SE513209C2 - Förfarande för produktion av transgena potatisar med ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelse - Google Patents
Förfarande för produktion av transgena potatisar med ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelseInfo
- Publication number
- SE513209C2 SE513209C2 SE9601506A SE9601506A SE513209C2 SE 513209 C2 SE513209 C2 SE 513209C2 SE 9601506 A SE9601506 A SE 9601506A SE 9601506 A SE9601506 A SE 9601506A SE 513209 C2 SE513209 C2 SE 513209C2
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- starch
- potatoes
- vector
- potato
- enzyme
- Prior art date
Links
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 title claims abstract description 40
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 title claims abstract description 35
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 title claims abstract description 28
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 title claims abstract description 28
- 239000008107 starch Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 title claims abstract description 23
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 title claims 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 108090000344 1,4-alpha-Glucan Branching Enzyme Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000003925 1,4-alpha-Glucan Branching Enzyme Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 claims description 18
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 14
- 108010031092 starch-branching enzyme II Proteins 0.000 claims description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 13
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 5
- 101710124145 1,4-alpha-glucan-branching enzyme 1, chloroplastic/amyloplastic Proteins 0.000 claims description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 3
- 108010039811 Starch synthase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims description 2
- 238000007323 disproportionation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010023236 starch synthase II Proteins 0.000 claims description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 7
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVYLLZQTGLZFBW-ZBFHGGJFSA-N (R,R)-tramadol Chemical compound COC1=CC=CC([C@]2(O)[C@H](CCCC2)CN(C)C)=C1 TVYLLZQTGLZFBW-ZBFHGGJFSA-N 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 101100129922 Caenorhabditis elegans pig-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 101100520057 Drosophila melanogaster Pig1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 101710091688 Patatin Proteins 0.000 description 1
- 101710177361 Soluble starch synthase 1, chloroplastic/amyloplastic Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940075933 dithionate Drugs 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 108010004047 granule-bound starch synthase I Proteins 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12N9/107—1,4-Alpha-glucan branching enzyme (2.4.1.18)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/8245—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified carbohydrate or sugar alcohol metabolism, e.g. starch biosynthesis
Description
25 30 35 513 209 av förgrening av amylopektin i transgena växter, t ex potatis.
I WO95/14827 beskrivs plasmider som har DNA-sekven- ser som efter insättning i genomet i växterna förorsakar förändringar av kolhydratkoncentrationen och kolhydrat- sammansättningen i regenererade växter. Dessa föränd- ringar kan erhållas från en sekvens av ett förgrenings- enzym som är beläget på dessa plasmider. Detta förgre- ningsenzym föreslås förändra amylos/amylopektinförhàl- landet i stärkelse hos växter, särskilt i kommersiellt använda växter.
WO92/14827 beskriver det hittills enda kända stärk- elseförgreningsenzymet i potatis och inom tekniken är det inte känt om andra stärkelseförgreningsenzym är inbegrip- na i syntesen av förgrenad stärkelse i potatis.
I Mol Gen Genet (1991) 225:289-296, beskrivs inhibering av expression av genen för Visser et al, granulbundet stärkelsesyntas i potatis med Inhibering av enzymet i i vilket fall antisenskonstruktioner. potatisknölstärkelse var upp till 100%, amylosfri stärkelse erhölls.
Emellertid har de tidigare kända metoderna för inhi- bering av amylopektin inte varit framgångsrika och därför är alternativa metoder för inhibering av amylopektin fortfarande i hög grad önskvärda (Müller-Röber och Koßmann, 1994; Martin och Smith, 1995). Ändamålet med föreliggande uppfinning är att möjlig- göra förändring av graden av amylopektinförgrening och amylopektin/amylosförhållandet i potatisstärkelse.
Enligt föreliggande uppfinning uppnås detta ändamål genom att använda en DNA-sekvens som kodar för ett andra stärkelseförgreningsenzym, SBE II, vilket efter insättning i växternas genom förorsakar förändringar av nämnda förgreningsgrad och förhållande i regenererade växter.
Inom föreliggande uppfinnings omfång beskrivs också aminosyrasekvensen av SBE II och varianter av ovanstående 10 l5 20 25 30 35 513 209 DNA-sekvens som är resultatet av den genetiska kodens degeneration.
Vidare beskrivs en vektor som omfattar nämnda DNA-sekvens och reglerelement som är aktiva i potatis.
Enligt uppfinningen àstadkommes ett förfarande för framställning av transgena potatisar med en reducerad grad av förgrening av amylopektinstärkelse, omfattande följande steg: i a) överföring och införlivande av en vektor enligt uppfinningen i genomet i en potatiscell och b) regenerering av intakta, hela plantor från de transformerade cellerna. A Slutligen àstadkommer uppfinningen användning av nämnda transgena potatisar för produktion av stärkelse.
