CN108315267A - 短密木霉gsaamlshu-1及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及短密木霉GSAAMLSHU‑1及其应用。本发明的短密木霉(Trichoderma brevicompactum)GSAAMLSHU‑1，保藏号CGMCC NO.15391。菌株GSAAMLSHU‑1具有广谱的拮抗植物病原真菌的作用，可用于农作物病害防治；同时由于该菌株对多种植物生长发育相对安全，且在一定浓度范围内对玉米、小麦、大豆的生长发育具有促进作用，因此有望作为菌肥对作物生长发育起到良好的作用，克服化学农药过多应用带来的一系列问题，在农业生产中具有广阔的应用前景。

Description

短密木霉GSAAMLSHU-1及其应用
技术领域
本发明属于微生物领域，具体地说，涉及短密木霉 GSAAMLSHU-1及其应用。
背景技术
随着化学农药的长期和大量使用而引起的农药残留，环境污染和病虫的抗药性等问题日益凸显，给人民的生命安全和经济收入带来了巨大的风险。为了解决化学农药对环境和农产品的污染问题，世界各国纷纷出台各种措施，限制和减少化学农药的使用，丹麦自1998年6 月起全国禁止使用化学农药。我国政府高度重视农业可持续发展，1997年7月，国家计委、科技部等部门在编制《当前优先发展的高技术产业化重点领域指南》中，把“高效安全生物农药及生物防治技术”确定为优先发展的重点领域，开发利用对非靶标生物安全、对环境友好的生物农药已引起全世界的广泛重视。
生物防治，即利用了生物物种间的相互关系，通过有益生物或其他生物来抑制或消灭有害生物的一种防治方法，与传统化学防治相比较，具有无污染、无公害、长效性等优点，具有广阔的发展前景，是实现生态农业的重要保障。
木霉属(Trichoderma Pers.)真菌是土壤习居菌的主要成员，广泛存在于土壤、作物根际周围、叶围、种子和球茎等生态环境中。木霉菌能产生木霉素、胶霉素、绿啶、抗菌肽等，是酮类、萜类、多肽类、氨基酸衍生物等，其中很多木霉菌种对植物病原真菌具有较强的拮抗作用，广泛应用于植物病害的生物防治中。木霉菌除能防治病虫害外，还具有提高营养利用效率、促进植物生长、增强植物抗逆性和修复农化污染环境等功能。因此，利用木霉菌等微生物资源来防治植物病虫害已成为必然趋势。
发明内容
本发明的目的是提供一株具有广谱拮抗植物病原真菌作用的短密木霉(Trichoderma brevicompactum)GSAAMLSHU-1。
本发明的另一目的是提供短密木霉在防治植物病害以及促进植物生长发育中的应用。
为了实现本发明目的，发明人从甘肃省景泰县条山农场马铃薯连作试验田采集的土样中分离纯化得到一株具有广谱拮抗植物病原真菌作用的真菌GSAAMLSHU-1。菌株在PDA培养基上可产生气生菌丝，菌落正面绒毛状至毡状，白色浓厚蓬松，突起于表面，呈明显同心圆状，5d后PDA上长满大量深绿色或黄绿色孢子，背面反面黄褐色。在SNA培养基上长满细微透明菌丝，白色絮状，青绿色孢子，孢子微量，散布于整个平皿，边缘较多，有酒味。分生孢子梗主轴较粗，节较短，侧枝极短粗，分生孢子梗形状似梨形，饱满，基部开始膨大，颈部缢缩，4-8个成为一簇长在各枝端、节点上，整体似葱花。分生孢子卵圆形，光滑。PCR扩增菌株GSAAMLSHU-1的EF-1α基因序列，扩增产物大小为393bp。对扩增产物进行测序，测序结果如SEQ ID NO:1所示。与GenBank核苷酸数据库中已有的木霉菌EF-1α基因序列进行比对，GSAAMLSHU-1与GenBank上登录号为AB558910 (Trichoderma brevicompactum)、EU280056(T.brevicompactum)、 KP985653(T.brevicompactum)、GU592404(T.brevicompactum)、HM234081(T.brevicompactum)的亲缘关系最近，同源性达97％以上。利用DNAstar软件进行聚类分析，构建聚类分析图，发现菌株 GSAAMLSHU-1亦与以上亲缘关系最近的短密木霉位于系统发育树的同一分支，聚为一类。以ITS1和ITS4为引物，菌株GSAAMLSHU-1 的基因组DNA为模板，进行PCR扩增后，将PCR产物纯化后测序，PCR 产物大小为611bp(SEQ ID NO:2)。将ITS基因序列在Genbank上比对后，发现菌株GSAAMLSHU-1的rDNA-ITS序列为木霉菌范畴，菌株 GSAAMLSHU-1与GenBank中登记的KX092002(Trichoderma brevicompactum)、KC561068(T.brevicompactum)、KU851839 (T.brevicompactum)、KC884785(T.brevicompactum)和HQ596986 (T.brevicompactum)的亲缘关系最近，同源性均达99％。