CN108373488B

CN108373488B - 梓醇6-咖啡酸酯衍生物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN108373488B
Application number: CN201810323115.2A
Authority: CN
Inventors: 李行诺; 颜继忠
Original assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date: 2018-04-11
Filing date: 2018-04-11
Publication date: 2020-10-09
Anticipated expiration: 2038-04-11
Also published as: CN108373488A

Abstract

本发明提供了具有正丁氧基的梓醇6‑咖啡酸酯衍生物，如式1、2或3所示；其制备方法为：将原料梓醇6‑咖啡酸酯溶于正丁醇中，升温至60～100℃反应1～3h，之后反应液减压浓缩，所得浓缩物进行柱色谱分离，得到式1、2、3所示的化合物；所述具有正丁氧基的梓醇6‑咖啡酸酯衍生物可应用于制备抗肿瘤药物，且较原形化合物梓醇6‑咖啡酸酯具有较好的肿瘤抑制活性，同时本发明化合物的制备方法简便易行，可用于后续的继续开发；

Description

梓醇6-咖啡酸酯衍生物及其制备方法与应用

(一)技术领域

本发明涉及具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物及其制备方法与应用。

(二)背景技术

梓醇6-咖啡酸酯广泛存在于天然植物和食物中，具有抗氧化、抗炎、抑制溃疡、抗肿瘤等广泛的药理活性。但是到目前为止，对其深入研究还较少。

本发明所涉及的具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物及其制备方法与应用，迄今在国内外尚未见相关专利或文献报道。

(三)发明内容

本发明的目的是提供具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物及其制备方法与应用。

本发明的技术方案如下：

具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物，如式1、2或3所示：

本发明还提供了式1、2、3所示的具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物的制备方法，包括如下步骤：

将原料梓醇6-咖啡酸酯溶于正丁醇中，升温至60～100℃反应1～3h，之后反应液减压浓缩，所得浓缩物进行柱色谱分离，得到式1、2、3所示的化合物；

所述正丁醇的体积用量以原料梓醇6-咖啡酸酯的物质的量计为25～50mL/mmol；

所述柱色谱分离采用反相硅胶柱，以C18为填料，体积分数10％～100％的甲醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，TLC监测，收集含目标化合物的洗脱液，蒸除溶剂并干燥，得到目标产物。

进一步，所述梯度洗脱的洗脱剂可依次为：体积分数10％的甲醇水溶液、体积分数40％的甲醇水溶液、体积分数60％的甲醇水溶液、100％甲醇；

进一步，所述式1、2、3所示的化合物TLC监测的条件分别为：

式1所示化合物以氯仿：甲醇(体积比3：1)为展开剂，Rf值为0.3；

式2所示化合物以氯仿：甲醇(体积比3：1)为展开剂，Rf值为0.4；

式3所示化合物以氯仿：甲醇(体积比3：1)为展开剂，Rf值为0.65。

本发明所述式1、2、3所示的具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物可应用于制备抗肿瘤药物。

本发明的有益效果在于：通过本发明获得的新化合物，较原形化合物梓醇6-咖啡酸酯具有较好的肿瘤抑制活性，同时本发明化合物的制备方法简便易行，可用于后续的继续开发。

(四)附图说明

图1：式(1)化合物的高分辨ESI质谱；

图2：式(1)化合物的氢谱；

图3：式(1)化合物的碳谱；

图4：式(1)化合物的HSQC谱；

图5：式(1)化合物的HMBC谱；

图6：式(1)化合物的ROESY谱；

图7：式(2)化合物的高分辨ESI质谱；

图8：式(2)化合物的氢谱；

图9：式(2)化合物的碳谱；

图10：式(2)化合物的HSQC谱；

图11：式(2)化合物的HMBC谱；

图12：式(2)化合物的ROESY谱；

图13：式(3)化合物的高分辨ESI质谱；

图14：式(3)化合物的氢谱；

图15：式(3)化合物的碳谱；

图16：式(3)化合物的HSQC谱；

图17：式(3)化合物的HMBC谱；

图18：式(3)化合物的ROESY谱。

(五)具体实施方式：

下面通过具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。

实施例1：

将梓醇6-咖啡酸酯(104.8mg，0.2mmol)溶解于正丁醇(6ml)中，于65℃反应1.5h，反应结束后，将反应液减压旋干，用反相硅胶柱进行分离，洗脱剂为甲醇体积含量10％-100％的甲醇-水混合溶剂，收集含目标化合物的洗脱液，减压旋干得到浅黄色油状物，产物质量分别为：化合物1—55.9mg，化合物2—23.3mg，化合物3—4.7mg。

