(cryostat)中连续切片。将连续切片收集在玻璃显微镜载玻片上。为了进行免疫组织化学染色，可用例如铬明矾、明胶或多聚-L-赖氨酸涂铺载玻片以确保切片粘在载玻片上。在另一个实施方案中，在切片之前将样品固定和包埋。例如，可将组织样品固定在例如福尔马林中，系列脱水，包埋在例如石蜡中。
一旦获得样品，可使用本领域已知的适合于检测和定量不结合细胞的FRα的任何方法(在核酸或，优选地，在蛋白质水平上)，如下部分(B)所述。示例性方法是本领域众所周知的并且包括但不限于western印迹、northern印迹、southern印迹、免疫组织化学、溶液相测定、ELISA例如放大ELISA、免疫沉淀、免疫荧光、流式细胞术、免疫细胞化学、质谱分析例如MALDI-TOF和SELDI-TOF、核酸杂交技术、核酸逆转录法和核酸扩增法。
在许多实施方案中，通过将样品与结合FRα的抗体接触来评价样品(如例如，尿或血清)中的不与细胞结合的FRα水平。结合FRα的抗体是本领域中已知的且包括(i)如欧洲专利申请号86104170.5(Rettig)(其中的完整内容通过引用并入本文)中所述的鼠单克隆LK26抗体(其重链和轻链在本文中表示为SEQ ID NO:22和23)，(ii)如国际公开号WO2004/113388和美国专利号5,646,253(其中每一篇的完整内容通过引用并入本文)中所述的MORAB-003抗体。单克隆抗体MOV18和MOv19也结合FRα分子(以前称为gp38/FBP)上不同的表位。Miotti,S.等人.Int J Cancer,38:297-303(1987)。例如，如Coney等人.Cancer Res,51:6125-6132(1991)所教导的，MOV18抗体结合本文中描述为SEQ ID NO:26(TELLNVXMNAK*XKEKPXPX*KLXXQX)的表位(注意，在12位处，色氨酸或组氨酸残基是可能的，且在21位处，天冬氨酸或谷氨酸酸残基是可能的)。
如本文中所用的，术语“MORAb-003”涉及特异性结合FRα和包含如SEQ ID NO:7中所述的成熟重链氨基酸序列和SEQ ID NO：8的成熟轻链序列的抗体。对于MORAb-003的相应的前蛋白氨基酸序列描述于SEQ ID NOs：9(重链)和10(轻链)中。MORAb-003抗体包含以下CDR：
SEQ ID NO：1为CDRH1，SEQ ID NO：2为CDRH2，SEQ ID NO：3为CDRH3，SEQ ID NO：4为CDRL1，SEQ ID NO：5为CDRL2，和SEQ ID NO：6为CDRL3。产生MORAb-003抗体的细胞已经在2006年4月24日由美国典型培养物保藏中心(10801 University Blvd.，Manassas，Virginia 20110-2209)保藏，且已经分配登录号PTA-7552。
结合FRα和用于本发明方法中的其他抗体包括9F3.H9.H3.H3.B5.G2(也称为9F3)、19D4.B7(也称为19D4)、24F12.B1(也称为24F12)和26B3.F2(也称为26B3)。这些抗体、它们的CDR、和它们的重和轻链可变结构域的氨基酸序列以及编码它们的多核苷酸序列提供于表33中。在一些实施方案中，这些抗体是鼠IgG或其衍生物。在其他实施方案中，抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
9F3
在一些实施方案中，结合FRα的抗体是包含与SEQ ID NO：27基本上相同或同一的轻链CDR1氨基酸序列的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ IDNO：28基本上相同或同一的轻链CDR2氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO：29基本上相同或同一的轻链CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO：31基本上相同或同一的重链CDR1氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO：32基本上相同或同一的重链CDR2氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO：33基本上相同或同一的重链CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包含轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO：27基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO：28基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO：29基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括重链，所述重链具有与SEQ IDNO：31基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO：32基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO：33基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO：27基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ IDNO：28基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO：29基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列，且还具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO：31基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO：32基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:33基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。
结合FRα的抗体可以包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与SEQ IDNO:30基本上相同或同一的氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO:34基本上相同或同一的氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包括与SEQ ID NO:30基本上相同或同一的氨基酸序列，以及所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO:34基本上相同或同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRa的抗体是9F3.H9.H3.H3.B5.G2(9F3)抗体或其抗原结合片段，其能够结合FRa的天然或非还原形式。在一些实施方案中，抗体具有鼠IgG2a恒定区。
在一些实施方案中，结合FRα的抗体是由某种产生抗体的细胞产生的抗体，所述产生抗体的细胞已经在2011年5月19日由美国典型培养物保藏中心(10801 UniversityBlvd.,Manassas,Virginia 20110-2209)保藏，且已经分配登录号PTA-11887。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含由保藏的产生抗体的细胞产生的抗体的一个或多个轻链和重链CDR。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含由保藏的产生抗体的细胞产生的抗体的轻链和重链可变区。
19D4
在一些实施方案中，结合FRα的抗体是包含与SEQ ID NO:35基本上相同或同一的轻链CDR1氨基酸序列的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ IDNO:36基本上相同或同一的轻链CDR2氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:37基本上相同或同一的轻链CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:39基本上相同或同一的重链CDR1氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:40基本上相同或同一的重链CDR2氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:41基本上相同或同一的重链CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:35基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:36基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:37基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括重链，所述重链具有与SEQ IDNO:39基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:40基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:41基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:35基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ IDNO:36基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:37基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列，且还具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:39基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:40基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:41基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。
结合FRα的抗体可以包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与SEQ IDNO:38基本上相同或同一的氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO:42基本上相同或同一的氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包括与SEQ ID NO:38基本上相同或同一的氨基酸序列，以及所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO:42基本上相同或同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRa的抗体是19D4.B7(19D4)抗体或其抗原结合片段，其能够结合FRa的天然或非还原形式。在一些实施方案中，抗体具有鼠IgG2a恒定区。
在一些实施方案中，结合FRα的抗体是由某种产生抗体的细胞产生的抗体，所述产生抗体的细胞已经在2011年5月19日由美国典型培养物保藏中心(10801 UniversityBlvd.,Manassas,Virginia 20110-2209)保藏，且已经分配登录号PTA-11884。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含由保藏的产生抗体的细胞产生的抗体的一个或多个轻链和重链CDR。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含由保藏的产生抗体的细胞产生的抗体的轻链和重链可变区。
24F12
在一些实施方案中，结合FRα的抗体是包括与SEQ ID NO:43基本上相同或同一的轻链CDR1氨基酸序列的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ IDNO:44基本上相同或同一的轻链CDR2氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:45基本上相同或同一的轻链CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:47基本上相同或同一的重链CDR1氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:48基本上相同或同一的重链CDR2氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:49基本上相同或同一的重链CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:43基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:44基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:45基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括重链，所述重链具有与SEQ IDNO:47基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:48基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:49基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:43基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ IDNO:44基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:45基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列，且还具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:47基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:48基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:49基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。
结合FRα的抗体可以包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与SEQ IDNO:46基本上相同或同一的氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO:50基本上相同或同一的氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包括与SEQ ID NO:46基本上相同或同一的氨基酸序列，以及所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO:50基本上相同或同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRa的抗体是24F12.B1(24F12)抗体或其抗原结合片段，其能够结合FRa的天然或非还原形式。在一些实施方案中，抗体具有鼠IgG1恒定区。
在一些实施方案中，结合FRα的抗体是由某种产生抗体的细胞产生的抗体，所述产生抗体的细胞已经在2011年5月19日由美国典型培养物保藏中心(10801 UniversityBlvd.,Manassas,Virginia 20110-2209)保藏，且已经分配登录号PTA-11886。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含由保藏的产生抗体的细胞产生的抗体的一个或多个轻链和重链CDR。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含由保藏的产生抗体的细胞产生的抗体的轻链和重链可变区。
