CN105330395B - 一种生物除草有机肥及其制备方法与应用 - Google Patents
一种生物除草有机肥及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种生物除草有机肥，是由罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体在基粒表面裹菌制得的固体颗粒剂；罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体和基粒的质量比是1.7～2.0：1基粒由固体基质、有机肥、粘合剂和水为原料制粒所得，有机肥占基粒的质量百分含量为5～45％、粘合剂占基粒的质量百分含量为1.3～28.6％、水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。本发明还公开了生物除草有机肥的制备方法和在防除双子叶杂草上的应用。本发明兼顾传统有机肥与生物除草剂的优势，一方面充分利用园林废弃物和农作物秸秆，变废为宝，减少因焚烧秸秆导致的环境污染，另一方面可减少化肥、农药的使用，增强作物抗逆性，改善作物品质。
Description
技术领域
本发明属于除草剂制剂领域，涉及一种生物除草有机肥及其制备方法与应用。
背景技术
近年来随着化学肥料的大规模使用，农业增产效果明显。但化学肥料的大量使用也造成了诸如土壤重金属和有毒元素的增加、微生物活性降低、养分失调、酸化加剧等环境污染问题。在世界呼唤农业可持续发展的背景下有机农业应运而生。研究表明有机肥不仅营养均衡，养分全面，还能活化土壤中潜在养分，极大地提高了土壤生物多样性和土壤生物学活性，改善土壤理化性质、土壤的形成、环境及营养循环，提高土壤肥力。
近百年来采用化学除草剂有效地控制了许多杂草，但化学药剂的大量使用也引发了一系列的问题，诸如除草剂抗性杂草植株的出现、土壤污染、水质的退化、以及对非杂草生物(特别是人、畜)的危害等等。随着全球环境意识的提高和农业可持续发展的需要，寻求更安全有效的除草制剂或方法成为除草剂发展的方向。由于核盘菌属(Sclerotinia spp.)的核盘菌(S.sclerotiorum)能引起植物快速发病，同时杀死多种阔叶杂草，已被筛选用于开发作为生物除草剂，用于草坪防治西洋蒲公英(Taraxacum officinale)、蓟(Cirsiumarvense)等杂草(et al.,1995；2006；Brosten and Sands,1986；Quimby et al.,2004)。该属的小核盘菌(S.minor)，由于其对禾本科植物安全，可以起多种菊科杂草病害，也已被开发作为生物除草剂(Abu-Dieyeh et al.,2005；2006；2007；Schnick et al.,2002)。
园林废弃物是指园林绿化过程中产生的枝叶修剪物、草坪修剪物、枯枝落叶等。随着城市化进程的加快，园林绿化在改善城市环境质量，维持城市生态平衡方面的作用日益受到人们的重视，不断快速发展，随之而来的，园林植物废弃物的量也越来越大，而焚烧园林废弃物造成环境污染，排放温室气体CO2和浪费大量有机质。所以园林废弃物的加工处理和利用就成了目前值得考虑和研究的课题。农作物秸秆包括水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆和甘蔗秸秆、小麦秸秆等。焚烧秸秆同样会带来环境污染等问题，所以如何合理利用农作物秸秆，变废为宝，值得人们深思。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前大量施用化学除草剂和化学肥料的问题，提供一种生产成本低、且能有效利用园林废弃物、农作物秸秆和有机肥的新型生物除草有机肥。
本发明的另一个目的是提供生物除草有机肥的制备方法。
本发明的另一个目的是提供生物除草有机肥的应用
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种生物除草有机肥，所述的生物除草有机肥是由罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体在基粒表面裹菌制得的固体颗粒剂；其中，所述的罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体和基粒的质量比是1.7～2.0：1；所述的基粒由固体基质、有机肥、粘合剂和水为原料制粒并烘干灭菌所得，所述的有机肥占基粒的质量百分含量为5～45％、所述的粘合剂占基粒的质量百分含量为1.3～28.6％、所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；所述的固体基质为园林废弃物或农作物秸秆；所述的农作物秸秆选自水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆中一种或多种；所述的有机肥选自有机氮肥、有机磷肥、有机钾肥中的一种或多种；所述的粘合剂选自糯米粉或白炭黑。
所述的园林废弃物为园林中的修剪物、枯枝落叶等。
所述的有机氮肥优选为大豆饼肥，所述的有机磷肥优选为蚯蚓粪或鸡粪，所述的有机钾肥优选为草木灰。
所述的基粒的烘干灭菌方法优选为：基粒在烘箱中烘干，再置于高压灭菌锅中与121℃灭菌25min。
其中，所述的罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体是将罗氏白绢小菌核菌SC64进行液体发酵后离心所得，其中罗氏白绢小菌核菌SC64有效浓度为1.5×105个cfu/g≤菌浓度≤2.86×105个cfu/g。
所述的罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体进一步优选由以下制备方法制得的：将罗氏白绢小菌核菌菌株SC64接种在灭菌的PDA固体培养基中，于28℃培养3～5天进行活化；接种上述活化的罗氏白绢小菌核菌SC64菌饼10枚在马铃薯液体培养基中，28～30℃下，110～130rpm培养3～6天，高速离心机8000～9000rpm离心15～18min，倾倒上清液，获得菌丝体，菌丝体中以菌丝体质量为基准，菌丝体中罗氏白绢小菌核菌SC64有效浓度为1.5×105个cfu/g≤菌浓度≤2.86×105个cfu/g。
所述的粘合剂为糯米粉时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～25％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～45％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％～25％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。
优选的，所述的粘合剂为糯米粉时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～10％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～10％；所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。
