JP4806469B2 - ホルマリン固定およびパラフィン包埋された組織においてMetを結合するモノクローナル抗体および関連する方法 - Google Patents
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Description
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
(項目1)
American Type Culture Collectionに受け入れ番号PTA−7680で寄託されたハイブリドーマ細胞株により生成されたモノクローナル抗体または該抗体のフラグメントもしくは誘導体。
(項目2)
American Type Culture Collectionに受け入れ番号PTA−7680で寄託されたハイブリドーマ細胞株により生成されたモノクローナル抗体である第2抗体とMetに対する結合に関して競合する抗体または該抗体のフラグメントもしくは誘導体。
(項目3)
項目1に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体の同定的な生物学的特徴を全て有するモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体。
(項目4)
Metに特異的なモノクローナル抗体であって、該抗体の重鎖および/もしくは軽鎖可変領域または該可変領域の抗原結合部位が項目1に記載のモノクローナル抗体の対応する領域または部位の同定的な生物学的または構造的特徴を全て有する、モノクローナル抗体。
(項目5)
項目1に記載のモノクローナル抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する抗Met抗体Metまたは該抗体のフラグメントもしくは誘導体。
(項目6)
配列番号:1でアミノ酸236−242として同定されたアミノ酸からなるポリペプチドに結合する抗体または該抗体のフラグメントもしくは誘導体。
(項目7)
配列番号:1でアミノ酸236−239として同定されたアミノ酸からなるポリペプチドに結合する抗体または該抗体のフラグメントもしくは誘導体。
(項目8)
項目1〜7から選択されるモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体を含む組成物。
(項目9)
モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が検出可能な部分に連結されている項目8に記載の組成物。
(項目10)
(a)項目8に記載の組成物;および(b)担体;を含む診断的に有用な組成物。
(項目11)
モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が検出可能な部分に連結されている項目10に記載の組成物。
(項目12)
(a)項目1に記載の抗体、フラグメントまたは誘導体を含む第1容器;(b)担体を含む第2容器;および(c)Metを検出、診断、予後診断またはMet阻害薬を評価するために抗体を使用するための説明書;を含むキット。
(項目13)
前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が検出可能な部分に連結されている項目12に記載のキット。
(項目14)
前記第1容器からのモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体に結合する第2のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体をさらに含む項目12に記載のキット。
(項目15)
前記第2抗体が検出可能な部分に連結されている項目14に記載のキット。
(項目16)
さらにMet阻害薬を含む項目12に記載のキット。
(項目17)
(a)Metを発現することが疑われる組織または試料を提供すること;(b)項目8に記載の組成物を提供すること;(c)該組織または試料を項目8に記載の組成物と接触させること;および(d)該組織または試料中のMetの存在を検出すること;の工程を含むMetを発現することが疑われる組織または生物学的試料中のMetの存在を検出するための方法。
(項目18)
前記組織または生物学的試料がホルムアルデヒドの溶液中で固定されている項目17に記載の方法。
(項目19)
(a)Met関連疾患を有するかまたは有することが疑われる患者から組織または生物学的試料を入手すること;(b)項目8に記載の組成物を提供すること;(c)該組織または生物学的試料を項目8に記載の組成物と接触させること;(d)該組織または試料中のMetの発現レベルを決定すること;および(e)該発現レベルを適当な対照と比較すること;の工程を含む、該患者におけるMet関連疾患を診断または予後診断する方法。
(項目20)
前記組織または生物学的試料がホルムアルデヒドの溶液中で固定されている項目19に記載の方法。
(項目21)
前記Met関連疾患が癌である項目19に記載の方法。
(項目22)
前記Met関連疾患が卵巣癌である項目21に記載の方法。
(項目23)