利用DNAStar 软件绘制其系统发育树状图，结果表明，菌株GSAAMLSHU-1亦与以上亲缘关系最近的短密木霉位于系统发育树的同一分支，聚为一类。根据菌株GSAAMLSHU-1的菌学特征、rDNA-ITS和EF-1α序列分析结果，将其鉴定为半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、粘孢菌类的木霉属真菌，短密木霉(Trichoderma brevicompactum)。菌株GSAAMLSHU-1 现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编 100101，保藏日期2018年3月26日，保藏编号CGMCCNO.15391。
本发明还提供一种病原菌抑制剂，其活性成分为短密木霉 GSAAMLSHU-1和/或其代谢产物。
所述病原菌抑制剂对禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、肿囊腐霉(Pythiuminflatum)、菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.) de Bary)、苹果腐烂病菌(Valsamali)、西瓜枯萎病菌(F.oxysporum f.sp.Niveum)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)、葡萄灰霉病菌 (Botrytis cinerea)、接骨木镰刀菌(Fusarium sambucinum)、茄病镰刀菌(Fusarium solani)、轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)等多种植物病原真菌均具有抑制作用。
本发明还提供一种植物病害抑制剂，其活性成分为短密木霉 GSAAMLSHU-1和/或其代谢产物。
所述植物病害包括玉米根腐病、玉米茎腐病、玉米穗腐病、马铃薯干腐病、油菜菌核病、大豆菌核病、苹果腐烂病、西瓜枯萎病、玉米大斑病、葡萄灰霉病等主要由植物病原真菌导致的植物病害。
其中，所述玉米根腐病由禾谷镰刀菌和/或肿囊腐霉引起。
本发明还提供所述短密木霉GSAAMLSHU-1的下述任一种应用：
1)短密木霉GSAAMLSHU-1在抑制病原菌中的应用；
2)短密木霉GSAAMLSHU-1在制备病原菌抑制剂中的应用；
3)短密木霉GSAAMLSHU-1在抑制植物病害中的应用；
4)短密木霉GSAAMLSHU-1在制备植物病害抑制剂中的应用。
1)-4)中，所述病原菌选自禾谷镰刀菌、肿囊腐霉、菌核病菌、苹果腐烂病菌、西瓜枯萎病菌、玉米大斑病菌、葡萄灰霉病菌、接骨木镰刀菌、茄病镰刀菌、轮枝镰刀菌等多种植物病原真菌。所述植物病害包括玉米根腐病、玉米茎腐病、玉米穗腐病、马铃薯干腐病、油菜菌核病、大豆菌核病、苹果腐烂病、西瓜枯萎病、玉米大斑病、葡萄灰霉病等主要由植物病原真菌导致的植物病害。
本发明还提供一种植物促生长剂，其活性成分为短密木霉 GSAAMLSHU-1和/或其代谢产物、发酵液、菌悬液、菌剂、孢子悬液。
所述植物促生长剂对玉米、小麦、大豆等多种作物及大棚蔬菜的生长发育均具有促进作用。
本发明进一步提供所述短密木霉GSAAMLSHU-1的下述任一种应用：
5)短密木霉GSAAMLSHU-1在促进植物生长发育以及提高作物产量中的应用；
6)短密木霉GSAAMLSHU-1在制备植物促生长剂中的应用；
7)短密木霉GSAAMLSHU-1在制备农用肥料中的应用；
8)短密木霉GSAAMLSHU-1在制备生物菌肥中的应用。
前述的应用，将短密木霉GSAAMLSHU-1的菌丝、菌饼、发酵液、菌悬液、菌剂和/或孢子悬液进行拌种，或作为基肥，或用作追肥施用于植物(如玉米、小麦、大豆)生长区域。
本发明的短密木霉GSAAMLSHU-1具有广谱的拮抗植物病原真菌的作用，可用于农作物病害防治；同时由于该菌株对多种植物生长发育相对安全，且在一定浓度范围内对玉米、小麦、大豆的生长发育具有促进作用，因此有望作为菌肥对作物生长发育起到良好的作用，克服化学农药过多应用带来的一系列问题，在农业生产中具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例2中短密木霉GSAAMLSHU-1对供试植物病原真菌菌落生长抑制作用结果。图中a1为短密木霉菌株 GSAAMLSHU-1与禾谷镰刀菌对峙培养结果,a2为对照禾谷镰刀菌； b1为短密木霉菌株GSAAMLSHU-1与肿囊腐霉菌对峙培养结果，b2 为对照肿囊腐霉菌。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