26B3
在一些实施方案中，结合FRα的抗体是包括与SEQ ID NO:51基本上相同或同一的轻链CDR1氨基酸序列的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ IDNO:52基本上相同或同一的轻链CDR2氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:53基本上相同或同一的轻链CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:55基本上相同或同一的重链CDR1氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:56基本上相同或同一的重链CDR2氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含与SEQ ID NO:57基本上相同或同一的重链CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:51基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:52基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:53基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括重链，所述重链具有与SEQ IDNO:55基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:56基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:57基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链，所述轻链具有与SEQ ID NO:51基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ IDNO:52基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:53基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列，且还具有重链，所述重链具有与SEQ ID NO:55基本上相同或同一的CDR1氨基酸序列；与SEQ ID NO:56基本上相同或同一的CDR2氨基酸序列；和与SEQ ID NO:57基本上相同或同一的CDR3氨基酸序列。
结合FRα的抗体可以包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与SEQ IDNO:54基本上相同或同一的氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO:58基本上相同或同一的氨基酸序列。结合FRα的抗体可以包括轻链和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包括与SEQ ID NO:54基本上相同或同一的氨基酸序列，以及所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO:58基本上相同或同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合FRa的抗体是26B3.F2(26B3)抗体或其抗原结合片段，其能够结合FRa的天然或非还原形式。在一些实施方案中，抗体具有鼠IgG1恒定区。
在一些实施方案中，结合FRα的抗体是由某种产生抗体的细胞产生的抗体，所述产生抗体的细胞已经在2011年5月19日由美国典型培养物保藏中心(10801 UniversityBlvd.,Manassas,Virginia 20110-2209)保藏，且已经分配登录号PTA-11885。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含由保藏的产生抗体的细胞产生的抗体的一个或多个轻链和重链CDR。在一些实施方案中，结合FRα的抗体包含由保藏的产生抗体的细胞产生的抗体的轻链和重链可变区。
可以使用抗体样蛋白作为CDR支架工程改造CDR的抗原结合排列。工程改造的抗原结合蛋白包括在结合FRα的抗体的范围内。
结合FRα的其他试剂抗体是本领域中已知的，且目前，多种这样的试剂抗体是市售的(基于在http://www.biocompare.com搜索抗-FRα抗体)，如下表中所列举。
在一个优选的实施方案中，结合FRα的抗体包含源自鼠LK26重和轻链的下列CDR中的至少一个：SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3。参见美国专利号5,646,253，由于其涉及可用于在本发明中的抗FRα抗体，其内容通过引用并入本文。如美国专利号5,646,253(其内容通过引用并入本文)中所教导的，可以在构架区中进行进一步突变。
在另一个优选的实施方案中，抗体包含可变区轻链和可变区重链，所述可变区轻链选自LK26HuVK(SEQ ID NO：13)LK26HuVKY(SEQ ID NO：14)，LK26HuVKPW(SEQ ID NO：15)，和LK26HuVKPW，Y(SEQ ID NO：16)；；且所述可变区重链选自LK26HuVH(SEQ ID NO：17)；LK26HuVH FAIS，N(SEQ ID NO：18)；LK26HuVH SLF(SEQ ID NO：19)；LK26HuVH I，I(SEQ IDNO：20)；和LK26KOLHuVH（SEQ ID NO：21)。参见美国专利号5,646,253和美国专利号6,124,106。在另一个实施方案中，抗体包含重链可变区LK26KOLHuVH(SEQ ID NO:21)和轻链可变区LK26HuVKPW,Y(SEQ ID NO:16)的抗体。在另一个实施方案中，抗体包含重链可变区LK26HuVH SLF(SEQ ID NO:19)和轻链可变区LK26HuVKPW,Y(SEQ ID NO:16)。在进一步实施方案中，抗体包含重链可变区LK26HuVH FAIS,N(SEQ ID NO:18)和轻链可变区LK26HuVKPW,Y(SEQ ID NO:16)。
在一些实施方案中，样品可能需要进行修饰以使FRα易于接近以便抗体结合。在免疫细胞化学或免疫组织化学法的具体方面，可以将载玻片转移至预处理的缓冲液和任选地加热以增加抗原可及性。在预处理缓冲液中加热样品快速地破坏细胞的脂双层，并且使抗原(可以是在新鲜样本中的情况，但通常不是在固定的样本中发生的情况)(即，FRα蛋白)更易于接近以便抗体结合。术语"预处理缓冲液"在本文中可互换使用，是指用于制备细胞学或组织学样品以用于免疫染色(特别地通过增加FRα蛋白对抗体结合的可及性)的缓冲液。预处理缓冲液可包含pH-特异性盐溶液、聚合物、去污剂或非离子或阴离子表面活性剂例如乙氧基化的阴离子或非离子表面活性剂、链烷酸酯或烷氧基化物或甚至这些表面活性剂的混合物或甚至胆汁盐的使用。预处理缓冲液可以例如是0.1％至1％的脱氧胆酸、钠盐的溶液或聚乙二醇单十二醚-13-甲酸钠(例如，Sandopan LS)或/和乙氧基化阴离子复合物的溶液。在一些实施方案中，预处理缓冲液还可用作载玻片保存缓冲液。在一个特定的实施方案中，样品，例如，尿样品，进行离心、涡旋、稀释和/或进行胍处理。
用于使FRα蛋白更易于接近以便抗体结合的任何方法可用于本发明的实施，包括本领域已知的抗原修复法。参见，例如，Bibbo,等人(2002)Acta.Cytol.46:25-29；Saqi,等人(2003)Diagn.Cytopathol.27:365-370；Bibbo,等人(2003)Anal.Quant.Cytol.Histol.25：8-11，所述文献的每一个的全部内容通过引用并入本文。
在预处理以增加FRα蛋白的可及性后，可使用适当的封闭试剂例如过氧化物酶封闭试剂例如过氧化氢封闭样品。在一些实施方案中，使用蛋白质封闭试剂封闭样品以防止抗体的非特异性结合。蛋白质封闭试剂可包含例如纯化的酪蛋白。随后将特异性结合FRα的抗体，特别是单克隆或多克隆抗体与样品一起孵育。
用于检测抗体结合的技术在本领域是众所周知的。可通过使用化学试剂来检测结合FRα的抗体，所述化学试剂产生相应于抗体结合的水平从而相应于FRα蛋白表达的水平的可检测信号。在本发明的免疫组织化学或免疫细胞化学方法之一中，通过使用缀合至标记的聚合物的二抗检测抗体结合。标记的聚合物的实例包括但不限于聚合物-酶缀合物。通常将这些复合物中的酶用于催化色原在抗原-抗体结合位置的沉积，从而导致相应于目的生物标记的表达水平的细胞染色。酶包括但不限于辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。
在本发明的一种免疫组织化学或免疫细胞化学方法中，通过使用缀合至二抗的HRP-标记的聚合物来检测结合FRα蛋白的抗体。还可通过使用结合单克隆或多克隆抗体的物种特异性探针试剂和缀合至HRP的聚合物(其结合物种特异性探测试剂)检测抗体结合。使用任何色原例如色原3,3-二氨基联苯(DAB)针对抗体结合对载玻片进行染色，然后用苏木精以及任选地蓝色剂例如氢氧化铵或TBS/Tween-20进行复染。其他适当的色原包括例如3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)。在本发明的某些方面，由细胞技术员和/或病理学家用显微镜观察载玻片以评价细胞染色，例如荧光染色(即，FRα表达)。可替代地，可通过自动化显微术或通过人员借助帮助鉴定阳性染色细胞的计算机软件来检查样品。
在优选的实施方案中，抗体是标记的。例如，可以通过将抗-FRα抗体偶联至可检测物质来帮助抗体结合的检测。可检测物质的实例包括多种酶、辅基、荧光物质、发光物质、生物发光物质和放射性物质。适当的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；适当的辅基复合物的实例包括链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；适当的荧光物质的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光物质的实例包括鲁米诺；生物发光物质的实例包括萤光素酶、萤光素和水母荧光蛋白(aequorin)；以及适当的放射性物质的实例包括125I、131I、35S、14C或3H。在特定的实施方案中，所述抗体是用放射标记、发色团标记、荧光团标记或酶标记标记的。
在本发明的一个实施方案中，如上所述制备冷冻的样品，随后用使用例如三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水(TBS)稀释至适当浓度的抗FRα的抗体染色。可通过在生物素化的抗免疫球蛋白中孵育载玻片来检测一抗。可任选地放大该信号，使用抗原的二氨基联苯胺沉淀使该信号可视。此外，可任选地用例如苏木精对载玻片进行复染以使细胞可视。
在另一个实施方案中，如上文中对于冷冻切片所描述的，用抗FRα的抗体染色被固定并且包埋的样品且对所述样品进行复染。此外，可以任选地用放大信号的试剂处理样品以使抗体染色可视。例如，可使用生物素基-酪胺的过氧化物酶催化的沉积，所述生物素基-酪胺然后与过氧化物酶缀合的链霉抗生物素蛋白反应(Catalyzed Signal Amplification(CSA)System,DAKO,Carpinteria,CA)。
本领域技术人员应当知道，用于实施本发明的方法的特定抗体的浓度将取决于这样的因素如结合的时间、抗体对于FRα的特异性的水平和样品制备的方法而变化。此外，当使用多种抗体时，可按照其中将抗体用于样品的顺序，例如作为混合物同时施用或作为单个抗体试剂相继施用来影响所需浓度。此外，用于使抗体对FRα的结合可视的检测化学必须进行最优化以产生所需信噪比。
在本发明的一个实施方案中，蛋白质组学方法例如质谱法对于检测和定量FRα蛋白是有用的。例如，基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)或表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)(其涉及将样品例如血清用于蛋白质-结合芯片)(Wright,G.L.,Jr.,等人(2002)Expert Rev Mol Diagn 2:549；Li,J.等人(2002)ClinChem 48:1296；Laronga,C.,等人(2003)Dis Markers 19:229；Petricoin,E.F.等人(2002)359:572；Adam,B.L.等人(2002)Cancer Res 62:3609；Tolson,J.等人(2004)Lab Invest84:845；Xiao,Z.等人(2001)Cancer Res 61:6029)可用于检测和定量FRα蛋白。质谱法描述于例如美国专利号5,622,824、5,605,798和5,547,835中，其中每一篇的全部内容通过引用并入本文。
本发明进一步基于，至少部分基于，鉴定FRα作为预后生物标记，即，作为表达FRα的癌症如卵巢癌或非小细胞肺癌的进展和/或严重性的生物标记。因此，本发明提供了通过比较源自受试者的样品中的FRα水平与对照样品中的FRα水平而在患有卵巢癌的受试者中评价表达FRα癌症的进展的方法，其中与对照样品相比源自受试者的样品(如尿或血清样品)的FRα水平的差异是癌症将快速进展的指示。同样，评价受试者将发展表达FRα的癌症的风险水平的方法涉及比较源自受试者的样品的FRα水平与对照样品中的FRα水平，其中与对照样品相比源自受试者的样品(如尿或血清样品)的FRα水平的差异是与健康个体中的正常风险相比所述受试者具有更高水平的发展表达FRα的癌症的风险的指示。
在一个实施方案中，差异是增加。在另一个实施方案中，差异是降低。在一些类型的癌症(例如，头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌)中，FRα表达的更高水平与预后更差相关，而在其他类型的癌症(例如，非小细胞肺癌)中，FRα表达的更高水平与预后更好相关。因此，在一个特定的实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌或头颈部鳞状细胞癌，且差异是增加。在另一个特定实施方案中，表达FRα的癌症是非小细胞肺癌，且差异是降低。
在某些方面，本发明提供了通过比较源自受试者的样品中的FRα水平与对照样品中的FRα水平而在患有表达FRα的癌症的受试者中评价表达FRα的癌症的进展的方法，其中与对照样品相比源自受试者的样品(如尿或血清样品)中的FRα水平的增加是癌症将快速进展的指示，或者与对照样品中的FRα水平相比源自受试者的样品中的FRα水平的降低是癌症将缓慢进展或将退化的指示。同样，评价受试者将发展表达FRα的癌症的风险水平的方法涉及比较源自受试者的样品中的FRα水平与对照样品中的FRα水平，其中与对照样品相比源自受试者的样品(如尿或血清样品)中的FRα水平的增加是与健康个体中的正常风险相比所述受试者具有更高水平的发展表达FRα的癌症的风险的指示，或者与对照样品中的FRα水平相比源自受试者的样品中的FRα水平的降低是与健康个体中的正常风险相比所述受试者具有更低水平的发展表达FRα的癌症的风险的指示。
使用本领域中已知的任何分析方法的任何临床相关的或统计显著的增加或降低可用于本发明的预后、风险评价和其他方法中。在一个实施方案中，FRα水平中FRα水平的增加是指超过使用如实施例6中例举的ROC分析测定的截止值的水平。在另一个实施方案中，FRα水平的降低是指测试样品中不超过使用ROC分析测定的截止值的水平。
在其他实施方案中，增加或降低必须大于用于确定FRα水平的方法的检测限值。在进一步的实施方案中，增加或降低至少大于评价方法的标准误差，且优选是评价方法的标准误差的至少约2-、约3-、约4-、约5-、约6-、约7-、约8-、约9-、约10-、约15-、约20-、约25-、约100-、约500-、约1000-倍或更大的差异。在一些实施方案中，使用参数和非参数描述性统计、比较、回归分析等评价增加或降低。
在其他实施方案中，增加或降低是源自受试者的样品中的水平比对照样品中的FRα水平高或低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约150％、约200％、约300％、约400％、约500％、约600％、约700％、约800％、约900％或约1000％。在可替代的实施方案中，增加或降低是源自受试者的样品中的水平比对照样品中的FRα平均水平高或低至少约1.5倍，且更优选约2倍、约3倍、约4倍、约5倍或更多倍标准偏差。如本文所使用的，短语“患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展”可以是指表达FRα的癌症从较不严重的癌症状态进展至更严重的癌症状态。这可以包括肿瘤数目和严重度、转移的程度、癌症生长和扩散的速度等的增加。在某些实施方案中，进展是从较不严重的阶段进展至更严重的阶段，其中根据本领域中已知的分期方案评价阶段。在一个实施方案(其中表达FRα的癌症是卵巢癌)中，进展是指从I期进展到II期，从II期进展到III期，等等。在另一个实施方案(其中表达FRα的癌症是非小细胞肺癌(NSCLC))中，进展是指从0期进展到IA期，从IA期进展到IB期，从IB期进展到IIA期，从IIA期进展到IIB期，从IIB期进展到IIC期，等等。在另一个实施方案(其中表达FRα的癌症是非小细胞肺癌(NSCLC))中，进展是指如根据TNM分类系统所确定的从较不严重的阶段进展至更严重的阶段。参见Spira；Greene；Sobin。