(a)Met関連の癌を有する患者から第1組織試料を入手すること;(b)Met阻害薬で患者を処置すること;(c)該患者から処置後組織を入手すること;(d)項目8に記載の組成物を提供すること;(e)該第1組織または生物学的試料および該処置後組織または試料の各々を項目8に記載の組成物と接触させること;(f)該第1組織または生物学的試料および該処置後組織または試料の各々におけるMetの発現レベルを決定すること;ならびに(g)該第1組織または生物学的試料のMet発現レベルを該処置後組織または試料のMet発現レベルと比較して該Met阻害薬の有効性を決定すること;の工程を含む、Met阻害薬の有効性を決定するための方法。
(項目24)
前記第1組織または生物学的試料および前記処置後組織または試料の各々がホルムアルデヒドの溶液中で固定されている項目23に記載の方法。
(項目25)
American Type Culture Collectionに受け入れ番号PTA−7680で寄託されたハイブリドーマ細胞株。
(項目26)
ホルムアルデヒド溶液で処理されている抗原に結合する抗体を同定する方法であって、抗原を提供すること;該抗原をホルムアルデヒド溶液で処理すること;該処理された抗原を抗体、そのフラグメントまたは誘導体と接触させること;および該抗体を試験して該抗体が該処理された抗原に結合するかどうかを決定すること;の工程を含む、方法。
(項目27)
前記ホルムアルデヒド溶液がホルマリンである項目26に記載の方法。
本発明の好ましい実施態様は以下の具体的な実施態様の詳細な記載ならびに本明細書後記に含まれる実施例および配列表を参照することによりさらに容易に理解され得る。
a Solid Phase」(第11章)、STRUCTURE OF ANTIGENS 1巻(Van Regenmortel,M.、CRC Press、ボッカラートン(1992)、209−259頁;Butler,J.E.、「ELISA」(第29章)、van Oss,C.J.ら(編)、IMMUNOCHEMISTRY、Marcel Dekker,Inc.、ニューヨーク(1994)759−803頁、Butler,J.E.(編)、IMMUNOCHEMISTRY OF SOLID−PHASE IMMUNOASSAY、CRC Press、ボッカラートン(1991);Voller,A.ら、Bull.WHO 53:55−65(1976);Voller,A.ら、J.Clin.Pathol.31:507−520(1978);Butler,J.E.、Meth.Enzymol.73:482−523(1981);Maggio,E.(編)、Enzyme Immunoassay、CRC Press、ボッカラートン(1980)、Ishikawa,E.ら(編)、Enzyme Immunoassay、Kagaku Shoin、東京(1981);においてさらに詳記される。今度は、後にその基質に暴露されるときにこの酵素は例えば分光光度分析、蛍光分析により、または視覚的手段により検出できる化学的部分を生成するためのような様式で基質と反応する。この目的のために一般的に使用される酵素には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、グルコース−6−リン酸デヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、Δ−V−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが含まれる。
実施例1−5に関する材料および方法
モノクローナル抗体作成および検証:
Van Andel InstituteのDr.Eric Xuの研究室で組換えタンパク質Met25−567Hを調製した。Met25−567H構築物(配列番号:1、25−567位置のアミノ酸)および精製Met928タンパク質はCambridge Antibody TechnologyのDr.Ermanno Gheradiの研究室からのものである41。組換え融合タンパク質Met−IgGをR&D systems(ミネアポリス、ミネソタ州)から購入した。
で1.5時間添加した(30 μl/ウェル)。洗浄バッファー中で2回洗浄した後、細胞を蛍光顕微鏡下で試験した。5個のクローンを陽性と見出し、そして取り、そして増殖させた。これらの5個のクローンに以前の融合からの3個のクローンを加えたものの上澄を、ホルマリン固定正常ヒト前立腺組織切片で、免疫組織化学により検証した。クローン8G6(Met4と称される)が最も強いシグナルを生じ、2回サブクローニングを行い、そして3つの組換えMetタンパク質に対するELISAにより検証された。バイオリアクターを使用してモノクローナル抗体を生成し、そしてプロテインGアフィニティーカラムを使用してFPLCにより精製した。