Uppfinningen kommer att beskrivas mer i detalj nedan i förbindelse med en experimentell del och åtföljande ritningar, vari , Pig 1 visar SDS-polyakrylamidelektrofores av pro- teiner extraherade fràn stärkelse fràn normal potatis (spår A) och transgen potatis (spår B). Utskurna protein- band är markerade med pilar; Spàr M: molekylviktsmarkör- (kDa).
Fig 2 visar fyra peptidsekvenser härledda fràn proteiner spjälkade proteiner från potatisknölstärkelse.
Fig 3 visar en CDNA-sekvens sáväl som aminosyrasek- vensen i enbokstavskod av det nya stärkelseförgreningsen- zymet II enligt föreliggande uppfinning, omfattande 3074 nukleotider respektive 878 aminosyror.
EXPERIMENTELL DEL É Isolering av stärkelse från potatisknölar Potatisplantor (Solanum tuberosum) odlades pà fält.
Skalade knölar fràn antingen cv. Early Puritan eller fràn en transgen potatislinje som i huvudsak saknar granulbun- det stärkelsesyntas I (Svalöf Weibull AB, internationella patentansökan PCT/SE91/O089å), homogeniserades vid 4°C i en fruktpress. Till "saftfraktionen", som innehöll en stor fraktion av stärkelsen; sattes omedelbart Tris-HCl, 10 15 20 25 30 35 513 209 till 50 mM, Na-ditionat till 30 mM och etylendi- (EDTA) till 10 mM, Stärkelsegranu- pH 7,5, nitrilotetraättiksyra lerna fick sedimentera i 30 min och tvättades 4x med 10 bäddvolymer tvättbuffert (50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 10 mM EDTA). Stärkelsen som lämnades på bänken vid +4°C i 30 min för att sedimentera mellan varje tvättning, tvät- tades slutligen med 3 x 3 båddvolymer aceton, lufttorka- des över natten och lagrades vid -20°C.
Extraktion av proteiner från knölstärkelse (20 g) blandades kontinuerligt med 200 ml extraktionsbuffert (50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 2% (vikt/vol) 5 mM EDTA) genom aspiration med en pipett vid 85°C tills stärkelsen var Lagrad stärkelse natriumdodecylsulfat (SDS), gelatiniserad. Proverna frystes därefter vid -70°C i 1 h.
Efter upptining vid 50°C centrifugerades proverna i 20 min vid l2000xg vid lO°C. och àtercentrifugerades vid 3000xg i 15 min. De slutliga Supernatanterna uppsamlades supernatanterna filtrerades genom 0,45 um filter och 2,25 volymer iskall aceton tillsattes. Efter 30 min inkubation vid 4°C uppsamlades proteinfällningarna genom centrifuge- ring (3000xg i 30 min vid 4°C) och löstes i 50 mM Tris-HCl, pH 7,5. rades med SDS-polyakrylamidgelelektrofores enligt Laemmli (1970) (fig 1). beredningarna koncentrerades genom utfällning med tri- En alikvot av varje beredning analyse- Proteinerna i de återstående delarna av (10%) och proteinerna separerades på en 8% (1970). färgades med Coomassie Brilliant Blue R-250 79,5% E30).
Spjälkning i gel och sekvenering av peptider kloràttiksyra Proteinerna i gelen (O,2% i 20% SDS-polyakrylamidgel Laemmli metanol, 0,5% ättiksyra, De färgade banden som markerats med pilar i fig 1, motsvarande en skenbar molekylvikt av 100 kDa, skars ut och tvättades två gånger med 0,2 M NHJKKg i 50% aceto- nitril under kontinuerlig omröring vid 35°C i 20 min.
Efter varje tvättning avlägsnades vätskan och gelbitarna fick torka genom indunstning i ett dragskåp. De fullstän- digt torkade gelbitarna placerades därefter separat på 10 l5 20 25 30 35 513 2095 parafilm och 2 pl 0,2 M NH¿Ig, 0,02% Tween-20 tillsattes.
Modifierat trypsin (Promega, Madison, WI, USA) (0,25 pg i 2 pl) sögs in i gelbitarna, varefter 0,2 M NH;CO3tillsat- tes i 5 pl portioner tills de hade àtertagit sina ur- sprungliga storlekar. Gelbitarna delades ytterligare i tre bitar och överfördes till ett Eppendorf-rör. 0,2 M IULCO3 (200 pl) tillsattes och proteinerna i gelbitarna spjälkades över natten vid 37°C (Rosenfeld et al 1992).
Efter avslutad spjälkning tillsattes trifluorättiksyra till 1% och supernatanterna avlägsnades och sparades.
