CN110760532B - 一种淀粉分支酶及其基因、含有该基因的工程菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种淀粉分支酶及其基因、含有该基因的工程菌及其应用。本发明提供了的淀粉分支酶基因，该基因全长为1881bp，G+C含量为68.4％，编码626个氨基酸，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，所编码的蛋白质氨基酸序列为：SEQ ID NO.2。利用该基因构建的工程菌株获得的重组淀粉分支酶以土豆淀粉为测活底物，通过碘液检测其比活力为2784U/mg。利用基因生产的淀粉分支酶可用于淀粉改性，包括慢消化淀粉或抗性淀粉的制备、具有凝胶特性优化或者抗老化特性的高分支度改性淀粉的制备以及冷水可溶性淀粉的制备等。

Description

一种淀粉分支酶及其基因、含有该基因的工程菌及其应用

技术领域

本发明属于应用工业微生物领域，公开了一种淀粉分支酶及其基因、含有该基因的工程菌及其在淀粉改性与高分支度淀粉制备方面的应用。

背景技术

淀粉作为地球上含量最为丰富的聚合物之一，淀粉颗粒主要是由直链淀粉和支链淀粉两种高分子有序集合而成，直链淀粉和支链淀粉的含量和结构对淀粉的功能特异性起决定性的影响。目前通过物理、化学或者生物方法改变淀粉的结构，进而改善淀粉的特性，以应用于功能食品制备等领域。淀粉分支酶(1,4-α-glucan branching enzyme；EC2.4.1.18)属于糖苷水解酶家族13(GH13)的一类糖基转移酶，通过分子间的转移反应催化α-1,4-糖苷键的断裂和α-1,6-糖苷键的形成进而在淀粉分子主链上形成新的分支。淀粉分支酶的特性使其在淀粉改性和高分支度淀粉的制备方面具有重要的价值，其中包括高分支糊精、抗性淀粉和糊精、淀粉胶制备、慢消化淀粉制备以及淀粉改性方面的应用等。

基于淀粉分支酶在制备高分支度淀粉产物和淀粉改性方面的应用价值，植物、动物和微生物来源的淀粉分支酶在淀粉改性方面均有报道，比如Thermomonospora curvata来源的糖原分支酶在高分支糊精制备和多分支淀粉合成方面的应用(专利号：201410579597.X；201810116399.8)；Thermuobifidafusca WSH03-11来源的分支酶Tfu_0582在抗性糊精制备中的应用(专利号：201710594597.0)；Rhodothermus obamensis来源的淀粉分支酶在提高淀粉液化产物透明度方面的应用(专利号：201810219838.8)；Geobacillus thermoglucosidans STB02来源的淀粉分支酶在淀粉老化和抗性淀粉制备方面的应用(专利号：201810531948.8)等。目前对于淀粉分支酶改变淀粉的特性主要归因于淀粉分支酶能够提高淀粉中支链淀粉的含量，使淀粉的分支链含量提高。已报道的这类淀粉分支酶所形成的新的分支链的聚合度较低，DP值小于12，淀粉结构中短的分支链的增加被认为与改性淀粉的相关性质直接相关。目前具有重要应用价值的淀粉分支酶主要来源于微生物。然而国内具有自主知识产权的淀粉分支酶较少，已报道的淀粉分支酶的应用受限于其活性和催化特性等，使得性能优良且高活性的淀粉分支酶资源的开发具有重要的价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的淀粉分支酶基因，及其编码的蛋白质。

本发明的另一目的是提供含有该淀粉分支酶基因的基因工程菌。

本发明的又一目的是提供该蛋白及其编码基因的应用。

淀粉分支酶基因，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，该基因全长(从起始密码子到终止密码子)为1881bp，G+C含量为68.4％，编码626个氨基酸。

本发明所述的淀粉分支酶基因编码的淀粉分支酶蛋白质,其氨基酸序列为：SEQID NO.2。

所述的淀粉分支酶最适反应pH为7.0，最适反应温度为40℃，并在20℃-50℃(1h)和pH 7.0-9.0(24h)之间保持活性相对稳定。

含本发明所述淀粉分支酶基因的重组质粒。

所述的重组质粒优选将所述淀粉分支酶基因克隆到pET29a质粒中所得。

含本发明所述的重组质粒的重组微生物。

所述的重组微生物，优选以大肠杆菌为宿主菌。

本发明所述淀粉分支酶基因在淀粉加工、食品或饲料领域的基因工程应用。

本发明所述淀粉分支酶在高分支淀粉制备和/或淀粉改性方面的应用；优选在慢消化淀粉或抗性淀粉的制备、高分支度改性淀粉的制备、淀粉凝胶特性的优化或淀粉抗老化特性的优化中的应用。