細胞ペレット:NIH3T3、S114(HGF/SFおよびMetに関するヒト遺伝子でトランスフェクトされたNIH3T3細胞)23、SK−LMS−1/HGF(ヒトMetおよびヒトHGF/SFに関するヒト平滑筋肉腫細胞系オートクリン)24、SW−1783、U118、U87、U373、DBTRG(ヒト脳神経膠芽腫)、MCF−7(乳癌)、ES−2、CaOV3、OV−90、SKOV3、TOV−112DおよびTOV−21G(卵巣腺癌)細胞をATCCから入手し、そしてその培地規格に従って培養した。1847、2780、OVCAR10、OVCAR5、OVCAR3、PEO−1細胞系(卵巣腺癌)をPacific Ovarian Cancer Research Consortium(シアトル、ワシントン州)から入手した。2008をDr.George Coucos(ペンシルバニア大学)から入手した。細胞層を10%中性緩衝ホルマリン中で固定し、削り取り、そしてHistoGel(Richard−Allan Scientific)に包埋した。HistoGelペレットを大きな患者組織に関するものと同じ設定を用いて加工し、そしてパラフィンに包埋した。
サブコンフルエントの細胞を記載されるようなプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤(Roche)バッファーを補充したRIPA中で溶解した43。Bradfordアッセイを使用して細胞系からのタンパク質ライゼートを測定した。同じ日に0から12 μg/mlの範囲にわたるBSA標準を使用して試料を測定した。試料1−2 mlが標準曲線の直線範囲内に測定値を提供するように試料を希釈した。試料(50mg)を4−15%グラジエントSDS−PAGE上で分離し、そしてImmobilon(商標)−P PVDF(Millipore、ビルリカ、マサチューセッツ州)またはニトロセルロース転写膜(Bio−Rad、ハーキュリーズ、カリフォルニア州)に移した。ホルマリン固定ウェスタンブロットのための膜を2%中性緩衝ホルマリンZ−fix(Anatech Ltd.、バトルクリーク、ミシガン州)中で20分間固定し、そしてPBS中で洗浄した。Black and Decker野菜用スチーマー中標的回復溶液(pH9)で20分間抗原回復を実施した。膜を5%乳遮断バッファーで室温で遮断し、そして5%BSA中1:250希釈でウサギ抗ヒトMetポリクローナル抗体C−28と共に室温で1.5時間、または1:1000希釈で一晩インキュベートした;これに代えて、Met4を1:1000で一晩、およびZymedマウス抗cMetクローン:3D4を1:500で使用した。ロバ抗ウサギIgG−HRP(Amersham)を1:5000で使用するか、またはAlexaFluor680ヤギ抗マウスIgG(Molecular Probes)を1:10000で使用した。化学発光試薬(Pierce)またはOdyssey(登録商標)赤外線撮像システム(LI−COR Biosciences、リンカーン、ネブラスカ州)によりタンパク質バンドを検出した。700 nmチャンネルを用いて5.0の強度でOdyssey(登録商標)赤外線撮像システムで画像をスキャンした。ImageQuant TLソフトウェアで1Dゲル分析を用いてMet特異的バンドのシグナル強度を測定した。「ローリングボール」手段を用いてバックグラウンドを減じた。
CRI Nuanceカメラシステム(www.cri−inc.com)を使用してMet4で染色した細胞ペレットのスライドをスペクトル的に撮像した。各スライドから6−10個の画像を収集した。420nmと720nmの間で20nm増で発光を測定した。得られた画像キューブを光学密度単位に変換し、そして対照標本から推定されるスペクトルを使用して、数学的に分解された(unmixed)その個々のDABおよびヘマトキシリン構成要素にし、そしてスペクトルライブラリーに保存した。DAB染色は対比を増大させるための擬似カラーの赤であった。ヘマトキシリンは擬似カラーの青であり、そして定量のために画像を擬似蛍光様式に変換した。
Microsoft(著作権) Excelソフトウェアを使用してピアソンの相関係数を計算した。
ホルマリン固定組織におけるc−Metの定量のための抗c−Metモノクローナル抗体の開発
たいていのインビトロおよび免疫組織化学研究においてMet発現を測定するために使用されている、Santa Cruzからのポリクローナル抗体であるC−28の制約は、我々がホルマリン固定組織における分子撮像および免疫組織化学を含む臨床適用のための患者の癌におけるc−Metタンパク質発現の測定のためのモノクローナル抗体(mAb)を開発することの同義付けとなった。Met受容体の細胞外ドメインと反応するc−Met抗体は細胞表面上のc−Met発現の存在量を評価するための最も直接的な測定を提供するので、これを入手するために免疫原を設計した。得られたmAbはC−28のロット間変動性およびMet細胞質ドメインに結合する抗体で観察される核反応性を克服する。
ホルマリン固定細胞におけるc−Metとの反応性に関するMet4の特異性
Met4のMet受容体タンパク質との反応性を確認するために、ウェスタンブロットをMet4でプロービングした。組織におけるホルマリン固定の再現条件により、ウェスタンブロット膜を10%ホルマリンで処理し、そして組織切片に適用していたのと同じ型の抗原回復を行った。多量のc−Metを発現するIGROV1卵巣癌細胞において、Met4は変性Met受容体タンパク質と反応しなかった。ホルマリン固定または抗原回復バッファー中の膜の煮沸はc−Metに対するMet4結合を増大させ、そして140 kDaのc−Metバンドを表した(図2)。Met4は低分子量バンドと非特異的に反応し、そのうちのいくつかはMet受容体陰性A2780細胞系においても現れた。免疫蛍光およびウェスタンブロッティング結果により、Met4が変性に感受性があり、そしてホルマリン固定または抗原回復により再確立されるMet上の特異的エピトープに結合することが実証される。
