CN108486030B - 一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的芽胞杆菌的制备方法及应用 - Google Patents

一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的芽胞杆菌的制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物技术及发酵领域，具体公开了一种通过过表达phoP基因高产聚γ‑谷氨酸的芽胞杆菌的制备方法及应用。本发明以质粒pHY300PLK为表达载体，在地衣芽胞杆菌WX‑02中游离表达磷代谢转录因子基因phoP，构建了地衣芽胞杆菌工程菌WX‑02/pHY300‑phoP，与转入pHY300PLK空质粒的对照菌WX‑02/pHY300相比，工程菌株的γ‑PGA的产量提高了30%以上。本发明首次尝试通过强化phoP基因的表达，提高了γ‑聚谷氨酸的产量，为今后γ‑PGA的发酵生产提供了新思路。

Description

一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的芽胞杆菌的制 备方法及应用
技术领域
本发明属于生物技术及发酵领域，具体涉及一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的芽胞杆菌的制备方法及应用。
背景技术
聚γ-谷氨酸(Poly glutamic acid,γ-PGA)是由D-谷氨酸和(或)L-谷氨酸单体经γ-酰胺键聚合而成的一种多功能生物高分子聚合物，其具有良好的水溶性，保水性，金属阳离子螯合，无毒性和可生物降解性等特性，目前已被应用于化妆品，医药，食品，水处理和农业等产业中，如作为材料和药物载体，食品防腐剂，金属离子螯合剂和高度吸水性水凝胶等。
枯草芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌中，聚谷氨酸是由ATP依赖的聚谷氨酸合酶复合体pgsB CA合成的。在枯草芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌中，有多种调控因子来直接或间接的调控该复合体。
PhoP-R双组分信号转导系统控制由枯草芽胞杆菌激活的三种反应以适应磷酸盐限制条件，这种反应包括酶和转运蛋白的产生，它们在环境中清除磷酸盐，并将其同化到细胞中，其中PhoP对PhoR其正调控作用。在地衣芽胞杆菌中同样存在双组分信号转导系统PhoP-R，那么PhoP对聚γ-谷氨酸的合成是否存在直接调控或者间接调控并没有相关的报道。本发明首次尝试在地衣芽胞杆菌中过表达phoP基因，发现过表达phoP后聚γ-谷氨酸产量大幅度提高。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌的制备方法，该方法通过在地衣芽胞杆菌中强化表达phoP基因，从而大大提高了聚γ-谷氨酸产量。
本发明的另一个目的在于提供了一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌的制备方法的应用。利用本发明的方法，可用于工业化制备聚γ-谷氨酸。
为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：
一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌的制备方法，是利用本领域的常规方法将phoP基因的在地衣芽胞杆菌中强化表达。
以上所述的方法中，优选的，所述的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)为地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02；
以上所述的方法中，具体的，包括下述步骤：
(1)以地衣芽胞杆菌WX-02的基因组DNA为模板，PCR扩增出phoP基因片段；
(2)在phoP基因片段上游连接P43启动子、下游连接淀粉酶终止子，构成完整的phoP表达元件；
(3)采用EcoRI和XbaI限制性内切酶对目的基因片段进行双酶切得到酶切基因片段；
(4)准备质粒pHY300PLK，并采用EcoRI和XbaI限制性内切酶对质粒pHY300PLK进行双酶切得到线性质粒片段；
(5)将步骤(3)得到的酶切基因片段和步骤(4)得到的线性质粒片段经T4-DNA连接酶进行连接，经过氯化钙转化法将酶连的产物转入大肠杆菌DH5α中，以氨苄青霉素为抗性筛选标记，并经过菌落PCR得到阳性转化子，经过测序得到游离表达质粒pHY300-phoP；
(6)将游离表达质粒pHY300-phoP电转入地衣芽胞杆菌WX-02中，以四环素抗性作为筛选标记，并经过菌落PCR筛选得到阳性转化子，命名为地衣芽胞杆菌WX-02/pHY300-phoP；
所述地衣芽胞杆菌WX-02的基因组DNA序列中的phoP基因为SEQ ID NO.1所示。
一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌的制备方法的应用，包括利用本领域的常规方式，将获得的地衣芽孢杆菌进行工业发酵以生产聚γ-谷氨酸；
