JP6224456B2 - 葉酸受容体アルファ発現癌の診断および予後マーカーとしての葉酸受容体アルファ - Google Patents

葉酸受容体アルファ発現癌の診断および予後マーカーとしての葉酸受容体アルファ Download PDF

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Description

本出願は、２０１０年１１月５日に出願された米国仮特許出願第６１／４１０，４９７号および２０１１年７月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／５０８，４４４号の出願日の利益を主張し、それらの各々の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ヒトにおいて、葉酸に対する高親和性受容体には３つのアイソフォームであるアルファ、ベータおよびガンマが挙げられる。アルファ型およびベータ型は、典型的に、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーにより細胞膜に結合する。これらの型は細胞外コンパートメントと細胞内コンパートメントとの間を再循環し、細胞内に葉酸を運搬することができる。可溶型のＦＲαは、膜に固定された葉酸受容体に対するプロテアーゼまたはホスホリパーゼの作用によって得ることができる。
葉酸受容体アルファ（ＦＲα、ＦＲ−アルファ、ＦＯＬＲ−１またはＦＯＬＲ１とも称される）は、様々な上皮組織、例えば、脈絡叢、肺、甲状腺、腎臓、子宮、乳房、卵管、精巣上皮および唾液腺の組織に発現される。Ｗｅｉｔｍａｎ，ＳＤら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５２：３３９６−３４０１（１９９２年）；Ｗｅｉｔｍａｎ ＳＤら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５２：６７０８−６７１１。ＦＲαの過剰発現は、種々の癌、例えば、肺癌（例えば、気管支肺胞癌、カルチノイド腫瘍および非小細胞肺癌、例えば腺癌）；中皮腫；卵巣癌；腎臓癌；脳癌（例えば、未分化上衣腫、若年性小脳毛様細胞性星状細胞腫および脳転移）；子宮頸癌；鼻咽腔癌；中胚葉由来の腫瘍；頭頸部の扁平上皮癌腫；子宮内膜癌；卵巣の類内膜腺癌；漿液性嚢胞腺癌；乳癌；膀胱癌；膵臓癌；骨癌（例えば、高悪性度骨肉腫）；下垂体癌（例えば、下垂体腺腫）；結腸直腸癌および甲状腺髄様癌において観察されている。例えば、米国特許第７，７５４，６９８号；米国特許出願公開第２００５／０２３２９１９号；ＷＯ２００９／１３２０８１；Ｂｕｅｎｏ Ｒら、Ｊ ｏｆ Ｔｈｏｒａｃｉｃ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ、１２１（２）：２２５−２３３（２００１年）；Ｅｌｋａｎａｔ Ｈ ＆ Ｒａｔｎａｍ Ｍ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、１１、５０６−５１９（２００６年）；Ｆｉｓｈｅｒ Ｒ．Ｅ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ、４９：８９９−９０６（２００８年）；Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＷＡら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ、Ｓｕｐｐｌ ８：８９−９５（１９９４年）；Ｈａｒｔｍａｎ Ｌ．Ｃ．ら．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２１：９３８−９４２（２００７年）；Ｉｗａｋｉｒｉ Ｓら、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１５（３）：８８９−８９９；Ｐａｒｋｅｒ Ｎ．ら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３８：２８４−２９３（２００５年）；Ｗｅｉｔｍａｎ，ＳＤら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５２：３３９６−３４０１（１９９２年）；Ｓａｂａ Ｎ．Ｆ．ら、Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ、３１（４）：４７５−４８１（２００９年）；Ｙａｎｇ Ｒら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３：２５５７−２５６７（２００７年）を参照されたい。いくつかのタイプの癌（例えば、頭頸部の扁平上皮癌腫）において、より高レベルのＦＲα発現がより悪い予後と関連付けられ、一方、他種の癌（例えば、非小細胞肺癌）において、高レベルのＦＲα発現がより良好な予後と関連付けられる。例えば、Ｉｗａｋｉｒｉ Ｓら、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１５（３）：８８９−８９９；Ｓａｂａ Ｎ．Ｆ．ら、Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ、３１（４）：４７５−４８１（２００９年）を参照されたい。
米国特許第７，７５４，６９８号明細書 米国特許出願公開第２００５／０２３２９１９号明細書 国際公開第２００９／１３２０８１号
Ｗｅｉｔｍａｎ，ＳＤら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５２：３３９６−３４０１、６７０８−６７１１（１９９２年） Ｂｕｅｎｏ Ｒら、Ｊ ｏｆ Ｔｈｏｒａｃｉｃ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ、１２１（２）：２２５−２３３（２００１年） Ｅｌｋａｎａｔ Ｈ ＆ Ｒａｔｎａｍ Ｍ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、１１、５０６−５１９（２００６年） Ｆｉｓｈｅｒ Ｒ．Ｅ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ、４９：８９９−９０６（２００８年） Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＷＡら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ、Ｓｕｐｐｌ ８：８９−９５（１９９４年） Ｈａｒｔｍａｎ Ｌ．Ｃ．ら．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２１：９３８−９４２（２００７年） Ｉｗａｋｉｒｉ Ｓら、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１５（３）：８８９−８９９ Ｐａｒｋｅｒ Ｎ．ら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３８：２８４−２９３（２００５年） Ｓａｂａ Ｎ．Ｆ．ら、Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ、３１（４）：４７５−４８１（２００９年） Ｙａｎｇ Ｒら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３：２５５７−２５６７（２００７年）
癌の早期の発見は、生存率および生活の質を改善する。早期の発見および治療の可能性を高めるため、非侵襲的な癌の診断法、癌発症の危険性レベルの決定法および癌進行の予測法が早急に必要とされている。本発明は、ＦＲα発現癌に対するこれらの必要性を満足させるものである。
（発明の要旨）
本発明は、対象が肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するための方法、ＦＲα発現癌に罹患している対象において、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌の進行を評価するための方法、ＦＲα発現癌の対象を少なくとも４つの癌治療群のうちの１つに階層化するための方法、卵巣癌または肺癌のＭＯＲＡｂ−００３治療の有効性を評価するための方法、および対象が肺癌もしくは卵巣癌などのＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するための、または対象における肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌の進行を評価するためのキットを提供する。
対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するための方法
第一の態様において、本発明は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価する方法を対象とし、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルとの間の差は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているという指標であり、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって評価される。特定の実施形態において、試料は、尿、血清、血漿または腹水のいずれかである。
別の態様において、本発明は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価する方法を対象とし、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルとの間の差は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているという指標である。さらなる態様において、本発明は、対象がＦＲαを発現する癌に罹患しているかどうかを、対象由来の血清試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の血清試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価する方法を対象とし、対象由来の血清試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルとの間の差は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているという指標である。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、ＦＲα発現癌は、肺癌、中皮腫、卵巣癌、腎臓癌、脳癌、子宮頸癌、鼻咽腔癌、頭頸部の扁平上皮癌腫、子宮内膜癌、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、骨癌、下垂体癌、結腸直腸癌および甲状腺髄様癌からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。別の実施形態において、ＦＲα発現癌は、腺癌などの非小細胞肺癌である。
別の態様において、本発明は、対象が卵巣癌に罹患しているかどうかを、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定することによって評価する方法を対象とし、約９１００ｐｇ／ｍｌを超える濃度での尿試料における細胞に結合しないＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
本発明の前述の態様の種々の態様において、約９５００ｐｇ／ｍＬ超、約１０，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１１，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１２，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１３，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１４，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１５，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１６，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１７，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１８，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１９，０００ｐｇ／ｍＬ超または約２０，０００ｐｇ／ｍＬ超の濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
種々の態様において、ＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって決定される。例えば、抗体は、下記からなる群から選択される。
（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）ＭＯＶ１８抗体；
（ｄ）ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｊ）ＣＤＲＨ１として配列番号５５（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号５６（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号５７（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号５１（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５２（ＮＡＫＴＬＡＥ）およびＣＤＲＬ３として配列番号５３（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体；
（ｌ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｍ）ＣＤＲＨ１として配列番号３９（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４０（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４１（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＬＡＳＮＬＥＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体；
（ｏ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｐ）ＣＤＲＨ１として配列番号３１（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３２（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３３（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２７（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２８（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号２９（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体；
（ｒ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｓ）ＣＤＲＨ１として配列番号４７（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４８（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４９（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４３（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号４４（ＹＴＳＳＬＨＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号４５（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体；
（ｕ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｗ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；
（ｘ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；ならびに
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体。
特定の実施形態において、抗体は、ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む。別の実施形態において、抗体はＭＯＶ１８抗体である。なお別の実施形態において、抗体は、ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態において、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む。ある種の実施形態において、抗体は、（ｉ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；または重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）と軽鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。
特定の実施形態において、前記対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡｂ−００３抗体；（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体；（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体；および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体からなる群から選択される一対の抗体と接触させることによって評価される。
ある種の実施形態において、抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、バーサボディ（ｖｅｒｓａｂｏｙ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）およびドメイン抗体からなる群から選択される。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、例えば、放射性標識、ビオチン標識、発色団標識、蛍光色素標識または酵素標識からなる群から選択される標識で標識される。
ある種の実施形態において、ＦＲαのレベルは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光分析、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）およびＥＬＩＳＡアッセイからなる群から選択される技法を用いることによって決定される。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、対照試料は、健常対象におけるＦＲαの標準化された対照レベルである。
ある種の実施形態において、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前にグアニジンで処理される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に希釈される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に、遠心分離され、ボルテックスされまたはその両方である。
なお別の態様において、本発明は、対象が卵巣癌に罹患しているかどうかを、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価する方法を対象とし、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルとの間の差は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標であり、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡｂ−００３抗体、（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体、（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体、および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体と接触させることによって評価される。例えば、試料は、尿、血清、血漿または腹水であってもよい。
対象におけるＦＲα発現癌の進行を評価するための方法
さらなる態様において、本発明は、ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行を、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価する方法を対象とし、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合の対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの増加は、癌が急速に進行するという指標であり；対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合の対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの減少は、癌が穏やかに進行するまたは退行するという指標であり、それにより対象におけるＦＲα発現癌の進行を評価し、対象由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって評価される。特定の実施形態において、試料は、尿、血清、血漿または腹水である。
別の態様において、本発明は、ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行を、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価する方法を提供し、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合の対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの増加は、癌が急速に進行するという指標であり；対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合の対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの減少は、癌が穏やかに進行するまたは退行するという指標であり、それにより対象におけるＦＲα発現癌の進行を評価する、方法を対象とする。
さらなる態様において、本発明は、ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行を、対象由来の血清試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の血清試料における、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価する方法を提供し、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合の対象由来の血清試料におけるＦＲαのレベルの増加は、癌が急速に進行するという指標であり；対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合の対象由来の血清試料におけるＦＲαのレベルの減少は、癌が穏やかに進行するまたは退行するという指標であり、それにより対象におけるＦＲα発現癌の進行を評価する。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、ＦＲα発現癌は、肺癌、中皮腫、卵巣癌、腎臓癌、脳癌、子宮頸癌、鼻咽腔癌、頭頸部の扁平上皮癌腫、子宮内膜癌、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、骨癌、下垂体癌、結腸直腸癌および甲状腺髄様癌からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。別の実施形態において、ＦＲα発現癌は、腺癌などの非小細胞肺癌である。
別の態様において、本発明は、対象が卵巣癌に罹患しているかどうかを、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定することによって評価する方法を対象とし、約９１００ｐｇ／ｍｌを超える濃度での尿試料における細胞に結合しないＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
本発明の前述の態様の種々の態様において、約９５００ｐｇ／ｍＬ超、約１０，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１１，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１２，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１３，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１４，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１５，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１６，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１７，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１８，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１９，０００ｐｇ／ｍＬ超または約２０，０００ｐｇ／ｍＬ超の濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
種々の態様において、ＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって決定される。例えば、抗体は、下記からなる群から選択される。
（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）ＭＯＶ１８抗体；
（ｄ）ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｊ）ＣＤＲＨ１として配列番号５５（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号５６（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号５７（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号５１（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５２（ＮＡＫＴＬＡＥ）およびＣＤＲＬ３として配列番号５３（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体；
（ｌ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｍ）ＣＤＲＨ１として配列番号３９（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４０（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４１（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＬＡＳＮＬＥＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体；
（ｏ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｐ）ＣＤＲＨ１として配列番号３１（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３２（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３３（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２７（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２８（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号２９（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体；
（ｒ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｓ）ＣＤＲＨ１として配列番号４７（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４８（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４９（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４３（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号４４（ＹＴＳＳＬＨＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号４５（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体；
（ｕ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｗ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；
（ｘ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；ならびに
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体。
特定の実施形態において、抗体は、ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む。別の実施形態において、抗体はＭＯＶ１８抗体である。なお別の実施形態において、抗体は、ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態において、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む。ある種の実施形態において、抗体は、（ｉ）重鎖改変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；または重鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）と軽鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。
特定の実施形態において、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体；（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体；（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体；および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体からなる群から選択される一対の抗体と接触させることによって評価される。
ある種の実施形態において、抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、アフィボディ、アビマー、バーサボディ、ナノボディおよびドメイン抗体からなる群から選択される。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、例えば、放射性標識、ビオチン標識、発色団標識、蛍光色素標識または酵素標識からなる群から選択される標識で標識される。
ある種の実施形態において、ＦＲαのレベルは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光分析、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）およびＥＬＩＳＡアッセイからなる群から選択される技術を用いることによって決定される。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、対照試料は、健常対象におけるＦＲαの標準化された対照レベルである。別の実施形態において、対照試料は、対象から予め得られた試料である。
ある種の実施形態において、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前にグアニジンで処理される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に希釈される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に、遠心分離され、ボルテックスされまたはその両方である。
さらなる態様において、本発明は、卵巣癌に罹患している対象における卵巣癌の進行を、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価する方法を対象とし、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合の対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの増加は、卵巣癌が急速に進行するという指標であり；対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合の対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの減少は、卵巣癌が穏やかに進行するまたは退行するという指標であり、それにより対象における卵巣癌の進行を評価することによって評価し、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体、（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体、（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体、および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体と接触させることによって評価される。例えば、試料は、尿、血清、血漿または腹水であってもよい。
ＦＲα発現癌を癌治療群に階層化するための方法
さらなる態様において、本発明は、ＦＲα発現癌に罹患している対象を、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルに基づいて、対象を少なくとも４つの癌治療群の１つに階層化することによって、少なくとも４つの癌治療群の１つに階層化する方法を提供し、対象由来の試料において、細胞に結合しないＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって評価される。例えば、試料は、尿、血清、血漿または腹水からなる群から選択される。
なお別の態様において、本発明は、ＦＲα発現癌に罹患している対象を、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルに基づいて、対象を少なくとも４つの癌治療群の１つに階層化することによって、少なくとも４つの癌治療群の１つに階層化する方法を提供する。さらなる態様において、本発明は、ＦＲα発現癌に罹患している対象を、対象由来の血清試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；血清試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルに基づいて、対象を少なくとも４つの癌治療群の１つに階層化することによって、少なくとも４つの癌治療群の１つに階層化する方法に関する。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、ＦＲα発現癌は、肺癌、中皮腫、卵巣癌、腎臓癌、脳癌、子宮頸癌、鼻咽腔癌、頭頸部の扁平上皮癌腫、子宮内膜癌、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、骨癌、下垂体癌、結腸直腸癌および甲状腺髄様癌からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。別の実施形態において、ＦＲα発現癌は、腺癌などの非小細胞肺癌である。
別の態様において、本発明は、対象が卵巣癌に罹患しているかどうかを、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定することによって評価する方法に関し、約９１００ｐｇ／ｍｌを超える濃度での尿試料における細胞に結合しないＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
本発明の前述の態様の種々の態様において、約９５００ｐｇ／ｍＬ超、約１０，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１１，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１２，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１３，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１４，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１５，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１６，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１７，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１８，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１９，０００ｐｇ／ｍＬ超または約２０，０００ｐｇ／ｍＬ超の濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