Met4免疫組織化学測定の再現性
結果により、新規Met4抗体はFFPE細胞調製物においてc−Metと特異的に結合することが実証されるので、中間のレベルのc−Metを発現するTOV21D細胞における染色の再現性を試験した。アッセイ再現性は臨床試験のための抗体の開発において重要な因子である。同じ日の反復染色(アッセイ内変動性)および異なる3日間に染色したスライド(アッセイ間変動性)の間でMet4染色強度の一貫性をFFPE細胞ペレットにおいて分析した。加えて、Met4抗体の2つの別個のロットからの染色結果を比較した。ハイブリドーマ培養培地から別個に調製された精製抗体の2つのロットはs=0.75の相関係数を表した。アッセイ内およびアッセイ間変動性は生物学的および技術的(アッセイ)変動性の構成要素からなり、それをこの分析において分けることはできなかった。異なる日の細胞ペレットにおいてTOV21D細胞間でMet4の染色強度に影響する有意な形態学的差異が観察された。結果的にアッセイ内変動性に関して%CVは39%であった。別個の3日間に実施したMet4アッセイの変動性(アッセイ間変動性)は%CV=21%であった。アッセイ間変動性を日変動性の代表値から計算し、そしてアッセイ内変動性よりも小さかった。
卵巣癌および神経膠腫におけるMet発現
保存(archival)FFPE組織におけるMet4の特異性を評価するために、卵巣癌組織の切片および神経膠腫のTMAを分析した。Met4は卵巣癌細胞、内皮細胞、卵巣間質および形質細胞における細胞の集団に関して高い染色特異性を保有する。核染色は観察されなかった(図5A)。卵巣癌の組織学的サブタイプには、漿液性、類内膜性および明細胞が含まれるが、粘液性癌は含まれず、そして全ての癌はFIGOステージIII−IVであった。29個全ての卵巣癌がMet4反応性を示した(表2)。
Met4のエピトープのマッピング
材料および方法
Met4をPBS中2.0 mg/mlの濃度で調製した。Ph.D.−12およびPh.D.−7ファージディスプレイペプチドライブラリーをNew England Biolabsファージディスプレイペプチドライブラリーキットから入手した。−96gIIIシークエンシングプライマーおよび宿主株E.coli ER2738もまたこのキットから入手した。その他の全ての溶液をSIGMAの化学物質を用いて調製した。
DNA配列分析をヒトMetタンパク質上の(配列番号:1の)アミノ酸残基236−242のエピトープDVLPEFR(表5参照)に、またはさらに具体的にはヒトMetタンパク質上の(配列番号:1の)アミノ酸残基236−239のエピトープDVLP(表5参照)にマッピングした。
RA4Eウサギ抗Met抗体はMet4のエピトープに結合する
ヒトMetアミノ酸残基233−246からのペプチドSYIDVLPEFRDSYP(ペプチド1)およびMetアミノ酸478−491からの別のペプチドNFLLDSHPVSPEVI(ペプチド2)をGenemed Synthesis,Inc.により合成した。ペプチド1をKLHタンパク質に抱合させた。Pacific Immunology CorpによりSYIDVLPEFRDSYP−KLHに対してウサギポリ血清(polysera)が作成された。ポリクローナル抗体(「RA4E」と称される)を、ペプチド1を抱合させたアフィニティーカラムを通して精製した。
ウサギ抗Met抗体RA4Eを競合ELISAにより特徴付けした。競合ELISAでは、96ウェルプレートを1 μg/mlのMet25−567タンパク質でコーティングした。Met4およびRA4Eを連続希釈のペプチド1およびペプチド2と混合し、そして混合物をMetコーティングプレート上で室温で1.5時間インキュベートした。洗浄後抗マウスまたは抗ウサギAP抱合体を1:2000希釈でプレートに添加した。展開させた後、ELISAリーダーにより405nmで光学密度値を測定した。ペプチド1は用量依存的な様式でMetタンパク質に対するMet4およびRA4E双方の結合を遮断したが(図10A−C)が、ペプチド2は結合に影響を及ぼさなかった。
ウサギ抗Met抗体RA4Eを免疫蛍光染色によりさらに特徴付けした。MKN45およびNIH3T3細胞を8チャンバースライドにおいて37℃で一晩同時培養した。次いで細胞をPBSで洗浄し、そして10%ホルマリンで固定した。固定細胞をMet4およびRA4E(各々8 μg/ml)と共に4℃で一晩インキュベートした。C28(20
μg/ml)を陽性対照として使用した。洗浄後、抗マウスローダミンレッドおよび抗ウサギFITC抱合体を細胞に添加し、そしてスライドを室温(RT)で1.5時間インキュベートした。核をDAPIで染色した。Met4およびRA4EはMet発現MKN45細胞において共存することが見出されたが、Met陰性NIH3T3細胞においては見出されなかった(図11A−C)。RA4EはMet4に類似して10%ホルマリンで固定されたMet陽性MKN45細胞を染色したので、RA4EはMet4に類似する特性を有するはずである。すなわちこのデータにより、RA4EはMet4同様、免疫組織化学染色によるホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織切片に関する臨床診断に使用できることが示唆される。