所述的粘合剂为白炭黑时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～25％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～45％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％～25％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。
优选的，所述的粘合剂为白炭黑时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～10％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～10％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。
当所述的粘结剂为糯米粉时，所述的基粒优选以70％园林废弃物、5％有机氮肥、15％糯米粉、10％水或65％园林废弃物、10％有机氮肥、15％糯米粉、10％水或50％园林废弃物、25％有机氮肥、15％糯米粉、10％水或70％园林废弃物、5％有机磷肥、15％糯米粉、10％水或65％园林废弃物、10％有机磷肥、15％糯米粉、10％水或35％园林废弃物、40％有机磷肥、15％糯米粉、10％水或30％园林废弃物、45％有机磷肥、15％糯米粉、10％水或79％园林废弃物、5％有机磷肥、6％糯米粉、10％水或74％园林废弃物、10％有机磷肥、6％糯米粉、10％水或39％园林废弃物、45％有机磷肥、6％糯米粉、10％水或65％园林废弃物、10％有机钾肥、15％糯米粉、10％水或55％园林废弃物、10％有机钾肥、25％糯米粉、10％水为原料制粒所得。
当所述的粘合剂为白炭黑时，所述的基粒优选以81％农作物秸秆、5％有机氮肥、4％白炭黑、10％水或76％农作物秸秆、10％有机氮肥、4％白炭黑、10％水或61％农作物秸秆、25％有机氮肥、4％白炭黑、10％水或81％农作物秸秆、5％有机磷肥、4％白炭黑、10％水或76％农作物秸秆、10％有机磷肥、4％白炭黑、10％水或41％农作物秸秆、45％有机磷肥、4％白炭黑、10％水或80％农作物秸秆、5％有机磷肥、5％白炭黑、10％水或75％农作物秸秆、10％有机磷肥、5％白炭黑、10％水或40％农作物秸秆、45％有机磷肥、5％白炭黑、10％水或76％农作物秸秆、10％有机钾肥、4％白炭黑、10％水或71％农作物秸秆、25％有机钾肥、4％白炭黑、10％水为原料制粒所得；所述的农作物秸秆优选自油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、小麦秸秆中的一种。
本发明所述的生物除草有机肥的制备方法，包括将固体基质、有机肥于粉碎机粉碎并灭菌；将固体基质、有机肥、粘合剂和水按照比例制成颗粒作为基粒，烘干灭菌，然后将基粒、罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1：1.7～2.0裹菌，最后将所制得的颗粒干燥得到含菌丝体的生物除草有机肥；其中，所述的有机肥占基粒的质量百分含量为5～45％、所述的粘合剂占基粒的质量百分含量为1.3～28.6％、所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。
所述的生物除草有机肥的制备方法，优选包含以下步骤：
(1)、罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体的制备：将罗氏白绢小菌核菌菌株SC64接种在灭菌的PDA固体培养基中于28℃培养3～5天进行活化；接种上述活化的罗氏白绢小菌核菌SC64菌饼10枚在马铃薯液体培养基中，28～30℃下，110～130rpm培养3～6天，高速离心机8000～9000rpm离心15～18min，倾倒上清液，获得菌丝体，菌丝体中以菌丝体质量为基准，菌丝体中罗氏白绢小菌核菌SC64有效浓度为1.5×105个cfu/g≤菌浓度≤2.86×105个cfu/g；
(2)、原料粉碎：园林废弃物或农作物秸秆作为固体基质，经秸秆粉碎机粉碎成细粉，过20目筛，常规高压灭菌；有机肥包括有机氮肥、有机磷肥、有机钾肥粉碎，过20目筛，常规高压灭菌后；
(3)、造粒：取上述粉碎后的固体基质和有机肥混合，再加入粘合剂和水混合，在造粒机中制成颗粒作为基粒，烘干灭菌，然后将基粒、罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1：1.7～2.0裹菌，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；
(4)、将步骤(3)中所制得的固体颗粒剂干燥，即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
本发明所述的罗氏白绢小菌核菌菌株(Sclerotium rolfsii Sacc.)SC64，2009年3月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCC NO.2934。具体见申请人于2009年4月15日申请的发明专利申请(申请公布号为CN 101712938A)。
本发明所涉及的PDA固体培养基(马铃薯葡萄糖培养基)配方：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g、蒸馏水1000ml，自然pH。本发明所涉及的马铃薯液体培养基由以下方法制备得到：200g新鲜去皮土豆丁煮汁，蔗糖20g，加蒸馏水至1L，配置好后将其pH值调至5.0，常规高压蒸汽灭菌25min。
本发明所述的生物除草有机肥在防除双子叶杂草中的应用，尤其是在防除紫茎泽兰、加拿大一枝黄花、反枝苋中的应用。
本发明相比现有技术具有以下优点：
利用园林废弃物和农作物秸秆作为基质生产生物除草有机肥，兼顾传统有机肥与生物除草剂的优势，一方面充分利用了园林废弃物和农作物秸秆，变废为宝，减少因焚烧秸秆导致的环境污染，另一方面可减少化肥、农药的使用，增强作物抗逆性，改善作物品质。
利用园林废弃物或农作物秸秆和有机肥复配作为固体基质制备生物除草有机肥，既能有效培养含有罗氏白绢小菌核菌SC64生物除草剂，也可在较大程度上减少化学肥料的使用，还能废物利用，减少污染，降低成本。本发明制备的罗氏白绢小菌核菌SC64生物除草有机肥有较高的离体叶片的致病性。利用本发明复配的固体基质制备的含菌丝体的生物除草剂能有效用于双子叶杂草的清除。本发明制备的齐整小核菌生物除草有机肥成本低、制备工艺简单，且可在常温下保藏。
附图说明
图1为生物除草有机肥的生产流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
如图1所示，一种生物除草有机肥的制备方法：