Gelbitarna extraherades vidare tvà gånger med 60% aceto- nitril, 0,l% trifluorättiksyra (200 pl) under kontinuer- lig skakning vid 37°C i 20 min. De tvà supernatanterna fràn dessa extraktioner kombinerades med den första supernatanten. Gelbitarna tvättades slutligen med 60% acetonitril, 0,l% trifluorättiksyra, 0,02% Tween-20 (200 pl). andra supernatanterna och volymen reducerades till 50 pl Även dessa supernatanter kombinerades med de genom indunstning. De extraherade peptiderna separerades pà ett SMART® kromatografisystem (Pharmacia, Uppsala, Sverige) försett med en pRPC C2/C18 SC2.l/10 kolonn. Pep- tider eluerades med en gradient av 0-60% acetonitril i vatten/0,l% trifluorättiksyra över 60 min med en flödes- hastighet av 100 pl/min. Peptiderna sekvenerades antingen pà en Applied Biosystems 470A gasfassekvenator med en on line PTH-aminosyraanalysapparat (120A) eller pà en modell 476A enligt instruktionernaïfràn tillverkaren (Applied cA, USA) .
Fyra av de sekvenerade'peptiderna gav lätt tolkbara Biosystems, Foster City, sekvenser (fig 2). En databassökning avslöjade att dessa fyra peptider uppvisade likhet med stärkelseförgrenings- enzymer och det var intressant att notera att peptiderna var mer besläktade med stärkelseförgreningsenzym II från andra växtarter än med stärkelseförgreningsenzym I fràn potatis. lO 15 20 25 30 35 513 209 Konstruktion av oligonukleotider som kodar för peptiderna 1 och 2 Degenererade oligonukleotider som kodar för peptid 1 och peptid 2 syntetiserades sàsom framàtriktade respek- tive omvända primersekvenser: Oligonukleotid 1: 5'-gtaaaacgacggccagt-TTYGGNGTNTGGGARATHTT-3' (resterna 1-8 i peptid 1) Oligonukleotid 2: 5'-aattaaccctcactaaaggg-CKRTCRAAYTCYTGIARNCC-3' (resterna 2-8 i peptid 2, omvänd sträng) vari H är A, C eller T, K är G eller T; N är A, C, G eller T; R är A eller G; Y är C eller T; baser med I är inosin; smà bokstäver tillades som märkningssekvenser.
Rening av mRNA från potatisknöl, syntes av CDNA och PCR- -amplifiering av ett cDNA-fragment motsvarande potatis- stärkelseförgreningsenzym II Totalt RNA från mogna potatisknölar (S. tuberosum cv. Amanda) isolerades sàsom beskrivits (Logemann et al 1987). Första strängens CDNA syntetiserades med använd- ning av 2 pg totalt RNA och 60 pmol oligo-dTm som ned- ströms primersekvenser. Primersekvensen hybridiserades till polyA i mRNA vid 60°C i 5 min. Förlängningen av cDNA genomfördes enligt den tekniska manualen fràn tillverka- ren med användning av Riboclone® CDNA Synthesis System M-MLV (H-) CDNA som kodar för det nya stärkelseförgreningsen- (Promega). zymet II enligt uppfinningen amplifierades i en Perkin- -Elmer GeneAmp® 9600 PCR thermocycler (Perkin-Elmer Cetus Instruments, CT, USA) med användning av tvà degenererade primersekvenser konstruerade fràn peptiderna 1 och 2 (se l mM dNTP, dera primersekvensen och en alikvot av cDNA beskrivet ovan) under följande betingelser: 1 uM av var- 10 15 20 25 30 35 513 209 ovan i en total reaktionsvolym av 20 ul med 1x AmpliTaq® buffert och 0,8 enheter AmpliTaq® (Perkin-Elmer Cetus). 96°C i 1 min, 80°C medan (ungefär 15 min), Cykliseringsbetingelserna var: enzymet tillsattes som en "hotstart" ett oavsiktligt fall till 25°C, 5 cykler vid 94°C i 20 s, 45°C i 1 min, höjning till 72°C under 1 min och bibehål- lande vid 72°C i 2 min, och 30 cykler av 94°C i 5 s, 45°C i 30 s och 72°C i (2 min + 2 s per cykel) och komplette- rat med 72°C i io min före kylning :iii 4°c.
Ett prov av denna reaktion (0,1 pl) omamplifierades med användning av cykliserihgsbetingelserna: 96°C i 1 min, 80°C medan enzymet tillsattes som en "hotstart" (ungefär 5 min), 5 cykler av 94°C i 20 s, 45°C i 1 min och 72°C i 2 min, och 25 cykler av 94°C i 5 s, 45°C i 30 s och 72°C i 10 min före kylning till 4°C. Efter avslutad PCR-ampli- fiering satsades reaktionsblandningen pä en 1,5% Seakem® agarosgel (FMC Bioproducts, Rockland, ME, USA). Efter elektrofores och färgning med etidiumbromid skars ett (2 min + 2 s per cykel) och avslutad med 72°C i huvudband ut med en synbar storlek av 1500 bp och frag- mentet eluerades genom skakning i vatten (200 pl) i 1 h.