可替代地，短语“患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展”可以是指表达FRα的癌症从更严重的状态退化至较不严重的状态，如肿瘤数目和严重度、转移程度、癌症生长和扩散的速度等的降低。在某些实施方案中，进展是从更严重的阶段进展至较不严重的阶段，其中根据本领域中已知的分期方案评价阶段。在一个实施方案(其中表达FRα的癌症是卵巢癌)中，进展是指从IV期退化到III期，从III期退化到II期，等等。在另一个实施方案(其中表达FRα的癌症是非小细胞肺癌(NSCLC))中，进展是指从IV期进展到IIIB期，从IIIB期进展到IIIA期，从IIIA期进展到IIB期，等等。在另一个实施方案(其中表达FRα的癌症是非小细胞肺癌(NSCLC))中，进展是指如根据TNM分类系统所确定的从更严重的阶段进展至较不严重的阶段。参见Spira；Greene；Sobin。
在进一步的实施方案中，FRα水平可以用于计算受试者患有表达FRα的癌症的可能性，受试者中表达FRα的癌症的进展，发展表达FRα的癌症的风险水平，正在针对表达FRα进行治疗的受试者中癌症复发的风险，正在针对表达FRα的癌症进行治疗的受试者的存活，用于治疗表达FRα的癌症的治疗方案的效力，等等，其使用本发明的方法，其中可以包括本领域技术人员已知的回归分析方法。例如，适当的回归模型包括但不限于CART(例如，Hill,T,和Lewicki,P.(2006)“STATISTICS Methods and Applications”StatSoft,Tulsa,OK)、Cox(例如，www.evidence-based-medicine.co.uk)、指数、正态和对数正态(例如，www.obgyn.cam.ac.uk/mrg/statsbook/stsurvan.html)、逻辑(例如，www.en.wikipedia.org/wiki/Logistic_regression)、参数、非参数、半参数(例如，www.socserv.mcmaster.ca/jfox/Books/Companion)、线性(例如，www.en.wikipedia.org/wiki/Linear_regression)或累加模型(例如，www.en.wikipedia.org/wiki/Generalized_additive_model)。
在一个实施方案中，回归分析包括FRα水平。在进一步实施方案中，回归分析可以包括额外的临床和/或分子协变量。此类临床协变量包括但不限于受试者年龄、肿瘤阶段、肿瘤级别、肿瘤大小、治疗方案(例如化疗和/或放疗)、临床结果(例如，复发、疾病特异性存活、治疗失败)和/或作为诊断后时间、治疗起始后时间和/或治疗完成后时间的函数的临床结果。分子协变量可以包括但不限于额外的分子标记值。例如，在其中表达FRα的癌症是卵巢癌的实施方案中，这样的标记可以包括，例如，血清CA125水平、血清DF3水平和/或血浆LPA水平。
在其他方面，本发明提供了用于监测治疗或治疗方案的有效性的方法。例如，本发明提供了用于监测患有卵巢癌或肺癌的受试者中卵巢癌或肺癌的MORAb-003治疗的效力的方法。具体而言，该方法涉及确定源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，其中所述受试者以前已经施用MORAb-003；和比较不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平和对照样品中的FRα水平，其中与对照样品中的FRα水平相比源自所述受试者的样品中FRα水平的增加或没有变化是MORAb-003治疗无效的指示；且其中与对照样品中的FRα水平相比源自所述受试者的样品中FRα水平的降低是MORAb-003治疗有效的指示。
例如，对照样品可以源自未进行治疗方案的受试者，且测试样品可以源自进行至少一部分治疗方案的受试者。或者，测试样品和对照样品可以源自相同的受试者。例如，测试样品可以是源自施用治疗剂如MORAb-003后的受试者的样品。对照样品可以是源自施用治疗剂之前或治疗方案更早期的受试者的样品。因此，试验样品中相对于对照样品的FRα表达水平的降低指示治疗已经降低表达FRα的癌症，例如，卵巢癌的进展。对于其中更高水平的FRα与较差的预后相关的表达FRα的癌症，诸如，例如，卵巢癌或头颈部鳞状细胞癌，测试样品中相对于对照样品的FRα表达水平的降低指示该治疗在患有表达FRα的癌症的受试者中有效减缓表达FRα的癌症的进展，或有效引起癌症的退化。在优选的实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。
在本发明的该方面的各个实施方案中，样品可以是尿、血清、血浆或腹水。在特定的实施方案中，样品是尿或血清。此外，可以通过将样品与结合FRα的抗体接触，任选地使用本文所述的抗体，和使用本文所述的测定方法测定FRα。
在各个实施方案中，MORAb-003治疗抗体是(a)包含如SEQ ID NO：7中所述的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO：8中所述的轻链氨基酸序列的抗体；(b)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；或(c)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ ID NO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体。
在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。在其他实施方案中，表达FRα的癌症是肺癌。在更特定的实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。在一个这样的实施方案中，NSCLC选自腺癌、鳞状细胞肺癌、大细胞肺癌、多形性NSCLC、类癌肿瘤、唾液腺癌和未分类癌。在优选的实施方案中，NSCLC是腺癌。在可替代的实施方案中，肺癌是小细胞肺癌(SCLC)。在另一个实施方案中，肺癌是细支气管肺泡癌。在又另一个实施方案中，肺癌是肺类癌肿瘤。
在另一个方面，本发明提供了基于样品中测定的FRα水平将患有表达FRα的癌症的受试者分层为癌症治疗组的方法。在优选的实施方案中，该方法涉及将患有表达FRα的癌症的受试者分层为至少四个癌症治疗组之一。在其他实施方案中，该方法涉及将患有表达FRα的癌症的受试者分层为至少约两个、约三个、约四个、约五个、约六个、约七个、约八个、约九个或约十个癌症治疗组之一。
根据本发明，FRα水平可以与表达FRα的癌症的严重度(即阶段)相关。例如，如本文所述，基于癌症的严重度将卵巢癌分层为不同的阶段。因此，本发明提供了用于将卵巢癌分层为下列的方法：I期，例如，IA期、1B期或IC期；II期，例如，IIA期、IIB期或IIC期；III期，例如，IIIA期、IIIB期或IIIC期；或IV期卵巢癌。
如本文所述，可以基于癌症的严重度将SCLS或NSCLC分层为不同的阶段。因此，本发明提供了用于将肺癌例如SCLS或NSCLC分层为下列的方法：隐匿(隐藏)期；0期；I期，例如，IA期和1B期；II期，例如，IIA和IIB期；III期，例如，IIIA和IIIB期；或IV期肺癌。
在又另一个方面，本发明基于，至少部分基于下列发现：FRα可以充当用于治疗表达FRα的癌症的预测性生物标记。具体而言，本发明的方法通过评价受试者中的FRα水平提供了评价受试者是否对治疗例如用MORAb-003治疗响应和是否和何时开始治疗例如用MORAb-003治疗。
在一个方面，本发明提供了用于预测患有表达FRα的癌症(例如卵巢癌或肺癌)的受试者是否将对MORAb-003治疗响应的方法，其通过下列实现：确定在源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且将源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自所述受试者样品中FRα水平与对照样品中FRα水平之间的差异是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示。
在某些实施方案中，测试样品中与对照样品相比不与癌细胞结合的FRα水平之间的差异程度是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示。例如，比评价方法的标准误差高至少约2-、约3-、约4-、约5-、约6-、约7-、约8-、约9-、约10-、约15-、约20-、约25-、约100-、约500-、约1000-倍或更大的差异提示受试者将对MORAb-003治疗响应。可替代地或组合地，至少约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约150％、约200％、约300％、约400％、约500％、约600％、约700％、约800％、约900％或约1000％的差异是受试者将对MORAb-003治疗响应的指示。可替代地或组合地，至少约1.5倍，更优选约2倍、约3倍、约4倍、约5倍或更高的标准偏差提示受试者将对MORAb-003治疗响应。
在各个实施方案中，MORAb-003治疗抗体是(a)与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；或(b)包含SEQ ID NO：1(GFTFSGYGLS)为CDRH1，SEQ ID NO：2(MISSGGSYTYYADSVKG)为CDRH2，SEQ ID NO：3(HGDDPAWFAY)为CDRH3，SEQ ID NO：4(SVSSSISSNNLH)为CDRL1，SEQ IDNO：5(GTSNLAS)为CDRL2和SEQ ID NO：6(QQWSSYPYMYT)为CDRL3的抗体。
在各个实施方案中，样品是尿、血清、血浆或腹水。在特定的实施方案中，样品是尿或血清。在进一步实施方案中，表达FRα的癌症选自肺癌、间皮瘤、卵巢癌、肾癌、脑癌、子宫颈癌、鼻咽癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂体癌、结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。在特定实施方案中，表达FRα的癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，表达FRα的癌症是非小细胞肺癌，如腺癌。
B.用于检测表达FRα的癌症的基于抗FRα抗体的测定
存在很多种用于使用抗体以检测样品中的多肽的本领域普通技术人员已知的测定形式，包括但不限于酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、免疫荧光测定法、免疫沉淀、溶液相测定法、平衡透析、免疫扩散和其他技术。参见，例如Harlow和Lane，Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，1988；Weir，D.M.，Handbook of Experimental Immunology，1986，Blackwell Scientific，Boston。例如，测定可以以Western印迹形式进行，其中来自生物样品的蛋白制剂进行凝胶电泳，转移到合适的膜，且使其与抗体反应。如本领域众所周知且如下描述的，然后可以使用合适的检测试剂检测膜上抗体的存在。
在另一个实施方案中，该测定涉及使用固体载体上固定化的抗体以结合目标FRα多肽，且将其从样品的剩余物中取出。然后可以使用与不同的FRα多肽抗原性决定簇反应的第二抗体(例如，含有可检测的报道部分的试剂)检测结合的FRα多肽。作为非限制性实例，根据本实施方案，识别不同的抗原性决定簇的固定化抗体和第二抗体可以是选自本文所述的MORAb-003、MOV18、548908、6D398或其变体的本文所述的单克隆抗体中的任何两种。或者，可以采用竞争性测定，其中FRα用可检测的报道部分标记，且在固定化的抗体与样品孵育后允许结合到固定化的抗FRα抗体。样品的组分抑制标记的多肽与抗体的结合的程度指示样品与固定化的抗体的反应性，且作为结果，指示样品中的FRα水平。
固体载体可以是本领域普通技术人员众所周知的任何材料，抗体可以与之结合，如微量滴定板上的测试孔，硝酸纤维素膜或其他合适的膜。或者，载体可以是珠粒或小盘，诸如玻璃、纤维玻璃、乳胶或塑料，诸如聚苯乙烯或聚氯乙烯。可以使用本领域技术人员已知的多种技术将抗体固定化在固体载体上，所述技术在专利和科学文献中进行了充分的描述。
在某些优选的实施方案中，用于检测样品中的FRα的测定是双抗体夹心测定。可以通过首先将已经固定在固体载体(通常为微量滴定板的孔)的FRα特异性抗体(例如，如本文所述的MORAb-003、MOV18、548908、6D398或其变体)与生物样品接触，使得样品中天然存在且具有与抗体反应的抗原决定簇的可溶性分子允许与固定化的抗体结合(例如，在室温下30分钟的孵育时间一般是足够的)，以形成抗原-抗体复合物或免疫复合物。然后将样品的未结合的成分从固定的免疫复合物去除。然后，添加对FRα特异性的第二抗体，其中第二抗体的抗原组合位点没有竞争性地抑制固定化的第一抗体的抗原组合位点与FRα的结合(例如如本文所述的MORAb-003、MOV18、548908、6D398或其变体，其与固体载体上固定化的单克隆抗体不同)。可以如本文所提供地可检测地标记第二抗体，使得它可以直接检测到。或者，第二抗体可以通过使用可检测标记的二级(或“第二级”)抗抗体或者通过使用如本文所提供的特定检测试剂而间接地检测。本发明方法并不限于任何特定的检测程序，因为熟悉免疫测定的那些人将理解，对于在双抗体夹心免疫测定中免疫检测特定抗原(例如，FRα)存在多种试剂和配置。
在本发明的使用上述双抗体夹心测定的某些优选的实施方案中，对于FRα特异性的第一固定化抗体是多克隆抗体，且对于FRα特异性的第二抗体是多克隆抗体。在本发明的某些其他实施方案中，对于FRα特异性的第一固定化抗体是单克隆抗体，且对于FRα特异性的第二抗体是多克隆抗体。在本发明的某些其他实施方案中，对于FRα特异性的第一固定化抗体是多克隆抗体，且对于FRα特异性的第二抗体是单克隆抗体。在本发明的某些其他实施方案中，对于FRα特异性的第一固定化抗体是单克隆抗体，且对于FRα特异性的第二抗体是单克隆抗体。例如，在这些实施方案中，应当注意，如本文提供的如本文所述的单克隆抗体MORAb-003、MOV18、548908、6D398或其变体识别FRα多肽上的独特和非竞争性抗原决定簇(例如，表位)，使得可以采用这些单克隆抗体的任何成对组合。在本发明的其他优选的实施方案中，对于FRα特异性的第一固定化的抗体和/或对于FRα特异性的第二抗体可以是本领域已知的任何种类的抗体，且例如，通过说明而非限制地，在本文中被称为Fab片段、F(ab')2片段、免疫球蛋白V区融合蛋白或单链抗体。熟悉本领域的那些人将理解，本发明涵盖其他抗体形式、片段、衍生物等在本文中公开且要求保护的方法中的用途。
在某些特别优选的实施方案中，第二抗体可以含有可检测的报道部分或标记，如酶、染料、放射性核素、发光基团、荧光基团或生物素等。然后使用对于特定可检测的报道部分或标记适当的方法测定保持与固体载体结合的第二抗体的量。对于放射性基团，闪烁计数或放射自显影方法一般都是适当的。可以使用各种偶联技术制备抗体酶缀合物(对于综述，参见例如Scouten,W.H.,Methods in Enzymology 135:30-65,1987)。光谱学方法可用于检测染料(包括，例如，酶反应的比色产物)、发光基团和荧光基团。可以使用与不同的报道基团(通常是放射性或荧光基团或酶)偶联的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白检测生物素。一般可以通过添加底物(一般持续特定的时间期间)，随后光谱法、分光光度法或其他方法分析反应产物而检测酶报道基团。标准和标准添加可以用于使用众所周知的技术确定样品中的间皮素多肽的水平。
可以通过检测来自受试者的生物样品中多于一种肿瘤相关标记而进一步增强根据本发明筛选表达FRα的癌症的存在的方法。因此，在某些实施方案中，本发明提供了下列筛选方法，除检测不与细胞结合的FRα的反应性之外，其还包括使用本领域中已知且本文提供的建立的方法检测至少一种恶性肿瘤病况的额外可溶性标记。如上所指出的，目前在容易获得的生物流体的样品中存在多种可检测的可溶性肿瘤相关抗原。
C.本发明的试剂盒
