CN113151318B

CN113151318B - 一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1及其应用

Info

Publication number: CN113151318B
Application number: CN202110287864.6A
Authority: CN
Inventors: 李雪梅; 曾婉俐; 师建全; 向海英; 高茜; 许力; 刘欣; 蒋佳芮; 杨文武; 杨光宇; 杨叶昆; 许�永; 翟妞
Original assignee: China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd
Current assignee: China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd
Priority date: 2021-03-17
Filing date: 2021-03-17
Publication date: 2022-08-16
Anticipated expiration: 2041-03-17
Also published as: CN113151318A

Abstract

本发明涉及一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1及其应用，碱基序列具体如SEQ ID NO.1所示。本申请中，通过对烟草淀粉分支酶NtGBE1的初步研究，发现其与烟草叶片中直链淀粉和支链淀粉的合成代谢相关，在将该基因沉默后，烟草叶片中淀粉总量明显降低，直链淀粉和支链淀粉含量明显降低。基于这一特性，可为烟叶品质调控、烟草新品种培育提供一定的应用基础和参考借鉴。

Description

一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1及其应用

技术领域

本发明属于烟草基因工程技术领域，具体涉及一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1及其应用。

背景技术

烟草作为一种重要的经济作物，其品质和安全性一直是研究人员关注的重点。淀粉是烟草生长过程中积累的重要碳水化合物，广泛存在于烟草的茎叶中。成熟的鲜烟叶中淀粉含量高达40％左右，经调制后，大部分淀粉降解为还原糖，但仍有部分留在烟叶中。烟叶中淀粉含量的高低影响着烟叶的外观和内在品质以及卷烟的香吃味。一方面，以淀粉形态存在的糖类在烟支燃吸时会对烟气质量产生不良影响，影响烟丝的燃烧速度及其完全性，也影响阴然持火力；另一方面，淀粉在燃烧时会产生焦糊气味，破坏烟草燃吸时所形成的香味，影响卷烟香气质及吸味口感，同时使安全性下降。近年来，我国烤烟水平不断提高，但与进口烟相比在其内在的化学组成协调性等方面还存在着较大差异。目前，我国烤烟中淀粉含量(质量分数)约为4％～6％，而国外优质烤烟淀粉含量仅为1％～2％。

因此，烟草中影响淀粉含量的基因功能的研究将为烟叶品质改善、烟草品种遗传改良提供理论支持，对提高我国烟草产品品质具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1及其应用，以解决现烤烟中淀粉含量过高的问题，从而为烟叶品质调控、烟草新品种培育奠定一定的基础。

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1，碱基序列具体如SEQ ID NO.1所示，含有2793个碱基，命名为NtGBE1。

进一步的，烟草淀粉分支酶基因NtGBE1，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，由930个氨基酸残基组成。

进一步的，烟草淀粉分支酶基因NtGBE1的PCR扩增制备方法，包括如下步骤：

(1)提取基因组，并反转录为cDNA备用；

(2)设计PCR扩增用引物，并进行PCR扩增，具体引物序列设计如下：

NtGBE1-F：5’-ATGTCTGCAGCTTTACTTTC-3’，

NtGBE1-R：5’-TAAATAACATTCACCATCTCCAG-3’。

进一步的，在步骤(1)中，提取基因组时，以烟草品种红花大金元叶片为样品。

上述任一项的烟草淀粉分支酶基因NtGBE1的应用，该基因表达的蛋白与植物叶片中淀粉含量相关，降低该蛋白表达后，叶片中淀粉含量明显降低。

进一步的，利用基因沉默技术、或者基因超表达方法，通过调节烟草淀粉分支酶NtGBE1表达量，来调节控制烟叶中淀粉含量情况。

进一步的，通过转基因技术、瞬时表达技术或基因组编辑技术，构建含有NtGBE1基因的病毒诱导沉默载体、RNAi干涉载体、超表达载体，转化烟草，筛选获得淀粉含量变化的烟草新品种。

具体例如：利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)的技术，干扰NtGBE1基因的表达使其沉默，NtGBE1基因沉默植株中淀粉含量显著下降，进而获得淀粉含量下降的植物新品种。

