CN108289932A - 胞外dna作为神经变性的治疗靶点 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及脱氧核糖核酸酶(DNA酶)酶抑制神经变性的进展和预防及治疗神经变性的用途。

Description

胞外DNA作为神经变性的治疗靶点
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年5月22日提交的美国临时申请号62/165,255的优先权，其内容通过引用的方式全文纳入本文。
技术领域
本发明涉及脱氧核糖核酸酶(DNase)酶抑制神经变性的进展和预防及治疗神经变性的用途。
发明背景
神经变性是神经元结构和/或功能逐渐丧失(包括神经元死亡)的单独临床病理状态。导致神经变性的分子途径是高度疾病特异性的(例如，异常折叠的β-淀粉样蛋白和蛋白质tau在阿尔茨海默病患者的脑中的积累；α-突触核蛋白在帕金森病中的积累；突变亨廷顿蛋白在亨廷顿病中的积累；TDP-43和FUS蛋白聚集体在肌萎缩侧索硬化症(ALS)的积累；DNA突变和断裂的线粒体在老年人中的积累)并在疾病进展的晚期阶段导致神经元细胞死亡。如动物模型和细胞系的研究所证实的，程序性细胞死亡(包括细胞凋亡)似乎在晚期疾病阶段的神经变性进展中起关键作用(Radi E.等，《阿尔茨海默病期刊》，2014；42)。
与神经变性有关的临床症状的疾病影响将近3000万人，疾病导致他们残疾和死亡。神经变性通常导致进行性神经系统功能障碍，并且经常与受影响的中枢或外周神经系统结构萎缩有关。神经变性与大量的神经系统疾病相关，影响特定功能解剖系统中神经元特定子集的异质临床和病理表达。下面列出了神经变性对临床和病理图像有显著影响的病症的非限制性列表：
·阿尔茨海默氏病
·老年痴呆型老年痴呆症
·皮克病(大脑萎缩)
·亨廷顿氏病
·痴呆与共济失调和/或帕金森病的表现相结合的多系统萎缩症
·进行性核上性麻痹(斯-里-奥三氏综合征)
·弥漫性路易体病
·皮质瘢痕性变性
·素变性病
·进行性家族性肌阵挛性癫痫
·麻痹震颤(帕金森病)
·纹状体变性
·进行性核上性麻痹
·扭转肌张力障碍(扭转痉挛；畸形性肌张力障碍)
·痉挛性斜颈和其他运动障碍
·家族性震颤
·图雷特综合征
·小脑皮质变性
·橄榄桥脑小脑萎缩(OPCA)
·脊髓小脑变性(遗传性脊髓性共济失调和相关疾病)
·中枢性自主神经系统综合症(立位低血压综合征)
·肌萎缩性侧索硬化症
·脊髓性肌萎缩
·原发性侧索硬化
·遗传性痉挛性截瘫
·腓骨肌肉萎缩(杜斯氏症)
·肥厚性间质性多发性神经病(神经病)
·其他形式的慢性进行性神经病
·视网膜色素变性(视网膜色素变性)
·遗传性视神经萎缩(莱伯氏病)
·躁郁症
·癫痫
·偏头痛
·精神分裂症。
传统上，寻找新的神经变性治疗方法集中在调节神经元细胞内的分子途径，以防止神经元细胞死亡并改善神经元细胞功能。组蛋白乙酰转移酶活化剂(US 20150119466)，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5抑制剂(US 20150119348)，神经营养素模拟物(US20150111903)，信号素-4D阻断剂(US 20150110800)，微粒体前列腺素E合酶-1抑制剂(US20150087646)，N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体抑制剂被提议用作治疗神经变性疾病的药物。NMDA受体抑制剂美金刚(memantine)已被临床用于治疗许多神经变性疾病，包括阿尔茨海默病，肌萎缩侧索硬化症(ALS)，帕金森病和亨廷顿病。美金刚还显示了作为与中枢神经系统(CNS)中过量的NMDA受体激活相关的其他疾病的治疗的希望，包括青光眼，多发性硬化，癫痫和神经性疼痛(J.Johnson等，《当代药理学》，2006，V6，第61-67页)。
循环胞外(也称为“游离”)核酸在60多年前被发现(Anker P.，血浆或血清中的循环DNA，《临床化学学报》，2001；313(1-2)：143-6)。正常血浆样品中的DNA水平相当低，浓度从3.6到5.0ng/ml不等。正常血浆样品主要含有约180bp的DNA片段和较大片段(例如500bp或更大片段)的比例更低。循环胞外DNA已被描述为几种疾病和病症的治疗靶点，包括癌症，感染，糖尿病，迟发型超敏反应和生育(参见例如美国专利号8,916,151；8,871,200；8,796,004；8,710,012；8,535,663；8,431,123；8,388,951；7,612,032；PCT/IL2007/001250；PCT/IB2013/056321)。
发明内容
如背景技术部分所述，本领域非常需要开发用于治疗神经变性的新组合物和方法。本发明通过提供基于DNA酶的组合物和方法来解决这个和其他需求。
具体而言，一方面，本发明提供了用于在有需要的患者(例如哺乳动物，如人或实验动物模型)中预防、治疗和/或抑制神经变性(例如，原发性神经变性)进展的方法，其包括向所述患者施用治疗有效剂量的DNA酶。
在一个相关方面，本发明提供了一种包含DNA酶的药物组合物，用于预防、治疗和/或抑制神经变性(例如，原发性神经变性)。
另一方面，本发明提供了DNA酶在预防、治疗和/或抑制有需要的患者中神经变性进展中的用途。
在一个实施例中，神经变性与患者的血液或脑脊液或肠中胞外DNA(例如原核和/或人)水平增加有关，该水平高于对照水平(例如，健康年龄匹配个体的血液或脑脊液或肠中胞外DNA的水平，或几个健康年龄匹配个体的血液或脑脊液或肠中胞外DNA的平均水平)。在一个实施例中，神经变性与神经变性疾病相关。包括的神经变性疾病的非限制性实例包括，例如阿尔茨海默病(即迟发性阿尔茨海默病)，帕金森病，肌萎缩侧索硬化(ALS)和亨廷顿舞蹈病。在一个实施例中，神经变性与神经系统功能障碍相关，例如精神分裂症或双相型障碍。