实施例1短密木霉GSAAMLSHU-1的分离和鉴定
1.菌株的分离
在马铃薯成熟期，从甘肃省景泰县条山农场马铃薯连作试验田采用五点取样法从马铃薯植株周围采集0-20cm耕作层土样，同一小区内的土样混合均匀、编号并装入保鲜袋中，带回实验室进行土壤木霉真菌分离。以玉米根腐病病原菌禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum) 和肿囊腐霉(Pythium inflatum)为靶标菌，利用平板对峙培养对纯培养菌株进行抑菌活性检测，筛选出具有明显抑菌活性的真菌 GSAAMLSHU-1。
2、菌株的鉴定
2.1形态学鉴定
菌株在PDA培养基上可产生气生菌丝，菌落正面绒毛状至毡状，白色浓厚蓬松，突起于表面，呈明显同心圆状，5d后PDA上长满大量深绿色或黄绿色孢子，背面反面黄褐色。在SNA培养基上长满细微透明菌丝，白色絮状，青绿色孢子，孢子微量，散布于整个平皿，边缘较多，有酒味。分生孢子梗主轴较粗，节较短，侧枝极短粗，分生孢子梗形状似梨形，饱满，基部开始膨大，颈部缢缩，4-8个成为一簇长在各枝端、节点上，整体似葱花。分生孢子卵圆形，光滑。
根据菌株的培养特性和形态特征，确定其分类地位为半知菌亚门 (Deuteromycotina)，丝孢纲(Hyphomycetes)，丝孢目(Hyphomycetales)，粘孢菌类(Gloiosporae)木霉属(Trichoderma)真菌的短密木霉(T. brevicompactum)。
2.2分子生物学鉴定
GSAAMLSHU-1的基因组DNA用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA 质量，得到比较单一的条带，电泳条带明亮，带型较宽，DNA含量较高。PCR扩增菌株GSAAMLSHU-1的EF-1α基因序列，扩增产物大小为393bp。对扩增产物进行测序，与GenBank核苷酸数据库中已有的木霉菌EF-1α基因序列进行比对，GSAAMLSHU-1与GenBank上登录号为AB558910(Trichodermabrevicompactum)、EU280056 (T.brevicompactum)、KP985653(T.brevicompactum)、GU592404 (T.brevicompactum)、HM234081(T.brevicompactum)的亲缘关系最近，同源性达97％以上。利用DNAstar软件进行聚类分析，构建聚类分析图，发现菌株GSAAMLSHU-1亦与以上亲缘关系最近的短密木霉位于系统发育树的同一分支，聚为一类。以ITS1和ITS4为引物，菌株 GSAAMLSHU-1的基因组DNA进行PCR扩增后，将PCR产物纯化后测序，得到了大小为611bp的碱基序列。将ITS基因序列在Genbank上比对后，发现菌株GSAAMLSHU-1的rDNA-ITS序列为木霉菌范畴，菌株GSAAMLSHU-1与GenBank中登记的KX092002(Trichodermabrevicompactum)、KC561068(T.brevicompactum)、KU851839 (T.brevicompactum)、KC884785(T.brevicompactum)和HQ596986 (T.brevicompactum)的亲缘关系最近，同源性均达99％。利用DNAStar 软件绘制其系统发育树状图，结果表明，菌株GSAAMLSHU-1亦与以上亲缘关系最近的短密木霉位于系统发育树的同一分支，聚为一类。
根据菌株GSAAMLSHU-1的菌学特征、rDNA-ITS和EF-1α序列分析结果，将其鉴定为半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、粘孢菌类的木霉属真菌，短密木霉(Trichodermabrevicompactum)。
实施例2短密木霉GSAAMLSHU-1对玉米茎腐病病原菌的抑制作用
1、试验方法及调查项目
将实验室里保存的玉米茎腐病病原菌禾谷镰刀菌 (F.graminearum)和肿囊腐霉(Pythium inflatum)从斜面转接到PDA 上进行活化，25℃培养，待菌丝长满平板后，用打孔器打成直径为6 mm的菌饼，将木霉菌菌饼和玉米茎腐病病原菌菌饼分别转接于PDA 平板两侧，两菌饼相距4cm，25℃恒温培养5d。观察记录木霉菌和茎腐病病原菌的菌落半径。以只接茎腐病病原菌不接木霉菌为对照。每处理重复5个平板。测量菌落生长速度计算菌丝抑制率。其中PDA配方为：马铃薯200g、葡萄糖15g、琼脂12g、水1000mL。