所得化合物经过系统结构鉴定，结果如下：

主要利用包括高分辨质谱、核磁共振谱(¹H NMR、¹³C NMR、2D NMR)。

化合物1为浅黄色油状物，HRESIMS(图1)给出准分子离子峰m/z：597.2178[M-H]^-，确定化合物分子式为C₂₈H₃₈O₁₄。

¹H NMR(CD₃OD，600MHz)谱(图2)给出2个反式烯氢质子信号δ_H 6.31(1H,d,J＝15.6Hz)、δ_H 7.60(1H,d,J＝15.6Hz)，一组苯环上的ABX偶和系统质子信号δ_H 6.79(1H,d,J＝7.8Hz)、δ_H 6.97(1H,dd,J＝1.8,7.8Hz)、δ_H 7.07(1H,d,J＝1.8Hz)，3个半缩醛质子信号δ_H 4.75(1H,d,J＝7.8Hz)、δ_H 4.80(1H,dd,J＝2.4,9.0Hz)、δ_H 5.18(1H,d,J＝7.8Hz)，6个亚甲基质子信号δ_H 3.88(1H,m)、δ_H 3.52(1H,m)、δ_H 1.57(2H,m)、δ_H 1.38(2H,m)，3个甲基质子信号δ_H 0.93(3H,t,J＝7.2Hz)。

¹³C NMR(CD₃OD，150MHz)谱、DEPT谱结合HSQC谱(图4、5、6)给出28个碳信号，包括1个羰基碳信号，3个sp2杂化季碳信号，5个sp2杂化次甲基信号，1个sp3杂化季碳信号，6个sp3杂化亚甲基碳信号，11个sp3杂化次甲基碳信号，1个甲基碳信号。(表1)

通过以上分析，并与原料梓醇6-咖啡酸酯的数据对照发现C-3和C-4之间的双键消失，并多出了一个正丁氧基信号。通过HMBC谱中，δ_H 3.88(H-1″′a)、3.52(H-1″′b)和δ_C 99.2(C-3)具有相关信号表明正丁氧基连在C-3位。

通过上述解析，最终确定化合物结构式如式1所示。

化合物2为浅黄色油状物，HRESIMS(图8)给出准分子离子峰m/z：597.2177[M-H]^-，确定化合物分子式为C₂₈H₃₈O₁₄。该化合物¹H和¹³C数据与化合物1非常相似，同时在ROESY谱中具有H-1和H-6、H₂-10、H-1”'a的相关信号，结合H-1和H-9的偶合常数(9.0Hz)，最终确定化合物结构式如式2所示。

化合物3为浅黄色油状物，HRESIMS(图8)给出准分子离子峰m/z：597.2176[M-H]^-，确定化合物分子式为C₂₈H₃₈O₁₄。除了C-7'和C-8'的双键信号消失，该化合物¹H和¹³C数据与梓醇6-咖啡酸酯非常相似。结合HMBC谱中δ_H 4.58(H-7″)与δ_C 172.8(C-9″)、119.5(C-6″)、114.7(C-2″)、69.6(C-1″′)、44.7(C-8″)具有相关信号，表明正丁氧基连在C-7″位。最终确定化合物结构式如式3所示。

表1梓醇6-咖啡酸酯和化合物1、2、3的¹H、¹³C NMR数据^a,b

^aδ为化学位移，其单位为ppm,偶合常数的单位为Hz.

^b该测试是在600MHZ核磁共振波谱仪上进行，氘代试剂为CD₃OD.