本发明也提供了用于评价受试者是否患有表达FRα的癌症、用于评价表达FRα的癌症的进展、用于评价受试者将发展表达FRα的癌症的风险水平、或用于监测对表达FRα的癌症的治疗或处理方案的有效性的试剂盒。这些试剂盒包括确定FRα的表达水平的工具和使用该试剂盒以评价表达FRα的癌症的进展、评价受试者将发展表达FRα的癌症的风险水平、或监测对表达FRα的癌症的治疗或处理方案的有效性的说明书。
本发明的试剂盒可任选地包含可用于进行本发明的方法的其他成分。通过实例的方式，试剂盒可以包含用于从受试者获得样品的工具，对照样品，例如，来自具有缓慢进展的癌症的受试者和/或不具有癌症的受试者的样品，一个或多个样品区室、描述本发明的方法的性能的说明材料以及组织特异性对照/标准。
用于确定FRα的水平的工具包括如上所讨论的本领域已知的用于评价蛋白水平的方法，和如本文所讨论的，例如，利用MORAb-003抗体的特定的优选实施方案。因此，例如，在一个实施方案中，通过将源自受试者的样品(如尿或血清)与叶酸受体α(FRα)结合剂接触来评价FRα的水平。在优选的实施方案中，结合剂是抗体。许多结合FRα的抗体类型在本发明的方法中如上所讨论，且也可以用于本发明的试剂盒中。
用于确定FRα水平的工具可以进一步包括，例如，用于确定FRα水平的测定中使用的缓冲液或其他试剂。说明书可以是，例如，用于进行测定的打印的说明书和/或用于评价FRα的表达水平的说明书。
本发明的试剂盒也可包括从受试者中分离样品的工具。这些工具可以包含一项或多项可以用于从受试者获得流体或组织的设备或试剂。用于从受试者获得样品的工具还可以包括用于从血液样品分离血液成分如血清的工具。优选地，试剂盒设计用于和人受试者一起使用。
III.筛选测定
在进一步的实施方案中，本发明还提供了通过监测且比较样品中FRα水平而鉴定调节剂(即，候选或测试化合物或试剂(如蛋白、肽、肽模拟物、拟肽、小分子或其他药物))的方法(本文中也称为“筛选测定”)，所述调节剂调节癌(例如，表达FRα的癌)或癌细胞(例如，卵巢癌细胞)的生长、进展和/或侵袭性。这些测定通常包括其针对癌或癌细胞的活性待评价的测试化合物，或测试化合物的组合。通过测定法如本文中描述的测定法鉴定的化合物对于例如调节，例如抑制、改善、治疗或预防表达FRα的癌或癌细胞(例如，卵巢癌细胞)的侵袭性可以是有用的。通过监测样品中的FRα水平，可以确定表达FRα的癌症是否进展或退化和测试化合物是否具有所需效果。例如，在其中表达FRα的癌症是更高水平的FRα与更差的预后相关的癌症的实施方案中，在施用一种或多种测试化合物之后FRα水平的降低指示测试化合物的效力。相比之下，在施用一种或多种测试化合物之后FRα水平的增加提示测试化合物无法有效治疗卵巢癌。相比之下，在其中表达FRα的癌症是更高水平的FRα与更好的预后相关的癌症的实施方案中，在施用一种或多种测试化合物之后FRα水平的增加指示测试化合物的效力。相比之下，在施用一种或多种测试化合物之后FRα水平的降低提示测试化合物无法有效治疗卵巢癌。
用于本发明的筛选测定法的测试化合物可从任何可获得的来源(包括天然和/或合成化合物的系统文库)获得。还可在本领域已知的组合文库法中利用许多方法的任何方法获得测试化合物，所述组合文库法包括：生物文库；类肽文库(具有肽的功能性但具有抗酶促降解然而仍保持生物活性的新型非肽主链的分子的文库；参见，例如，Zuckermann等人，1994，J.Med.Chem.37:2678-85)；空间可寻址的平行固相或液相文库；需要去卷积(deconvolution)的合成文库法；'一珠一化合物'文库法；和使用亲和层析选择的合成文库法。生物学文库和类肽文库法限定于肽文库，然而所述其他4种方法适用于肽、非肽寡聚物或化合物的小分子文库(Lam，1997，AnticancerDrugDes.12:145)。
用于分子文库的合成的方法的实例可见于本领域中，例如见于：DeWitt等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6909；Erb等人(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:11422；Zuckermann等人(1994)J.Med.Chem.37:2678；Cho等人(1993)Science 261:1303；Carrell等人(1994)Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33:2059；Carell等人(1994)Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33:2061中；和Gallop等人(1994)J.Med.Chem.37:1233中。
化合物的文库可以呈现于溶液中(例如，Houghten，1992，Biotechniques 13:412-421)或珠粒上(Lam，1991，Nature 354:82-84)、芯片上(Fodor，1993，Nature 364:555-556)、细菌和/或孢子上(Ladner，USP 5,223,409)、质粒上(Cull等人，1992，Proc NatlAcad Sci USA 89:1865-1869)或噬菌体上(Scott和Smith，1990，Science 249:386-390；Devlin，1990，Science 249:404-406；Cwirla等人，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.87:6378-6382；Felici，1991，J.Mol.Biol.222:301-310；Ladner，同上)。
还通过下述实施例进一步阐述了本发明，所述实施例不应当被解释为进一步限制性的。本申请通篇中引用的所有参考文献、专利和公开的专利申请的内容，以及附图，明确通过引用完整地并入本文中。
实施例
实施例1.如电化学发光免疫测定(ECLIA)所测量的来自患有和未患卵巢癌的人受试者的尿样品中FRα水平的测定。
材料与方法
从人受试者获得尿样品，所述受试者包括患有卵巢癌的受试者和未患卵巢癌的正常对照受试者。根据下列程序使用电化学发光免疫测定法(ECLIA)测定尿样品中的FRα水平(参见Namba等人.(1999)Analytical Science 15:1087-1093):
i.抗体包被至微珠
将单克隆抗叶酸受体α抗体包被在微珠的表面上(Dynabeads M-450 Epoxy,Dynal)。在0.15mol/L磷酸盐缓冲盐水pH 7.8(PBS)中将三十六毫克微珠与1.2mL抗体MOV18(0.36mg/mL,Enzo Life Science)混合，随后在室温下轻微混合16小时。然后将微珠用含有0.1％正常兔血清(NRS),150mmol/LNaCl,0.01％Tween 20pH 7.5的50mM HEPES缓冲液(洗涤缓冲液)洗涤5次。此后，将包被的微珠悬浮于含有20％NRS,150mmol/L NaCl和0.01％Tween 20的1.2mL 50mM HEPES缓冲液pH 7.5(反应缓冲液)中，以封闭未结合的表面，随后在室温下轻微混合3.5小时。最后，将微珠用洗涤缓冲液洗涤5次，且用含有10％NRS,150mmol/LNaCl,10mmol/L EDTA-2Na和0.01％Tween 20的1.2mL 50mM HEPES缓冲液pH 7.5(反应缓冲液)重悬浮，使得微珠的浓度为30mg/mL。将微珠储存在4℃直到使用。
ii.用钌-螯合物-NHS(Ru)标记抗体
将1毫升MORAB-003(1mg/mL)/PBS与14μL Ru(10mg/mL)混合，抗体与Ru的初始摩尔比为1:20，随后在室温下在暗处振荡30分钟。通过添加25μL 2mol/L甘氨酸溶液随后孵育20分钟而终止反应。通过使用Sephadex G-25(GE Healthcare)凝胶过滤且以PBS洗脱而纯化标记的抗体。收集第一次洗脱的黄色级分，且借助Pierce BCA蛋白测定试剂盒(ThermoScientific)和455nm处的吸收分别测定抗体和Ru的浓度。通过下列公式计算最终摩尔比：最终摩尔比＝[(455处的吸收)/13700]/[Ab(mg/mL/150000)]。将标记的抗体储存在4℃直到使用。
iii.一步免疫测定
在反应缓冲液中将微珠的浓度调整至1.5mg/ml(工作溶液)之后，将抗体包被的微珠设置在Picolumi 8220(Sanko,Tokyo,Japan)的试剂台上。在反应缓冲液中将抗体的浓度调整至2μg/ml(工作溶液)之后，将Ru标记的抗体设置在Picolumi 8220的试剂台上。
将十微升尿(1:51稀释在反应缓冲液中)或标准的FRα(制备在反应缓冲液中)和100μL反应缓冲液分配至反应管(Sanko,Tokyo,Japan)中，且设置在Picolumi 8220上。
下列步骤由Picolumi 8220自动运行。分配二十五微升珠粒(工作溶液)和180μLRu标记的抗体(工作溶液)。在30+/-2℃孵育26分钟后，洗涤珠粒且用300μL电解质溶液(Sanko,Tokyo,Japan)悬浮。随后将洗涤后的珠粒转移到电极且测量电化学发光(ECL)发射。
一式两份进行所有ECL测量。
结果
表1描述了患有卵巢癌的个体受试者和未患卵巢癌的女性对照受试者中FRα的尿水平。
表1：患有卵巢癌的受试者和正常女性对照受试者的尿中的FRα水平。
组 样品# FRα(pg/mL)
卵巢癌 1 27800
2 40242
3 85580
4 4994
5 2017
6 3781
7 29469
8 47456
9 4479
10 11920
11 18352
12 162017
13 30630
14 14431
15 11801
16 13470
17 11563
18 22185
19 52106
正常对照 20 8491
21 4885
22 3595
23 21301
24 22757
25 16578
26 6081
27 4195
28 12169
29 20639
表2描述了如表1中所述患有卵巢癌的受试者和正常女性对照受试者中尿中FRα水平的分布。
表2总结了关于卵巢癌组和正常女性对照组中FRα水平的受试者数量(n)、平均值、标准偏差(SD)、最大值(Max.)和最小值(Min.)。
表2：尿FRα测量的总结
讨论
患有卵巢癌的受试者的尿中检测到高水平的FRα。此外，FRα水平在卵巢癌和正常女性对照组之间显著差异(p＝0.03，一侧的)。
实施例2.稀释线性-确定通过电化学发光免疫测定法(ECLIA)测量的系列稀释的尿样品中的FRα水平
稀释线性是测定准确度的量度。两份尿样品系列稀释10和100的系数。如实施例1中所述测量每份样品的FRα水平且比较以评价百分比误差。如下计算百分比误差：
[[(稀释样品中的FRα)*(稀释系数)]-(未稀释样品中的FRα)]*100
(未稀释样品中的FRα)
结果描述于表3中：
表3：对于尿的稀释线性
上述结果表明，在评价人尿样品中FRα水平中的稀释线性，且在可接受的误差内，尿可以稀释最高达至少100的系数，同时保持准确的FRα水平。因此，在测定FRα水平之前可以考虑稀释尿样品。
实施例3：离心尿样品-解决重现性
还测试ECLIA测定对于特定尿样品的重现性。例如，如表4中所反映的，相同样品的ECLIA测定导致不同的结果。
表4.没有离心样品的情况下的重现性
假设尿样品中不溶性物质(沉淀物)的存在导致在测量FRα水平中看到的可变性。作为结果，在测量FRα水平之前为了去除尿沉淀而离心样品被认为是增强测定的准确度和重现性的一个选项。
表5描述了当进行ECLIA测定之前离心3份样品时获得的结果。
表5.离心样品的情况下的重现性
如上所述，结果表明，离心提供了FRα浓度的更一致的测量值。
此外，两份样品进行(i)离心(2000xg持续2min)，和取出上清液用于测量FRα(描述为下表6中的样品“A”)和(ii)离心，随后为涡旋(描述为下表6中的样品“B”)，然后通过实施例1中所述的ECLIA测定法测量FRα水平。结果反映在下表6中。
表6：离心对尿中FRα水平的影响
如下测定差异(％)：
[(“B”中的FRα水平)-(“A”中的FRα水平)]*100
(“A”中的FRα水平)
如表6中所示，如通过ECLIA测定的FRα水平根据是否通过离心使尿澄清以去除沉淀或是否将尿涡旋以悬浮或分散沉淀而变化。因此，在某些实施方案中，可以在确定FRα水平之前进行尿样品的离心或涡旋。
实施例4.确定通过电化学发光免疫测定(ECLIA)所测量的来自患有和未患卵巢癌的人受试者的离心后的尿样品中FRα水平。
基于实施例3的结果，将用于评价受试者中FRα水平的测定进行改良以引入离心步骤。对实施例1中使用的相同样品测定FRα水平，包括患有卵巢癌的受试者组和正常女性对照受试者组。
材料与方法
利用的方法如实施例1中所述，除了尿样品以10000×g离心1min且随后获得的上清液在反应缓冲液中以1:51稀释。
结果
表7描述了来自患有卵巢癌的受试者和健康女性对照受试者的离心和未离心的尿样品中的FRα水平。
表7：卵巢癌和正常对照组中的尿FRα水平
根据表7中所述的结果，离心导致一些样品中FRα水平的测量值的降低，如前面在表6中所示。
实施例5:通过免疫印迹法检测尿沉淀中的FRα
基于实施例3和4中所示的结果，使用western印迹评价在尿沉渣/沉淀中FRα的存在或不存在。
材料与方法
来自2名卵巢癌患者(其FRα浓度分别测量为18,747pg/mL和145,564pg/mL(参见上面表10))的尿样品进行下列程序。对照样品由HeLa细胞裂解物10μg、肝组织裂解物20μg和卵巢癌组织裂解物20μg组成。
·900μL尿以10000g离心2分钟
·去除上清液
·剩余沉淀溶解于15μL PAGE样品缓冲液(含有292mM LDS)中，且随后在70℃煮沸10min
·将整个样品(约20μL)上样到NuPAGE bis-tris凝胶(Invitrogen)上
·电泳后，将蛋白转移至PVDF膜
·添加1％脱脂奶粉/0.05％Tween 20/PBS用于封闭
·用0.05％Tween 20/PBS洗膜
·添加0.5mL 2μg/ml单克隆抗体548908(R&D Systems)且在室温下孵育60分钟
·用0.05％Tween 20/PBS洗膜
·添加10mL抗小鼠IgG-HRP(DAKO p0447,1:2000)且允许孵育60分钟
·用0.05％Tween 20/PBS洗膜
·将Pierce ECL底物添加至膜
·将膜从底物去除，然后用Las-3000(FUJIFILM)系统成像。
结果
获得的免疫印迹显示于图3中。在该图中，泳道1-5对应于从下列来源检测的FRα：
(1)来自卵巢癌患者的尿，具有18,747pg/mL的测量的FRα水平
(2)来自卵巢癌患者的尿，具有145,564pg/mL的测量的FRα水平
(3)HeLa细胞裂解物：10μg
(4)肝组织裂解物：20μg
(5)卵巢癌组织裂解物：20μg。
western印迹中的泳道6代表分子量标记，且表明泳道1、2、3和5中观察到的条带以FRα的预期分子量运行。
泳道3和5是阳性对照样品且泳道4是阴性对照样品。泳道1上的淡条带和泳道2上的清晰条带表明western印迹在卵巢癌患者的尿沉淀中可以检测到FRα。
实施例6.通过电化学发光免疫测定(ECLIA)确定胍处理的正常人尿样品中的FRα水平
基于实施例4的结果(其中离心导致FRα水平下降)和实施例5的结果(其中显示从离心获得的尿沉淀含有免疫反应性FRα)，寻求溶解尿沉淀以获得FRα的更定量和精确的测量值的方法。
在这方面，尝试在评价FRα水平之前用胍处理正常女性尿样品。
利用的方法如实施例1中所述，除了尿样品与6M胍/缓冲液(PBS)或仅缓冲液以1:1比例进行混合。随后，尿样品以1:51在反应缓冲液中稀释。
该测定的结果显示于表8中。
表8：有或没有胍处理的情况下的正常尿FRα水平
该实验的结果表明，胍没有干扰FRα测量值。如对于纯抗原对照(Std Ag)可以看到，这种胍处理方法和随后的稀释对于FRα测量值没有影响。此外，应注意的是，在评价的所有三(3)份尿样品中，相对于没有用胍处理的样品，FRα水平在胍处理(溶解)的样品中更高。
通过将三份样品暴露于胍且使用ECLIA测定法测量每份胍处理的样品中的FRα浓度3次而进一步评价胍预处理尿样品的可靠性。结果反映在下表9中：
表9：胍处理尿的测定间重复性
如上所述，结果表明，FRα测定前的胍处理尿提供了具有非常低的CV的一致的FRα浓度的测量值。
实施例7.确定通过电化学发光免疫测定(ECLIA)所测量的来自患有和未患卵巢癌的人受试者的胍处理的尿样品中FRα水平。
基于实施例6的结果(其中显示胍处理不干扰FRα测定)，采用改良的测定方案来测量来自实施例1中患有和未患卵巢癌的受试者的尿样品中的FRα。
采用下列测定方案：
材料与方法
利用的方法如实施例1中所述，除了尿样品与6M胍缓冲液以1:1比例进行混合且随后在反应缓冲液中以1:26稀释。
结果
表10描述了来自患有卵巢癌的受试者和健康女性对照受试者的胍处理的尿样品中的FRα水平。
表10：卵巢癌和正常对照组中的尿FRα水平
表4显示了使用用胍处理的改良方案的患有卵巢癌的受试者和正常女性对照受试者中尿中FRα水平的分布。观察组间的统计学显著性差异。表11总结了这些结果。
表11：尿FRα测量的总结
使用来自该实验的数据，进行接收者操作特性(ROC)分析。图5显示了在用胍处理尿后尿中FRα水平的ECLIA测量的灵敏度和特异性的ROC曲线。AUC是曲线下面积，其测量试验在区分卵巢癌和对照受试者中的精确度。