本发明的有益效果是：

本申请中，通过对特定烟草淀粉分支酶NtGBE1的初步研究，发现其与烟草淀粉含量高度相关，在将该基因沉默后，烟草中淀粉含量发生了明显降低。基于这一特性，可为烟叶品质调控、烟草新品种培育提供一定的应用基础和参考借鉴。

附图说明

图1为与对照植株相比，NtGBE1基因沉默植株中该基因的相对表达量；

图2为病毒诱导基因沉默的烟叶及对照烟叶中的淀粉含量比较。

具体实施方式

以下通过实施例来详细说明本发明的技术方案，以下的实施例仅是示例性的，仅能用来解释和说明本发明的技术方案，而不能解释为是对本发明技术方案的限制。

生物材料：

本氏烟草，一种常用烟草材料，育苗钵中育苗，待发芽后两周进行分苗，种于塑料钵(10cm×10cm)中，22℃、16h光/8h暗条件下进行日常肥水管理等栽培管理。

下述实施例中所采用的VIGS载体是一种来自烟草脆裂病毒的病毒载体(tobaccorattle virus，TRV)，所具体利用的TRV2(一种常用载体)带有卡那霉素筛选标记和35S启动子，同时TRV2带有EcoR I和BamH I等多克隆位点，可以用来携带和转化外源基因。

实验试剂：

LB液体培养基，1L含量中含有：10g细菌蛋白胨(bacteriological peptone)；10g氯化钠(NaCl)；5g酵母抽提物(yeast extract)，高温高压灭菌。

YEB液体培养基，1L含量中含有：5g牛肉浸膏(beef extract)；5g细菌蛋白胨(bacteriological peptone)；5g蔗糖(sucrose)；1g酵母抽提物(yeast extract)；2mL 1M硫酸镁(MgSO4)，高温高压灭菌。

1M 2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)储备液：ddH₂O溶解，过滤灭菌，-20℃储存备用。

200mM乙酰丁香酮(Acetosyringone，As)储备液：二甲基亚砜(DSMO)溶解，-20℃储存备用。

实施例1

本实施例就烟草NtGBE1基因克隆及沉默载体的构建过程简要介绍如下。

(1)烟草NtGBE1基因克隆

根据前期对于烟草基因组及相关NtGBE1基因研究，选择特异编码序列为目标片段，设计PCR扩增用引物序列如下：

NtGBE1-F：5’-ATGTCTGCAGCTTTACTTTC-3’，

NtGBE1-R：5’-TAAATAACATTCACCATCTCCAG-3’。

以烟草红花大金元叶片(先提取基因组，再反转录为cDNA)的cDNA为模板，进行PCR扩增获得NtGBE1基因。

PCR扩增程序为：95℃预变性3min；95℃变性15s，53℃退火15s，72℃延伸3min，34个循环后，72℃彻底延伸5min。

对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，并回收电泳产物备用。

(2)构建重组TRV2-NtGBE1载体

将步骤(1)中的PCR扩增产物进行EcoRI、BamHI双酶切，同时对空载体TRV2进行EcoRI、BamHI双酶切，分别回收酶切产物，利用T4 DNA连接酶进行连接。

将连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α，转化操作结束后将转化产物涂布在含50mg/L Kan的LB固体培养基上，37℃过培养夜。

挑选阳性单菌落扩增后进一步进行PCR鉴定，并结合测序验证，确保获得构建正确的重组载体TRV2-NtGBE1。

需要说明的是，烟草NtGBE1基因，包括2793个碱基，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

烟草淀粉分支酶蛋白NtGBE1，包括930个氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

实施例2

在实施例1基础上，利用农杆菌介导的VIGS技术，进一步将所构建的重组TRV2-NtGBE1载体转化了烟草植株，并就相关植物表型变化情况做了验证分析，具体实验过程简介如下。

