KR20150014996A - 항-토파시티닙 항체 및 약물을 모니터링하기 위한 그의 용도 - Google Patents

항-토파시티닙 항체 및 약물을 모니터링하기 위한 그의 용도 Download PDF

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조셉 폴 가드너 2세
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화이자 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 선택적 토파시티닙 항체, 토파시티닙에 대해 특이적인 항체를 생성하기 위한 면역원성 분자로서 유용한 면역원성 토파시티닙 접합체를, 특정 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 측정하는 방법, 상기 항체의 제조 방법, 및 상기 항체를 사용하기 위한 검정 및 키트와 함께 제공한다.

Description

항-토파시티닙 항체 및 약물을 모니터링하기 위한 그의 용도{Anti-tofacitinib antibodies and uses thereof for drug monitoring}
본 발명은 2개의 공지된 대사물에 비해 토파시티닙과 선택적으로 결합하는, 토파시티닙에 대해 특이적인 항체에 관한 것이다. 이러한 항-토파시티닙 항체의 선택성으로 인해, 상기 항체는 면역검정에 특히 유용하다. 본 발명은 추가로, 토파시티닙에 대해 특이적인 항체를 포함하는 면역검정 또는 키트에 관한 것이다.
본 발명은, 예를 들어 약물의 혈중 농도를 모니터링하기 위한 검정 방법 및 검정 키트에 유용한, 토파시티닙에 대해 특이적인 항체에 관한 것이다.
토파시티닙는 류마티스성 관절염 (RA), 건선, 염증성 장 질환, 및 기타 면역학적 질환을 치료하기 위해서 뿐만 아니라 장기 이식체 거부를 예방하기 위해서 개발된 강력한 면역억제제이다. 토파시티닙은 림프구의 생존, 증식, 분화 및 아폽토시스(apoptosis)를 좌우하는 사이토킨 신호 변환에 있어 중추적인 역할을 하는 야누스(Janus) 활성화 키나제 3 (JAK3)을 특이적으로 저해한다.
특정 상황 하에서, 신장, 심장, 폐, 골수 및 간과 같은 장기를 인간에게서 이식하는 경우, 신체는 종종 이와 같이 이식된 조직을 거부할 것이다. 장기 이식체 거부의 한 가지 치료는 토파시티닙과 같은 면역억제 약물을 이용하여 면역계를 제어 방식으로 억제하는 것을 포함한다. 면역억제 약물은 외래 (즉, 비-자기) 조직의 거부를 방지하기 위해 이식체 수용자에게 조심스럽게 투여한다. 면역억제 약물을 이용하여 성공적으로 치료하기 위해서는, 약물 농도를 측정한 다음, 독성을 최소화하면서도 효능을 최대로 하기 위해 투여량을 후속 조정해야 한다. 따라서, 이러한 투여량을 조절하기 위해서는, 토파시티닙으로 치료한 환자에게서 토파시티닙의 혈중 농도를 모니터링하는 것이 매우 요망된다. 적당한 투여량은 과도한 어떠한 부작용의 위험을 피하면서도 약리학적 활성에 충분한 최소한의 약물 활성 수준을 유지시켜 줄 것이다. 따라서, 약제로서의 토파시티닙의 개발의 일부로서 임상 환경 하에 신속하고도 용이하게 수행될 수 있는, 환자 중의 토파시티닙 농도를 측정하기 위한 민감하면서도 신뢰할 수 있는 검정에 대한 필요성이 있다.
임상 환경에서의 토파시티닙의 사용을 뒷받침하기 위해, 특히 장기 이식체 거부를 방지하는 데 사용하기 위해서는, 반드시 치료적 농도가 유지되어야 할 뿐만 아니라 필요에 따라 적시에 투여량의 조정을 안내받기 위해서 많은 환자에게서 토파시티닙의 혈장 농도를 모니터링해야 할 필요성이 오랫동안 있어 왔다. 이러한 활성은 종종, 치료적 약물 모니터링 (TDM)으로서 지칭된다. TDM은 임상의들이 면역억제 약물 각각의 치료적 범위 내에서 이러한 면역억제 약물의 혈중 및 혈장 농도를 유지하는 데 도움을 주는 데 있어 중요한 역할을 한다. 협소한 치료적 범위를 벗어난 농도 상의 변동은 불리한 임상 성과를 초래할 수 있다. TDM은 약물의 농도가 너무 높거나 너무 낮지 않게 함으로써, 독성이나 거부의 위험을 각각 저하시켜야 한다. 면역억제 약물의 치료적 모니터링은 일반적으로, 특별한 약물에 대해 적당한 검정 및 생물학적 유체 (즉, 전혈, 혈장)의 몇 가지 선택을 기초로 하였다.
신뢰할 만한 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS/MS)에 의거한 검정이 토파시티닙의 치료적 수준을 모니터링하는 데 이용 가능하다. 불행하게도, 전국과 전 세계 대부분의 임상 사이트는 통상적으로 집에서 LC-MS/MS 검정을 수행하도록 설정되어 있지 않다. 임상 사이트는 전형적으로, 사이트의 TDM 노력을 간소화하기 위해 검정을 수행하는 데 비교적 신속하고도 저렴하며 용이한 것을 선호한다. 따라서, 환자의 혈액, 혈청, 혈장, 및/또는 기타 생물학적 유체 또는 샘플 중의 토파시티닙을 탐지하도록 구성된 면역검정을 수행하는 것이 유리할 것이다. 부가적으로, 항-토파시티닙 항체를 생성하는 데 사용하기 위한, 토파시티닙에 의거한 면역원이 유리할 것이다.
추가로, 토파시티닙과는 결합하지만, 토파시티닙의 적어도 하나의 대사물과는 실질적으로 결합하지 않는 특이적 항-토파시티닙 항체가 유리할 것이다. 이러한 항체는 특히, 치료가 진행중인 환자 (이 환자에게 토파시티닙을 투여한다)로부터의 샘플 중의 임상적으로 관련된 토파시티닙의 농도를 탐지하는 것이 유용할 것이다.
토파시티닙을 인식하는 모노클로날 항체에 관한 기존의 보고서는 없었다. 토파시티닙은 면역원성이 아니고, 그 자체가 면역억제성이기 때문에, 토파시티닙에 대한 모노클로날 항체를 만드는 데 있어서 내재된 어려움이 있다. 더욱이, 토파시티닙의 대사물은 당해 분야의 문헌에 명확하게 잘 규명되지 않았기 때문에, 토파시티닙과 그의 대사물 간을 구별할 수 있는 모노클로날 항체를 확인하는 것은 어렵다. 활동성 토파시티닙은 탐지하지만, 그의 비활동성 대사물은 탐지하는 않는 정교한 검정에 대한 필요성이 존재한다. 본 발명은 이러한 필요성을 충족시켜 준다.
발명의 간단한 요약
본 발명은 신규 면역원성 토파시티닙 접합체뿐만 아니라 표지된 토파시티닙 경쟁인자에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 상기 면역원성 토파시티닙 접합체를 이용하여 생성된 폴리클로날 및 모노클로날 항체에 관한 것이다. 이들 항체, 접합체, 및 경쟁인자는 특히, 샘플 중의 토파시티닙을 탐지하기 위한 면역검정에 유용하다.
본 발명은 면역원성 담체와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 면역원성 토파시티닙 접합체를 포함하는데, 이러한 면역원성 담체는 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin) 및 소의 혈청 알부민으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질이고, 추가로
(a) 면역원성 토파시티닙 접합체는 다음 화학식 V의 구조를 갖거나; 또는
(b) 면역원성 토파시티닙 접합체는 다음 화학식 VI의 구조를 갖는다:
<화학식 V>
Figure pct00001

<화학식 VI>
Figure pct00002
상기식에서,
BSA는 소의 혈청 알부민이고;
KLH는 키홀 림펫 헤모시아닌이다.
본 발명은 특정 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 평가하는 방법을 포함한다. 이러한 방법은
(a) 토파시티닙을 함유하는 것으로 의심되는 샘플을 제공하는 단계;
(b) 이러한 샘플 또는 샘플 추출물을, 토파시티닙에 대해 특이적인 항체가 토파시티닙과 결합하여 검정 혼합물을 형성하는 데 적합한 조건 하에, 상기 항체와 접촉시키는 단계; 및
(c) 토파시티닙에 대한 상기 항체의 결합을 탐지하는 단계
를 포함한다.
본 발명은 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 큰 단리된 항체를 포함한다:
<화학식 II>
Figure pct00003

<화학식 III>
Figure pct00004

한 측면에서, 상기 단리된 항체는 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 대사물 1 또는 대사물 2에 대한 결합 친화도의 25, 30, 40, 또는 50배이다.
또 다른 측면에서, 상기 항체는 면역원성 담체와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 면역원성 토파시티닙 접합체 화합물을 사용하여 수득한다.
본 발명은 특정 샘플 중의 토파시티닙의 양을 결정하는 방법을 포함한다. 이러한 방법은
탐지 가능한 표지와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 표지된 경쟁인자의 공지된 양을 제공하는 단계;
선택적 항-토파시티닙 항체를 제공하는 단계;
상기 샘플, 선택적 항-토파시티닙 항체 및 표지된 경쟁인자를 합하는 단계 (이러한 샘플 중의 토파시티닙은 선택적 항-토파시티닙 항체와의 결합을 놓고 표지된 경쟁인자와 경쟁한다); 및
표지의 탐지에 의해 항체와 결합되지 않은 표지된 경쟁인자의 양을 측정함으로써 상기 샘플 중의 토파시티닙의 양을 결정하는 단계
를 포함한다.
한 측면에서, 선택적 항-토파시티닙 항체는 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1에 대한 결합 친화도 보다 더 크고/크거나 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 크다:
<화학식 II>
Figure pct00005

<화학식 III>
Figure pct00006

한 측면에서, 상기 항체는 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 크다:
<화학식 II>
Figure pct00007

<화학식 III>
Figure pct00008

본 발명은 특정 샘플 중의 토파시티닙의 양을 결정하기 위한 키트를 포함한다.
이러한 키트는 탐지 가능한 표지와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 표지된 경쟁인자; 및 하나 이상의 선택적 항-토파시티닙 항체를 포함하는데, 상기 표지된 경쟁인자는 항-토파시티닙 항체와의 결합을 놓고 특정 샘플 중의 토파시티닙과 경쟁한다.
한 측면에서, 선택적 항-토파시티닙 항체는 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 토파시티닙 대사물에 대한 결합 친화도 보다 더 크다:
<화학식 II>
Figure pct00009

<화학식 III>
Figure pct00010

또 다른 측면에서, 상기 항체는 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 크다:
<화학식 II>
Figure pct00011

<화학식 III>
Figure pct00012

또 다른 측면에서, 상기 키트는 약 5 ng/ml 내지 약 1,215 ng/ml의 범위의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙을 탐지하기 위해 사용될 수 있고, 다음을 포함한다:
(a) 서열 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 31의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 32의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체; 및/또는
(b) 서열 37의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 38의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 39의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체.
본 발명은 특정 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 결정하기 위한 경쟁적 면역검정 키트를 포함한다. 이러한 경쟁적 면역검정은 하나 이상의 선택적 항-토파시티닙 항체; 탐지 가능한 표지와 접합된 토파시티닙 화합물을 포함하는데, 이와 같이 접합된 토파시티닙 화합물은 상기 항체와의 결합을 놓고 상기 샘플 중의 토파시티닙과 경쟁하고; 상기 표지는 샘플 중의 토파시티닙이 치료적 약물 모니터링 농도로 존재하는 경우에 이러한 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 표시하는 신호를 제공한다.
한 측면에서, 상기 항체는 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 크다:
<화학식 II>
Figure pct00013

<화학식 III>
Figure pct00014

본 발명은 토파시티닙과는 결합하지만, 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 토파시티닙 대사물과는 실질적으로 결합하지 않는 단리된 항체를 포함한다:
<화학식 II>
Figure pct00015

<화학식 III>
Figure pct00016

한 측면에서, 상기 단리된 항체는 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2와 실질적으로 결합하지 않는다:
<화학식 II>
Figure pct00017