Detta fragment användes som mall i sekveneringsreaktioner efter omamplifiering med användning av primersekvenser motsvarande märkningssekvenserna (i oligonukleotiderna 1 och 2), rening med agarosgelelektrofores som ovan och extraktion fràn gelen med användning av Qiaex® gelext- raktionssats enligt tillverkarens instruktioner (DIAGEN GmbH, Hilden, Tyskland). Sekveneringsreaktionerna gjordes med användning av DyeDeoxy®íTerminator Cycle Sequencing kits (Perker-Elmer Cetus Instruments) med användning av märkningssekvenser och interna primersekvenser. Sekvene- ringsreaktionen analyserades pà en Applied Biosystems 373A DNA-sekvenerare enligt;tillverkarens protokoll. Sek- vensen redigerades och omfaštade 1393 bp. För att avsluta bestämningen av sekvensen av stärkelseförgreningsenzym II amplifierades 5'- och 3'-ändarna av fulllängds-CDNA från samma totala RNA som ovan med användning av snabb ampli- 10 15 20 25 30 35 513 209 fiering av cDNA-ändar, RACE, en metodologi med specifika primersekvenser fràn den 1393 bp lànga sekvensen. I amplifieringen av 3'-änden användes en oligo T”G-primer- sekvens mot poly A-svansen och i 5'-änden användes 5'/3' RACE-satsen fràn Boehringer Mannheim (katalognr 1734792).
Fragmenten från dessa amplifieringar sekvenerades pà samma sätt som ovan med användning av interna och änd- ställda primersekvenser. Sekvenserna fràn de tvä ändarna radades upp tillsammans med de 1393 basparen för att ge en sammansatt fullängds-cDNA-sekvens. Primersekvenser konstruerades fràn denna sekvens för att amplifiera hela den kodande regionen i en del. Partiell sekvenering av det amplifierade kodande CDNA bekräftade närvaron av ett cDNA motsvarande den sammansatta sekvensen. Fullängds- -cDNA är 3074 bp och den translaterade sekvensen omfattar 878 aminosyror (fig 3). Det mogna proteinet omfattar 830 aminosyror.
Jämförelser av konsensussekvensen med EMBL- och GenBank-databaserna visade 68% identitet med potatis- stärkelseförgreningsenzym I och ca 80% identitet med stärkelseförgreningsenzym II fràn andra växtarter. Före- liggande uppfinnare betecknar därför enzymet som kodas av den nya förgreningsenzymsekvensen för potatisstärkelse- förgreningsenzym II ("potato starch branching enzyme II").
Transformation av potatisplantor Det isolerade fullängds-CDNA fràn potatisstärkelse- förgreningsenzym II och andra funktionellt aktiva frag- ment i området 50-3074 bp klonas i omvänd orientering efter promotorer som är aktiva i potatisknölar. Med ut- trycket "funktionellt aktiva" menas fragment som kommer att påverka amylos/amylopektinförhàllandet i potatis- stärkelse. DNA- och aminosyrasekvensen av SBE II enligt uppfinningen visas i fig 3. Promotorerna är valda bland t ex patatinpromotorn, promotorn fràn genen för granul- bundet potatisstärkelsesyntas I eller promotorer isolera- de fràn generna för potatisstärkelseförgreningsenzymerna 10 15 20 25 30 35 513 209 I och II. Konstruktionen klonas antingen i en binär Ti-plasmidvektor lämplig för transformation av potatis medierad av Agrobacterium thmefaciens, eller i en vektor, lämplig för direkt transforfiation med användning av bal- listiska tekniker eller elektroporering. Det inses att sens- (se nedan) och antisehs-konstruktionerna måste innehålla alla nödvändiga rbglerelement. Transgena pota- tisplantor transkriberar specifikt den omvända stärkel- seförgreningsenzym II-konstruktionen i knölarna, vilket leder till antisensinhiberihg av enzymet. En reduktion av och ett förändrat mönster för förgreningen av amylopektin sàväl som ett ändrat amylos/amylopektinförhàllande bör därvid uppträda i potatisknölstärkelse.
Antisenskonstruktionen för potatisstärkelseförgre- ningsenzym II används också i kombination med antisens- konstruktioner för potatisstärkelseförgreningsenzym I, för granulbundet potatisstärkelsesyntas II, för lösliga potatisstärkelsesyntaser II och III, för potatisstärkel- sedisproportioneringsenzym §D-enzym) eller för potatis- stärkelseavförgreningsenzym för att transformera potatis till att ändra graden av förgrening av amylopektin och amylos/amylopektinförhàllandet. Detta kommer att ge nya och värdefulla material till stärkelseprocessindustrin.