在一个实施例中，DNA酶的治疗有效剂量足以破坏患者血液或脑脊液或肠中的所述胞外DNA(例如，足以降低所述胞外DNA的平均分子量[例如，如通过凝胶电泳所测量的])。
在一个实施例中，所述DNA酶是重组DNA酶。在一个实施例中，所述DNA酶是DNA酶I。在一个实施例中，所述DNA酶具有延长的半衰期(例如与聚唾液酸缀合或通过修饰肌动蛋白结合位点而被保护免于与肌动蛋白结合；参见例如Gibson等，(1992)《免疫学方法杂志》，155，249-256)。
在一个实施例中，所述DNA酶通过静脉内、皮下或肌内施用。在一个具体的实施例中，所述DNA酶是DNA酶I，并且以至少0.04mg/kg/天或0.05-10000孔尼茨单位/kg/天的量在至少一天内施用。
在另一个实施例中，所述DNA酶经肠(例如口服)施用。在一个具体的实施例中，所述DNA酶是DNA酶I，并且以至少0.04mg/kg/天或0.05-10000孔尼茨单位/kg/天的量在至少一天内施用。
在另一个实施例中，所述DNA酶在脑脊液中施用。在一个具体的实施例中，所述DNA酶是DNA酶I，并且以每天至少0.1mg的量施用。
在下面的说明书，权利要求和附图中，本发明的这些和其它方面对于本领域的技术人员将是显而易见的。
附图简要说明
图1显示了在注射入颈动脉后，标记的胞外DNA在大鼠脑实质中的累积。
图2显示了施用DNA酶之前(左)和DNA酶治疗开始后一个月(右)患者的血液胞外DNA的电泳图。
图3A-B是T1MRI图像，显示了严重阿尔茨海默病患者的脑中左前额叶区域的萎缩和广泛神经胶质增生。图像(A)和(B)描绘了终末期阿尔茨海默病中的体积减少，伴随脑室周围白质的轻度改变。(A)冠状T1核磁共振显示顶叶区域明显的进行性皮层萎缩。(B)横向T1MRI显示双侧明显萎缩。
发明详述
本发明基于一个意外的发现，即细胞外DNA(真核和原核)以高水平存在于患有神经变性的患者(例如阿尔茨海默病，帕金森病，肌萎缩侧索硬化症，亨廷顿病，精神分裂症和双相性精神障碍)的血液和脑脊髓液(CSF)中，并且所述胞外DNA穿透血脑屏障(BBB)并发挥神经元毒性。如本文进一步证明的，DNA酶的施用导致神经变性的治疗/改善，并伴随着循环胞外DNA水平的降低。
定义
术语“神经变性”在本文中指神经元结构和/或功能逐渐丧失(包括神经元死亡)的单独的临床病理状态。神经变性可以是原发性或继发性的。涉及原发性神经变性的疾病的非限制性实例包括，例如阿尔茨海默病(AD)，轻度认知障碍(MCI)，帕金森病(PD)，亨廷顿病(HD)，朊病毒引起的疾病，额颞叶痴呆(FTD)，Lewy痴呆后期硬化(ALS)，慢性创伤性脑病(CTE)，进行性核上性麻痹(PSP)，多系统萎缩症(MSA)，皮质基底节变性(CBGD)，皮克病，橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA)，老年性痴呆阿尔茨海默型痴呆，进行性核上性麻痹(斯-里-奥三氏综合征)，皮质腱鞘变性，素变性病，进行性家族性肌阵挛性癫痫，纹状体黑质变性，扭转性肌张力障碍(例如扭转性痉挛；肌张力障碍肌无力)，痉挛性斜颈运动障碍，家族性震颤，图雷特综合征，小脑皮层退化，脊髓小脑变性(例如弗里德赖希共济失调及相关疾病)，立位低血压综合征，脊髓性肌萎缩症，原发性侧索硬化症，遗传性痉挛性截瘫，腓骨肌萎缩症(杜斯氏症)，肥厚型间质性多神经病(神经病)，慢性进行性神经病，视网膜色素变性(视网膜色素变性)和遗传性视神经萎缩(莱伯氏病)。继发性神经变性主要由坏死引起。可能导致继发性神经变性的病症的非限制性例子，包括通过肿瘤，水肿，出血，中风，创伤，免疫攻击，缺氧，中毒，代谢缺陷和感染破坏神经元。
术语“胞外DNA”和“游离DNA”可互换使用，指的是在患者的血液，脑脊髓液(CSF)或肠中发现的胞外DNA(真核或原核来源)。
如本文所用，术语“脱氧核糖核酸酶”和“DNA酶”用于指催化DNA骨架中磷酸二酯键水解切割的任何酶。各种各样的脱氧核糖核酸酶是已知的并且可以用于本发明的方法中。有用的DNA酶的非限制性例子包括，例如DNA酶I(例如，人重组DNA酶I或牛胰DNA酶I)，DNA酶I类似物(例如DNA酶X，DNA酶γ抗体和DNAS1L2)，DNA酶II，磷酸二酯酶I，乳铁蛋白和乙酰胆碱酯酶。DNA酶I优先在与嘧啶核苷酸相邻的磷酸二酯键处裂解DNA，产生在3'端具有游离羟基的5'5'-磷酸末端的多核苷酸，平均产生四核苷酸。DNA酶I作用于单链DNA，双链DNA和染色质。
术语“约”是指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这部分取决于如何测量或确定该值，即测量系统的限制。例如，根据本领域的实践，“约”可以意指在可接受的标准偏差内。或者，“约”可以是指给定值的高达±20％，优选高达±10％，更优选高达±5％，还更优选高达±1％的范围。或者，特别是关于生物系统或方法，该术语可以意指数值的一个数量级内，优选在2倍内。在申请和权利要求书中描述特定值的情况下，除非另有说明，术语“约”是隐含的，并且在本文中意味着在特定值的可接受的误差范围内。
在本发明的范围内，只要涉及本文所述的神经变性或任何特定的疾病病症，术语“治疗”等意味着减轻或减轻至少一种与这种病症有关的症状，或者减缓或逆转这种状况的进展。在本发明的含义内，术语“治疗”还表示阻止、延迟发作(即疾病临床表现之前的时期)和/或降低发展或恶化疾病的风险。
如本文所用，术语“治疗有效的”应用于剂量或量是指化合物或药物组合物的量足以在给予有需要的个体时产生期望的活性。在本发明的上下文中，当术语“治疗有效的”与使用脱氧核糖核酸酶(DNA酶)联合使用以预防、治疗和/或抑制神经变性或与所述神经变性有关的特定疾病的进展时，是指一定量的DNA酶或含有DNA酶的药物组合物，其有效地减轻或缓解至少一种与神经变性或这种疾病有关的症状，或减缓或逆转神经变性或这种疾病的进展。注意，当施用活性成分的组合时(例如DNA酶和另一种有效预防、治疗和/或抑制与神经变性有关的疾病的进展的化合物的组合)，组合的有效剂量可以包括或不包括单独施用本来有效的每种成分的量。