(参考文献)
Claims (16)
- American Type Culture Collectionに受託番号PTA−7680で寄託されたハイブリドーマ細胞株により生成されたモノクローナル抗体であって、cMet肝細胞成長因子受容体(Met)に結合するモノクローナル抗体(Met−特異的mAb)、または該Met−特異的mAbの抗原結合フラグメント。
- 配列番号:1のアミノ酸236−239でcMet肝細胞成長因子受容体(Met)に結合する、単離されたMet−特異的モノクローナル抗体(mAb)、または該Met−特異的mAbの抗原結合フラグメント。
- (a)請求項1または2に記載のMet−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメント、および
(b)診断的に許容される担体または賦形剤
を含む組成物。 - 前記Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントは、検出可能な部分に連結されている、請求項3に記載の組成物。
- (a)請求項1または2に記載のMet−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントを含む第1容器;(b)該Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントのための担体を含む第2容器;および(c)該Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントを使用して、試料中のMetを検出または測定するため、あるいはMet−関連疾患を診断するための説明書;を含むキット。
- 前記Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントが検出可能な部分に連結されている、請求項5に記載のキット。
- 前記Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントに特異的であり、そして該Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントに結合する、第2抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに含む、請求項5に記載のキット。
- 前記第2抗体が検出可能な部分で標識される、請求項7に記載のキット。
- 対象由来の組織試料または別の生物学的試料中のMetの存在を検出するための方法であって、
(a)該試料を請求項3に記載の組成物と接触させる工程;および(b)該試料へのMet−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントの結合を検出する工程であって、該Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントの結合は、該試料中でのMetの存在を示す、工程
を含む、方法。 - 前記試料が、前記接触させる工程(a)の前に、ホルムアルデヒドを用いた処理により固定されている、請求項9に記載の方法。
- 対象における、増加したMet発現を有する癌の診断を補助する方法であって、
(a)該対象由来の、Metを発現することが疑われる組織試料または他の生物学的試料を、請求項3に記載の組成物と接触させる工程;
(b)Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントの該試料への結合を、検出または測定し、それによって該試料中のMetの存在またはレベルを判定する工程;ならびに
(c)(b)において判定されたMetのレベルを、変化したMet発現を有する疾患を有さない健常な対象由来の対応する対照試料におけるMetのレベルと比較する工程;
を含み、ここで
(i)該対照試料におけるMetの非存在と比較した、工程(b)において判定されたMetの存在、または
(ii)該対照試料におけるMetのレベルと比較した、工程(b)において判定されたMetの増加したレベル
は、増加したMet発現を有する癌の兆候を示す、方法。 - 前記試料が、前記接触させる工程(a)の前に、ホルムアルデヒドを用いた処理により固定されている、請求項11に記載の方法。
- American Type Culture Collectionに受託番号PTA−7680で寄託されたハイブリドーマ細胞株。
- 前記Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントが検出可能な部分に連結されている、請求項1または2に記載のMet−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメント。
- 前記Met−特異的mAbまたはその抗原結合フラグメントが検出可能な部分に連結されている、請求項9に記載の方法。