(1)、罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体的制备：将罗氏白绢小菌核菌菌株SC64接种在灭菌的PDA固体培养基中，于28℃培养5天进行活化，接种上述活化的罗氏白绢小菌核菌SC64菌饼10枚在马铃薯液体培养基中(马铃薯液体培养基由以下方法制备得到：200g新鲜去皮土豆丁煮汁，蔗糖20g，加蒸馏水至1L，配置好后将其pH值调至5.0，常规高压蒸汽灭菌25min)，30℃下，110rpm培养5天，高速离心机9000rpm离心18min，倾倒上清液，获得菌丝体，菌丝体中以菌丝体质量为基准，菌丝体中罗氏白绢小菌核菌SC64有效浓度为2.86×105个cfu/g。
(2)、原料粉碎：园林废弃物或农作物秸秆作为固体基质，经秸秆粉碎机进行粉碎成细粉，过20目筛，装入塑料袋系好，常规高压灭菌25min后冷却，备用。有机肥包括有机氮肥(大豆饼肥)、有机磷肥(蚯蚓粪或鸡粪)、有机钾肥(草木灰)粉碎，过20目筛，装入塑料袋系好，常规高压灭菌25min后冷却，备用。
(3)、造粒：取上述粉碎后的固体基质和有机肥混合，再加入粘合剂和水混合，在造粒机中制成颗粒作为基粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，然后将基粒、罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1：1.7～2.0裹菌，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂。
(4)、将步骤(3)中所制得的固体颗粒剂干燥，即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例1园林废弃物和有机氮肥复配
取粉碎后的园林废弃物和有机氮肥(大豆饼肥)，将园林废弃物与有机氮肥分别按照不同比例混合，再加入糯米粉和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机氮肥(大豆饼肥)占基粒的质量百分含量如表1所示，糯米粉占基粒的质量百分含量为15％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1.8：1的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例2
对实施例1中制备得到的含菌丝体的生物除草有机肥进行检测。其中致病力检测以30℃条件下，直径为3.8mm的除草剂颗粒在熟龄紫茎泽兰叶片(从顶部往下5～6片真叶)中央培养72小时后所引起的坏死病斑面积为指标。即将新鲜培养的含菌丝体生物除草有机肥置于预先铺有湿润双层滤纸的9cm培养皿中的紫茎泽兰叶片中央，每平皿2片叶子，Parafilm(American National Can,Greenwich,CT,USA)进行密封，将培养皿置于30℃，12hL/D的光照培养箱。每试验处理均4次重复。设置不添加有机氮肥的颗粒裹菌后作为空白对照(CK)。结果如表1所示。
表1园林废弃物与有机氮肥复配对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
注：同一列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，下同
从表1可以看出，罗氏白绢小菌核菌SC64在生物除草有机肥表面萌发并侵染叶片，当有机氮肥占基粒的比例达到5％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积达到2.31cm2，与空白对照无显著差异；当有机氮肥的复配比例达到25％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积达到1.96cm2，与空白对照虽差异显著，但仍然可以接受。当复配的比例达到30％时，致病力下降到不可接受的水平。因此，考虑到保持原有生物除草剂的致病效果，有机氮肥与园林废弃物复配的最佳比例在5％-25％之间。
实施例3农作物秸秆和有机氮肥复配
取粉碎后的农作物秸秆和有机氮肥(大豆饼肥)，将农作物秸秆与有机氮肥分别按照不同比例混合，再加入白炭黑和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机氮肥(大豆饼肥)占基粒的质量百分含量如表2所示，白炭黑占基粒的质量百分含量为4％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1.8：1的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例4
按照实施例2中的方法，对实施例3中制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测。检测结果如下表2所示。
表2农作物秸秆与有机氮肥复配对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
从表2可以看出，罗氏白绢小菌核菌菌株SC64在生物除草有机肥表面萌发并侵染叶片，当有机氮肥分别与水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆复配时，当有机氮肥占基粒的比例达到5％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积分别达到0.78、1.75、1.64、1.50、0.68、1.14cm2，与空白对照差异不显著；当有机氮肥占基粒的比例达到10％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积分别达到0.76、1.74、1.63、1.50、0.66、1.12cm2，与空白对照差异不显著；在25％时虽与对照相比差异显著，但是仍然可以接受。当进一步提高比例到30％时，则致病力下降到不可接受的水平。因此，考虑到保持原有生物除草剂的致病效果，有机氮肥与水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆或小麦秸秆复配的最佳比例在5％-25％之间。同时由表2可以看出，当有机氮肥与油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆或小麦秸秆复配，其致病力显著高于有机氮肥与水稻秸秆或甘蔗秸秆复配的致病力。
实施例5园林废弃物和有机磷肥(蚯蚓粪)复配
取粉碎后的园林废弃物和机磷肥(蚯蚓粪)，将园林废弃物和有机磷肥分别按照不同比例混合，再加入糯米粉和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机磷肥占基粒的质量百分含量如表3所示，糯米粉占基粒的质量百分含量为15％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1.8：1的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例6
按照实施例2中的方法，对实施例5中制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测，设置不添加有机磷肥(蚯蚓粪)的颗粒裹菌后作为空白对照(CK)。检测结果如下表3所示。
表3园林废弃物与有机磷肥复配对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