(1)转化农杆菌

需要说明的是，参考实施例1操作及现有技术，同时制备了TRV2-GFP重组载体作为对照，具体转化过程为：

将TRV2-GFP(载体对照)及TRV2-NtGBE1的阳性克隆质粒，分别通过电击转化方式转化进入农杆菌GV3101感受态细胞中，利用含50mg/L Kan和50mg/L Rif的YEB平板进行培养筛选，在28℃倒置培养2d后，利用菌落PCR筛选带有目的基因的农杆菌。

(2)制备转染用菌液

将步骤(1)中筛选所得阳性农杆菌克隆在5mL的YEB液体培养基(含50mg/L Kan和50mg/L Rif)中，28℃、250rpm条件下培养过夜。

取50uL过夜培养物接种至50mL的YEB液体培养基(含50mg/L Kan)中，培养至OD₆₀₀＝1.0-1.5左右，然后4000g离心5min，收集菌体，再用MMA重悬，调节OD₆₀₀＝1.0左右。

最后室温放置3h左右后，作为转染用菌液。

(3)瞬时转化

以3-4w(周)苗龄的本氏烟草叶片为实验材料，利用1mL规格注射器，将步骤(2)中所制备转染用菌液注射至烟草叶片中，注射后的烟草继续在人工培养箱内培养，观察表型变化。

进一步通过qRT-PCR对NtGBE1基因表达情况进行了检测，结果如图1所示，可以看出，TRV2-NtGBE1的侵染植株中，NtGBE1的表达量显著降低，qRT-PCR引物如下：

NtGBE1-F：5’-TTTTCCCAGATGCGATTACCC-3’，

NtGBE1-R：5’-TCACCCACTCTCCAATCCTC-3’。

进一步地，对实验组(TRV2-NtGBE1浸染植株)和对照组(TRV2-GFP浸染植株)中的叶片淀粉含量情况进行了检测(检测方法参照：格锐思生物的支链-直链-总淀粉含量试剂盒(分光光度法))，结果如图2所示。

从图2结果可以看出，实验组中直链淀粉和支链淀粉含量与对照组相比均有显著下降。这进一步表明，通过沉默NtGBE1基因，可对烟草叶片中植物淀粉的含量进行调控，进而可为烟叶品质调控、烟草新品种培育奠定一定技术基础。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

序列表

<110> 云南中烟工业有限责任公司

<120> 一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1及其应用

<130> WPC210885

<140> 2021102878646

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2793

<212> DNA

<213> 人工序列(NtGBE1)