種々の態様において、ＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって決定される。例えば、抗体は、下記からなる群から選択される。
（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号ｌ（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬｌ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）ＭＯＶ１８抗体；
（ｄ）ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｊ）ＣＤＲＨ１として配列番号５５（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号５６（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号５７（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号５１（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５２（ＮＡＫＴＬＡＥ）およびＣＤＲＬ３として配列番号５３（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体；
（ｌ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｍ）ＣＤＲＨ１として配列番号３９（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４０（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４１（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＬＡＳＮＬＥＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体；
（ｏ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｐ）ＣＤＲＨ１として配列番号３１（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３２（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３３（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２７（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２８（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号２９（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体；
（ｒ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｓ）ＣＤＲＨ１として配列番号４７（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４８（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４９（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４３（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号４４（ＹＴＳＳＬＨＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号４５（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体；
（ｕ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｗ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；
（ｘ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；ならびに
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体。
特定の実施形態において、抗体は、ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む。別の実施形態において、抗体はＭＯＶ１８抗体である。なお別の実施形態において、抗体は、ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態において、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む。ある種の実施形態において、抗体は、（ｉ）重鎖改変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；または重鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）と軽鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。
特定の実施形態において、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体；（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体；（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体；および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体からなる群から選択される一対の抗体と接触させることによって評価される。
ある種の実施形態において、抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、アフィボディ、アビマー、バーサボディ、ナノボディおよびドメイン抗体からなる群から選択される。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、例えば、放射性標識、ビオチン標識、発色団標識、蛍光色素標識または酵素標識からなる群から選択される標識で標識される。
ある種の実施形態において、ＦＲαのレベルは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光分析、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）およびＥＬＩＳＡアッセイからなる群から選択される技術を用いることによって決定される。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、対照試料は、健常対象におけるＦＲαの標準化された対照レベルである。
ある種の実施形態において、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前にグアニジンで処理される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に希釈される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に、遠心分離され、ボルテックスされまたはその両方である。
特定の実施形態において、対象は、病期Ｉ、病期ＩＩ、病期ＩＩＩまたは病期ＩＶの卵巣癌に階層化される。
さらなる態様において、本発明は、卵巣癌対象を、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；試料において細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルに基づいて、対象を少なくとも４つの癌治療群のうちの１つに階層化することによって、少なくとも４つの癌治療群のうちの１つに階層化する方法を提供し、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体、（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体、（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体、および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体と接触させることによって評価される。例えば、試料は、尿、血清、血漿または腹水であってもよい。
卵巣癌または肺癌のＭＯＲＡｂ−００３治療の有効性を監視するための方法
一態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌を患っている対象における卵巣癌または肺癌のＭＯＲＡｂ−００３治療の有効性を、ＭＯＲＡｂ−００３が予め投与された対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって監視する方法を提供し、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの増加は、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効でないという指標であり；対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの減少は、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効であるという指標である。特定の実施形態において、対象由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって評価される。例えば、試料は、尿、血清、血漿または腹水であってもよい。
さらなる態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌を患っている対象における卵巣癌または肺癌のＭＯＲＡｂ−００３治療の有効性を、ＭＯＲＡｂ−００３が予め投与された対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の尿試料における、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって監視する方法を提供し、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの増加は、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効でないという指標であり；対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの減少は、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効であるという指標である。
なお別の態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌を患っている対象における卵巣癌または肺癌のＭＯＲＡｂ−００３治療の有効性を、ＭＯＲＡｂ−００３が予め投与された対象由来の血清試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の血清試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって監視する方法を対象とし、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合、対象由来の血清試料におけるＦＲαのレベルの増加は、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効でないという指標であり；対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合、対象由来の血清試料におけるＦＲαのレベルの減少は、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効であるという指標である。
種々の態様において、ＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって決定される。例えば、抗体は、下記からなる群から選択される。
（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）ＭＯＶ１８抗体；
（ｄ）ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｊ）ＣＤＲＨ１として配列番号５５（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号５６（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号５７（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号５１（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５２（ＮＡＫＴＬＡＥ）およびＣＤＲＬ３として配列番号５３（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体；
（ｌ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｍ）ＣＤＲＨ１として配列番号３９（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４０（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４１（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＬＡＳＮＬＥＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体；
（ｏ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｐ）ＣＤＲＨ１として配列番号３１（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３２（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３３（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２７（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２８（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号２９（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体；
（ｒ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｓ）ＣＤＲＨ１として配列番号４７（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４８（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４９（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４３（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号４４（ＹＴＳＳＬＨＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号４５（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体；
（ｕ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｗ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；
（ｘ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；ならびに
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体。
特定の実施形態において、抗体は、ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む。別の実施形態において、抗体はＭＯＶ１８抗体である。なお別の実施形態において、抗体は、ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態において、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む。ある種の実施形態において、抗体は、（ｉ）重鎖改変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；または重鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）と軽鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。
特定の実施形態において、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体；（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体；（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体；および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体からなる群から選択される一対の抗体と接触させることによって評価される。
ある種の実施形態において、抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、アフィボディ、アビマー、バーサボディ、ナノボディおよびドメイン抗体からなる群から選択される。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、例えば、放射性標識、ビオチン標識、発色団標識、蛍光色素標識または酵素標識からなる群から選択される標識で標識される。
ある種の実施形態において、ＦＲαのレベルは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光分析、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）およびＥＬＩＳＡアッセイからなる群から選択される技術を用いることによって決定される。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、対照試料は、健常対象におけるＦＲαの標準化された対照レベルである。別の実施形態において、対照試料は、対象から予め得られた試料である。
ある種の実施形態において、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前にグアニジンで処理される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に希釈される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に、遠心分離され、ボルテックスされまたはその両方である。
対象がＭＯＲＡｂ−００３治療に応答するかどうかを予測するための方法
一態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌などのＦＲα発現癌を患っている対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するかどうかを、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって予測する方法を提供し、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するという指標である。
一態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌などのＦＲα発現癌を患っている対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するかどうかを、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって予測する方法を提供し、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するという指標である。
さらなる態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌などのＦＲα発現癌を患っている対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するかどうかを、対象由来の血清試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の血清試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって予測する方法を提供し、対象由来の血清試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するという指標である。
さらなる実施形態において、ＦＲα発現癌は、肺癌、中皮腫、卵巣癌、腎臓癌、脳癌、子宮頸癌、鼻咽腔癌、頭頸部の扁平上皮癌腫、子宮内膜癌、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、骨癌、下垂体癌、結腸直腸癌および甲状腺髄様癌からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。別の実施形態において、ＦＲα発現肺癌は非小細胞肺癌、例えば腺癌である。
さらなる態様において、本発明は、卵巣癌を患っている対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するかどうかを、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定することによって予測する方法を提供し、約９１００ｐｇ／ｍｌを超える濃度での尿試料における細胞に結合しないＦＲαの存在は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するという指標である。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、約９５００ｐｇ／ｍＬ超、約１０，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１１，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１２，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１３，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１４，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１５，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１６，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１７，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１８，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１９，０００ｐｇ／ｍＬ超または約２０，０００ｐｇ／ｍＬ超の濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、ＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって決定される。例えば、抗体は、下記からなる群から選択される。
（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）ＭＯＶ１８抗体；
（ｄ）ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｊ）ＣＤＲＨ１として配列番号５５（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号５６（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号５７（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号５１（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５２（ＮＡＫＴＬＡＥ）およびＣＤＲＬ３として配列番号５３（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体；
（ｌ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｍ）ＣＤＲＨ１として配列番号３９（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４０（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４１（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＬＡＳＮＬＥＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体；
（ｏ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｐ）ＣＤＲＨ１として配列番号３１（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３２（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３３（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２７（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２８（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号２９（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体；
（ｒ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｓ）ＣＤＲＨ１として配列番号４７（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４８（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４９（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４３（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号４４（ＹＴＳＳＬＨＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号４５（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体；
（ｕ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｗ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；
（ｘ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；ならびに
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体。
特定の実施形態において、抗体は、ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む。別の実施形態において、抗体はＭＯＶ１８抗体である。なお別の実施形態において、抗体は、ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態において、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む。ある種の実施形態において、抗体は、（ｉ）重鎖改変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；または重鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）と軽鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。
特定の実施形態において、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体；（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体；（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体；および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体からなる群から選択される一対の抗体と接触させることによって評価される。
ある種の実施形態において、抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、アフィボディ、アビマー、バーサボディ、ナノボディおよびドメイン抗体からなる群から選択される。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、例えば、放射性標識、ビオチン標識、発色団標識、蛍光色素標識または酵素標識からなる群から選択される標識で標識される。
ある種の実施形態において、ＦＲαのレベルは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光分析、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）およびＥＬＩＳＡアッセイからなる群から選択される技術を用いることによって決定される。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、対照試料は、健常対象におけるＦＲαの標準化された対照レベルである。
ある種の実施形態において、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前にグアニジンで処理される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に希釈される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に、遠心分離され、ボルテックスされまたはその両方である。
さらなる態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌などのＦＲα発現癌を患っている対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するかどうかを、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって予測する方法を提供し、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するという指標であり、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体；（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体；（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体；および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体と接触させることによって評価される。例えば、試料は、尿、血清、血漿または腹水であってもよい。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、治療のためのＭＯＲＡｂ−００３は、（ａ）配列番号７に記載の重鎖アミノ酸配列および配列番号８に記載の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；（ｂ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；または（ｃ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体である。
卵巣癌または肺癌を有する対象を治療するための方法
別の態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌を有する対象を、前記対象由来の試料（例えば、尿、血清、血漿または腹水）において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較し；治療有効量のＭＯＲＡｂ−００３を前記対象に投与することによって治療する方法を提供し、前記対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルとの間の差は、対象が卵巣癌または肺癌に罹患しているという指標である。
別の態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌を有する対象を、前記対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較し；治療有効量のＭＯＲＡｂ−００３を対象に投与することによって治療する方法を提供し、前記対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαレベルの間の差は、対象が卵巣癌または肺癌に罹患しているという指標である。
別の態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌を有する対象を、前記対象由来の血清試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較し；治療有効量のＭＯＲＡｂ−００３を前記対象に投与することによって治療する方法を提供し、前記対象由来の血清試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象が卵巣癌または肺癌に罹患しているという指標である。
さらなる態様において、本発明は、卵巣癌を患っている対象を、対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；治療有効量のＭＯＲＡｂ−００３を前記対象に投与することによって治療する方法を提供し、約９１００ｐｇ／ｍｌを超える濃度での尿試料における細胞に結合しないＦＲαの存在は、対照がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するという指標である。
特定の実施形態において、前記対象に由来する試料において、細胞に結合しないＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって評価される。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、約９５００ｐｇ／ｍＬ超、約１０，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１１，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１２，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１３，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１４，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１５，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１６，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１７，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１８，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１９，０００ｐｇ／ｍＬ超または約２０，０００ｐｇ／ｍＬ超の濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、ＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって決定される。例えば、抗体は、下記からなる群から選択される。
（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）ＭＯＶ１８抗体；
（ｄ）ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｊ）ＣＤＲＨ１として配列番号５５（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号５６（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号５７（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号５１（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５２（ＮＡＫＴＬＡＥ）およびＣＤＲＬ３として配列番号５３（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体；
（ｌ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｍ）ＣＤＲＨ１として配列番号３９（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４０（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４１（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＬＡＳＮＬＥＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体；