从表3可以看出，加入5％直至45％的有机磷肥后，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积达到2.09-1.90cm2，与空白对照差异不显著。当进一步提高比例到50％时，则致病力下降到不可接受的水平。因此，考虑到保持原有生物除草剂的致病效果，有机磷肥(蚯蚓粪)与园林废弃物复配的最佳比例在5％-45％之间。
实施例7农作物秸秆和有机磷肥(蚯蚓粪)复配
取粉碎后的农作物秸秆和机磷肥(蚯蚓粪)，将农作物秸秆和有机磷肥分别按照不同比例混合，再加入白炭黑和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机磷肥占基粒的质量百分含量如表4所示，白炭黑占基粒的质量百分含量为4％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1.8：1的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例8
按照实施例2中的方法，对实施例7中制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测。检测结果如下表4所示。
表4农作物秸秆与有机磷肥复配罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
从表4可以看出，罗氏白绢小菌核菌SC64在生物除草有机肥表面萌发并侵染叶片，当有机磷肥分别与水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆复配时，当有机磷肥占基粒的比例达到5％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积分别达到0.75cm2、1.74cm2、1.63cm2、1.49cm2、0.65cm2、1.13cm2，与空白对照差异不显著；当有机磷肥占基粒的比例达到10％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积分别达到0.72cm2、1.72cm2、1.62cm2、1.48cm2、0.63cm2、1.04cm2，与空白对照差异不显著；在45％时虽与对照差异显著，但是仍然可以接受。当进一步提高比例到50％时，则致病力下降到不可接受的水平。因此，考虑到保持原有生物除草剂的致病效果，有机磷肥(蚯蚓粪)与水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆复配的最佳比例在5％-45％之间。同时由表4可以看出，当有机磷肥与油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆或小麦秸秆复配，其致病力显著高于有机氮肥与水稻秸秆或甘蔗秸秆复配的致病力。
实施例9园林废弃物和有机磷肥(鸡粪)复配
取粉碎后的园林废弃物和有机磷肥(鸡粪)，将园林废弃物和有机磷肥分别按照不同比例混合，再加入糯米粉和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机磷肥占基粒的质量百分含量如表5所示，糯米粉占基粒的质量百分含量为6％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1.8：1的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例10
按照实施例2中的方法，对实施例9中制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测，设置不添加有机磷肥(鸡粪)的颗粒裹菌后作为空白对照(CK)。检测结果如下表5所示。
表5有机磷肥(鸡粪)与园林废弃物复配对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
从表5可以看出，当有机磷肥占基粒的比例达到5％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积达到2.32cm2，与空白对照无显著差异；将45％的有机磷肥加入后，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积达到1.90cm2，与空白对照差异不显著，当进一步提高比例到50％时，致病力下降到不可接受的水平。因此，考虑到保持原有生物除草剂的致病效果，有机磷肥与园林废弃物复配的最佳比例在5％-45％之间。
实施例11农作物秸秆和有机磷肥(鸡粪)复配
取粉碎后的农作物秸秆和机磷肥(鸡粪)，将农作物秸秆和有机磷肥分别按照不同比例混合，再加入白炭黑和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机磷肥占基粒的质量百分含量如表5所示，白炭黑占基粒的质量百分含量为5％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1.8：1的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例12
按照实施例2中的方法，对实施例11中制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测。检测结果如下表6所示。
表6农作物秸秆与有机磷肥(鸡粪)复配对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
从表6可以看出，罗氏白绢小菌核菌菌株SC64在生物除草有机肥表面萌发并侵染叶片，当有机磷肥分别与水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆复配时，当有机磷肥占基粒的比例为5％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积分别达到0.71、1.70、1.60、1.46、0.60、1.11cm2，与空白对照无显著差异；当有机磷肥分别与水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆复配时，当有机磷肥占基粒的比例达到45％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积分别达到0.69、1.68、1.57、1.42、0.57、1.02cm2，与空白对照差异不显著；当进一步提高比例到50％时，致病力下降到不可接受的水平。因此，考虑到保持原有生物除草剂的致病效果，有机磷肥与水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆复配的最佳比例在5％-45％之间。同时由表6可以看出，当有机磷肥与油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆或小麦秸秆复配，其致病力显著高于有机氮肥与水稻秸秆或甘蔗秸秆复配的致病力。
实施例13园林废弃物和有机钾肥复配