以上所述的应用中，优选的，所述发酵的培养基配方，包括：30～90g/L葡萄糖(或20～60g/L甘油)，0～30g/L谷氨酸钠，0～10g/L柠檬酸钠，0～10g/L NaNO3，0～10g/LNH4Cl，0～1g/L K2HPO4·3H2O，0～1g/L MgSO4·7H2O，0～1g/L ZnSO4·7H2O，0～0.15g/LMnSO4·H2O，0～1g/L CaCl2，pH6.5～7.2；
所述的发酵的培养基中，其组分谷氨酸钠，柠檬酸钠，NaNO3，NH4Cl，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，ZnSO4·7H2O，MnSO4·H2O和CaCl2中只能有一种组分取0；
以上所述的发酵培养基，优选的：
30～90g/L葡萄糖(或20～60g/L甘油)，15～30g/L谷氨酸钠，5～10g/L柠檬酸钠，5～10g/L NaNO3，5～10g/L NH4Cl，0.5～1g/L K2HPO4·3H2O，0.5～1g/L MgSO4·7H2O，0.5～1g/L ZnSO4·7H2O，0.075～0.15g/L MnSO4·H2O，0.5～1g/L CaCl2，pH6.5～7.2；
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明人首次尝试通过强化phoP基因的表达，提高了γ-聚谷氨酸的产量，为提高聚γ-谷氨酸产量提供了一种新策略。与地衣芽胞杆菌WX-02相比，通过本发明构建得到的地衣芽胞杆菌WX-02/pHY300-phoP的聚谷氨酸产量至少提高了30％。本发明的研究结果表明：过表达phoP基因是一种十分有效的提高聚γ-谷氨酸产量的方法。
附图说明
图1为实施例1步骤(1)得到的phoP基因片段的琼脂糖凝胶图；
其中，泳道1为DNA marker，泳道2为phoP基因片段。
图2为实施例1步骤(2)得到的phoP表达元件的琼脂糖凝胶图；
其中，泳道1为DNA marker，泳道2为P43启动子，泳道3为淀粉酶终止子TamyL，泳道4为phoP表达元件。
图3为实施例1步骤(5)得到的游离表达质粒pHY300-phoP进行菌落PCR验证图；
其中，泳道1为DNA marker，泳道2为游离表达质粒pHY300-phoP进行菌落PCR验证的条带。
图4为实施例1步骤(6)得到的转化子进行菌落PCR验证图；
其中，泳道1为DNA marker，泳道2为阳性转化子WX-02/pHY300-phoP进行菌落P CR验证的条带；其中，上述DNA marker泳道中从上到下的条带对应的分子量依次为：5000bp，3000bp，2000bp，1500bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp。
具体实施方式
本发明所述技术方案，如未特备说明，均为本领域的常规技术；所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
实施例1：
一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌的制备方法，包括以下步骤：(1)根据地衣芽胞杆菌WX-02基因组DNA序列中的phoP基因(SEQ ID NO.1所示)的基因序列，设计phoP基因的上游引物(phoP-F)和下游引物(phoP-R)；并以地衣芽胞杆菌WX-02的基因组DNA为模板，分别以phoP基因的上游引物、下游引物进行PCR扩增得到phoP基因片段(720bp)；
其中，phoP-F和phoP-R的序列为：
phoP-F:TAGGTAAGAGAGGAATGTACACATGGAAAAAACAAAAATACTGA
phoP-R:GAAATCCGTCCTCTCTGCTCTTCTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGC
(2)以枯草芽胞杆菌168的基因组DNA为模板，PCR扩增得到P43启动子(所用引物为P43-F和P43-R)；以地衣芽胞杆菌WX-02的基因组DNA为模板，PCR扩增得淀粉酶终止子(所用引物为TamyL-F和TamyL-R)，随后将启动子、目的基因和终止子通过SOE-PCR连到一起(所用引物为P43-F和TamyL-R)，构成完整的phoP表达元件(1521bp)；其中，P43-F、P43-R、TamyL-F、TamyL-R的序列为：
P43-F:GCGAATTCTGATAGGTGGTATGTTTTCGCT
P43-R:TCAGTATTTTTGTTTTTTCCATGTGTACATTCCTCTCTTACCTA
TamyL-F:GCACCACCACCACCACCACTAGAAGAGCAGAGAGGACGGATTTC
TamyL-R:GGTCTAGACG CAATAATGCCGTCGCACTGG
(3)采用限制性内切酶EcoRI和XbaI对目的基因片段进行双酶切得到酶切基因片段(1527bp)；
(4)准备质粒pHY300PLK，并采用EcoRI和XbaI限制性内切酶对质粒pHY300PLK进行双酶切得到线性质粒片段(4870bp)；其中，所述的限制性内切酶EcoR I和Xba I限制性内切酶均购自北京全式金生物技术有限公司；
(5)将步骤(3)得到的酶切基因片段和步骤(4)得到的线性质粒片段经T4DNA连接酶进行连接，得到连接产物；通过氯化钙转化法将该连接产物转入大肠杆菌DH5α，在37℃的条件下经含有氨苄青霉素抗性的培养基进行筛选，筛选得到转化子，对转化子挑质粒进行菌落PCR验证(所用引物为：pHY-F和pHY-R)。若转化子的PCR验证结果为：在1804bp处出现电泳条带，说明phoP表达载体构建成功，上述转化子为阳性转化子(命名为：游离表达载体pHY300-phoP)。其中pHY-F和pHY-R的序列分别为：