（ｏ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｐ）ＣＤＲＨ１として配列番号３１（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３２（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３３（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２７（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２８（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号２９（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体；
（ｒ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｓ）ＣＤＲＨ１として配列番号４７（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４８（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４９（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４３（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号４４（ＹＴＳＳＬＨＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号４５（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体；
（ｕ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｗ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；
（ｘ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；ならびに
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体。
特定の実施形態において、抗体は、ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、抗体は、ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む。別の実施形態において、抗体はＭＯＶ１８抗体である。なお別の実施形態において、抗体は、ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態において、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む。ある種の実施形態において、抗体は、（ｉ）重鎖改変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）と軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）；または重鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）と軽鎖可変領配ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。
特定の実施形態において、前記対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体；（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体；（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体；および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体からなる群から選択される一対の抗体と接触させることによって評価される。
ある種の実施形態において、抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、アフィボディ、アビマー、バーサボディ、ナノボディおよびドメイン抗体からなる群から選択される。または、あるいはそれと組み合わせて、抗体は、例えば、放射性標識、ビオチン標識、発色団標識、蛍光色素標識または酵素標識からなる群から選択される標識で標識される。
ある種の実施形態において、ＦＲαのレベルは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光分析、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）およびＥＬＩＳＡアッセイからなる群から選択される技術を用いることによって決定される。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、対照試料は、健常対象におけるＦＲαの標準化された対照レベルである。
ある種の実施形態において、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前にグアニジンで処理される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に希釈される。または、あるいはそれと組み合わせて、試料は、試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に、遠心分離され、ボルテックスされまたはその両方である。
さらなる態様において、本発明は、卵巣癌または肺癌を患っている対象を、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって治療する方法を提供し、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するという指標であり；対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、試料を（ａ）固体支持体に固定されたＭＯＶ１８抗体と標識されたＭＯＲＡＢ−００３抗体；（ｂ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２４Ｆ１２抗体；（ｃ）固体支持体に固定された２６Ｂ３抗体と標識された１９Ｄ４抗体；および（ｄ）固体支持体に固定された９Ｆ３抗体と標識された２６Ｂ３抗体と接触させることによって評価される。例えば、試料は、尿、血清、血漿または腹水であってもよい。
本発明の前述の態様の種々の実施形態において、治療のためのＭＯＲＡｂ−００３は、（ａ）配列番号７に記載の重鎖アミノ酸配列および配列番号８に記載の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；（ｂ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；または（ｃ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体である。
本発明のキット
一態様において、本発明は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するためのキットまたは対象におけるＦＲα発現癌の進行を評価するためのキットであって、対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定するための手段；および対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価する、またはＦＲα発現癌の進行を評価するキットを使用するための使用説明書を含むキットを提供する。例えば、ＦＲα発現癌は、肺癌、中皮腫、卵巣癌、腎臓癌、脳癌、子宮頸癌、鼻咽腔癌、頭頸部の扁平上皮癌腫、子宮内膜癌、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、骨癌、下垂体癌、結腸直腸癌および甲状腺髄様癌からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。なお別の実施形態において、ＦＲα発現癌は、非小細胞肺癌、例えば腺癌である。さらなる実施形態において、試料は、尿、血清、血漿または腹水のいずれかである。
さらなる実施形態において、手段は、葉酸受容体アルファ（ＦＲα）結合剤、例えば抗体を含む。さらなる実施形態において、抗体は、下記からなる群から選択される。
（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）ＭＯＶ１８抗体；
（ｄ）ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｊ）ＣＤＲＨ１として配列番号５５（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号５６（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号５７（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号５１（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５２（ＮＡＫＴＬＡＥ）およびＣＤＲＬ３として配列番号５３（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体；
（ｌ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｍ）ＣＤＲＨ１として配列番号３９（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４０（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４１（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＬＡＳＮＬＥＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体；
（ｏ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｐ）ＣＤＲＨ１として配列番号３１（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３２（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３３（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２７（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２８（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号２９（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体；
（ｒ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｓ）ＣＤＲＨ１として配列番号４７（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４８（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４９（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４３（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号４４（ＹＴＳＳＬＨＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号４５（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体；
（ｕ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｗ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；
（ｘ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；ならびに
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体。
ある種の実施形態において、抗体は標識され、限定されないが、放射性標識、ビオチン標識、発色団標識、蛍光色素標識または酵素標識が挙げられる。
なお別の実施形態において、キットは、対象由来の試料を得るための手段を含む。
本発明は、以下の詳細な説明および図面によってさらに例示される。
実施例に記載される尿におけるＦＲαを評価するための電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）法の概要図を示す。固体支持体に結合されたＭＯＶ１８抗体は尿中のＦＲαに結合した。その後、ＦＲαは、Ｒｕ標識されたＭＯＲＡｂ−００３抗体に結合することによって検出された。 ＥＣＬＩＡによって測定した場合、卵巣癌対象の尿および正常な対照対象の尿におけるＦＲαレベルの分布を示す図である（実施例１参照）。 イムノブロッティングを用いた卵巣癌患者の尿中のＦＲα（レーン１上の淡いバンド、レーン２上の明確なバンド）の検出を示す図である（実施例５参照）。 実施例７に記載されるように、尿をグアニジンにより処置した後、ＥＣＬＩＡによって測定した場合、卵巣癌対象の尿および正常な対照対象の尿におけるＦＲαレベルの分布を示す図である。 実施例７に記載されるように、尿をグアニジンにより処置した後、尿中のＦＲαレベルのＥＣＬＩＡ測定の感受性および特異性を示すＲＯＣ曲線を示す図である。曲線下面積（ＡＵＣ）は、卵巣癌を対照対象から区別する試験の精度を測定する。９１００ｐｇ／ｍＬのカットオフ値（これを超える値は試験結果が異常と考えられた）を用いた。 クレアチニンレベルについて修正後、卵巣癌（ＯＣ）および正常な対照対象におけるＦＲαレベルの分布を示す図である。ＦＲαのクレアチニン修正済みのレベルにおける卵巣癌患者と対照の間に統計学的な有意差がある（ｐ＝０．００７）（実施例８参照）。 グアニジン処理された尿試料の電気化学発光アッセイ（ＥＣＬＩＡ）を用いて決定されたクレアチニン修正済みのＦＲαレベルのＲＯＣ分析を示す図である（実施例８参照）。 実施例９に記載されるように、試料におけるＦＲα（すなわち、ＦＲα）のレベルを評価するために用いられた酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）法の概要図である。ＭＯＶ−１８は、生物学的液体からＦＲαを結合する捕捉抗体として役割を果たした。ＦＲαは、西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートされたアビジン（アビジン−ＨＲＰ）を用いて検出されるビオチン化ＭＯＲＡｂ−００３に結合することによって検出された。 実施例９に記載されるように、１工程および２工程のインキュベーション手法を用いて、血清中のＦＲαの測定のために得られた結果を示す図である。 実施例１１に記載されるように、ヒト血漿中のＦＲαのレベルを評価するための酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）法により使用された捕捉抗体および検出抗体の３種の組み合わせの概要図である。 実施例１１に記載されるように、捕捉抗体および検出抗体の３種の組み合わせによるＥＩＡを用いて決定された個々の対象についてのＦＲαの血漿濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す図である。 ＯＤ値とＦＲα濃度の間の関係を示す図である（実施例１１参照）。 ＥＩＡを用いて決定された、卵巣癌対象および正常な対照対象における血漿ＦＲα濃度の分布を示す図である（実施例１２参照）。 ＥＩＡおよびＥＣＬＩＡを用いて決定されたＦＲα血漿濃度間の相関を示す図である（実施例１２参照）。 血清および尿中のＦＲαレベルのＥＣＬＩＡ測定値間の相関を示す図である。肺癌患者についての相関は、ｒ＝０．２４（上段パネル）であり、卵巣癌患者についての相関はｒ＝−０．７６（下段パネル）であった（実施例１３参照）。 対１を用いて行われたアッセイについての血清対血漿のＦＲαレベルの相関を示す図である（実施例１６参照）。 対２を用いて行われたアッセイについての血清対血漿のＦＲαレベルの相関を示す図である（実施例１６参照）。 対１対対２を用いて行われたアッセイについての血清ＦＲαレベルの相関を示す図である（実施例１６参照）。 対１対対２を用いて行われたアッセイについての血漿ＦＲαレベルの相関を示す図である（実施例１６参照）。 対２を用いて行われたアッセイについての血清ＦＲαレベルの日中の相関を示す図である（実施例１６）。
本発明は、少なくとも一部には、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）が、対照試料と比較して、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌を有する対象の生体液、例えば尿または血清においてレベルが増加することが見出されるという予期せぬ発見に基づいている。さらに、本発明は、少なくとも一部には、試料中のＦＲαレベルを評価するために必要な感受性を示す免疫アッセイの同定に基づき、この場合、そうすることの従前の試みは繰り返し失敗している。結果として、本発明は、対象由来の試料において、細胞に結合しないＦＲαのレベルを評価することによって、ＦＲα発現癌を診断するための方法を提供する。実際に、本発明は、試料において細胞に結合しないＦＲαのレベルを正確に評価することができる免疫アッセイを提供することによって、卵巣癌などのＦＲα発現癌についてＦＲαに基づく診断アッセイを開発するという従前の試みの中で得られた課題を克服する。
したがって、対象がＦＲα発現癌を有するまたはそれを発症する危険性にあるかどうかを評価するための方法およびキット、さらにＦＲα発現癌の進行を評価するための方法およびキットが提供される。種々の実施形態において、方法は、対象における卵巣癌の存在、程度または発症の危険性の評価において、対照レベルと比較した場合、試料、例えば、尿および血清において、細胞に結合しないＦＲαのレベルの比較を伴う。特定の実施形態において、方法は、試料、例えば、尿または血清において、細胞に結合しないＦＲαのレベルの評価において、ＭＯＲＡｂ−００３抗体、ＭＯＲＡｂ−００３抗体またはＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を有する抗体と同じエピトープに結合する抗体の使用を伴う。その代わりにまたはそれに加えて、ＭＯＶ１８抗体もしくはＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体、５４８９０８抗体、５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体、６Ｄ３９８抗体もしくは５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体は、本発明の方法に従って用いられてもよい。
本発明の種々の態様は、以下のサブセクションにおいて、さらに詳細に説明される。
Ｉ．定義
本明細書で使用するとき、以下の用語の各々は、このセクションにおける用語と関連付けられた意味を有する。
冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」とは、本明細書において、冠詞の文法上目的語の１つまたは１を超える（すなわち、少なくとも１つ）を指す。例えば、「１つの要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または１を超える要素を意味する。
本明細書で使用するとき、用語「対象」とは、ヒトおよび非ヒト動物、例えば獣医学的対象を指す。用語「非ヒト動物」は全ての脊椎動物を含み、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、トリ、両生類および爬虫類が挙げられる。好ましい実施形態において、対象はヒトである。
用語「癌」または「腫瘍」は、当該技術分野において周知であり、例えば、対象において、癌を引き起こす細胞に典型的な特徴、例えば制御されない増殖、不死性、転移能、急速な成長および増殖速度、およびある種の特徴的形態学的状態を有する細胞の存在を指す。癌細胞は、多くの場合、腫瘍の形態であるが、このような細胞は対象内で単独で存在してもよく、または白血病細胞などの非腫瘍形成性癌細胞であってもよい。本明細書で使用するとき、用語「癌」には、前癌状態の癌および悪性癌が含まれる。
本明細書で使用するとき、「ＦＲα発現癌」には、癌細胞がＦＲαを発現することによって特徴付けられる任意のタイプの癌が含まれる。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は、癌細胞が、ＦＲαの増加レベルが対象由来の生物学的試料において検出され得るような様式で、ＦＲαを分泌し、脱落し、運び出しまたは放出することができることによって特徴付けられる癌性状態を含む。ＦＲα発現癌には、限定されないが、肺癌（例えば、気管支肺胞癌腫、カルチノイド腫瘍および非小細胞肺癌、例えば腺癌）；中皮腫；卵巣癌；腎臓癌；脳癌（例えば、未分化上衣腫および若年性小脳毛様細胞性星状細胞腫）；子宮頸癌；鼻咽腔癌；中胚葉由来の腫瘍；頭頸部の扁平上皮癌腫；子宮内膜癌；卵巣の類内膜腺癌；漿液性嚢胞腺癌；乳癌；膀胱癌；膵臓癌；骨癌（例えば、高悪性度骨肉腫）；下垂体癌（例えば、下垂体腺腫）が挙げられる。例えば、米国特許第７，７５４，６９８号；米国出願公開第２００５／０２３２９１９号；ＷＯ２００９／１３２０８１；Ｂｕｅｎｏ Ｒら、Ｊ ｏｆ Ｔｈｏｒａｃｉｃ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ、１２１（２）：２２５−２３３（２００１年）；Ｅｌｋａｎａｔ Ｈ ＆ Ｒａｔｎａｍ Ｍ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、１１、５０６−５１９（２００６年）；Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＷＡら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ、Ｓｕｐｐｌ ８：８９−９５（１９９４年）；Ｈａｒｔｍａｎ Ｌ．Ｃ．ら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２１：９３８−９４２（２００７年）；Ｉｗａｋｉｒｉ Ｓら．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１５（３）：８８９−８９９；Ｗｅｉｔｍａｎ，ＳＤら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５２：３３９６−３４０１（１９９２年）；Ｓａｂａ Ｎ．Ｆ．ら、Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ、３１（４）：４７５−４８１（２００９年）；Ｙａｎｇ Ｒら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３：２５５７−２５６７（２００７年）を参照されたい。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。別の実施形態において、ＦＲα発現癌は、非小細胞肺癌などの肺癌である。他の実施形態において、ＦＲα発現癌は、結腸直腸癌および甲状腺髄様癌である。
本明細書で使用するとき、「ＦＲα発現癌に罹患している」対象は、資格のある臨床医によって（例えば、本発明の方法によって）このような癌であることを臨床的に診断されたもの、またはこのような癌の１もしくはそれを超える兆候または症状（例えば、生物学的液体中のＦＲαのレベル増加）を示し、その後、資格のある臨床医によって（例えば、本発明の方法によって）このような癌であることを臨床的に診断されたものである。また、ＦＲα発現癌の動物モデルとして役割を果たす非ヒト対象は、「ＦＲα発現癌に罹患している」対象たる用語の範囲内にあってもよい。
用語「卵巣癌」とは、当該技術分野において認識されている疾患を指し、上皮性卵巣癌（ＥＯＣ；西洋諸国における卵巣癌の９０％超）、胚細胞腫瘍（卵巣癌の約２−３％）、および間質卵巣癌の各々を含む。卵巣癌は、腫瘍組織の分化に基づいて、異なる群に階層化される。グレードＩにおいて、腫瘍組織は十分に分化している。グレードＩＩにおいて、腫瘍組織は中程度に十分に分化している。グレードＩＩＩにおいて、腫瘍組織は不十分に分化している。このグレードは、グレードＩおよびＩＩよりも少ない良好な予後と相関する。
卵巣癌は、癌の転移に基づいて異なる病期に階層化される。一般的に、病期Ｉは、１つ（病期ＩＡ）または両方（病期ＩＢ）の卵巣周囲の嚢内に限定されるが、いくつかの病期Ｉ（すなわち、病期ＩＣ）の癌において、悪性細胞が、腹水中、腹膜洗浄液（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｒｉｎｓｅ ｆｌｕｉｄ）中または卵巣表面上に検出されてもよい。病期ＩＩは、１つまたは両方の卵巣から他の骨盤構造への腫瘍の拡大または転移を伴う。病期ＩＩＡにおいて、腫瘍は、子宮、卵管または両方に拡大しまたは転移している。病期ＩＩＢは、骨盤への腫瘍の拡大を伴う。病期ＩＩＣは、悪性細胞が腹水中、腹膜洗浄液中または卵巣の表面上に検出され得る病期ＩＩＡまたはＩＩＢである。病期ＩＩＩにおいて、腫瘍は、小腸もしくは網への少なくとも１つの悪性拡大を含み、微視的サイズ（病期ＩＩＩＡ）もしくは巨視的サイズ（２センチメートル未満の径、病期ＩＩＩＢ；２センチメートルを超える径、病期ＩＩＩＣ）の骨盤外腹膜インプラントを形成しまたは後腹膜もしくは鼠径リンパ節に転移している（病期ＩＩＩＣの代替の指標）。病期ＩＶにおいて、腫瘍の遠隔（すなわち、腹膜でない）転移が検出され得る。
卵巣癌の種々の病期の継続期間は、現在知られていないが、各々、少なくとも約１年であると考えられている（Ｒｉｃｈａｒｔら、１９６９年、Ａｍ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．１０５：３８６）。予後は病期の記号の増加に伴って減少する。例えば、病期Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶの卵巣癌であると診断されたヒト対象についての５年生存率は、それぞれ、８０％、５７％、２５％および８％である。
前述の卵巣癌のタイプ、グループおよび病期の各々は、本明細書で使用される用語「卵巣癌」に包含される。
本明細書で使用するとき、用語「肺癌」は、いくつかの症例において、転移をもたらす制御されない細胞増殖を伴う肺組織の疾患を指す。肺癌は、男性および女性の癌に関連した死亡の最も共通した原因である。大部分の原発性肺癌は、肺の癌腫であり、上皮細胞由来である。肺癌の主なタイプは、小細胞肺癌腫（ＳＣＬＣ）および非小細胞肺癌腫（ＮＳＣＬＣ）である。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は、非小細胞肺癌である。
小細胞肺癌または小細胞肺癌腫（ＳＣＬＣ）は肺の悪性癌であり、この場合、癌細胞は扁平形状であり、細胞質が少量である；したがって、ＳＣＬＣは、「燕麦細胞癌腫」と呼ばれることもある。一般的に、ＳＣＬＣはＮＳＣＬＣよりも転移性であり、扁平上皮癌腫と組み合わせて観察されることがある。
本明細書で使用するとき、用語「非小細胞肺癌」は、非小細胞肺癌腫（ＮＳＣＬＣ）としても知られ、小細胞肺癌腫（ＳＣＬＣ）以外の上皮性肺癌を指す。腺癌、扁平上皮癌腫および大細胞肺癌腫の３つの主要なサブタイプが存在する。他のあまり一般的でないタイプの非小細胞肺癌には、多形性のカルチノイド腫瘍、唾液腺癌腫および未分類の癌腫が挙げられる。腺癌は肺癌の約４０％を占め、喫煙をしたことがない人々における最も共通のタイプの肺癌である。扁平上皮癌腫は、肺癌の約２５％を占める。肺の扁平上皮癌腫は、女性よりも男性において共通し、他のタイプの肺癌腫よりもタバコ喫煙の前歴とさらにより高い相関性がある。少なくとも４つの改変体（乳頭状、小細胞、明細胞および類基底）の肺の扁平上皮癌腫がある。大細胞肺癌腫は、肺において形質転換した上皮細胞由来の異種グループの悪性新生物である。大細胞肺癌腫は、小細胞癌腫、扁平上皮癌腫または腺癌の光学顕微鏡的特徴を欠損している癌腫である。
異なる病期分類システムをＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣに用いる。ＳＣＬＣは、同側の半胸部に限定される制限された疾患として分類され、または同側の半胸部を超えた転移を伴う広範囲の疾患として分類される。
ＮＳＣＬＣは、腫瘍−結節−転移（ＴＮＭ）病期分類システムを用いて分類されてもよい。Ｓｐｉｒａ Ｊ ＆ Ｅｔｔｉｎｇｅｒ，Ｄ．Ｓ．Ｍｕｌｔｉｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ、３５０：３８２−（２００４年）（下記ではＳｐｉｒａとする）；Ｇｒｅｅｎｅ ＦＬ、Ｐａｇｅ ＤＬ、Ｆｌｅｍｉｎｇ ＩＤ、Ｆｒｉｔｚ ＡＧ、Ｂａｌｃｈ ＣＭ、Ｈａｌｌｅｒ ＤＧら（ｅｄｓ）、ＡＪＣＣ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ、６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、２００２：１６７−７７（下記ではＧｒｅｅｎｅとする）；Ｓｏｂｉｎ ＬＨ、Ｗｉｔｔｅｋｉｎｄ ＣＨ（ｅｄｓ）、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｃａｎｃｅｒ、ＴＮＭ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｕｍｏｕｒｓ、６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ（２００２年）（下記ではＳｏｂｉｎとする）を参照されたい。さらに、ＮＳＣＬＣは、典型的には、下記の分類スキームによって決定される癌の病期に従って治療される（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｃａｎｃｅｒｔｏｐｉｃｓ／ｐｄｑ／ｔｒｅａｔｍｅｎｔ／ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ−ｌｕｎｇ／Ｐａｔｉｅｎｔ／ｐａｇｅ２＃Ｋｅｙｐｏｉｎｔ１０参照）。
潜伏（隠れた）病期において、癌細胞は唾液（肺から喀出される粘液）中に見出されるが、腫瘍は、画像もしくは気管支鏡検査法によって肺において見出すことができずまたは腫瘍は非常に小さいため検査することができない。
病期０（上皮内癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ））において、異常な細胞は、気道内部に見出される。これらの異常な細胞は癌となり、隣接する正常組織内に広がる場合がある。また、病期０は上皮内癌腫とも呼ばれる。
病期Ｉは、癌が形成されており、病期ＩＡとＩＢに分類される。
病期ＩＡにおいて、腫瘍は肺においてのみ存在し、３センチメートル以下である。
病期ＩＢにおいて、癌はリンパ節までには広がらずまたは以下の１もしくは複数が当てはまる：（ｉ）腫瘍の大きさが３センチメートルを超えるが、５センチメートルよりは大きくない；（ｉｉ）癌が主要気管支に広がり、気管が気管支に接続する場所の下の少なくとも２センチメートルであり；（ｉｉｉ）癌が、肺を覆う膜の最内層に広がっている；（ｉｖ）肺の一部が、気管が気管支に接続する領域において、崩壊しているまたは肺炎（肺の炎症）を発症している。
病期ＩＩＡにおいて、癌は、原発性腫瘍と同じ胸部側のある種のリンパ節に広がっている；癌は、（ａ）５ｃｍもしくはそれ未満である、（ｂ）主要気管支に広がっている、および／または（ｃ）肺の内膜（ｌｕｎｇ ｌｉｎｉｎｇ）の最内層に広がっている。または、癌はリンパ節に広がっていない；癌は、（ｄ）５ｃｍより大きいが７ｃｍより大きくない、（ｅ）主要気管支に広がっている、および／または（ｆ）肺の内膜の最内層に広がっている。肺の一部は崩壊しているまたは炎症を起こしている場合がある。病期ＩＩＡは、腫瘍の大きさ、腫瘍が見つかった場所、およびリンパ節に癌が存在するかどうかにより２つのセクションに分けられる。第一のセクションにおいて、癌は、腫瘍と同じ胸部側のリンパ節に広がっている。癌を有するリンパ節が肺内にあるまたは気管支の近傍にある。また、以下の１つもしくは複数が当てはまる：（ｉ）腫瘍の大きさが５センチメートルよりは大きくない；（ｉｉ）癌が主要気管支に広がり、気管が気管支に接続する場所の下の少なくとも２センチメートルであり；（ｉｉｉ）癌が、肺を覆う膜の最内層に広がっている；（ｉｖ）肺の一部が、気管が気管支に接続する領域において、崩壊しているまたは肺炎（肺の炎症）を発症している。第二のセクションにおいて、癌はリンパ節までには広がらずおよび以下の１つもしくは複数が当てはまる：（ｉ）腫瘍の大きさが５センチメートルを超えるが、７センチメートルよりは大きくない；（ｉｉ）癌が主要気管支に広がり、気管が気管支に接続する場所の下の少なくとも２センチメートルであり；（ｉｉｉ）癌が、肺を覆う膜の最内層に広がっている；（ｉｖ）肺の一部が、気管が気管支に接続する領域において、崩壊しているまたは肺炎（肺の炎症）を発症している。
病期ＩＩＢにおいて、癌は、原発性腫瘍と同じ胸部側のある種のリンパ節に広がっている；癌は、（ａ）５ｃｍより大きいが、７ｃｍよりは大きくない、（ｂ）主要気管支に広がっている、および／または（ｃ）肺の内膜の最内層に広がっている。肺の一部は、崩壊しているまたは炎症を起こしている場合がある。あるいは、（ｄ）癌は、７ｃｍより大きい；（ｅ）主要気管支、（ｆ）横隔膜、（ｇ）胸壁もしくは胸壁の内膜に広がっている、および／または（ｈ）心臓周囲の膜に広がっている。同じ肺葉に１つまたは複数の別々の腫瘍があり得る；癌が横隔膜を調節する神経に広がっている場合がある；肺全体が崩壊しているまたは炎症を起こしている場合がある。病期ＩＩＢは、腫瘍の大きさ、腫瘍が見つかった場所、およびリンパ節に癌が存在するかどうかにより２つのセクションに分けられる。第一のセクションにおいて、癌は、腫瘍と同じ胸部側のリンパ節近傍に広がっている。癌を有するリンパ節が肺内にあるまたは気管支の近傍にある。また、以下の１つもしくは複数が当てはまる：（ｉ）腫瘍の大きさが５センチメートルを超えるが、７センチメートルよりは大きくない；（ｉｉ）癌が主要気管支に広がり、気管が気管支に接続する場所の下の少なくとも２センチメートルであり；（ｉｉｉ）癌が、肺を覆う膜の最内層に広がっている；（ｉｖ）肺の一部が、気管が気管支に接続する領域において、崩壊しているまたは肺炎（肺の炎症）を発症している。第二のセクションにおいて、癌はリンパ節までには広がらずおよび以下の１つもしくは複数が当てはまる：（ｉ）腫瘍の大きさが７センチメートルを超える；（ｉｉ）癌が主要気管支（および気管が気管支に接続する場所の下の２センチメートル未満であり）、胸壁、横隔膜または横隔膜を調節する神経に広がっている；（ｉｉｉ）心臓周囲の膜もしくは胸壁の内膜に広がっている、（ｉｖ）肺全体が崩壊しているまたは肺炎（肺の炎症）を発症している、（ｖ）同じ肺葉に１つまたは複数の別々の腫瘍が存在している。
病期ＩＩＩＡは、腫瘍の大きさ、腫瘍が見つかった場所、（もしあれば）どのリンパ節が癌を有するかにより３つのセクションに分けられる。病期ＩＩＩＡの第一のセクションにおいて、癌は、腫瘍と同じ胸部側のリンパ節に広がっている。癌を有するリンパ節は、胸骨（胸の骨）近傍にあるまたは気管支が肺に入る場所にある。また、腫瘍は任意の大きさであってもよい；肺の一部（気管が気管支に接続する場所）または肺全体が崩壊しているまたは肺炎（肺の炎症）を発症していてもよい；同じ肺葉に１つまたは複数の別々の腫瘍が存在してもよい；および癌が以下のいずれかに広がっていてもよい：（ｉ）主要な気管支であるが、気管が気管支に接続する領域ではない、（ｉｉ）胸壁、（ｉｉｉ）横隔膜および横隔膜を調節する神経、（ｉｖ）肺周囲の膜または胸壁の内膜、（ｉｖ）心臓周囲の膜。病期ＩＩＩＡの第二のセクションにおいて、癌は、腫瘍と同じ胸部側のリンパ節に広がっている。癌を有するリンパ節は、肺内または気管支近傍にある。また、腫瘍は任意の大きさであってもよい；肺全体が崩壊しているまたは肺炎（肺の炎症）を発症していてもよい；癌を有する肺葉のいずれかに１つまたは複数の別々の腫瘍が存在してもよい；および癌が以下のいずれかに広がっていてもよい：（ｉ）主要な気管支であるが、気管が気管支に接続する領域ではない、（ｉｉ）胸壁、（ｉｉｉ）横隔膜および横隔膜を調節する神経、（ｉｖ）肺周囲の膜または胸壁の内膜、（ｖ）心臓または心臓周囲の膜、（ｖｉ）心臓にもたらすまたは心臓からもたらされる主要な血管、（ｖｉ）気管、（ｖｉｉ）食道、（ｖｉｉｉ）喉頭（ｖｏｉｃｅ ｂｏｘ）を調節する神経、（ｉｘ）胸骨（胸の骨）または背骨、（ｘ）竜骨（気管が気管支に接続する場所）。病期ＩＩＩＡの第三のセクションにおいて、癌はリンパ節に広がっておらず、腫瘍は任意の大きさであってもよく、および癌は以下のいずれかに広がっている：（ｉ）心臓、（ｉｉ）心臓にもたらすまたは心臓からもたらされる主要な血管、（ｉｉｉ）気管、（ｉｖ）食道、（ｖ）喉頭（ｖｏｉｃｅ ｂｏｘ）を調節する神経、（ｖｉ）胸骨（胸の骨）または背骨、（ｖｉ）竜骨（気管が気管支に接続する場所）。
病期ＩＩＩＢは、腫瘍の大きさ、腫瘍が見つかった場所、どのリンパ節が癌を有するかにより２つのセクションに分けられる。第一のセクションにおいて、癌は、鎖骨上のリンパ節または腫瘍と反対の胸部のリンパ節に広がっている；腫瘍は任意の大きさであってもよい；肺の一部（気管が気管支に接続している場所）または肺全体が崩壊しているまたは肺炎（肺の炎症）を発症していてもよい；癌を有する肺葉のいずれかに１つまたは複数の別々の腫瘍が存在していてもよい；および癌は以下のいずれかに広がっていてもよい：（ｉ）主要な気管、（ｉｉ）胸壁、（ｉｉｉ）横隔膜および横隔膜を調節する神経、（ｉｖ）肺周囲の膜または胸壁の内膜、（ｉｖ）心臓または心臓周囲の膜、（ｖ）心臓にもたらすまたは心臓からもたらされる主要な血管、（ｖｉ）気管、（ｖｉｉ）食道、（ｖｉｉｉ）喉頭（ｖｏｉｃｅ ｂｏｘ）を調節する神経、（ｉｘ）胸骨（胸の骨）または背骨、（ｘ）竜骨（気管が気管支に接続する場所）。病期ＩＩＩＢの第二のセクションにおいて、癌は、腫瘍と同じ胸部側のリンパ節に広がっている；癌を有するリンパ節は胸骨（胸の骨）の近傍または気管支が肺に入る場所にある；腫瘍は任意の大きさであってもよい；同じ肺の異なる肺葉に別々の腫瘍が存在していてもよい；および癌は以下のいずれかに広がっていてもよい：（ｉ）心臓、（ｉｉ）心臓にもたらすまたは心臓からもたらされる主要な血管、（ｉｉｉ）気管、（ｉｖ）食道、（ｖ）喉頭（ｖｏｉｃｅ ｂｏｘ）を調節する神経、（ｖｉ）胸骨（胸の骨）または背骨、（ｖｉｉ）竜骨（気管が気管支に接続する場所）。
病期ＩＶにおいて、腫瘍は任意の大きさであってもよく、癌はリンパ節に広がっていてもよい。以下の１つまたは複数が当てはまる：両肺において１つまたは複数の腫瘍が存在する；癌が肺または心臓の周囲の体液に見出される；癌が他の生体部分、例えば脳、肝臓、副腎、腎臓または骨に広がっている。