2、菌落抑制率计算方法
3、试验结果
由试验结果可知(见图1：a1,a2,b1,b2)，短密木霉菌株GSAAMLSHU-1对禾谷镰孢菌和肿囊腐霉菌有较好的抑菌效果，培养 5d后抑菌率分别达为66.5％和100％。其中短密木霉菌株 GSAAMLSHU-1与肿囊腐霉菌对峙培养5d后，短密木霉菌株 GSAAMLSHU-1将肿囊腐霉菌完全覆盖；而其与禾谷镰刀菌的对峙培养结果显示，培养5d后两者互相抑制，菌落再不向前生长。
实施例3短密木霉GSAAMLSHU-1的抑菌谱测定
1、试验方法
采用菌丝生长抑制法对菌株GSAAMLSHU-1进行抑菌谱的测定。菌丝生长抑制法：将实验室里保存的各种植物病原真菌从斜面转接到 PDA上进行活化，25℃培养，待菌丝长满平板后，用打孔器打成直径为6mm的菌饼，将短密木霉菌株GSAAMLSHU-1菌饼和各种植物病原真菌菌饼分别转接于PDA平板两侧，两菌饼相距4cm，25℃恒温培养5d。观察记录短密木霉菌株GSAAMLSHU-1和各种植物病原菌的菌落半径。以只接植物病原菌不接短密木霉菌株GSAAMLSHU-1为对照。每处理重复5个平板。测量菌落生长速度计算菌丝抑制率，其中计算方法和PDA配方同实施例2。
2、试验结果
由试验结果表明(表1)，短密木霉菌株GSAAMLSHU-1对10种供试的植物病原真菌菌丝生长均有较好的抑制效果，具有较广的抗真菌谱。
表1短密木霉菌株GSAAMLSHU-1对供试植物病原真菌菌落生长抑制作用
编号 植物病原真菌 菌丝抑制率(％)
1 油菜菌核(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary) 61.48
2 苹果腐烂病菌(Valsa mali) 66.67
3 大麦赤霉病菌(F.graminearum) 43.75
4 西瓜枯萎病菌(F.oxysporum f.sp.Niveum) 56.30
5 玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum) 53.00
6 葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea) 65.12
7 接骨木镰刀菌(F.sambucinum) 64.04
8 茄病镰刀菌(F.solani) 71.43
9 轮枝镰刀菌(F.verticillioides) 59.84
10 大豆菌核病(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary) 59.26
实施例4短密木霉GSAAMLSHU-1对玉米和小麦生长发育的影响
1、孢子悬浮液制备方法
将5℃低温保存的短密木霉菌株GSAAMLSHU-1活化后，接种于 PDA培养基上，在28℃恒温培养箱里恒温生长4d后，先用无菌水配置浓度为1×107个/mL的孢子悬浮液原液，再依次稀释成1×106个/mL 和1×105个/mL的孢子悬浮液备用。
2、试验方法及调查指标
挑选健康和大小均一的玉米品种(金穗3号)和小麦种子(辉县红)，经75％酒精消毒10min后，再用无菌水冲洗3次。将处理后的种子放入垫有双层滤纸的直径为90mm的无菌培养皿中，每皿分别加入 10粒玉米种和15粒小麦种子，然后向每个培养皿中分别加入不同浓度的孢子悬浮液10mL。置于25℃的恒温黑暗培养箱中保湿处理，每天喷施适量的无菌水。以无菌水处理作为对照，共设置3个处理和1个对照，每个处理和对照重复4次。7d后测量发芽率、芽长、根长、根数、芽鲜重、根鲜重。
3、试验结果
①由试验结果可知：与对照相比较，该菌株1.0×105CFU/mL、 1.0×106CFU/mL、1.0×107CFU/mL对玉米发芽率、根数、芽鲜重及根鲜重的影响差异不显著(P＞0.05)；1.0×105CFU/mL和1.0×106 CFU/mL对玉米根长、芽长的影响呈显著差异(P＜0.05)，有一定的促生作用(表2)。
表2不同浓度的短密木霉菌株GSAAMLSHU-1对玉米形态学指标的影响
注：表中同列数据后标相同小写字母，表示经过Duncan新复极差测试，在P0.05水平上差异不显著。下同。
②与对照相比较，该菌株1.0×105CFU/mL、1.0×106CFU/mL、 1.0×107CFU/mL对小麦芽长、根数、芽鲜重及根鲜重的影响差异不显著(P＞0.05)；但1.0×105CFU/mL、1.0×106CFU/mL和1.0×107 CFU/mL对小麦发芽率及根长的影响呈显著差异(P＜0.05)，有一定的促生作用(表3)。
表3不同浓度的短密木霉菌株GSAAMLSHU-1对小麦形态学指标的影响