pHY-F：GTTTATTATCCATACCCTTAC
pHY-R：CAGATTTCGTGATGCTTGTC
(6)将游离表达载体pHY300-phoP转入地衣芽胞杆菌WX-02中，在37℃的条件下、含有四环素抗性的培养基进行筛选，筛选得到转化子，对转化子挑质粒进行菌落PCR验证(所用引物为：pHY-F和pHY-R)。若转化子的PCR验证结果为：在1804bp处出现电泳条带，证明：游离表达载体pHY300-phoP成功转入地衣芽胞杆菌WX-02中，此时，该转化子为阳性转化子，即转入了游离表达载体pHY300-phoP的地衣芽胞杆菌工程菌WX-02/pHY300-phoP。
实施例2：
地衣芽胞杆菌工程菌WX-02/pHY300-phoP在γ-PGA生产中的应用，包括下述步骤：
1)种子液获得的具体步骤为：先将地衣芽胞杆菌WX-02/pHY300-phoP活化，即从甘油管以体积百分比1％接种于装有5mL LB培养基中，230r/min、温度37℃，培养12小时，然后将菌种活化后的菌液以体积百分比按1％接种量接种于种子发酵的培养基后于230r/min、37℃中培养12小时，得到种子培养的菌液；
所述的种子培养基的配方是LB配方(10g/L蛋白胨，5g/L酵母粉，10g/L氯化钠，pH7.2)；
2)向250mL三角瓶中装入50mL的不同配方的发酵培养基(具体配方见表1，pH7.20)，然后将种子培养的菌液以接种量为3％(体积百分比)，转速230r/min，温度37℃，发酵培养28小时，即得。
以向地衣芽胞杆菌WX-02中转入了质粒pHY300PLK的地衣芽胞杆菌工程菌WX-02/pHY300为对照。
本发明人采用干重法测量γ-PGA产量和菌体生物量，具体操作步骤如下：取一定体积的发酵液样品，6mol/L HCl调pH至3.0，12000r/min，离心10min，菌体沉淀80℃烘箱烘干，测干重。取上清，用6mol/L NaOH至上清液，调pH至中性，加3倍体积乙醇沉淀γ-PGA，离心收集γ-PGA絮状沉淀，沉淀80℃烘箱烘干，测干重。根据干重法计算出生产发酵的菌液中γ-PGA的产量(见表2)。
表1
Figure BDA0001648836740000041
Figure BDA0001648836740000051
Figure BDA0001648836740000061
表2
Figure BDA0001648836740000062
Figure BDA0001648836740000071
从表2可看出，在相同的发酵的条件下，采用本发明的地衣芽胞杆菌WX-02/pHY300-phoP的发酵的菌液中γ-PGA产量较对照菌有了大幅提升(提高30％以上)，说明：本发明的技术方案在提高地衣芽胞杆菌γ-PGA产量方面具有重大应用价值。申请人同时做了柠檬酸转运蛋白基因citM的研究，发现无论是缺失还是强化表达都不能提高γ-PGA的产量。
序列表
<110> 湖北大学
<120> 一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的芽胞杆菌的制备方法及应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggaaaaaa caaaaatact gattattgaa gatgatgaag caattgctga tttgctttca 60
tacgggctga cgtccgaagg ctttgaaacg tgcacggtca ataacggttc ttcaggaatg 120
aggaaactag atcagttcaa acctgacctt ctgctcctcg attggatgct gccggactgc 180
agcggattgg atatttgcaa aaaagtgacc gaaagctgta atattccaat actgatgatt 240
accgcaaaat cagatatcac ggataaaata ctggggttgg aattcggggc cgatgactat 300
attacaaagc cgtttgatct gcgcgaagtt gtcgcgagaa tacgcacgat ccttcggcgt 360
ctggaacaag cccatcatgt gaacgaacgg gaaacggaaa aagtggatga gatccggttt 420
aaaaatattg tgatcgttcc gggcgaaaga ctggtgaaaa aagacggggc agccgtcgaa 480
ttaactccta aagaatatga tctgctaatg actttggttg accatcgggg aaaagttttt 540
acccgttcag agcttttgga attcatctgg ggatacgatt ttttcggtga cacccgtaca 600
gtcgataccc atattcaaag actccgcaaa aagcttgatg caagcgactt gattaaaaca 660
gtgttcggca tcggatataa attcgagaag caggaggagc accaccacca ccaccactag 720