与未处理对照相比，淀粉分支酶在40℃条件处理土豆淀粉10分钟时，酶处理土豆淀粉中直链淀粉的相对含量下降为对照的74％，此时改性淀粉中高聚合度分支链的含量显著升高(聚合度DP>25)；当反应时间延长至30分钟时，酶处理土豆淀粉中直链淀粉的相对含量下降为对照的17％时，此时改性淀粉中低聚合度分支链的含量显著升高(聚合度DP<7)。

本发明所述淀粉分支酶作为酶制剂在淀粉加工、食品或饲料领域的生产应用。

有益效果

1.本发明以保藏号为CCTCC NO：M2012316的Aquabacterium sp.A7-Y为材料，参考基因组序列信息并结合PCR扩增，成功获得淀粉分支酶基因序列。该基因全长(从起始密码子到终止密码子)为1881bp，G+C含量为68.4％，编码626个氨基酸，不含信号肽。

2.该淀粉分支酶基因表达的产物，通过碘液方法对淀粉分支酶进行酶活性测定，该淀粉分支酶能高效的作用于可溶性淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉和支链淀粉，在以土豆淀粉为底物时的比活力高达2784U/mg。

3.所获得的重组淀粉分支酶在淀粉改性方面表现出较高的催化效率和特殊的催化特性，所制备的高分支度淀粉除了低聚合度分支链含量提高之外(聚合度DP<7)，还能增加高聚合度的分支链含量(聚合度DP>25)，表现出较广的分支链分布特性。两种不同特性的改性淀粉均表现出抗老化特性，且与抗性淀粉和慢消化淀粉含量的提高以及淀粉凝胶特性的改变直接相关。

附图说明

图1淀粉分支酶编码基因的PCR扩增电泳图

1：核酸Marker；2：淀粉分支酶基因PCR扩增

图2淀粉分支酶基因克隆与表达的示意图

图3重组淀粉分支酶的SDS-PAGE电泳图

M:标准蛋白Marker；1：重组蛋白破碎粗酶液；2：重组淀粉分支酶纯化蛋白

图4淀粉分支酶酶学性质

a：淀粉分支酶最适温度；b：温度稳定性；c：淀粉分支酶最适pH；d：pH稳定性

图5淀粉分支酶制备的改性淀粉凝胶特性分析

图6淀粉分支酶制备的冷水可溶性淀粉的溶解度和透明度分析

生物材料保藏信息

Aquabacterium sp.A7-Y，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，武汉大学，保藏日期为2012年8月27日，保藏号为CCTCC NO：M2012316。

具体实施方式

实施例1淀粉分支酶的表达纯化与活性测定

1.1淀粉分支酶基因的PCR扩增

参考Aquabacterium sp.strain A7-Y基因组序列并结合NCBI基因组信息进行ORF预测，以全长序列设计淀粉分支酶基因引物，以A7-Y菌(CCTCC NO：M2012316)的基因组DNA为模板，进行淀粉分支酶基因全长的PCR扩增，得到淀粉分支酶基因的全长序列。该基因全长(从起始密码子到终止密码子)为1881bp，G+C含量为68.4％，基因序列为SEQ ID NO.1，编码626个氨基酸，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。所用引物为F和R，结果见图1。具体过程参照图2。

F：GGGAATTCCATATGGTGCTGAGCGATCACGACA(Nde I)(SEQ ID NO.3)

R：CCGGAATTCTTAATGATGATGATGATGATGGGCATCGGCTTCGGGTT-3(EcoR I)(SEQ IDNO.4)1.2E.coli BL21(DE3)电转感受态的制备

从-80℃冰箱中取菌种E.coli BL21(DE3)划线于新鲜的LB平板上，培养过夜，挑取直径约2mm菌落接入没有添加Mg²⁺的SOB试管，37℃培养至OD600到达1.0后，以1/100的接种量接入装有100ml SOB培养基的0.5L摇瓶，18℃，220rpm培养至OD600到达0.7～0.8之间；将摇瓶置于冰浴中，冷却10min之后，4℃4000rpm离心5min收集菌体沉淀；等体积的灭菌超纯水重悬、洗涤菌体后，4℃4000rpm离心5min收集菌体沉淀；重复洗涤一次；100ml 10％甘油重悬菌体，4℃4000rpm离心5min收集菌体沉淀；重复洗涤一次；小心弃上清，倒置离心瓶于灭菌吸水纸上沥干约1min。每1000ml培养物用2ml 10％甘油小心重悬，每管100μl分装于离心管后迅速放入-80℃冰箱保存备用。