取粉碎后的园林废弃物和有机钾肥(草木灰)，将园林废弃物和有机钾肥分别按照不同比例混合，再加入糯米粉和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机钾肥占基粒的质量百分含量如表7所示，糯米粉占基粒的质量百分含量为15％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1.8：1的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例14
按照实施例2中的方法，对实施例13中制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测，设置不添加有机钾肥(草木灰)的颗粒裹菌后作为空白对照(CK)。检测结果如下表7所示。
表7园林废弃物与有机钾肥复配对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
从表7可以看出，加入10％的有机钾肥后，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积达到2.41cm2，与对照差异不显著。在25％时，虽与对照差异显著，但是仍然可以接受。当复配的比例提高到40％时，致病力下降到不可接受的水平。因此，考虑到保持原有生物除草剂的致病效果，有机钾肥与园林废弃物复配的最佳比例在10％-25％之间。
实施例15农作物秸秆和有机钾肥复配
取粉碎后的农作物秸秆和有机钾肥(草木灰)，将农作物秸秆和有机钾肥分别按照不同比例混合，再加入白炭黑和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机钾肥占基粒的质量百分含量如表5所示，白炭黑占基粒的质量百分含量为4％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1.8：1的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
实施例16
按照实施例2中的方法，对实施例15中制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测。检测结果如下表8所示。
表8有机钾肥与农作物秸秆复配对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
从上表可以看出，罗氏白绢小菌核菌菌株SC64在生物除草有机肥表面萌发并侵染叶片，当有机钾肥分别与水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆或小麦秸秆复配时，当有机钾肥占基粒的比例达到10％时，在离体紫茎泽兰叶片上所引起的坏死面积分别达到0.74、1.73、1.61、1.48、0.64、1.13cm2，与对照差异不显著；达到25％时，虽与对照差异显著，但是仍然可以接受。当进一步提高比例到40％时，致病力下降到不可接受的水平。因此，考虑到保持原有生物除草剂的致病效果，有机钾肥与水稻秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆复配的最佳比例在10％-25％之间。同时由表8可以看出，当有机钾肥与油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆或小麦秸秆复配，其致病力显著高于有机氮肥与水稻秸秆或甘蔗秸秆复配的致病力。
实施例17糯米粉或白炭黑含量对颗粒成型率的影响
每个处理固体基质22g，有机肥(此处以氮肥为例)5g，水的体积为3ml，改变糯米粉或白炭黑的用量，造粒，干燥后称重，计算成型率(将所制得的颗粒干燥后直径介于2.0-3.8mm之间的颗粒重量与颗粒总重量的比例)。
表9不同糯米粉或白炭黑含量对颗粒成型率的影响
注：同一列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)
结果显示：当白炭黑用量为0.4g-6g(即白炭黑在基粒中的含量为1.3～16.7％)时，成型率在91.35％以上，但白炭黑用量为0.1g时成型率明显较低。当糯米粉用量为1.8g-12g时(即糯米粉在基粒中的含量为5.6％～28.6％)，成型率在90.14％以上，但糯米粉用量为1g时成型率明显较低。
实施例18固体基质和有机氮肥复配后的基粒与菌丝体的配比对罗氏白绢小菌核菌菌株
SC64致病力的影响
取粉碎后的固体基质(农作物秸秆或园林废弃物)和有机氮肥(大豆饼肥)，将农作物秸秆与有机氮肥混合，再加入白炭黑和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，农作物秸秆占基粒的质量百分含量为61％，有机氮肥(大豆饼肥)占基粒的质量百分含量为25％，白炭黑占基粒的质量百分含量为4％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按不同的质量比裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。按照实施例2中的方法，对制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测。检测结果如下表10所示。
表10固体基质和有机氮肥复配后的基粒与菌丝体的配比对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
实施例19固体基质和有机磷肥复配后的基粒与菌丝体的配比对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
取粉碎后的固体基质(农作物秸秆或园林废弃物)和有机磷肥(蚯蚓粪)，将固体基质与有机氮肥混合，再加入白炭黑和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机磷肥(蚯蚓粪)占基粒的质量百分含量为41％，白炭黑占基粒的质量百分含量为4％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按不同的质量比裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。按照实施例2中的方法，对制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测。检测结果如下表11所示。
表11固体基质和有机磷肥(蚯蚓粪)复配后的基粒与菌丝体的配比对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
实施例20固体基质和有机磷肥复配后的基粒与菌丝体的配比对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
取粉碎后的固体基质(农作物秸秆或园林废弃物)和有机磷肥(鸡粪)，将固体基质与有机氮肥混合，再加入白炭黑和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机磷肥(鸡粪)占基粒的质量百分含量为41％，白炭黑占基粒的质量百分含量为4％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按不同的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。按照实施例2中的方法，对制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测。检测结果如下表12所示。