与本发明的组合物一起使用的短语“药学上可接受的”是指这样的组合物的分子实体和其他成分，其在生理学上可耐受，并且当施用于受试者(例如，哺乳动物如人)时通常不产生不利反应。优选地，如本文所用，术语“药学上可接受的”是指由联邦或州政府的管理机构批准的或在美国药典或其他公认药典中列出的用于哺乳动物，尤其是用于人类的。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”是指任何哺乳动物。在一个优选的实施例中，受试者/患者是人。
如在本说明书和所附权利要求中所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一个”，“一种”和“该”包括复数形式。
根据本发明，可以使用本领域技术范围内的常规药理学和分子生物学技术。这些技术在文献中有充分的解释。参见例如Sambrook，Fritsch&Maniatis，分子克隆：实验手册，第二版(1989)冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约(在此为“Sambrook等，1989”)；DNA克隆：实用方法，第一卷和第二卷(D.N.Glover编，1985)；寡核苷酸合成(MJ.Gait编，1984)；寡核苷酸合成(MJ.Gait编，1984)&S.J.希金斯编。(1985))；转录和翻译(B.D.Hames&S.J.Higgins，编(1984))；动物细胞培养(R.I.Freshney编，(1986))；固定化细胞和酶(IRL出版，(1986))；B.Perbal，分子克隆实用指南(1984)；F.M.Ausubel等(编)，《当代分子生物学手册》，John Wiley&Sons,Inc.1994)；等等。
本发明的治疗方法
如下面的实施例部分所示，血液和脑脊液(CSF)中的原核和真核胞外DNA水平随着老年性痴呆、帕金森病和阿尔茨海默氏病患者的神经状态恶化而增加。如本文进一步证明的，血液和脑脊髓液中的大部分胞外DNA是肠细菌DNA(例如源自胃肠微生物群)。因此，监测真核或原核来源的胞外DNA可用于预后或监测神经变性的进展。监测可以包括例如以下的一种或多种：确定胞外DNA的量，确定胞外DNA的类型(原核或真核细胞，例如基于rRNA确定)，确定特定DNA片段(例如，CpG基序，CpG样基序，16S的超保守区域，rpoD，例如使用RT-PCR或宏基因组分析测定)的存在和/或量。
如本文进一步描述的，来自患有神经变性疾病的患者的肠、血液和脑脊髓液的胞外DNA可以穿过血脑屏障(BBB)。这是意想不到的，因为对于大的核酸分子，BBB一直被认为是不可渗透的(Evers MM，反义寡核苷酸治疗神经变性疾病。《先进药物输送综述》，2015)。
如本文进一步描述的，来自患有神经变性的患者的肠、血液和脑脊髓液的胞外DNA引起神经元细胞死亡和细胞凋亡。破坏这些胞外DNA的DNA酶治疗显着改善了这些患者的神经系统功能。根据广泛接受的认知衰退临床诊断标准进行改善评估，如MMSE，PANSS，物理功能和/或功能任务(参见例如Holmes等，(1999)《英国精神病学杂志》，174(1)，45-50；Os等，(2006)《斯堪的纳维亚精神病学学报》，113(2)，91-95；O’Shea等(2002)物理治疗法，82(9)，888-897；Rochester等，(2004)85(10)，1578-1585)。
在一方面，本发明提供了用于预防、治疗和/或抑制有需要的受试者中的神经变性进展的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效剂量的DNA酶(例如，DNA酶I，DNA酶I的类似物[例如DNA酶X，DNA酶γ，DNAS1L2]，DNA酶II，磷酸二酯酶I，乳铁蛋白或乙酰胆碱酯酶)，其中所述量的DNA酶有效预防或改善至少一种神经变性症状。
在本发明的方法中有用的DNA酶剂量取决于神经变性的严重性和过程、先前或同时的治疗、患者的临床病史和对DNA酶的应答，以及主治医师的判断。优选地，这样的剂量在0.5-20mg/kg/天或500-20000孔尼茨单位(KU)/kg/天的范围内。
根据本发明的方法施用DNA酶可以通过任何合适的途径进行。有用的给药途径的具体非限制性实例包括静脉内、皮下、肌内、递送至脑脊液(CSF)、肠内(例如口服)、直肠(例如通过灌肠)和鼻内。
根据本发明的方法，DNA酶可以单独施用或与对抑制进展有用，或治疗神经变性疾病，或其他神经系统功能障碍(例如双相性精神障碍、偏头痛、精神分裂症、癫痫)的其它治疗组合施用。这些另外治疗的非限制性实例包括，例如组蛋白乙酰转移酶活化剂，细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5抑制剂，神经营养因子模拟物，信号素-4D阻断剂，微粒体前列腺素E合酶-1抑制剂，左旋多巴和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体抑制剂(例如美金刚)。
本发明的药物组合物
在某些实施方案中，DNA酶可以与药学上可接受的载体或赋形剂一起配制成药物组合物。
本发明方法中使用的制剂可方便地以单位剂量形式存在，并可通过本领域已知的方法制备。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的对象和特定的施用模式而变化。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常将是产生治疗效果的化合物的量。