使用9100pg FRα/mL的任意截止值，如表12中所示，AUC为0.70，阳性预测值为70％，阴性预测值为80％。使用该截止值，15/19的卵巢癌患者具有高于9100pg/mL的FRα浓度，且8/10的正常受试者具有小于9100pg/mL的FRα浓度。
表12：用于尿测量的胍处理
实施例8：肌酸酐校正通过电化学发光免疫测定(ECLIA)测定的胍处理的尿样品中FRα浓度
前面使用ECLIA测定来自卵巢癌患者和正常女性对照(参见实施例7，表10)的胍处理的尿样品的FRα浓度。此处，这些FRα浓度针对尿肌酸酐水平进行校正，以便针对肾小球滤过率进行均一化。获得的值进行ROC分析。
方法
通过卫生、劳工和福利部批准的检测试剂盒测定尿肌酸酐水平，测定者L CRE(KyowaMedex,Japan)。如下计算尿FRα浓度的校正值：
尿FRα肌酸酐校正(ng/g)
＝(尿FRα(ng/L)x 1000)/(尿肌酸酐(mg/dL)x10)
＝(尿FRα(ng/L)x 1000)/尿肌酸酐(mg/L)
＝尿FRα(ng/L)/尿肌酸酐(g/L)
＝尿FRα(ng)/尿肌酸酐(g)
或
＝1/1000x尿FRα(μg)/尿肌酸酐(g)。
结果
表13给出了获得的肌酸酐校正的FRα水平。
表13：使用ECLIA测定的胍处理的尿样品的肌酸酐校正的FRα水平
表6显示了在针对尿肌酸酐浓度校正后卵巢癌受试者(OC)和正常女性对照受试者中FRα水平的分布。卵巢癌患者和对照之间的FRα的肌酸酐校正水平之间存在统计显著性差异(p＝0.007)。
卵巢癌和正常对照受试者的总结数据提供于表14中。
表14：肌酸酐校正的FRα水平的总结统计
肌酸酐校正的FRα水平进一步进行ROC分析。ROC曲线显示于图7中。表15给出了肌酸酐校正测试的各种截止值的灵敏度、特异性和曲线下面积(AUC)。
表15：肌酸酐校正测试的各种截止值的灵敏度、特异性和AUC
如前面所述，卵巢癌患者的尿和来自健康女性对照受试者的尿之间存在明显区别。
实施例9：酶免疫测定法(EIA)及其优化
1.酶免疫测定法(EIA)
抗体包被至微量滴定板
如下将单克隆抗叶酸受体α抗体包被在微量滴定板的表面上(Nunc-immunoplate,Thermo Scientific)。将一百微升50mmol/L碳酸盐缓冲液pH 9.4中的抗体(280nm处的吸光度0.02)分配到孔中，随后在4℃包被16小时。然后微孔板用含有0.05％Tween20的PBS(PBS-T)洗涤2次。此后将0.15mL含有20％正常兔血清的PBS pH 7.8分配到孔中以封闭未结合的表面，随后在室温下封闭1小时。最后，微孔板用PBS-T洗涤2次。抗体包被的板干燥且在4℃下保持在铝袋中，直到使用。
生物素标记
根据制造商的推荐针对EZ-Link Sulfo-NHS-LC-LC-生物素(产品编号21338,ThermoScientific)进行生物素标记。简而言之，将0.4mL PBS中的1mg抗体与0.013mL 10mMSulfo-NHS-LC-LC-生物素以1:20的抗体与生物素的初始摩尔比进行混合，随后在室温孵育30min。通过使用PD-10柱(GE Healthcare)凝胶过滤且以PBS洗脱以去除未反应的生物素而纯化生物素偶联的抗体。为了确定生物素掺入的水平，使用EZ生物素定量试剂盒(产品编号28005,Thermo Scientific)。将生物素标记的抗体储存在-80℃直到使用。
两步免疫测定
对于第一个反应，将40μL血浆或标准抗原和60μl含有10％NRS,150mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA-2Na,0.01％Tween 20的50mM HEPES缓冲液pH 7.5(反应缓冲液)分配到抗体包被的孔中。将板在4℃孵育18小时，且随后用PBS-T洗涤5次。对于第二个反应，分配100μL反应缓冲液中的10μg/mL生物素标记的抗体。将板在室温孵育1小时，且随后用PBS-T洗涤5次。分配100μL辣根过氧化物酶标记的链霉抗生物素蛋白(Pierce)。在室温下孵育30分钟后，将板用PBS-T洗涤5次。最后，为了显色，分配100μL TMB溶液(KPL)，在暗处放置15分钟。通过添加100μL 1N HCl停止显色后，使用酶标仪读取450nm处的吸光度。通过自动洗板机(AMW-8,BioTec,Japan)自动进行所有洗涤步骤，且一式两份进行所有EIA测量。
图8描述了使用MOV18作为捕获抗体和生物素化的MORAb-003作为检测抗体的EIA测定。
2.EIA程序的优化
部分基于下列设计用于优化程序的实验进行上述EIA程序。
首先，比较抗生物素蛋白-HRP、生物素标记的抗体和HRP标记的抗体。与HRP标记的抗体相比，生物素标记的抗体和抗生物素蛋白-HRP提供了更高的信号；因此，采用生物素标记的抗体和抗生物素蛋白-HRP。
其次，比较一步和两步孵育程序。如图9中所示，两步孵育程序产生了更高的信号，且因此使用两步孵育程序。
第三，为了优化第二个孵育时间，比较了1至4小时的孵育时间。结果表明，一小时孵育时间提供了最高的信噪比，因此，随后采用一小时的孵育时间。
第四，为了优化生物素标记的抗体的工作浓度、HRP标记的抗体和样品体积，如EIA测定的上述描述中所述采用各种浓度。最佳值浓度如上所述。
实施例10：比较使用电化学发光免疫测定法(ECLIA)与酶免疫测定法(EIA)测定的人血浆中的FRα
使用实施例1和图1中所述的电化学发光测定法(ECLIA)(使用MORAb-003作为捕获抗体和钌(Ru)标记的MOV-18作为标记的检测抗体)和实施例9和图8中所述的酶免疫测定法(EIA)在从卵巢癌患者和健康女性对照采集的人血浆样品中测量FRα水平。在两种测定法中，测定40μL血浆。
表16显示了如使用EIA和ECLIA所测定的在卵巢癌和正常对照受试者中的FRα血浆水平。
表16：使用EIA和ECLIA方法测定的FRα的血浆浓度
只有一个例外，所有受试者的结果表明，使用EIA在血清中检测的FRα浓度低于使用ECLIA检测的水平，表明当使用捕获(MOV-18)和检测抗体(MORAb-003)的特定组合时格式化的EIA测定没有和ECLIA测定一样灵敏。因此，进行使用其他类型抗体的进一步实验以开发更灵敏的EIA程序。
实施例11:不同类型的抗体对于EIA测量人血浆中的FRα的可行性
1.抗体组合的初步实验
考虑捕获/检测抗体的各种组合。初步实验提出了表17中所述的结果。
表17
2.使用各种抗体组合的EIA测定的比较和与ECLIA测定的比较
用捕获和生物素标记抗体的不同组合使用酶联免疫吸附测定法(EIA)测量来自卵巢癌患者和正常健康女性对照的血浆中的FRα水平，其与使用ECLIA测定法测量的FRα水平进行比较。
材料与方法
ECLIA方法如实施例1中所述且描述于图1中(使用MORAb-003抗体作为捕获抗体和Mov-18抗体作为标记的检测抗体)。EIA方法如实施例9中所述，除了采用三种不同的捕获/检测抗体的组合，如图10中所述：MOV18/MORAb-003、548908/MORAb-003和6D398/MORAb-003。抗体548908和6D398是市售的。从R&D Systems(North Las Vegas,NV)获得548908抗体，且从US Biological(Swampscott,MA01907)获得6D398抗体。
结果
使用EIA和ECLIA方法测定的FRα的浓度(pg/mL)显示于表18中。此外，使用各种捕获/检测抗体的组合通过EIA确定的FRα的浓度(pg/mL)图示描述于图11中。
表18：以各种捕获和检测抗体的组合使用EIA和ECLIA方法测定的FRα的血浆浓度(pg/mL)
表18中的数据表明，使用54908-MORAb-003组合以EIA测量FRα产生了与使用ECLIA测定获得的结果最相似的结果。进行定量分析，验证该观察结果。此外，这些数据表明，FRα的检测高度依赖于采用的抗体和抗体组合。因此，可以采用不同的抗体组合用于测定生物流体中的FRα。此外，由于从EIA和ECLIA测定形式获得的数据是类似的，所以可以使用各种测定形式用于测定FRα。
对于用于EIA方法的捕获和检测抗体的三种组合中的每一种，进行回归分析，且用EIA测定的FRα浓度(pg/mL)与用ECLIA测定确定的浓度相关。该分析的结果显示于表19和图12中。
表19：使用捕获和检测抗体的三种组合通过ECLIA测量的FRα血浆浓度与通过EIA测量的浓度的相关性
使用548098-MORAb-003捕获-检测组合的EIA的结果与ECLIA的结果高度相关(r＝0.96)。
实施例12:通过EIA和ECLIA在来自卵巢癌患者的样品中测定的FRα血浆水平使用ECLIA和EIA在卵巢癌患者组(n＝17)和正常对照组(n＝35)中测定血清FRα水平的测量值。对于EIA测量，采用548908捕获/MORAb-003检测抗体组合。EIA程序否则如实施例9中所述。ECLIA程序如实施例1中所述。结果如表20中所示。
表20：如使用EIA和ECLIA所测定的在卵巢癌患者和正常对照中的血浆FRα浓度
表13显示了如使用EIA所测定的患有卵巢癌的受试者和正常女性对照受试者中血浆FRα水平的分布。
表21显示了如使用EIA所测定的卵巢癌受试者和正常女性对照受试者中血浆FRα浓度的简要描述性统计。
表21：如使用EIA所测定的卵巢癌受试者和正常女性对照受试者中FRα血浆浓度的总结。
图14进一步描述了使用EIA和ECLIA测定的FRα血浆浓度之间的相关性。相关性较高(r＝0.95)。
实施例13.确定如电化学发光免疫测定(ECLIA)所测量的来自肺癌患者和卵巢癌患者的匹配的尿和血清样品中FRα水平
使用ECLIA在来自肺癌和卵巢癌患者的匹配的尿和血清样品中测定FRα水平，其中样品取自相同的患者。还确定血清和尿FRα水平之间的相关性。
材料与方法
采用的ECLIA方法如实施例1中所述。如实施例6中所述使用胍溶解尿沉淀。
结果
来自肺癌和卵巢癌患者的血清和尿的ECLIA测定的结果呈现于表22中。
表22：如通过ECLIA所测定的肺癌患者和卵巢癌患者的匹配的尿和血清样品中的FRα浓度
肺癌患者的血清和尿FRα水平的总结数据呈现于表23中。
表23：如通过ECLIA所测定的肺癌患者的匹配的血清和尿样品中FRα浓度的总结统计
卵巢癌患者的血清和尿FRα水平的总结数据呈现于表24中。
表24：如通过ECLIA所测定的卵巢癌患者的匹配的血清和尿样品中FRα浓度的总结统计
图15显示了在取自相同患者的匹配的血清和尿样品中FRα水平的ECLIA量度之间的相关性。肺癌患者的相关性为r＝0.24(上小图)且卵巢癌患者的相关性为r＝-0.76(下小图)。
这些数据表明尿相比于血清中测量的FRα浓度之间的相关性的相对缺乏，尤其如对于肺癌患者所示。此外，这些数据表明，在肺癌患者相比于正常对照的血清中FRα基本上没有检测到高于背景水平，而FRα在这些患者的尿中可以检测到。
实施例14.评价来自患有卵巢癌的患者、患有肺癌的患者和正常对照的血清样品中的FRα水平
评价患有卵巢癌的患者、患有肺癌的患者和正常对照的血清中的FRα水平。用两对不同的捕获-检测抗体使用ECLIA评价血清FRα水平：第1对，其中9F3是捕获抗体且24F12是检测抗体，第2对，其中26B3是捕获抗体且19D4是检测抗体。
用完全校准曲线和196份1:4稀释的个体血清测试FRα对。在一次实验中，26B3在板批次上CR处理后用作捕获抗体(75μg/mL,+B,+T)，且19D4以1.0μg/mL用作检测抗体。在另一次实验中，9F3用作捕获抗体，且24F12以1.0μg/mL用作检测抗体。每一种以13.3的标记蛋白比(L/P)进行CR处理(批次10070)。稀释剂100(Meso Scale Discovery,Gaithersburg,Maryland)+人抗小鼠抗体(HAMA)+mIgG用于样品和校准物。稀释剂3(Meso ScaleDiscovery,Gaithersburg,Maryland)用于检测。
采用下列方案用于ECLIA。以50μL/孔添加样品。对样品振荡2小时，随后用含有去污剂Tween 20的磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液(PBST)进行洗涤。以25μL/孔添加检测抗体。对样品振荡2小时，然后用PBST洗涤。最后，用2X缓冲液T读取样品的电化学发光(ECL)发射。
结果显示于下面表25中。
基于前述数据，很明显，9F3、2412、26B3和19D4抗体在检测源自受试者的生物样品(例如血清)中的FRα水平中是有用的。此外，(i)9F3作为捕获抗体且24F12作为检测抗体和(ii)26B3作为捕获抗体且19D4作为检测抗体的特定组合能够且特别有效评价生物样品中的FRα水平。
实施例15.使用三对不同的检测和捕获抗体评价尿中的FRα水平
评价三对抗FRα抗体在检测尿样品中的FRα水平中的能力。采用的抗体对如下：(1)26B3作为检测抗体且9F3作为捕获抗体，和(2)24F12作为检测抗体且9F3作为捕获抗体。
方法
用完全校准曲线和在6M胍、3M胍或PBS对照中以1:1稀释预处理2分钟的尿测试两对抗体。测试下列尿样品：1:80稀释的三种人尿合并物，和1:80稀释的五份人个体尿(1男，4女)。
将板在4spot STD((Meso Scale Discovery,Gaithersburg,Maryland))上以150μg/mL,+B,+T进行生物斑点分析，每孔一种捕获抗体。以1μg/mL运行检测。使用稀释剂100+HAMA+mIgG用于样品和校准物。使用稀释剂3用于检测。稀释剂是从Meso Scale Discovery获得的市售稀释剂。
采用下列方案用于ECLIA。以50μL/孔添加样品。对样品振荡2小时。样品用含有去污剂Tween 20的磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液(PBST)进行洗涤。以25μL/孔添加检测抗体。对样品振荡2小时，然后用PBST洗涤。用2X MSD缓冲液T读取样品的电化学发光(ECL)发射。
这些实验的结果显示于表26-27中。
表26：使用26B3作为检测抗体和9F3作为捕获抗体检测尿中的FRα水平
表27：使用24F12作为检测抗体和9F3作为捕获抗体检测尿中的FRα水平
基于前述数据，很明显，9F3、2412、26B3和19D4抗体在检测源自受试者的生物样品中的FRα水平中是有用的。此外，(1)26B3作为检测抗体且9F3作为捕获抗体和(2)24F12作为检测抗体且9F3作为捕获抗体的组合能够且特别有效评价生物样品中的FRα水平。
在上述方案之后使用相同两对抗体利用1:80稀释的四份女性人个体尿进行第二组实验。将尿在3M胍或PBS对照中以1:1稀释预处理2分钟。结果显示于表28-29中。
表28：使用26B3作为检测抗体和9F3作为捕获抗体检测尿中的FRα水平
表29：使用24F12作为检测抗体和9F3作为捕获抗体检测尿中的FRα水平
该第二组实验的结果进一步验证了第一组实验的结果，且表明可以使用测定如ECLIA测定和使用26B3、9F3、24F12抗体可靠地评价(例如，尿中)不与细胞结合的FRα水平。此外，结果表明，这种测定可以使用结合FRα的检测和捕获抗体对(如，例如，26B3作为检测抗体且9F3作为捕获抗体，和24F12作为检测抗体且9F3作为捕获抗体)有效地检测FRα。
实施例16.评价血清和血浆中的FRα水平
在单独两天评价血清和血浆样品中的FRα水平。样品来源的受试者是正常受试者或患有卵巢癌或肺癌的患者。
用于评价FRα水平的方案与上述实施例14中所述的是相同的。用于评价FRα水平的抗体对与实施例14中所述的也是相同的，即，第1对，其中9F3是捕获抗体且24F12是检测抗体，第2对，其中26B3是捕获抗体且19D4是检测抗体。
结果在表30中提供。
基于前述数据，很明显，9F3、2412、26B3和19D4抗体在检测源自受试者的生物样品(例如血清或血浆)中的FRα水平中是有用的。此外，(i)9F3作为捕获抗体且24F12作为检测抗体和(ii)26B3作为捕获抗体且19D4作为检测抗体的特定组合能够且特别有效评价生物样品中的FRα水平。
对于使用第1对和第2对进行的测定，在血清和血浆FRα水平之间有较高相关性。图16显示了使用第1对进行的测定的血清相比于血浆FRα水平的相关性(参见实施例16)。R2值是0.8604。图17显示了使用第2对进行的测定的血清相比于血浆FRα水平的相关性(参见实施例16)。R2值是0.9766。
对于血清和血浆样品，在使用第1对和第2对测量的FRα水平之间存在较高相关性。图18显示了使用第1对相比于第2对进行的测定的血清FRα水平的相关性(参见实施例16)。R2值是0.9028。图19显示了使用第1对相比于第2对进行的测定的血浆FRα水平的相关性(参见实施例16)。R2值是0.8773。
结果还显示，在不同天测量的FRα水平之间存在较高相关性。图20显示了使用第1对进行的测定的血清FRα水平的日间相关性。R2值是0.9839。
等同方式
使用不超出常规的实验，本领域技术人员将知晓或者能够确定本文所述的本发明的具体实施方案的很多等同方式。此类等同方式也意欲包括在下述权利要求之内。从属权利要求中公开的实施方案的任何组合也包括在本发明的范围内。
表33：序列
序列表
<110> MORPHOTEK INC.