したがって、前述の発明の様々な実施形態において、肺癌は、対象の試料（例えば、尿または血清）における正常細胞または癌細胞などの細胞に結合しないＦＲαのレベルの評価に基づいて、前記病期（例えば、潜在的な、病期０、病期ＩＡ、病期ＩＢ、病期ＩＩＡ、病期ＩＩＢ、病期ＩＩＩＡ、病期ＩＩＩＢまたは病期ＩＶ）のいずれかに階層化されてもよい。
本明細書で使用するとき、用語「葉酸受容体アルファ」（ＦＲα、ＦＲ−アルファ、ＦＯＬＲ−１またはＦＯＬＲ１とも称される）とは、葉酸に対する高親和性受容体のアルファアイソフォームを指す。膜に結合したＦＲαは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーによって細胞表面に結合し、細胞外コンパートメントと細胞内コンパートメントの間を再循環し、葉酸を細胞に輸送することができる。ＦＲαは、様々な上皮組織に発現し、女性の生殖器系、胎盤、乳房、近位尿細管、脈絡叢、肺および唾液腺の組織が挙げられる。ＦＲαの可溶形態は、膜に固定された葉酸受容体へのプロテアーゼまたはホスホリパーゼの作用によって誘導され得る。
ヒトＦＲαのコンセンサスなヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、本明細書において、それぞれ配列番号２４および２５に記載されている。改変体、例えば、天然に存在する対立遺伝子改変体または少なくとも１つのアミノ酸置換を含む配列は、本明細書で使用される用語によって包含される。
本明細書で使用するとき、用語「細胞に結合しない」とは、癌細胞などの細胞の細胞膜に結合しないＦＲαを指す。特定の実施形態において、細胞に結合しないＦＲαは、いずれの細胞にも結合せず、生物学的液体、例えば尿または血清に自由に浮遊または可溶化されている。例えば、ＦＲαは、正常細胞または癌細胞から、例えば癌細胞の表面から生物学的液体に脱落され、分泌されまたは運び出されてもよい。
細胞に結合しない葉酸受容体アルファの「レベル」とは、本明細書で使用するとき、タンパク質レベルの測定のために、当該技術分野において知られている任意の方法を用いて決定される、葉酸受容体アルファタンパク質のレベルを指す。このような方法には、例えば、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高拡散クロマトグラフィー、液体またはゲル沈降反応、吸光分光法、比色分析法、分光学的定量法、フローサイトメトリー、免疫拡散法（一重または二重）、液相アッセイ、免疫電気泳動、ウェスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイおよび電気化学発光イムノアッセイ（以下に例示される）などが挙げられる。特定の実施形態において、レベルは、本明細書においてより詳細に記載されている抗体に基づく技術を用いて決定される。
一般的に、ウェスタンブロッティングおよび免疫蛍光技術のための固体支持体上で、細胞に結合しないＦＲαに特異的な抗体または結合タンパク質のいずれかを固定することが好ましい。適切な固相支持体または担体には、抗原または抗体を結合することができる任意の支持体が含まれる。周知の支持体または担体には、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然および修飾されたセルロース、ポリアクリルアミド、斑糲岩および磁鉄鉱が挙げられる。
当業者は、抗体または抗原に結合するのに適切な他の多くの担体を知っており、本発明を用いた使用にこのような支持体を適合することができる。例えば、対象試料（例えば、尿または血清）から単離されたタンパク質は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動上で移動し、ニトロセルロースなどの固相支持体に固定され得る。次に、支持体は、適切な緩衝液で洗浄され、続いて、標識された抗体で処理され得る。その後、固相支持体は、２度目の緩衝液で洗浄され、未結合の抗体を除去することができる。次に、固体支持体に結合した標識量は、従来の手段によって検出され得る。電気泳動技術を用いてタンパク質を検出する手段は、当業者に周知である（概して、Ｒ．Ｓｃｏｐｅｓ（１９８２年）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，（１９９０年）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１８２：Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．参照）。
他の標準的な方法は、当業者に周知であるイムノアッセイ技術を含み、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ Ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｐｒｉｃｅ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ、ｅｄｓ．、ＭａｃＭｉｌｌａｎ（１９９７年）およびＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ、ｅｄｓ．、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｈ．９（１９８８年）に見出すことができ、各々は、その全体として、参照により本明細書に組み込まれる。
葉酸受容体アルファの発現レベルを決定するためにイムノアッセイにおいて使用される抗体は、検出可能なレベルで標識化されてもよい。用語「標識化される」とは、結合剤または抗体に関して、結合剤または抗体に検出可能な基質をカップリングさせる（すなわち、物理的に連結させる）ことによる結合剤または抗体の直接標識、および直接的に標識される別の試薬との反応性による結合剤または抗体の間接標識を包含することを意図する。間接標識の例には、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出が含まれる。一実施形態において、抗体は、標識され、例えば、放射性標識され、発色団標識され、フルホロフォア標識されまたは酵素標識される。別の実施形態において、抗体は、細胞に結合しないＦＲαに特異的に結合する抗体誘導体（例えば、基質とコンジュゲートされた抗体またはタンパク質−リガンド対（例えば、ビオチン−ストレプトアビジン）のタンパク質もしくはリガンドとコンジュゲートされた抗体、または抗体断片（例えば、一本鎖抗体、単離された抗体超可変領域））である。
本発明の一実施形態において、プロテオーム法、例えば質量分析法を用いる。質量分析法は、化合物をイオン化し、荷電分子（またはその断片）を生じさせ、それらの質量対荷電の比を測定することからなる分析技術である。典型的な質量分析手法において、試料は対象から得られ、質量分析計に装填し、その成分（例えば、ＦＲα）を異なる方法によって（例えば、それらを電子ビームにより衝撃を与えることによって）イオン化し、荷電粒子（イオン）の形成をもたらす。次に、粒子が電磁場を通過するため、粒子の質量対荷電の比は、イオンの運動から計算される。
例えば、タンパク質結合チップへの尿または血清などの試料の塗布を伴うマトリックス関連レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析計（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）または表面エンハンス型レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析計（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）（Ｗｒｉｇｈｔ，Ｇ．Ｌ．，Ｊｒ．ら、（２００２年）Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｄｉａｇｎ ２：５４９；Ｌｉ，Ｊ．ら、（２００２年）Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ４８：１２９６；Ｌａｒｏｎｇａ，Ｃら、（２００３年）Ｄｉｓ Ｍａｒｋｅｒｓ １９：２２９；Ｐｅｔｒｉｃｏｉｎ、Ｅ．Ｆ．ら、（２００２年）３５９：５７２；Ａｄａｍ，Ｂ．Ｌ．ら、（２００２年）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６２：３６０９；Ｔｏｌｓｏｎ，Ｊ．ら、（２００４年）Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ ８４：８４５；Ｘｉａｏ，Ｚ．ら、（２００１年）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６１：６０２９）を用いて、ＦＲαのレベルを決定することができる。
さらに、細胞に結合しないＦＲαのレベルを決定するためのインビボ技術は、検出可能な分子に結合し、ＦＲαを変換する、ＦＲαに対して試行される標識された抗体を対象に導入することを含む。対象において、細胞に結合しない検出可能なＦＲαの存在、レベルまたは位置は標準的な画像化技術を用いて決定されてもよい。
用語「試料」とは、本明細書で使用するとき、対象から単離された類似の液体、細胞または組織、および対象内に存在する液体、細胞または組織の回収物を指す。好ましい実施形態において、試料は、癌細胞に結合しないＦＲαを含む生物学的液体である。生物学的液体は、典型的には、生理学的温度の液体であり、対象または生物学的供給源に存在する、そこから採取された、そこで発現している、または他にはそこから抽出された天然に存在する液体を含んでもよい。ある種の生物学的液体は、特定の組織、臓器または局所化された領域から誘導され、ある種の他の生物学的液体は対象または生物学的供給源において、より全体的にまたは全身的に位置付けられてもよい。生物学的液体の例には、血液、血清および漿膜液、血漿、リンパ液、尿、脳脊髄液、唾液、眼液、嚢胞液、涙滴、糞便、喀痰、分泌組織および臓器の粘液分泌物、膣分泌物、婦人科液、腹水、例えば非固形腫瘍、胸腔、心膜腔、腹膜腔、腹腔および他の体腔、気管支洗浄によって回収される液体などが挙げられる。特定の実施形態において、試料は尿または血清である。別の実施形態において、試料は腹水を含まずまたは腹水試料ではない。別の実施形態において、試料は腹膜液を含まずまたは腹膜液ではない。
一実施形態において、試料は対象から取り出される。別の実施形態において、試料は対象内に存在する。また、生物学的液体は、対象または生物学的供給源と接触した溶液を含み、例えば、細胞および臓器培養液、例えば細胞または臓器の馴化培地、洗浄液などが挙げられる。
いくつかの実施形態において、ほんの一部の試料は、細胞に結合しないＦＲαのレベルを決定するためにアッセイに供され、または試料の種々の部分は、細胞に結合しないＦＲαのレベルを決定するために種々のアッセイに供される。また、多数の実施形態において、試料は、アッセイの前に物理的または化学的な手段によって前処理されてもよい。例えば、実施例のセクションにおいてより詳細に検討されている実施形態において、試料、例えば、尿試料は、細胞に結合しないＦＲαについて試料をアッセイする前に、遠心分離、希釈および／または可溶化物質を用いた処理（例えば、グアニジン処理）に供された。このような技術は、本発明のアッセイの精度、信頼性および再現性を高めるために役立つ。
用語「対照試料」とは、本明細書で使用するとき、いずれかの臨床的に関連する対照試料を指し、例えば、卵巣癌に罹患していない健常対象由来の試料、評価されるべき対象よりも低い重度または遅い進行性の卵巣癌を有している対象由来の試料、いくつかの他のタイプの癌または疾患を有する対象由来の試料などが含まれる。対照試料は、１つまたは複数の対象由来の試料を含んでもよい。また、対照試料は、評価されるべき対象由来から早期時点で作られる試料であってもよい。例えば、対照試料は、疾患の早期の病期での肺癌もしくは卵巣癌などのＦＲα発現癌の発症前、または治療もしくは一部の治療の付与前に評価されるべき対象から採取される試料であり得る。また、対照試料は、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌の、動物モデルからの試料、または動物モデル由来の組織または細胞株からの試料であってもよい。一群の測定値からなる対照試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルは、例えば、平均、中央値またはモード値を含む中心傾向の測定などの任意の適切な統計学的測定に基づいて決定されてもよい。
用語「対照レベル」とは、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと比較するために使用されるＦＲαの容認されたレベルまたは予め決定されたレベルを指す。一実施形態において、ＦＲαの対照レベルは、穏やかな疾患進行を有する対象由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルに基づく。別の実施形態において、細胞に結合しないＦＲαの対照レベルは、急速な疾患進行を有する対象由来の試料におけるレベルに基づく。別の実施形態において、ＦＲαの対照レベルは、影響されていない、すなわち、疾患でない対象、すなわち、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌を有しない対象由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルに基づいている。なお別の実施形態において、ＦＲαの対照レベルは、卵巣癌の治療の付与前に、対象由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルに基づく。別の実施形態において、ＦＲαの対照レベルは、試験化合物と接触していない、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌を有する対象由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルに基づく。別の実施形態において、ＦＲαの対照レベルは、試験化合物と接触していない肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌を有しない対象由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルに基づく。一実施形態において、ＦＲαの対照レベルは、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌の動物モデル、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌の動物モデル由来の細胞または細胞株由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルに基づく。
一実施形態において、対照は、標準化された対照であり、例えば、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌を有しない対象の集団由来の細胞に結合しないＦＲαのレベルの平均を用いて事前に決定された対照が挙げられる。本発明のなお他の実施形態において、ＦＲαの対照レベルは、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌を有する対象由来の非癌性試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルに基づく。例えば、開腹術または他の医療手法が卵巣の一部における卵巣癌の存在を示す場合、ＦＲαの対照レベルは、卵巣の影響されていない部分を用いて決定されてもよく、この対照レベルは、卵巣の影響された部分におけるＦＲαのレベルと比較されてもよい。同様に、生検または他の医療手法が肺の一部における肺癌の存在を示す場合、ＦＲαの対照レベルは、肺の影響されていない部分を用いて決定されてもよく、この対照レベルは、肺の影響された部分におけるＦＲαのレベルと比較されてもよい。
本明細書で使用するとき、対象由来の試料（すなわち、試験試料）における細胞に結合しない葉酸受容体アルファのレベルと対照試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファのレベルの間の「差」は、２つの試料における葉酸受容体アルファのレベルの任意の臨床的に関連するおよび／または統計学的に有意な差を広く指す。例示的な実施形態において、差は、実施例６に示される例である受信者動作特性（ＲＯＣ）分析を用いて決定されるカットオフ値に基づいて選択される。
他の実施形態において、差は、細胞に結合しないＦＲαのレベルを決定するための方法の検出限界より大きくなる必要がある。差は、評価法の標準誤差よりも少なくとも大きいことが好ましく、好ましくは少なくとも評価法の標準誤差の約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれらを超える。差は、任意の適切なパラメータ的または非パラメータ的記述統計学または比較を含む任意の適切な比較によって評価されてもよい。例えば、細胞に結合しないＦＲαのレベルの「増加」は、対照試料におけるＦＲαのレベルの約２倍、より好ましくは約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍またはそれらを超える試験試料におけるレベルを指してもよい。また、増加は、好ましくは、対照試料におけるＦＲαの平均レベルを超える少なくとも約１．５、より好ましくは約２、約３、約４、約５またはそれを超える標準偏差である試験試料におけるレベルを指す場合がある。同様に、細胞に結合しないＦＲαのレベルの「減少」は、対照試料におけるＦＲαのレベルの約２倍、より好ましくは約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍またはそれらを下回る試験試料におけるレベルを指してもよい。また、減少は、好ましくは、対照試料におけるＦＲαの平均レベルを下回る少なくとも約１．５、より好ましくは約２、約３、約４、約５またはそれを下回る標準偏差である試験試料におけるレベルを指す場合がある。
本明細書で使用するとき、ＦＲα結合剤、例えば抗ＦＲα抗体と「試料を接触させる」たる用語には、試料またはその任意の部分を薬剤または抗体で暴露し、試料の少なくとも一部が薬剤または抗体と接触するようになることが含まれる。試料またはその一部は、何らかの方法で変更されてもよく、例えば、それを薬剤または抗体と接触させる行為の前に、それを物理的または化学的な処置（例えば、希釈またはグアニジン処理）に供することによって変更されてもよい。
用語「抗体」は、本明細書で使用するとき、ジスルフィド結合によって相互に連結されている２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖の４つのポリペプチド鎖、および任意の機能的（すなわち、抗原結合）断片、変異体、改変体またはそれらの誘導体を含み、それはＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特徴を保持している。このような変異、改変または誘導抗体フォーマットは当該技術分野において知られ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆａｂｃ断片、Ｓｃ抗体（一本鎖抗体）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、個々の抗体軽鎖、個々の抗体重鎖、抗体鎖間のキメラ融合体などを含む。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであってもよい。
各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＬＣＶＲまたはＶＬと省略される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は１つのドメインであるＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに下位に分割することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が散在している。各ＶＨおよびＶＬは、以下：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順番でアミノ末端からカルボキシ末端に配列されている３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成される。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロンとして分類され、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを画定する。
重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、宿主の組織または因子への免疫グロブリンの結合を仲介し得て、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および典型的な補体系の第一のコンポーネント（Ｃ１ｑ）を含む。
抗体の「抗原結合部分」なる用語は、本明細書で使用するとき、抗原（例えば、細胞に結合しないＦＲα）に特異的に結合する能力を保持している抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長の抗体の断片によって果たされてもよい。抗体の「抗原結合部分」なる用語内に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨおよびＶＬドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４−５４６）；（ｖｉｉ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ；および（ｖｉｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）または（ｉｘ）合成リンカーによって場合により接続されてもよい２つまたはそれを超える単離されたＣＤＲの組み合わせが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によってコードされているが、それらは、一価分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄら、（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２、４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら、（１９８８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５、５８７９−５８８３参照）を形成するために、ＶＬおよびＶＨ領域が対をなして単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって、組換え法を用いて接続され得る。また、このような単一鎖抗体は、抗体の「抗原結合部分」なる用語に包含されることが意図される。これらの抗体断片は、当業者に知られている慣用的な技術を用いて得られ、断片は、無傷な抗体と同様の方法で有用性についてスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によってまたは無傷な免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって生成することができる。
用語「抗体」は、本明細書で使用するとき、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体、天然に存在するまたは当技術分野で周知の方法に従い組換え的に生成される抗体を含む。
一実施形態において、本発明の方法に用いるための抗体は二重特異性抗体である。「二重特異性抗体」は、２種の重鎖／軽鎖対および２種の結合部位を有する人工的なハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含む様々な方法によって生成することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ、（１９９０年）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７９、３１５−３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、（１９９２年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８、１５４７−１５５３を参照されたい。
別の実施形態において、本発明の方法に用いられる抗体は、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願公開ＷＯ９４／０４６７８に記載されているラクダ抗体である。
ＶＨＨとして同定されている小さい単一の可変領域であるラクダ抗体の領域は、標的に対して高親和性を有する小タンパク質を得るように遺伝子操作によって得ることができ、「ラクダナノボディ」として知られる低分子量の抗体誘導性タンパク質をもたらす。Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，７５９，８０８参照；さらに、Ｓｔｉｊｌｅｍａｎｓら、２００４年 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：１２５６−１２６１；Ｄｕｍｏｕｌｉｎら、２００３年 Ｎａｔｕｒｅ ４２４：７８３−７８８；Ｐｌｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒら、２００３年 Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１４：４４０−４４８；Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏら、２００２年 Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８９：４５６−６２；Ｌａｕｗｅｒｅｙｓら、１９９８年 ＥＭＢＯ Ｊ．１７：３５１２−３５２０を参照されたい。ラクダ抗体および抗体断片の遺伝子操作されたライブラリーは、例えば、Ａｂｌｙｎｘ，Ｇｈｅｎｔ，Ｂｅｌｇｉｕｍから市販されている。したがって、本発明の特徴は、ＦＲαに高親和性であるラクダナノボディである。
本発明の他の実施形態において、本発明の方法に用いられる抗体は、ダイアボディ、一本鎖ダイアボディまたはジダイアボディ（ｄｉ−ｄｉａｂｏｄｙ）である。
ダイアボディは、二価の二重特異性分子であり、これは、ＶＨおよびＶＬドメインが、単一のポリペプチド鎖に発現し、同鎖上の２つのドメイン間で対形成ができないような短いリンカーによって接続されている。ＶＨおよびＶＬドメインは別の鎖の相補的ドメインと対をなし、それによって、２つの抗原結合部位を創作する（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、１９９３年 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋら、１９９４年 Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１−１１２３参照）。ダイアボディは、同じ細胞内で構造ＶＨＡ−ＶＬＢとＶＨＢ−ＶＬＡ（ＶＨ−ＶＬ立体構造）またはＶＬＡ−ＶＨＢとＶＬＢ−ＶＨＡ（ＶＬ−ＶＨ立体構造）のいずれかを有する２つのポリペプチド鎖を発現することによって生成することができる。それらの大部分は細菌において可溶形態で発現し得る。
一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は、約１５アミノ酸残基のリンカーを用いて、２つのダイアボディ形成ポリペプチド鎖を接続することによって生成される（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ、１９９７年 Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、４５（３−４）：１２８−３０；Ｗｕら、１９９６年 Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２（１）：２１−３６参照）。ｓｃＤｂは、可溶な活性型単量体の形態で細菌中に発現し得る（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ、１９９７年 Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、４５（３４）：１２８−３０；Ｗｕら、１９９６年 Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２（１）：２１−３６；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ａｎｄ Ｐａｃｋ、１９９７年 Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３（２）：８３−１０５；Ｒｉｄｇｗａｙら、１９９６年 Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、９（７）：６１７−２１参照）。
ダイアボディは、Ｆｃに融合し、「ジダイアボディ」を生成することができる（Ｌｕら、２００４年 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７９（４）：２８５６−６５参照）。
また、抗体の機能的特性を示すが、それらのフレームワークと他のポリペプチド（例えば、抗体遺伝子がコードするポリペプチドまたはインビボで抗体遺伝子の組換えによって生成されるポリペプチド以外のポリペプチド）由来の抗原結合部分を誘導するＦＲα結合分子は、本発明の方法において使用されてもよい。これらの結合分子の抗原結合ドメイン（例えば、ＦＲα結合ドメイン）は、指向進化過程を通じて生成される。例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．７，１１５，３９６を参照されたい。抗体の可変領域の構造に類似した全折り畳み構造（「免疫グロブリン様」折り畳み構造）を有する分子は、適した足場タンパク質である。抗原結合分子の誘導に適した足場タンパク質には、フィブロネクチンまたはフィブロネクチン二量体、テネイシン、Ｎ−カドヘリン、Ｅ−カドヘリン、ＩＣＡＭ、チチン、ＧＣＳＦ受容体、サイトカイン受容体、グリコシダーゼ阻害剤、抗生物質色素タンパク質、ミエリン膜接着分子Ｐ０、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２、クラスＩ ＭＨＣ、Ｔ細胞抗原受容体、ＣＤ１、Ｃ２およびＶＣＡＭ−１のＩセットドメイン、ミオシン結合タンパク質ＣのＩセット免疫グロブリンドメイン、ミオシン結合タンパク質ＨのＩセット免疫グロブリンドメイン、テロキンのＩセット免疫グロブリンドメイン、ＮＣＡＭ、トゥイッチン（ｔｗｉｔｃｈｉｎ）、ニューログリアン（ｎｅｕｒｏｇｌｉａｎ）、成長ホルモン受容体、エリストポエチン受容体、プロラクチン受容体、インターフェロン−ガンマ受容体、β−ガラクトシダーゼ／グルクロニダーゼ、β−グルクロニダーゼ、トランスグルタミナーゼ、Ｔ細胞抗原受容体、スーパーオキシドジスムターゼ、組織因子ドメイン、シトクロームＦ、緑色蛍光タンパク質、ＧｒｏＥＬおよびタウマチンが挙げられる。
抗体との関連で使用される場合の「特異的結合」または抗体断片は、対象とするタンパク質の１つまたは複数のエピトープに対する、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子の断片によってコードされるドメインを介した結合を表し、抗原性分子の混合集団を含む試料中の他の分子を実質的に認識および結合しない。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイまたは細胞結合アッセイによって測定した場合、約１×１０−８Ｍ未満のＫｄを有する同種抗原に結合する。
本明細書で使用するとき、葉酸受容体アルファ「結合剤」には、細胞に結合しないＦＲαに結合する抗体および非抗体結合剤が含まれる。非抗体結合剤または結合分子を生じさせるために、クローンライブラリーが作製され得て、この場合、抗原結合表面を形成する足場タンパク質の領域（例えば、抗体可変ドメイン免疫グロブリンの折り畳み構造のＣＤＲに対して位置および構造において類似した領域）の配列は無作為化される。ライブラリークローンは、対象とする抗原（例えば、ＦＲα）への特異的結合についておよび他の機能（例えば、ＦＲαの生物学的活性の阻害）について試験される。選択されたクローンは、さらなる無作為化および選択のための基礎として用い、抗原に対して高親和性の誘導体を生成することができる。
高親和性結合分子は、例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，８１８，４１８および７，１１５，３９６；Ｒｏｂｅｒｔｓ ａｎｄ Ｓｚｏｓｔａｋ、１９９７年 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９４：１２２９７；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，２６１，８０４；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，２５８，５５８；およびＳｚｏｓｔａｋら、ＷＯ９８／３１７００（各々の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている、足場としてのフィブロネクチンＩＩＩ（１０Ｆｎ３）の１０番目のモジュールを用いて生じさせる。
非抗体結合分子は、二量体または多量体として生成され、標的抗原に対する結合活性を増加させることができる。例えば、抗原結合ドメインは、Ｆｃ−Ｆｃ二量体を形成する抗体の定常領域（Ｆｃ）を有する融合体として発現される。例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれるＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．７，１１５，３９６を参照されたい。
「抗原」は、免疫系によって認識される分子である；該用語は元々は「抗体生成因子」に由来し、抗体に特異的に結合する分子を含む。分子レベルにおいて、抗原は、抗体の抗原結合部位で結合されるその能力によって特徴付けられる。本発明において、抗原はＦＲαであり、例えば、細胞ＦＲαまたはその一部に結合しないＦＲαである。
本明細書で使用するとき、用語「エピトープ」は、抗体によって結合され得る抗原（例えば、ＦＲα）の分子表面特徴を指す。抗原性分子は、通常、「大きな」生物学的ポリマーであり、大抵、特異的抗体に対する相互作用点として作用し得るいくつかの表面特徴を示す。任意のこのような区別可能な分子特徴はエピトープを構成する。したがって、大部分の抗原は、いくつかの区別可能な抗体によって結合される潜在性を有し、その各々は、典型的には、特定のエピトープに特異的である。本発明の一実施形態において、結合剤、例えば抗体は、受容体の膜結合形態においてではなく、細胞に結合しない受容体の形態で利用可能であるＦＲα上のエピトープに結合する。例えば、抗体は、ＭＯＲＡＢ−００３が結合するＦＲα上の同じエピトープに結合してもよい。
本明細書で使用するとき、語句「ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行」には、重症度の低い状態からより重症度の高い状態のこのような癌の進行を含む。これは、腫瘍の数または重症度、転移の程度、癌が成長しているおよび広がっている速度などの増加を含むことができる。例えば、「卵巣癌の進行」は、病期Ｉから病期ＩＩ、病期ＩＩから病期ＩＩＩなどの進行などの重症度の低い状態からより重症度の高い状態のこのような癌の進行を含む。あるいは、語句「ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行」は、重症度の高い状態からより重症度の低い状態のＦＲα発現癌の退行を指してもよい。例えば、一実施形態において、「卵巣癌の進行」は、病期ＩＶから病期ＩＩＩ、病期ＩＩＩから病期ＩＩなどの退行を指す。他の実施形態において、「ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行」は、ＦＲα発現癌の症状の開始から決定される生存率またはＦＲα発現癌の診断時からの生存率を指してもよい。
本明細書で使用するとき、用語「階層化されること」とは、当該技術分野において許容されている階層化と同様に、例えば、癌の広がりの程度に基づいて、適切な病期にＦＲα発現癌、例えば卵巣癌または肺癌を特徴付けることを指す。例えば、階層化することは、ＦＲα発現癌を病期Ｉ、病期ＩＩ、病期ＩＩＩまたは病期ＩＶに特徴付けることを含む。ある種の実施形態において、病期Ｉは、生体の一部に局在化される癌を指す。ある種の実施形態において、病期ＩＩおよび病期ＩＩＩは、局所的に進行した癌を指し、この場合、病期間の区別は、多くの場合、特定の癌に特異的である。最終的に、病期ＩＶは、しばしば転移しているまたは他の臓器にもしくは生体全体に広がっている癌を指す。
本明細書で使用するとき、用語「生存」とは、癌に対して治療された対象の生命の存続を指す。一実施形態において、生存は、腫瘍が再発しないことを指す。本明細書で使用するとき、用語「再発」は、腫瘍の初期治療が付与された対象における腫瘍または癌性細胞の再増殖を指す。腫瘍は、生体の発生部位または別の部分において再発してもよい。一実施形態において、再発する腫瘍は、対象が治療された原発性腫瘍と同じタイプである。例えば、対象が卵巣癌の腫瘍を有し、治療され、その後、別の卵巣癌の腫瘍を発症した場合、腫瘍は再発している。さらに、癌は、当初生じたものとは異なる臓器または組織において再発し得る。
ＩＩ．本発明の方法およびキット
本発明は、少なくとも部分的には、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）が、対照試料と比較して、ＦＲα発現癌を有する対象の生体液、例えば、尿または血清においてレベル増加して見出されるという予期せぬ発見に基づいている。さらに、本発明は、少なくとも一部には、試料中の細胞に結合しないＦＲαのレベルを評価するのに必要な感受性を示す免疫学的アッセイの同定に基づいており、同様の従来の試みは失敗を繰り返していた。実際に、本発明は、試料、例えば尿または血清中の細胞に結合しないＦＲαのレベルを正確に評価することができる免疫学的アッセイを提供することによって、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌についてのＦＲαに基づく診断アッセイを開発する従来の試みの中で観察された課題を克服する。
したがって、対象がＦＲα発現癌を有するまたは発症する危険性にあるかどうかを評価し、さらにＦＲα発現癌の進行を評価するための方法およびキットが提供される。種々の実施形態において、方法は、対象における卵巣癌の存在、程度または発症の危険性の評価において、対照レベルと比較して、試料、例えば尿および血清において、細胞に結合しないＦＲαのレベルの比較を伴う。
Ａ．診断方法、予測方法、危険性評価方法および階層化方法