1.3酶连转化

体系如下：

将体系放置于16℃水浴锅中过夜反应。将酶连产物直接转化到E.coli BL21(DE3)中后，涂布含有50mg/L卡那霉素的LB平板，挑取单菌落经测序验证基因序列无误后保存于终浓度为15％甘油的-80℃低温冰箱中。

1.4重组表达的淀粉分支酶活性测定

1.3中经测序后接单菌至LB培养基中37℃培养至0D_600nm在0.5-0.6之间，加IPTG至浓度0.2mM，18℃继续培养24h。收集菌体用Tris-HCl(pH7.0)重悬后，用超声处理破碎菌体细胞，20000g离心15min，所得上清即为淀粉分支酶粗酶液。酶活测定方法为：取100μL稀释酶液加入900μL的土豆淀粉溶液中(0.5％,w/w，50mM Tris-HCl buffer(pH 7.0))，40℃反应10min，沸水浴终止反应，添加5mL碘液和终浓度约为3.8μmol的盐酸溶液，室温静置20min后660nm或者530nm测定吸光值，一个活力单位定义为在660nm处每分钟下降1％所需要的酶量。通过Ni-NTΑ亲和层析纯化并经超滤浓缩后测得该重组淀粉分支酶在以土豆淀粉为底物时的比活力为2784U/mg(图3)。生产的酶制剂可用于淀粉加工、食品工业、酿造、发酵、纺织工业和医药等工业。

实施例2.淀粉分支酶AqGBE酶学特性研究

3.1温度对酶活力的影响

最适反应温度的测定：在不同温度(20℃、30℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、70℃)，pH7.0的条件下测定重组酶的活性，将最高酶活力设定为100％(图4a)。热稳定性的测定：将重组酶在20℃、30℃、40℃、45℃、50℃、60℃、70℃，pH7.0下保温1h，于冰上迅速冷却，各自测定残余酶活力，以未保温的酶活力为100％(图4b)。经测定该淀粉分支酶最适反应温度为40℃，并在20℃-50℃之间保持相对稳定。

3.2pH对酶活力的影响

最适反应pH的测定：在不同pH值(3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0),50℃下测定重组淀粉分支酶的活性，将最高活力设定为100％(图4c)。pH稳定性的测定：将重组淀粉分支酶在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0下，4℃保持24h，后各自测定其残余活力，以pH7.0的酶活力为100％(图4d)。经测定该淀粉分支酶最适反应pH为7.0，并在pH7.0-10.0保持相对稳定。

3.3淀粉分支酶底物特异性

以可溶性淀粉，土豆淀粉，玉米淀粉，支链淀粉，直链淀粉和糖原等为底物，对表达的淀粉分支酶进行底物特异性分析(如表1)，结果发现淀粉分支酶对所测底物均具有活性，其中以支链淀粉和土豆淀粉为底物时活性最高。以土豆淀粉为测活底物，通过碘液检测淀粉分支酶的活性，酶活单位定义为每分钟OD660值下降1％为一个活力单位，在以土豆淀粉为底物时测得该淀粉分支酶AqGBE的比活力为2784U/mg。

表1重组淀粉分支酶AqGBE的底物特异性分析

实施例3.利用淀粉分支酶AqGBE制备多分支改性淀粉

制备10％的土豆淀粉沸水浴30min充分糊化，冷却后以500U/kg淀粉的添加量添加淀粉分支酶AqGBE，40℃条件反应10min和30min，沸水浴终止反应。所制备的酶处理淀粉接着添加异淀粉酶(1U/mg淀粉)40℃条件下24小时进行脱支反应，沸水浴终止反应。利用高效阴离子交换色谱法(ICS-5000,DIONEX,USA)进行分支链的聚合度分析。结果表明10min处理淀粉高聚合度分支链含量增加(DP>25)，30min处理淀粉低聚合度分支链含量增加(DP<7)(表2)。结果说明淀粉分支酶AqGBE作用于淀粉产生高聚合度和低聚合度两类不同类型的高分支度改性淀粉。