表12固体基质和有机磷肥(鸡粪)复配后的基粒与菌丝体的配比对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
实施例21固体基质和有机钾肥复配后的基粒与菌丝体的配比对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
取粉碎后的固体基质(农作物秸秆或园林废弃物)和有机钾肥(草木灰)，将固体基质与有机钾肥混合，再加入白炭黑和水混合，在造粒机中制成颗粒，在烘箱中烘干后置于高压灭菌锅中灭菌(121℃,25min)，作为基粒备用，其中，有机钾肥(草木灰)占基粒的质量百分含量为25％，白炭黑占基粒的质量百分含量为4％，水占基粒的质量百分含量为10％；接着在造粒机中将罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按不同的比例裹在制成的基粒的表面，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；制得的固体颗粒剂风干后即得到含菌丝体的生物除草有机肥。按照实施例2中的方法，对制备的各含菌丝体生物除草有机肥进行检测。检测结果如下表13所示。
表13固体基质和有机钾肥复配后的基粒与菌丝体的配比对罗氏白绢小菌核菌菌株SC64致病力的影响
当罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体与基粒的比例大于2.0：1时，颗粒难以成型，所以探讨在2.0：1之前的适宜比例。根据实施例18-21的试验结果表明：固体基质和有机肥复配后的基粒裹上罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体所制得的生物除草有机肥，致病力随罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体的比例的增加逐渐增强，1.7～2.0：1均为适宜的配比范围，1.6：1的致病力已经下降到不可接受的水平，因此为确保生物除草药肥的致病力需要将菌丝体与基粒的比例控制在1.7～2.0：1之间。
实施例22以园林废弃物为固体基质原料之一的生物除草有机肥在盆钵菌丝萌发效果
取实施例1中园林废弃物与有机氮肥(大豆饼肥)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(有机氮肥占基粒的质量百分含量25％)、实施例5中园林废弃物与有机磷肥(蚯蚓粪)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(蚯蚓粪占基粒的质量百分含量45％)、实施例9中园林废弃物与有机磷肥(鸡粪)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(鸡粪占基粒的质量百分含量45％)、实施例13中园林废弃物与有机钾肥(草木灰)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(草木灰占基粒的质量百分含量25％)进行除草试验，并分别设置不添加有机肥的颗粒裹菌后作为空白对照。
试验在南京农业大学牌楼温室进行(32°2’N 118°50’E)。试验时用内径10cm的塑料花盆盛土(去杂质的菜园土与营养土混匀，4：1，v/v)，直接播种实验室保存的加拿大一枝黄花杂草种子，处理时对每盆钵间苗，最终得到每盆含15株长势均匀的苗进行实验。实验期间通过将盆钵置于大型盛水的浅盆内以保持土壤的湿润。正午温度较高时(25-35℃)接种前述的含菌丝体生物除草有机肥，设计15kg/亩、25kg/亩、35kg/亩、50kg/亩四个剂量，7d后统计杂草的株防效和鲜重防效。结果如下表14所示。
测定和计算方法：杂草的株防效(％)＝(空白对照区的杂草株数-处理区的杂草株数)×100/空白对照区的杂草株数；杂草的鲜重防效(％)＝(空白对照区的杂草鲜重-处理区的杂草鲜重)×100/空白对照区的杂草鲜重。
表14含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对加拿大一枝黄花的温室防除效果
a MR表示植株死亡率(％)，FW表示鲜重抑制率(％)，图中数据为平均值±标准误。同行相同小写字母者表示未达5％显著水平，下同。
从表14可以看出，在温室环境下，与对照相比4个处理剂量均对杂草有明显的防除和抑制(P＜0.05)。施药24h即可在土壤表面观察到萌发的白色菌丝体，菌丝体在接触到杂草茎基部时便形成附着和聚集，随后可在杂草基部观察到表皮变为深黄色至褐色，呈水渍状，一些敏感和弱小杂草2d开始倒伏和萎蔫。含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对试验杂草的致病性随处理剂量的增大而增加，园林废弃物与有机氮肥(大豆饼肥)、有机磷肥(蚯蚓粪)、有机磷肥(鸡粪)、有机钾肥(草木灰)复配的菌丝体生物除草有机肥的剂量为25kg/亩时，对加拿大一枝黄花的株防效分别为71.7％、78.3％、76.1％、76.7％，鲜重防效分别为73.8％、75.8％、73.3％、72.8％，当剂量加倍后，株防效和鲜重防效分别增加到83.3％、85.0％、82.8％、83.3％和89.6％、90.3％、88.4％、88.3％。
实施例23以水稻秸秆为固体基质原料之一的生物除草有机肥在盆钵菌丝萌发效果
取实施例3中水稻秸秆与有机氮肥(大豆饼肥)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(大豆饼肥占基粒的质量百分含量25％)、实施例7中水稻秸秆与有机磷肥(蚯蚓粪)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(蚯蚓粪占基粒的质量百分含量45％)、实施例11中水稻秸秆与有机磷肥(鸡粪)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(鸡粪占基粒的质量百分含量45％)、实施例15中水稻秸秆与有机钾肥(草木灰)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(草木灰占基粒的质量百分含量25％)进行除草试验，并分别设置不添加有机肥的颗粒裹菌后作为空白对照。
试验和测定方法均与实施例22相同。结果如下表15所示。
表15含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对加拿大一枝黄花的温室防除效果