通常，制剂可以用液体载体或精细分散的固体载体或两者一起制备，然后如果需要，使产品成型。
适于肠胃外给药的药物组合物可以包含DNA酶与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散体、混悬液或乳液，或者可以在使用前重构成无菌注射溶液或分散体的无菌粉末组合，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。可以用于本公开的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的实例包括水，乙醇，多元醇(如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油如橄榄油和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣材料，通过在分散体的情况下维持所需的粒度，通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。
这些组合物还可以含有防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗菌剂和抗真菌剂可以确保防止微生物的作用，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等。将等渗剂如糖、氯化钠等包括在组合物中也是可取的。另外，可注射药物形式的延长吸收可以通过包含延迟吸收的药剂来实现，如单硬脂酸铝和明胶。
可注射储库形式可以通过在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成一种或多种活性成分的微胶囊基质来制备。根据活性成分与聚合物的比例以及所用特定聚合物的性质，可以控制活性成分的释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将活性成分包裹在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备贮库注射制剂。
用于口服给药的制剂可以是胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、散剂、颗粒剂形式，或者作为水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂(例如作为漱口剂、要吞服的组合物、或者灌肠剂)，或者作为水包油或油包水的液体乳剂等，每种都含有预定量的一种或多种活性成分。
在用于口服给药的固体剂型(胶囊剂、片剂、丸剂、糖锭剂、粉剂、颗粒剂等)中，一种或多种活性成分(DNA酶和任意其他用于治疗神经变性疾病的化合物)可以与一种或多种药学上可接受的载体如柠檬酸钠或磷酸二钙混合，或以下任何一项：(1)填充剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)润湿剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；和(10)着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，药物组合物可以包含缓冲剂。相同类型的固体组合物还可用作软和硬填充明胶胶囊中的填充剂，使用赋形剂如乳糖或乳液的糖以及高分子量聚乙二醇等。
除一种或多种活性成分之外，悬浮液还含有悬浮剂如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。
本发明的DNA酶组合物还可以包含促进DNA酶递送穿过血脑屏障(BBB)的物质。这种有用物质的非限制性实例包括，例如可植入储库(Omaya储库)、DNA酶的聚腺苷酸化、功能化纳米载体(例如，用转铁蛋白或转铁蛋白受体[TR]抗体包被的纳米颗粒)、外泌体、脂质体(例如用靶向分子如抗体、特洛伊木马脂质体[THL]包被的脂质体)、抗体(例如抗转铁蛋白受体[TR]或胰岛素受体[HIR]的抗体、BBB穿越Llama单结构域抗体(sdAb))、嵌合肽(例如来源于表达Kunitz结构域的蛋白的血管肽)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LRP-1和2)、白喉毒素受体(DTR)、间充质干细胞、受体相关蛋白、载脂蛋白E、黑素转铁蛋白/p97等。
实施例
以下通过实施例对本发明进行描述和说明。然而，在说明书中的任何地方使用这些和其他示例只是说明性的，并不以任何方式限制本发明的范围和含义。同样地，本发明不限于任何特定的优选实施例。实际上，本发明的许多修改和变化对于本领域技术人员在阅读本说明书之后可能是显而易见的，并且/或者可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下进行改变。因此，本发明仅受所附权利要求以及那些权利要求的等价形式的整个范围的限制。
实施例1.来自血液和脑脊髓液的胞外循环DNA促进神经元细胞死亡
对于神经元培养，将大脑皮质从胚胎日(E)15-17雄性实验动物大鼠胚胎移除。使用细针将皮质外植体切成约200-400μm2的碎片，并根据制造商的说明书用木瓜蛋白酶解离系统(沃辛顿生化试剂)解离，然后保存在冰冷的基础培养基(Gibco)上。将神经元涂布在直径13mm的盖玻片上，先用聚-D-赖氨酸(10μg/ml，PBS中)涂覆，然后用层粘连蛋白(10μg/ml，PBS中)(Gibco)，然后在含有1％(v/v)抗生素-抗真菌药物的基础培养基(Gibco)中，37℃，加湿的8％CO2(v/v)中培养24-48小时。