表2淀粉分支酶AqGBE处理土豆淀粉分支链的聚合度分析

实施例4.利用淀粉分支酶AqGBE制备的改性淀粉的抗老化性质分析

利用实施例3中制备的淀粉分支酶处理10mim和30min的土豆淀粉，在4℃条件下存储7天，利用差示扫描量热法(DSC823e,Mettler Toledo,Switzerland)对不同聚合度的改性淀粉的焓变进行分析，以判断淀粉分支酶的处理对淀粉老化性质的影响。结果如表3所示，与对照的焓值(ΔH)11.57J/g相比，本发明淀粉分支酶处理10mim制备的淀粉的焓值(ΔH)为8.09J/g，本发明淀粉分支酶处理30mim制备的淀粉的焓值(ΔH)为6.11J/g。结果说明淀粉分支酶AqGBE作用于淀粉产生高聚合度和低聚合度两类不同类型的高分支度淀粉，均表现出明显的抗老化性质。

表3 DSC分析粉分支酶AqGBE制备的改性淀粉的老化特性

To:起始温度；Tp:峰值温度；Tc:终止温度.

实施例5.淀粉分支酶在提高营养淀粉含量方面的应用分析

利用实施例3中制备的淀粉分支酶处理10mim和30min的改性土豆淀粉，4℃冷藏24h，而后加入2900U的猪胰酶，37℃处理10h，水解释放出的麦芽糖的量利用DNS法测定。吸光度与麦芽糖标准品浓度做出标曲，得出麦芽糖的质量。评估淀粉分支酶AqGBE对于慢消化淀粉与抗性淀粉生产中的潜在价值。

测定公式为：RDS％＝(A-B/C)×100；SDS％＝(D-A/C)×0.9；RS％＝(C-D/C)×0.9

式中：A：1h释放的葡萄糖的质量；B：0h释放的葡萄糖的质量；C：样品质量；D：10h释放的葡萄糖的质量。

结果表明粉分支酶AqGBE作用于淀粉产生高聚合度和低聚合度两类不同类型的高分支度淀粉中营养淀粉的含量均有所提高，其中高聚合度分支淀粉中慢消化淀粉含量提高了46.7％(处理10min)，抗性淀粉的含量提高了27.9％；低聚合度分支淀粉中慢消化淀粉含量提高了28.7％(10min)，抗性淀粉的含量提高了34.3％(表4)。

表4淀粉分支酶AqGBE制备的改性淀粉中营养淀粉的含量变化分析

实施例6.淀粉分支酶改变淀粉凝胶特性和水溶性方面的应用分析

参照实施例3中制备的淀粉分支酶处理10mim和30min的土豆淀粉，4℃冷藏不同的时间，间隔时间测定620nm下的吸光度以判断其透明度。同时对存储的淀粉凝胶特性进行测定，以判断淀粉分支酶AqGBE作用于淀粉后对其凝胶特性的改变。凝胶特性分析特性研究表明(图5)，与对照相比，AqGBE作用于土豆淀粉后起始阶段能够显著提高改性淀粉的凝胶特性，稳定性提高，随着酶的进一步处理，分支度提高，粘度显著下降。另外，AqGBE充分处理土豆淀粉得到分支度提高的改性淀粉，发现该淀粉冷水(室温)可溶，冷水溶解度高达85％。该冷水可溶淀粉浆液室温下存储不凝冻，具有很好的流动性，稳定性提高，透明度好(图6)。

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 一种淀粉分支酶及其基因、含有该基因的工程菌及其应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1881

<212> DNA

<213> 水杆菌属(Aquabacterium sp.A7-Y)