从表15可以看出，当选用水稻秸秆作为固体基质原料之一时，含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对试验杂草的致病性随处理剂量的增大而增加，水稻秸秆与有机氮肥(大豆饼肥)、有机磷肥(蚯蚓粪)、有机磷肥(鸡粪)、有机钾肥(草木灰)复配的菌丝体生物除草有机肥的剂量为25kg/亩时，加拿大一枝黄花7的株防效分别为72.9％、79.2％、77.2％、78.7％，鲜重防效分别为75.0％、78.2％、74.5％、74.7％，当剂量加倍后，株防效和鲜重防效分别增加到84.5％、87.5％、83.9％、85.4％和90.5％、92.1％、89.6％、90.1％。
实施例24以油菜秸秆为固体基质原料之一的生物除草有机肥在盆钵菌丝萌发效果
取实施例3中油菜秸秆与有机氮肥(大豆饼肥)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(大豆饼肥占基粒的质量百分含量25％)、实施例7中油菜秸秆与有机磷肥(蚯蚓粪)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(蚯蚓粪占基粒的质量百分含量45％)、实施例11中油菜秸秆与有机磷肥(鸡粪)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(鸡粪占基粒的质量百分含量45％)、实施例15中油菜秸秆与有机钾肥(草木灰)复配制备的含菌丝体生物除草有机肥(草木灰占基粒的质量百分含量25％)进行除草试验，并分别设置不添加有机肥的颗粒裹菌后作为空白对照。
试验和测定方法均与实施例22相同。结果如下表16所示。
表16含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对加拿大一枝黄花的温室防除效果
从表16可以看出，当选用油菜秸秆作为固体基质原料之一时，含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对试验杂草的致病性随处理剂量的增大而增加，油菜秸秆与有机氮肥(大豆饼肥)、有机磷肥(蚯蚓粪)、有机磷肥(鸡粪)、有机钾肥(草木灰)复配的菌丝体生物除草有机肥的剂量为25kg/亩时，加拿大一枝黄花的株防效分别为74.1％、80.3％、78.9％、79.8％，鲜重防效分别为76.1％、79.4％、75.7％、75.9％；当剂量加倍后，株防效和鲜重防效分别增加到85.7％、88.8％、85.3％、86.7％和91.7％、93.2％、90.8％、91.2％。
实施例25温室盆栽模拟玉米田生物除草有机肥试验
玉米施肥技术：玉米对氮素的需要量最多，吸收磷较氮和钾少。一般每生产100kg子粒，需氮2.2-4.2kg，磷0.5-1.5kg，钾1.5-4kg，三要素的比例约为3：1：2。本次试验中将氮磷钾肥均按基肥施入。
试验于3月在南京农业大学牌楼温室进行(32°2’N 118°50’E)。试验时用内径10cm的塑料花盆盛土，设置3个处理，即玉米本身所需的有机肥施用量、有机肥施用量降低30％、有机肥施用量降低60％。施用有机肥时，先将有机氮肥(大豆饼肥、糯米粉、水和固体基质按照25％、15％、10％和50％的质量比例制成基粒，按照1：1.8的质量比例裹上菌丝体)、有机磷肥(蚯蚓粪、白炭黑、水和固体基质按照45％、4％、10％和41％的质量比例制成基粒，按照1：1.8的质量比例裹上菌丝体)和有机钾肥(草木灰、白炭黑、水和固体基质按照25％、4％、10％和61％的质量比例制成基粒，按照1：1.8的质量比例裹上菌丝体)分别制成生物除草有机肥，然后将有机氮肥、有机磷肥和有机钾肥按照3：1：2的比例撒施到盆钵中。
设置化学肥料(其中氮肥采用尿素、磷肥采用过磷酸钙、钾肥采用氯化钾)作为对照，每处理4次重复。直接播种玉米种子和实验室保存的反枝苋种子，同时将不同处理的生物除草有机肥施于盆钵土壤表面。处理时对每盆钵间苗，最终得到每盆含1株玉米和30株长势均匀的反枝苋的苗进行实验。实验期间通过将盆钵置于大型盛水的浅盆内以保持土壤的湿润。7天后统计杂草的株防效和鲜重防效，20天后统计各个处理玉米植株的鲜重，并进行数据分析。结果如下表17和表18所示。
表17含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对反枝苋的温室防除效果
a MR表示植株死亡率(％)，FW表示鲜重抑制率(％)，图中数据为平均值±标准误。
从表17可以看出，在温室环境下，与化学肥料对照相比，3个处理剂量均对杂草有明显的防除和抑制(P＜0.05)。含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对试验杂草的致病性随处理剂量的增大而增加。以园林废弃物为基质时，标准有机肥施用量对反枝苋的最大株防效和鲜重防效分别为81.7％和74.3％；以水稻秸秆为基质时，标准有机肥施用量对反枝苋的最大株防效和鲜重防效分别为82.5％和75.2％；以油菜秸秆为基质时，标准有机肥施用量对反枝苋的最大株防效和鲜重防效分别为84.1％和76.4％。同时，各个处理株防效之间均差异显著，说明生物除草有机肥有较好的田间除草效果。
表18含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥对玉米生长的影响
从表18可以看出，在温室环境下，在标准有机肥施用量下以园林废弃物、水稻秸秆、油菜秸秆为基质的玉米的鲜重均与施用化学肥料没有显著差异，且3个处理剂量之间均差异显著。说明生物除草有机肥替代化学肥料应用于田间具有可行性。
综上所述，本发明利用园林废弃物以及农作物秸秆作为基质制备的罗氏白绢小菌核菌菌株SC64生物除草有机肥，可以兼顾传统有机肥与生物除草剂的优势。一方面作为有机肥施于田间，达到接近化学肥料的效果，同时降低成本；另一方面通过温室的杂草防除试验也证实了罗氏白绢小菌核菌菌株SC64生物除草有机肥可以有效控制杂草，获得明显的株防效和鲜重防效，同时减少了环境污染。
实施例26贮藏条件、时间对固体颗粒萌发率和致病性的影响
分别称取实施例1制备的固体颗粒各100g，于5月10号置于常温非真空、常温真空、4℃非真空、4℃真空四种条件下保存，每个处理4个重复，真空按照1g小包装，每次取小包实验。分别于每个月10号、25号检测固体颗粒的萌发率和致病性，首次检测时间为5月25号。萌发率检测为取直径为3.3mm的固体颗粒剂接种与PDA固体培养基平板上，每个平板5粒，4个平板重复。于28℃恒温培养箱培养，36小时后测量固体颗粒所形成的菌落直径大小。致病力检测以30℃条件下，直径为3.3mm的除草剂颗粒在熟龄紫茎泽兰叶片(从顶部往下5～6片真叶)中央培养72小时后所引起的坏死病斑面积为指标。即将新鲜培养的含菌丝体固体基质置于预先铺有湿润双层滤纸的9cm培养皿中的紫茎泽兰叶片中央，每平皿2片叶子，Parafilm(American National Can,Greenwich,CT,USA)进行密封，将培养皿置于30℃，12hL/D的光照培养箱。每试验处理均4次重复，设置灭菌的固体基质为空白对照。
表19含罗氏白绢小菌核菌菌株SC64菌丝体生物除草有机肥颗粒剂货架期检测
a MR表示植株死亡率(％)，FW表示鲜重抑制率(％)，图中数据为平均值±标准误。
表19的结果显示：常温非真空与4℃非真空菌的萌发率较高，4个月后，仍高达60％-70％，两者相比，常温非真空效果较好。常温真空和4℃真空在两个月后萌发率急剧下降，4个月后，降至5％。鉴于萌发率与致病力呈正相关。因此，固体颗粒常温贮藏即可。
Claims (9)