具体的には、本発明は、対象が肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するための診断方法、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌の進行を予測するための予後方法、および対象がＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルを評価するための危険性評価方法を提供する。さらに、本発明は、肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌を癌治療群に階層化するための階層化方法を提供する。本明細書に検討されている本発明の種々の態様および実施形態は、非制限的であり、本明細書で検討されているまたは以下で特許請求されている方法およびキットのいずれかに適用してもよい、記載されている特定の実施形態の全ての可能な組み合わせを包含することが意図される。
本発明の方法は、ＦＲα発現癌を診断し、ＦＲα発現癌の進行を予測しまたは対象がＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルを評価するために、熟練の実施者によって用いられる任意の他の方法と組み合わせて行うことができる。
一態様において、本発明は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを、対象由来の試料（例えば尿または血清）において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって、対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するための方法を提供し、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているという指標である。特定の実施形態において、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルは、細胞に結合しないＦＲαに結合し、試料を（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；および（ｂ）ＣＤＲＨ１としての配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２としての配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３としての配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１としての配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２としての配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３としての配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体からなる群から選択される抗体と接触させることによって評価される。一実施形態において、試料は、尿および血清からなる群から選択される。
別の態様において、本発明は、対象が肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを、対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の尿試料における葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαレベルを比較することによって評価するための方法を提供し、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているという指標である。
別の態様において、本発明は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを、対象由来の血清試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；対象由来の血清試料における葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価するための方法を提供し、対象由来の血清試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は、対象がＦＲα発現癌に罹患しているという指標である。特定の実施形態において、対象は、血清中のＦＲαのレベルを増大させる薬剤、例えばステロイドで処理されていない。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌であり、対象は、血清中のＦＲαのレベルを増大させる薬剤、例えばステロイドで処理されていない。
本発明の方法およびキットにおいて、ＦＲα発現癌には、癌細胞がＦＲαを発現することによって特徴付けられる癌が含まれる。特定の実施形態において、ＦＲαは、癌細胞から、例えば癌細胞の表面から対象の生物学的液体に放出される。ＦＲα発現癌には、肺癌（例えば、気管支肺胞癌、カルチノイド腫瘍および非小細胞肺癌、例えば腺癌）；中皮腫；卵巣癌；腎臓癌；脳癌（例えば、未分化上衣腫および若年性小脳毛様細胞性星状細胞腫）；子宮頸癌；鼻咽腔癌；中胚葉由来の腫瘍；頭頸部の扁平上皮癌腫；子宮内膜癌；卵巣の類内膜腺癌；漿液性嚢胞腺癌；乳癌；膀胱癌；膵臓癌；骨癌（例えば、高悪性度骨肉腫）；および下垂体癌（例えば下垂体腺腫）が含まれる。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。
本発明の方法およびキットのある種の実施形態において、ＦＲα発現癌は肺癌である。より特定の実施形態において、肺癌は非小細胞肺癌腫（ＮＳＣＬＣ）である。１つのこのような実施形態において、ＮＳＣＬＣは、腺癌、扁平上皮肺癌腫、大細胞肺癌腫、多形型ＮＳＣＬＣ、カルチノイド腫瘍、唾液腺癌腫および未分類の癌腫からなる群から選択される。好ましい実施形態において、ＮＳＣＬＣは腺癌である。代替の実施形態において、肺癌は小細胞肺癌腫（ＳＣＬＣ）である。別の実施形態において、肺癌は、気管支肺胞癌腫である。なお別の実施形態において、肺癌は肺カルチノイド腫瘍である。
また、本発明は、対象が卵巣癌に罹患しているかどうかを、対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定することによって評価する方法を提供し、約３０００ａ．ｕ．／ｍｌを超える濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。特定の実施形態において、約４０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約５０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約６０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約７０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約８０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約９０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１０，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１１，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１２，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１３，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１４，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１５，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１６，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１７，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１８，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約１９，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２０，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２１，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２２，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２３，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２４，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２５，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２６，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２７，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２８，０００ａ．ｕ．／ｍｌ、約２９，０００ａ．ｕ．／ｍｌまたは約３０，０００ａ．ｕ．／ｍｌを超える濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
なお別の態様において、本発明は、対象が卵巣癌に罹患しているかどうかを、対象由来の尿試料における葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定することによって評価するための方法を提供し、約９１００ｐｇ／ｍｌを超える濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標であり、または約９１００ｐｇ／ｍｌ未満の濃度は、対象が卵巣癌に罹患していないという指標である。例えば、約９５００ｐｇ／ｍＬ、約１０，０００ｐｇ／ｍＬ、約１１，０００ｐｇ／ｍＬ、約１２，０００ｐｇ／ｍＬ、約１３，０００ｐｇ／ｍＬ、約１４，０００ｐｇ／ｍＬ、約１５，０００ｐｇ／ｍＬ、約１６，０００ｐｇ／ｍＬ、約１７，０００ｐｇ／ｍＬ、約１８，０００ｐｇ／ｍＬ、約１９，０００ｐｇ／ｍＬ、約２０，０００ｐｇ／ｍＬ、約２１，０００ｐｇ／ｍＬ、約２２，０００ｐｇ／ｍＬ、約２３，０００ｐｇ／ｍＬ、約２４，０００ｐｇ／ｍＬ、約２５，０００ｐｇ／ｍＬ、約２６，０００ｐｇ／ｍＬ、約２７，０００ｐｇ／ｍＬ、約２８，０００ｐｇ／ｍＬ、約２９，０００ｐｇ／ｍＬ、約３０，０００ｐｇ／ｍＬ、約４０，０００ｐｇ／ｍＬ、約５０，０００ｐｇ／ｍＬ、約６０，０００ｐｇ／ｍＬ、約７０，０００ｐｇ／ｍＬ、約８０，０００ｐｇ／ｍｌ、約９０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００，０００ｐｇ／ｍｌまたは約１５０，０００ｐｇ／ｍｌを超える濃度での尿試料におけるＦＲαの存在は、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である。
本発明の前述の態様のある種の実施形態において、対象由来の試料（例えば、尿試料または血清試料などの試料）における細胞に結合しないＦＲαのレベルは、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較され、レベル間の差は、対象が肺癌または卵巣癌などのＦＲα発現癌に罹患しているという指標である。特定の実施形態において、差は、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した場合、対象由来の試料における細胞に結合しないＦＲαのレベルの増加を構成し、この増加はＦＲα発現癌の存在または増殖を示す。あるいは、差はＦＲαのレベルの減少を構成し、この減少は、ＦＲα発現癌の不存在または退行を示す。本明細書で使用するとき、対象由来の試料（すなわち、試験試料）における細胞に結合しない葉酸受容体アルファのレベルと対照試料における葉酸受容体アルファのレベルの間の「差」は、２つの試料における葉酸受容体アルファのレベルの任意の臨床的に関連する変化（増加もしくは減少を含む）および／または統計学的に有意な差を広く指す。例示的な実施形態において、差は、実施例６に示される例である受信者動作特性（ＲＯＣ）を用いて決定されるカットオフ値に基づいて選択される。最適なカットオフ値は、使用されるアッセイ法および条件に依存して変更してもよい。他の実施形態において、差は、細胞に結合しないＦＲαのレベルを決定するための方法の検出限界より大きくなる必要がある。差は、評価法の標準誤差よりも少なくとも大きいことが好ましく、好ましくは少なくとも評価法の標準誤差の約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、２５倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれらを超える。差は、任意の適切なパラメータ的または非パラメータ的記述統計学または比較を含む任意の適切な比較によって評価されてもよい。例えば、ＦＲαのレベルの「増加」は、ＲＯＣ分析を用いて決定されるカットオフ値を超えるレベルを指す場合がある。また、対照試料におけるＦＲαのレベルよりも２多い、より好ましくは約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１５０％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％または約１０００％多い試験試料におけるレベルを指す場合がある。また、増加は、対照試料におけるＦＲαの平均レベルを上回る標準偏差が、好ましくは少なくとも１．５であり、より好ましくは約２、約３、約４、約５またはそれを超える試験試料におけるレベルを指す場合がある。同様に、細胞に結合しないＦＲαのレベルの「減少」は、ＲＯＣ分析を用いて決定されるカットオフ値を超えない試験試料におけるレベルを指す場合がある。また、それは、対照試料におけるＦＲαのレベルの約５％未満、約１０％未満、約１５％未満、約２０％未満、約２５％未満、約３０％未満、約４０％未満、約５０％未満、約６０％未満、約７０％未満、約８０％未満または約９０％未満である試験試料におけるレベルを指してもよい。また、減少は、好ましくは、対照試料におけるＦＲαの平均レベルを下回る少なくとも約１．５、より好ましくは約２、約３、約４、約５またはそれを下回る標準偏差である試験試料におけるレベルを指す場合がある。
本発明の方法およびキットに有用な試料は、細胞に結合しないＦＲαの検出可能なレベルを含み得る任意の組織、細胞、生検または生体液を含む。一実施形態において、試料は、組織、細胞、全血、血漿、頬腔擦取物（ｂｕｃｃａｌ ｓｃｒａｐｅ）、唾液、脳脊髄液、糞便または気管支肺胞洗浄液であってもよい。いつくかの実施形態において、試料は、ＦＲα発現腫瘍試料またはＦＲα発現癌が見られる可能性がある組織もしくは細胞の試料である。好ましい実施形態において、試料は尿または血清試料である。
生体試料は、当該技術分野において知られている様々な技術によって、例えば、生検の使用によってまたはある領域を擦取りもしくは拭き取ることによってまたは生体液を吸引するための針を用いることによって対象から得ることができる。種々の生体試料を回収するための方法は、当該技術分野において周知である。
ＦＲαタンパク質レベルの検出および定量に適した試料は、新鮮なもの、凍結されたもの、または当業者に知られている方法に従って固定されたものでもよい。適切な組織試料は、さらなる分析のために、好ましくは薄片にされ、顕微鏡スライドに置かれる。固体試料、すなわち組織試料は、可溶化および／または均質化され、次に可溶性抽出物として分析されてもよい。また、液体試料は、物理的または化学的処置に供されてもよい。いくつかの実施形態において、尿試料は、遠心分離、ボルテックス、希釈および／または可溶化物質を用いた処理（例えば、グアニジン処理）によって処理される。
一実施形態において、新鮮に得られた生検試料は、例えば、液体窒素またはジフルオロジクロロメタンを用いて凍結される。凍結試料は、例えば、ＯＣＴを用いて薄片化するために載せられ、クリオスタットにおいて連続的に薄片化される。連続切片は、顕微鏡スライドガラス上に回収される。免疫組織化学染色について、スライドは、例えば、クロムミョウバン、ゼラチンまたはポリ−Ｌ−リジンを用いて被覆され、薄片がスライドに貼りついていることを確認してもよい。別の実施形態において、薄片化前に試料を固定し、包埋する。例えば、組織試料は、例えばホルマリンに固定され、連続的に脱水され、例えばパラフィンに包埋されてもよい。
試料が得られれば、細胞に結合しないＦＲαの検出および定量に適切な当該技術分野において知られている任意の方法が、以下のセクション（Ｂ）に記載されるように、（核酸レベルまたは好ましくはタンパク質レベルで）使用されてもよい。例示的な方法は、当該技術分野において周知であり、限定されないが、ウェスタンブロット、ノーザンブロット、サザンブロット、免疫組織化学、液相アッセイ、ＥＬＩＳＡ、例えば増幅ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、免疫蛍光、フローサイトメトリー、免疫細胞化学、質量分析解析、例えばＭＡＬＤＩ−ＴＯＦおよびＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ、核酸ハイブリダイゼーション技術、核酸逆転写法および核酸増幅法を含む。
多数の実施形態において、試料（例えば、尿または血清）における細胞に結合しないＦＲαのレベルは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させることによって評価される。ＦＲαに結合する抗体は、当該技術分野において知られ、（ｉ）欧州特許出願公開第８６１０４１７０．５号（Ｒｅｔｔｉｇ）（その全内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるマウスモノクローナルＬＫ２６抗体（その重鎖および軽鎖は配列番号２２および２３として本明細書に示されている）；（ｉｉ）国際公開第２００４／１１３３８８号および米国特許第５，６４６，２５３号（そのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるＭＯＲＡＢ−００３抗体を含む。また、モノクローナル抗体ＭＯＶ１８およびＭＯｖ１９はＦＲα分子（従来、ｇｐ３８／ＦＢＰとして知られている）上の異なるエピトープに結合する。Ｍｉｏｔｔｉ、Ｓ．ら．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ、３８：２９７−３０３（１９８７年）。例えば、ＭＯＶ１８抗体は、Ｃｏｎｅｙら．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，５１：６１２５−６１３２（１９９１年）に教示されるように、配列番号２６（ＴＥＬＬＮＶＸＭＮＡＫ＊ＸＫＥＫＰＸＰＸ＊ＫＬＸＸＱＸ）（１２位でトリプトファンまたはヒスチジン残基が可能であり、２１位でアスパラギン酸またはグルタミン酸残基が可能であることに留意されたい）として本明細書に記載されているエピトープに結合する。
本明細書で使用するとき、用語「ＭＯＲＡｂ−００３」とは、ＦＲαに特異的に結合し、配列番号７に記載される成熟重鎖アミノ酸配列および配列番号８に記載される成熟軽鎖配列を含む抗体を指す。ＭＯＲＡｂ−００３について対応するプレタンパク質アミノ酸配列は、配列番号９（重鎖）および配列番号１０（軽鎖）に記載されている。ＭＯＲＡｂ−００３抗体は、以下のＣＤＲ：ＣＤＲＨ１として配列番号１、ＣＤＲＨ２として配列番号２、ＣＤＲＨ３として配列番号３、ＣＤＲＬ１として配列番号４、ＣＤＲＬ２として配列番号５およびＣＤＲＬ３として配列番号６を含む。ＭＯＲＡｂ−００３抗体を産生する細胞は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９）に２００６年４月２４日に寄託され、寄託番号第ＰＴＡ−７５５２と指定された。
ＦＲαに結合し、本発明の方法に使用するための他の抗体は、９Ｆ３．Ｈ９．Ｈ３．Ｈ３．Ｂ５．Ｇ２（９Ｆ３とも称する）、１９Ｄ４．Ｂ７（１９Ｄ４とも称する）、２４Ｆ１２．Ｂ１（２４Ｆ１２とも称する）および２６Ｂ３．Ｆ２（２６Ｂ３とも称する）を含む。これらの抗体、それらのＣＤＲおよびそれらの重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列、ならびにそれらをコードし得るポリヌクレオチド配列を表３３に示す。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、マウスＩｇＧまたはその誘導体である。他の実施形態において、抗体はヒト、ヒト化またはキメラである。
９Ｆ３
いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号２７に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む抗体または抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号２８に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号２９に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３１に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３２に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３３に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号２７に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２８に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号２９に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３１に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３２に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３３に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号２７に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２８に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号２９に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよく、また、配列番号３１に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３２に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３３に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖を有してもよい。
ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３０に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３４に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、軽鎖および重鎖可変領域を含んでもよく、軽鎖可変領域は、配列番号３０に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号３４に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む。いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、ＦＲαの天然型または非還元型のいずれかと結合し得る、９Ｆ３．Ｈ９．Ｈ３．Ｈ３．Ｂ５．Ｇ２（９Ｆ３）抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗体はマウスＩｇＧ２ａ定常領域を有する。
いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９）に２０１１年５月１９日に寄託され、寄託番号第ＰＴＡ−１１８８７とし帰属された抗体産生細胞によって生成される抗体である。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、寄託された抗体産生細胞によって生成される抗体の軽鎖および重鎖ＣＤＲの１つまたは複数を含む。いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、寄託された抗体産生細胞によって生成される抗体の軽鎖および重鎖可変領域を含む。
１９Ｄ４
いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３５に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む抗体または抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３６に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３７に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３９に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４０に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４１に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３５に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３６に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３７に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３９に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号４０に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号４１に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３５に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３６に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３７に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよく、また、配列番号３９に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号４０に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号４１に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖を有してもよい。
ＦＲαに結合する抗体は、配列番号３８に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４２に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、軽鎖および重鎖可変領域を含んでもよく、ここで、軽鎖可変領域は、配列番号３８に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号４２に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む。いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、ＦＲαの天然型または非還元型のいずれかと結合し得る、１９Ｄ４．Ｂ７（１９Ｄ４）抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗体はマウスＩｇＧ２ａ定常領域を有する。
いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９）に２０１１年５月１９日に寄託され、寄託番号第ＰＴＡ−１１８８４とし帰属された抗体産生細胞によって生成される抗体である。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、寄託された抗体産生細胞によって生成される抗体の軽鎖および重鎖ＣＤＲの１つまたは複数を含む。いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、寄託された抗体産生細胞によって生成される抗体の軽鎖および重鎖可変領域を含む。
２４Ｆ１２
いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４３に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む抗体または抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４４に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４５に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４７に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４８に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４９に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４３に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号４４に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号４５に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４７に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号４８に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号４９に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４３に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号４４に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号４５に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよく、また、配列番号４７に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号４８に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号４９に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖を有してもよい。
ＦＲαに結合する抗体は、配列番号４６に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５０に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、軽鎖および重鎖可変領域を含んでもよく、ここで、軽鎖可変領域は、配列番号４６に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号５０に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む。いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、ＦＲαの天然型または非還元型のいずれかと結合し得る、２４Ｆ１２．Ｂ１（２４Ｆ１２）抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗体はマウスＩｇＧ１定常領域を有する。
いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９）に２０１１年５月１９日に寄託され、寄託番号第ＰＴＡ−１１８８６とし帰属された抗体産生細胞によって生成される抗体である。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、寄託された抗体産生細胞によって生成される抗体の軽鎖および重鎖ＣＤＲの１つまたは複数を含む。いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、寄託された抗体産生細胞によって生成される抗体の軽鎖および重鎖可変領域を含む。
２６Ｂ３
いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５１に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む抗体または抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５２に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５３に実質的に同じであるまたは同一である軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５５に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５６に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５７に実質的に同じであるまたは同一である重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５１に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号５２に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号５３に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５５に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号５６に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号５７に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５１に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号５２に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号５３に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよく、また、配列番号５５に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号５６に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号５７に実質的に同じであるまたは同一であるＣＤＲ３アミノ酸配列を有する重鎖を有してもよい。
ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５４に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、配列番号５８に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含んでもよい。ＦＲαに結合する抗体は、軽鎖および重鎖可変領域を含んでもよく、ここで、軽鎖可変領域は、配列番号５４に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号５８に実質的に同じであるまたは同一であるアミノ酸配列を含む。いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、ＦＲαの天然型または非還元型のいずれかと結合し得る、２６Ｂ３．Ｆ２（２６Ｂ３）抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗体はマウスＩｇＧ１定常領域を有する。
いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９）に２０１１年５月１９日に寄託され、寄託番号第ＰＴＡ−１１８８５として帰属された抗体産生細胞によって生成される抗体である。いくつかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、寄託された抗体産生細胞によって生成される抗体の軽鎖および重鎖ＣＤＲの１つまたは複数を含む。いつくかの実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、寄託された抗体産生細胞によって生成される抗体の軽鎖および重鎖可変領域を含む。
ＣＤＲの抗原結合配置は、ＣＤＲ足場のような抗体様タンパク質を用いて操作されてもよい。操作された抗原結合タンパク質は、ＦＲαに結合する抗体の範囲内に含まれる。
ＦＲαに結合する他の試薬抗体は当該技術分野において知られ、現在、複数のこのような試薬抗体は、以下の表に列挙されるように、（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃｏｍｐａｒｅ．ｃｏｍにて抗ＦＲα抗体のサーチに基づく）市販されている。
Figure 0006224456
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好ましい実施形態において、ＦＲαに結合する抗体は、マウスＬＫ２６重鎖および軽鎖から誘導され、以下のＣＤＲ：ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）の少なくとも１つを含む。本発明に使用され得る抗ＦＲα抗体に関連するので、その内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，６４６，２５３号を参照されたい。さらなる突然変異は、米国特許第５，６４６，２５３号（その内容が参照により本明細書に組み込まれる）に教示されるフレームワーク領域において行われてもよい。