Fullängds-cDNA-sekvensèn som kodar för enzymet klo- nas i sensorientering efter en eller flera av de ovan nämnda promotorerna, och konstruktionerna överföres till lämpliga transformationsvektorer, såsom beskrivs ovan, och används för transformation av potatis. Regenererade transformerade potatisplantor förväntas producera ett överskott av stärkelseförgreningsenzym II i knölarna, vilket leder till en ökad grad och förändrat mönster av förgrening av amylopektin eller till inhibering av tran- skription av endogen stärkelseförgreningsenzym II-tran- skription beroende pà sam-suppression, vilket resulterar i en minskad förgrening av ämylopektin. 10 15 20 25 513 209 10 Referenser Mülle-Röber, B., Koßmann, J., (1994) Approaches to in- fluence starch quantity and starch quality in transgenic plants. Plant Cell Environm. 17, 601-613.
Martin, C., Smith, A. (1995) Starch Biosynthesis. Plant Cell 7, 971-985.
Laemmli, U.K. (1979) Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, 680-685.
Schell, J. (1987) Improved method for the isolation of RNA from plant Anal. 163, 16-20.
Logemann, J., och Willmitzer, L. tissues. Biochem.
Rosenfeld, J., Guillemot, Ferrara, P. (1992) sequence analysis after one- or two-dimensional gel 173-179.
Capdeville, J., J C., In-gel digestion of proteins for internal electrophoresis. Anal. Biochem. 203, R.G.F., (1993) Towards modifying plants for altered starch content and composition.
TibTech 11, 63-68.
Visser, Jacobsen, E.
Claims (8)
1. Förfarande för prodpktion av transgena potatisar med antingen en ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelse, k ä n n e t e c k n a t av att det omfattar följande steg: a) överföring och införlivande av en vektor omfat- tande hela eller en funktionellt aktiv del av den DNA- sekvens som kodar för stärkelseförgreningsenzym II (SBE II) fràn potatis omfattande nukleotidsekvensen som visas i fig 3 i de bifogade ritningarna, eller varianter därav som är resultatet av den genetiska kodens degenera- tion, och reglerelement som är aktiva i potatis in i ge- nomet i en potatiscell och l b) regenerering av intakta, hela plantor från de transformerade cellerna.
2. Förfarande för prodüktion av transgena potatisar med reducerad grad av förgrening av amylopektinstärkelse, k ä n n e t e c k n a t av att det omfattar följande steg: i a) överföring och införlivande av en vektor omfat- tande hela eller en funktionellt aktiv del av den DNA- sekvens som kodar för stärkelseförgreningsenzym II (SBE II) visas i fig 3 i de bifogade ritningarna och reglerelement fràn potatis omfattande nukleotidsekvensen som som är aktiva i potatis, vilken DNA-sekvens är insatt i antisensriktning (omvänd orientering), in i genomet i en potatiscell och ' b) regenerering av intakta, hela plantor fràn de transformerade cellerna.
3. Förfarande enligt krav 2, vari vektorn också om- fattar en antisenskonstruktion av stärkelseförgrenings- enzym I (SBE I). f
4. Förfarande enligt krav 2 eller 3, vari vektorn också omfattar en antisenskdnstruktion av granulbundet potatisstärkelsesyntas II. I 10 513 209 12
5. Förfarande enligt ett eller flera av kraven 2-4, vari vektorn också omfattar en antisenskonstruktion av lösliga potatisstärkelsesyntaser II och III.
6. Förfarande enligt ett eller flera av kraven 2-5, vari vektorn också omfattar en antisenskonstruktion av potatisstärkelsedisproportioneringsenzym (D-enzym).
7. Förfarande enligt ett eller flera av kraven 2-6, vari vektorn också omfattar en antisenskonstruktion av potatisstärkelseförgreningsenzym.