根据制造商的说明书，用QIAamp循环核酸试剂盒从患有严重阿尔茨海默病的患者的血浆和脑脊髓液中提取胞外DNA。为了评估此类胞外DNA对神经元的生物效应，将胞外DNA样品加入皮层神经元培养物中。在培养48小时的分离的皮层神经元中测定神经元细胞死亡。初始阶段之后，将胞外DNA样品(剂量水平100和200mkg/ml)再施用24小时。通过CytoTox-GloTM细胞毒性分析(普洛麦格)评估神经元细胞死亡。用Promega GloMax 96光度计测量与死细胞数量成正比的荧光，并以相对发光单位(RLU)表示。
在培养48小时的分离的皮质神经元中测定凋亡标记物半胱天冬酶3的诱导情况。初始阶段之后，将胞外DNA样品(剂量水平100和200mkg/ml)再施用24小时。将细胞固定在4％(w/v)多聚甲醛(PFA)中，然后在PBS中以1:500稀释的裂解半胱天冬酶3抗体(艾碧康)中孵育1小时。洗涤细胞，并在PBS中与半胱天冬酶3的山羊抗兔多克隆Alexa Fluor 488抗体(英杰公司)温育1小时，再进行洗涤和计数。
表1
*使用的DNA酶I是由康泰伦特(麦迪逊，美国)制造的人重组DNA酶1。
从表1中的数据可以看出，来自血液和脑脊髓液的胞外DNA在培养的神经元中以剂量依赖性方式诱导细胞毒性和凋亡标记物半胱氨酸蛋白酶3的上调。DNA酶I保护神经元免受胞外DNA诱导的毒性。
实施例2.阿尔茨海默病患者血液和脑脊液中细菌胞外DNA的评估
根据制造商的说明，用QIAamp循环核酸试剂盒从患有严重阿尔茨海默病的患者和健康志愿者(年龄和性别匹配)的血浆和脑脊髓液中提取胞外DNA。使用CFX96TouchTM实时PCR检测系统对细菌胞外DNA进行定量。我们使用通用细菌DNA PCR引物1369F和1492R(细菌16S rRNA)。
1369F(SEQ ID NO:1) CGGTGAATACGTTCYCGG
1492R(SEQ ID NO:2) GGWTACCTTGTTACGACTT
阈值循环列于下表中：
表2
从表2的数据来看，与健康志愿者相比，严重的阿尔茨海默病患者的血清和脑脊液含有更多的细菌DNA。
实施例3.来自血液的胞外循环DNA穿透血脑屏障
使用QIAamp循环核酸试剂盒从诊断为老年性痴呆的患者的血浆中提取胞外DNA。胞外DNA的碘化如所述使用碘基因试剂进行(Piatyszek A.等，分析生物化学，1988，V172，pp.356-359)。标记的胞外DNA的比活性约为30mkCi/mkg。将1ml PBS溶液(约3.0mkCi，100ng)中标记的胞外DNA缓慢地(0.1ml/分钟)注入麻醉的雌性SD大鼠的颈动脉中。一小时后，将大鼠用氯仿安乐死，将脑取出并固定在福尔马林溶液中。石蜡切片用依尔福L4乳剂染色。使用标准视觉组织放射自显影技术研究脑中标记的胞外DNA的累积(图1)。注射胞外DNA在大鼠脑实质中的积累表明它穿透血脑屏障(BBB)。
实施例4.用DNA酶治疗老年性痴呆
72岁的男性患者K.四年前已经诊断为老年性痴呆，逐渐发展为运动迟缓、短期记忆和注意力恶化。渐渐出现以下症状：情绪低落，缺乏主动性，情绪不稳，嗜睡。患者服用左旋多巴3年，观察到有一些积极效果。然而，在过去的18年里，症状变得更加明显，即运动减退和姿势障碍开始显现。
给患者施用牛胰腺DNA酶I(Samson Med，俄罗斯)，以2000孔尼茨单位/kg的量每天口服胶囊三次。在14天和30天后，使用简易精神状态检查量表(MMSE)评估DNA酶治疗的有效性。研究结果如表3所示。
表3
在DNA酶治疗之前两个月并恰在DNA酶治疗开始之前，使用实时PCR(RT-PCR)测定法对来自患者的人血浆DNA进行定量：ALU(J1)，c-MYC和β-Glob(ALU引物为GTCAGGAGATCGAGACCATCCC(SEQ ID NO：3)，c-MYC引物为AAACACAAACTTGAACAGCTAC(SEQ IDNO:4)，β-Glob引物为GGTTGGCCAATCTACTCCCAGG(SEQ ID NO：5)。阈值循环列在下表中。
表4
在图2中显示了在DNA酶治疗之前(左)和治疗后一个月(右)的患者的血液胞外DNA的电泳图(琼脂糖凝胶)。
如上所述，老年痴呆症患者临床症状的进展特征在于血液中循环胞外DNA水平的升高。破坏胞外DNA的DNA酶治疗对痴呆症状具有积极的临床作用。
实施例5.用DNA酶减双相情感障碍的恶化
患者：M.，63岁，男。诊断：原发病-双相情感障碍恶化，躁狂发作。在治疗开始时，抱怨烦躁不安，渴望尖叫，做噩梦。检查发现患者非常活跃，会突然离开房间，表现出去抑制化(常问问题，经常会开始唱歌)和易怒(很容易被重复的问题激怒)。
在DNA酶治疗开始之前，用阳性和阴性综合征量表(PANSS-EC)兴奋成分评估的总分为29分。患者接受一次持续3小时的静脉内注射50孔尼茨单位/kg人重组DNA酶I(康泰伦特，麦迪逊，美国)。在DNA酶治疗后，症状明显缓解，PANSS-EC总分为8分，未观察到精神运动性兴奋。
因此，DNA酶的施用在治疗双相情感障碍加重时具有积极的作用。
实施例6.用DNA酶治疗精神分裂症
患者：L.38岁，女。诊断：精神分裂症，偏执型，阵发性病程，偏执型幻觉综合征。在DNA酶治疗之前，患者抱怨听到“头脑内”的声音，她还认为她的同事试图毒死她。患者的坐姿不自然，还观察到明显的上肢震颤，运动也会震颤。发现情绪障碍，思维障碍(思维迟缓，出轨，不合逻辑)。用阳性和阴性综合征量表(PANSS)进行评估，总分分别为24和22分。
患者开始口服3000孔尼茨单位(KU)/kg的牛胰腺DNA酶I(Samson Med，俄罗斯)胶囊，每天三次。研究结果如表5所示。
表5
因此，给予DNA酶在治疗精神分裂症方面有积极的作用。
实施例7.用DNA酶治疗阿尔茨海默病
患者G.，77岁，男性。基于临床数据和指示性MRI改变，患者被诊断为患有阿尔茨海默病。从确诊后14个月开始，患者开始服用美金刚胺。然而，临床症状继续恶化，开始表现出言语和协调障碍，以及迷失方向。确诊后20个月时，患者出现了上述所有症状，并且行动不能自理。开始施用DNA酶时，患者处于昏迷状态，并观察到大小便失禁。