实施例2：

将梓醇6-咖啡酸酯(104.8mg，0.2mmol)溶解于正丁醇(8.5ml)中，于85℃反应2h，反应结束后，将反应液减压旋干，用反相硅胶柱进行分离，洗脱剂为甲醇体积含量10％-100％的甲醇-水混合溶剂，收集含目标化合物的洗脱液，减压旋干得到浅黄色油状物，产物质量分别为：化合物1—59.4mg，化合物2—24.7mg，化合物3—5.0mg。

所得化合物经过薄层鉴别和核磁共振谱(¹H NMR)数据最终确定结构。

实施例3：

将梓醇6-咖啡酸酯(104.8mg，0.2mmol)溶解于正丁醇(10ml)中，于100℃反应3h，反应结束后，将反应液减压旋干，用反相硅胶柱进行分离，洗脱剂为甲醇体积含量10％-100％的甲醇-水混合溶剂，收集含目标化合物的洗脱液，减压旋干得到浅黄色油状物，产物质量分别为：化合物1—63.6mg，化合物2—26.5mg，化合物3—5.3mg。

实施例4：

式(1)化合物在体外对HepG2细胞的抑制作用，将HepG2细胞培养在96孔板中(1.00×10⁵个细胞/孔，200.00μL培养基)。孵化24小时后，一系列浓度(0.00、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00μg/mL)的化合物1添加到孔板中并继续孵化24.00h，梓醇6-咖啡酸酯用来作为一个阳性对照。每孔加入20.00μL MTT(5.00mg/mL，即0.50％MTT)，继续培养4.00h，将含有MTT的培养基移除。活细胞中生成的甲瓒晶体溶解于150.00μL DMSO溶液中，低速振荡10.00min，在490nm条件下对各样品进行测定。

通过MTT法测定并计算出各化合物的IC₅₀值，结果如表所示：

体外实验结果表明式(1)化合物较梓醇6-咖啡酸酯在体外对HepG2细胞有较好生长抑制作用。

实施例5：

式(2)化合物在体外对HepG2细胞的抑制作用，将HepG2细胞培养在96孔板中(1.00×10⁵个细胞/孔，200.00μL培养基)。孵化24小时后，一系列浓度(0.00、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00μg/mL)的化合物1添加到孔板中并继续孵化24.00h，梓醇6-咖啡酸酯用来作为一个阳性对照。每孔加入20.00μL MTT(5.00mg/mL，即0.50％MTT)，继续培养4.00h，将含有MTT的培养基移除。活细胞中生成的甲瓒晶体溶解于150.00μL DMSO溶液中，低速振荡10.00min，在490nm条件下对各样品进行测定。

通过MTT法测定并计算出化合物的IC₅₀值，结果如表所示：

体外实验结果表明式(2)化合物较梓醇6-咖啡酸酯在体外对HepG2细胞有较好生长抑制作用。

实施例6：

式(3)化合物在体外对HepG2细胞的抑制作用，将HepG2细胞培养在96孔板中(1.00×10⁵个细胞/孔，200.00μL培养基)。孵化24小时后，一系列浓度(0.00、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00μg/mL)的化合物1添加到孔板中并继续孵化24.00h，梓醇6-咖啡酸酯用来作为一个阳性对照。每孔加入20.00μL MTT(5.00mg/mL，即0.50％MTT)，继续培养4.00h，将含有MTT的培养基移除。活细胞中生成的甲瓒晶体溶解于150.00μL DMSO溶液中，低速振荡10.00min，在490nm条件下对各样品进行测定。

通过MTT法测定并计算出化合物的IC₅₀值，结果如表所示：

体外实验结果表明式(3)化合物较梓醇6-咖啡酸酯在体外对HepG2细胞有较好生长抑制作用。

Claims

1.具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物，其特征在于，如式1、2或3所示：

2.如权利要求1所述式1、2、3所示的具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

所述正丁醇的体积用量以原料梓醇6-咖啡酸酯的物质的量计为25～50mL/mmol。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述柱色谱分离采用反相硅胶柱，以C18为填料，体积分数10％～100％的甲醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，TLC监测，收集含目标化合物的洗脱液，蒸除溶剂并干燥，得到目标产物。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱剂依次为：体积分数10％的甲醇水溶液、体积分数40％的甲醇水溶液、体积分数60％的甲醇水溶液、100％甲醇。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述TLC监测的条件分别为：

式1所示化合物以氯仿：甲醇体积比3：1的混合液为展开剂，Rf值为0.3；

式2所示化合物以氯仿：甲醇体积比3：1的混合液为展开剂，Rf值为0.4；

式3所示化合物以氯仿：甲醇体积比3：1的混合液为展开剂，Rf值为0.65。

6.如权利要求1所述式1、2、3所示的具有正丁氧基的梓醇6-咖啡酸酯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。