<120> 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记
<130> 118557-01420
<140> PCT/US2011/059411
<141> 2011-11-04
<150> 61/508,444
<151> 2011-07-15
<150> 61/410,497
<151> 2010-11-05
<160> 90
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Gly Leu Ser
1 5 10
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 2
Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 3
His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 4
Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn Asn Leu His
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 5
Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 6
Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Tyr Met Tyr Thr
1 5 10
<210> 7
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 8
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 8
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Tyr Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 9
<211> 468
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 9
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Gly Tyr Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
225 230 235 240
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
245 250 255
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
260 265 270
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
275 280 285
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
290 295 300
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
305 310 315 320
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
325 330 335
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
340 345 350
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
355 360 365
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
370 375 380
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
385 390 395 400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
420 425 430
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
435 440 445
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
450 455 460
Ser Pro Gly Lys
465
<210> 10
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 10
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
20 25 30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile
35 40 45
Ser Ser Asn Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Pro Trp Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
100 105 110
Ser Tyr Pro Tyr Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130 135 140
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
165 170 175
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 11
<211> 1407
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 11
atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactccgag 60
gtccaactgg tggagagcgg tggaggtgtt gtgcaacctg gccggtccct gcgcctgtcc 120
tgctccgcat ctggcttcac cttcagcggc tatgggttgt cttgggtgag acaggcacct 180
ggaaaaggtc ttgagtgggt tgcaatgatt agtagtggtg gtagttatac ctactatgca 240
gacagtgtga agggtagatt tgcaatatcg cgagacaacg ccaagaacac attgttcctg 300
caaatggaca gcctgagacc cgaagacacc ggggtctatt tttgtgcaag acatggggac 360
gatcccgcct ggttcgctta ttggggccaa gggaccccgg tcaccgtctc ctcagcctcc 420
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 720
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260
tccgacggct ccttcttctt atattcaaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380
agcctctccc tgtctcccgg gaaatga 1407
<210> 12
<211> 711
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 12
atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactccgac 60
atccagctga cccagagccc aagcagcctg agcgccagcg tgggtgacag agtgaccatc 120
acctgtagtg tcagctcaag tataagttcc aacaacttgc actggtacca gcagaagcca 180
ggtaaggctc caaagccatg gatctacggc acatccaacc tggcttctgg tgtgccaagc 240
agattcagcg gtagcggtag cggtaccgac tacaccttca ccatcagcag cctccagcca 300
gaggacatcg ccacctacta ctgccaacag tggagtagtt acccgtacat gtacacgttc 360
ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgtta a 711
<210> 13
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 13
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Tyr Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 14
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 14
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Tyr Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 15
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 15
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Tyr Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 16
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 16
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Tyr Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 17
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 17
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 18
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 19
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 19
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 20
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 21
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠种
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> 任何氨基酸
<400> 22
Gln Val Xaa Leu Gln Xaa Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 23
<211> 110
<212> PRT
<213> 小鼠种
<400> 23
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Glu Thr Ser Pro Lys Pro Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Leu Arg Phe Arg
50 55 60
Gly Phe Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Tyr Met Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 24
<211> 962
<212> DNA
<213> 智人
<400> 24
tcaaggttaa acgacaagga cagacatggc tcagcggatg acaacacagc tgctgctcct 60
tctagtgtgg gtggctgtag taggggaggc tcagacaagg attgcatggg ccaggactga 120
gcttctcaat gtctgcatga acgccaagca ccacaaggaa aagccaggcc ccgaggacaa 180
gttgcatgag cagtgtcgac cctggaggaa gaatgcctgc tgttctacca acaccagcca 240
ggaagcccat aaggatgttt cctacctata tagattcaac tggaaccact gtggagagat 300
ggcacctgcc tgcaaacggc atttcatcca ggacacctgc ctctacgagt gctcccccaa 360
cttggggccc tggatccagc aggtggatca gagctggcgc aaagagcggg tactgaacgt 420
gcccctgtgc aaagaggact gtgagcaatg gtgggaagat tgtcgcacct cctacacctg 480
caagagcaac tggcacaagg gctggaactg gacttcaggg tttaacaagt gcgcagtggg 540
agctgcctgc caacctttcc atttctactt ccccacaccc actgttctgt gcaatgaaat 600
ctggactcac tcctacaagg tcagcaacta cagccgaggg agtggccgct gcatccagat 660
gtggttcgac ccagcccagg gcaaccccaa tgaggaggtg gcgaggttct atgctgcagc 720
catgagtggg gctgggccct gggcagcctg gcctttcctg cttagcctgg ccctaatgct 780
gctgtggctg ctcagctgac ctccttttac cttctgatac ctggaaatcc ctgccctgtt 840
cagccccaca gctcccaact atttggttcc tgctccatgg tcgggcctct gacagccact 900
ttgaataaac cagacaccgc acatgtgtct tgagaattat ttggaaaaaa aaaaaaaaaa 960
aa 962
<210> 25
<211> 257
<212> PRT
<213> 智人
<400> 25
Met Ala Gln Arg Met Thr Thr Gln Leu Leu Leu Leu Leu Val Trp Val
1 5 10 15
Ala Val Val Gly Glu Ala Gln Thr Arg Ile Ala Trp Ala Arg Thr Glu
20 25 30
Leu Leu Asn Val Cys Met Asn Ala Lys His His Lys Glu Lys Pro Gly
35 40 45
Pro Glu Asp Lys Leu His Glu Gln Cys Arg Pro Trp Arg Lys Asn Ala
50 55 60
Cys Cys Ser Thr Asn Thr Ser Gln Glu Ala His Lys Asp Val Ser Tyr
65 70 75 80
Leu Tyr Arg Phe Asn Trp Asn His Cys Gly Glu Met Ala Pro Ala Cys
85 90 95
Lys Arg His Phe Ile Gln Asp Thr Cys Leu Tyr Glu Cys Ser Pro Asn
100 105 110
Leu Gly Pro Trp Ile Gln Gln Val Asp Gln Ser Trp Arg Lys Glu Arg
115 120 125
Val Leu Asn Val Pro Leu Cys Lys Glu Asp Cys Glu Gln Trp Trp Glu
130 135 140
Asp Cys Arg Thr Ser Tyr Thr Cys Lys Ser Asn Trp His Lys Gly Trp
145 150 155 160
Asn Trp Thr Ser Gly Phe Asn Lys Cys Ala Val Gly Ala Ala Cys Gln
165 170 175
Pro Phe His Phe Tyr Phe Pro Thr Pro Thr Val Leu Cys Asn Glu Ile
180 185 190
Trp Thr His Ser Tyr Lys Val Ser Asn Tyr Ser Arg Gly Ser Gly Arg
195 200 205
Cys Ile Gln Met Trp Phe Asp Pro Ala Gln Gly Asn Pro Asn Glu Glu
210 215 220
Val Ala Arg Phe Tyr Ala Ala Ala Met Ser Gly Ala Gly Pro Trp Ala
225 230 235 240
Ala Trp Pro Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Met Leu Leu Trp Leu Leu
245 250 255
Ser
<210> 26
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (12)..(12)
<223> /替代="His"
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> /注="序列中给出的残基关于对于所述位置的注释没有任何优先"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(18)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (21)..(21)
<223> /替代="Glu"
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> /注="序列中给出的残基关于对于所述位置的注释没有任何优先"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(25)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> 任何氨基酸
<400> 26
Thr Glu Leu Leu Asn Val Xaa Met Asn Ala Lys Trp Xaa Lys Glu Lys
1 5 10 15
Pro Xaa Pro Xaa Asp Lys Leu Xaa Xaa Gln Xaa
20 25
<210> 27
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 27
Arg Ala Ser Ser Thr Val Ser Tyr Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 28
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 28
Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 29
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 29
Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 30
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 30
Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
1 5 10 15
Arg Ala Ser Ser Thr Val Ser Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Gly Ala Ser Pro Gln Leu Trp Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu
35 40 45
Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser
50 55 60
Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr
85 90 95
Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro
100 105
<210> 31
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 31
Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn
1 5
<210> 32
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 32
Tyr Ile Lys Ser Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn
1 5 10 15
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 33
Glu Trp Lys Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 34
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 34
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr
1 5 10 15
Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn Trp
20 25 30
Ile Arg Gln Phe Pro Gly Ser Arg Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Lys
35 40 45
Ser Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Ile Ser
50 55 60
Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys Leu Asn Ser
65 70 75 80
Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Arg Glu Trp Lys
85 90 95
Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp
115 120 125
Thr
<210> 35
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 35
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr Gly Asn Asn Phe Ile His
1 5 10 15
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 36
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 37
Gln Gln Asn Asn Gly Asp Pro Trp Thr
1 5
<210> 38
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 38
Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys
1 5 10 15
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr Gly Asn Asn Phe Ile His Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala
35 40 45
Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala
65 70 75 80
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Gly Asp Pro Trp Thr Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro
100 105 110
<210> 39
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 39
His Pro Tyr Met His
1 5
<210> 40
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 40
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 41
Glu Glu Val Ala Asp Tyr Thr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 42
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 42
Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr
1 5 10 15
Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys His Pro Tyr Met His Trp Val Lys Gln
20 25 30
Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn
35 40 45
Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr
50 55 60
Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr
65 70 75 80
Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Arg Glu Glu Val Ala Asp
85 90 95
Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val
115 120 125
<210> 43
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 43
Ser Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Phe Leu Asn
1 5 10
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 44
Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 45
Gln His Phe Ser Lys Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 46
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 46
Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys
1 5 10 15
Ser Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
20 25 30
Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His
35 40 45
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr
50 55 60
Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Ile Tyr Tyr
65 70 75 80
Cys Gln His Phe Ser Lys Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
85 90 95
Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro
100 105
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 47
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 48
Glu Ile Gly Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Thr
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 49
Glu Thr Thr Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 50
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 50
Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys
1 5 10 15
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
20 25 30
Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Glu Ile Gly Ser Gly
35 40 45
Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile
50 55 60
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Glu Met Ser Ser Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Thr Thr Ala
85 90 95
Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 51
Arg Thr Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 52
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 53
Gln His His Tyr Ala Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 54
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 54
Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys
1 5 10 15
Arg Thr Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
20 25 30
Gln Gly Ile Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala
35 40 45
Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe
50 55 60
Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr
65 70 75 80
Cys Gln His His Tyr Ala Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys
85 90 95
Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro
100 105
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 55
Gly Tyr Phe Met Asn
1 5
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 56
Arg Ile Phe Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成肽"
<400> 57
Gly Thr His Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 58