8. Användning av transgena potatisar framställda en- ligt ett eller flera av kraven 1-7 för produktion av stärkelse.
Priority Applications (16)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9601506A SE513209C2 (sv) | 1995-11-29 | 1996-04-19 | Förfarande för produktion av transgena potatisar med ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelse |
| AU77165/96A AU7716596A (en) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | Starch branching enzyme ii of potato |
| SK726-98A SK284999B6 (sk) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | Aminokyselinová sekvencia, sekvencia DNA, ich fragmenty, vektory, spôsob produkcie transgénnych zemiakov s modifikovaným stupňom vetvenia amylopektínového škrobu a ich použitie na výrobu škrobu |
| PL96326975A PL186381B1 (pl) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | Wyizolowana sekwencja DNA kodująca sieciujący skrobię enzym II (SBE II) ziemniaka, sekwencja aminokwasowa sieciującego skrobię enzymu II (SBE II) ziemniaka, wektor oraz sposób otrzymywania transgenicznych ziemniaków |
| JP9520417A JP2000500978A (ja) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | ポテトのデンプン分枝酵素▲ｉｉ▼ |
| PCT/SE1996/001558 WO1997020040A1 (en) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | Starch branching enzyme ii of potato |
| CA002238948A CA2238948C (en) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | Starch branching enzyme ii of potato |
| KR1019980704030A KR100540824B1 (ko) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | 감자의 전분 분지형성 효소 ⅱ |
| CZ0165698A CZ298540B6 (cs) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | Aminokyselinová sekvence, sekvence DNA a její fragmenty a vektory, transgenní brambor, zpusob jeho produkce a použití pro výrobu škrobu |
| EP96940226A EP0863983A2 (en) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | Starch branching enzyme ii of potato |
| CN96199514A CN1112443C (zh) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | 马铃薯淀粉分支酶ⅱ |
| HU9901306A HU222651B1 (hu) | 1995-11-29 | 1996-11-28 | Burgonya II. típusú, keményítżt elágaztató enzimje |
| NO982443A NO982443L (no) | 1995-11-29 | 1998-05-28 | Stivelsesforgrenende enzym II fra potet |
| US09/087,277 US6169226B1 (en) | 1995-11-29 | 1998-05-29 | Starch branching enzyme II of potato |
| US09/658,499 US6469231B1 (en) | 1995-11-29 | 2000-09-08 | Starch branching enzyme II of potato |
| US10/254,534 US20030046730A1 (en) | 1995-11-29 | 2002-09-26 | Starch branching enzyme II of potato |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9504272A SE513208C2 (sv) | 1995-11-29 | 1995-11-29 | Förfarande för produktion av transgena potatisar med ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelse |
| SE9601506A SE513209C2 (sv) | 1995-11-29 | 1996-04-19 | Förfarande för produktion av transgena potatisar med ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelse |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE9601506D0 SE9601506D0 (sv) | 1996-04-19 |
| SE9601506L SE9601506L (sv) | 1997-05-30 |
| SE513209C2 true SE513209C2 (sv) | 2000-07-31 |
Family
ID=26662437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE9601506A SE513209C2 (sv) | 1995-11-29 | 1996-04-19 | Förfarande för produktion av transgena potatisar med ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelse |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6169226B1 (sv) |
| EP (1) | EP0863983A2 (sv) |
| JP (1) | JP2000500978A (sv) |
| KR (1) | KR100540824B1 (sv) |
| CN (1) | CN1112443C (sv) |
| AU (1) | AU7716596A (sv) |
| CA (1) | CA2238948C (sv) |
| CZ (1) | CZ298540B6 (sv) |
| HU (1) | HU222651B1 (sv) |
| NO (1) | NO982443L (sv) |
| PL (1) | PL186381B1 (sv) |
| SE (1) | SE513209C2 (sv) |
| SK (1) | SK284999B6 (sv) |
| WO (1) | WO1997020040A1 (sv) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996034968A2 (en) | 1995-05-05 | 1996-11-07 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Improvements in or relating to plant starch composition |
| JP4118330B2 (ja) | 1995-09-19 | 2008-07-16 | バイエル バイオサイエンス ゲーエムベーハー | 修飾澱粉を合成する植物、その産生プロセスおよび修飾澱粉 |
| GB9623095D0 (en) * | 1996-11-05 | 1997-01-08 | Nat Starch Chem Invest | Improvements in or relating to starch content of plants |
| NZ503137A (en) | 1997-09-12 | 2000-10-27 | Groupe Limagrain Pacific Pty L | Sequence and promoters for starch branching enzyme I, starch branching enzyme II, soluble starch synthase I and starch debranching enzyme derived from Triticum tauschii to modulate gene expression |