1.一种生物除草有机肥，其特征在于所述的生物除草有机肥是由罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体在基粒表面裹菌制得的固体颗粒剂；其中，所述的罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体和基粒的质量比是1.7～2.0：1；所述的基粒由固体基质、有机肥、粘合剂和水为原料制粒所得；所述的固体基质为园林废弃物或农作物秸秆；所述的农作物秸秆选自水稻秸秆、油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、甘蔗秸秆、小麦秸秆中一种或多种；所述的有机肥选自有机氮肥、有机磷肥、有机钾肥中的一种或多种；所述的粘合剂选自糯米粉或白炭黑；
所述的粘合剂为糯米粉时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～25％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～45％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％～25％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；
所述的粘合剂为白炭黑时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～25％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～45％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％～25％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。
2.根据权利要求1所述的生物除草有机肥，其特征在于所述的罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体是将罗氏白绢小菌核菌SC64进行液体发酵后离心所得，其中罗氏白绢小菌核菌SC64有效浓度为1.5×105个cfu/g≤菌浓度≤2.86×105个cfu/g。
3.根据权利要求2所述的生物除草有机肥，其特征在于所述的罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体是由以下制备方法制得的：将罗氏白绢小菌核菌菌株SC64接种在灭菌的PDA固体培养基中，于28℃培养3～5天进行活化；接种上述活化的罗氏白绢小菌核菌SC64菌饼10枚在马铃薯液体培养基中，28～30℃下，110～130rpm培养3～6天，高速离心机8000～9000rpm离心15～18min，倾倒上清液，获得菌丝体，菌丝体中以菌丝体质量为基准，菌丝体中罗氏白绢小菌核菌SC64有效浓度为1.5×105个cfu/g≤菌浓度≤2.86×105个cfu/g。
4.根据权利要求1所述的生物除草有机肥，其特征在于所述的粘合剂为糯米粉时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～10％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～10％；所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；
所述的粘合剂为白炭黑时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～10％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～10％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。
5.根据权利要求4所述的生物除草有机肥，其特征在于所述的农作物秸秆选自油菜秸秆、棉花秸秆、大豆秸秆、小麦秸秆中的一种。
6.权利要求1所述的生物除草有机肥的制备方法，其特征在于包括将固体基质、有机肥于粉碎机粉碎并灭菌；将固体基质、有机肥、粘合剂和水按照比例制成颗粒作为基粒，烘干灭菌，然后将基粒、罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1：1.7～2.0裹菌，最后将所制得的颗粒干燥得到含菌丝体的生物除草有机肥；其中，所述的粘合剂为糯米粉时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～25％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～45％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％～25％，所述的粘合剂占基粒的5.6％～28.6％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；
所述的粘合剂为白炭黑时，当所述的有机肥为有机氮肥时，有机肥占基粒的5％～25％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机磷肥时，有机肥占基粒的5％～45％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质；或当所述的有机肥为有机钾肥时，有机肥占基粒的10％～25％，所述的粘合剂占基粒的1.3～16.7％，所述的水占基粒的质量百分含量为10～15％，余下为固体基质。
7.根据权利要求6所述的生物除草有机肥的制备方法，其特征在于包含以下步骤：
(1)、罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体的制备：将罗氏白绢小菌核菌菌株SC64接种在灭菌的PDA固体培养基中，于28℃培养3～5天进行活化；接种上述活化的罗氏白绢小菌核菌SC64菌饼10枚在马铃薯液体培养基中，28～30℃下，110～130rpm培养3～6天，高速离心机8000～9000rpm离心15～18min，倾倒上清液，获得菌丝体，菌丝体中以菌丝体质量为基准，菌丝体中罗氏白绢小菌核菌SC64有效浓度为1.5×105个cfu/g≤菌浓度≤2.86×105个cfu/g；
(2)、原料粉碎：园林废弃物或农作物秸秆作为固体基质，经秸秆粉碎机粉碎成细粉，过20目筛，常规高压灭菌；有机肥包括有机氮肥、有机磷肥、有机钾肥粉碎，过20目筛，常规高压灭菌后；
(3)、造粒：取上述粉碎后的固体基质和有机肥混合，再加入粘合剂和水混合，在造粒机中制成颗粒作为基粒，烘干灭菌，然后将基粒、罗氏白绢小菌核菌SC64菌丝体按照质量比1：1.7～2.0裹菌，制得粒径大于等于12目小于等于6目的固体颗粒剂；
(4)、将步骤(3)中所制得的固体颗粒剂干燥，即得到含菌丝体的生物除草有机肥。
8.权利要求1所述的生物除草有机肥在防除双子叶杂草中的应用。
9.权利要求1所述的生物除草有机肥在防除紫茎泽兰、加拿大一枝黄花、反枝苋中的应用。
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