实施例5短密木霉GSAAMLSHU-1对大豆生长发育的影响
1、试验方法及调查指标
在大豆种植前，穴施短密木霉固体发酵物50g，待到大豆成株期进行大豆形态学指标调查，包括株高、地上鲜重、结荚数量。
2、试验结果
由试验结果可知：与对照相比较，该菌株对大豆株高和结荚数的影响呈极显著差异(P＜0.01)，有一定的促生作用(表4)。
表4不同浓度的短密木霉菌株GSAAMLSHU-1对小麦形态学指标的影响
实施例6短密木霉GSAAMLSHU-1对玉米苗期根腐病防治效果
1、试验方法
将短密木霉菌株GSAAMLSHU-1接种于PDA培养基上，置于25 ℃恒温培养箱种培养，待其产生孢子后用灭菌水洗下，配成1×108个/ mL、1×106个/mL、1×104个/mL的孢子悬浮液。选择大小均一的玉米种子(诚信16号))，70％酒精消毒5min后用无菌水洗涤3次。每盆土1kg，播种6粒种子。萌发后选取生长均一的幼苗留下。接种前抛开根部土壤，用解剖刀切开根部，在伤口处接种直径为50mm2块病原菌后，用土覆盖。5d后将配置好的生防木霉菌孢子悬浮液每盆灌根50mL。 10d后调查各处理玉米的发病情况，计算病情指数和防效。
2、病情指数及防效
3、玉米根腐病分级标准
0级，根系健全，无病斑；1级，根系上有零星病斑点，但不连片； 2级，根病斑连片，但小于根部周长的1/4；3级，根病斑大于周长的 1/2，但小于3/4；5级，整个根部均有病斑包围，根部腐烂。
4、结果见表5
由试验结果可知：短密木霉菌株GSAAMLSHU-1发酵液在1×104、 1×106、1×108处理下对玉米根腐病都具有一定的防治效果。尤其1×104对对玉米根腐病具有较好的防效，与其它各处理相比，差异显著(p< 0.05)。
表5不同浓度的短密木霉菌株GSAAMLSHU-1对玉米苗期根腐病防效
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 甘肃省农业科学院植物保护研究所
<120> 短密木霉GSAAMLSHU-1及其应用
<130> KHP181111050.8
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ttacttgaag gaacccttac cgagttcggc ggcttcctgt tgagggggaa atgggtcagt 60
acaactgaag aagatgaaaa ggatagtagc gacgattgag atgtgatgag atgcattggg 120
tgatgaagag tatcaacagg taacagagcg tcactggtag tagtgggggt ttgctccaag 180
aagtaccccc actaaaacct agtaaggcag caaaaaaatt ttgcaggtct gtaccaaagg 240
aggggtaggc cgcgaaagcg gggtgaccat gaaaaaaaaa attgacacga aatcctcaaa 300
taactgagaa ttgtcgggca caattgcatg gagtgaaggt caaaatgaga gagaaaatca 360
ggcgtaagct taccttctcg acttctcgat gac 393
<210> 2
<211> 611
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aggggggcct gcggagggat cattaccgag tttacaactc ccaaacccca atgtgaacgt 60
taccaaactg ttgcctcggc gggatttctg ccccgggcgc gtcgcagccc cggaccaagg 120
cgcccgccgg aggaccaatt tacaaactct tttgtatatc ccatcgcgga ttctttacat 180
tctgagcttt ctcggcgctc ctagcgagcg tttcgaaaat gaatcaaaac tttcaacaac 240
ggatctcttg gttctggcat cgatgaagaa cgcagcgaaa tgcgataagt aatgtgaatt 300
gcagaattca gtgaatcatc gaatctttga acgcacattg cgcccgccag tattctggcg 360
ggcatgcctg tccgagcgtc atttcaaccc tcgaacccct ccggggggtc ggcgttgggg 420
atcggcactt acctgccggc cccgaaatac agtggcggtc tcgccgcagc ctctcctgcg 480