| DE69940734D1 (de) * | 1998-06-15 | 2009-05-28 | Brunob Ii Bv | Verbesserung von pflanzen und deren produkten |
| DE19836098A1 (de) | 1998-07-31 | 2000-02-03 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Pflanzen, die eine modifizierte Stärke synthetisieren, Verfahren zur Herstellung der Pflanzen, ihre Verwendung sowie die modifizierte Stärke |
| MXPA01009699A (es) * | 1999-03-29 | 2002-05-14 | Novo Nordisk As | Polipeptidos que tienen actividad de enzima ramificadora y acidos nucleicos que los codifican. |
| US7052697B1 (en) | 1999-05-13 | 2006-05-30 | Agriculture Victoria Services Pty Ltd | Lawsonia derived gene and related OmpH polypeptides, peptides and proteins and their uses |
| DE19937643A1 (de) * | 1999-08-12 | 2001-02-22 | Aventis Cropscience Gmbh | Transgene Zellen und Pflanzen mit veränderter Aktivität des GBSSI- und des BE-Proteins |
| GB9921830D0 (en) * | 1999-09-15 | 1999-11-17 | Nat Starch Chem Invest | Plants having reduced activity in two or more starch-modifying enzymes |
| AUPR138100A0 (en) | 2000-11-10 | 2000-12-07 | Agriculture Victoria Services Pty Ltd | Novel therapeutic compositions for treating infection by lawsonia spp |
| JP4460282B2 (ja) * | 2001-06-12 | 2010-05-12 | バイエル・クロップサイエンス・アーゲー | 高アミロースデンプンを合成するトランスジェニック植物 |
| US8022272B2 (en) * | 2001-07-13 | 2011-09-20 | Sungene Gmbh & Co. Kgaa | Expression cassettes for transgenic expression of nucleic acids |
| ATE460485T1 (de) | 2002-07-09 | 2010-03-15 | Basf Plant Science Gmbh | Verwendung von mutierten ahas genen als selektionsmarker bei der kartoffeltransformation |
| WO2004056999A1 (en) | 2002-12-19 | 2004-07-08 | Bayer Cropscience Gmbh | Plant cells and plants which synthesize a starch with an increased final viscosity |
| EP1431393A1 (de) * | 2002-12-19 | 2004-06-23 | Bayer CropScience GmbH | Pflanzen, die eine Stärke mit erhöhter Endviskosität synthetisieren |
| ATE517994T1 (de) | 2003-06-30 | 2011-08-15 | Commw Scient Ind Res Org | Weizen mit veränderter verzweigungsenzymaktivität sowie daraus erhaltene stärke und stärkehaltige produkte |
| KR20070009657A (ko) * | 2004-03-31 | 2007-01-18 | 바스프 플랜트 사이언스 게엠베하 | 높은 키트 수를 얻기 위한 히드록시프로필화된고아밀로오스 함량 감자 전분의 용도 |
| JP2007530809A (ja) * | 2004-04-01 | 2007-11-01 | ビーエーエスエフ プラント サイエンス ゲーエムベーハー | 織物用糸のためのサイジング剤としてのアミロースデンプン生成物 |
| CA3020943A1 (en) | 2009-04-22 | 2010-10-28 | Basf Plant Science Company Gmbh | Whole seed specific promoter |
| CN104017829A (zh) * | 2011-12-06 | 2014-09-03 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 提高植物直链淀粉含量的方法 |
| DE202012104218U1 (de) | 2012-11-02 | 2014-02-06 | Emsland-Stärke GmbH | Pflanzliches Nahrungsmittelprodukt |
| DE102014107610A1 (de) | 2014-05-28 | 2015-12-03 | Emsland-Stärke GmbH | Verwendung eines Nahrungsmittelprodukts aus stärkehaltigen Pflanzenteilen |
| CN110760532B (zh) * | 2019-11-18 | 2022-08-12 | 南京农业大学 | 一种淀粉分支酶及其基因、含有该基因的工程菌及其应用 |
| CN112391365B (zh) * | 2020-11-30 | 2022-04-15 | 江南大学 | 一种催化活力提高的淀粉分支酶突变体及其应用 |
| CN113151318B (zh) * | 2021-03-17 | 2022-08-16 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1及其应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9004095L (sv) * | 1990-12-21 | 1992-06-01 | Amylogene Hb | Genetisk foeraendring av potatis foer bildning av staerkelse av amylostyp |
| SE467358B (sv) | 1990-12-21 | 1992-07-06 | Amylogene Hb | Genteknisk foeraendring av potatis foer bildning av staerkelse av amylopektintyp |
| DE4104782B4 (de) * | 1991-02-13 | 2006-05-11 | Bayer Cropscience Gmbh | Neue Plasmide, enthaltend DNA-Sequenzen, die Veränderungen der Karbohydratkonzentration und Karbohydratzusammensetzung in Pflanzen hervorrufen, sowie Pflanzen und Pflanzenzellen enthaltend dieses Plasmide |
| WO1995004826A1 (en) * | 1993-08-09 | 1995-02-16 | Institut Für Genbiologische Forschung Berlin Gmbh | Debranching enzymes and dna sequences coding them, suitable for changing the degree of branching of amylopectin starch in plants |
| DE69432796T2 (de) | 1993-09-09 | 2004-04-29 | Bayer Cropscience Gmbh | Kombination von dna-sequenzen, die die bildung von modifizierter stärke in pflanzenzellen und pflanzen ermöglicht, verfahren zur herstellung dieser pflanzen |
| WO1996034968A2 (en) | 1995-05-05 | 1996-11-07 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Improvements in or relating to plant starch composition |
-
1996