<400> 1

gtgctgagcg atcacgacat ctacctgttc cgggaaggaa cccacggccg cctctacgac 60

gccctcgggg cccaccttgc cgacgacggc cggagcgccg gtttcgcggt ctgggctccg 120

aacgccgaag cggtgagcgt catcggcgac tggaacggct ggaacgacca ggcccatcgc 180

ctggagccgc gcccggatgg cagcggcatc tgggaaggtt cggtcagcgg accgcagcgc 240

ggtcacgcct acaagtaccg catccgctca cgccacggcg gcgaactgct tgacaaggcc 300

gaccccttcg cctggtatgc cgagctgccg ccggccaccg gctcgcggct gtgggacctg 360

gcctacgagt ggcaggacca ggaatggatg gcgacacgcg ccggcaagaa cgccctcgat 420

gcccccatgt cgatctacga ggtgcacccg ggctcctggc ggcgccgcga cggcgagttc 480

ctgccgtggc gggagctggc gcacgcgctg gccgactacg tgctggagat gggcttcacg 540

cacgtcgagc tgatgccggt caccgagcac cccttctacg gctcctgggg ctaccagacc 600

accggctact tcgcgcccac cgcgcgctac ggcacgccgc aggacttcat gtacttcgtc 660

gaccacctgc acggccgcgg cattggcgtg atcctcgact gggtgccctc gcacttcccg 720

tccgacgcgc atggactggc gcgcttcgac ggcacctatc tctacgagca cgccgacccc 780

cgccagggtt tccaccccga gtggaactcc agcatcttca actacggccg caacgaggtg 840

cgcagcttcc tgacctcctc ggcgctgttc tggctcgaca agtaccacct cgacgggctg 900

cgcgtcgatg cggtggcctc catgctctac ctggactacg cgcgcaagga cggcgagtgg 960

attcccaatc gccacggcgg caaggagaac ctggaagcga tcgagtttct gcgccgcatg 1020

aacgaggcgg tctaccgcga ccacccggac gtggtgacca tcgccgagga atcgaccgcc 1080

tggcccatgg tctcacggcc gacctatctc ggcggcctgg gcttcggcat gaagtggaac 1140

atgggctgga tgcacgatac cctggcctac ctgaaggaag acccggtcca ccgcaagtac 1200

caccacggca agctgacctt ctcgatggtc tatgccttca acgagaactt cgtgctgccg 1260

ctctcgcacg acgaggtggt gcacggcaag ggctcgctgg tgaacaagat gccgggcgac 1320

acctggcagc agttcgccaa cctgcgcgcg atgtacggct acatgtgggc ccacccgggc 1380

aagaagctgc ttttcatggg cggcgagttc ggccagcggc gcgaatggac ccatgacggc 1440

gagctcgaat ggtgggtcac gcagaccagc caccacgcag gtgtgcagcg tttcgtgaag 1500

gacctcaacg cgctttaccg gcgtgagccg gcgctgcacg aggtcgactt cgcccacccc 1560

ggcttcgaat ggatcgaggg caacgacgcc gagcacagcg tgttcgcctt cctgcgcaag 1620

ccggccgacg gcggtgcgcc gctgctggtg gtctgcaacc tcacgccgct gccccgcacc 1680

aattacctgc tcggtgttcc ggtggccggc cgttggagcg agctcatcaa cagcgacgcg 1740

caggactacg gcggctccgg ctggggcaac ctcggcggcg tcgaggcggc cccgctgccc 1800

tcgcacggcc agctgcaggc cctgagcctg acgctgccgc ccctggccac cctcatcctg 1860

aaacccgaag ccgatgccta a 1881

<210> 2

<211> 626

<212> PRT

<213> 水杆菌属(Aquabacterium sp.A7-Y)