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多肽"
<400> 58
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
1 5 10 15
Ala Ser Asp Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Met Asn Trp Val Met Gln
20 25 30
Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Phe Pro Tyr Asn
35 40 45
Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr
50 55 60
Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His Met Glu Leu Arg Ser Leu Ala
65 70 75 80
Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Thr His Tyr Phe
85 90 95
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr
100 105 110
Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr
115 120 125
<210> 59
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 59
agggccagct caactgtaag ttacagttac ttgcac 36
<210> 60
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 60
ggcacatcca acttggcttc t 21
<210> 61
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 61
cagcagtaca gtggttaccc actcacg 27
<210> 62
<211> 323
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 62
ccagcaatca tgtctgcatc tccaggggaa aaggtcacca tgacctgcag ggccagctca 60
actgtaagtt acagttactt gcactggtac cagcagaagt caggtgcctc cccccaactc 120
tggatttatg gcacatccaa cttggcttct ggagtccctg ctcgcttcag tggcagtggg 180
tctgggacct cttactctct cacaatcagc agtgtggagg ctgaagatgc tgccacttat 240
tactgccagc agtacagtgg ttacccactc acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg 300
aaacgggctg atgctgcacc aac 323
<210> 63
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 63
agtggttatt actggaac 18
<210> 64
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 64
tacataaagt ccgacggtag caataattac aacccatctc tcaaaaat 48
<210> 65
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 65
gagtggaagg ctatggacta c 21
<210> 66
<211> 389
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 66
gagtcaggac ctggcctcgt gagaccttct cagtctctgt ctctcacctg ctctgtcact 60
ggctactcca tcaccagtgg ttattactgg aactggatcc ggcagtttcc aggaagcaga 120
ctggaatgga tgggctacat aaagtccgac ggtagcaata attacaaccc atctctcaaa 180
aatcgaatct ccatcactcg tgacacatct aagaaccagt ttttcctgaa gttgaattct 240
gtgactactg aggacacagc tacatatttc tgtacaaggg agtggaaggc tatggactac 300
tggggtcagg gaacctcagt caccgtctcc tcagccaaaa caacaccccc atcagtctat 360
ccactggccc ctgggtgtgg agatacaac 389
<210> 67
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 67
agagccagtg aaagtgttga tacttatggc aataatttta tacac 45
<210> 68
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 68
cttgcatcca acctagaatc t 21
<210> 69
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 69
cagcaaaata atggggatcc gtggacg 27
<210> 70
<211> 331
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 70
ccagcttctt tggctgtgtc tctagggcag agggccacca tatcctgcag agccagtgaa 60
agtgttgata cttatggcaa taattttata cactggtacc agcagaaacc aggacagcca 120
cccaaactcc tcatttatct tgcatccaac ctagaatctg gggtccctgc caggttcagt 180
ggcagtgggt ctaggacaga cttcaccctc accattgatc ctgtggaggc tgatgatgct 240
gcaacctatt actgtcagca aaataatggg gatccgtgga cgttcggtgg aggcaccaag 300
ctggagatca aacgggctga tgctgcacca a 331
<210> 71
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 71
cacccctata tgcac 15
<210> 72
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 72
aggattgatc ctgcgaatgg taatactaaa tatgacccga agttccaggg c 51
<210> 73
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 73
gaggaggtgg cggactatac tatggactac 30
<210> 74
<211> 380
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 74
ggggcagagc ttgtgaagcc aggggcctca gtcaagttgt cctgcacagc ttctggcttc 60
aacattaaac acccctatat gcactgggtg aagcagaggc ctgaccaggg cctggagtgg 120
attggaagga ttgatcctgc gaatggtaat actaaatatg acccgaagtt ccagggcaag 180
gccactataa cagcagacac atcctccaac acagcctacc tacagctcag cagcctgaca 240
tctgaggaca ctgccgtcta ttactgtggt agagaggagg tggcggacta tactatggac 300
tactggggtc aaggaacctc agtcaccgtc tcctcagcca aaacaacagc cccatcggtc 360
tatccactgg cccctgtgtg 380
<210> 75
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 75
agtgcaagtc agggcattaa caatttttta aac 33
<210> 76
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 76
tacacatcaa gtttacactc a 21
<210> 77
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 77
cagcacttta gtaagcttcc gtggacg 27
<210> 78
<211> 320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 78
acatcctccc tgtctgcctc tctgggagac agagtcacca tcagttgcag tgcaagtcag 60
ggcattaaca attttttaaa ctggtatcag cagaaaccag atggcactgt taaactcctg 120
atctattaca catcaagttt acactcagga gtcccatcaa ggttcagtgg cagtgggtct 180
gggacagatt attctctcac catcagcaac ctggaacctg aagatattgc catatactat 240
tgtcagcact ttagtaagct tccgtggacg ttcggtggag gcaccaagct ggaaatcaaa 300
cgggctgatg ctgcaccaac 320
<210> 79
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 79
agctatgcca tgtct 15
<210> 80
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 80
gaaattggta gtggtggtag ttacacctac tatccagaca ctgtgacggg c 51
<210> 81
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 81
gaaactacgg cgggctactt tgactac 27
<210> 82
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 82
tctgggggag gcttagtgag gcctggaggg tccctgaaac tctcctgtgc agcctctgga 60
ttcactttca gtagctatgc catgtcttgg gttcgccagt ctccagagaa gaggctggag 120
tgggtcgcag aaattggtag tggtggtagt tacacctact atccagacac tgtgacgggc 180
cgattcacca tctccagaga caatgccaag agcaccctgt acctggaaat gagcagtctg 240
aggtctgagg acacggccat ctattactgt gcaagggaaa ctacggcggg ctactttgac 300
tactggggcc aaggcaccac tctcacagtc tcctca 336
<210> 83
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 83
cgaacaagtg agaatatttt cagttattta gca 33
<210> 84
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 84
aatgcaaaaa ccttagcaga g 21
<210> 85
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 85
caacatcatt atgcttttcc gtggacg 27
<210> 86
<211> 320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 86
ccagcctccc tatctgcatc tgtgggagaa actgtcacca tcacatgtcg aacaagtgag 60
aatattttca gttatttagc atggtatcag cagaaacagg gaatatctcc tcagctcctg 120
gtctataatg caaaaacctt agcagagggt gtgccatcaa ggttcagtgg cagtggatca 180
ggcacacagt tttctctgaa gatcaacagc ctgcagcctg aagattttgg gagttattac 240
tgtcaacatc attatgcttt tccgtggacg ttcggtggag gctccaagct ggaaatcaaa 300
cgggctgatg ctgcaccaac 320
<210> 87
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 87
ggctacttta tgaac 15
<210> 88
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 88
cgtatttttc cttacaatgg tgatactttc tacaaccaga agttcaaggg c 51
<210> 89
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成寡核苷酸"
<400> 89
gggactcatt actttgacta c 21
<210> 90
<211> 386
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注="人工序列的说明：合成多核苷酸"
<400> 90
ggacctgagc tggtgaagcc tggggcttca gtgaagatat cctgcaaggc ttctgattac 60
tcttttactg gctactttat gaactgggtg atgcagagcc atggaaagag ccttgagtgg 120
attggacgta tttttcctta caatggtgat actttctaca accagaagtt caagggcagg 180
gccacattga ctgtagacaa atcctctagc acagcccaca tggagctccg gagcctggca 240
tctgaggact ctgcagtcta tttttgtgca agagggactc attactttga ctactggggc 300
caaggcacca ctctcactgt ctcctcagcc aaaacgacac ccccatctgt ctatccactg 360
gcccctggat ctgctgccca aactaa 386

Claims (25)

1.评价受试者是否患有表达FRα的癌症的方法，所述方法包括
确定在源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且
将所述不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中源自所述受试者的样品中FRα水平与所述对照样品中FRα水平之间的差异是所述受试者患有表达FRα的癌症的指示；
其中通过将所述样品与结合FRα的抗体接触来评价源自所述受试者的样品中不与细胞结合的FRα水平。
2.权利要求1的方法，其中所述样品选自尿、血清、血浆或腹水。
3.权利要求1的方法，其中所述表达FRα的癌症选自肺癌、间皮瘤、卵巢癌、肾癌、脑癌、子宫颈癌、鼻咽癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、垂体癌、结肠直肠癌和骨髓甲状腺癌。
4.权利要求1的方法，其中所述表达FRα的癌症是卵巢癌。
5.权利要求3的方法，其中所述表达FRα的癌症是肺癌。
6.权利要求5的方法，其中所述表达FRα的癌症是非小细胞肺癌。
7.权利要求6的方法，其中所述非小细胞肺癌是腺癌。
8.权利要求1的方法，其中FRα在所述样品中存在的浓度高于约9500 pg/mL、约10,000pg/mL、约11,000 pg/mL、约12,000 pg/mL、约13,000 pg/mL、约14,000 pg/mL、约15,000pg/mL、约16,000 pg/mL、约17,000 pg/mL、约18,000 pg/mL、约19,000 pg/mL、或约20,000pg/mL是所述受试者患有卵巢癌的指示。
9.权利要求1的方法，其中通过将所述样品与选自下列的抗体接触来确定所述FRα水平：
(a) 与MORAb-003抗体结合相同表位的抗体；
(b) 包含SEQ ID NO:1 (GFTFSGYGLS)作为CDRH1、SEQ ID NO:2 (MISSGGSYTYYADSVKG)作为CDRH2、SEQ ID NO:3 (HGDDPAWFAY)作为CDRH3、SEQ ID NO:4 (SVSSSISSNNLH)作为CDRL1、SEQ ID NO:5 (GTSNLAS)作为CDRL2和SEQ ID NO:6 (QQWSSYPYMYT)作为CDRL3的抗体；
(c) MOV18抗体；
(d) 与MOV18抗体结合相同表位的抗体；
(e) 548908抗体；
(f) 与548908抗体结合相同表位的抗体；
(g) 6D398抗体；
(h) 与6D398抗体结合相同表位的抗体；
(i) 与26B3抗体结合相同表位的抗体；
(j) 包含SEQ ID NO:55 (GYFMN)作为CDRH1、SEQ ID NO:56 (RIFPYNGDTFYNQKFKG)作为CDRH2、SEQ ID NO:57 (GTHYFDY)作为CDRH3、SEQ ID NO:51 (RTSENIFSYLA)作为CDRL1、SEQ ID NO:52 (NAKTLAE)作为CDRL2和SEQ ID NO:53 (QHHYAFPWT)作为CDRL3的抗体；
(k) 26B3抗体；
(l) 与19D4抗体结合相同表位的抗体；
(m) 包含SEQ ID NO:39 (HPYMH)作为CDRH1、SEQ ID NO:40 (RIDPANGNTKYDPKFQG)作为CDRH2、SEQ ID NO:41 (EEVADYTMDY)作为CDRH3、SEQ ID NO:35 (RASESVDTYGNNFIH)作为CDRL1、SEQ ID NO:36 (LASNLES)作为CDRL2和SEQ ID NO:37 (QQNNGDPWT)作为CDRL3的抗体；
(n) 19D4抗体；
(o) 与9F3抗体结合相同表位的抗体；
(p) 包含SEQ ID NO:31 (SGYYWN)作为CDRH1、SEQ ID NO:32 (YIKSDGSNNYNPSLKN)作为CDRH2、SEQ ID NO:33 (EWKAMDY)作为CDRH3、SEQ ID NO:27 (RASSTVSYSYLH)作为CDRL1、SEQ ID NO:28 (GTSNLAS)作为CDRL2和SEQ ID NO:29 (QQYSGYPLT)作为CDRL3的抗体；
(q) 9F3抗体；
(r) 与24F12抗体结合相同表位的抗体；
(s) 包含SEQ ID NO:47 (SYAMS)作为CDRH1、SEQ ID NO:48 (EIGSGGSYTYYPDTVTG)作为CDRH2、SEQ ID NO:49 (ETTAGYFDY)作为CDRH3、SEQ ID NO:43 (SASQGINNFLN)作为CDRL1、SEQ ID NO:44 (YTSSLHS)作为CDRL2和SEQ ID NO:45 (QHFSKLPWT)作为CDRL3的抗体；
(t) 24F12抗体；
(u) 包含可变区轻链的抗体，所述可变区轻链选自LK26HuVK (SEQ ID NO:13)；LK26HuVKY (SEQ ID NO:14)；LK26HuVKPW (SEQ ID NO:15)；和 LK26HuVKPW,Y (SEQ IDNO:16)；
(v) 包含可变区重链的抗体，所述可变区重链选自LK26HuVH (SEQ ID NO:17)；LK26HuVH FAIS,N (SEQ ID NO:18)；LK26HuVH SLF (SEQ ID NO:19)；LK26HuVH I,I (SEQID NO:20)；和LK26KOLHuVH (SEQ ID NO:21)；
(w) 包含重链可变区LK26KOLHuVH (SEQ ID NO:21)和轻链可变区LK26HuVKPW,Y (SEQID NO:16)的抗体；
(x) 包含重链可变区LK26HuVH SLF (SEQ ID NO:19) 和轻链可变区 LK26HuVKPW,Y(SEQ ID NO:16)的抗体；和
(y) 包含重链可变区LK26HuVH FAIS,N (SEQ ID NO:18) 和轻链可变区 LK26HuVKPW,Y (SEQ ID NO:16)的抗体。
10.权利要求1的方法，其中所述抗体选自鼠抗体、人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、Fab、Fab’2、ScFv、SMIP、亲和抗体、avimer、versabody、纳米抗体和结构域抗体。
11.权利要求1的方法，其中所述抗体是标记的。
12.权利要求11的方法，其中所述抗体是用标记进行标记的，所述标记选自放射标记、生物素标记、发色团标记、荧光团标记、ECL标记和酶标记。
13.权利要求1的方法，其中所述FRα水平通过使用下列技术确定，所述技术选自western印迹分析、放射免疫测定、免疫荧光定量、免疫沉淀、平衡透析、免疫扩散、溶液相测定、电化学发光免疫测定(ECLIA)和ELISA测定。
14.权利要求1的方法，其中所述对照样品包含在健康受试者中FRα的标准化对照水平。
15.权利要求1的方法，其中在测定所述样品中的FRα水平之前用胍处理所述样品。
16.权利要求1的方法，其中在测定所述样品中的FRα水平之前稀释所述样品。
17.权利要求1的方法，其中在测定所述样品中的FRα水平之前，离心、涡旋或离心和涡旋所述样品。
18.权利要求1的方法，其中通过将所述样品与选自下列的抗体对接触来评价源自所述受试者的样品中的FRα水平
(a) 固定到固体载体的MOV18抗体和标记的MORAB-003抗体；
(b) 固定到固体载体的9F3抗体和标记的24F12抗体；
(c) 固定到固体载体的26B3抗体和标记的19D4 抗体；和
(d) 固定到固体载体的9F3抗体和标记的26B3抗体。
19.评价在患有表达FRα的癌症的受试者中表达FRα的癌症的进展的方法，所述方法包括
确定在源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且
将所述不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与所述对照样品中的FRα水平相比，源自所述受试者的样品中的FRα水平的增加是所述癌症将迅速进展的指示；并且其中与所述对照样品中的FRα水平相比，源自所述受试者的样品中的FRα水平的降低是癌症将缓慢进展或将退化的指示，从而评价在所述受试者中所述表达FRα的癌症的进展；
其中通过将所述样品与结合FRα的抗体接触来评价源自所述受试者的样品中所述不与细胞结合的FRα水平。
20.将患有表达FRα的癌症的受试者分层为至少四个癌症治疗组之一的方法，其包括：
确定在源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且
基于所述不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，将所述受试者分层为至少四个癌症治疗组之一；
其中通过将所述样品与结合FRα的抗体接触来评价源自所述受试者的样品中所述不与细胞结合的FRα水平。
21.权利要求20的方法，其中所述表达FRα的癌症是卵巢癌并且所述受试者被分层在 I期、II期、III期或IV期卵巢癌中。
22.在患有卵巢癌或肺癌的受试者中监测卵巢癌或肺癌的MORAb-003治疗的效力的方法，所述方法包括
确定在源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，其中所述受试者以前已经施用过MORAb-003；并且
将所述源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中与所述对照样品中的FRα水平相比，所述源自所述受试者的样品中FRα水平的增加是所述MORAb-003治疗无效的指示；并且其中与所述对照样品中的FRα水平相比，源自所述受试者的样品中FRα水平的降低是所述MORAb-003治疗有效的指示。
23.预测患有卵巢癌或肺癌的受试者是否将对MORAb-003治疗响应的方法，所述方法包括
确定在源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平；并且
将所述源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中所述源自所述受试者的样品中的FRα水平与所述对照样品中的FRα水平之间的差异是所述受试者将对MORAb-003治疗响应的指示。
24.治疗患有卵巢癌或肺癌的受试者的方法，所述方法包括
确定在源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平，其中所述样品包括尿或血清；并且
将所述不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平与对照样品中FRα的水平相比较，其中所述源自所述受试者的样品中的FRα水平与所述对照样品中的FRα水平之间的差异是所述受试者患有卵巢癌或肺癌的指示；并且
将治疗有效量的MORAb-003施用于所述受试者，从而治疗所述患有卵巢癌或肺癌的受试者。
25.用于评价受试者是否患有表达FRα的癌症或用于评价受试者中表达FRα的癌症的进展的试剂盒，所述试剂盒包含
用于确定源自所述受试者的样品中不与细胞结合的叶酸受体α(FRα)的水平的工具；和
用于使用所述试剂盒以评价所述受试者是否患有表达FRα的癌症或评价表达FRα的癌症的进展的说明书。
CN201710961050.XA 2010-11-05 2011-11-04 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记 Pending CN108562744A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41049710P 2010-11-05 2010-11-05
US61/410497 2010-11-05
US201161508444P 2011-07-15 2011-07-15
US61/508444 2011-07-15
CN201180064293.4A CN103687618A (zh) 2010-11-05 2011-11-04 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201180064293.4A Division CN103687618A (zh) 2010-11-05 2011-11-04 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108562744A true CN108562744A (zh) 2018-09-21

Family

ID=45003076

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710961050.XA Pending CN108562744A (zh) 2010-11-05 2011-11-04 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记
CN201180064293.4A Pending CN103687618A (zh) 2010-11-05 2011-11-04 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201180064293.4A Pending CN103687618A (zh) 2010-11-05 2011-11-04 叶酸受体α作为用于表达叶酸受体α的癌症的诊断和预后标记

Country Status (14)

Country Link
US (1) US20120207771A1 (zh)
EP (2) EP2635304B1 (zh)
JP (2) JP6224456B2 (zh)
KR (2) KR102057438B1 (zh)
CN (2) CN108562744A (zh)
AU (3) AU2011323124C1 (zh)
BR (1) BR112013011072B1 (zh)
CA (1) CA2816991C (zh)
ES (2) ES2627061T3 (zh)
IL (2) IL225871B (zh)
MX (2) MX343607B (zh)
RU (2) RU2764592C2 (zh)
SG (3) SG10201701933XA (zh)
WO (1) WO2012061759A2 (zh)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009521206A (ja) * 2005-04-22 2009-06-04 モルフォテック、インク． 免疫エフェクター活性を有する葉酸受容体アルファ陽性細胞に内部移行する抗体
MY171234A (en) 2010-02-24 2019-10-04 Immunogen Inc Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof
US20120189620A1 (en) * 2011-01-21 2012-07-26 Emory University Methods for treating non-functioning pituitary adenoma
JP2014508165A (ja) * 2011-03-02 2014-04-03 モルフォテック、インク． 乳癌の治療のためのエリブリンおよびファーレツズマブの共投与
IL303208A (en) * 2011-04-01 2023-07-01 Immunogen Inc Methods for increasing the effectiveness of FOLR1 cancer therapy
CA2841725C (en) 2011-07-15 2021-03-09 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-folate receptor alpha antibodies and uses thereof
US9512223B2 (en) 2012-05-15 2016-12-06 Morphotek, Inc. Methods for treatment of gastric cancer
NZ726258A (en) * 2012-08-31 2019-07-26 Immunogen Inc Antibodies and uses thereof to detect folate receptor 1
AU2014284212B2 (en) * 2013-06-20 2019-09-12 Eisai, Inc. Methods for treatment of ovarian cancer
KR20230145514A (ko) 2013-08-30 2023-10-17 이뮤노젠 아이엔씨 엽산 수용체 1의 검출을 위한 항체 및 분석
NZ757964A (en) * 2013-10-08 2022-07-01 Immunogen Inc Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens
EP4141032B1 (en) 2014-11-20 2024-05-29 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of t cell activating bispecific antigen binding molecules and pd-1 axis binding antagonists
MX2017013390A (es) 2015-04-17 2018-06-13 Morphotek Inc Método para el tratamiento de cáncer pulmonar.