<화학식 III>
Figure pct00018

또 다른 측면에서, 상기 항체는 특정 샘플 중의 토파시티닙을 탐지할 수 있지만, 이러한 샘플 중의 토파시티닙 대사물은 실질적으로 탐지하지 못하는데, 이러한 토파시티닙의 양은 약 5 ng/ml 내지 1,215 ng/ml, 약 5 ng/ml 내지 405 ng/ml, 또는 약 15 ng/ml 내지 1,215 ng/ml의 범위이다.
본 발명은 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 토파시티닙 대사물에 대한 결합 친화도 보다 더 큰 단리된 항체를 포함한다. 이러한 항체는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는데, 중쇄 가변 도메인은
(a) 서열 13, 서열 19, 서열 30, 및 서열 37로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1;
(b) 서열 14, 서열 20, 서열 25, 서열 31, 및 서열 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2;
(c) 서열 15, 서열 21, 서열 26, 서열 32, 및 서열 39로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3
으로 이루어진 군으로부터 선택된 3개의 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고;
경쇄 가변 도메인은
(d) 서열 16, 서열 22, 서열 27, 서열 33, 및 서열 34로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1;
(e) 서열 17, 서열 23, 서열 28, 및 서열 35로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및
(f) 서열 18, 서열 24, 서열 29, 및 서열 34로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3
으로 이루어진 군으로부터 선택된 3개의 CDR (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.
한 측면에서, 상기 항체는
(a) 서열 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 14의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 17의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(b) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(c) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 25의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 26의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 27의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 28의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 29의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(d) 서열 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 31의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 32의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(e) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 33의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 17의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(f) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 34의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 35의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 36의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(g) 서열 37의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 38의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 39의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(h) 서열 1, 서열 3, 서열 5, 서열 7, 서열 8, 서열 10 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 2, 서열 4, 서열 6, 서열 9, 및 서열 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(i) 서열 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(j) 서열 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(k) 서열 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(l) 서열 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(m) 서열 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(n) 서열 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(o) 서열 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(p) 서열 3, 서열 7 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(q) 서열 3, 서열 8, 서열 10, 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4, 서열 9 및 서열 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
또 다른 측면에서, 항체는
(a) 서열 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 31의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 32의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체;
(b) 서열 37의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 38의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 39의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체;
(c) 서열 3, 서열 7 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체;
(d) 서열 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; 및
(e) 서열 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 측면에서, 상기 항체는 약 15 ng/ml 내지 1,215 ng/ml의 범위의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙을 탐지할 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 항체는 약 5 ng/ml 내지 405 ng/ml의 범위의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙을 탐지할 수 있다.
또한 또 다른 측면에서, 본 발명은
(a) 서열 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 14의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 17의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(b) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(c) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 25의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 26의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 27의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 28의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 29의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(d) 서열 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 31의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 32의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(e) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 33의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 17의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(f) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 34의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 35의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 36의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(g) 서열 37의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 38의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 39의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
(h) 서열 1, 서열 3, 서열 5, 서열 7, 서열 8, 서열 10 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 2, 서열 4, 서열 6, 서열 9, 및 서열 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(i) 서열 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(j) 서열 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(k) 서열 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(l) 서열 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(m) 서열 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(n) 서열 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(o) 서열 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(p) 서열 3, 서열 7 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(q) 서열 3, 서열 8, 서열 10, 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4, 서열 9 및 서열 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는
항체를 암호화하는 핵산을 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 항체의 생성 방법을 포함한다. 이러한 방법은 숙주 세포를, 상기 항체가 생성되는 조건 하에 배양하는 것을 포함한다. 추가 측면에서, 상기 방법은 상기 항체를 단리하는 것을 포함한다.
개시된 주제는 본 명세서의 결론으로 특허청구범위에 특별하게 지적되고 명확하게 청구되어 있다. 개시된 실시양태의 전술된 및 기타 목적, 특색 및 이점은 첨부된 도면과 연계해서 다음의 상세한 설명으로부터 명백해진다.
도 1은 고체 상 ELISA에 의해 결정된 바와 같은, 실시예 2의 토파시티닙-BSA 접합체에 대한 혈청 항체의 결합성을 도시한 그래프이다.
도 2는 ELISA에 의해 결정된 바와 같은, 바이오티닐화 토파시티닙에 대한 선택된 항-토파시티닙 항체의 결합성을 도시한 그래프이다.
도 3은 ELISA에 의해 결정된 바와 같은, 대사물 1에 대한 선택된 항-토파시티닙 항체의 교차 반응성을 도시한 그래프이다.
도 4는 ELISA에 의해 결정된 바와 같은, 본 발명의 선택 모노클로날 항체의 최적의 희석 범위를 도시한 그래프이다.
도 5는 ELISA에 의해 결정된 바와 같은, 본 발명의 선택 모노클로날 항체의 최적의 희석 범위를 도시한 그래프이다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 면역원성 담체와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 신규 면역원성 토파시티닙 접합체뿐만 아니라 표지된 토파시티닙 경쟁인자를 제공한다. 본 발명은 또한, 상기 면역원성 토파시티닙 접합체를 이용하여 생성된 폴리클로날 및 모노클로날 항체에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 토파시티닙에 대해 특이적인 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 면역원성 담체와 연결된 토파시티닙을 포함하는 신규 면역원성 토파시티닙 접합체로의 접종에 반응하여 생성된다.
이들 항체, 접합체, 및 경쟁인자는 생물학적 유체 중의 토파시티닙을 탐지하기 위한 면역검정에 유용하다. 이들 항체, 접합체 및 경쟁인자를 포함하는 검정 키트는 임상 환경에 사용하는 데 매우 적합하고, 기존에 가능하였던 것 보다 훨씬 더 정교하고 재현 가능한 결과를 제공해준다. 상기 항체는 또한, 토파시티닙의 정제 및 단리에 유용하다.
본원에 지칭된 바와 같은 용어 "항체"는 완전 항체, 및 그의 어느 항원 결합성 단편 (즉, "항원 결합성 부분") 또는 단일 쇄를 포함한다. "항체"는 디술피드 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄 (H)와 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 당단백질, 또는 그의 항원 결합성 부분을 지칭한다. "항체"는 또한, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM 항체 아유형을 지칭한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로서 약칭됨)과 중쇄 불변 영역 (CH)으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 전형적으로, 3개의 도메인, 즉 CH1, CH2 및 CH3으로 구성된다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로서 약칭됨)과 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, 즉 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 골격 영역 (FR)으로 명명된, 더 보존되는 영역이 산재된, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명된 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각 VH 및 VL은 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성되는데, 이들은 아미노 말단부터 카르복시 말단까지 다음 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호 작용하는 결합성 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
가변 도메인의 "CDR"은 카바트(Kabat)의 정의, 초티아(Chothia)의 정의, 카바트와 초티아 둘 다의 누적 정의, AbM 정의, 접촉 정의 및/또는 입체 형태적 정의, 및/또는 당해 분야에 널리 공지된 어떠한 CDR 결정 방법에 따라서도 확인되는, 가변 영역 내의 아미노산 잔기이다. 항체 CDR은 카바트 등에 의해 처음으로 정의된 초가변 영역으로서 확인될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C.] 참조). CDR의 위치는 또한, 초티아 등에 의해 처음으로 기재된 구조적 루프 구조로서 확인될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883] 참조). CDR 확인에 대한 기타 접근법은 "IMGT 정의" (문헌 [Lefranc, M.-P. et al., 1999, Nucleic Acids Res. 27:209-212] 참조) 및 "AbM 정의" [이는 카바트와 초티아 간의 절충안이고, 옥스포드 몰레쿨라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어 (현재 Accelrys®)를 이용하여 유도된다], 또는 문헌 ([MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745] 참조)에 제시된, 관찰된 항원 접촉을 기초로 한 CDR의 "접촉 정의"를 포함한다. 본원에서 CDR의 "입체 형태적 정의"로서 지칭된 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 항원 결합에 대한 엔탈피 기여를 하는 잔기로 확인될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Makabe et al., 2008, J. Biol. Chem. 283:1156-1166] 참조). 또한 기타 CDR 경계 정의가 상기 접근법들 중의 하나를 엄격하게 따를 수는 없지만, 그럼에도 불구하고 카바트 CDR의 적어도 일부와 중복될 것이지만, 이들은 특별한 잔기 또는 잔기 군 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합성에 상당한 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견에 비추어 단축되거나 연장될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 특정 CDR은 당해 분야에 공지된 어떠한 접근법 (접근법들의 조합을 포함함)에 의해서도 정의된 CDR을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 방법은 이들 접근법 중 어느 것에 따라서 정의된 CDR을 활용할 수 있다. 둘 이상의 CDR을 함유하는 소정의 어떠한 실시양태에 대해서도, 이러한 CDR은 카바트, 초티아, 연장된, AbM, 접촉, 및/또는 입체 형태적 정의 중 어느 것에 따라서 정의될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 항체의 "항원 결합성 부분" 또는 "항원 결합성 단편" (또는 간단히 "항체 부분")은 항원 (예를 들어, 토파시티닙)과 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유하고 있는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합성 기능은 완전한 길이의 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 사실이 밝혀졌다. 항체의 "항원 결합성 부분" 내에 포괄된 결합성 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지(hinge) 영역에서 디술피드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (문헌 [Ward et al., 1989 Nature 341:544-546] 참조); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역을 포함한다. 더욱이, Fv 단편의 두 도메인 VL 및 VH가 별개의 유전자에 의해 암호화되긴 하지만, 재조합 방법을 사용하여, VL 영역과 VH 영역이 짝을 이루어 1가 분자 [단일 쇄 Fv (scFv)로서 공지됨]를 형성하는 단일 단백질 쇄로서 만들어질 수 있도록 해주는 합성 링커에 의해 상기 두 도메인을 연결시킬 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Bird et al., 1988 Science 242:423-426]; 및 [Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조). 이러한 단일 쇄 항체가 또한, 항체의 "항원 결합성 부분" 내에 포괄된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득하고, 이 단편을 대상으로 하여 온전한 항체와 동일한 방식으로 활용하는 것에 관해 스크리닝한다.
본원에 사용된 바와 같은 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 지닌 기타 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭한다 (예를 들어, 토파시티닙과 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 토파시티닙 이외의 항원과 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 더욱이, 단리된 항체는 기타 세포성 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 단일 분자 조성의 항체 분자 제제를 지칭한다. 모노클로날 항체 조성물은 특별한 에피토프에 대한 단일 결합 특이성과 친화성을 표시한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "재조합 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 창출되거나 또는 단리되는 모든 항체, 예컨대 (a) 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포로부터 단리된 항체, (b) 재조합의 조합 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 (c) 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열로 스플라이싱하는 것을 포함하는 기타 모든 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 창출되거나 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 항체는 골격 및 CDR 영역이 마우스 생식세포계 면역글로불린 서열로부터 유래되는 가변 영역을 포함한다. 그러나, 특정의 실시양태에서, 이러한 재조합 마우스 항체는 시험관 내에서 돌연변이 유발시킬 수 있으므로 (또는, 인간 Ig 서열에 대해 트랜스제닉(transgenic)인 동물을 사용하는 경우에는, 생체내 체세포 돌연변이 유발시킬 수 있으므로), 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 마우스 생식세포계 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관계되긴 하지만, 생체 내에서 이러한 마우스 항체 생식세포계 레퍼토리(repertoire) 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
본원에 사용된 바와 같은 "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화되는 항체 부류 (예를 들어, IgM 또는 IgG)를 지칭한다.
"항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 대해 특이적인 항체"란 표현은 본원에서 "항원과 특이적으로 결합하는 항체"란 표현과 상호 교환적으로 사용된다.
용어 "항체 유도체"는 항체의 변형된 모든 형태, 예를 들어 항체의 접합체, 및 또 다른 작용제 또는 항체를 지칭한다.
용어 "인간화 항체"는 비-인간 종, 예컨대 마우스의 생식세포계로부터 유래된 CDR 서열을 인간 골격 서열 상으로 이식시킨 항체를 지칭하기 위한 것이다. 부가의 골격 영역 변형이 인간 골격 서열 내에서 이루어질 수 있다.
용어 "키메라 항체"는 가변 영역 서열이 한 종으로부터 유래되고 불변 영역 서열이 또 다른 종으로부터 유래되는 항체, 예컨대 가변 영역 서열이 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역 서열이 인간 항체로부터 유래되는 항체를 지칭하기 위한 것이다. 키메라 항체는 또한, V 도메인과 C 도메인 둘 다가 동일한 종으로부터 유래된 경우일지라도, 이러한 두 도메인이 각각 2가지 상이한 공급원으로부터 유래되는 항체를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "토파시티닙과 특이적으로 결합하는" 항체 또는 "선택적 토파시티닙 항체"는 토파시티닙과는 결합하지만, 토파시티닙의 대사물과는 실질적으로 결합하지 않는 항체를 지칭한다. 특정 항체가 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및/또는 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2와 탐지 가능하게 결합하지 않거나 또는 이러한 대사물과 훨씬 덜한 정도로 결합하는 경우, 이러한 항체는 토파시티닙과 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 상기 대사물은, 예를 들어 경쟁적 결합 검정에 의해 측정된 바와 같이, 상기 항체와의 결합을 놓고 토파시티닙과 실질적으로 경쟁하지 않는다. 선택적 토파시티닙 항체는 화학식 II의 대사물 1 또는 화학식 III의 대사물 2에 대한 그의 친화도 보다 5, 10, 15, 25, 30, 40, 또는 50배 더 큰 친화도로 토파시티닙과 결합한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"는 모든 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 용어 "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비-포유류, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 암소, 치킨, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
본 발명의 각종 측면이 다음 세부 항목에 추가로 상세히 기재되어 있다.
항체의 "가변 영역"은 단독으로 또는 조합되는, 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. 당해 분야에 공지된 바와 같이, 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 영역은 초가변 영역으로서 공지되기도 한 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 연결된 4개의 골격 영역 (FR)으로 이루어지고, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. 특히 CDR 영역 외부의 (즉, 골격 영역 내의) 아미노산 잔기 상의 치환을 수반하는, 대상 가변 영역의 변이체가 요망되는 경우에는, 이러한 대상 가변 영역과 동일한 표준 부류의 CDR1 및 CDR2 서열을 함유하는 다른 항체의 가변 영역을, 상기 대상 가변 영역과 비교함으로써 적당한 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 아미노산 치환을 확인할 수 있다 (문헌 [Chothia and Lesk, J Mol Biol 196(4): 901-917, 1987] 참조). 대상 CDR을 양옆에 배치하기 위해 FR을 선택하는 경우, 예를 들어 항체를 인간화하거나 최적화하는 경우, 동일한 표준 부류 내의 CDR1 및 CDR2 서열을 함유하는 항체로부터의 FR이 바람직하다.
가변 도메인의 "CDR"은 카바트 정의, 초티아 정의, 카바트와 초티아 둘 다의 누적 정의, AbM 정의, 접촉 정의 및/또는 입체 형태적 정의, 또는 당해 분야에 널리 공지된 어떠한 CDR 결정 방법에 따라서도 확인되는, 가변 영역 내의 아미노산 잔기이다. 항체 CDR은 카바트 등에 의해 처음으로 정의된 초가변 영역으로서 확인될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C.] 참조). CDR의 위치는 또한, 초티아 등에 의해 처음으로 기재된 구조적 루프 구조로서 확인될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883] 참조). CDR 확인에 대한 기타 접근법은 "IMGT 정의" (문헌 [Lefranc, M.-P. et al., Nucleic Acids Res., 27, 209-212 (1999)] 참조) 및 "AbM 정의" [이는 카바트와 초티아 간의 절충안이고, 옥스포드 몰레쿨라의 AbM 항체 모델링 소프트웨어 (현재 Accelrys®)를 이용하여 유도된다], 또는 문헌 ([MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745] 참조)에 제시된, 관찰된 항원 접촉을 기초로 한 CDR의 "접촉 정의"를 포함한다. 본원에서 CDR의 "입체 형태적 정의"로서 지칭된 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 항원 결합에 대한 엔탈피 기여를 하는 잔기로 확인될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry 283:1156-1166] 참조). 또한 기타 CDR 경계 정의가 상기 접근법들 중의 하나를 엄격하게 따를 수는 없지만, 그럼에도 불구하고 카바트 CDR의 적어도 일부와 중복될 것이지만, 이들은 특별한 잔기 또는 잔기 군 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합성에 상당한 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견에 비추어 단축되거나 연장될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 특정 CDR은 당해 분야에 공지된 어떠한 접근법 (접근법들의 조합을 포함함)에 의해서도 정의된 CDR을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 방법은 이들 접근법 중 어느 것에 따라서 정의된 CDR을 활용할 수 있다. 둘 이상의 CDR을 함유하는 소정의 어떠한 실시양태에 대해서도, 이러한 CDR은 카바트, 초티아, 연장된, AbM, 접촉, 및/또는 입체 형태적 정의 중 어느 것에 따라서 정의될 수 있다.
용어 "모노클로날 항체" (Mab)는 항체을 생성시키는 방법이 아니라, 예를 들어 모든 진핵성, 원핵성 또는 파지(phage) 클론을 포함한, 단일 카피 또는 클론으로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 바람직하게, 본 발명의 모노클로날 항체는 동질적이거나 실질적으로 동질적인 집단에 존재한다.
본 발명의 항체는 당해 분야에 널리 공지된 기술, 예를 들어 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술 또는 이러한 기술의 조합, 또는 당해 분야에 용이하게 공지된 기타 기술을 이용하여 생성할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Jayasena, S.D., 1999, Clin. Chem. 45:1628-1650] 및 [Fellouse et al., 2007, J. Mol. Biol., 373(4):924-940] 참조).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "특이적 결합", "선택적 결합", "선택적으로 결합하는" 또는 "특이적으로 결합하는"은 비-표적 화합물에 대한 친화도 보다 더 큰 친화도로 표적 화합물 또는 에피토프와 결합할 수 있는 능력을 지칭한다. 예시되는 예에서, 토파시티닙과 특이적으로 결합하는 항체는 토파시티닙에 대한 친화도가 토파시티닙의 대사물, 예를 들어 화학식 II의 대사물 1 및 화학식 III의 대사물 2에 대한 친화도 보다 더 크다. 일부 실시양태에서, "특이적으로 결합하는" 또는 "선택적으로 결합하는"은 비-표적에 대한 친화도 보다 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 50, 100, 500, 1,000배 또는 그 초과로 더 큰 친화도로 표적 화합물과 결합하는 것을 지칭한다.
용어 "에피토프"는 항체의 항원 결합성 영역 중 하나 이상에서 이러한 항체에 의해 인식되고 결합될 수 있는 분자의 그 부분을 지칭한다. 에피토프는 종종, 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 집단으로 이루어지고, 특이적 3차원 구조적 특징뿐만 아니라 특이적 전하 특징을 지니고 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "항원성 에피토프"는 당해 분야에 널리 공지된 어느 방법, 예를 들어 통상적인 면역검정에 의해서 결정된 바와 같이, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 폴리펩티드의 특정 부분으로서 정의된다. "비선형 에피토프" 또는 "입체 형태적 에피토프"는 이러한 에피토프에 대해 특이적인 항체가 결합하는 항원성 단백질 내의 비연속성 폴리펩티드 (또는 아미노산)를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "면역원" 및 "면역원성"은 유기체 내에서 면역 반응을 생성시키거나 발생시킬 수 있는 물질을 지칭하는 것을 의미한다. 면역원은 또한, 항원일 수 있다. 통상적으로, 면역원은 상당히 고 분자량 (예를 들어, 10,000 초과)이므로, 각종 거대분자, 예컨대 단백질, 지단백질, 다당류, 일부 핵산 및 특정의 테이코산(teichoic acid)이 면역원일 수 있다.
"합텐"은 부분 또는 불완전 항원이다. 이는 통상적으로, 단백질이 없는 물질이고, 대개 저 분자량이며, 일반적으로 항체 형성을 자극할 수 없지만, 항체와 반응한다. 합텐에 대한 항체는 합텐을 고 분자량 항원성 담체 (예를 들어, 면역원)와 커플링시킨 다음, 이와 같이 커플링된 생성물, 즉 면역원성 접합체를 인간 또는 동물 대상체에게 주사함으로써 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 토파시티닙이 합텐이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "담체" 또는 "면역원성 담체"는 합텐과 연결될 수 있음으로써, 이러한 합텐이 면역 반응을 유발할 수 있게 하고, 항원 (합텐)과 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 생성을 유발시킬 수 있게 하는 면역원성 물질, 통상적으로 단백질이다. 담체 물질은 외래로서 인식되므로 숙주로부터 면역학적 반응을 유발시키는 단백질, 당단백질, 복합 다당류, 입자 및 핵산을 포함한다. 각종 단백질이 폴리펩티드 면역원성 담체로서 이용될 수 있다. 이들 단백질은 알부민 및 혈청 단백질, 예를 들어 글로불린, 안구 렌즈 단백질, 지단백질 등을 포함한다. 예시적인 단백질은 소의 혈청 알부민 (BSA), 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 계란의 난백 알부민, 소의 감마-글로불린 (BGG) 등을 포함한다. 또 다른 한편, 합성 폴리펩티드를 사용할 수 있다. 면역원성 담체는 또한, 다당류, 예를 들어 전분, 글리코겐, 셀룰로스, 탄수화물 검, 예컨대 아라비아 검, 한천 등일 수 있다. 이러한 다당류는 또한, 폴리펩티드 잔기 및/또는 지질 잔기를 함유할 수 있다. 면역원성 담체는 또한, 단독으로 사용되거나 또는 상기 언급된 폴리펩티드 또는 다당류 중 하나와 접합되는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "면역원성"은 면역 반응을 유도시킬 수 있는 분자의 능력을 지칭하는데, 이는 주입된 분자의 고유 화학적 구조에 의해서 그리고 숙주 동물의 면역계가 화합물을 인식하는지의 여부에 의해서 결정할 수 있다. 항원 구조 상의 작은 변화도 특정 화합물의 면역원성을 크게 변경시킬 수 있고, 이는, 특히 잘 보존된 항원에 대항하여 항체를 생성시킬 기회를 증가시키기 위한 일반적인 과정으로서 광범위하게 사용되어 왔다. 예를 들어, 이들 변형 기술은 면역원의 영역을 변경시켜 T-세포 결합을 위한 더 좋은 부위를 제공하거나, 또는 B-세포 결합을 위한 새로운 에피토프를 노출시킨다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "표지"는 탐지 가능한 신호를 생성하거나, 또는 생성하도록 유도될 수 있는 모든 분자를 지칭한다. 이러한 표지는 분석물, 면역원 및/또는 항원과 접합될 수 있다. 표지의 비-제한적 예는 방사성 동위원소, 효소, 효소 단편, 효소 기질, 효소 저해제, 조효소, 촉매, 형광단, 염료, 화학발광인자, 발광인자, 감작제, 비-자기 또는 자기 입자, 고형 지지체, 리포솜, 리간드, 수용체, 및 합텐 방사성 동위원소를 포함한다.
특이적 항체 또는 표지된 경쟁인자와 관련해서 용어 "표지된"은 탐지 가능한 물질을 상기 항체 또는 표지된 경쟁인자와 커플링 (즉, 물리적 연결)시킴으로써 직접적으로 표지시키는 것뿐만 아니라 상기 항체 또는 표지된 경쟁인자를 또 다른 시약 (이는 결국 직접적으로 표지된다)과 커플링시킴으로써 이러한 항체 또는 표지된 경쟁인자를 간접적으로 표지시키는 것을 포함한다. 간접적으로 표지시키는 것의 예는 형광성-표지된 2차 항체를 이용하여 1차 항체를 탐지하는 것을 포함한다. 본 발명의 항원을 탐지하기 위한 시험관내 기술은 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA), 웨스턴 블롯, 면역침전 및 면역형광을 포함한다.
본원에 기재된 항체, 표지된 경쟁인자, 및 잠재적 치료적 화합물은 또한, 일정 범위의 탐지 시스템을 수반한 기타 수많은 동질적 및 이질적 면역검정 중 어느 것과도 함께 사용하는 데 적합하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항원성 화합물"은 면역 반응을 생성시키기 위해 사용된 화합물을 지칭한다. 예시적으로, 항원성 화합물은 면역원성 담체와 연결된 합텐, 예를 들어 토파시티닙이다. 항원성 화합물은 목적하는 항체를 생성시키기 위해 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "표지된 경쟁인자"는 토파시티닙에 대한 특이성을 지닌 항체와 특이적으로 결합할 수 있는 분자인데, 이러한 분자는 탐지 가능한 표지 또는 추적자와 연결된다. 예시적으로, 상기 분자는 토파시티닙, 또는 그의 유도체 또는 분석물이다.
용어 "생물학적 샘플"은 살아있는 대상체 또는 이전에 살아있는 대상체로부터 단리되었거나 유래된 모든 양의 물질을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 상기 용어는 특정 대상체로부터 단리된 조직, 세포 및 생물학적 유체뿐만 아니라 특정 대상체 내에 존재하는 조직, 세포 및 유체를 포함하고자 한다. 대상체는 치킨, 인간, 마우스, 원숭이, 래트, 토끼, 말, 낙타과 동물, 및 기타 동물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 상기 물질은 혈액, 혈장, 혈청, 정액, 뇨, 눈물, 타액, 세포, 기관, 조직, 뼈, 골수, 림프, 림프절, 활막 조직 또는 유체, 연골세포, 활막 대식세포, 내피 세포 및 피부를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
한 측면에서, 본 개시내용은 토파시티닙의 수준을 측정하기 위하여 토파시티닙에 대해 특이적인 항체를 생성시키기 위한 면역원성 분자로서 유용한, 토파시티닙의 유도체를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 특정 샘플 중의 토파시티닙을 선택적으로 탐지하기 위한 방법 및 키트를 제공한다.
토파시티닙 (화학식 I)은 류마티스성 관절염 (RA) 및 기타 자가면역 장애, 예컨대 염증성 장 질환, 강직성 척추염, 건선, 건선성 관절염을 치료하고 이식체 거부를 방지하기 위해 개발된, 경구적으로 이용 가능한 JAK3의 강력한 선택적 억제제이다.
<화학식 I>
Figure pct00019