患者开始口服4000孔尼茨单位/kg的牛胰腺DNA酶I(Samson Med，俄罗斯)胶囊，每24小时三次。在DNA酶治疗开始后的第5天和第30天，用MMSE小规模评估有效性。研究结果如表6所示。
表6
在DNA酶治疗之前一个月、恰在开始治疗前和治疗开始后30天，用常规实时PCR(RT-PCR)测定法定量患者的人血浆DNA中三种不同标记物序列：ALU(J1)，c-MYC和β-Glob(ALU引物是GTCAGGAGATCGAGACCATCCC(SEQ ID NO：3)，c-MYC引物是AAACACAAACTTGAACAGCTAC(SEQ ID NO：4)，β-Glob引物是GGTTGGCCAATCTACTCCCAGG(SEQ IDNO：5)，以患者的胞外DNA总分数计。结果列于表7。
表7
早在DNA酶治疗开始后的第5天，观察到患者认知功能的显著改善。患者言语和思维恢复正常，能站起身来，穿好衣服，然后自己四处走动了。
因此，DNA酶的施用对阿尔茨海默病的治疗有积极的作用。DNA酶治疗的积极临床效果是通过降低血液中的循环胞外DNA水平来促进的。
实施例8.DNA酶用于治疗阿尔茨海默病的路易体变体
一名77岁的白人男性在诊所就诊前30个月被诊断为迟发性阿尔茨海默病继发性痴呆，表现出行为障碍，认知能力下降，从事日常生活活动的能力下降。初次诊断后大约14个月，患者开始每天服用10mg美金刚肽(Reisberg等，《新英格兰医学杂志》，2003；348：1333-1341；Danysz等，《英国临床药理学杂志》，2012；167：324-352)，然而他的认知状况持续恶化，除了进行性失忆综合征，失语症，运动迟缓，步态缓慢，失去平衡和尿失禁之外，快速进展为包括如侵略性和去抑制化之类的行为变化。此外，患者体重减轻了20磅，这表明患有阿尔茨海默病的患者预后不良(Soto等，《阿尔茨海默病期刊》(2012)28：647-654；Soto等，《美国老年学会杂志》，2015；63：651-658；White等，《美国老年学会杂志》，1998；46：1223-1227)。头颅MRI分析显示适龄的脑室周围白质的体积损失和轻度改变(图3A-B)。
在开始美金刚治疗13个月后，患者在简易精神状态检查(MMSE)和功能评估分级检查(FAST)上的总分分别是10分和5分。他在时间和地点、注意力、记忆力和视觉空间建设方面没有得分，并且患者在完成任务方面明显较慢。患者在转弯和拐弯时遇到额外困难，导致反复跌倒，并表现出波动的意识水平，在混乱和清醒之间交替。但是，他没有视觉或听觉幻觉。
另外三个月后，美金刚治疗开始后共16个月，患者的认知功能进一步恶化。患者的意识水平有波动。他的认知在混淆和清醒之间波动，但他没有视觉或听觉幻觉。他记不住他的名字、日历日期、星期几、年份或地点、不认识家人。额外的障碍包括言语不清、表情失语、肠/膀胱失控、缺乏协调能力、无法坐下、站立或行走无力。患者对刺激没有反应，MMSE评分3分，FAST评分7分。
一个月后，患者家属同意用40mg人重组DNA酶I治疗(1500KU/mg，Samson Med，俄罗斯)，每天口服3次，并持续美金刚治疗(每天10mg)。DNA酶I耐受性很好，没有发生不良或意外事件。
在DNA酶I治疗的第二天，患者开始有认知改善，对时间和地点有部分感觉，并再次想起和记住家庭成员的名字。然后他能够自己穿衣服，包括系鞋带和纽扣，以及自己走路、自己吃饭，并能骑自行车。影响步态的神经系统异常明显减弱。他的MMSE得分从3分急剧增加到了16分，而FAST得分从7分降到了5分。然而，他对于时间、地点、记忆和视觉空间结构的MMSE得分依然很低。
在DNA酶I治疗开始后两个月(美金刚治疗19个月后)，患者的MMSE评分为18分，FAST评分为4分。虽然视觉空间结构继续下降，但观察到记忆有中等改善。他能够更好地与其他人交谈、认识亲人、积极参加电视节目。患者还能计算、弹钢琴、下象棋、并能自己走路。
以上数据表明DNA酶的施用对治疗阿尔茨海默病有积极作用。在本实施例中用DNA酶治疗使患者从终点状态好转，并导致认知和行为功能的显着改善，包括独自走路和完成每天任务的能力。在认知和运动功能的所有方面都观察到显著恢复，表明DNA酶敏感靶点可能参与阿尔茨海默病症状的产生。游离DNA，包括细菌来源的DNA，可能就是这样一个靶点(Holdenrieder等，《临床化学》2005；51：1544-1546)。
实施例9.用DNA酶治疗帕金森病
患者S.，58岁，女，患帕金森病7年。最近5年，她接受左旋多巴治疗。研究前一个月，患者病情明显恶化，即：右手震颤明显增加、以广泛性舞蹈手合症的形式出现不自主运动、四肢僵硬、早晨起床困难、夜间尿频(6-7次)。
患者开始每天三次以1500孔尼茨单位/kg的量在胶囊中口服牛胰腺DNA酶I(Samson Med，俄罗斯)。用统帕金森病评定量表(UPDRS)进行评估，在6个月期间进行观察。
在DNA酶治疗之前一个月、恰在治疗之前和治疗开始后3个月，使用常规实时PCR(RT-PCR)测定法对患者血浆DNA中的ALU序列(TPALU1：GTAAGAGTTCCGTAACAGGACAGCT(SEQID NO：6))进行定量，以患者胞外DNA的总分数计。阈值循环在表8中给出。
表8
观察时间，月 游离DNA量(ALU) UPDRS(分)
0 9.56±0.047 22
1 9.43±0.012 17
3 8.93±0.042 16
12 - 14
24 - 12
在服用DNA酶I的第6个月，观察到患者以下病情的显着改善：早盲、运动僵硬、双手颤动减少；夜间排尿次数减少到每晚一次。因此，DNA酶的施用对帕金森病的治疗有积极作用。这种积极的作用伴随着血液中循环胞外DNA水平的降低。
实施例10.DNA酶用于治疗肌萎缩侧索硬化症