Claims (5)

1.一种通过过表达phoP基因高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌的制备方法，包括将phoP基因在地衣芽胞杆菌中强化表达，所述的地衣芽胞杆菌（Bacillus licheniformis）为地衣芽胞杆菌（Bacillus licheniformis）WX-02，所述phoP基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.1所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其步骤包括：
（1）以地衣芽胞杆菌WX-02的基因组DNA为模板，PCR扩增出phoP基因片段；
（2）在phoP基因片段上游连接P43启动子、下游连接淀粉酶终止子，构成完整的phoP表达元件；
（3）采用EcoRI和XbaI限制性内切酶对目的基因片段进行双酶切得到酶切基因片段；
（4）准备质粒pHY300PLK，并采用EcoRI和XbaI限制性内切酶对质粒 pHY300PLK进行双酶切得到线性质粒片段；
（5）将步骤（3）得到的酶切基因片段和步骤（4）得到的线性质粒片段经 T4-DNA连接酶进行连接，经过氯化钙转化法将酶连的产物转入大肠杆菌DH5α中，以氨苄青霉素为抗性筛选标记，并经过菌落PCR得到阳性转化子，经过测序得到游离表达质粒pHY300-phoP；
（6）将游离表达质粒pHY300-phoP电转入地衣芽胞杆菌WX-02中，以四环素抗性作为筛选标记，并经过菌落PCR筛选得到阳性转化子，即得。
3.利用权利要求1所述的方法制备得到的地衣芽胞杆菌在生产聚γ-谷氨酸中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述生产的过程中的发酵培养基配方：包括：30~90g/L葡萄糖或20~60g/L甘油，0~30g/L谷氨酸钠，0~10g/L柠檬酸钠，0~10g/L NaNO3，0~10g/LNH4Cl，0~1g/L K2HPO4·3H2O，0~1g/L MgSO4·7H2O，0~1g/L ZnSO4·7H2O，0~0.15g/LMnSO4·H2O，0~1g/L CaCl2，pH6.5~7.2；
所述的发酵的培养基中，其组分谷氨酸钠，柠檬酸钠， NaNO3，NH4Cl， K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O， ZnSO4·7H2O， MnSO4·H2O和CaCl2中每次只能有一种组分取0。
5.根据权利要求3所述的应用，所述生产的过程中的发酵培养基配方：30~90g/L葡萄糖或20~60g/L甘油，15~30g/L谷氨酸钠，5~10g/L柠檬酸钠，5~10g/L NaNO3，5~10g/L NH4Cl，0.5~1g/L K2HPO4·3H2O，0.5~1g/L MgSO4·7H2O，0.5~1g/L ZnSO4·7H2O，0.075~0.15g/LMnSO4·H2O，0.5~1g/L CaCl2，pH6.5~7.2。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109182240B (zh) * 2018-09-18 2021-06-25 绿康生化股份有限公司 地衣芽孢杆菌DW2ΔphoP在杆菌肽生产中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106497857A (zh) * 2016-11-11 2017-03-15 湖北大学 一株可以高产聚γ‑谷氨酸的地衣芽胞杆菌工程菌
CN106497961A (zh) * 2016-09-14 2017-03-15 湖北大学 一种提高芽胞杆菌生物量的基因工程改造方法
CN107502585A (zh) * 2017-09-06 2017-12-22 武汉骏安生物科技有限公司 一株高效合成聚‑γ‑谷氨酸的地衣芽孢杆菌工程菌

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7364875B2 (en) * 2003-10-30 2008-04-29 Cresent Innovations, Inc. Method for producing medical and commercial grade poly-gamma-glutamic acid of high molecular weight

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106497961A (zh) * 2016-09-14 2017-03-15 湖北大学 一种提高芽胞杆菌生物量的基因工程改造方法
CN106497857A (zh) * 2016-11-11 2017-03-15 湖北大学 一株可以高产聚γ‑谷氨酸的地衣芽胞杆菌工程菌
CN107502585A (zh) * 2017-09-06 2017-12-22 武汉骏安生物科技有限公司 一株高效合成聚‑γ‑谷氨酸的地衣芽孢杆菌工程菌

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