토파시티닙은 적어도 2개의 공지된 대사물, 즉 "대사물 1" (화학식 II) 및 "대사물 2" (화학식 III)를 갖는다.
<화학식 II>
Figure pct00020

<화학식 III>
Figure pct00021

토파시티닙과 같은 소분자를 탐지하기 위한 면역검정을 구현하는 것은 어려울 수 있다. 일부 경우에, 소분자는 항원성이 결여되기 때문에, 이들에 대항한 항체를 생성시키는 것은 어렵다. 이러한 문제는 토파시티닙의 경우에 악화되는데, 이는 토파시티닙이 강력한 면역억제 특성을 지니고 있기 때문이다. 소분자의 면역원성을 증가시키기 위해서는, 더 큰 면역원성 화합물 (소의 혈청 알부민, 난백 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다)을 약물과 커플링시킬 수 있다. 특정 샘플 중의 약물을 탐지하기 위해서는, 일반적으로 특정 항체, 토파시티닙 또는 토파시티닙 유사체와 접합된 탐지 가능한 표지를 사용해야 한다.
본 발명 이전에는, 토파시티닙이 면역원성 담체와 접합됨으로써 더 면역원성이 될 수 있었다는 사실을 예상하지 못하였다. 따라서, 놀랍게도, 한 측면에서 본 개시내용은 면역원성 담체와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 면역원성 토파시티닙 접합체를 제공하는데, 이러한 면역원성 담체는 면역된 동물에 의해 외래로서 인식되어 면역학적 반응을 유발시키는 단백질, 당단백질, 복합 다당류 또는 핵산이다. 하나의 예시적 예에서, 면역원성 담체는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH) 및 소의 혈청 알부민 (BSA)로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질이다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 다음 구조를 갖는 화학식 V의 면역원성 토파시티닙 접합체를 제공한다:
<화학식 V>
Figure pct00022

상기식에서,
BSA는 소의 혈청 알부민이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 다음 구조를 갖는 화학식 VI의 면역원성 토파시티닙 접합체를 제공한다:
<화학식 VI>
Figure pct00023