对SOD1酶敲除伴有G93A-hSOD1蛋白过度表达的小鼠进行研究，这是肌萎缩侧索硬化症(ALS)的普遍接受模型(Gurney，《新英格兰医学期刊》(1994)331：1721-1722)。形成两组动物，每组由10只动物组成(Jackson实验室，巴尔港，ME)。这些动物被安置在一个12小时光照周期的房间中，并自由提供水和食物。如PCT/GB2007/002839中所述制备聚唾液酸化的DNA酶。简言之：将20摩尔过量的氧化的26kDa聚唾液酸(PSA)溶解在缓冲液中，并将pH调节至6.0。然后加入人重组DNA酶I DNA酶(康泰伦特)和50mM(终浓度)氰基硼氢化钠，重新调节pH值，并使反应混合物达到所需体积。反应在37±1℃下轻轻摇动18小时。使用疏水相互作用色谱(HIC)-苯基-琼脂糖基质纯化DNA酶-PSA偶联物，含有2.0M硫酸铵的起始缓冲液，在不含硫酸铵的缓冲液中洗脱。然后将洗脱组分用于离子交换基质快流速Q琼脂糖凝胶，并用含有氯化钠的缓冲液洗脱。通过尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)确认缀合物的纯化。
第1组小鼠未接受治疗(对照组)；第2组小鼠接受皮下注射50mg/kg的人聚唾液酸化重组DNA酶I，每天一次。动物的存活时间用作评估标准。结果显示在表9中。
表9
因此，DNA酶I的施用对肌萎缩侧索硬化症小鼠的存活具有积极作用。
实施例11.用DNA酶治疗系统性中枢神经系统萎缩
选择亨廷顿病作为系统性中枢神经系统萎缩的例子。已经对表达编码谷氨酰胺的基因的外显子1的R6/2转基因小鼠进行了研究，所述小鼠是普遍接受的亨廷顿病模型(Miller等，《神经科学》(2008)153：329-337)。形成三组动物，每组由10只动物组成(查尔斯河实验室)。动物被安置在12小时光照周期的房间内，并自由提供水和食物。第1组的小鼠没有接受治疗；第2组的小鼠以25000mg/kg的量接受人重组DNA酶I(康泰伦特，麦迪逊，美国)治疗(每24小时2次，肌肉注射)；第3组的小鼠接受25mg/kg量的DNA酶(每周一次，用ICV推注技术)。动物的存活时间用作评估标准。结果显示在表10中。
表10
因此，DNA酶I的施用对亨廷顿病的治疗有积极的作用。
* * *
本发明的范围不受这里描述的具体实施例的限制。实际上，除了本文所述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域的技术人员将变得显而易见。修改旨在所附权利要求的范围内。
所有专利、申请、出版物、实验方法、文献和其他材料通过引用整体并入本文，如同在本说明书中的一样。

Claims (89)

1.一种预防，治疗和/或抑制有需要的患者的神经变性进展的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的DNA酶。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述神经变性是原发性神经变性。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述神经变性与所述患者的血液或脑脊液或肠中胞外DNA水平的升高相关，所述水平高于血液或脑脊液中或肠中胞外DNA的对照水平。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述对照水平是健康年龄匹配个体的血液或脑脊液或肠中胞外DNA的水平或几个健康年龄匹配的个体的血液或脑脊液中胞外DNA的平均水平。
5.如权利要求3或4的方法，其中所述胞外DNA是原核来源的。
6.如权利要求3或4的方法，其中所述胞外DNA是人源的。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述治疗有效剂量的所述DNA酶足以破坏所述患者的血液或脑脊液或肠中的所述胞外DNA。
8.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述治疗有效剂量的所述DNA酶足以降低通过凝胶电泳测量的所述胞外DNA的平均分子量。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述DNA酶是重组DNA酶。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述DNA酶是DNA酶I。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述DNA酶具有延长的半衰期。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述DNA酶与聚唾液酸缀合。
13.如权利要求11所述的方法，其中所述DNA酶通过修饰肌动蛋白结合位点而被保护免于与肌动蛋白结合。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述DNA酶通过静脉内、皮下或肌内途径施用。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且以至少0.04mg/kg/天的量在至少一天内施用。
16.如权利要求14所述的方法，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且以0.05-10000孔尼茨单位/kg/天的量在至少一天内施用。
17.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述DNA酶经肠内施用。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述DNA酶经口服施用。