<400> 1

atggtgtaca caatctctgg tgttcgtttt cctactgttc catcgcttca caaatcccct 60

gctttcactt ccaatgctga tcggcggaat cctagcgttt ctgtcttctc gaaaaagcac 120

tatgtttcac gtactacctt cctctgtgtc tgtgtgtatg tgtgtatttg tgtttcctct 180

ctgtgtgtat gtgtgtttgt gtttgtgttt ctttggtttg ttgtaattgg tgaatttttc 240

gtggttgaca ttaccgaagg gaagatcttt gctgaaaagt cttcttacga gcccgaatcc 300

cgatcttcta cagttgcagc atcagggaaa gtccttgttc ctggcagcca gagtggtagc 360

tcctcatcct caactgaaca attggaggtt gctgatacag ttccagaaaa ttccctggca 420

tcaactgatg tagatagttc agaaatggaa catgctagcc agattaaagc tgagaacggt 480

gacgtcgagc cagcaagtgg tcttaaagga aattttgaag agctggattt tgtgtcatca 540

ctacaactag aagaaggtgg taaactgaag gagtccaaaa cattagatac ttctgaagag 600

acgatcatcg atgaatctgc tagagttaga aagaggggca ttcctccacc tggacttggt 660

cggaaaattt acgaaataga cccccttttg acaaaccatc gtcaacacct tgattacagg 720

ttttcagagt acaagaaaat gagggaggca attgacaagt atgagggtgg tttggaagct 780

ttttctcgtg gttacgaaaa aatgggtttc actcgtagtg ctacaggtat cacttatcgg 840

gagtgggctc ctggtgccaa ggctttgttt cttgatagca ttactcgcta cctcttcaag 900

cttgatctag gcctcgactt gtgggctgcc ctcattggag atttcaacaa ttggaaccca 960

aatgctgacg tcatgactcg gaacgaattt ggtgtctggg aaattttttt gccaaataat 1020

gtggatggct ctcctgcaat tcctcatggg tccagagtga agatacgtat ggacactcca 1080

tcaggtgtta aggattccat tcctgcnnnn attcctgctt ggatcaagtt ctctgtacag 1140

cctcctggtg aaattccata caatggaata tactatgatc cacccgaaga ggagaagtat 1200

gtattccaac atccacggcc aaagaaacca aagtcactga gaatatacga atctcatatc 1260

ggaatgagta gtccggagcc taaaattaac tcatacgtga attttagaga tgaagttctt 1320

cctcgcataa aaaaacttgg atacaacgct gtgcaaatta tggctattca agagcattct 1380

tattatgcta gttttggtta tcatgtcaca aatttttttg caccaagcag ccgttttggg 1440

acgcctgatg accttaagtc tttgattgat aaagctcatg agctaggaat tgttgttctc 1500

atggacattg ttcacagcca tgcatcaaat aatactttag atgggctgaa catgtttgat 1560

ggaactgata gttgttattt tcactctgga tctcgtggtt atcattggat gtgggattcc 1620

cgcctcttta actatggaca ctgggaggta cttaggtatc ttctctcaaa tgcgagatgg 1680

tggttggatg agttcaaatt tgatggattt agatttgatg gtgtgacatc aatgatgtat 1740

actcaccacg gattatcggt ggcattcact gggaactaca atgaatattt tggattcgcg 1800

actgatgtgg atgctgtggt gtatttgatg cttgtcaatg atcttattca cgggcttttc 1860

ccagatgcga ttaccattgg tgaagatccg acattttgta ttcccgttca agatgggggt 1920

gttggctttg actatcggct gcatatggca attgctgata aatggattga gttgctcaag 1980

aaaagggatg aggattggag agtgggtgat attgttcata cactgacaaa tagaagatgg 2040

tcggaaaagt gtgtttcata tgcggaaagt catgatcaag ctctagttgg tgataaaact 2100

atagcattct ggttgatgga caaggatatg tatgatttta tggctctgga tagaccgtca 2160

acaccattaa tagatcgtgg gattgcgttg cacaagatga tcaggcttat aactatggga 2220

ttaggaggag aaggatacct aaatttcatg ggaaatgaat ttggccaccc tgagtggatt 2280

gatttcccta gggctgaaca acacctccct gatggacaag tgattcccgg aaacaatttc 2340

agttatgata aatgcagacg gagatttgat ctgggagatg ccgattattt aagataccat 2400

gggttgcaag aatttgacca ggccatgcag catcttgaag agagatatga gtttatgaca 2460

tcagaacacc agtacatatc acgaaaggat gaaggagata ggatgattgt atttgaaaga 2520

ggtgaccttg ttttcgtctt taattttcac tggacaaata gttattcgga ctatcgcata 2580

ggctgcctga agcctggaaa atacaaggtt gtcttggact cagatgatcc actttttggt 2640

ggctttggaa gaatagatca caatgccgaa tatttcacct tcgaagggtg gtatgatgac 2700

cgtcctagtt cctttatggt gtatgcacct agcagaacgg cagtggtcta tgcactagta 2760

gacaaagacc aagaagtagc tgttgaagaa tga 2793

<210> 2

<211> 930

<212> PRT

<213> 人工序列(NtGBE1)