상기식에서,
KLH는 키홀 림펫 헤모시아닌이다.
본 발명의 면역원성 토파시티닙 접합체는 공지된 항체 생성 및 스크리닝 과정을 이용하여 항체를 유발시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 면역원성 토파시티닙 접합체는 적당한 동물 숙주 내로 주사하여 항체의 생성을 자극할 수 있다. 이로써 생성된 항체는 토파시티닙을 탐지하도록 구성된 면역검정에 직접 사용하기 위해 거둬들일 수 있다. 일부 경우에, 토파시티닙에 대해 특이적이고, 토파시티닙 대사물에 비해 토파시티닙과 선택적으로 결합하는 모노클로날 항체가 바람직하다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 대사물 1 또는 대사물 2에 대한 결합 친화도의 약 25, 30, 40, 또는 50배이다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 토파시티닙에 대한 결합 친화도의 약 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0.5% 미만의 친화도로 대사물 1 또는 대사물 2와 결합한다.
선택적 항- 토파시티닙 항체
본 발명의 항체는 이것이 토파시티닙 (화학식 I)과는 특이적으로 결합하지만, 공지된 토파시티닙 대사물, 즉 "화학식 II의 대사물 1" 및 "화학식 III의 대사물 2" 중 하나 또는 둘 다와는 실질적으로 결합하지 않는다는 사실을 특징으로 하고, 본 발명은 이들 항-토파시티닙 항체의 제조 및 사용 방법을 제공한다. 선택적 토파시티닙 항체는 화학식 II의 대사물 1 또는 화학식 III의 대사물 2에 대한 친화도 보다 5, 10, 15, 25, 30, 40, 또는 50배 더 큰 친화도로 토파시티닙과 결합한다.
토파시티닙 및 그의 대사물에 대한 항체의 결합 능력을 평가하기 위한 표준 검정은 당해 분야에 공지되어 있는데, 이는 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블롯, 방사성면역검정 및 유동 세포계수법 분석을 포함한다. 적합한 검정은 다음 실시예에 상세히 기재되어 있다. 상기 항체의 결합 역학 (예를 들어, 결합 친화도)은 또한, 당해 분야에 공지된 표준 검정, 예컨대 비아코어(Biacore) SPR 분석 및 옥텟(Octet) 분석에 의해 평가할 수 있다.
본 발명의 항체는 마우스 모노클로날 항체 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6을 포함한다. 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 VH 아미노산 서열은 표 2에 나타내고, 서열 1, 3, 5, 7, 8, 10 및 12에 각각 제시된다. 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 VL 아미노산 서열은 표 2에 나타내고, 서열 2, 4, 6, 4, 9, 11 및 4에 각각 제시된다.
VH 서열과 VL 서열을 "혼합 및 매치하여" 본 발명의 다른 선택적 토파시티닙 결합성 분자를 창출시킬 수 있다. 이러한 혼합 및 매치된 항체의 토파시티닙 결합성뿐만 아니라 대사물 1 및 2 중 하나 또는 둘 다에 대한 항체의 결합성은 상기 및 다음 실시예에 기재된 결합 검정을 이용하여 시험할 수 있다. 임의로, VH 쇄와 VL 쇄를 혼합 및 매치하는 경우, 특별한 VH/VL 짝짓기로부터의 VH 서열을 구조상 유사한 VH 서열로 대체시킨다. 마찬가지로, 임의로 특별한 VH/VL 짝짓기로부터의 VL 서열을 구조상 유사한 VL 서열로 대체시킨다.
따라서, 한 측면에서, 본 발명은
(a) 서열 1, 서열 3, 서열 5, 서열 7, 서열 8, 서열 10 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 2, 서열 4, 서열 6, 서열 9, 및 서열 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(b) 서열 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(c) 서열 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(d) 서열 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(e) 서열 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(f) 서열 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(g) 서열 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(h) 서열 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
(i) 서열 3, 서열 7 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
(j) 서열 3, 서열 8, 서열 10, 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4, 서열 9 및 서열 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는
단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 그의 조합을 포함하는 항체를 제공한다. 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 VH CDR1의 아미노산 서열은 서열 13, 19, 19, 30, 19, 19, 및 37에 각각 제시된다. 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 의 VH CDR2의 아미노산 서열은 서열 14, 20, 25, 31, 20, 20, 및 38에 각각 제시된다. 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 VH CDR3의 아미노산 서열은 서열 15, 21, 26, 32, 21, 21, 및 39에 각각 제시된다. 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 VL CDR1의 아미노산 서열은 서열 16, 22, 27, 22, 33, 34, 및 22에 각각 제시된다. 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 VL CDR2의 아미노산 서열은 서열 17, 23, 28, 23, 17, 35 및 23에 각각 제시된다. 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 VL CDR3의 아미노산 서열은 서열 18, 24, 29, 24, 18, 36, 및 24에 각각 제시된다. CDR 영역은 카바트 시스템을 이용하여 서술된다 (문헌 [Kabat, E. A., et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)] 참조).
항체 5A3.E5에 대한 중쇄 및 경쇄 CDR은 서열 13, 14, 15, 16, 17, 18을 포함한다. 항체 10A6.C5에 대한 중쇄 및 경쇄 CDR은 서열 19, 20, 21, 22, 23, 및 24를 포함한다. 항체 10F10.H5에 대한 중쇄 및 경쇄 CDR은 서열 19, 25, 26, 27, 28, 및 29를 포함한다. 항체 6D9.A5에 대한 중쇄 및 경쇄 CDR은 서열 30, 31, 32, 22, 23, 및 24를 포함한다. 항체 12H4.G2에 대한 중쇄 및 경쇄 CDR은 서열 19, 20, 21, 33, 17, 및 18을 포함한다. 항체 16F10.E6에 대한 중쇄 및 경쇄 CDR은 서열 19, 20, 21, 34, 35, 및 36을 포함한다. 항체 12D4.G6에 대한 중쇄 및 경쇄 CDR은 서열 37, 38, 39, 22, 23, 및 24를 포함한다.
또한 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체는 앞서 본원에 기재된 항체의 아미노산 서열과 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하고, 이러한 항체는 본 발명의 선택적 항-토파시티닙 항체의 목적하는 기능적 특성을 보유하고 있다.
각종 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어 마우스 항체, 인간화 항체, 또는 마우스 항-토파시티닙 항체로부터 유래된 키메라 항체일 수 있다. 다른 실시양태에서, VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 상기 제시된 서열과 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 두 아미노산 서열 간의 상동률(%)은 두 서열 간의 동일률(%)과 등가이다. 두 서열 간의 동일률(%)은 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려하여, 서열들에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는데, 이들 서열 중 하나 이상은 본원에 기재된 항체를 기초로 하여 명시된 아미노산 서열, 또는 그의 보존적 변형을 포함하고, 상기 항체는 본 발명의 항-토파시티닙 항체의 목적하는 기능적 특성을 보유하고 있다.
또 다른 실시양태에서, 항체는, 예를 들어 마우스 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합성 특징에 상당한 영향을 미치지 않거나 이를 변경시키지 않는 아미노산 변형을 지칭한다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 당해 분야에 공지된 표준 기술, 예컨대 부위 지시된 돌연변이 유발 및 PCR-매개된 돌연변이 유발에 의해 본 발명의 항체 내로 도입할 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기를 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체하는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기 계열은 당해 분야에 정의되었다. 이들 계열은 염기성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 전하를 띠지 않는 극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지된 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소루이신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 따라서, 본 발명의 항체의 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산 잔기를 동일한 측쇄 계열로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체시킬 수 있고, 이와 같이 변경된 항체를 대상으로 하여, 본원에 기재된 기능적 검정을 이용하여 보유된 기능에 관하여 시험할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 항-토파시티닙 항체와 동일한 토파시티닙 상의 에피토프와 결합하는 항체 (즉, 토파시티닙과의 결합을 놓고 본 발명의 항체와 경쟁할 수 있는 능력을 지닌 항체)를 제공한다. 대체 실시양태에서, 경쟁 연구를 위한 참조 항체는 모노클로날 항체 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6일 수 있다. 이러한 경쟁성 항체는 표준 결합 검정에서 토파시티닙과의 결합을 놓고 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 또는 12D4.G6과 경쟁할 수 있는 그의 능력을 기초로 하여 확인할 수 있다. 예를 들어, 비아코어 분석, 옥텟 분석, ELISA 검정 또는 유동 세포계수법을 사용하여 본 발명의 항체와의 교차 경쟁을 입증할 수 있다. 예를 들어, 토파시티닙에 대한 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 또는 12D4.G6의 결합을 저해할 수 있는 시험 항체의 능력 (이러한 시험 항체는 대사물 1 및/또는 대사물 2와 실질적으로 결합하지 않는다)은 시험 항체가 토파시티닙과의 결합을 놓고 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6과 경쟁할 수 있으므로, 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6와 동일한 토파시티닙 상의 에피토프와 결합할 수 있다는 것을 명확하게 보여준다. 추가 실시양태에서, 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6와 동일한 토파시티닙 상의 에피토프와 결합하는 항체는 마우스 모노클로날 항체이다. 이러한 모노클로날 항체는 다음 실시예에 기재된 바와 같거나 또는 당해 분야에 널리 공지된 각종 방법에 의해 제조 및 단리할 수 있다. 다른 실시양태에서, 상기 항체와 경쟁하는 항체는 인간, 인간화 또는 마우스 항체이다.
본 발명의 항체는 출발 항체와는 상이한 특성을 지닐 수 있지만, 출발 물질 항체와 동일하거나 실질적으로 동일한 에피토프와 결합할 수 있는 변형된 항체를 조작하기 위해 출발 물질로서 본원에 개시된 VH 및/또는 VL 서열 중 적어도 하나를 포함하는 항체를 사용하여 제조할 수 있다. 항체는 하나 또는 둘 다의 가변 영역 (즉, VH 및/또는 VL), 예를 들어 하나 이상의 CDR 영역 및/또는 하나 이상의 골격 영역 내의 하나 이상의 잔기를 변형시킴으로써 조작할 수 있다. 부가적으로 또는 또 다른 한편, 항체는, 예를 들어 이러한 항체의 효과기 기능(들)을 변경시키기 위해 불변 영역(들) 내의 잔기를 변형시킴으로써 조작할 수 있다.
본 발명은 본 발명의 토파시티닙 특이적 항체를 암호화하는 핵산을 제공한다. 본 발명의 항체를 암호화하는 핵산은 당해 분야에 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다. 또한, 당업자에 의해 인지되는 바와 같이, 핵산 암호의 축중(degeneracy)로 인해, 광범위한 핵산 서열이 본 발명의 항체의 아미노산 서열을 암호화할 수 있다.
수행될 수 있는 한 가지 유형의 가변 영역 조작은 CDR 이식화이다. 항체는 주로 6개의 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역 (CDR)에 위치하는 아미노산 잔기를 통하여 표적 항원과 상호 작용한다. 이러한 이유로 인해, CDR 내의 아미노산 서열은 CDR 외부의 서열 보다 개개 항체들 간에 더 다양하다. CDR 서열은 대부분의 항체-항원 상호 작용에 대해 책임이 있기 때문에, 상이한 특성을 지닌 상이한 항체로부터의 골격 서열 상으로 이식된 특이적 자연 발생적 항체로부터의 CDR 서열을 포함하는 발현 벡터를 구축함으로써 특이적 자연 발생적 항체의 특성을 모방하는 재조합 항체를 발현시키는 것이 가능하다 (예를 들어, 문헌 [Riechmann et al., 1998, Nature 332:323-327]; [Jones et al., 1986, Nature 321:522-525]; [Queen et al., 1989, Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86:10029-10033]; [미국 특허 번호 5,225,539; 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370] 참조).
따라서, 본 발명의 또 다른 실시양태는 각각 서열 13, 19, 30, 및 37; 서열 14, 20, 25, 31, 및 38; 및 서열 15, 21, 26, 32, 및 39로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 각각 서열 16, 22, 27, 33, 및 34; 서열 17, 23, 28, 및 35; 및 서열 18, 24, 29, 및 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분에 관한 것이다. 이러한 항체는 이와 상이한 골격 서열을 함유할 수 있는 모노클로날 항체 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6의 VH 및 VL CDR 서열을 함유한다. 이러한 골격 서열은 생식세포계 항체 유전자 서열을 포함하는 공개된 참고문헌 또는 공공의 DNA 데이터베이스로부터 수득할 수 있다.
또 다른 유형의 가변 영역 변형은 VH 및/또는 VL CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시킴으로써 관심 항체의 하나 이상의 결합 특성 (예를 들어, 친화성)을 개선시키는 것이다. 부위 지시된 돌연변이 유발 또는 PCR 매개된 돌연변이 유발을 수행하여 상기 돌연변이(들)를 도입할 수 있고, 항체 결합성 또는 기타 기능적 관심 특성에 대한 효과를, 본원에 기재되고 본 실시예에 제공되는 바와 같은 시험관내 또는 생체내 검정에서 평가할 수 있다. 임의로, 보존적 변형 (상기 논의된 바와 같음)을 도입한다. 돌연변이는 아미노산 치환, 부가 또는 결실일 수 있다. 더욱이, 전형적으로 CDR 영역 내의 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 잔기를 변경시킨다.
또한 또 다른 실시양태에서, 본 발명은
(a) 서열 13, 19, 30, 및 37로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 13, 19, 30, 및 37과 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1 영역; (b) 서열 14, 20, 25, 31, 및 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 14, 20, 25, 31, 및 38과 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2 영역; (c) 서열 15, 21, 26, 32, 및 39로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 15, 21, 26, 32, 및 39와 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3 영역; (d) 서열 16, 22, 27, 33, 및 34로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 16, 22, 27, 33, 및 34와 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1 영역; (e) 서열 17, 23, 28, 및 35로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 17, 23, 28, 및 35와 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 영역; 및 (f) 서열 18, 24, 29, 및 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 18, 24, 29, 및 36과 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3 영역
을 포함하는, 단리된 항-토파시티닙 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합성 부분을 제공한다.
본 발명의 조작된 항체는, 예를 들어 항체의 특성을 개선시키기 위해 VH 및/또는 VL 내의 골격 잔기에 대한 변형이 이루어진 항체를 포함한다. 전형적으로, 이러한 골격 변형은 항체의 면역원성을 저하시키기 위해 이루어진다. 예를 들어, 한 가지 접근방식은 하나 이상의 골격 잔기를 상응하는 생식세포계 서열 ("생식세포계성"으로 지칭되기도 함)로 "복귀 돌연변이"시키는 것이다. 더 구체적으로 언급하면, 체세포 돌연변이를 진행한 항체는 이러한 항체가 유래되는 생식세포계 서열과 상이한 골격 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 골격 서열을, 이러한 항체가 유래되는 생식세포계 서열과 비교함으로써 확인할 수 있다.
또 다른 유형의 골격 변형은 골격 영역 내의 하나 이상의 잔기, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜 T 세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적 면역원성을 저하시키는 것을 포함한다. 이러한 접근 방식은 또한, "탈면역"으로서 지칭되고, 미국 특허 공개 번호 2003/0153043에 추가로 상세히 기재되어 있다. 골격 또는 CDR 영역 내에서 이루어진 변형 이외에도, 또는 이러한 변형에 대한 대안으로, 본 발명의 항체는, 전형적으로 항체의 한 가지 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정화, Fc 수용체 결합성 및/또는 항원-의존성 세포성 세포독성을 변경시키기 위해, Fc 영역 내의 변형을 포함하도록 조작될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 항체는 화학적으로 변형시킬 수 있거나 (예를 들어, 하나 이상의 화학적 부분을 항체에 부착시킬 수 있다) 또는 그의 글리코실화를 변경하도록 변형시킬 수 있다.
본 발명에 의해 고려되는 본원의 항체의 또 다른 변형은 페길화이다. 항체는, 예를 들어 이러한 항체의 생물학적 (예를 들어, 혈청) 반감기를 증가시키기 위해 페길화할 수 있다. 항체를 페길화시키기 위해서는, 이러한 항체 또는 그의 단편을 전형적으로, 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 기가 상기 항체 또는 항체 단편에 부착되도록 하는 조건 하에, PEG를 포함한 중합체, 예컨대 PEG의 반응성 에스테르 또는 알데히드 유도체와 반응시킨다. 또 다른 한편, 페길화는 반응성 PEG 분자 (또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 통하여 수행된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질, 예컨대 모노 (C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 유도체화하기 위해 사용되어 왔던 PEG의 모든 형태를 포괄하기 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 페길화시키고자 하는 항체는 아글리코실화(aglycosylated) 항체이다. 단백질을 페길화시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 본 발명의 항체에 적용할 수 있다.
항체의 조작 방법
상기 논의된 바와 같이, 본원에 개시된 VH 및 VL 서열을 갖는 선택적 항-토파시티닙 항체를 사용하여, VH 및/또는 VL 서열, 또는 이에 부착된 불변 영역(들)을 변형시킴으로써 새로운 항-토파시티닙 항체를 창출시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 또 다른 측면에서, 본 발명의 항-토파시티닙 항체의 구조적 특색을 이용하여, 본 발명의 항체의 한 가지 이상의 기능적 특성, 예컨대 토파시티닙과는 결합하지만 대사물 1 및/또는 대사물 2와는 실질적으로 결합하지 않는 특성을 보유하고 있는, 구조적으로 관련된 항-토파시티닙 항체를 창출시킨다. 예를 들어, 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5, 12H4.G2, 16F10.E6, 및/또는 12D4.G6의 하나 이상의 CDR 영역, 또는 그의 돌연변이물을 공지된 골격 영역 및/또는 기타 CDR과 재조합적으로 조합하여 상기 논의된 바와 같은, 부가의 재조합적으로 조작된 항-토파시티닙 항체를 창출시킬 수 있다. 기타 유형의 변형은 앞서 섹션에 기재된 것을 포함한다. 조작 방법에 대한 출발 물질은 본원에 제공된 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상이거나, 또는 그의 하나 이상의 CDR 영역이다. 이와 같이 조작된 항체를 창출시키기 위해, 본원에 제공된 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상, 또는 그의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는 항체를 실제로 제조 (즉, 단백질로서 발현)할 필요는 없다. 오히려, 이들 서열(들) 내에 함유된 정보를 출발 물질로서 사용하여 본래의 서열(들)로부터 유래된 "차세대" 서열(들)을 창출시킨 다음, 이러한 "차세대" 서열(들)을 단백질로서 제조 및 발현시킨다.
표준 분자 생물학 기술을 이용하여, 상기와 같이 변경된 항체 서열을 제조 및 발현할 수 있다.
임의로, 변경된 항체 서열(들)에 의해 암호화된 항체는 본원에 기재된 항-토파시티닙 항체의 한 가지, 일부, 또는 모든 기능적 특성을 보유하고 있는 것인데, 이러한 기능적 특성은 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다:
(i) 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1과 실질적으로 결합하지 않는 특성; 및/또는
(ii) 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2와 실질적으로 결합하지 않는 특성.
변경된 항체의 기능적 특성은 당해 분야에서 이용 가능하고/하거나 본원에 기재된 표준 검정뿐만 아니라 당해 분야에 공지된 검정 또는 미래에 발견될 검정을 이용하여 평가할 수 있다.
본 발명의 항체를 조작하는 방법의 특정 실시양태에서, 돌연변이를 항-토파시티닙 항체 암호화 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위 또는 선택적으로 도입할 수 있고, 이로써 생성된 변형된 항-토파시티닙 항체를 대상으로 하여, 결합 활성 및/또는 본원에 기재된 바와 같은 기타 기능적 특성에 관하여 스크리닝할 수 있다. 돌연변이 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
본 발명의 모노클로날 항체의 생성
본 발명의 모노클로날 항체 (mAb)는 통상적인 모노클로날 항체 방법론을 포함한 각종 기술에 의해 생성될 수 있다. 본 발명의 마우스, 래트, 토끼, 낙타과 동물 및 인간 모노클로날 항체는 또한, 이들 또는 기타 많은 종으로부터의 면역글로불린 유전자의 라이브러리를 스크리닝하기 위한 파지 디스플레이 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 이러한 항체를 단리하기 위한 파지 디스플레이 방법은 당해 분야에 확립되었고, 면역된 동물 또는 인간으로부터 제조된 파지 디스플레이 라이브러리, 또는 본래의 출발 물질이 면역된 동물로부터 유래되지 않은 타고난 본래의 파지 디스플레이 라이브러리를 포괄한다. 파지 디스플레이는 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 미국 특허 번호 5,223,409, WO 91/17271, WO92/20791; 및 WO 92/15679에 기재되어 있다.
본 발명의 모노클로날 항체는 또한, 이러한 모노클로날 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 적합한 조건 하에 배양하고, 상기 항체 또는 그의 항원 결합성 부분을 회수함으로써 제조할 수 있다. 이러한 숙주 세포 배양 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
사용 방법
본 개시내용은 추가로, 토파시티닙을 함유하는 것으로 의심되는 샘플을 제공하는 단계; 이러한 샘플 또는 샘플 추출물을, 토파시티닙에 대해 특이적인 항체가 토파시티닙과 결합하여 검정 혼합물을 형성하는 데 적합한 조건 하에, 상기 항체와 접촉시키는 단계; 및 토파시티닙에 대한 상기 항체의 결합을 탐지하는 단계를 포함하는, 특정 샘플 중의 토파시티닙의 존재 또는 농도를 평가하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 특정 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 결정하는 방법을 제공한다. 이 방법은 탐지 가능한 표지와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 표지된 경쟁인자를 제공하는 단계; 토파시티닙과는 결합하지만 대사물 1 및/또는 2와는 결합하지 않는 선택적 항-토파시티닙 항체를 제공하는 단계; 상기 샘플, 선택적 항-토파시티닙 항체, 및 표지된 경쟁인자를 합하는 단계 (여기서, 이러한 샘플 중의 토파시티닙은 선택적 항-토파시티닙 항체와의 결합을 놓고 표지된 경쟁인자와 경쟁한다); 및 표지를 탐지함으로써 항체와 결합되지 않은 표지된 경쟁인자의 양을 측정함으로써 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 결정하는 단계를 포함한다. 예시적 실시양태에서, 표지된 경쟁인자 (토파시티닙)의 양은 토파시티닙을 함유하지 않은 샘플 중에서 탐지하고, 이러한 샘플에서 탐지된 표지의 양을, 토파시티닙이 존재할 수도 있는 샘플 중의 표지의 양과 비교한다. 토파시티닙의 부재 하에서 탐지된 표지의 양과 토파시티닙을 함유하는 것으로 의심되는 샘플 중의 표지의 양 간의 차이를 측정한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 특정 샘플 중의 토파시티닙의 존재 또는 부재를 결정하기 위한 경쟁적 면역검정 키트를 제공한다. 예시되는 경쟁적 면역검정 키트, 예컨대 효소 결합 면역검정 (ELISA)은 토파시티닙과 특이적으로 결합할 수 있는 항체; 및 탐지 가능한 표지와 접합된 토파시티닙 화합물을 포함하는데, 이와 같이 접합된 토파시티닙 화합물은 상기 항체와의 결합을 놓고 특정 샘플 중의 토파시티닙과 경쟁하고; 상기 표지는 샘플 중의 토파시티닙이 치료적 약물 모니터링 농도로 존재하는 경우에 이러한 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 표시하는 신호를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 토파시티닙의 치료적 범위 내의 약물의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙의 존재를 결정하기 위한 경쟁적 면역검정을 제공한다. 그러나, 이는 더 넓은 범위에 걸쳐 정보를 제공하는 데 유용할 수 있고, 면역검정 범위가 일반적으로, 치료적 범위 보다 더 넓은 것으로 이해된다. 따라서, 치료적 약물 농도를 모니터링하는 면역검정은 더 넓은 범위의 토파시티닙 농도에 걸쳐 민감도를 제공할 수 있다. 한 측면에서, 경쟁적 면역검정은 약 0 내지 약 1,500 ng/ml의 범위의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙의 존재를 모니터링하는 데 적합하다. 또 다른 측면에서, 경쟁적 면역검정은 약 5 내지 약 1,215 ng/ml의 범위의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙의 존재를 모니터링하는 데 적합하다. 또 다른 측면에서, 경쟁적 면역검정은 약 5 내지 약 500 ng/ml의 범위의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙의 존재를 모니터링하는 데 적합하다. 또 다른 측면에서, 경쟁적 면역검정은 약 5 내지 약 405 ng/ml의 범위의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙의 존재를 모니터링하는 데 적합하다. 또 다른 측면에서, 경쟁적 면역검정은 약 15 내지 약 1,215 ng/ml의 범위의 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙의 존재를 모니터링하는 데 적합하다.
한 경쟁적 면역검정에서, 표지된 경쟁인자는 면역원성 토파시티닙 접합체의 연쇄와 동일하거나 유사한 연쇄를 이용하여 토파시티닙으로부터 유래될 수 있다. 일부 경쟁적 면역검정에서는, 토파시티닙이 항-토파시티닙 항체와 결합하는 것보다 덜한 특이도로, 표지된 경쟁인자가 항-토파시티닙 항체와 결합하는 것이 바람직한데, 이로써 표지된 경쟁인자는 토파시티닙의 존재 하에 더 용이하게 대체될 수 있다.
본원에 기재된 항체, 면역원성 토파시티닙 접합체, 표지된 경쟁인자 및/또는 기타 접합체는 또한, 일정 범위의 탐지 시스템을 수반한 기타 수많은 동질적 및 이질적 면역검정 중 어느 것과도 함께 사용하는 데 적합하다. 본 명세서에 제시된 예는 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
따라서, 본 발명은 토파시티닙을 탐지하기 위한 면역검정에 사용하기 위한 면역원 및 접합체의 제조에 유용한 토파시티닙 접합체를 제공한다. 본 발명에 따르는 토파시티닙 유사체를 면역원성 담체 물질과 커플링시킴으로써, 토파시티닙을 탐지하기 위한 면역검정에 유용한 시약인 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 생성 및 단리할 수 있다. 커플링은 표지 또는 담체와 결합하게 될 어떠한 화학적 반응에 의해서도 수행될 수 있다.
예시되는 토파시티닙 면역검정은 폴리클로날 또는 모노클로날일 수 있는 항-토파시티닙 항체를 이용한다. 예시되는 경쟁적 면역검정에서, 사용된 항체 제제는 본원에 기재된 면역원에 의해 유도되고, 완충액 등과 같은 수용액에서 제제화되거나, 또는 아주반트 또는 유사한 조성물에 제공된다. 이와 같이 유도된 항체를 시험하여 토파시티닙에 대한 특이성을 결정할 수 있다.
본원에 기재된 항체 및 표지된 경쟁인자는 또한, 일정 범위의 탐지 시스템을 수반한 기타 수많은 동질적 및 이질적 면역검정 중 어느 것과도 함께 사용하는 데 적합하다.
키트
본 발명은 하나 이상의 선택적 항-토파시티닙 항체를 포함하는, 특정 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 결정하기 위한 키트를 제공한다. 한 측면에서, 이러한 키트는 추가로, 탐지 가능한 표지와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 표지된 경쟁인자를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 표지된 경쟁인자는 항-토파시티닙 항체와의 결합을 놓고 특정 샘플 중의 토파시티닙과 경쟁한다. 또 다른 측면에서, 선택적 항-토파시티닙 항체는 면역원성 담체와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 면역원성 토파시티닙 접합체를 이용하여 생성된다. 키트는 또한, 국소 기구 및/또는 키트의 사용에 관한 교재를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 특정 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 결정하기 위한 키트를 포함하는데, 이러한 키트는 토파시티닙과는 결합하지만 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 대사물과는 실질적으로 결합하지 않는 하나 이상의 선택적 토파시티닙 항체를 포함한다. 한 측면에서, 상기 키트는 토파시티닙과는 결합하지만, 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1과는 실질적으로 결합하지 않고 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2와도 실질적으로 결합하지 않는 하나 이상의 선택적 토파시티닙 항체를 포함한다. 한 측면에서, 상기 키트는 국소 기구를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 키트는 키트의 사용에 관한 교재를 포함한다.
한 측면에서, 키트는 5 ng/ml 내지 1,215 ng/ml의 범위의 토파시티닙의 농도를 탐지할 수 있다. 또 다른 측면에서, 키트는 5 ng/ml 내지 405 ng/ml의 범위의 토파시티닙의 농도를 탐지할 수 있다. 또한 또 다른 측면에서, 키트는 15 ng/ml 내지 1,215 ng/ml의 범위의 토파시티닙의 농도를 탐지할 수 있다.
본 발명은 다음 실시예에 의해 추가로 예시되지만, 이로써 추가 제한되는 것으로 간주되지 말아야 한다. 모든 도면, 및 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고문헌, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용은 분명하게도 본원에 참조로 포함된다.
실시예
실시예 1:
토파시티닙과 숙신산과의 접합
40 mg 숙신산 무수물 및 0.2 ml TEA (50 mM 트리에탄올아민, 50 mM KCl, 20 mM MgCl2, pH 7.5)를 0.8 ml 아세토니트릴 중의 47 mg 토파시티닙의 용액에 가하였다. 반응 혼합물을 60℃의 온도 하에 1시간 동안 진탕시켰다. 1시간째에, 50 mg 숙신산 무수물을 상기 반응 혼합물에 더 가한 다음, 진탕시키면서 60℃ 하에 하나의 항온배양물을 가하였다. 0 내지 30% 아세토니트릴 (ACNN)의 이동 상 구배로 HPLC 정제한 후 정제된 물질을 수득하고 25.2 mg의 화학식 IV의 토파시티닙 헤미숙시네이트 중간체를 제공하였다.
<화학식 IV>
Figure pct00024

실시예 2:
BSA 와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 면역원성 토파시티닙 접합체의 합성
1.5 mg의 화학식 IV의 화합물을 2 ml 1-에틸-3-[3-디메틸아미노-프로필]카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 접합 완충액 (0.1 M MES, 0.9 M NaCl, 0.02% NaN3, pH 4.7)에 용해시켰다. 8 mg BSA [피어스(Pierce) #77601로부터 수득된 임젝트(Imject) BSA]를 0.8 ml 물에 용해시킨 다음, 이를 화학식 IV 용액과 혼합하였다. 그 다음, 10 mg EDC를 0.1 ml H2O에 용해시킨 다음, BSA, 화학식 IV 혼합물에 바로 가하였다. 이 혼합물을 실온 하에 2시간 동안 온화하게 진탕시켰다. 혼합물을 침강시키고, 토파시티닙-BSA 접합체 (화학식 V)를 함유하는 상등액을, 당업자에게 공지된 표준 탈염 방법에 따라서 탈염시킴으로써 정제하였다. 토파시티닙과 BSA의 접합은 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화 (MALDI)에 의해 확증하였다.
<화학식 V>
Figure pct00025

실시예 3:
BSA 와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 면역원성 토파시티닙 접합체의 합성
1.5 mg의 화학식 IV의 화합물을 1.5 ml EDC 접합 완충액에 용해시켰다. 10 mg EDC를 0.2 ml 물에 용해시킨 다음, 화학식 IV 용액 내로 바로 가하였다. 화학식 IV/EDC 혼합물을 0.6 ml 매리컬처(Mariculture) 키홀 림펫 헤모시아닌 (mcKLH, 피어스 #77601로부터 수득됨) 용액 (수중 10 mg/ml) 내로 가하였다. 이 반응 혼합물을 실온 하에 2시간 동안 온화하게 진탕시켰다. 혼합물을 침강시키고, 토파시티닙-KLH 접합체 (화학식 VI)를 함유하는 상등액을, 당업자에게 공지된 표준 탈염 방법에 따라서 탈염시킴으로써 정제하였다.
<화학식 VI>
Figure pct00026

실시예 4:
토파시티닙 표지된 경쟁인자의 합성
토파시티닙 표지된 경쟁인자의 한 가지 예시적 예는 화학식 VII의 바이오티닐화 토파시티닙 유도체이다. 이러한 화학식 VII의 바이오티닐화 토파시티닙 유도체는 다음과 같이 제조하였다.
18 mg의 화학식 IV의 화합물 및 20 mg EDC를 1 ml EDC 접합 완충액에 용해시켰다. 0.1 ml 아세토니트릴을 가하여 상기 화합물을 용해시키는 데 도움을 주었다. 10 ㎕ 5 M NaOH를 부가하여 상기 용액의 pH를 5.5로 조정하였다. 그 다음, 23 mg 아민-PEG3-바이오틴을 가하였다. 이 혼합물을 실온 하에 밤새 진탕시켰다. 밤새 항온 배양한 후, 바이오티닐화 토파시티닙 (화학식 VII)을 0 내지 30% ACN의 이동 상 구배로 HPLC함으로써 정제하여 14 mg의 정제된 화합물을 제공하였다.
<화학식 VII>
Figure pct00027

실시예 5:
항- 토파시티닙 항체의 생성
폴리클로날 및 모노클로날 항체를 본질적으로 문헌 ([Kohler and Milstein, Nature 256:495-497(1975)]에 기재된 바와 같이, 통상적인 기술을 사용함으로써 생성하였다. 3마리 암컷 Balb/C 마우스를, 완전 프로인트(Freund) 아주반트 중의 실시예 3의 면역원성 토파시티닙-KLH 접합체 100 ㎍을 복강내 (ip) 주사함으로써 면역시켰다. 초기 주사 후 10, 20 및 30일째에 불완전 프로인트 아주반트 중의 면역원성 토파시티닙-KLH 접합체 50 ㎍/마우스를 포함하는 3회 후속 주사제를 복강내 투여하였다. 혈청을 37일째에 수집하고, 상기 항원에 대해 반응성인 항체의 존재를, 다음에 기재되는 바와 같이 실시예 2의 면역원성 토파시티닙-BSA 접합체에 대항하여 고체 상 ELISA함으로써 결정하였다.
고체 상 ELISA : 실시예 2의 면역원성 토파시티닙-BSA 접합체를 미세역가 판의 웰에 고정화시켰다. 구체적으로 언급하면, 미세역가 판을 실온 하에 1 내지 2시간 동안 또는 4℃ 하에 밤새 코팅 완충액 [0.2 M 탄산염 완충액 (BuPH 탄산염-중탄산염 완충제 팩, 피어스 아이템 #28382] 중의 2 내지 10 ㎍/ml 토파시티닙-BSA 접합체로 코팅한 다음, 실온 하에 1시간 동안 또는 4℃ 하에 밤새 차단 완충액 [1% (w/v) BSA를 함유하는 PBS]으로 포화시키고, 세척 완충액 [0.5% (v/v) 트윈(Tween) 20을 함유하는 PBS]으로 3회 세척하였다. 스크리닝하고자 하는 항체 샘플 (즉, 마우스 혈청 또는 하이브리도마 상등액)을 희석액 (PBS 중의 BSA 0.1% 용액)에 희석시켰다. 이와 같이 희석된 항체 샘플을 미세역가 판에 가하고, 이 판을 실온 하에 1 내지 2시간 동안 항온 배양하였다. 결합되지 않은 모든 물질을 세척 완충액으로 세척 제거한 후, 토끼 또는 염소 항-마우스 과산화효소-접합된 2차 항체 (IgG 특이적)를 희석제 중에 권장되거나 실험적으로 유도된 희석도 (통상적으로 1/1,000 내지 1/10,000)로 사용하여, 결합된 항-토파시티닙 항체의 수준을 결정하였다. 실온 하에 30분 동안 항온 배양하고 세척 완충액으로 3회 세척한 후, 발색 기질인 OPD (o-페닐렌디아민)를 가한 다음, 20분 동안 색상을 현상하고, 50 ㎕ 2 N 황산을 가함으로써 중지시켰다. 490 nm 하에서의 흡광도를 측정하였다. 도 1은 고체 상 ELISA에 의해 결정된 바와 같은, 실시예 2의 토파시티닙-BSA 접합체에 대한 혈청 항체의 결합성을 도시한 그래프이다. 도 1에서 입증된 바와 같이, 항원에 대해 반응성인 항체가 마우스 1, 2 및 3 각각에 존재하였다. 마우스 3은 가장 높은 역가 (50% 최대 신호에서의 혈청의 희석도로서 정의됨)를 나타냈기 때문에, 이러한 마우스가 하이브리도마 생성을 위해 선택되었다.
하이브리도마 생성: 가장 높은 혈청 항체 역가 (50% 최대 신호에서의 혈청의 희석도로서 정의됨)를 명확하게 보여주는 마우스인 마우스 3에게 25 ㎍의 항원을 포함하는 부스터 주사제를 투여하였다. 3일 후, 마우스를 희생시키고, 그의 비장 세포를 단리하며, 이를 표준 융합 프로토콜에 따라서 NS1 골수종 세포와 융합시켰다. 모 클론으로 불리우는 이들 클론의 혼합물을, 토파시티닙과 결합할 수 있는 항체를 분비하는 모 클론을 확인하기 위해 면역원성 토파시티닙-BSA에 대항하여 고체 상 ELISA (상기 언급됨)에 의해 융합시킨 후 10일째에 스크리닝하였다. 양성 모 클론을 추가 분석용으로 선택하였다.
상기 융합으로부터 비롯되는 이들 양성 모 클론을 96 웰 판에서 24 웰 판으로 확장시키고, 3일 후에 재스크리닝하여, 상기 클론이 여전히 항체를 생성하고 있었다는 것을 보장하였다. 이러한 재스크린으로부터, 양성 하이브리도마 (즉, 면역원성 토파시티닙-BSA 접합체와는 결합할 수 있었지만, 대사물-1-BSA, 대사물-2-BSA와는 결합하지 않았던 항체를 분비한 하이브리도마)를 수반하는 것으로 선택된 웰을 미래 사용을 위해 동결시키고, 서브클로닝하여 양성 세포주를 단리하였다.
면역원성 토파시티닙-BSA 접합체와 결합할 수 있는 항체를 분비하는, 상기 선택된 양성 모 클론을 제한 희석함으로써 서브클로닝하여 모노클로날 하이브리도마 세포주를 수득하였다. 서브클로닝한지 대략 10일 후에, 작은 용적의 매질을 상기 웰로부터 제거하고 고체 상 ELISA에 의해 스크리닝하여 항체-생성 클론을 확인하였다. 선택된 양성 클론을 확장하고 재스크리닝하여 상기 클론이 여전히 항체를 생성하고 있었다는 것을 보장하였고 특이성을 확증하였다. 클론 6D9.A5 및 12D4.G6을 포함한, 모 세포주당 2개 이하의 양성 클론을, 2개 바이알 각각을 동결시킴으로써 확장하였다. 1 ml 상등액을 또한 시험용으로 수집하였다.
상기 실시예 5에 기재된 직접 고체 상 ELISA 이외에도, 실험적 샘플 중의 토파시티닙을 탐지하기 위한 경쟁적 면역검정 포맷을 포함한, 또 다른 면역검정 포맷을 개발하였다. 예시되는 경쟁적 면역검정 프로토콜이 다음에 제공된다.
토파시티닙이 강력한 면역억제제인 것을 고려해 보면, 토파시티닙에 대한 항체의 생성은 놀라운 일이었다. 훨씬 더 놀라운 것은 다음에 나타낸 바와 같이, 이러한 항체가 토파시티닙과 그의 2개 대사물 간을 구별지어, 토파시티닙과는 선택적으로 결합하지만 어느 하나의 대사물 또는 둘 다의 대사물과는 실질적으로 결합하지 않는 상기 항체의 정교한 선택성이었다.
경쟁적 항- 토파시티닙 면역검정-1
상기 실시예 5에 기재된 직접 고체 상 ELISA를 경쟁적 ELISA로 전환시켰는데, 여기서는 규정된 양의 모노클로날 항체가 면역 혈청 샘플 또는 하이브리도마 상등액을 대체한 다음, 경쟁인자 (즉, 토파시티닙, 토파시티닙 대사물)를 모노클로날 항체 용액에 가하며, 이러한 경쟁인자의 존재 및 부재 하에 토파시티닙-BSA 접합체에 대한 모노클로날 항체의 결합성을 측정하였다.
경쟁적 항- 토파시티닙 면역검정-2
미세역가 판을 실온 하에 3시간 동안 코팅 완충액 중의 100 ㎕/웰의 1 ㎍/ml 정제된 항-토파시티닙 항체로 코팅한 다음, 실온 하에 30분 동안 300 ㎕/웰 차단 완충액 (1% 무지방 분유 분말을 함유하는 PBS)으로 대체하고, 세척 완충액 (0.5% 트윈 20을 함유하는 PBS)으로 3회 세척하였다. 바이오티닐화 토파시티닙 (0.03 ㎍/ml), 표지되지 않은 경쟁인자, 예컨대 토파시티닙 (1.0 내지 0.001 ㎍/ml), 대사물 1 또는 대사물 2, 및 스트렙타비딘-HRP (1:16,000 희석도는 로트에 따라 다양할 수 있다)를 함유하는 혼합물 100 ㎕/웰을 가하고, 실온 하에 2시간 동안 항온 배양하였다. 3회 세척한 후, 100 ㎕ OPD 기질을 가한 다음, 20분 동안 색상을 현상하고, 50 ㎕ 2 N 황산을 가함으로써 상기 반응을 중지시켰다. 450 nm 하에서의 흡광도를 측정하였다.
경쟁적 항- 토파시티닙 면역검정-3
항-토파시티닙 MAb (1/100 내지 1/1,638,400 희석도), 바이오티닐화 토파시티닙 (1 ng/ml), 및 표지되지 않은 경쟁인자, 예컨대 토파시티닙 (1,000 내지 0.001 ng/ml), 대사물 1 (400 내지 0.097 ng/ml) 또는 대사물 2를 함유하는 혼합물 200 ㎕/웰을 염소 항-마우스 IgG 예비-코팅된 판 내로 가하고, 실온 하에 1 내지 2시간 동안 항온 배양하였다. 판을 세척한 후, 200 ㎕의 스트렙타비딘-HRP (50 ng/ml)을 가한 다음, 상기 판을 실온 하에 0.5 내지 1시간 동안 항온 배양하였다. 판을 다시 세척한 후, 200 ㎕의 TMB (3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘) 기질을 가한 다음, 30분 동안 색상을 현상하고, 50 ㎕ 2 N 황산을 가함으로써 상기 반응을 중지시켰다. 450 nm 하에서의 흡광도를 측정하였다.
실시예 6:
바이오티닐화 토파시티닙에 대한 항- 토파시티닙 모노클로날 항체의 결합성
선택된 항체를 대상으로 하여 표준 ELISA에 의해 토파시티닙에 대한 결합성을 알아보기 위해 추가로 시험하였다. 간략하게 언급하면, 총 34개 클론을 대상으로 하여 바이오티닐화 토파시티닙에 대한 결합성에 관하여 스크리닝하였다. ELISA의 포맷은 다음과 같다. 바이오티닐화 토파시티닙 (1 ng/ml)을 예비-코팅된 염소 항-마우스 IgG 판 상에서 1:100 내지 1:1,638,400의 범위의 희석도의 항체와 함께 1시간 동안 항온 배양하였다. 결합되지 않은 모든 물질을 세척 제거한 후, 항체에 대한 바이오티닐화 토파시티닙의 결합성을, 공지된 방법에 따라서 스트렙타비딘-HRP 및 관련 발색 기질 TMB를 부가한 후에 측정하였다.
도 2는 ELISA에 의해 결정된 바와 같은, 바이오티닐화 토파시티닙에 대한 선택된 항-토파시티닙 항체의 결합성을 도시한 그래프이다. 11개 항체가 농도 의존적 방식으로 바이오티닐화 토파시티닙과 결합하는 것으로 밝혀졌다. 이들 항체 중 10개에 대한 데이터가 도 2에 도시되어 있고, 항체 8B5.F2에 대한 데이터는 도시되지 않는다.
이들 11개 클론을 추가 분석용으로 선택하였다. 구체적으로 언급하면, 이들 11개 클론을 대상으로 하여 토파시티닙 대사물 1과의 교차 반응성에 관하여 평가하였다.
실시예 7:
대사물 1에 대한 항- 토파시티닙 모노클로날 항체의 결합성
토파시티닙 대사물이 경쟁인자로서 사용되는 상기 언급된 경쟁적 면역검정-3을 이용하여 교차 반응성을 측정함으로써, 항체를 토파시티닙 또는 그의 대사물과의 결합성으로서 추가로 명확히 규명하였다.
본 실시예의 경우에는, 11개 항-토파시티닙 모노클로날 항체를 대상으로 하여 경쟁적 면역검정을 이용하여 대사물 1과의 교차 반응성에 관하여 스크리닝하였다. 항-토파시티닙 MAb (1/100 내지 1/1,638,400 희석도), 바이오티닐화 토파시티닙 (1 ng/ml), 및 대사물 1 (400 내지 0.097 ng/ml)을 함유하는 혼합물 200 ㎕/웰을 염소 항-마우스 IgG 예비-코팅된 판 내로 가하고, 실온 하에 1 내지 2시간 동안 항온 배양하였다. 판을 세척한 후, 200 ㎕의 스트렙타비딘-HRP (50 ng/ml)을 가한 다음, 실온 하에 0.5 내지 1시간 동안 항온 배양하였다. 판을 다시 세척한 후, 200 ㎕의 TMB 기질을 가한 다음, 30분 동안 현상하고, 50 ㎕ 2 N 황산을 가함으로써 중지시켰다. 450 nm 하에서의 흡광도를 측정하였다.
도 3은 경쟁적 면역검정을 이용하여 결정된 바와 같은, 대사물 1에 대한 선택된 항-토파시티닙 항체의 교차 반응성을 도시한 그래프이다. 도 3에 명확히 제시된 바와 같이, 4개의 항체는 농도 의존적 방식으로 대사물 1에 대한 교차 반응성을 명확히 보여주었다 (예를 들어, 클론 7C10.C11, 1B2.B9, 11G10.F12, 및 8B5.F2). 7개 클론, 예를 들어 5A3.E5, 10A6.C5, 10F10.H5, 6D9.A5 (또는 6D9.A8), 12H4.G2, 16F10.E6, 및 12D4.G6은 이들이 토파시티닙과는 결합하였지만, 대사물 1과는 탐지 가능하게 결합하지 않았다는 점에서 선택적이었다. 7개 클론에 대한 이들 플롯은 도 3에 도시된 그래프의 상단 전체에 걸쳐 대략 일직선으로 진행되는 선으로서 표시된다. 더 구체적으로 언급하면, 도 3에 도시된 그래프를 제조하기 위해 사용된 데이터는 다음과 같다:
<표 1>
Figure pct00028

대사물 1과 교차 반응성을 나타내지 않았던 7개 클론을 대상으로 하여 모 약물을 이용한 억제에 관하여 추가로 시험하였다.
대사물 1과 교차 반응성을 나타내지 않았던 7개 모노클로날 항체 클론의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열이 다음 표 2에 제공되어 있다.
<표 2>
Figure pct00029

Figure pct00030

a 상보성 결정 영역 (CDR)은 IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정된 바와 같이 진하게 밑줄처져 있다 (문헌 [Lefranc, M.-P. et al., 1999, Nucleic Acids Research 27:209-212] 참조).
b 항체 클론 6D9.A8 및 16F10.E2는 보존 과정에서 생존하지 못하였다. 이러한 이유로 인해, 동일한 모 세포주로부터 서브클로닝된 클론 6D9.A5 및 16F10.E6의 서열을 분석하였다.
실시예 8:
항원 경쟁
본 실시예의 경우에는, 경쟁적 면역검정 포맷을 이용하여, 대사물-1과 교차 반응하지 않은 것으로 선택된 항체 클론이 바이오티닐화 토파시티닙과 결합할 수 있는 능력을 토파시티닙이 억제하였는지를 결정하였다. 대사물-1과 교차 반응하지 않은 것으로 선택된 항체 클론을, 초기 항체 적정으로부터 결정된 그의 EC50 희석도에서 검정하였다 (도 2 참조). 항-토파시티닙 MAb (1/100 내지 1/1,638,400 희석도), 바이오티닐화 토파시티닙 (1 ng/ml), 및 표지되지 않은 토파시티닙 (1,000 내지 0.001 ng/ml)을 함유하는 혼합물 200 ㎕/웰을 염소 항-마우스 IgG 예비-코팅된 판 내로 가하고, 실온 하에 1 내지 2시간 동안 항온 배양하였다. 판을 세척한 후, 200 ㎕의 스트렙타비딘-HRP (50 ng/ml)을 가한 다음, 실온 하에 0.5 내지 1시간 동안 항온 배양하였다. 판을 다시 세척한 후, 200 ㎕의 TMB 기질을 가한 다음, 30분 동안 현상하고, 50 ㎕ 2 N 황산을 가함으로써 중지시켰다. 450 nm 하에서의 흡광도를 측정하였다.
다음 표 3에 명확히 나타낸 바와 같이, 클론 6D9.A8 및 12D4.G6을 이용한 경우에 경쟁이 관찰되었다. 구체적으로 언급하면, 표지되지 않은 토파시티닙에 의한 바이오티닐화 토파시티닙에 대한 결합성의 억제가 클론 6D9.A8 및 12D4.G6의 경우에 관찰되었는데, ED50은 각각 202 ng/ml 및 104 ng/ml였다. 다음 표 3은 본 실험에 대한 ED20, ED50 및 ED80을 보여준다.
<표 3>
Figure pct00031

실시예 9:
대사물 1 및 대사물 2에 대한 항- 토파시티닙 모노클로날 항체의 결합성:
2개의 클론 6D9.A8 및 12D4.G6을 대상으로 하여, 대사물 1 및 2에 대한 교차 반응성에 관하여 시험하였다. 이 실험에서는, 대사물을 200,000 내지 200 ng/ml의 농도로 제조하였고, 항체 클론을 표 1에 제시된 그의 EC50 희석도로 제조하였다. 대사물을 1시간 동안 예비-코팅된 염소 항-마우스 IgG 판 상에서 바이오티닐화 토파시티닙 (1 ng/ml) 및 항체와 함께 항온 배양하였다. 결합되지 않은 모든 물질을 세척 제거한 후, 항체에 대한 바이오티닐화 토파시티닙의 결합성을, 공지된 방법에 따라서 스트렙타비딘-HRP 및 관련 발색 기질 TMB를 부가한 후 측정하였다.
다음 표 4에는 대사물-1 및 대사물-2에 대한 클론 6D9.A8 및 12D4.G6의 교차 반응성이 요약되어 있다.
<표 4>
Figure pct00032

표 4에 나타낸 바와 같이, 클론 6D9.A8은 대사물 1 및 2 각각에 대한 교차 반응도 3.68% 및 0.38%을 나타내었고; 클론 12D4.G6은 은 대사물 1 및 2 각각에 대한 교차 반응도 4.17% 및 0.15%를 나타냈다. 이들 데이터는 이들 항체가 대사물 1 및 2와 실질적으로 결합하지 않는다는 것을 입증해준다.
실시예 10:
토파시티닙을 이용한 표준 곡선
본 실시예의 경우에는, 토파시티닙에 대한 선택된 항체의 상대적 친화도를, 공지된 농도의 표지된 토파시티닙 (예를 들어, 0.001 내지 1,000 ng/ml)을 함유하는 용액을 이용하여 결정하였다. 도 4는 ELISA에 의해 결정된 바와 같은, 본 발명의 선택 모노클로날 항체, 예를 들어 6D9.A8 (오픈 원형) 및 12D4.G6 (오픈 사각형)의 최적의 희석 범위를 도시한 그래프이다. 표 5에는 ELISA의 검정 조건 및 결과가 요약되어 있다. 표 6은 도 5에 도시된 그래프를 생성시키기 위해 사용된 데이터 값을 나타낸다.
<표 5>
Figure pct00033

<표 6>
Figure pct00034

곡선 맞춤 옵션 - 고정 중량 값. 서브클론 6D9.A8 및 12D4.G6은 모 약물에 대한 용량 반응이 유사하다는 것을 명확히 보여주었는데, 6D9.A8이 약간 더 강력하였다.
도 4 및 표 5에 입증된 바와 같이, 클론 12D4.G6은 5 내지 405 ng/ml의 표준 범위를 나타냈는데 (도 4), 이는 이러한 모노클로날 항체가 5 ng/ml 정도로 낮은 수준 하의 토파시티닙을 탐지할 수 있다는 것을 명확히 보여준다. 도 4는 또한, 6D9.A8의 표준 범위가 15 내지 1,215 ng/ml였다는 것을 보여주었다. 따라서, 이들 두 항체를 조합하여 사용하면, 약 5 ng/ml 내지 약 1,215 ng/ml의 용량 범위의 특정 샘플 중의 토파시티닙을 탐지할 수 있다.
실시예 11:
헤파린 처리된 인간 혈장에서의 스파이크 및 회복
본 실시예의 경우에는, 토파시티닙을 시판용 헤파린 인간 혈장 내로 스파이킹하여 인간 혈장 샘플 중의 토파시티닙의 선형도 및 회수율에 대한 희석도의 효과를 결정하였다. 토파시티닙을 4,864 ng/ml의 농도로 헤파린-혈장 (인간) 내로 스파이킹하고, 일련으로 2배 희석하여 혈장에 대한 검정 내성을 시험하였다. % 희석 선형도 및 % 회수율을 실시예 5에 기재된 바와 같은 ELISA 검정을 통하여 계산하였다.
<표 7>
Figure pct00035

표 7이 입증하는 바와 같이, 검정 완충액에서 적어도 1:8로 희석시킨 상업적 공급원으로부터 수득된 혈장 샘플은 허용 가능한 희석 선형도 및 회수율을 가졌다. 2배 및 4배 희석된 샘플은 예상된 흡광도 값 보다 더 낮은 값으로 복귀하였는데, 이는 이들 저 희석도에서의 샘플 매트릭스 간섭을 표시한다. 이들 데이터는 본 발명의 항체가 심지어 복합 생물학적 샘플, 예컨대 혈장 (그러나, 이에 제한되지 않는다) 중에서의 토파시티닙의 존재 및 농도를 정확하게 탐지할 수 있다는 것을 입증해준다.
실시예 12:
클론 6 D9 .A5 특징 확인
본 실시예의 경우에는, 토파시티닙 용량 반응 곡선 (0.001 내지 1,000 ng/ml)을, 항체 클론 6D9.A5, 6D9.A8, 또는 12D4.G6을 이용하여 본 검정에서 수행하였다. 그 결과가 표 8 및 도 5에 제시되어 있다. 추가로, 도 5에 도시된 그래프를 생성시키기 위해 사용된 데이터가 다음 표 9에 제시되어 있다. 본원에 개시된 데이터는 6D9.A5가 6D9.A8과 동일한 표준 범위 (15 내지 1,215 ng/ml)를 갖고 있고, 약 15 ng/ml 정도로 낮은 농도 및 약 1,215 ng/ml 정도로 높은 농도 하의 특정 샘플 중의 토파시티닙을 탐지할 수 있다는 것을 표시한다.
<표 8>
Figure pct00036

<표 9>
Figure pct00037

곡선 맞춤 옵션 - 고정 중량 값.
따라서, 대체 서브클론 항체 6D9.A5 (6D9.A8을 대체함)는 서브클론 항체 6D9.A8과 비교해서 모 약물에 대한 유사한 용량 반응 활성을 명백히 보여주었다. 또한, 본원에 개시된 데이터는 6D9.A5 및 6D9.A8 항체가 항체 12D4.G6과 비교해서 모 약물의 유사하게 더 강력한 결합제라는 것을 입증해준다.
토파시티닙 대사물을 경쟁인자로서 사용하는 경쟁적 면역검정-3을 이용하거나, 또는 미세역가 판을 토파시티닙-BSA 접합체로 코팅시키는, 실시예 5에 언급된 직접 ELISA 검정을 이용하여 대사물에 대한 교차 반응성을 측정함으로써 6D9.A5 항체를 추가로 명확히 규명하였다. 표 10에 제시된 데이터는 클론 6D9.A5가 클론 6D9.A8 및 클론 12D4.G6을 이용하여 관찰된 바와 유사한, 대사물에 대한 교차 반응성을 나타냈다는 것을 입증해준다. 즉, 12D4.G6과 마찬가지로, 6D9.A5도 대사물 1 또는 2와 실질적으로 결합하지 못하였다.
<표 10>
Figure pct00038

상기 개시된 교시가 각종 적용, 방법, 키트 및 조성물을 참조로 하여 기재되긴 하였지만, 본원의 교시 및 다음에 청구된 발명을 벗어나지 않고서도 각종 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 전술된 실시예는 개시된 교시를 더 잘 예시하기 위해 제공된 것이고, 본원에 제시된 교시의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 교시가 이들 예시적 실시양태 면에서 기재되긴 하였지만, 당업자는 이들 예시적 실시양태의 수많은 변동 및 변형이 과도한 실험 없이도 가능하다는 것을 용이하게 이해할 것이다. 이러한 모든 변동 및 변형은 현 교시 범위 내에 있다.
본원에 인용된 모든 참고문헌 (특허, 특허 출원, 서류, 교과서 등을 포함함), 및 이미 없는 정도까지 본원에 인용된 참고문헌은 그들의 전문이 본원에 참조로 포함된다. 본원에 포함된 문헌 및 유사한 물질 중 하나 이상이 본 출원과 상이하거나 이에 모순되는 경우에는 (이는 정의된 용어, 용어 활용, 기재된 기술 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다), 본 출원이 우선한다.
전술된 설명 및 실시예는 본 발명의 특정의 구체적 실시양태를 상세히 열거한 것이고, 본 발명자들에 의해 고려된 최상의 방식을 기재한 것이다. 그러나, 아무리 상세한 전술 내용도 텍스트에 나타낼 수 있지만, 본 발명은 다양한 방식으로 실행될 수 있고, 본 발명은 첨부된 특허청구범위 및 그의 모든 등가에 따라서 추론되어야 한다는 것이 인지될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> PFIZER INC Gardner, Joseph Paul II Wong, Victoria Yatsum <120> ANTI-DRUG ANTIBODIES AND USES THEREOF FOR DRUG MONITORING <130> PC71701A <140> PCT/US2013/to be assigned <141> 2013-06-18 <150> US 61/665,361 <151> 2012-06-28 <160> 39 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asp Gly Tyr Thr Pro Tyr Tyr Ser Pro 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Pro His Tyr Tyr Gly Phe Pro Phe Gly Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 2 <211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr 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Artificial Sequence <220> <223> 10F10-H5-LCDR1 <400> 27 Ser Ser Val Ser Ser 1 5 <210> 28 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 10F10-H5-LCDR2 <400> 28 Ser Thr Ser 1 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 10F10-H5-LCDR3 <400> 29 Gln Gln Arg Asn Asn Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 30 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6D9-A5-HCDR1 <400> 30 Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Ser 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6D9-A5-HCDR2 <400> 31 Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 32 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6D9-A5-HCDR3 <400> 32 Ala Arg Ile Tyr Tyr Gly Ile Tyr 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 12H4-G2-LCDR1 <400> 33 Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr 1 5 <210> 34 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 16F10-E6-LCDR1 <400> 34 Gln Asn Val Gly Thr Asn 1 5 <210> 35 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 16F10-E6-LCDR2 <400> 35 Ser Ala Ser 1 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 16F10-E6-LCDR3 <400> 36 Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 12D4-G6-HCDR1 <400> 37 Gly Phe Ser Leu Ser Ile Tyr Ser 1 5 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 12D4-G6-HCDR2 <400> 38 Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr 1 5 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 12D4-G6-HCDR3 <400> 39 Ala Arg Ile Tyr Tyr Gly Ile Phe 1 5

Claims (26)

  1. 면역원성 담체와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 면역원성 토파시티닙 접합체 (여기서, 면역원성 담체는 키홀 림펫 헤모시아닌 및 소의 혈청 알부민으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질이고, 추가로
    (a) 면역원성 토파시티닙 접합체는 다음 화학식 V의 구조를 갖거나; 또는
    (b) 면역원성 토파시티닙 접합체는 다음 화학식 VI의 구조를 갖는다:
    <화학식 V>
    Figure pct00039

    <화학식 VI>
    Figure pct00040

    상기식에서,
    BSA는 소의 혈청 알부민이고;
    KLH는 키홀 림펫 헤모시아닌이다).
  2. (a) 토파시티닙을 함유하는 것으로 의심되는 샘플을 제공하는 단계;
    (b) 이러한 샘플 또는 샘플 추출물을, 토파시티닙에 대해 특이적인 항체가 토파시티닙과 결합하여 검정 혼합물을 형성하는 데 적합한 조건 하에, 상기 항체와 접촉시키는 단계; 및
    (c) 토파시티닙에 대한 상기 항체의 결합을 탐지하는 단계
    를 포함하는, 특정 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 평가하는 방법.
  3. 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 큰 단리된 항체:
    <화학식 II>
    Figure pct00041

    <화학식 III>
    Figure pct00042

  4. 제3항에 있어서, 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 대사물 1 또는 대사물 2에 대한 결합 친화도의 25, 30, 40, 또는 50배인 단리된 항체.
  5. 제4항에 있어서, 면역원성 담체와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 면역원성 토파시티닙 접합체 화합물을 사용하여 수득되는 단리된 항체.
  6. (a) 탐지 가능한 표지와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 표지된 경쟁인자의 공지된 양을 제공하는 단계;
    (b) 선택적 항-토파시티닙 항체를 제공하는 단계;
    (c) 샘플, 상기 선택적 항-토파시티닙 항체 및 표지된 경쟁인자를 합하는 단계 (샘플 중의 토파시티닙은 선택적 항-토파시티닙 항체와의 결합을 놓고 표지된 경쟁인자와 경쟁한다); 및
    (d) 표지를 탐지함으로써 항체와 결합되지 않은 표지된 경쟁인자의 양을 측정함으로써 샘플 중의 토파시티닙의 양을 결정하는 단계
    를 포함하는, 샘플 중의 토파시티닙의 양을 결정하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 선택적 항-토파시티닙 항체의 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1에 대한 결합 친화도 보다 더 크고/크거나 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 큰 방법:
    <화학식 II>
    Figure pct00043

    <화학식 III>
    Figure pct00044
  8. 제7항에 있어서, 상기 항체의 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 큰 방법:
    <화학식 II>
    Figure pct00045

    <화학식 III>
    Figure pct00046
  9. 탐지 가능한 표지와 커플링된 토파시티닙을 포함하는 표지된 경쟁인자; 및 하나 이상의 선택적 항-토파시티닙 항체를 포함하는데, 상기 표지된 경쟁인자가 항-토파시티닙 항체와의 결합을 놓고 샘플 중의 토파시티닙과 경쟁하는
    샘플 중의 토파시티닙의 양을 결정하기 위한 키트.
  10. 제9항에 있어서, 선택적 항-토파시티닙 항체의 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 토파시티닙 대사물에 대한 결합 친화도 보다 더 큰 키트:
    <화학식 II>
    Figure pct00047

    <화학식 III>
    Figure pct00048
  11. 제10항에 있어서, 상기 항체의 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 큰 키트:
    <화학식 II>
    Figure pct00049

    <화학식 III>
    Figure pct00050
  12. 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 결정하기 위한 경쟁적 면역검정 키트 (여기서, 경쟁적 면역검정은
    (a) 하나 이상의 선택적 항-토파시티닙 항체;
    (b) 탐지 가능한 표지와 접합된 토파시티닙 화합물
    을 포함하는데, 상기 접합된 토파시티닙 화합물은 상기 항체와의 결합을 놓고 상기 샘플 중의 토파시티닙과 경쟁하고;
    상기 표지는 샘플 중의 토파시티닙이 치료적 약물 모니터링 농도로 존재하는 경우에 샘플 중의 토파시티닙의 농도를 표시하는 신호를 제공한다).
  13. 제12항에 있어서, 상기 항체의 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2에 대한 결합 친화도 보다 더 큰 키트:
    <화학식 II>
    Figure pct00051

    <화학식 III>
    Figure pct00052
  14. 토파시티닙과는 결합하지만, 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 토파시티닙 대사물과는 실질적으로 결합하지 않는 단리된 항체:
    <화학식 II>
    Figure pct00053

    <화학식 III>
    Figure pct00054
  15. 제14항에 있어서, 다음 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 다음 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2와 실질적으로 결합하지 않는 단리된 항체:
    <화학식 II>
    Figure pct00055

    <화학식 III>
    Figure pct00056
  16. 제3항에 있어서, 샘플 중의 토파시티닙을 탐지할 수 있지만, 샘플 중의 토파시티닙 대사물은 실질적으로 탐지하지 못하며, 이러한 토파시티닙의 양이 약 5 ng/ml 내지 1,215 ng/ml, 약 5 ng/ml 내지 405 ng/ml, 또는 약 15 ng/ml 내지 1,215 ng/ml의 범위인 항체.
  17. 토파시티닙에 대한 결합 친화도가 화학식 II의 토파시티닙 대사물 1 및 화학식 III의 토파시티닙 대사물 2로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 토파시티닙 대사물에 대한 결합 친화도 보다 더 크고, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 상기 중쇄 가변 도메인이
    (a) 서열 13, 서열 19, 서열 30, 및 서열 37로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1;
    (b) 서열 14, 서열 20, 서열 25, 서열 31, 및 서열 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2;
    (c) 서열 15, 서열 21, 서열 26, 서열 32, 및 서열 39로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 3개의 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고;
    경쇄 가변 도메인이
    (d) 서열 16, 서열 22, 서열 27, 서열 33, 및 서열 34로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1;
    (e) 서열 17, 서열 23, 서열 28, 및 서열 35로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및
    (f) 서열 18, 서열 24, 서열 29, 및 서열 34로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 3개의 CDR (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 단리된 항체.
  18. 제17항에 있어서,
    (a) 서열 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 14의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 17의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
    (b) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
    (c) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 25의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 26의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 27의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 28의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 29의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
    (d) 서열 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 31의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 32의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
    (e) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 33의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 17의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
    (f) 서열 19의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 20의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 21의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 34의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 35의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 36의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
    (g) 서열 37의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 38의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 39의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하며;
    (h) 서열 1, 서열 3, 서열 5, 서열 7, 서열 8, 서열 10 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 2, 서열 4, 서열 6, 서열 9, 및 서열 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
    (i) 서열 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
    (j) 서열 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
    (k) 서열 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
    (l) 서열 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
    (m) 서열 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
    (n) 서열 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
    (o) 서열 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고;
    (p) 서열 3, 서열 7 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며;
    (q) 서열 3, 서열 8, 서열 10, 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열 4, 서열 9 및 서열 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체.
  19. 제15항에 있어서,
    (a) 서열 30의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 31의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 32의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체;
    (b) 서열 37의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 38의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열 39의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 추가로 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 24의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 항체;
    (c) 서열 3, 서열 7 및 서열 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체;
    (d) 서열 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; 및
    (e) 서열 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 추가로 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체
    로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체.
  20. 제19(a)항에 있어서, 약 15 ng/ml 내지 1,215 ng/ml의 범위의 농도 하의 샘플 중의 토파시티닙을 탐지할 수 있는 항체.
  21. 제19(b)항에 있어서, 약 5 ng/ml 내지 405 ng/ml의 범위의 농도 하의 샘플 중의 토파시티닙을 탐지할 수 있는 항체.
  22. 제11항에 있어서, 약 5 ng/ml 내지 약 1,215 ng/ml의 범위의 농도 하의 샘플 중의 토파시티닙을 탐지하기 위해 사용될 수 있는, 제19(a)항의 항체 및 제19(b)항의 항체를 포함하는 키트.
  23. 제18항의 항체를 암호화하는 핵산.
  24. 제23항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  25. 제24항의 숙주 세포를, 제18항의 항체가 생성되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는, 제18항의 항체의 생성 방법.
  26. 제25항에 있어서, 항체를 단리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10434160B2 (en) * 2015-09-10 2019-10-08 Becton, Dickinson And Company Cyclophosphamide analogs for use as immunogens and assay conjugates for an immunoassay of cyclophosphamide and ifosfamide
JP7030109B2 (ja) * 2016-09-14 2022-03-04 テネオバイオ， インコーポレイテッド Ｃｄ３結合抗体
EP3684944A4 (en) 2017-09-21 2021-05-26 Becton, Dickinson and Company KIT FOR SAMPLING HAZARDOUS POLLUTANTS AND QUICK TEST
CN107602569A (zh) * 2017-10-23 2018-01-19 上海博悦生物科技有限公司 一种新型吡咯并[2,3‑d]嘧啶化合物及其合成方法和用途
CN212748381U (zh) 2019-01-28 2021-03-19 贝克顿·迪金森公司 一种有害污染物检测系统和一种有害污染物收集装置
CA3140816A1 (en) 2019-06-14 2020-12-17 Nathan Trinklein Multispecific heavy chain antibodies binding to cd22 and cd3
CN116396392B (zh) * 2023-01-17 2023-10-27 珠海重链生物科技有限公司 一种特异性针对异羟基洋地黄毒甙元的抗体及其相关应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
DK0585287T3 (da) 1990-07-10 2000-04-17 Cambridge Antibody Tech Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer
ES2330052T3 (es) 1991-03-01 2009-12-03 Dyax Corporation Proteina quimerica que comprende micro-proteinas que tienen dos o mas puentes disulfuro y relaizaciones de las mismas.
GB9307491D0 (en) * 1993-04-08 1993-06-02 Sandoz Ltd Organic compounds
JP2002512624A (ja) 1997-05-21 2002-04-23 バイオベーション リミテッド 非免疫原性タンパク質の製造方法
IN2008CN05409A (ko) * 2002-07-18 2015-10-02 Cytos Biotechnology Ag
UY33492A (es) * 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas

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