別の好ましい実施形態において、抗体は、ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）、ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）、ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖；およびＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）、ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）、ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）、ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む。米国特許第５，６４６，２５３号および米国特許第６，１２４，１０６号を参照されたい。別の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。別の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。さらなる実施形態において、抗体は、重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む。
いくつかの実施形態において、試料は、ＦＲαを抗体結合に近づけるようにするために修飾されることを必要としてもよい。免疫細胞化学法または免疫組織化学法の具体的な局面において、スライドは、前処理緩衝液に移され、場合により抗原の接近性を増大させるために加熱されてもよい。前処理緩衝液中での試料の加熱は細胞の脂質二重層を崩壊し、抗原（新鮮な被検査物中の場合であってもよいが、典型的には固定された被検査物において生じるものではない）（すなわち、ＦＲαタンパク質）を抗体結合により近づけるようにする。用語「前処理緩衝液」とは、本明細書において置き換え可能に使用され、特に抗体結合についてＦＲαタンパク質の接近性を増大させることによって、免疫染色について細胞学または組織学試料を調製するために使用される緩衝液を指す。前処理緩衝液は、ｐＨ特異的塩溶液、ポリマー、洗剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）または非イオン性もしくは陰イオン性界面活性剤、例えばエチルオキシル化陰イオン性もしくは非イオン性界面活性剤、アルカノエートもしくはアルコキシレートまたはさらにこれらの界面活性剤の混和物またはさらに胆汁塩の使用を含んでもよい。前処理緩衝液は、例えば、０．１％から１％のデオキシコール酸ナトリウム塩の溶液またはラウレス−１３−カルボン酸ナトリウム（例えば、Ｓａｎｄｏｐａｎ ＬＳ）または／およびエトキシル化アニオン錯体の溶液であってもよい。いくつかの実施形態において、前処理緩衝液はまたスライド保存緩衝液として用いられてもよい。特定の実施形態において、試料、例えば尿試料は、遠心分離され、ボルテックスされ、希釈されおよび／またはグアニジン処理に供される。
抗体結合についてＦＲαタンパク質をより近づけるようにするための任意の方法は、本発明の実施に用いられてもよく、当該技術分野において知られている抗原回復法が挙げられる。例えば、Ｂｉｂｂｏら、（２００２年）Ａｃｔａ．Ｃｙｔｏｌ．４６：２５−２９；Ｓａｑｉら、（２００３年）Ｄｉａｇｎ．Ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌ．２７：３６５−３７０；Ｂｉｂｂｏら、（２００３年）Ａｎａｌ．Ｑｕａｎｔ．Ｃｙｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｌ．２５：８−１１（各々の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
ＦＲαタンパク質の接近性を増大させるための前処理後、試料は、適切なブロッキング剤、例えば過酸化水素などのペルオキシダーゼブロッキング試薬を用いてブロッキングされてもよい。いくつかの実施形態において、試料は、抗体の非特異的な結合を妨げるために、タンパク質ブロッキング試薬を用いてブロッキングされてもよい。タンパク質ブロッキング試薬は、例えば、精製されたカゼインを含んでもよい。次に、ＦＲαに特異的に結合する抗体、特にモノクローナルまたはポリクローナル抗体を試料と共にインキュベートする。
抗体結合を検出するための技術は当該技術分野において周知である。ＦＲαへの抗体結合は、抗体結合のレベル、したがってＦＲαタンパク質発現のレベルに対応する検出可能なシグナルを生じさせる化学的試薬の使用を介して検出されてもよい。本発明の免疫組織化学法または免疫細胞化学法の１つにおいて、抗体結合は、標識されたポリマーにコンジュゲートされる二次抗体の使用を介して検出される。標識されたポリマーの例には、限定されないが、ポリマー−酵素コンジュゲートが含まれる。これらの複合体中の酵素は、典型的には、抗原−抗体結合部位でのクロマゲン（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）の堆積物を触媒するために使用され、それにより、対象とするバイオマーカーの発現レベルに対応する細胞染色をもたらす。酵素は、限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）およびアルカリホスファターゼ（ＡＰ）を含む。
本発明の１つの免疫組織化学法または免疫細胞化学法において、ＦＲαタンパク質に結合する抗体は、二次抗体にコンジュゲートされたＨＲＰ標識ポリマーの使用を介して検出される。また、抗体結合は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体に結合する種特異的プローブ試薬、および種特異的プローブ試薬に結合する、ＨＲＰにコンジュゲートしたポリマーの使用を介して検出され得る。スライドは、任意のクロマゲン、例えば、クロマゲン３，３−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）を用いて抗体結合に対して染色され、次に、ヘマトキシリンおよび場合により水酸化アンモニウムまたはＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ−２０などの青味剤を用いて対比染色される。他の適したクロマゲンには、例えば、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）が含まれる。本発明のいくつかの態様において、スライドは、細胞染色、例えば蛍光染色（すなわち、ＦＲα発現）を評価するために、細胞検査技師および／または病理学者によって顕微鏡的に検査される。あるいは、試料は、陽性染色細胞の同定を促進するコンピュータソフトウェアの支援により、自動化顕微鏡を介してまたはヒトによって検査されてもよい。
本発明の好ましい実施形態において、抗体は標識される。例えば、抗体結合の検出は、抗ＦＲα抗体を検出可能な基質にカップリングさせることによって促進され得る。検出可能な基質の例には、種々の酵素、補欠分子群、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる；適切な補欠分子群複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる；適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオロセイン、フルオロセインイソシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオロセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが含まれる；発光物質の例には、ルミノールが含まれる；生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが含まれる；適切な放射性物質の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃまたは３Ｈが含まれる。特定の実施形態において、抗体は、放射線標識、発色団標識、蛍光色素標識または酵素標識で標識される。
本発明の一実施形態において、凍結試料は、上記されるように調製され、続いて、例えばＴｒｉｓ−緩衝化生理食塩水（ＴＢＳ）を用いて適切な濃度に希釈されたＦＲαに対する抗体を用いて染色される。一次抗体は、ビオチン化された抗免疫グロブリンにおいてスライドをインキュベートすることによって検出され得る。このシグナルは、場合により、増幅され、抗原のジアミノベンジジン沈殿を用いて視覚化されてもよい。さらに、スライドは、場合により、例えばヘマトキシリンを用いて対比染色され、細胞を視覚化してもよい。
別の実施形態において、固定化され、包埋された試料は、凍結切片について上記したように、ＦＲαに対する抗体で染色され、対比染色される。さらに、試料は、場合により、抗体染色を視覚化するために、シグナルを増幅する薬剤で処理されてもよい。例えば、ビオチニル−チラミドのペルオキシダーゼ触媒される堆積物は、順にペルオキシダーゼコンジュゲートされたストレプトアビジン（触媒されたシグナル増幅（ＣＳＡ）システム，ＤＡＫＯ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）と反応し、これを用いてもよい。
当業者は、本発明の方法を実施するために使用される具体的な抗体の濃度は、結合するための時間、ＦＲαに対する抗体の特異性のレベルおよび試料の調製法などの因子に依存して変化することを認識する。さらに、複数の抗体を用いた場合、必要とされる濃度はその順番によって影響を受ける場合があり、この場合、抗体は、例えば、カクテルとして同時にまたは個々の抗体試薬として連続的に試料に適用される。さらに、ＦＲαへの抗体結合を視覚化するために使用される検出化学は、所望のシグナル対ノイズ比を生じさせるように最適化されていなければならない。本発明の一実施形態において、プロテオミック法、例えば質量分析法を用いて、ＦＲαタンパク質を検出および定量する。例えば、タンパク質結合チップへの試料、例えば血清の塗布を伴うマトリックス関連レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）または表面エンハンス型レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）（Ｗｒｉｇｈｔ，Ｇ．Ｌ．，Ｊｒら、（２００２年）Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｄｉａｇｎ ２：５４９；Ｌｉ，Ｊら、（２００２年）Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ４８：１２９６；Ｌａｒｏｎｇａ，Ｃら、（２００３年）Ｄｉｓ Ｍａｒｋｅｒｓ １９：２２９；Ｐｅｔｒｉｃｏｉｎ，Ｅ．Ｆ．ら、（２００２年）３５９：５７２；Ａｄａｍ，Ｂ．Ｌ．ら、（２００２年）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６２：３６０９；Ｔｏｌｓｏｎ，Ｊ．ら、（２００４年）Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ ８４：８４５；Ｘｉａｏ，Ｚ．ら、（２００１年） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６１：６０２９）を用いて、ＦＲαタンパク質を検出および定量することができる。質量分析法は、例えば、米国特許第５，６２２，８２４号、同第５，６０５，７９８号および同第５，５４７，８３５号（各々の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
本発明は、さらに、少なくとも部分的には、卵巣癌または非小細胞肺癌などのＦＲα発現癌の予後マーカーとして、すなわち進行および／または重症度のバイオマーカーとして、ＦＲαの同定に基礎を置く。したがって、本発明は、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって、卵巣癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行を評価するための方法を提供し、対照試料と比較した、対象由来の試料（例えば尿または血清試料）におけるＦＲαのレベルの差は、癌が急速に進行しているという指標である。同様に、対象がＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルを評価する方法は、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することを伴い、対照試料と比較した、対象由来の試料（例えば尿または血清試料）におけるＦＲαのレベルの差は、対象が、健常個体における通常の危険性と比較して、ＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルが高いという指標である。
一実施形態において、差は増加である。別の実施形態において、差は減少である。いくつかのタイプの癌（例えば、頭頸部の扁平上皮癌腫、卵巣癌）において、高レベルのＦＲα発現はより悪い予後と関連し、一方、他のタイプの癌（例えば、非小細胞肺癌）において、高レベルのＦＲα発現は良好な予後と関連する。このようにして、１つの特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は、卵巣癌または頭頸部の扁平上皮癌腫であり、差は増加である。別の特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は小細胞肺癌であり、差は減少である。
ある種の態様において、本発明は、ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行を、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって評価するための方法を提供し、対照試料と比較した、対象由来の試料（例えば尿または血清試料）におけるＦＲαのレベルの増加は、癌が急速に進行しているという指標であり、または対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの減少は、癌が穏やかに進行するもしくは退行するという指標である。同様に、対象がＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルを評価するための方法は、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することを伴い、対照試料と比較した、対象由来の試料（例えば尿または血清試料）におけるＦＲαのレベルの増加は、健常個体における通常危険性と比較して、ＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルが高いという指標であり、または対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した、対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの減少は、対象が、健常個体における通常危険性と比較して、ＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルが低いという指標である。
当該技術分野において知られている任意の分析的な方法を用いた、任意の臨床的に関連するまたは統計学的に有意な増加または減少は、本発明の予後、危険性評価および他の方法に用いることができる。一実施形態において、ＦＲαのレベルの増加は、実施例６に例示されるＲＯＣ分析を用いて決定されるカットオフ値を超えるレベルを指す。別の実施形態において、ＦＲαのレベルの減少は、ＲＯＣ分析を用いて決定されるカットオフ値を超えない試験試料のレベルを指す。
他の実施形態において、増加または減少は、ＦＲαのレベルを決定するための方法の検出限界よりも大きくなければならない。さらなる実施形態において、増加または減少は、評価法の標準誤差よりも少なくとも大きく、好ましくは少なくとも評価法の標準誤差の約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれらを超える差がある。いくつかの実施形態において、増加または減少は、パラメータ的または非パラメータ的記述統計学、比較、回帰分析などを用いて評価される。
他の実施形態において、増加または減少は、対照試料におけるＦＲαのレベルよりも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１５０％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％または約１０００％多いまたは少ない対象由来の試料におけるレベルである。代替の実施形態において、増加または減少は、対照試料におけるＦＲαの平均レベルの上または下の標準偏差が少なくとも１．５であり、より好ましくは約２、約３、約４、約５またはそれを超える対象由来の試料におけるレベルである。本明細書で使用するとき、語句「ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行」とは、重症度の低い癌状態から重症度の高い癌状態のＦＲα発現癌の進行を指す場合がある。これは、腫瘍の数または重症度、転移の程度、癌が成長しているおよび広がっている速度などの増加を含むことができる。ある種の実施形態において、進行は、重症度が低い病期から重症度が高い病期への進行であり、病期は当該技術分野において知られている病期スキームに従って評価される。一実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である場合、進行は、病期Ｉから病期ＩＩ、病期ＩＩから病期ＩＩＩなどを指す。別の実施形態において、ＦＲα発現癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である場合、進行は、病期０から病期ＩＡ、病期ＩＡから病期ＩＢ、病期ＩＢから病期ＩＩＡ、病期ＩＩＡから病期ＩＩＢ、病期ＩＩＢから病期ＩＩＣなどの進行を指す。別の実施形態において、ＦＲα発現癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である場合、進行は、ＴＮＭ分類システムにより決定される重症度が低い病期から重症度が高い病期への進行を指す。Ｓｐｉｒａ；Ｇｒｅｅｎｅ；Ｓｏｂｉｎを参照されたい。
あるいは、語句「ＦＲα発現癌に罹患している対象におけるＦＲα発現癌の進行」とは、重症度の高い癌状態から重症度の低い癌状態のＦＲα発現癌の退行を指し、例えば、腫瘍の数または重症度、転移の程度、癌が成長しているおよび広がっている速度などの減少が挙げられる。ある種の実施形態において、進行は、重症度が高い病期から重症度が低い病期への進行であり、病期は当該技術分野において知られている病期スキームに従って評価される。一実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である場合、進行は、病期ＩＶから病期ＩＩＩ、病期ＩＩＩから病期ＩＩなどを指す。別の実施形態において、ＦＲα発現癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である場合、進行は、病期ＩＶから病期ＩＩＩＢ、病期ＩＩＩＢから病期ＩＩＩＡ、病期ＩＩＩＡから病期ＩＩＢなどを指す。別の実施形態において、ＦＲα発現癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である場合、進行は、ＴＮＭ分類システムにより決定される重症度が高い病期から重症度が低い病期への進行を指す。Ｓｐｉｒａ；Ｇｒｅｅｎｅ；Ｓｏｂｉｎを参照されたい。
さらなる実施形態において、ＦＲαのレベルは、対象がＦＲα発現癌に罹患している可能性、対象におけるＦＲα発現癌の進行、ＦＲα発現癌を発症する危険性のレベル、ＦＲα発現について治療される対象における癌の再発の危険性、ＦＲα発現癌について治療される対象の生存、ＦＲα発現癌を治療するための治療計画の有効性などを、当業者に知られている回帰分析の方法を含んでもよい本発明の方法を用いて計算するために使用され得る。例えば、適切な回帰モデルには、限定されないが、ＣＡＲＴ（例えば、Ｈｉｌｌ，Ｔ，およびＬｅｗｉｃｋｉ，Ｐ．（２００６年）“ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＳ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”ＳｔａｔＳｏｆｔ，Ｔｕｌｓａ，ＯＫ）、Ｃｏｘ（例えば、ｗｗｗ．ｅｖｉｄｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ−ｍｅｄｉｃｉｎｅ．ｃｏ．ｕｋ）、指数関数、正規および対数正規（例えば、ｗｗｗ．ｏｂｇｙｎ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｍｒｇ／ｓｔａｔｓｂｏｏｋ／ｓｔｓｕｒｖａｎ．ｈｔｍｌ）、ロジスティック（例えば、ｗｗｗ．ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｌｏｇｉｓｔｉｃ＿ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）、パラメータ的、非パラメータ的、半パラメータ的（例えば、ｗｗｗ．ｓｏｃｓｅｒｖ．ｍｃｍａｓｔｅｒ．ｃａ／ｊｆｏｘ／Ｂｏｏｋｓ／Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ）、線形（例えば、ｗｗｗ．ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｌｉｎｅａｒ＿ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）または付加（例えば、ｗｗｗ．ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ＿ａｄｄｉｔｉｖｅ＿ｍｏｄｅｌ）が挙げられる。
一実施形態において、回帰分析はＦＲαのレベルを含む。さらなる実施形態において、回帰分析は、追加の臨床的および／または分子共変を含んでもよい。このような臨床的共変は、限定されないが、対象の年齢、腫瘍ステージ、腫瘍グレード、腫瘍サイズ、治療計画、例えば化学療法および／または放射線療法、臨床転帰（例えば、再発、疾患特異的生存、治療の失敗）、および／または診断後の時間、治療開始後の時間および／または治療完了後の時間の関数としての臨床転帰を含む。分子共変は、限定されないが、付加的分子マーカー値を含むことができる。例えば、ＦＲα発現癌が卵巣癌である実施形態において、このようなマーカーには、例えば、血清ＣＡ１２５レベル、血清ＤＦ３レベルおよび／または血漿ＬＰＡレベルを含んでもよい。
他の態様において、本発明は、治療または治療計画の有効性を監視するための方法を提供する。例えば、本発明は、卵巣癌または肺癌に罹患している対象における卵巣癌または肺癌のＭＯＲＡｂ−００３治療の有効性を監視するための方法を提供する。具体的には、方法は、前記対象由来の試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し、前記対象はＭＯＲＡｂ−００３を予め投与され；細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することを伴い、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した、前記対象由来の試料ＦＲαのレベルの増加または無変化は、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効でないという指標であり；対照試料におけるＦＲαのレベルと比較した、前記対象由来の試料におけるＦＲαのレベルの減少は、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効であるという指標である。
例えば、対照試料は、治療計画に供されていない対象由来であってもよく、試験試料は、治療計画の少なくとも一部に供された対象由来であってもよい。あるいは、試験試料および対照試料は、同じ対象由来であってもよい。例えば、試験試料は、ＭＯＲＡｂ−００３などの治療薬の投与後、対象由来の試料であってもよい。対照試料は、治療薬の投与前または治療計画の初期病期での対象由来の試料であってもよい。したがって、対照試料と比較して、試験試料におけるＦＲαの発現のレベルの減少は、治療がＦＲα発現癌、例えば卵巣癌の進行を減少させたという指標である。高レベルのＦＲαが悪い予後と関連するＦＲα発現癌、例えば卵巣癌または頭頸部の扁平上皮癌腫について、対照試料と比較した、試験試料におけるＦＲαの発現のレベルの減少は、治療が、ＦＲα発現癌に罹患している対象において、ＦＲα発現癌の進行の遅延または癌の退行の要因に有効であるという指標である。好ましい実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。
本発明のこの態様の種々の実施形態において、試料は尿、血清、血漿または腹水であってもよい。特定の実施形態において、試料は尿または血清である。さらに、ＦＲαは、試料をＦＲαに結合する抗体と接触させ、場合により本明細書に記載されている抗体と、本明細書に記載されているアッセイ法を用いて決定されてもよい。
種々の実施形態において、ＭＯＲＡｂ−００３治療抗体は、（ａ）配列番号７に記載の重鎖アミノ酸配列および配列番号８に記載の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体；（ｂ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；または（ｃ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体である。
特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。他の実施形態において、ＦＲα発現癌は肺癌である。より特定の実施形態において、肺癌は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。１つのこのような実施形態において、ＮＳＣＬＣは、腺癌、扁平上皮肺癌腫、大細胞肺癌腫、多形型ＮＳＣＬＣ、カルチノイド腫瘍、唾液腺癌腫および未分類の癌腫からなる群から選択される。好ましい実施形態において、ＮＳＣＬＣは腺癌である。代替の実施形態において、肺癌は小細胞肺癌腫（ＳＣＬＣ）である。別の実施形態において、肺癌は、気管支肺胞癌腫である。なお別の実施形態において、肺癌は肺カルチノイド腫瘍である。
別の態様において、本発明は、試料におけるＦＲαの決定されたレベルに基づいて、ＦＲα発現癌を有する対象を癌治療群に階層化するための方法を提供する。好ましい実施形態において、方法は、ＦＲα発現癌を有する対象を少なくとも４つの癌治療群のうちの１つに階層化することを伴う。他の実施形態において、方法は、ＦＲα発現癌を有する対象を少なくとも約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個または約１０個の癌治療群のうちの１つに階層化することを伴う。
本発明に従って、ＦＲαのレベルは、ＦＲα発現癌の重症度、すなわち病期と関連付けられてもよい。例えば、卵巣癌は、本明細書に記載されている癌の重症度に基づいて異なる病期に階層化される。したがって、本発明は、卵巣癌を病期Ｉ、例えば病期ＩＡ、病期ＩＢもしくは病期ＩＣ；病期ＩＩ、例えば病期ＩＩＡ、病期ＩＩＢもしくは病期ＩＩＣ；病期ＩＩＩ、例えば病期ＩＩＩＡ、病期ＩＩＩＢもしくは病期ＩＩＩＣ；または病期ＩＶの卵巣癌に階層化するための方法を提供する。
ＳＣＬＳまたはＮＳＣＬＣは、本明細書に記載されるように、癌の重症度に基づいて異なる病期に階層化されてもよい。したがって、本発明は、肺癌、例えばＳＣＬＳまたはＮＳＣＬＣを潜在的な（隠された）病期；病期０；病期Ｉ、例えば病期ＩＡおよび病期ＩＢ；病期ＩＩ、例えば病期ＩＩＡおよび病期ＩＩＢ；病期ＩＩＩ、例えば病期ＩＩＩＡおよび病期ＩＩＩＢ；または病期ＩＶの肺癌に階層化するための方法を提供する。
なお別の態様において、本発明は、少なくとも部分的には、ＦＲαがＦＲα発現癌を治療するための予後バイオマーカーとして役割を果たし得るという所見に基づいている。具体的には、本発明の方法は、対象が、例えばＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するかどうか、および例えばＭＯＲＡｂ−００３を用いた治療を開始するかどうかまたは治療をいつ開始するかを対象におけるＦＲαのレベルを評価することによって評価するための方法を提供する。
一態様において、本発明は、ＦＲα発現癌、例えば卵巣癌または肺癌を患っている対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するかどうかを、前記対象由来の試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定し；前記対象由来の試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較することによって予測するための方法を提供し、前記対象由来の試料におけるＦＲαのレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルの間の差は対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するという指標である。
ある種の実施形態において、対照試料と比較した場合、試験試料における癌細胞に結合しないＦＲαのレベルの間の差の程度は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するということを示す。評価法の標準誤差の少なくとも約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれらを超える差は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するということを示す。または、あるいはそれと組み合わせて、少なくとも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１５０％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％または約１０００％の差は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するということを示す。または、あるいはそれと組み合わせて、少なくとも１．５であり、より好ましくは約２、約３、約４、約５またはそれを超える標準誤差の差は、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するということを示す。
種々の実施形態において、ＭＯＲＡｂ−００３治療抗体は、（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；または（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体である。
種々の実施形態において、試料は、尿、血漿、血清または腹水である。特定の実施形態において、試料は尿または血清である。さらなる実施形態において、ＦＲα発現癌は、肺癌、中皮腫、卵巣癌、腎臓癌、脳癌、子宮頸癌、鼻咽腔癌、頭頸部の扁平上皮癌腫、子宮内膜癌、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、骨癌、下垂体癌、結腸直腸癌および甲状腺髄様癌からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＦＲα発現癌は卵巣癌である。別の実施形態において、ＦＲα発現癌は非小細胞肺癌、例えば腺癌である。
Ｂ．ＦＲα発現癌を検出するための抗ＦＲα抗体に基づくアッセイ
試料中のポリペプチドを検出するための抗体を用いる、当業者に知られている様々なアッセイフォーマットがあり、例えば、限定されないが、酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫蛍光分析、免疫沈降、溶液相アッセイ、平衡透析、免疫拡散法および他の技術が挙げられる。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８年；Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８６年、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｂｏｓｔｏｎを参照されたい。例えば、アッセイはウェスタンブロットフォーマットにおいて行われてもよく、生物学的試料からのタンパク質調製は、ゲル電気泳動に置かれ、適切なメンブレンに転写され、抗体と反応させるようにする。次に、メンブレン上の抗体の存在は、当該技術分野において周知であり、以下に記載されるように、適切な検出試薬を用いて検出され得る。
別の実施形態において、アッセイは、標的ＦＲαポリペプチドに結合する、固体支持体に固定された抗体の使用を伴い、該ペプチドを試料の残余物から取り出す。次に、結合したＦＲαポリペプチドは、区別されるＦＲαポリペプチド抗原決定基と反応性である二次抗体、例えば検出可能なレポーター部分を含む試薬を用いて検出され得る。非制限的な例として、本実施形態に従って、固定化された抗体、および区別される抗原決定基を認識する二次抗体は、本明細書に記載されているＭＯＲＡｂ−００３、ＭＯＶ１８、５４８９０８、６Ｄ３９８またはその改変体から選択される、本明細書に記載されている任意の２つのモノクローナル抗体であってもよい。あるいは、競合アッセイを用いてもよく、この場合、ＦＲαは検出可能なレポーター部分で標識され、固定された抗体と試料のインキュベーション後、固定された抗ＦＲα抗体に結合することを可能にする。試料の成分が、抗体への標識されたポリペプチドの結合を阻害する程度は、試料と固定された抗体の反応性を示し、結果として、試料におけるＦＲαのレベルを示す。
固体支持体は、抗体が結合され得る、当業者に知られている任意の材料であってもよく、例えばマイクロタイタープレートの試験ウェル、ニトロセルロースフィルターまたは別の適切なメンブレンが挙げられる。あるいは、支持体は、ビーズもしくはディスク、例えばガラス、ファイバーガラス、ラテックスまたはプラスチック、例えばポリスチレンもしくはポリ塩化ビニルであってもよい。抗体は、特許および科学文献に十分に記載されている、当業者に知られている様々な技術を用いて固体支持体に固定化され得る。
ある種の好ましい実施形態において、試料中のＦＲαを検出するためのアッセイは２抗体サンドイッチアッセイである。このアッセイは、最初に、固体支持体、通常はマイクロタイタープレートのウェルに固定化されているＦＲα特異的抗体（例えば、本明細書に記載されているＭＯＲＡｂ−００３、ＭＯＶ１８、５４８９０８、６Ｄ３９８またはその改変体）を生物学的試料と接触させることによって行うことができ、その結果、試料中に天然に存在し、抗体と反応性である抗原決定基を有する可溶性分子を固定化された抗体に結合させるようにし（例えば、室温にて３０分のインキュベーション時間が一般的に十分である）、抗原−抗体複合体または免疫複合体を形成する。次に、試料の未結合の構成物は、固定された免疫複合体から除かれる。次に、ＦＲαに特異的な二次抗体が添加され、二次抗体の抗原結合部位は、ＦＲαに対する固定された一次抗体（例えば、固体支持体に固定されたモノクローナル抗体と同じでない、本明細書に記載されているＭＯＲＡｂ−００３、ＭＯＶ１８、５４８９０８、６Ｄ３９８またはその改変体）の抗原結合部位の結合を競合的に阻害しない。二次抗体は、本明細書に提供されるように検出可能に標識されてもよく、その結果、直接検出されてもよい。あるいは、二次抗体は、検出可能に標識された第二（または「第二段階」）の抗−抗体の使用を介して、または本明細書に提供されている特異的検出試薬を用いることによって間接的に検出されてもよい。本発明の方法は、イムノアッセイに精通している者が、２抗体サンドイッチイムノアッセイにおいて特定の抗原（例えばＦＲα）を免疫学的に検出するための多数の試薬および構成があることを認めるため、任意の特定の検出手法に限定されない。
上述される２抗体サンドイッチアッセイを用いる本発明のある種の好ましい実施形態において、ＦＲαに特異的な固定化された第一の抗体はポリクローナル抗体であり、ＦＲαに特異的な第二の抗体はポリクローナル抗体である。本発明のある種の他の実施形態において、ＦＲαに特異的な固定化された第一の抗体はモノクローナル抗体であり、ＦＲαに特異的な第二の抗体はポリクローナル抗体である。本発明のある種の他の実施形態において、ＦＲαに特異的な固定化された第一の抗体は、ポリクローナル抗体であり、ＦＲαに特異的な第二の抗体はモノクローナル抗体である。本発明のある種の他の実施形態において、ＦＲαに特異的な固定化された第一の抗体はモノクローナル抗体であり、ＦＲαに特異的な第二の抗体はモノクローナル抗体である。例えば、これらの実施形態において、本明細書に記載されているモノクローナル抗体であるＭＯＲＡｂ−００３、ＭＯＶ１８、５４８９０８、６Ｄ３９８またはその改変体は、本明細書に提供され、ＦＲαポリペプチド上の区別される、非競合的な抗原決定基（例えばエピトープ）を認識し、そのためにこれらのモノクローナル抗体の任意の一対の組み合わせを用いてもよい。本発明の他の好ましい実施形態において、ＦＲαに特異的な固定された第一の抗体、および／またはＦＲαに特異的な第二の抗体は、当該技術分野において知られている任意の種類の抗体であってもよく、本明細書において、例として、限定されないが、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、免疫グロブリンＶ領域融合タンパク質または一本鎖抗体を指す。当該技術に精通している者は、本発明が、本明細書に開示され、特許請求される方法において他の抗体形態、断片、誘導体などの使用を包含することを認識する。
ある種の特に好ましい実施形態において、第二の抗体は、酵素、色素、放射性核種、発光基、蛍光基またはビオチンなどの検出可能なレポーター部分または標識を含んでもよい。次に、固体支持体に結合した状態にある第二の抗体の量は、特定の検出可能なレポーター部分または標識に適した方法を用いて決定される。放射性基について、シンチレーションカウントまたはオートラジオグラフ法が一般的に適切である。抗体−酵素コンジュゲートは、様々なカップリング技術を用いて調製され得る（概説として、例えば、Ｓｃｏｕｔｅｎ，Ｗ．Ｈ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １３５：３０−６５、１９８７年を参照）。分光法は、色素（例えば、酵素反応の比色生成物を含む）、発光基および蛍光基を検出するために使用されてもよい。ビオチンは、異なるレポーター基（通常、放射性もしくは蛍光基または酵素）にカップリングされるアビジンまたはストレプトアビジンを用いて検出することができる。酵素レポーター基は、一般的に、基質の添加（一般的に、特定の期間）、続く反応産物の分光的、分光光度的または他の分析によって検出され得る。標準および標準的な添加は、周知の技術を用いて、試料中のメソセリンポリペプチドのレベルを決定するために用いられてもよい。
本発明に従うＦＲα発現癌の存在をスクリーニングするための方法は、対象由来の生物学的試料における１を超える腫瘍関連マーカーの検出によってさらに向上させてもよい。したがって、ある種の実施形態において、本発明はまた、細胞に結合しないＦＲαの反応性の検出に加えて、当該技術分野において知られ、本明細書に提供されている確立した方法を用いて、悪性状態の少なくとも１つの付加的な可溶性マーカーの検出を含むスクリーニング法を提供する。上記されるように、容易に得られる生物学的液体の試料において検出可能な多数の可溶性腫瘍関連抗原が現に存在する。