cagtagtttg cacactcgca ccgggagcgc ggcgcgtcca cggccgtaaa acaacccaaa 540
cttctgaaat gttgacctcg gatcaggtag gaatacccgc tgaacttaag catatcaaaa 600
gccgggagga a 611

Claims (10)

1.短密木霉(Trichoderma brevicompactum)GSAAMLSHU-1，保藏号CGMCC NO.15391。
2.病原菌抑制剂，其特征在于，其活性成分为权利要求1所述的短密木霉和/或其代谢产物；
所述病原菌抑制剂对禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、肿囊腐霉(Pythiuminflatum)、菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)、苹果腐烂病菌(Valsamali)、西瓜枯萎病菌(F.oxysporumf.sp.Niveum)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)、葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、接骨木镰刀菌(Fusarium sambucinum)、茄病镰刀菌(Fusarium solani)、轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)具有抑制作用。
3.植物病害抑制剂，其特征在于，其活性成分为权利要求1所述的短密木霉和/或其代谢产物；
所述植物病害包括玉米根腐病、玉米茎腐病、玉米穗腐病、马铃薯干腐病、油菜菌核病、大豆菌核病、苹果腐烂病、西瓜枯萎病、玉米大斑病、葡萄灰霉病。
4.根据权利要求2所述的植物病害抑制剂，其特征在于，所述玉米根腐病由禾谷镰刀菌和/或肿囊腐霉引起。
5.权利要求1所述短密木霉的下述任一种应用：
1)权利要求1所述的短密木霉在抑制病原菌中的应用；
2)权利要求1所述的短密木霉在制备病原菌抑制剂中的应用；
3)权利要求1所述的短密木霉在抑制植物病害中的应用；
4)权利要求1所述的短密木霉在制备植物病害抑制剂中的应用；
1)-4)中，所述病原菌选自禾谷镰刀菌、肿囊腐霉、菌核病菌、苹果腐烂病菌、西瓜枯萎病菌、玉米大斑病菌、葡萄灰霉病菌、接骨木镰刀菌、茄病镰刀菌、轮枝镰刀菌；所述植物病害包括玉米根腐病、玉米茎腐病、玉米穗腐病、马铃薯干腐病、油菜菌核病、大豆菌核病、苹果腐烂病、西瓜枯萎病、玉米大斑病、葡萄灰霉病。
6.植物促生长剂，其特征在于，其活性成分为权利要求1所述的短密木霉和/或其代谢产物、发酵液、菌悬液、菌剂、孢子悬液。
7.根据权利要求6所述的植物促生长剂，其特征在于，所述植物促生长剂对玉米、小麦、大豆的生长发育具有促进作用。
8.权利要求1所述短密木霉的下述任一种应用：
5)权利要求1所述的短密木霉在促进植物生长发育以及提高作物产量中的应用；
6)权利要求1所述的短密木霉在制备植物促生长剂中的应用；
7)权利要求1所述的短密木霉在制备农用肥料中的应用；
8)权利要求1所述的短密木霉在制备生物菌肥中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将权利要求1所述短密木霉的菌丝、菌饼、发酵液、菌悬液、菌剂和/或孢子悬液进行拌种，或作为基肥，或用作追肥施用于植物生长区域。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述植物包括玉米、小麦、大豆。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109182146A (zh) * 2018-09-29 2019-01-11 武汉友芹种苗技术有限公司 一种脐孢木霉菌株及其应用
CN111466415A (zh) * 2020-04-24 2020-07-31 上海交通大学 利用木霉菌剂诱导玉米抗镰孢菌穗腐病的方法
CN112273390A (zh) * 2020-06-30 2021-01-29 中国农业科学院生物技术研究所 化合物harzianums及其产生菌的除草活性
CN112899170A (zh) * 2021-01-28 2021-06-04 贵州省生物技术研究所(贵州省生物技术重点实验室、贵州省马铃薯研究所、贵州省食品加工研究所) 一种短密木霉及其应用
CN113519514A (zh) * 2021-08-13 2021-10-22 甘肃省农业科学院植物保护研究所 短密木霉gsaamlshu-1水分散粒剂及其制备方法与应用