<400> 2

Met Val Tyr Thr Ile Ser Gly Val Arg Phe Pro Thr Val Pro Ser Leu

1 5 10 15

His Lys Ser Pro Ala Phe Thr Ser Asn Ala Asp Arg Arg Asn Pro Ser

20 25 30

Val Ser Val Phe Ser Lys Lys His Tyr Val Ser Arg Thr Thr Phe Leu

35 40 45

Cys Val Cys Val Tyr Val Cys Ile Cys Val Ser Ser Leu Cys Val Cys

50 55 60

Val Phe Val Phe Val Phe Leu Trp Phe Val Val Ile Gly Glu Phe Phe

65 70 75 80

Val Val Asp Ile Thr Glu Gly Lys Ile Phe Ala Glu Lys Ser Ser Tyr

85 90 95

Glu Pro Glu Ser Arg Ser Ser Thr Val Ala Ala Ser Gly Lys Val Leu

100 105 110

Val Pro Gly Ser Gln Ser Gly Ser Ser Ser Ser Ser Thr Glu Gln Leu

115 120 125

Glu Val Ala Asp Thr Val Pro Glu Asn Ser Leu Ala Ser Thr Asp Val

130 135 140

Asp Ser Ser Glu Met Glu His Ala Ser Gln Ile Lys Ala Glu Asn Gly

145 150 155 160

Asp Val Glu Pro Ala Ser Gly Leu Lys Gly Asn Phe Glu Glu Leu Asp

165 170 175

Phe Val Ser Ser Leu Gln Leu Glu Glu Gly Gly Lys Leu Lys Glu Ser

180 185 190

Lys Thr Leu Asp Thr Ser Glu Glu Thr Ile Ile Asp Glu Ser Ala Arg

195 200 205

Val Arg Lys Arg Gly Ile Pro Pro Pro Gly Leu Gly Arg Lys Ile Tyr

210 215 220

Glu Ile Asp Pro Leu Leu Thr Asn His Arg Gln His Leu Asp Tyr Arg

225 230 235 240

Phe Ser Glu Tyr Lys Lys Met Arg Glu Ala Ile Asp Lys Tyr Glu Gly

245 250 255

Gly Leu Glu Ala Phe Ser Arg Gly Tyr Glu Lys Met Gly Phe Thr Arg

260 265 270

Ser Ala Thr Gly Ile Thr Tyr Arg Glu Trp Ala Pro Gly Ala Lys Ala

275 280 285

Leu Phe Leu Asp Ser Ile Thr Arg Tyr Leu Phe Lys Leu Asp Leu Gly

290 295 300

Leu Asp Leu Trp Ala Ala Leu Ile Gly Asp Phe Asn Asn Trp Asn Pro

305 310 315 320

Asn Ala Asp Val Met Thr Arg Asn Glu Phe Gly Val Trp Glu Ile Phe

325 330 335

Leu Pro Asn Asn Val Asp Gly Ser Pro Ala Ile Pro His Gly Ser Arg

340 345 350

Val Lys Ile Arg Met Asp Thr Pro Ser Gly Val Lys Asp Ser Ile Pro

355 360 365

Ala Xaa Ile Pro Ala Trp Ile Lys Phe Ser Val Gln Pro Pro Gly Glu

370 375 380

Ile Pro Tyr Asn Gly Ile Tyr Tyr Asp Pro Pro Glu Glu Glu Lys Tyr

385 390 395 400

Val Phe Gln His Pro Arg Pro Lys Lys Pro Lys Ser Leu Arg Ile Tyr

405 410 415

Glu Ser His Ile Gly Met Ser Ser Pro Glu Pro Lys Ile Asn Ser Tyr

420 425 430

Val Asn Phe Arg Asp Glu Val Leu Pro Arg Ile Lys Lys Leu Gly Tyr

435 440 445

Asn Ala Val Gln Ile Met Ala Ile Gln Glu His Ser Tyr Tyr Ala Ser

450 455 460

Phe Gly Tyr His Val Thr Asn Phe Phe Ala Pro Ser Ser Arg Phe Gly

465 470 475 480

Thr Pro Asp Asp Leu Lys Ser Leu Ile Asp Lys Ala His Glu Leu Gly

485 490 495

Ile Val Val Leu Met Asp Ile Val His Ser His Ala Ser Asn Asn Thr

500 505 510

Leu Asp Gly Leu Asn Met Phe Asp Gly Thr Asp Ser Cys Tyr Phe His

515 520 525

Ser Gly Ser Arg Gly Tyr His Trp Met Trp Asp Ser Arg Leu Phe Asn