Ｃ．本発明のキット
本発明はまた、対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価し、ＦＲα発現癌の進行を評価し、対象がＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルを評価しまたはＦＲα発現癌の治療もしくは治療計画の有効性を監視するためのキットを提供する。これらのキットは、ＦＲαの発現レベルを決定するための手段、およびＦＲα発現癌の進行を評価し、対象がＦＲα発現癌を発症する危険性のレベルを評価し、またはＦＲα発現癌に対する治療もしくは治療計画の有効性を監視するためのキットを使用するための使用説明書を含む。
本発明のキットは、場合により、本発明の方法の実施に有用な追加の成分を含んでもよい。例えば、キットは、対象由来の試料、対照試料、例えば癌の進行が穏やかな対象由来の試料および／または癌を有しない対象由来の試料、１つまたは複数の試料コンパートメントを得るための手段、および本発明の方法の実施および組織特異的対照／標準を記載する使用説明資料を含んでもよい。
ＦＲαのレベルを決定するための手段は、上記で検討されたように、タンパク質レベルを評価し、および本明細書において検討されているＭＯＲＡｂ−００３抗体を用いるための、当該技術分野において知られている方法を含む。このようにして、例えば、一実施形態において、ＦＲαのレベルは、対象由来の試料（例えば尿または血清）を葉酸受容体アルファ（ＦＲα）結合剤と接触させることによって評価される。好ましい実施形態において、結合剤は抗体である。ＦＲαに結合する多数のタイプの抗体は、本発明の方法において上記で検討され、また、本発明のキットに用いられてもよい。
ＦＲαのレベルを決定するための手段は、例えば、ＦＲαのレベルを決定するためのアッセイにおいて使用するための緩衝液または他の試薬をさらに含むことができる。使用説明書は、例えば、アッセイを行うための印刷された使用説明書および／またはＦＲαの発現のレベルを評価するための印刷された使用説明書であってもよい。
また、本発明のキットは、対象から試料を単離するための手段を含んでもよい。これらの手段は、対象から液体または組織を得るために使用され得る装置または試薬の１つまたは複数の種目を含むことができる。また、対象から試料を得るための手段は、血液試料から血液成分、例えば血清を単離するための手段を含んでもよい。好ましくは、キットはヒト対象用に設計されている。
ＩＩＩ．スクリーニングアッセイ
さらなる実施形態において、本発明はまた、試料中のＦＲαのレベルを監視および比較することによって、癌、例えばＦＲα発現癌、または癌細胞、例えば卵巣癌細胞の増殖、進行および／または攻撃性（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ）を調節する調節因子、すなわち候補もしくは試験化合物または薬剤（例えば、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣薬、ペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）、小分子または他の薬物）を同定するための方法（本明細書において「スクリーニングアッセイ」とも称される）を提供する。このようなアッセイは、典型的には、癌または癌細胞に対する活性が測定されるべきである試験化合物または試験化合物の組み合わせを含む。本明細書に記載されるアッセイなどのアッセイを介して同定される化合物は、例えば、ＦＲα発現癌または癌細胞、例えば卵巣癌細胞の攻撃性の調節、例えば阻害、改善、治療または予防に有用であり得る。試料中のＦＲαのレベルを監視することによって、ＦＲα発現癌が進行しているまたは退行しているかどうかを決定し、試験化合物が所望の効果を有するかどうかを決定することができる。例えば、ＦＲα発現癌が、高レベルのＦＲαが悪い予後と関連付けられる実施形態において、試験化合物の投与後のＦＲαのレベルの減少は、試験化合物の有効性を示す。対照的に、試験化合物の投与後のＦＲαのレベルの増加は、試験化合物が卵巣癌の治療に有効でないことを示す。対照的に、ＦＲα発現癌が、高レベルのＦＲαが良好な予後と関連付けられる癌である実施形態において、試験化合物の投与後のＦＲαのレベルの増加は、試験化合物の有効性を示す。対照的に、試験化合物の投与後のＦＲαのレベルの減少は、卵巣癌の治療に有効でないことを示す。
本発明のスクリーニングアッセイに使用される試験化合物は、任意の利用可能な供給源から得ることでき、例えば、天然および／または合成の化合物の系統的ライブラリーが含まれる。また、試験化合物は当該技術分野において知られているコンビナトリアルライブラリー法における多数のアプローチにいずれかによって得ることができ、例えば、生物学的ライブラリー；ペプトイドライブラリー（ペプチドの機能性を有するが、酵素分解に耐性である新規の非ペプチド骨格を有し、それにも関わらず、生物活性を保持している分子のライブラリー；例えば、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら，１９９４年，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８−８５参照）；空間的に指定可能な並行固相または液相ライブラリー；デコンボリューションを必要とする合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を用いた合成ライブラリー法が挙げられる。生物学的ライブラリーおよびペプトイドライブラリーアプローチは、ペプチドライブラリーに限定され、一方、他の４つのアプローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマーまたは化合物の小分子ライブラリーに応用可能である（Ｌａｍ、１９９７年、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１２：１４５）。
分子ライブラリーを合成するための方法の例は、当該技術分野において、例えば、ＤｅＷｉｔｔら、（１９９３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９；Ｅｒｂら、（１９９４年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら、（１９９４年）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら、（１９９３年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら、（１９９４年）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら、（１９９４年）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：２０６１；Ｇａｌｌｏｐら、（１９９４年）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３に見出すことができる。
化合物のライブラリーは、溶液（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ、１９９２年、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２−４２１）、またはビーズ（Ｌａｍ、１９９１年、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２−８４）、チップ（Ｆｏｄｏｒ、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５−５５６）、細菌および／または胞子（Ｌａｄｎｅｒ、ＵＳＰ５，２２３，４０９）、プラスミド（Ｃｕｌｌら、１９９２年、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１８６５−１８６９）またはファージ（Ｓｃｏｔｔ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６−３９０；Ｄｅｖｌｉｎ、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４−４０６；Ｃｗｉｒｌａら、１９９０年、Ｐｗｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：６３７８−６３８２；Ｆｅｌｉｃｉ、１９９１年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０；Ｌａｄｎｅｒ、上述）に存在してもよい。
本発明は、さらなる限定として解釈されるべきでない以下の実施例によってさらに例証される。本出願を通じて引用されている全ての参考資料、特許および公開された特許出願および図面は、全体として参照により本明細書に明確に組み込まれる。
［実施例１］
電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）によって測定される卵巣癌を有するまたは有しないヒト対象由来の尿試料におけるＦＲαレベルの決定
材料および方法
尿試料をヒト対象から得て、卵巣癌に罹患している対象および卵巣癌に罹患していない正常な対照対象を含んでいた。尿試料におけるＦＲαのレベルは、以下の手法に従って、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）を用いて決定された（Ｎａｍｂａら、（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５：１０８７−１０９３参照）。
ｉ．マイクロビーズへの抗体被覆
モノクローナル抗葉酸受容体アルファ抗体をマイクロビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ−４５０ Ｅｐｏｘｙ、Ｄｙｎａｌ）の表面全体に被覆した。３６ｍｇのマイクロビーズを０．１５ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．８（ＰＢＳ）中の１．２ｍＬの抗体ＭＯＶ１８（０．３６ｍｇ／ｍＬ、Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）と混合し、１６時間、室温にて穏やかに混合した。次に、マイクロビーズは、０．１％の正常なウサギ血清（ＮＲＳ）、１５０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０ ｐＨ７．５を含む５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（洗浄緩衝液）で５回洗浄された。その後、被覆されたマイクロビーズは、２０％ＮＲＳ、１５０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌおよび０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０ ｐＨ７．５を含む１．２ｍＬの５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（反応緩衝液）中に懸濁され、未結合表面をブロッキングし、３．５時間、室温にて穏やかに混合した。最後に、マイクロビーズは、洗浄緩衝液で５回洗浄され、１０％ＮＲＳ、１５０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ−２Ｎａおよび０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０ ｐＨ７．５を含む１．２ｍＬの５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（反応緩衝液）で再懸濁され、マイクロビーズの濃度を３０ｍｇ／ｍＬにした。マイクロビーズを４℃にて使用するまで保存した。
ｉｉ．ルテニウム−キレート−ＮＨＳ（Ｒｕ）を用いた抗体標識
ＰＢＳ中の１ｍｌのＭＯＲＡＢ−００３（１ｍｇ／ｍＬ）は、１４μＬのＲｕ（１０ｍｇ／ｍＬ）と混合され、抗体とＲｕの初期モル比は１：２０であり、３０分間、室温にて遮光して振とうした。反応は、２５μＬの２ｍｏｌ／Ｌグリシン溶液を添加することによって停止させ、その後、２０分間インキュベートした。標識された抗体は、ＰＢＳで溶出させるＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたゲル濾過によって精製された。最初に溶出された黄色の画分を回収し、抗体およびＲｕの濃度は、Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の手段およびそれぞれ４５５ｎｍの吸収によって決定された。最終モル比は、式：最終モル比＝［（４５５での吸収）／１３７００］／［Ａｂ（ｍｇ／ｍＬ／１５００００）］によって計算された。標識された抗体を４℃にて使用するまで保存した。
ｉｉｉ．一工程イムノアッセイ
抗体被覆されたマイクロビーズは、Ｐｉｃｏｌｕｍｉ ８２２０（Ｓａｎｋｏ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）の試薬表に設定され、その後、反応緩衝液中で１．５ｍｇ／ｍｌの濃度（作業溶液）を調節した。Ｒｕ標識された抗体は、Ｐｉｃｏｌｕｍｉ ８２２０の試薬表に設定され、その後、抗体の濃度を反応緩衝液中２μｇ／ｍｌ（作業溶液）を調節した。
１０μｌの尿（反応緩衝液中で１：５１に希釈される）または標準のＦＲα（反応緩衝液中に調製される）および１００μＬの反応緩衝液は、反応管（Ｓａｎｋｏ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）に分配され、Ｐｉｃｏｌｕｍｉ ８２２０に設定された。
以下の工程は、Ｐｉｃｏｌｕｍｉ ８２２０によって自動的に行った。２５μｌのビーズ（作業溶液）および１８０μｌのＲｕ標識された抗体（作業溶液）を分配した。３０±２℃にてインキュベーションの２６分後、ビーズを洗浄し、３００μＬの電解質溶液（Ｓａｎｋｏ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を用いて懸濁した。続いて、洗浄されたビーズを電極に移動させ、電気化学発光（ＥＣＬ）発光を測定した。
全てのＥＣＬ測定は二点測定で行われた。
結果
表１は、卵巣癌罹患の個々の対象および非罹患女性対照対象におけるＦＲαの尿レベルを示す。
Figure 0006224456
図２は、表１に記載されるように、卵巣癌の対象および正常な女性の対照対象における尿中のＦＲαレベルの分布を示す。
表２は、卵巣癌群および正常な女性対照群におけるＦＲαレベルについての対象数（ｎ）、平均、標準偏差（ＳＤ）、最大（Ｍａｘ．）および最小（Ｍｉｎ．）値を概要する。
Figure 0006224456
検討
高レベルのＦＲαは、卵巣癌の対象の尿において検出された。さらに、ＦＲαのレベルは、卵巣癌と正常な女性の対照群の間で有意に異なっていた（ｐ＝０．０３、片側）。
［実施例２］
希釈直線性−電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）によって測定される連続希釈された尿試料におけるＦＲαレベルの決定
希釈直線性はアッセイの精度の測定である。２つの尿試料は、１０倍および１００倍に連続希釈された。各試料のＦＲαレベルは、実施例１に記載されるように測定し、誤差率を評価するために比較された。誤差率は以下のように計算された：
Figure 0006224456
 結果は表３に記載される。
Figure 0006224456
前述の結果は、ヒト尿試料におけるＦＲαのレベルの評価における希釈直線性を示し、許容される誤差内において、尿は、ＦＲαの正確なレベルを保持しながら、少なくとも１００の倍数まで希釈することができる。したがって、尿試料の希釈は、ＦＲαのレベルの決定前に考慮されてもよい。
［実施例３］
尿試料の遠心分離−再現性の対処
具体的な尿試料についてのＥＣＬＩＡアッセイの再現性はまた試験された。例えば、表４に反映されるように、同じ試料のＥＣＬＩＡアッセイは様々な結果をもたらした。
Figure 0006224456
尿試料における不溶性物質（沈殿物）の存在は、ＦＲαのレベルの測定において観察された変動性に起因するものと仮説を立てた。結果として、ＦＲαのレベルの測定前の、尿沈渣を除くための試料の遠心分離は、アッセイの精度および再現性を高めるためにオプションとして考えられた。
表５は、ＥＣＬＩＡアッセイの実施前に、３つの試料を遠心分離した際に得られた結果を示す。
Figure 0006224456
上記したように、結果は、遠心分離がＦＲα濃度のより一貫した測定を与えたことを示す。
さらに、２つの試料は、（ｉ）遠心分離（２０００×ｇ、２分間）およびＦＲαの測定のために除かれた上清（表６において、以下試料「Ａ」として示されている）および（ｉｉ）実施例１に記載されるＥＣＬＩＡアッセイによるＦＲαレベルの測定前、遠心分離、続くボルテックス（表６において、以下試料「Ｂ」として示されている）に供された。結果は、以下の表６に反映される。
Figure 0006224456
差（％）は以下のように決定された：
Figure 0006224456
表６に示されるように、ＥＣＬＩＡアッセイによって決定されたＦＲαのレベルは、尿が沈殿物を除くために遠心分離によって浄化されたかどうかまたは尿は沈渣を懸濁もしくは分散するためにボルテックスされたかどうかに依存して変化する。したがって、ある種の実施形態において、尿試料の遠心分離またはボルテックスはＦＲαのレベルを決定する前に行われてもよい。
［実施例４］
電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）によって決定された卵巣癌を有するまたは有しないヒト対象由来の遠心分離された尿試料におけるＦＲαレベルの決定
実施例３の結果に基づいて、対象におけるＦＲαレベルを評価するためのアッセイは遠心分離工程を導入するために修正された。ＦＲαレベルは、実施例１において使用されたものと同じ試料において決定され、卵巣癌を有する対象群および正常な女性の対照対象の群を含んだ。
材料および方法
使用された方法は、尿試料を１００００×ｇで１分間遠心分離し、その後、得られた上清を反応緩衝液中で１：５１に希釈したことを除いて、実施例１に記載される通りであった。
結果
表７は、卵巣癌に罹患している対象および健常な女性の対照対象由来の遠心分離された尿試料および遠心分離されていない尿試料におけるＦＲαのレベルを示す。
Figure 0006224456
表７に記載される結果によれば、遠心分離は、表６に以前に示されるように、いくつかの試料におけるＦＲαレベルの測定値の減少をもたらした。
［実施例５］
イムノブロッティングによる尿沈渣におけるＦＲαの検出
実施例３および４に示された結果に基づいて、尿沈渣／沈殿物におけるＦＲαの存否はウェスタンブロッティングを用いて評価された。
材料および方法
２人の卵巣癌患者由来の尿試料は、ＦＲα濃度がそれぞれ１８，７４７ｐｇ／ｍＬと１４５，５６４ｐｇ／ｍＬとして測定され（表１０（上述）参照）、以下の手法に供された。対照試料は、ＨｅＬａ細胞溶解物１０μｇ、肝組織溶解物２０μｇおよび卵巣癌組織溶解物２０μｇからなっていた。
・９００μＬの尿を２分間、１００００ｇにて遠心分離した。
・上清を除いた。
・残りのペレットを１５μＬのＰＡＧＥ試料緩衝液（２９２ｍＭのＬＤＳ含有）に溶解し、続いて７０℃にて１０分間煮沸した。
・全試料（約２０μＬ）をＮｕＰＡＧＥビス−トリスゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に充填した。
・電気泳動後、タンパク質をＰＶＤＦメンブレンに転写した。
・１％スキムミルク／０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳをブロッキングのために添加した。
・メンブレンを０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳで洗浄した。
・２μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体５４８９０８（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｅｔｍｓ）０．５ｍＬを添加し、６０分間、室温にてインキュベートした。
・メンブレンを０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳで洗浄した。
・１０ｍＬの抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（ＤＡＫＯ ｐ０４４７、１：２０００）を添加し、６０分間インキュベートした。
・メンブレンを０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳで洗浄した。
・Ｐｉｅｒｃｅ ＥＣＬ基質をメンブレンに添加した。
・基質からメンブレンを除き、次に、ＬＡＳ−３０００（ＦＵＪＩＦＩＬＭ）システムを用いて画像化した。
結果
得られたイムノブロットを図３に示す。この図において、レーン１から５は、以下の供給源から検出されたＦＲαに対応する：
（１）測定されたＦＲαレベルが１８，７４７ｐｇ／ｍＬである卵巣癌患者由来の尿
（２）測定されたＦＲαレベルが１４５，５６４ｐｇ／ｍＬである卵巣癌患者由来の尿
（３）ＨｅＬａ細胞溶解物：１０μｇ
（４）肝組織溶解物：２０μｇ
（５）卵巣癌組織溶解物：２０μｇ
ウェスタンブロットのレーン６は分子量マーカーを表し、レーン１、２、３および５において観察されたバンドはＦＲαの予期された分子量で移動することを示す。
レーン３と５は陽性対照試料であり、レーン４は陰性対照試料である。レーン１の薄いバンドおよびレーン２の明確なバンドは、ＦＲαが、ウェスタンブロッティングによる卵巣癌患者の尿沈渣において検出され得ることを示す。
［実施例６］
電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）によるグアニジン処理された正常ヒト尿試料におけるＦＲαレベルの決定
遠心分離がＦＲαレベルの減少をもたらした実施例４の結果、および遠心分離から得られた尿沈渣が免疫反応性ＦＲαを含むことが示された実施例５の結果に基づいて、方法は、ＦＲαのより定量的および正確な測定を得るために、尿の沈渣を可溶化させるように追求された。
この点において、ＦＲαレベルを評価する前のグアニジンによる正常な女性の尿試料の処置を試みた。
用いられた方法は、尿試料が、緩衝液（ＰＢＳ）中の６Ｍグアニジンまたは緩衝液単独のいずれかと１：１比で混合されたことを除き、実施例１に記載される通りであった。続いて、尿試料を反応緩衝液中で１：５１に希釈した。
このアッセイの結果を表８に示す。
Figure 0006224456
この実験の結果は、グアニジンがＦＲα測定と干渉しないことを示す。純粋な抗原対照（Ｓｔｄ Ａｇ）について観察され得るように、グアニジン処理および続く希釈の方法は、ＦＲαの測定に影響がない。さらに、評価された３つ全ての尿試料において、ＦＲαのレベルは、グアニジンで処理されていない試料と比較して、グアニジンで処理された（可溶化された）試料において高かった。
尿試料のグアニジン前処理の信頼性は、３つの試料をグアニジンに暴露し、ＥＣＬＩＡアッセイを用いて、各グアニジン処理された試料のＦＲα濃度を３回測定することによってさらに評価された。結果は、以下の表９に反映される：
Figure 0006224456
上述されるように、結果は、ＦＲαアッセイ前の尿のグアニジン処理は、ＣＶが非常に低いＦＲα濃度の一致した測定値を与えたことを示す。
［実施例７］
電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）によって測定される卵巣癌を有するおよび卵巣癌を有しないヒト対象由来のグアニジン処理された尿試料におけるＦＲαレベルの決定
グアニジン処理はＦＲαアッセイと干渉しないことが示された実施例６の結果に基づいて、変更されたアッセイプロトコールを用いて、実施例１における卵巣癌を有するおよび卵巣癌を有しない対象由来の尿試料においてＦＲαを測定した。
以下のアッセイプロトコールを用いた：
材料および方法
用いられた方法は、尿試料が、反応緩衝液中の６Ｍグアニジン緩衝液と１：１比に混合され、続いて１：２６に希釈されたことを除き、実施例１に記載される通りであった。
結果
表１０は、卵巣癌に罹患している対象および健常な女性の対照対象由来のグアニジン処理された尿試料におけるＦＲαのレベルを示す。
Figure 0006224456
図４は、グアニジン処理を含む変更されたプロトコールを用いて、卵巣癌に罹患している対象および正常な女性の対照対象の尿におけるＦＲαレベルの分布を示す。これらの群の間の統計学的に有意な差が観察された。表１１はこれらの結果を要約する。
Figure 0006224456
この実験からのデータを用いて、受信者動作特性（ＲＯＣ）分析を行った。図５は、尿をグアニジンで処理した後、尿におけるＦＲαレベルのＥＣＬＩＡ測定の感受性および特異性のＲＯＣ曲線を示す。ＡＵＣは曲線下の面積であり、これは、対照対象からの卵巣癌の区別において試験の精度を測定する。
９１００ｐｇのＦＲα／ｍＬの任意のカットオフ値を用いると、表１２に示されるように、ＡＵＣは０．７０であり、陽性予測値は７０％であり、陰性予測値は８０％であった。このカットオフ値を用いると、１５／１９の卵巣癌患者は、ＦＲα濃度が９１００ｐｇ／ｍＬ超であり、８／１０の正常な対象はＦＲα濃度が９１００ｐｇ／ｍＬ未満であった。
Figure 0006224456
［実施例８］
電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）によるグアニジン処理された尿試料において決定されたＦＲα濃度のクレアチニン補正
ＦＲαの濃度は、卵巣癌患者および正常な女性対照由来のグアニジン処理された尿試料のＥＣＬＩＡを用いて予め決定された（実施例７、表１０参照）。ここで、これらのＦＲα濃度は、糸球体濾過率について標準化するために、尿のクレアチニンレベルについて補正された。得られた値をＲＯＣ分析に供した。
方法
尿のクレアチニンレベルは、厚生労働省によって承認されている試験キットであるｄｅｔｅｒｍｉｎｅｒ Ｌ ＣＲＥ（Ｋｙｏｗａ Ｍｅｄｅｘ、日本）によって決定された。尿のＦＲα濃度について補正された値は以下のように計算された：
尿のＦＲαクレアチニン補正（ｎｇ／ｇ）
＝（尿ＦＲα（ｎｇ／Ｌ）×１０００）／（尿クレアチニン（ｍｇ／ｄＬ）×１０）
＝（尿ＦＲα（ｎｇ／Ｌ）×１０００）／尿クレアチニン（ｍｇ／Ｌ）
＝尿ＦＲα（ｎｇ／Ｌ）／尿クレアチニン（ｇ／Ｌ）
＝尿ＦＲα（ｎｇ）／尿クレアチニン（ｇ）
または
＝１／１０００×尿ＦＲα（μｇ）／尿クレアチニン（ｇ）
結果
表１３は、得られたクレアチニン補正されたＦＲαレベルを示す。
Figure 0006224456
図６は、尿クレアチニンレベルの補正後、卵巣癌（ＯＣ）および正常な女性の対照対象におけるＦＲαレベルの分布を示す。ＦＲαのクレアチニン補正されたレベルにおける卵巣癌患者と対照の間に統計学的に有意な差がある（ｐ＝０．００７）。
卵巣癌および正常な対照対象についての要約データを表１４に示す。
Figure 0006224456
クレアチニン補正されたＦＲαレベルをさらにＲＯＣ分析に供した。ＲＯＣ曲線を図７に示す。表１５は、クレアチニン補正された試験の種々のカットオフ値について、感受性、特異性および曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。
Figure 0006224456
前述されるように、卵巣癌患者の尿と健常な女性の対照対象由来の尿の間に明確な区別がある。
［実施例９］
酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）およびその最適化
１．酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）
マイクロタイタープレートへの抗体被覆
モノクローナル抗葉酸受容体アルファ抗体は、以下のようにマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ−イムノプレート、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の表面に被覆された。５０ｍｍｏｌ／Ｌの炭酸塩緩衝液ｐＨ９．４中の１００μｌの抗体（吸光度は２８０ｎｍにて０．０２）をウェルに分注し、続いて、１６時間、４℃にて被覆した。次に、マイクロタイターは、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳ−Ｔ）を含むＰＢＳで２回洗浄された。その後、２０％の正常なウサギ血清ｐＨ７．８を含む０．１５ｍＬのＰＢＳをウェルに分注し、未結合表面をブロッキングし、続いて、１時間、室温にてブロッキングした。最後に、マイクロタイターは、ＰＢＳ−Ｔで２回洗浄された。抗体被覆されたプレートを乾燥させ、使用するまでアルミニウムバッグ中に４℃にて維持した。
ビオチン標識
ビオチン標識は、ＥＺ−Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ（製造番号２１３３８、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）について、製造業者の推奨に従って行った。要約すると、０．４ｍＬのＰＢＳ中の１ｍｇの抗体は、１０ｍＭのＳｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎの０．０１３ｍＬと混合され、抗体とビオチンの初期のモル比は１：２０であり、続いて、３０分間、室温にてインキュベートされた。ビオチンをカップリングさせた抗体は、ＰＢＳで溶出されるＰＤ−１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いるゲル濾過によって精製され、未反応のビオチンを除いた。ビオチンの取り込みのレベルを決定するために、ＥＺ Ｂｉｏｔｉｈ定量キット（製造番号２８００５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いた。ビオチン標識された抗体を使用するまで−８０℃にて保存した。
二工程イムノアッセイ
第一の反応について、４０μＬの血漿または標準抗原および６０μＬの５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（１０％ＮＲＳ、１５０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ−２Ｎａ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ ２０ ｐＨ７．５）（反応緩衝液）を抗体被覆ウェルに分注した。プレートを１８時間、４℃にてインキュベートし、続いて、ＰＢＳ−Ｔで５回洗浄した。第二の反応について反応緩衝液中の１０μｇ／ｍＬのビオチン標識された抗体の１００μＬを分注した。プレートを１時間、室温にてインキュベートし、続いてＰＢＳ−Ｔで５回洗浄した。１００μＬの西洋ワサビペルオキシダーゼ標識されたストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ）を分注した。室温にて３０分のインキュベーション後、プレートをＰＢＳ−Ｔで５回洗浄した。最後に、発色について、１００μＬのＴＭＢ溶液（ＫＰＬ）を分注し、１５分間遮光して維持した。１００μＬの１ＮのＨＣｌの添加より発色を停止させた後、４５０ｎｍでの吸光度をプレートリーダーを用いて読み込んだ。全ての洗浄工程は、自動プレートウォッシャー（ＡＭＷ−８、ＢｉｏＴｅｃ、日本）によって自動的に行われ、全てのＥＩＡ測定は２点測定で行われた。
図８は、捕捉抗体としてＭＯＶ１８、および検出抗体としてビオチン化されたＭＯＲＡｂ−００３を用いたＥＩＡアッセイを示す。
２．ＥＩＡ手法の最適化
上記ＥＩＡ手法は、部分的には、この手法を最適化するために設計された以下の実験に基づいて達成された。
第一に、アビジン−ＨＲＰ、ビオチン標識された抗体およびＨＲＰ標識された抗体を比較した。ＨＲＰ標識された抗体と比較すると、ビオチン標識された抗体およびアビジン−ＨＲＰは、より高いシグナルを与えた；したがって、ビオチン標識された抗体とアビジン−ＨＲＰを採用した。
第二に、一工程および二工程のインキュベーション手法を比較した。図９に示されるように、二工程のインキュベーション手法は、より高いシグナルを与え、したがって採用された。
第三に、第二のインキュベーション時間を最適化するために、１から４時間のインキュベーション時間を比較した。結果は、１時間のインキュベーション時間は最大のシグナル対ノイズ比を与え、したがって、続いて、１時間のインキュベーション時間を採用した。
第四に、ビオチン標識された抗体の作業濃度、ＨＲＰ標識された抗体の作業濃度および試料体積を最適化するために、ＥＩＡアッセイの上記の記載の通り、種々の濃度を採用した。最適値の濃度は上記される。
［実施例１０］
電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）および酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）を用いたヒト血漿におけるＦＲαの比較
ＦＲαのレベルは、実施例１と図１（捕捉抗体としてＭＯＲＡｂ−００３および標識された検出抗体としてルテニウム（Ｒｕ）標識されたＭＯＶ−１８を用いる）に記載されている電気化学発光アッセイ（ＥＣＬＩＡ）および実施例９と図８に記載されている酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）を用いて、卵巣癌患者および健常な女性の対照から採取されたヒト血漿試料において測定された。両アッセイにおいて、４０μＬの血漿をアッセイした。
表１６は、ＥＩＡとＥＣＬＩＡを用いて決定されるように、卵巣癌および正常な対照対象におけるＦＲαの血漿レベルを示す。
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ただ１つの例外を除いて、対象の全てについての結果は、ＥＩＡを用いて血清において検出されたＦＲαの濃度は、ＥＣＬＩＡを用いて検出されたレベルよりも低いことを示し、これは、ＥＩＡアッセイが、形式を合わせると、捕捉抗体（ＭＯＶ−１８）および検出抗体（ＭＯＲＡｂ−００３）のこの特定の組み合わせを用いた場合、ＥＣＬＩＡアッセイほど感受性でないことを示す。したがって、他のタイプの抗体を用いたさらなる実験は、より感受性のあるＥＩＡ手法を開発するために実施された。
［実施例１１］
ヒト血漿におけるＦＲαのＥＩＡ測定のための異なるタイプの抗体の実施可能性
１．抗体の組み合わせの予備実験
捕捉／検出抗体の種々の組み合わせを考慮した。予備実験は、表１７に記載される結果を示した。
Figure 0006224456
２．種々の抗体の組み合わせを用いたＥＩＡアッセイの比較およびＥＣＬＩＡアッセイとの比較
卵巣癌患者および正常な健常女性の対照由来の血漿におけるＦＲαのレベルは、捕捉抗体とビオチン標識された抗体の異なる組み合わせを用いた酵素免疫吸着法（ＥＩＡ）により測定され、ＥＣＬＩＡアッセイを用いて測定されたＦＲαのレベルと比較された。
材料および方法
ＥＣＬＩＡ法は実施例１に記載され、図１（捕捉抗体としてＭＯＲＡｂ−００３抗体、および標識された検出抗体としてＭｏｖ−１８抗体を用いる）に示される通りであった。ＥＩＡ法は、捕捉／検出抗体の３つの異なる組み合わせを用いることを除いて、実施例９に記載され、図１０に示される通りであった：ＭＯＶ１８／ＭＯＲＡｂ−００３、５４８９０８／ＭＯＲＡｂ−００３および６Ｄ３９８／ＭＯＲＡｂ−００３。抗体５４８９０８と６Ｄ３９８は市販されている。５４８９０８抗体はＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｎｏｒｔｈ Ｌａｓ Ｖｅｇａｓ、ＮＶ）から得られ、６Ｄ３９８抗体はＵＳ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（Ｓｗａｍｐｓｃｏｔｔ，ＭＡ ０１９０７）から得られた。
結果
ＥＩＡ法およびＥＣＬＩＡ法を用いて決定されたＦＲαの濃度（ｐｇ／ｍＬ）を図１８に示す。さらに、捕捉／検出抗体の種々の組み合わせを用いたＥＩＡによって決定されたＦＲαの濃度（ｐｇ／ｍｌ）は、図１１に図示されている。
Figure 0006224456
表１８におけるデータは、５４９０８−ＭＯＲＡｂ−００３の組み合わせを用いたＥＩＡによるＦＲαレベルの測定は、ＥＣＬＩＡアッセイを用いて得られた結果と最も類似する結果を得ることを示す。定量的分析を行い、この観察を確認した。さらに、これらのデータは、ＦＲαの検出が抗体および採用された抗体の組み合わせに非常に依存することを示す。したがって、異なる抗体の組み合わせは、生物学的液体中のＦＲαを決定するために使用され得る。さらに、ＥＩＡとＥＣＬＩＡアッセイフォーマットから得られたデータは類似しているため、種々のアッセイフォーマットがＦＲαの決定のために使用され得る。
ＥＩＡ法に使用された捕捉抗体および検出抗体の３つの組み合わせの各々について、回帰分析を行い、ＥＩＡにより決定されたＦＲαの濃度（ｐｇ／ｍＬ）は、ＥＣＬＩＡアッセイにより決定された濃度と相関していた。このアッセイの結果を図１９および図１２に示す。
Figure 0006224456
５４８０９８−ＭＯＲＡｂ−００３捕捉−検出酌み交わせを用いたＥＩＡについての結果はＥＣＬＩＡについての結果と非常に相関した（ｒ＝０．９６）。
［実施例１２］
卵巣癌患者由来の試料におけるＥＩＡとＥＣＬＩＡによって決定されたＦＲαの血漿レベル
血清ＦＲαレベルの測定は、卵巣癌患者（ｎ＝１７）群および正常対照（ｎ＝３５）群において、ＥＣＬＩＡおよびＥＩＡを用いて決定された。ＥＩＡ測定について、５４８９０８捕捉抗体／ＭＯＲＡｂ−００３検出抗体の組み合わせを採用した。ＥＩＡ手法は、他には実施例９に記載される通りであった。ＥＣＬＩＡ手法は、実施例１に記載される通りであった。結果を表２０に示す。
Figure 0006224456
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図１３は、ＥＩＡを用いて決定された卵巣癌を有する対象および正常な女性の対照対象における血漿ＦＲα濃度の分布を示す。
表２１は、ＥＩＡを用いて決定された卵巣癌および正常な女性の対照対象における血漿ＦＲα濃度についての要約記述統計量を示す。
Figure 0006224456
図１４は、さらに、ＥＩＡとＥＣＬＩＡを用いて決定されたＦＲα血漿濃度間の相関を示す。相関は高い（ｒ＝０．９５）。
［実施例１３］
電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）によって測定された肺癌患者および卵巣癌患者由来の合致した尿および血清試料におけるＦＲαレベルの決定
ＦＲαレベルは、ＥＣＬＩＡを用いて、肺癌患者および卵巣癌患者由来の合致した尿および血清試料において決定され、試料は同じ患者から採取された。また、血清と尿のＦＲαレベル間の相関を決定した。
材料および方法
利用されたＥＣＬＩＡ法は実施例１に記載される通りである。グアニジンは、実施例６に記載されるように、尿沈渣を可溶化するために用いられた。
結果
肺癌患者および卵巣癌患者由来の血清および尿のＥＣＬＩＡアッセイの結果を表２２に示す。
Figure 0006224456
肺癌患者の血清および尿のＦＲαレベルについての要約データを表２３に示す。
Figure 0006224456
卵巣癌患者の血清および尿のＦＲαレベルについての要約データを表２４に示す。
Figure 0006224456
図１５は、同じ患者から採取された合致した血清および尿試料におけるＦＲαレベルのＥＣＬＩＡ測定値間の相関を示す。肺癌患者についての相関はｒ＝０．２４（上段パネル）であり、卵巣癌患者についての相関はｒ＝−０．７６（下段パネル）であった。