- 前記試料が、前記接触させる工程(a)の前に、ホルムアルデヒドを用いた処理により固定されている、請求項15に記載の方法。
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US20070248958A1 (en) * | 2004-09-15 | 2007-10-25 | Microchip Biotechnologies, Inc. | Microfluidic devices |
US7892770B2 (en) * | 2007-08-24 | 2011-02-22 | Van Andel Research Institute | Monoclonal antibody which binds cMet (HGFR) in formalin-fixed and paraffin-embedded tissues and related methods |
EP2287197A1 (en) * | 2009-08-21 | 2011-02-23 | Pierre Fabre Medicament | Anti-cMET antibody and its use for the detection and the diagnosis of cancer |
GB201004551D0 (en) | 2010-03-19 | 2010-05-05 | Immatics Biotechnologies Gmbh | NOvel immunotherapy against several tumors including gastrointestinal and gastric cancer |
AU2011261161A1 (en) | 2010-06-01 | 2013-01-10 | Ludwig Institute For Cancer Research Limited | Antibodies directed to the unprocessed receptor tyrosine kinase c-Met |
EP2402370A1 (en) | 2010-06-29 | 2012-01-04 | Pierre Fabre Médicament | Novel antibody for the diagnosis and/or prognosis of cancer |
AU2011325098B2 (en) | 2010-11-03 | 2016-07-14 | Argen-X N.V. | c-Met antibody combinations |
US20140348819A1 (en) | 2011-06-24 | 2014-11-27 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods of Treating Cancer |
JP2014530201A (ja) * | 2011-09-20 | 2014-11-17 | イーライ リリー アンド カンパニー | 抗c−Met抗体 |
US9926364B2 (en) | 2011-11-03 | 2018-03-27 | Argen-X N.V. | Chimeric human-llama antigens and methods of use |
WO2013096868A2 (en) | 2011-12-22 | 2013-06-27 | Children's Medical Center Corporation | Saposin-a derived peptides and uses thereof |
US9260531B2 (en) * | 2012-05-09 | 2016-02-16 | Eli Lilly And Company | Anti-c-met antibodies |
US9168300B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-10-27 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | MET-binding agents and uses thereof |
MX2016012285A (es) | 2014-03-24 | 2017-01-23 | Genentech Inc | Tratamiento de cáncer con antagonista de c-met y correlación de estos con la expresión de hgf. |
ES2748295T3 (es) | 2014-09-16 | 2020-03-16 | Symphogen As | Anticuerpos anti-MET y composiciones |
GB201521894D0 (en) | 2015-12-11 | 2016-01-27 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against various cancers |
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