RU2749865C2 (ru) 2015-09-17 2021-06-17 Иммьюноджен, Инк. Терапевтические комбинации, содержащие анти-folr1 иммуноконъюгаты
JP7227123B2 (ja) 2016-08-12 2023-02-21 エル．イー．エー．エフ． ホールディングス グループ エルエルシー αおよびγ－Ｄポリグルタミン酸化抗葉酸剤およびその使用
EP3544999A1 (en) * 2016-11-23 2019-10-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-folate receptor alpha antibodies and uses thereof
CN107353325B (zh) * 2017-07-26 2020-08-11 中国药科大学 叶酸受体α特异性结合肽1及其应用
CN107446021B (zh) * 2017-07-26 2020-08-11 中国药科大学 叶酸受体α特异性结合肽5及其应用
CN107446020B (zh) * 2017-07-28 2019-10-01 中国药科大学 叶酸受体α特异性结合肽2及其应用
AU2018328187A1 (en) * 2017-09-05 2020-03-26 Immunogen, Inc. Methods for detection of folate receptor 1 in a patient sample
CN111954531A (zh) 2018-02-07 2020-11-17 L.E.A.F.控股集团公司 α聚谷氨酸化培美曲塞及其用途
EP3749316A4 (en) 2018-02-07 2021-10-27 L.E.A.F Holdings Group LLC PRALATREXATE ALPHA-POLYGLUTAMATE AND ASSOCIATED USES
US11771700B2 (en) 2018-02-14 2023-10-03 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated lometrexol and uses thereof
JP7433236B2 (ja) 2018-03-13 2024-02-19 フェインズ セラピューティクス，インコーポレーテッド 抗葉酸受容体１抗体及びその使用
WO2020180424A1 (en) 2019-03-04 2020-09-10 Iocurrents, Inc. Data compression and communication using machine learning
JP2022530524A (ja) 2019-04-29 2022-06-29 イミュノジェン， インコーポレイテッド バイパラトピックＦＲ－α抗体及びイムノコンジュゲート
AU2022284860A1 (en) * 2021-06-04 2023-12-14 Immunogen, Inc. Treatment of cancer in patients with soluble fr-alpha
CN117700557B (zh) * 2024-02-05 2024-04-30 卡秋(江苏)生物科技有限公司 一种特异性结合叶酸受体α的抗体或抗原结合片段

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100272741A1 (en) * 2006-06-01 2010-10-28 Knutson Keith L Immunity to folate receptors

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5646253A (en) 1994-03-08 1997-07-08 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Recombinant human anti-LK26 antibodies
PT1498427E (pt) 1992-08-21 2010-03-22 Univ Bruxelles Imunoglobulinas desprovidas de cadeias leves
US5605798A (en) 1993-01-07 1997-02-25 Sequenom, Inc. DNA diagnostic based on mass spectrometry
WO1994016101A2 (en) 1993-01-07 1994-07-21 Koester Hubert Dna sequencing by mass spectrometry
ATE220114T1 (de) 1993-03-19 2002-07-15 Sequenom Inc Dns-sequenzbestimmung durch massenspektrometrie auf dem weg des abbaus mit exonuklease
US6261804B1 (en) 1997-01-21 2001-07-17 The General Hospital Corporation Selection of proteins using RNA-protein fusions
KR100566859B1 (ko) 1997-01-21 2006-04-03 제너럴 하스피톨 코포레이션 Ｒｎａ-단백질 융합물을 이용한 단백질의 선별
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US6933108B2 (en) * 1999-12-09 2005-08-23 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for use in the treatment of filovirus mediated disease conditions
JP2004512540A (ja) * 2000-11-01 2004-04-22 マウント・サイナイ・ホスピタル 卵巣癌の検出
US20100120078A1 (en) * 2001-08-16 2010-05-13 Tony Baker Urine Stabilization System
JP4481646B2 (ja) * 2001-11-13 2010-06-16 アイディー バイオメディカル コーポレーション 緑膿菌のポリペプチド
AU2003253589A1 (en) * 2002-03-26 2003-11-10 Centocor, Inc. Epitope mapping using nuclear magnetic resonance
US20080131366A1 (en) * 2003-03-17 2008-06-05 Manohar Ratnam Folate Receptor Gene Modulation For Cancer Diagnosis And Therapy
US20040235108A1 (en) 2003-05-23 2004-11-25 Luigi Grasso Monoclonal antibodies that specifically bind a tumor antigen
WO2005047534A2 (en) * 2003-10-28 2005-05-26 Bayer Healthcare Ag Methods and compositions for the response prediction of malig-nant neoplasia to treatment
EP2316857A1 (en) 2004-02-12 2011-05-04 Morphotek, Inc. Monoclonal antibodies that specifically bind to folate receptor alpha
CA2602585A1 (en) * 2005-03-30 2006-10-05 Purdue Research Foundation Method for cancer prognosis using cellular folate vitamin receptor quantification
JP2009521206A (ja) * 2005-04-22 2009-06-04 モルフォテック、インク． 免疫エフェクター活性を有する葉酸受容体アルファ陽性細胞に内部移行する抗体
NZ570008A (en) * 2006-02-09 2011-10-28 Univ South Florida Detection of ovarian cancer by elevated levels of Bcl-2 in urine
EP1900752A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-19 DOMPE' pha.r.ma s.p.a. Human anti-folate receptor alpha antibodies and antibody fragments for the radioimmunotherapy of ovarian carcinoma
US7754698B2 (en) 2007-01-09 2010-07-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of FR-alpha expression
EP2225364A4 (en) * 2007-10-19 2011-02-16 Cell Signaling Technology Inc CLASSIFICATION OF CANCER AND METHODS OF USE
WO2009132081A2 (en) 2008-04-24 2009-10-29 The Research Foundation Of State University Of New York Monoclonal antibody-based targeting of folate receptors
US20110177525A1 (en) * 2010-01-19 2011-07-21 Predictive Biosciences, Inc. Antibodies and methods of diagnosing diseases
CA2808417A1 (en) * 2010-08-18 2012-02-23 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Circulating biomarkers for disease

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100272741A1 (en) * 2006-06-01 2010-10-28 Knutson Keith L Immunity to folate receptors

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIMBERLY R.等: "MORAb-003,a fully humanized monoclonal antibody againse the folate receptor alpha ,for the ptotential treatment of epithelial ovarian cancer", 《CURRENT OPINION IN INVESTIGATIONAL DRUGS》 *
L.T. MANTOVANI等: "Folate binding protein distribution in normal tissues and biological fluids from ovarian carcinoma patients as detected by the monoclonal antibodies MOv18 and MOv19", 《EUROPEAN JOURNAL OF CANCER》 *

Also Published As

Publication number Publication date
MX343607B (es) 2016-11-11
AU2016203408A1 (en) 2016-06-16
RU2013125772A (ru) 2014-12-10
KR101931936B1 (ko) 2018-12-26
JP6224456B2 (ja) 2017-11-01
EP2635304A2 (en) 2013-09-11
JP2018036270A (ja) 2018-03-08
US20120207771A1 (en) 2012-08-16
EP3130605A1 (en) 2017-02-15
EP2635304B1 (en) 2017-03-08
AU2011323124A1 (en) 2013-05-09
JP6554152B2 (ja) 2019-07-31
IL260590B (en) 2020-01-30
ES2627061T3 (es) 2017-07-26
JP2013544354A (ja) 2013-12-12
RU2630608C2 (ru) 2017-09-11
SG10201701933XA (en) 2017-05-30
BR112013011072A2 (pt) 2017-06-20
EP3130605B1 (en) 2020-01-08
AU2011323124B2 (en) 2016-02-25
WO2012061759A2 (en) 2012-05-10
KR102057438B1 (ko) 2019-12-20
SG189957A1 (en) 2013-06-28
KR20140024838A (ko) 2014-03-03
AU2018201760B2 (en) 2019-07-25
CA2816991C (en) 2020-06-09
MX2013005067A (es) 2013-07-02
RU2017129266A3 (zh) 2021-01-25
IL225871B (en) 2018-08-30
ES2780192T3 (es) 2020-08-24
RU2764592C2 (ru) 2022-01-18
CN103687618A (zh) 2014-03-26
RU2017129266A (ru) 2019-02-04
BR112013011072B1 (pt) 2021-02-02
MX368394B (es) 2019-10-01
SG10201509145XA (en) 2015-12-30
AU2011323124C1 (en) 2016-09-22
IL225871A0 (en) 2013-06-27
WO2012061759A3 (en) 2012-07-26
KR20180137587A (ko) 2018-12-27
AU2018201760A1 (en) 2018-04-05
CA2816991A1 (en) 2012-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018201760B2 (en) Folate Receptor Alpha as a Diagnostic and Prognostic Marker for Folate Receptor Alpha-Expressing Cancers
JP4806469B2 (ja) ホルマリン固定およびパラフィン包埋された組織においてＭｅｔを結合するモノクローナル抗体および関連する方法
CN107011439A (zh) 抗叶酸受体α抗体及其应用
CN101088012A (zh) Asc作为结肠直肠癌的标记的用途
US20100227343A1 (en) Glycodelin monoclonal antibodies and methods for their use in the detection of ovarian cancer
JP7043548B2 (ja) 乳癌検出のための試薬および方法
KR20050114604A (ko) 대장암에 대한 마커로서의 니코틴아미드ｎ―메틸트랜스퍼라아제의 용도
US20220119490A1 (en) Modulators of cell surface protein interactions and methods and compositions related to same
CN108138238A (zh) 用于检测胰腺癌的组合物和方法
CN111303289B (zh) 抗人Tn型糖基化MUC1抗体及其用途
KR102128251B1 (ko) 아르기닌이 메틸화된 drd2에 특이적으로 결합하는 대장암 진단용 바이오마커 조성물
KR102131860B1 (ko) 아르기닌이 메틸화된 ggt1에 특이적으로 결합하는 대장암 진단용 바이오마커 조성물
KR20110091476A (ko) 항―ｔｍａｐ／ｃｋａｐ２ 항체를 포함하는 암의 예후 진단용 조성물
WO2012065071A2 (en) Methods of predicting response to egfr antibody therapy

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180921