JP2010536886A5 - - Google Patents

Description

Ｍｅｔ４モノクローナル抗体は、ブダペスト条約に基づく国際寄託として、２００６年６月２９日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に受託番号ＰＴＡ−７６８０で寄託されたハイブリドーマ細胞系により生成される。ＡＴＣＣの住所は１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｅ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，２０１１０−２２０９である。ＦＦＰＥ前立腺組織におけるスクリーニングアッセイ、ならびに前立腺上皮および内皮細胞の特定の亜集団におけるｃ−Ｍｅｔの確立された特異的発現に基づいてＭｅｔ４ハイブリドーマを単離した（図１ＡおよびＢ）。このスクリーニング研究法はＦＦＰＥ組織においてｃ−Ｍｅｔと反応性がある抗Ｍｅｔ抗体を入手するための機会を大きく増大させた。

ＭＫＮ４５およびＮＩＨ３Ｔ３細胞を混合し、そして１０個の９６ウェルプレートに蒔き、そして３７℃で一晩培養した。細胞を洗浄し、そして翌日１０％ホルマリンで固定した。７個のクローンからのハイブリドーマ上澄５０ μｌを、固定された細胞が入ったウェルに３７℃で１．５時間添加した。プレートを洗浄バッファー（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を伴うＰＢＳ）中で２回洗浄し、そして１：１００希釈のローダミンレッド抱合ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂ）を３７℃
で１．５時間添加した（３０ μｌ／ウェル）。洗浄バッファー中で２回洗浄した後、細胞を蛍光顕微鏡下で試験した。５個のクローンを陽性と見出し、そして取り、そして増殖させた。これらの５個のクローンに以前の融合からの３個のクローンを加えたものの上澄を、ホルマリン固定正常ヒト前立腺組織切片で、免疫組織化学により検証した。クローン８Ｇ６（Ｍｅｔ４と称される）が最も強いシグナルを生じ、２回サブクローニングを行い、そして３つの組換えＭｅｔタンパク質に対するＥＬＩＳＡにより検証された。バイオリアクターを使用してモノクローナル抗体を生成し、そしてプロテインＧアフィニティーカラムを使用してＦＰＬＣにより精製した。

Claims (16)

1. Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに受託番号ＰＴＡ−７６８０で寄託されたハイブリドーマ細胞株により生成されたモノクローナル抗体であって、ｃＭｅｔ肝細胞成長因子受容体（Ｍｅｔ）に結合するモノクローナル抗体（Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂ）、または該Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂの抗原結合フラグメント。
2. 配列番号：１のアミノ酸２３６−２３９でｃＭｅｔ肝細胞成長因子受容体（Ｍｅｔ）に結合する、単離されたＭｅｔ−特異的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、または該Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂの抗原結合フラグメント。
3. （ａ）請求項１または２に記載のＭｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメント、および
   （ｂ）診断的に許容される担体または賦形剤
   を含む組成物。
4. 前記Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントは、検出可能な部分に連結されている、請求項３に記載の組成物。
5. （ａ）請求項１または２に記載のＭｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントを含む第１容器；（ｂ）該Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントのための担体を含む第２容器；および（ｃ）該Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントを使用して、試料中のＭｅｔを検出または測定するため、あるいはＭｅｔ−関連疾患を診断するための説明書；を含むキット。
6. 前記Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントが検出可能な部分に連結されている、請求項５に記載のキット。
7. 前記Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントに特異的であり、そして該Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントに結合する、第２抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに含む、請求項５に記載のキット。
8. 前記第２抗体が検出可能な部分で標識される、請求項７に記載のキット。
9. 対象由来の組織試料または別の生物学的試料中のＭｅｔの存在を検出するための方法であって、
   （ａ）該試料を請求項３に記載の組成物と接触させる工程；および（ｂ）該試料へのＭｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントの結合を検出する工程であって、該Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントの結合は、該試料中でのＭｅｔの存在を示す、工程
   を含む、方法。
10. 前記試料が、前記接触させる工程（ａ）の前に、ホルムアルデヒドを用いた処理により固定されている、請求項９に記載の方法。
11. 対象における、増加したＭｅｔ発現を有する癌の診断を補助する方法であって、
    （ａ）該対象由来の、Ｍｅｔを発現することが疑われる組織試料または他の生物学的試料を、請求項３に記載の組成物と接触させる工程；
    （ｂ）Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントの該試料への結合を、検出または測定し、それによって該試料中のＭｅｔの存在またはレベルを判定する工程；ならびに
    （ｃ）（ｂ）において判定されたＭｅｔのレベルを、変化したＭｅｔ発現を有する疾患を有さない健常な対象由来の対応する対照試料におけるＭｅｔのレベルと比較する工程；
    を含み、ここで
    （ｉ）該対照試料におけるＭｅｔの非存在と比較した、工程（ｂ）において判定されたＭｅｔの存在、または
    （ｉｉ）該対照試料におけるＭｅｔのレベルと比較した、工程（ｂ）において判定されたＭｅｔの増加したレベル
    は、増加したＭｅｔ発現を有する癌の兆候を示す、方法。
12. 前記試料が、前記接触させる工程（ａ）の前に、ホルムアルデヒドを用いた処理により固定されている、請求項１１に記載の方法。
13. Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに受託番号ＰＴＡ−７６８０で寄託されたハイブリドーマ細胞株。
14. 前記Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントが検出可能な部分に連結されている、請求項１または２に記載のＭｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメント。
15. 前記Ｍｅｔ−特異的ｍＡｂまたはその抗原結合フラグメントが検出可能な部分に連結されている、請求項９に記載の方法。
16. 前記試料が、前記接触させる工程（ａ）の前に、ホルムアルデヒドを用いた処理により固定されている、請求項１５に記載の方法。