<400> 2

Met Leu Ser Asp His Asp Ile Tyr Leu Phe Arg Glu Gly Thr His Gly

1 5 10 15

Arg Leu Tyr Asp Ala Leu Gly Ala His Leu Ala Asp Asp Gly Arg Ser

20 25 30

Ala Gly Phe Ala Val Trp Ala Pro Asn Ala Glu Ala Val Ser Val Ile

35 40 45

Gly Asp Trp Asn Gly Trp Asn Asp Gln Ala His Arg Leu Glu Pro Arg

50 55 60

Pro Asp Gly Ser Gly Ile Trp Glu Gly Ser Val Ser Gly Pro Gln Arg

65 70 75 80

Gly His Ala Tyr Lys Tyr Arg Ile Arg Ser Arg His Gly Gly Glu Leu

85 90 95

Leu Asp Lys Ala Asp Pro Phe Ala Trp Tyr Ala Glu Leu Pro Pro Ala

100 105 110

Thr Gly Ser Arg Leu Trp Asp Leu Ala Tyr Glu Trp Gln Asp Gln Glu

115 120 125

Trp Met Ala Thr Arg Ala Gly Lys Asn Ala Leu Asp Ala Pro Met Ser

130 135 140

Ile Tyr Glu Val His Pro Gly Ser Trp Arg Arg Arg Asp Gly Glu Phe

145 150 155 160

Leu Pro Trp Arg Glu Leu Ala His Ala Leu Ala Asp Tyr Val Leu Glu

165 170 175

Met Gly Phe Thr His Val Glu Leu Met Pro Val Thr Glu His Pro Phe

180 185 190

Tyr Gly Ser Trp Gly Tyr Gln Thr Thr Gly Tyr Phe Ala Pro Thr Ala

195 200 205

Arg Tyr Gly Thr Pro Gln Asp Phe Met Tyr Phe Val Asp His Leu His

210 215 220

Gly Arg Gly Ile Gly Val Ile Leu Asp Trp Val Pro Ser His Phe Pro

225 230 235 240

Ser Asp Ala His Gly Leu Ala Arg Phe Asp Gly Thr Tyr Leu Tyr Glu

245 250 255

His Ala Asp Pro Arg Gln Gly Phe His Pro Glu Trp Asn Ser Ser Ile

260 265 270

Phe Asn Tyr Gly Arg Asn Glu Val Arg Ser Phe Leu Thr Ser Ser Ala

275 280 285

Leu Phe Trp Leu Asp Lys Tyr His Leu Asp Gly Leu Arg Val Asp Ala

290 295 300

Val Ala Ser Met Leu Tyr Leu Asp Tyr Ala Arg Lys Asp Gly Glu Trp

305 310 315 320

Ile Pro Asn Arg His Gly Gly Lys Glu Asn Leu Glu Ala Ile Glu Phe

325 330 335

Leu Arg Arg Met Asn Glu Ala Val Tyr Arg Asp His Pro Asp Val Val

340 345 350

Thr Ile Ala Glu Glu Ser Thr Ala Trp Pro Met Val Ser Arg Pro Thr

355 360 365

Tyr Leu Gly Gly Leu Gly Phe Gly Met Lys Trp Asn Met Gly Trp Met

370 375 380

His Asp Thr Leu Ala Tyr Leu Lys Glu Asp Pro Val His Arg Lys Tyr

385 390 395 400

His His Gly Lys Leu Thr Phe Ser Met Val Tyr Ala Phe Asn Glu Asn

405 410 415

Phe Val Leu Pro Leu Ser His Asp Glu Val Val His Gly Lys Gly Ser

420 425 430

Leu Val Asn Lys Met Pro Gly Asp Thr Trp Gln Gln Phe Ala Asn Leu

435 440 445

Arg Ala Met Tyr Gly Tyr Met Trp Ala His Pro Gly Lys Lys Leu Leu

450 455 460

Phe Met Gly Gly Glu Phe Gly Gln Arg Arg Glu Trp Thr His Asp Gly

465 470 475 480

Glu Leu Glu Trp Trp Val Thr Gln Thr Ser His His Ala Gly Val Gln

485 490 495

Arg Phe Val Lys Asp Leu Asn Ala Leu Tyr Arg Arg Glu Pro Ala Leu

500 505 510

His Glu Val Asp Phe Ala His Pro Gly Phe Glu Trp Ile Glu Gly Asn

515 520 525

Asp Ala Glu His Ser Val Phe Ala Phe Leu Arg Lys Pro Ala Asp Gly

530 535 540

Gly Ala Pro Leu Leu Val Val Cys Asn Leu Thr Pro Leu Pro Arg Thr

545 550 555 560

Asn Tyr Leu Leu Gly Val Pro Val Ala Gly Arg Trp Ser Glu Leu Ile

565 570 575

Asn Ser Asp Ala Gln Asp Tyr Gly Gly Ser Gly Trp Gly Asn Leu Gly

580 585 590

Gly Val Glu Ala Ala Pro Leu Pro Ser His Gly Gln Leu Gln Ala Leu

595 600 605

Ser Leu Thr Leu Pro Pro Leu Ala Thr Leu Ile Leu Lys Pro Glu Ala

610 615 620

Asp Ala

625

<210> 3

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gggaattcca tatggtgctg agcgatcacg aca 33

<210> 4

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ccggaattct taatgatgat gatgatgatg ggcatcggct tcgggtt 47

Claims (1)

1.SEQ ID NO.2所示的淀粉分支酶在作用于淀粉产生高聚合度和低聚合度两类不同类型的高分支度改性淀粉的应用，所述的高聚合度为DP >25，所述的低聚合度为DP＜7。

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