- 1996-04-19 SE SE9601506A patent/SE513209C2/sv not_active IP Right Cessation
- 1996-11-28 JP JP9520417A patent/JP2000500978A/ja not_active Ceased
- 1996-11-28 CA CA002238948A patent/CA2238948C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-28 CZ CZ0165698A patent/CZ298540B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-11-28 HU HU9901306A patent/HU222651B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-11-28 PL PL96326975A patent/PL186381B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-11-28 EP EP96940226A patent/EP0863983A2/en not_active Withdrawn
- 1996-11-28 SK SK726-98A patent/SK284999B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-11-28 KR KR1019980704030A patent/KR100540824B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-11-28 AU AU77165/96A patent/AU7716596A/en not_active Abandoned
- 1996-11-28 CN CN96199514A patent/CN1112443C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-28 WO PCT/SE1996/001558 patent/WO1997020040A1/en active IP Right Grant
-
1998
- 1998-05-28 NO NO982443A patent/NO982443L/no not_active Application Discontinuation
- 1998-05-29 US US09/087,277 patent/US6169226B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-09-08 US US09/658,499 patent/US6469231B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-09-26 US US10/254,534 patent/US20030046730A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1112443C (zh) | 2003-06-25 |
| CZ165698A3 (cs) | 1999-04-14 |
| WO1997020040A1 (en) | 1997-06-05 |
| US6169226B1 (en) | 2001-01-02 |
| CZ298540B6 (cs) | 2007-10-31 |
| AU7716596A (en) | 1997-06-19 |
| CA2238948C (en) | 2008-11-18 |
| JP2000500978A (ja) | 2000-02-02 |
| HU222651B1 (hu) | 2003-09-29 |
| KR100540824B1 (ko) | 2006-05-26 |
| PL186381B1 (pl) | 2003-12-31 |
| SE9601506D0 (sv) | 1996-04-19 |
| EP0863983A2 (en) | 1998-09-16 |
| SE9601506L (sv) | 1997-05-30 |
| SK72698A3 (en) | 1999-06-11 |
| CA2238948A1 (en) | 1997-06-05 |
| NO982443D0 (no) | 1998-05-28 |
| US20030046730A1 (en) | 2003-03-06 |
| PL326975A1 (en) | 1998-11-09 |
| HUP9901306A1 (hu) | 1999-07-28 |
| US6469231B1 (en) | 2002-10-22 |
| HUP9901306A3 (en) | 2001-11-28 |
| CN1207125A (zh) | 1999-02-03 |
| SK284999B6 (sk) | 2006-04-06 |
| KR19990071752A (ko) | 1999-09-27 |
| NO982443L (no) | 1998-07-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SE513209C2 (sv) | Förfarande för produktion av transgena potatisar med ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelse | |
| US4886878A (en) | Modified zein genes containing lysine | |
| Stiefel et al. | Expression of a maize cell wall hydroxyproline-rich glycoprotein gene in early leaf and root vascular differentiation. | |
| US4885357A (en) | Modified zein proteins containing lysine | |
| ES2321347T3 (es) | Nuevos almidones obtenidos para la modificacion de la expresion de genes de enzimas biosinteticas de almidon. | |
| US7122727B2 (en) | Nucleic acid molecules from wheat encoding an R1-protein, and transgenic plant cells and plants comprising the nucleic acid molecules | |
| WO1992011382A1 (en) | Glycogen biosynthetic enzymes in plants | |
| US8563687B2 (en) | Synthetic genes for plant gums and other hydroxyproline rich glycoproteins | |
| CA1304025C (en) | Modified zein | |
| US9006518B2 (en) | F-box protein targeted plant oil production | |
| Bolle et al. | Different sequences for 5′-untranslated leaders of nuclear genes for plastid proteins affect the expression of the β-glucuronidase gene | |
| AU732422B2 (en) | Method for expressing foreign genes and vectors therefor | |
| SE513208C2 (sv) | Förfarande för produktion av transgena potatisar med ökad eller minskad grad av förgrening av amylopektinstärkelse | |
| Korneev et al. | cDNA libraries from a few neural cells | |
| EP1869189A2 (en) | Alteration of plant embryo/endosperm size during seed development | |
| JP5266489B2 (ja) | ジーンサイレンシング抑制技術 | |
| JP3054687B2 (ja) | Ｌ−ガラクトノラクトンデヒドロゲナーゼ遺伝子 | |
| JP2775405B2 (ja) | 新規チオニン | |
| CN114940709A (zh) | 植物的一个bHLH转录因子RdbHLH89及其编码基因和应用 | |
| AU2012216826B2 (en) | F-box protein targeted plant oil production | |
| Sévigny et al. | Structure of the gene coding for the mouse TRiC-P5 subunit of the cytosolic chaperonin TRiC | |
| Puigdomenech | Expression of a Maize Cell Wall Hydroxyproline-Rich Glycoprotein Gene in Early Leaf and Root Vascular Differentiation | |
| JPH08256777A (ja) | 翻訳エンハンサー配列およびその使用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |