CN113519514A - 短密木霉gsaamlshu-1水分散粒剂及其制备方法与应用 - Google Patents

短密木霉gsaamlshu-1水分散粒剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种短密木霉GSAAMLSHU‑1水分散粒剂及其制备方法与应用。所述水分散粒剂的最佳配方为:短密木霉GSAAMLSHU‑1母药以及母药质量百分数0.5%的抗坏血酸、4%的碳酸钙、5%的凹凸棒土、5%的可溶性淀粉、5%的十二烷基苯磺酸钠和5%的聚乙烯基吡咯烷酮;所述水分散粒剂的含水量为33%‑37%;短密木霉孢子的含量为2.9×108cfu/g‑5.1×108cfu/g。本发明提供的短密木霉GSAAMLSHU‑1水分散粒剂有效成分含量高,可以延长菌剂的保存时间,提高使用效率,增加木霉菌的利用价值,能有效防治玉米苗期根腐病和茎腐病。

Description

短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及生物农药领域,具体地说,涉及短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂及其制备方法与应用。
背景技术
我国是农业大国,农业是国民经济的基础。农药是重要的农业生产资料,对防病治虫、促进粮食稳产和高产至关重要。然而,由于化学农药的长期过量使用,使得病虫耐药性提高,防效降低,同时对土壤、水质乃至生态环境造成了非常严重的负面影响,给植物的安全带来巨大隐患。因此,生防菌剂便以其风险低、环境相容性好的优点凸显了出来。木霉属(Trichoderma Pers.)真菌作为一种适应性强、抗菌谱广、拮抗机制多样化的生防菌,在自然界广泛分布和存在。由于其培养条件简单,繁殖速度快,符合工业化生产的需要,被公认为可取代化学试剂,是开发生防制剂防治植物病害的有力竞争者,目前已有多种木霉菌被广泛应用于生物防治。
目前,市场上的木霉制剂货架期短,产孢活性较差,易导致其在田间防效稳定性不高,在运输和储存过程中也易受光照、温度等多种因素的干扰。与传统农药剂型相比,水分散粒剂具有有效成分含量高、悬浮性高、分散性好、储藏时间长和便于运输等优点。玉米苗期根腐病和茎腐病主要是由禾谷镰孢(Fusarium graminearum)和肿囊腐霉(Pythiuminflatum)引起的重要土传病害,在现今大力提倡食品安全和生态农业的背景下,生物防治的开展显得尤为重要。通过对峙试验筛选出对禾谷镰孢和肿囊腐霉具有明显拮抗作用的短密木霉GSAAMLSHU-1,该菌株具有广谱抗病性,其分生孢子悬浮液对玉米苗期根腐病有一定的防治效果,同时在一定浓度范围内对农作物的生长发育具有促进作用。因此,开发以短密木霉GSAAMLSHU-1为活性成分的水分散粒剂,对提高其生物利用度,最大发挥药效具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂及其制备方法与应用。
为了实现本发明目的,第一方面,本发明提供一种短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂,所述水分散粒剂的最佳配方为:短密木霉GSAAMLSHU-1母药以及母药质量百分数0.5%的抗坏血酸、4%的碳酸钙、5%的凹凸棒土、5%的可溶性淀粉、5%的十二烷基苯磺酸钠和5%的聚乙烯基吡咯烷酮(PVP);所述水分散粒剂的含水量为33%-37%。
所述短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂中短密木霉孢子的含量为2.9×108cfu/g-5.1×108cfu/g(优选5.1×108cfu/g)。
短密木霉GSAAMLSHU-1的保藏号为CGMCC NO.15391,可参见ZL201810331181.4。
短密木霉GSAAMLSHU-1母药的制备方法包括以下步骤:
(1)液体菌种的制备
向装有75mL液体培养基的150mL三角瓶中接入1mL浓度为107cfu/g的短密木霉孢子悬浮液,在25℃、140r/min摇床上培养5d,即为液体菌种。
所述液体培养基的制备方法如下:
称取以下原料:马铃薯200g,葡萄糖20g,蒸馏水1000mL;将去皮马铃薯切成小块放入锅中,加蒸馏水1000mL,煮沸30min,稍冷后用四层纱布滤去马铃薯,将滤液倒入量杯中,加入葡萄糖,充分溶解后,加水定容至1000mL;然后分装于三角瓶中,121℃高温灭菌30min。
短密木霉孢子悬浮液的制备方法如下:
将低温保存的短密木霉菌种活化后,打成直径为5mm的菌块,接种于PDA培养基中,于25℃恒温培养箱中光照(24h,10000lx)培养4d后,加入10mL无菌水并滴入0.05mL吐温-80,缓慢摇晃,使分生孢子充分脱落,用无菌水将原液稀释成浓度为107cfu/g的溶液,备用。
(2)固体菌种的制备
向固体培养基中接入占固体培养基总质量20%的液体菌种,搅拌均匀,于25℃恒温培养箱中,光照强度10000lx(24h)培养7d后,于30℃干燥箱中烘干,即为固体菌种。
所述固体培养基的制备方法如下:
将麦麸和玉米秸秆按3:1的质量比混合,向混合物中加入蒸馏水,使混合物的质量百分数为60%,拌匀后用纱布封口,121℃高温灭菌60min,冷却至室温。
(3)母药的制备
向最佳培养基质中接入质量百分数为50%的固体菌种,在25℃恒温暗培养的条件下进行扩繁,得到短密木霉GSAAMLSHU-1母药。
所述最佳培养基质的制备方法如下:
分别将大麦、高粱、小麦、棉籽壳拌水,待充分吸水后,将吸水后的各物料按等质量比混合,置于塑料袋中,封口,121℃高温灭菌60min;然后冷却至室温,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值为6-7。
第二方面,本发明提供所述水分散粒剂的制备方法,将短密木霉GSAAMLSHU-1母药用鼓风干燥机干燥制成母粉,在母粉中按比例加入抗坏血酸、碳酸钙、凹凸棒土、可溶性淀粉和十二烷基苯磺酸钠,,然后向混合物中喷入预先配制好的聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)溶液,使含水量保持在33%-37%,挤压造粒即得。控制产品粒径范围为1~500mm。
第三方面,本发明提供所述水分散粒剂的以下任一应用:
1)用于抑制病原菌以及病原菌所致植物病害;
2)用于促进植物生长发育以及提高作物产量;
3)用于制备农用肥料。
借由上述技术方案,本发明至少具有下列优点及有益效果:
本发明提供的短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂有效成分含量高,可以延长菌剂的保存时间,提高使用效率,增加木霉菌的利用价值,能有效防治玉米苗期根腐病和茎腐病。
附图说明
图1为本发明较佳实施例中不同配比基质对菌株GSAAMLSHU-1产孢量的影响。
图2为本发明较佳实施例中紫外保护剂对菌株GSAAMLSHU-1产孢量的影响。
图3为本发明较佳实施例中稳定剂对菌株GSAAMLSHU-1产孢量的影响。
图4为本发明较佳实施例中载体对菌株GSAAMLSHU-1产孢量的影响。
图5为本发明较佳实施例中崩解剂对菌株GSAAMLSHU-1产孢量的影响。
图6为本发明较佳实施例中湿润剂对菌株GSAAMLSHU-1产孢量的影响。
图7为本发明较佳实施例中黏结剂对菌株GSAAMLSHU-1产孢量的影响。
图8为短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的储藏期孢子萌发率的变化。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段,所用原料均为市售商品。
实施例1短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的制备
1材料与方法
1.1供试材料及仪器
短密木霉GSAAMLSHU-1由甘肃省农业科学院植物保护研究所提供;麦麸等基质由甘肃省农科院食用菌研究室提供;99%炭黑购自郑州正浩化工产品有限公司;99%抗坏血酸(VC)购自上海谱振生物科技有限公司;99%羧甲基纤维素(CMC)购自北京鼎丰基业生物科技发展有限公司;98%碳酸钙、磷酸钾购自天津市大茂化学试剂厂;十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠及皂角粉购自天津市凯信化学工业有限公司;凹凸棒土、膨润土及硅藻土购自上海中泰化学试剂有限公司;YK-90挤压造粒机购自湖南省衡阳市一帆制药设备有限公司;恒温培养箱购自上海跃进医疗器械有限公司;食用菌罐头瓶购自兰州华科生物有限公司。
1.2短密木霉菌株GSAAMLSHU-1孢子悬浮液的制备
将低温保存的短密木霉菌株GSAAMLSHU-1菌种活化后,打成直径为5mm的菌块,接种于PDA培养基中,于25℃恒温培养箱中光照(24h,10000lx)培养4d后,加入10mL无菌水并滴入0.05mL吐温-80,缓慢摇晃,使分生孢子充分脱落,用无菌水将原液稀释成浓度为107cfu/g的溶液,备用。
1.3短密木霉菌株GSAAMLSHU-1母药的制备
1.3.1液体菌种的制备
取制备好的液体培养基75mL于150mL三角瓶中,121℃高温灭菌30min后,接入1mL浓度为107cfu/g的短密木霉GSAAMLSHU-1孢子悬浮液,在25℃、140r/min摇床上培养5d,备用。
所述液体培养基的制备方法如下:
称取以下原料:去皮马铃薯200g,葡萄糖20g和蒸馏水1000mL;将去皮马铃薯切成小块放入锅中,加入蒸馏水,煮沸30min,稍冷后用四层纱布滤去马铃薯,将滤液倒入量杯中,加入葡萄糖,充分溶解后,加水定容至1000mL。然后分装于三角瓶中,121℃高温灭菌30min。
1.3.2固体菌种的制备
将麦麸:玉米秸秆=3:1(质量比)的固体基质置于食用菌罐头瓶中,厚度为4.5cm,加入蒸馏水,使基质的质量百分数为60%,拌匀后用8层纱布封口,121℃高温灭菌60min。冷却至室温后,接入占基质总质量20%的液体菌种,搅拌均匀,于25℃恒温培养箱中光照(24h,10000lx)培养7d后,置于30℃干燥箱中烘干。
1.3.3短密木霉GSAAMLSHU-1母药的制备
(1)最佳培养基质筛选
混合基质筛选:将大麦、小麦、高粱、玉米秸秆、棉籽壳拌水,待充分吸水后分别按组合一:大麦:小麦:玉米秸秆:高粱:棉籽壳=1:1:1:1:1(质量比)、组合二:大麦:玉米秸秆:高粱:棉籽壳=1:1:1:1(质量比)、组合三:大麦:玉米秸秆:小麦:棉籽壳=1:1:1:1(质量比)、组合四:大麦:高粱:小麦:棉籽壳=1:1:1:1(质量比)、组合五:大麦:玉米秸秆小麦:高粱=1:1:1:1(质量比)、组合六:高粱:棉籽壳:小麦:玉米秸秆=1:1:1:1(质量比)配制,置于塑料袋中,封口,121℃高温灭菌60min。待温度降至室温,接入质量百分数为50%的固体菌种,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值为6-7,于25℃恒温暗培养。每个处理3次重复,3d后测定短密木霉GSAAMLSHU-1的产孢量,以确定最佳混合基质。
(2)短密木霉GSAAMLSHU-1母药的制备
将50%固体菌种接入已筛选出的最佳基质中,在25℃恒温暗培养的条件下进行扩繁,得到短密木霉GSAAMLSHU-1母药。
1.4短密木霉母药中添加不同助剂对产孢量的影响
通过测定添加不同助剂对短密木霉GSAAMLSHU-1产孢量的影响,对助剂进行筛选。
1.4.1产孢量测定
称取1g在不同基质中培养的短密木霉GSAAMLSHU-1培养物或添加不同助剂的母药,用含0.1%吐温-80的无菌水稀释100倍,磁力搅拌器搅拌20min后过滤,用血球计数板统计短密木霉菌株GSAAMLSHU-1分生孢子的数量。每个处理3次重复。
1.4.2母药中添加助剂的筛选
(1)紫外保护剂的筛选
称取10g短密木霉母药,分别添加炭黑、抗坏血酸和羧甲基纤维素各0.05g,搅拌均匀,置于波长254nm紫外灯(20W)下40cm处照射5min,于25℃培养箱中暗培养18h,分别测定短密木霉GSAAMLSHU-1产孢量。
(2)稳定剂的筛选
称取10g短密木霉母药,分别添加碳酸钙、磷酸钾和羧甲基纤维素钠各0.4g,搅拌均匀,热贮[(54±2)℃,4d]试验后测定产孢量。
(3)载体的筛选
称取10g短密木霉母药,分别添加凹凸棒土、膨润土和硅藻土各0.5g,搅拌均匀,置于25℃培养箱中暗培养4d,测定产孢量。
(4)崩解剂的筛选
称取10g短密木霉母药,分别添加可溶性淀粉、硫酸钠、硫酸铵和尿素各0.5g,搅拌均匀,置于25℃培养箱中暗培养4d,测定产孢量。
(5)湿润剂的筛选
称取10g短密木霉母药,分别添加十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠和皂角粉各0.5g,搅拌均匀,置于25℃暗培养箱中培养4d,测定产孢量。
(6)黏结剂的筛选
称取10g短密木霉母药,分别添加淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)和聚乙烯醇(PVA)各0.5g,搅拌均匀,置于25℃培养箱中暗培养4d,测定产孢量。
1.5短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的制备
将短密木霉GSAAMLSHU-1母药用鼓风干燥机干燥制成母粉,在母粉中按照筛选好的比例添加抗坏血酸、碳酸钙、凹凸棒土、可溶性淀粉和十二烷基苯磺酸钠等助剂,然后向混合物中喷入5%聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)溶液,使含水量保持在33%-37%。加入造粒机造粒,干燥,得到短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂。在能够满足颗粒强度前提下,尽可能地减少压力和控制产品粒径(1~500mm范围之内),并且在满足产品含水率的前提下,控制干燥时间和干燥温度。
1.6制剂质量指标分析测定
按照《中华人民共和国国家标准》对短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂进行测定。润湿时间测定参照GB/T 5451—2001,悬浮率测定参照GB/T 14825—2006,含水率测定参照GB/T 1600—2001,pH值测定参照GB/T 1603—1993。
1.7制剂贮藏稳定性测定
1.7.1孢子萌发率测定
用标准的PDB溶液将短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂稀释成浓度为106cfu/g的孢子悬浮液。采用悬滴法测定。将0.1mL已稀释好的孢子悬浮液置于盖玻片上,迅速将其翻转,盖于有凹面的载玻片上,放入铺有湿润滤纸的培养皿中。于28℃下暗培养17h,在显微镜下测定孢子萌发率。每处理统计100个左右孢子,3次重复。
1.7.2储藏稳定性测定
分别取100g短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂置于冷藏(4±2℃)和室温(25℃)条件下贮存,每隔30d测定样品的孢子萌发率,测定时长为300d,从而评估制剂的贮藏稳定性。
1.6结果与分析
1.6.1最佳培养基质筛选
图1结果表明,短密木霉GSAAMLSHU-1在由大麦、小麦、高粱、玉米秸秆、棉籽壳等基质按不同配比制备的固体培养基中均可产生分生孢子。其中,在大麦:高粱:小麦:棉籽壳=1:1:1:1的基质(组合三)中的产孢量最高,达1.65×108cfu/g,其次为组合二,产孢量达到1.57×108cfu/g,组合一的产孢量最低。最终选用大麦:高粱:小麦:棉籽壳=1:1:1:1的基质作为短密木霉GSAAMLSHU-1的最佳培养基质。
1.6.2不同助剂对短密木霉GSAAMLSHU-1产孢量的影响
(1)紫外保护剂的影响
图2结果表明,添加炭黑、抗坏血酸和羧甲基纤维素3种紫外保护剂后,短密木霉GSAAMLSHU-1的产孢量均不同程度地高于对照,部分紫外保护剂之间存在显著差异。添加抗坏血酸的产孢量显著高于对照和其它两个处理,产孢量为1.19×108cfu/g,说明抗坏血酸对短密木霉GSAAMLSHU-1的产孢有显著的保护作用,最终选用抗坏血酸为紫外保护剂。
(2)稳定剂的影响
稳定剂的主要作用在于保证有效成分在储存期的稳定。图3结果表明,3种稳定剂对短密木霉GSAAMLSHU-1的产孢量的影响存在较大差异。其中,添加碳酸钙的产孢量稍高于对照,而羧甲基纤维素钠和磷酸钾对产孢量有抑制作用。3种稳定剂中,添加碳酸钙的产孢量最高,为1.19×108cfu/g。碳酸钙化学纯度高、惰性强,且热稳定性好,与短密木霉GSAAMLSHU-1具有较好的相容性,故选用碳酸钙为稳定剂。
(3)载体的影响
图4结果表明,在供试的3种载体中,3种载体对短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的产孢量都有不同程度的促进作用,其中凹凸棒土对产孢量的促进作用最明显,达到3.14×108cfu/g,显著高于对照;硅藻土次之,产孢量为2.69×108cfu/g。有研究表明,凹凸棒土不仅能提高制剂利用率、改良土壤活性、调节土壤pH值、延长药效以及可提供植物生长的部分微量元素,而且添加该载体的制剂在田间应用上更具忍耐性,故最终选取凹凸棒土为载体。
(4)崩解剂的影响
图5结果表明,在供试的4种崩解剂中,可溶性淀粉对短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的产孢量有明显的促进作用,产孢量达到3.53×108cfu/g;硫酸钠次之,产孢量为2.85×108cfu/g,上述两者均显著高于对照;硫酸铵和尿素在一定程度上也可以提高短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的产孢量,故选择可溶性淀粉作为崩解剂。
(5)湿润剂的影响
制剂中添加湿润剂不仅能使药物分散度增大,增强制剂稳定性,且有利于药物的释放、吸收和药效的增强。图6结果表明,供试湿润剂十二烷基苯磺酸钠和皂角粉对短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂产孢量有明显促进作用,其中,添加十二烷基苯磺酸钠的处理产孢量最高,达到1.18×108cfu/g,皂角粉次之,产孢量达到0.92×108cfu/g;而十二烷基硫酸钠对其有抑制作用,故认为十二烷基苯磺酸钠是最好的湿润剂。
(6)黏结剂的影响
图7结果表明,在供试的3种黏结剂中,聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)和聚乙烯醇(PVA)均能提高短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的产孢量,其中添加聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)的处理产孢量最高,为3.09×108cfu/g,聚乙烯醇(PVA)次之,产孢量为2.32×108cfu/g,而添加淀粉的处理产孢量低于对照。聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)具有较强的结合能力,可与不同化合物生成络合物而吸附在界面,在一定程度上可降低界面表面张力,故最终选用聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)为黏结剂。
(7)最佳助剂配方下加工的短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的相关指标
根据对短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂助剂的筛选试验,最终确定短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂中助剂的最佳配方(质量百分数)为:0.5%抗坏血酸、4%碳酸钙、5%凹凸棒土、5%可溶性淀粉、5%十二烷基苯磺酸钠和5%聚乙烯基吡咯烷酮(PVP),其中含水量为33%-37%。由此制备的短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂的孢子含量为5.1×108cfu/g,润湿时间48s,悬浮率49%,水分含量3.5%,pH值6.2,颗粒强度较强,各项检测结果均符合国家标准。
实施例2水分散粒剂的稳定性
将实施例1的在最佳助剂配方下制备得到的短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂在冷藏(4±2℃)和室温(25℃)下贮存300d孢子萌发率的变化如图8所示。结果表明,短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂在冷藏条件下储藏孢子萌发率高于室温条件。将该制剂在冷藏条件(4±2℃)下贮藏300d,其孢子萌发率为48.1%,而在室温(25℃)下的孢子萌发率为31.0%。可见,低温贮藏更有利于货架期的延长。
实施例3水分散粒剂对植物病害的防治应用
本实施例通过盆栽实验说明短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂(实施例1的在最佳助剂配方下制备得到的短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂)对玉米苗期根腐病防治效果。
1、试验方法:选择大小均一的玉米种子(诚信16),70%酒精消毒5min后用无菌水洗涤3次。每盆土1kg,播种6粒种子。萌发后选取生长均一的幼苗留下。接种前刨开根部土壤,用解剖刀切开根部,在伤口处接种面积为50mm2病原菌块后,用土覆盖。5d后将5g水分散粒剂兑水495mL,将配制好的生防木霉菌孢子悬浮液每盆灌根10mL。10d后调查各处理玉米的发病情况,计算病情指数和防效。
2、病情指数及防效
Figure BDA0003211165300000081
Figure BDA0003211165300000082
3、玉米根腐病分级标准:
0级,根系健全,无病斑;1级,根系上有零星病斑点,但不连片;2级,根病斑连片,但小于根部周长的1/4;3级,根病斑大于周长的1/2,但小于3/4;5级,整个根部均有病斑包围,根部腐烂。
4、结果:
由试验结果可知:短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂对玉米茎腐病具有较好的防效,对禾谷镰孢和肿囊腐霉苗期根腐病的防效分别为59.13%和64.56%。
实施例4水分散粒剂对植物病害的防治应用
本实施例通过田间实验说明短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂(实施例1的在最佳助剂配方下制备得到的短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂)对玉米茎腐病防治效果。
1、试验方法:试验田设在甘肃省酒泉市农科院试验基地,试验地前5年连续种植玉米,连续3年玉米茎腐病均重度发病。播前一次性施入基肥施农家肥2500kg/亩、磷酸二铵35kg/亩。于3月中旬结合耙耱均匀深施覆盖地膜,规划小区2×4=8㎡,三行区随机区组排列,小区间距100cm,行、穴距为50cm×28cm。2017年4月26日点播,玉米散粉后期即7月15日利用短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂400g/亩进行滴灌。8月10日开始陆续发病,9月1日进行调查,分别记载调查总株数,发病株数,计算发病株率。田间管理为全生育期浇水7次,分别结合2、4次水在拔节期、孕穗期追施尿素25kg/亩、10kg/亩。
2、结果:
由试验结果可知:在大田自然病圃防治中,短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂对玉米茎腐病防效为37.2%。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之做一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

Claims (4)

1.短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂,其特征在于,所述水分散粒剂的最佳配方为:短密木霉GSAAMLSHU-1母药以及母药质量百分数0.5%的抗坏血酸、4%的碳酸钙、5%的凹凸棒土、5%的可溶性淀粉、5%的十二烷基苯磺酸钠和5%的聚乙烯基吡咯烷酮;所述水分散粒剂的含水量为33%-37%;
所述短密木霉GSAAMLSHU-1水分散粒剂中短密木霉孢子的含量为2.9×108cfu/g-5.1×108cfu/g;
短密木霉GSAAMLSHU-1的保藏号为CGMCC NO.15391。
2.根据权利要求1所述的水分散粒剂,其特征在于,短密木霉GSAAMLSHU-1母药的制备方法包括以下步骤:
(1)液体菌种的制备
向装有75mL液体培养基的150mL三角瓶中接入1mL浓度为107cfu/g的短密木霉孢子悬浮液,在25℃、140r/min摇床上培养5d,即为液体菌种;
所述液体培养基的制备方法如下:
称取以下原料:马铃薯200g,葡萄糖20g,蒸馏水1000mL;将去皮马铃薯切成小块放入锅中,加蒸馏水1000mL,煮沸30min,稍冷后用四层纱布滤去马铃薯,将滤液倒入量杯中,加入葡萄糖,充分溶解后,加水定容至1000mL;然后分装于三角瓶中,121℃高温灭菌30min;
(2)固体菌种的制备
向固体培养基中接入占固体培养基总质量20%的液体菌种,搅拌均匀,于25℃恒温培养箱中,光照强度10000lx培养7d后,于30℃干燥箱中烘干,即为固体菌种;
所述固体培养基的制备方法如下:
将麦麸和玉米秸秆按3:1的质量比混合,向混合物中加入蒸馏水,使混合物的质量百分数为60%,拌匀后用纱布封口,121℃高温灭菌60min,冷却至室温;
(3)母药的制备
向最佳培养基质中接入质量百分数为50%的固体菌种,在25℃恒温暗培养的条件下进行扩繁,得到短密木霉GSAAMLSHU-1母药;
所述最佳培养基质的制备方法如下:
分别将大麦、高粱、小麦、棉籽壳拌水,待充分吸水后,将吸水后的各物料按等质量比混合,置于塑料袋中,封口,121℃高温灭菌60min;然后冷却至室温,用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值为6-7。
3.权利要求1或2所述水分散粒剂的制备方法,其特征在于,将短密木霉GSAAMLSHU-1母药用鼓风干燥机干燥制成母粉,在母粉中按比例加入抗坏血酸、碳酸钙、凹凸棒土、可溶性淀粉和十二烷基苯磺酸钠,然后向混合物中喷入预先配制好的聚乙烯基吡咯烷酮溶液,使含水量保持在33%-37%,挤压造粒即得。
4.权利要求1或2所述水分散粒剂的以下任一应用:
1)用于抑制病原菌以及病原菌所致植物病害;
2)用于促进植物生长发育以及提高作物产量;
3)用于制备农用肥料。
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