CN113913304A (zh) * 2021-11-15 2022-01-11 中国农业科学院特产研究所 一种短密木霉、人参病原菌抑菌剂及其应用
CN115948254A (zh) * 2022-12-15 2023-04-11 扬州大学 一种绿木霉192-45及其应用
CN117431166A (zh) * 2023-12-20 2024-01-23 南京农业大学三亚研究院 短密木霉菌新菌株tb2及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104342461A (zh) * 2014-10-15 2015-02-11 中国计量学院 一种提高脐孢木霉菌合成木霉素的方法
CN105462858A (zh) * 2016-01-04 2016-04-06 北京市农林科学院 一株短密木霉及其在黄瓜枯萎病防治中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104342461A (zh) * 2014-10-15 2015-02-11 中国计量学院 一种提高脐孢木霉菌合成木霉素的方法
CN105462858A (zh) * 2016-01-04 2016-04-06 北京市农林科学院 一株短密木霉及其在黄瓜枯萎病防治中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WOO ET AL.: "The Molecular Biology of the Interactions between Trichoderma spp., Phytopathogenic Fungi,and Plants", 《PHYTOPATHOLOGY》 *
孟有儒等: "《玉米病害概论》", 31 October 2004, 甘肃科学技术出版社 *
杨军玉等: "《蔬菜病虫害防治彩色图鉴》", 28 February 2016, 金盾出版社 *
贾丙志: "多功能木霉对纤维素和农药的降解特性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109182146B (zh) * 2018-09-29 2021-05-11 武汉友芹种苗技术有限公司 一种脐孢木霉菌株及其应用
CN109182146A (zh) * 2018-09-29 2019-01-11 武汉友芹种苗技术有限公司 一种脐孢木霉菌株及其应用
CN111466415A (zh) * 2020-04-24 2020-07-31 上海交通大学 利用木霉菌剂诱导玉米抗镰孢菌穗腐病的方法
CN112273390B (zh) * 2020-06-30 2021-12-10 中国农业科学院生物技术研究所 化合物harzianums及其产生菌的除草活性
CN112273390A (zh) * 2020-06-30 2021-01-29 中国农业科学院生物技术研究所 化合物harzianums及其产生菌的除草活性
CN112899170A (zh) * 2021-01-28 2021-06-04 贵州省生物技术研究所(贵州省生物技术重点实验室、贵州省马铃薯研究所、贵州省食品加工研究所) 一种短密木霉及其应用
CN112899170B (zh) * 2021-01-28 2022-09-16 贵州省生物技术研究所(贵州省生物技术重点实验室、贵州省马铃薯研究所、贵州省食品加工研究所) 一种短密木霉及其应用
CN113519514A (zh) * 2021-08-13 2021-10-22 甘肃省农业科学院植物保护研究所 短密木霉gsaamlshu-1水分散粒剂及其制备方法与应用
CN113913304A (zh) * 2021-11-15 2022-01-11 中国农业科学院特产研究所 一种短密木霉、人参病原菌抑菌剂及其应用
CN115948254A (zh) * 2022-12-15 2023-04-11 扬州大学 一种绿木霉192-45及其应用
CN115948254B (zh) * 2022-12-15 2023-12-01 扬州大学 一种绿木霉192-45及其应用
CN117431166A (zh) * 2023-12-20 2024-01-23 南京农业大学三亚研究院 短密木霉菌新菌株tb2及其应用
CN117431166B (zh) * 2023-12-20 2024-02-23 南京农业大学三亚研究院 短密木霉菌新菌株tb2及其应用

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