530 535 540

Tyr Gly His Trp Glu Val Leu Arg Tyr Leu Leu Ser Asn Ala Arg Trp

545 550 555 560

Trp Leu Asp Glu Phe Lys Phe Asp Gly Phe Arg Phe Asp Gly Val Thr

565 570 575

Ser Met Met Tyr Thr His His Gly Leu Ser Val Ala Phe Thr Gly Asn

580 585 590

Tyr Asn Glu Tyr Phe Gly Phe Ala Thr Asp Val Asp Ala Val Val Tyr

595 600 605

Leu Met Leu Val Asn Asp Leu Ile His Gly Leu Phe Pro Asp Ala Ile

610 615 620

Thr Ile Gly Glu Asp Pro Thr Phe Cys Ile Pro Val Gln Asp Gly Gly

625 630 635 640

Val Gly Phe Asp Tyr Arg Leu His Met Ala Ile Ala Asp Lys Trp Ile

645 650 655

Glu Leu Leu Lys Lys Arg Asp Glu Asp Trp Arg Val Gly Asp Ile Val

660 665 670

His Thr Leu Thr Asn Arg Arg Trp Ser Glu Lys Cys Val Ser Tyr Ala

675 680 685

Glu Ser His Asp Gln Ala Leu Val Gly Asp Lys Thr Ile Ala Phe Trp

690 695 700

Leu Met Asp Lys Asp Met Tyr Asp Phe Met Ala Leu Asp Arg Pro Ser

705 710 715 720

Thr Pro Leu Ile Asp Arg Gly Ile Ala Leu His Lys Met Ile Arg Leu

725 730 735

Ile Thr Met Gly Leu Gly Gly Glu Gly Tyr Leu Asn Phe Met Gly Asn

740 745 750

Glu Phe Gly His Pro Glu Trp Ile Asp Phe Pro Arg Ala Glu Gln His

755 760 765

Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Pro Gly Asn Asn Phe Ser Tyr Asp Lys

770 775 780

Cys Arg Arg Arg Phe Asp Leu Gly Asp Ala Asp Tyr Leu Arg Tyr His

785 790 795 800

Gly Leu Gln Glu Phe Asp Gln Ala Met Gln His Leu Glu Glu Arg Tyr

805 810 815

Glu Phe Met Thr Ser Glu His Gln Tyr Ile Ser Arg Lys Asp Glu Gly

820 825 830

Asp Arg Met Ile Val Phe Glu Arg Gly Asp Leu Val Phe Val Phe Asn

835 840 845

Phe His Trp Thr Asn Ser Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Gly Cys Leu Lys

850 855 860

Pro Gly Lys Tyr Lys Val Val Leu Asp Ser Asp Asp Pro Leu Phe Gly

865 870 875 880

Gly Phe Gly Arg Ile Asp His Asn Ala Glu Tyr Phe Thr Phe Glu Gly

885 890 895

Trp Tyr Asp Asp Arg Pro Ser Ser Phe Met Val Tyr Ala Pro Ser Arg

900 905 910

Thr Ala Val Val Tyr Ala Leu Val Asp Lys Asp Gln Glu Val Ala Val

915 920 925

Glu Glu

930

Claims

1.一种烟草淀粉分支酶基因NtGBE1，其特征在于，基因序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述的烟草淀粉分支酶基因NtGBE1的PCR扩增制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取RNA，并反转录为cDNA备用；

NtGBE1-F：5’-ATGTCTGCAGCTTTACTTTC-3’，

NtGBE1-R：5’-TAAATAACATTCACCATCTCCAG-3’。

3.根据权利要求2所述的烟草淀粉分支酶基因NtGBE1的PCR扩增制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，提取RNA时，以烟草品种红花大金元叶片为样品。

4.如权利要求1所示烟草淀粉分支酶基因NtGBE1的应用，其特征在于，利用基因沉默或者基因超表达方法，通过调节烟草淀粉分支酶NtGBE1表达量，来调节烟叶中淀粉含量。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用为降低基因的表达使烟草叶片中淀粉含量降低。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，通过转基因技术、瞬时表达技术或基因组编辑技术，构建含有NtGBE1基因的病毒诱导沉默载体、RNAi干涉载体、超表达载体或基因组编辑载体，转化烟草，筛选获得淀粉含量变化的烟草新品种。