これらのデータは、特に肺癌患者について示されるように、尿対血清において測定されたＦＲα濃度間の相関の相対的欠失を示す。さらに、これらのデータは、ＦＲαが、肺癌患者対正常な対照の血清におけるバックグランドレベルを超えて基本的には検出できず、一方、ＦＲαはこれらの患者の尿において検出可能であることを示す。
［実施例１４］
卵巣癌を有する患者、肺癌を有する患者および正常な対照由来の血清試料におけるＦＲαのレベルの評価
卵巣癌を有する患者、肺癌を有する患者および正常な対照の血清におけるＦＲαレベルを評価した。血清のＦＲαレベルは、捕捉−検出抗体の２種の対を用いてＥＣＬＩＡにより評価された；対１、ここでは９Ｆ３は捕捉躯体であり、２４Ｆ１２は検出抗体であり、対２、ここでは２６Ｂ３は捕捉抗体であり、１９Ｄ４は検出抗体であった。
ＦＲα対は、全較正曲線および１：４に希釈された１９６個の個々の血清を用いて試験された。１つの実験において、１．０μｇ／ｍＬにて、２６Ｂ３はプレートロット上のＣＲ処理後の捕捉抗体（７５μｇ／ｍＬ、＋Ｂ、＋Ｔ）として用いられ、１９Ｄ４は検出抗体として用いられた。別の実験において、１．０μｇ／ｍＬにて、９Ｆ３は捕捉抗体として用いられ、２４Ｆ１２は検出抗体として用いられた。各々はＣＲ処理（ロット１００７０）され、標識対タンパク質比（Ｌ／Ｐ）は１３．３であった。希釈剤１００（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｒｓｂｕｒｇ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）＋ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）＋ｍＩｇＧを試料および較正について使用した。希釈剤３（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｒｓｂｕｒｇ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）を検出に使用した。
以下のプロトコールをＥＣＬＩＡのために使用した。試料を５０μＬ／ウェルにて添加した。試料を２時間振とうし、続いて、洗浄剤Ｔｗｅｅｎ ２０を有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液（ＰＢＳＴ）を用いて洗浄した。検出抗体を２５μＬ／ウェルにて添加した。試料を２時間振とうし、ＰＢＳＴを用いて洗浄した。最後に、試料の電気化学発光（ＥＣＬ）の放出を２×ＭＳＤ（登録商標）緩衝液Ｔを用いて読み込んだ。
結果を以下の表２５に示す。
Figure 0006224456
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前述のデータに基づいて、９Ｆ３、２４１２、２６Ｂ３および１９Ｄ４抗体は、対象由来の生物学的試料、例えば血清におけるＦＲαのレベルの検出に有用であった。さらに、（ｉ）捕捉抗体としての９Ｆ３および検出抗体としての２４Ｆ１２、および（ｉｉ）捕捉抗体としての２６Ｂ３および検出抗体としての１９Ｄ４の特定の組み合わせは、生物学的試料においてＦＲαのレベルを評価することができ、特に有効であった。
［実施例１５］
３種の検出抗体および捕捉抗体の対を用いた尿におけるＦＲαのレベルの評価
尿試料におけるＦＲαのレベルの検出における３つの抗ＦＲα抗体対の能力を評価した。用いられた抗体対は以下の通りであった：（１）検出抗体として２６Ｂ３および捕捉抗体として９Ｆ３、および（２）検出抗体として２４Ｆ１２および捕捉抗体として９Ｆ３。
方法
２つの抗体対は、完全な較正曲線、および６Ｍグアニジン、３ＭグアニジンまたはＰＢＳ対照のいずれかにおいて、２分間、１：１希釈で前処理された尿を用いて試験された。以下の尿試料を試験した：１：８０に希釈された３つのヒト尿プール、および１：８０に希釈された５つのヒトの個々の尿（男性１人、女性４人）。
プレートは、１５０μｇ／ｍＬ、＋Ｂ、＋Ｔにて、４ｓｐｏｔ ＳＴＤ（（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ））上にバイオドット（Ｂｉｏｄｏｔ）し、ウェルあたり１捕捉であった。検出は１μｇ／ｍＬで行った。希釈剤１００＋ＨＡＭＡ＋ｍＩｇＧを試料および較正に用いた。希釈剤３を検出に用いた。希釈剤は、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙから得られる市販の希釈剤であった。
以下のプロトコールをＥＣＬＩＡに用いた。試料を５０μＬ／ウェルにて添加した。試料を２時間振とうした。試料は、洗浄剤Ｔｗｅｅｎ ２０を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液（ＰＢＳＴ）で洗浄された。検出抗体を２５μＬ／ウェルにて添加した。試料を２時間振とうし、続いて、ＰＢＳＴで洗浄した。試料の電気化学発光（ＥＣＬ）の放出を２×ＭＳＤ緩衝液Ｔを用いて読み込んだ。
これらの実験の結果を表２６から２７に示す。
Figure 0006224456
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前述のデータに基づいて、９Ｆ３、２４Ｆ１２、２６Ｂ３および１９Ｄ４抗体は、対象由来の生物学的試料におけるＦＲαのレベルの検出に有用であった。さらに、（１）検出抗体としての２６Ｂ３および捕捉抗体としての９Ｆ３、および（２）検出抗体としての２４Ｆ１２および捕捉抗体としての９Ｆ３の組み合わせは、生物学的試料においてＦＲαのレベルを評価することができ、特に有効であった。
実験の第二セットは、上記のプロトコールに従い、同じ２対の抗体を用い、１：８０に希釈した４人の女性のヒトの個々の尿を用いて行われた。尿は、３ＭグアニジンまたはＰＢＳ対照のいずれかにおいて２分間、１：１希釈で前処理された。結果を表２８から２９に示す。
Figure 0006224456
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この第二セットの実験の結果は、第一セットの実験の結果をさらに確認し、細胞に結合しないＦＲαのレベルが、例えば、尿において、ＥＣＬＩＡアッセイなどのアッセイを用い、２６Ｂ３、９Ｆ３、２４Ｆ１２抗体を用いて、確実に評価され得ることを示す。さらに、結果は、このようなアッセイが、ＦＲαに結合する検出抗体と捕捉抗体の対（例えば、検出抗体として２６Ｂ３と捕捉抗体として９Ｆ３、および検出抗体として２４Ｆ１２と捕捉抗体として９Ｆ３）を用いてＦＲαを効果的に検出することができることを示す。
［実施例１６］
血清および血漿におけるＦＲαのレベルの評価
ＦＲαのレベルは、別々の２日に血清および血漿の試料において評価された。試料の由来の対象は、正常な対象または卵巣癌または肺癌を有する患者のいずれかであった。
ＦＲαレベルを評価するためのプロトコールは、上記の実施例１４に記載のものと同じであった。また、ＦＲαレベルを評価するための用いられた抗体の対は実施例１４と同じであった。すなわち、対１、ここでは９Ｆ３は捕捉躯体であり、２４Ｆ１２は検出抗体であり、対２、ここでは２６Ｂ３は捕捉抗体であり、１９Ｄ４は検出抗体であった。
結果を表３０に示す。
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前述のデータに基づいて、９Ｆ３、２４１２、２６Ｂ３および１９Ｄ４抗体は、対象由来の生物学的試料、例えば血清または血漿におけるＦＲαのレベルの検出に有用であった。さらに、（ｉ）捕捉抗体としての９Ｆ３および検出抗体としての２４Ｆ１２、および（ｉｉ）捕捉抗体としての２６Ｂ３および検出抗体としての１９Ｄ４の特定の組み合わせは、生物学的試料においてＦＲαのレベルを評価することができ、特に有効であった。
対１と対２の両方を用いて行われたアッセイについて、血清と血漿のＦＲαレベルの間に高い相関があった。図１６は、対１を用いて行われたアッセイについて、血清対血漿のＦＲαレベルにおいて相関を示す（実施例１６参照）。Ｒ２値は０．８６０４であった。図１７は、対２を用いて行われたアッセイについて、血清対血漿のＦＲαレベルにおいて相関を示す（実施例１６参照）。Ｒ２値は０．９７６６であった。
血清と血漿の試料の両方について、対１と対２を用いて測定されたＦＲαレベル間に高い相関があった。図１８は、対１対対２を用いて行われたアッセイについて血清ＦＲαレベルにおいて相関を示す（実施例１６参照）。Ｒ２値は０．９０２８であった。図１９は、対１対対２を用いて行われたアッセイについて血漿ＦＲαレベルにおいて相関を示す（実施例１６参照）。Ｒ２値は０．８７７３であった。
また、結果は、異なる日で測定されたＦＲαレベル間に高い相関があることを示した。図２０は、対２を用いて行われたアッセイについて、血清ＦＲαレベルにおいて日間の相関を示す。Ｒ２値は０．９８３９であった。
均等物
当業者は、本明細書に記載されている本発明の特定の実施形態の多数の均等物を認識し、またはたかが日常的な実験を用いてそれを確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。従属請求項に開示された実施形態のいずれかの組み合わせは、本発明の範囲内にあることが意図される。
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Claims (21)

  1. 対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するためのデータを提供する方法であって、
    対象由来の尿試料をＦＲαに結合する抗体と接触させ、これにより、尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定すること；および
    対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較すること；を含み、
    対照試料におけるＦＲαのレベルと比較して、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの増加が、対象がＦＲα発現癌に罹患しているという指標である、前記方法。
  2. ＦＲα発現癌が、肺癌、中皮腫、卵巣癌、腎臓癌、脳癌、子宮頸癌、鼻咽腔癌、頭頸部の扁平上皮癌腫、子宮内膜癌、乳癌、膀胱癌、膵臓癌、骨癌、下垂体癌、結腸直腸癌および甲状腺髄様癌からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  3. ＦＲα発現癌が卵巣癌である、請求項１に記載の方法。
  4. ＦＲα発現癌が肺癌である、請求項２に記載の方法。
  5. ＦＲα発現癌が非小細胞肺癌である、請求項４に記載の方法。
  6. 非小細胞肺癌が腺癌である、請求項５に記載の方法。
  7. 尿試料における、約９５００ｐｇ／ｍＬ超、約１０，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１１，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１２，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１３，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１４，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１５，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１６，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１７，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１８，０００ｐｇ／ｍＬ超、約１９，０００ｐｇ／ｍＬ超または約２０，０００ｐｇ／ｍＬ超の濃度のＦＲαの存在が、対象が卵巣癌に罹患しているという指標である、請求項１に記載の方法。
  8. 抗体が、下記からなる群から選択される、請求項１に記載の方法：
    （ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
    （ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
    （ｃ）ＭＯＶ１８抗体；
    （ｄ）ＭＯＶ１８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
    （ｅ）５４８９０８抗体；
    （ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
    （ｇ）６Ｄ３９８抗体；
    （ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
    （ｉ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
    （ｊ）ＣＤＲＨ１として配列番号５５（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号５６（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号５７（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号５１（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５２（ＮＡＫＴＬＡＥ）およびＣＤＲＬ３として配列番号５３（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
    （ｋ）２６Ｂ３抗体；
    （ｌ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
    （ｍ）ＣＤＲＨ１として配列番号３９（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４０（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４１（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＬＡＳＮＬＥＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
    （ｎ）１９Ｄ４抗体；
    （ｏ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
    （ｐ）ＣＤＲＨ１として配列番号３１（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３２（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３３（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２７（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２８（ＧＴＳＮＬＡＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号２９（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
    （ｑ）９Ｆ３抗体；
    （ｒ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
    （ｓ）ＣＤＲＨ１として配列番号４７（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号４８（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号４９（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４３（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号４４（ＹＴＳＳＬＨＳ）およびＣＤＲＬ３として配列番号４５（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
    （ｔ）２４Ｆ１２抗体；
    （ｕ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ（配列番号１３）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ（配列番号１４）；ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ（配列番号１５）；およびＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）からなる群から選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
    （ｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ（配列番号１７）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）；ＬＫ２６ＨｕＶＨ Ｉ，Ｉ（配列番号２０）；およびＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される可変領域重鎖を含む抗体；
    （ｗ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号２１）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；
    （ｘ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＳＬＦ（配列番号１９）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体；ならびに
    （ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号１８）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号１６）を含む抗体。
  9. 抗体が、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、アフィボディ、アビマー、バーサボディ、ナノボディおよびドメイン抗体からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  10. 抗体が標識される、請求項１に記載の方法。
  11. 抗体が、放射性標識、ビオチン標識、発色団標識、蛍光色素標識、ＥＣＬ標識および酵素標識からなる群から選択される標識を用いて標識される、請求項１０に記載の方法。
  12. ＦＲαのレベルが、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光分析、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）およびＥＬＩＳＡアッセイからなる群から選択される技法を用いて決定される、請求項１に記載の方法。
  13. 対照試料が、健常対象におけるＦＲαの標準化された対照レベルを含む、請求項１に記載の方法。
  14. 尿試料が、尿試料におけるＦＲαレベルを決定する前にグアニジンで処理される、請求項１に記載の方法。
  15. 尿試料が、尿試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に希釈される、請求項１に記載の方法。
  16. 尿試料が、尿試料におけるＦＲαのレベルを決定する前に、遠心分離、ボルテックスまたはその両方にかけられる、請求項１に記載の方法。
  17. 請求項１に記載の方法であって、
    対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルが、尿試料を
    （ａ） 固体支持体に固定されおよびＭＯＲＡＢ−００３抗体と標識されたＭＯＶ１８抗体、
    （ｂ）固体支持体に固定されおよび２４Ｆ１２抗体と標識された９Ｆ３抗体、
    （ｃ）固体支持体に固定されおよび１９Ｄ４抗体と標識された２６Ｂ３抗体、ならびに
    （ｄ）固体支持体に固定されおよび２６Ｂ３抗体と標識された９Ｆ３抗体
    からなる群から選択される一対の抗体と接触させることによって評価される、方法。
  18. 卵巣癌に罹患している対象における卵巣癌の進行を評価するためのデータを提供する方法であって、
    対象由来の尿試料をＦＲαに結合する抗体と接触させ、これにより、尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定すること；および
    対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較すること；を含み、
    （ｉ）対照試料におけるＦＲαのレベルと比較して、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの増加が、卵巣癌が急速に進行しているという指標であり；または
    （ｉｉ）対照試料におけるＦＲαのレベルと比較して、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの減少が、卵巣癌が穏やかに進行しているという指標である；
    前記方法。
  19. 卵巣癌を患っている対象における卵巣癌のＭＯＲＡｂ−００３治療の有効性を監視するためのデータを提供する方法であって、
    対象由来の尿試料をＦＲαに結合する抗体と接触させ、これにより、ＭＯＲＡｂ−００３が予め投与された対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定すること；および
    対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較すること；を含み、
    （ｉ）対照試料におけるＦＲαのレベルと比較して、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの増加が、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効ではないという指標であり；または
    （ｉｉ）対照試料におけるＦＲαのレベルと比較して、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの減少が、ＭＯＲＡｂ−００３治療が有効であるという指標である；
    前記方法。
  20. 卵巣癌を患っている対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するかどうかを予測するためのデータを提供する方法であって、
    対象由来の尿試料をＦＲαに結合する抗体と接触させ、これにより、尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定すること；および
    対象由来の尿試料における細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルと対照試料におけるＦＲαのレベルを比較すること；を含み、
    対照試料におけるＦＲαのレベルと比較して、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの増加が、対象がＭＯＲＡｂ−００３による治療に応答するであろうという指標である、前記方法。
  21. 対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するための、または対象における卵巣癌の進行を評価するためのキットであって、
    対象由来の尿試料において、細胞に結合しない葉酸受容体アルファ（ＦＲα）のレベルを決定する手段、および
    対象がＦＲα発現癌に罹患しているかどうかを評価するための、または卵巣癌の進行を評価するためのキットの使用説明書
    を含み、
    前記使用説明書が、対照試料におけるＦＲαのレベルと比較して、対象由来の尿試料におけるＦＲαのレベルの増加が、対象がＦＲα発現癌に罹患しているという指標であること、または卵巣癌が急速に進行しているという指標であること、を示している、
    前記キット。
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Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006116592A2 (en) * 2005-04-22 2006-11-02 Morphotek, Inc. Antibodies with immune effector activity and that internalize in folate receptor alpha-positive cells
KR20220017432A (ko) 2010-02-24 2022-02-11 이뮤노젠 아이엔씨 엽산염 수용체 1 항체와 면역접합체 및 이들의 용도
US20120189620A1 (en) * 2011-01-21 2012-07-26 Emory University Methods for treating non-functioning pituitary adenoma
EP2680839A1 (en) * 2011-03-02 2014-01-08 Morphotek, Inc. Co -administration of eribulin and farletuzumab for the treatment of breast cancer
CA3182262A1 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 Immunogen, Inc. Methods for increasing efficacy of folr1 cancer therapy
DK2731972T3 (en) 2011-07-15 2018-03-12 Eisai R&D Man Co Ltd Antifolate receptor alpha antibodies and uses thereof
ES2766836T3 (es) 2012-05-15 2020-06-15 Eisai Inc Métodos para el tratamiento de cáncer gástrico
SG10201804260QA (en) * 2012-08-31 2018-07-30 Immunogen Inc Diagnostic assays and kits for detection of folate receptor 1
JP6383787B2 (ja) * 2013-06-20 2018-08-29 モルフォテック， インコーポレイテッド 卵巣癌の治療方法
SG10201907501QA (en) 2013-08-30 2019-10-30 Immunogen Inc Antibodies and assays for detection of folate receptor 1
PT3653228T (pt) * 2013-10-08 2024-07-17 Immunogen Inc Regimes de dosagem de imunoconjugado anti-folr1
RS60615B1 (sr) 2014-11-20 2020-08-31 Hoffmann La Roche Zajednički laki lanci i postupci upotrebe
DK3789402T3 (da) 2014-11-20 2022-09-19 Hoffmann La Roche Kombinationsbehandling med T-celleaktiverende bispecifikke antigenbindende molekyler og PD-1-aksebindende antagonister
US20180125970A1 (en) 2015-04-17 2018-05-10 Morphotek, Inc. Methods for treating lung cancer
CN108601828B (zh) 2015-09-17 2023-04-28 伊缪诺金公司 包含抗folr1免疫缀合物的治疗组合
CA3033083A1 (en) 2016-08-12 2018-02-15 L.E.A.F. Holdings Group Llc Polyglutamated antifolates and uses thereof
US10822410B2 (en) 2016-11-23 2020-11-03 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-folate receptor alpha antibodies and uses thereof
CN107353325B (zh) * 2017-07-26 2020-08-11 中国药科大学 叶酸受体α特异性结合肽1及其应用
CN107446021B (zh) * 2017-07-26 2020-08-11 中国药科大学 叶酸受体α特异性结合肽5及其应用
CN107446020B (zh) * 2017-07-28 2019-10-01 中国药科大学 叶酸受体α特异性结合肽2及其应用
KR20240034260A (ko) * 2017-09-05 2024-03-13 이뮤노젠 아이엔씨 환자 샘플에서 엽산 수용체 1의 검출 방법
CN111954531A (zh) 2018-02-07 2020-11-17 L.E.A.F.控股集团公司 α聚谷氨酸化培美曲塞及其用途
CN111867593A (zh) 2018-02-07 2020-10-30 L.E.A.F.控股集团公司 α聚谷氨酸化抗叶酸剂及其用途
US11730738B2 (en) 2018-02-07 2023-08-22 L.E.A.F. Holdings Group Llc Alpha polyglutamated pralatrexate and uses thereof
WO2019160736A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated pralatrexate and uses thereof
CA3090992A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated tetrahydrofolates and uses thereof
CA3090875A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 L.E.A.F. Holdings Group Llc Gamma polyglutamated lometrexol and uses thereof
AU2019236091A1 (en) 2018-03-13 2020-09-03 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-folate receptor 1 antibodies and uses thereof
EP3935581A4 (en) 2019-03-04 2022-11-30 Iocurrents, Inc. DATA COMPRESSION AND COMMUNICATION USING MACHINE LEARNING
SG11202111109UA (en) 2019-04-29 2021-11-29 Immunogen Inc Biparatopic fr-alpha antibodies and immunoconjugates
TW202306995A (zh) * 2021-06-04 2023-02-16 美商免疫遺傳股份有限公司 治療具有可溶性ＦＲ－α之患者之癌症
CN117700557B (zh) * 2024-02-05 2024-04-30 卡秋(江苏)生物科技有限公司 一种特异性结合叶酸受体α的抗体或抗原结合片段

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5646253A (en) 1994-03-08 1997-07-08 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Recombinant human anti-LK26 antibodies
WO1994004678A1 (en) 1992-08-21 1994-03-03 Casterman Cecile Immunoglobulins devoid of light chains
US5547835A (en) 1993-01-07 1996-08-20 Sequenom, Inc. DNA sequencing by mass spectrometry
US5605798A (en) 1993-01-07 1997-02-25 Sequenom, Inc. DNA diagnostic based on mass spectrometry
AU687801B2 (en) 1993-03-19 1998-03-05 Sequenom, Inc. DNA sequencing by mass spectrometry via exonuclease degradation
DE69835143T2 (de) 1997-01-21 2007-06-06 The General Hospital Corp., Boston Selektion von proteinen mittels rns-protein fusionen
US6261804B1 (en) 1997-01-21 2001-07-17 The General Hospital Corporation Selection of proteins using RNA-protein fusions
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US6933108B2 (en) * 1999-12-09 2005-08-23 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for use in the treatment of filovirus mediated disease conditions
WO2002037112A2 (en) * 2000-11-01 2002-05-10 Mount Sinai Hospital Detection of ovarian cancer
US20100120078A1 (en) * 2001-08-16 2010-05-13 Tony Baker Urine Stabilization System
AU2002340683C1 (en) * 2001-11-13 2009-11-12 Id Biomedical Corporation Of Quebec Polypeptides of pseudomonas aeruginosa
AU2003253589A1 (en) * 2002-03-26 2003-11-10 Centocor, Inc. Epitope mapping using nuclear magnetic resonance
WO2004082463A2 (en) * 2003-03-17 2004-09-30 Medical College Of Ohio Folate receptor gene modulation for cancer diagnosis and therapy
US20040235108A1 (en) 2003-05-23 2004-11-25 Luigi Grasso Monoclonal antibodies that specifically bind a tumor antigen
WO2005047534A2 (en) * 2003-10-28 2005-05-26 Bayer Healthcare Ag Methods and compositions for the response prediction of malig-nant neoplasia to treatment
JP4805848B2 (ja) 2004-02-12 2011-11-02 モルフォテック、インク． 腫瘍抗原の生物活性を特異的に阻止するモノクローナル抗体
US20090081710A1 (en) * 2005-03-30 2009-03-26 Purdue Research Foundation Method for Cancer Prognosis Using Cellular Folate Vitamin Receptor Quantification
WO2006116592A2 (en) * 2005-04-22 2006-11-02 Morphotek, Inc. Antibodies with immune effector activity and that internalize in folate receptor alpha-positive cells
NZ570008A (en) * 2006-02-09 2011-10-28 Univ South Florida Detection of ovarian cancer by elevated levels of Bcl-2 in urine
CA2685300C (en) * 2006-06-01 2017-01-03 Mayo Foundation For Medical Education And Research Immunity to folate receptors
EP1900752A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-19 DOMPE' pha.r.ma s.p.a. Human anti-folate receptor alpha antibodies and antibody fragments for the radioimmunotherapy of ovarian carcinoma
US7754698B2 (en) 2007-01-09 2010-07-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of FR-alpha expression
JP2011522212A (ja) * 2007-10-19 2011-07-28 セル・シグナリング・テクノロジー・インコーポレイテツド 癌の分類および使用法
WO2009132081A2 (en) 2008-04-24 2009-10-29 The Research Foundation Of State University Of New York Monoclonal antibody-based targeting of folate receptors
US20110177525A1 (en) * 2010-01-19 2011-07-21 Predictive Biosciences, Inc. Antibodies and methods of diagnosing diseases
WO2012024543A1 (en) * 2010-08-18 2012-02-23 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings Circulating biomarkers for disease

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