19.权利要求17或18所述的方法，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且以至少0.04mg/kg/天的量在至少一天内施用。
20.如权利要求17或18所述的方法，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且以0.05-10000孔尼茨单位/kg/天的量在至少一天内施用。
21.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述DNA酶被施用到脑脊液中。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述DNA酶是DNA酶I并且以每天至少0.1mg的量施用。
23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述患者已经被诊断患有阿尔茨海默病。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述阿尔茨海默病是迟发型阿尔茨海默病。
25.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述患者已被诊断患有帕金森病。
26.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述患者已被诊断为患有肌萎缩侧索硬化症。
27.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述患者已被诊断患有亨廷顿病。
28.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述患者已被诊断患有精神分裂症。
29.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述患者已被诊断患有双相型障碍。
30.如权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述患者是人。
31.如权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述患者是实验动物模型。
32.一种包含DNA酶的药物组合物，其用于预防、治疗和/或抑制神经变性进展的方法中，其中所述神经变性与血液或脑脊液或肠中胞外DNA水平增加有关。
33.如权利要求32所述的药物组合物，其中所述神经变性是原发性神经变性。
34.如权利要求32或33所述的药物组合物，其中所述胞外DNA是原核来源的。
35.如权利要求32或33所述的药物组合物，其中所述胞外DNA是人源的。
36.如权利要求32至35中任一项所述的药物组合物，其中所述DNA酶以足以破坏患者的血液或脑脊液或肠中胞外DNA的量施用。
37.如权利要求32至35中任一项所述的药物组合物，其中所述DNA酶以足以降低通过凝胶电泳所测量的所述胞外DNA的平均分子量的量施用。
38.如权利要求32-37中任一项所述的药物组合物，其中所述DNA酶是重组DNA酶。
39.如权利要求32-38中任一项所述的药物组合物，其中所述DNA酶是DNA酶I。
40.如权利要求32-39中任一项所述的药物组合物，其中所述DNA酶具有延长的半衰期。
41.如权利要求40所述的药物组合物，其中所述DNA酶与聚唾液酸缀合。
42.如权利要求40所述的药物组合物，其中所述DNA酶通过修饰肌动蛋白结合位点而被保护免于与肌动蛋白结合。
43.如权利要求32-42中任一项所述的药物组合物，其中所述DNA酶将通过静脉内、皮下或肌内途径施用。
44.如权利要求43所述的药物组合物，其中所述DNA酶是DNA酶I，其在至少一天内以至少0.04mg/kg/天的量施用。
45.如权利要求43所述的药物组合物，其中所述DNA酶是DNA酶I，其在至少一天内以每千克体重0.05-10000孔尼茨单位的量施用。
46.如权利要求32-42中任一项所述的药物组合物，其中所述DNA酶经肠施用。
47.如权利要求46所述的药物组合物，其中所述DNA酶被口服给药。
48.如权利要求46或47所述的药物组合物，其中所述DNA酶是DNA酶I，其在至少一天内以至少0.04mg/kg/天的量施用。
49.如权利要求46或47所述的药物组合物，其中所述DNA酶是DNA酶I，其在至少一天内以每千克体重0.05-10000孔尼茨单位的量施用。
50.如权利要求32-42中任一项所述的药物组合物，其中所述DNA酶被施用到脑脊液中。
51.如权利要求50所述的药物组合物，其中所述DNA酶是DNA酶I，其以至少0.1mg/天的量施用的。
52.如权利要求32-51中任一项所述的药物组合物，其中所述神经变性与阿尔茨海默病有关。
53.如权利要求52所述的药物组合物，其中所述阿尔茨海默病是迟发型阿尔茨海默病。
54.如权利要求32-51中任一项所述的药物组合物，其中所述神经变性与帕金森病有关。
55.如权利要求32-51中任一项所述的药物组合物，其中所述神经变性与肌萎缩侧索硬化有关。
56.如权利要求32-51中任一项所述的药物组合物，其中所述神经变性与亨廷顿病有关。
57.如权利要求32-51中任一项所述的药物组合物，其中所述神经变性与精神分裂症有关。
58.如权利要求32-51中任一项所述的药物组合物，其中所述神经变性与双相型障碍有关。
59.DNA酶用于预防、治疗和/或抑制有此需要的患者的神经变性进展的用途。
60.如权利要求59所述的用途，其中所述神经变性是原发性神经变性。
61.如权利要求59或60所述的用途，其中所述神经变性与所述患者的血液或脑脊液或肠中胞外DNA的水平升高相关，所述水平高于血液或脑脊髓液或肠中胞外DNA的对照水平。
62.如权利要求61所述的用途，其中所述对照水平是健康年龄匹配个体的血液或脑脊液或肠中胞外DNA的水平或几个健康年龄匹配个体的血液或脑脊液中胞外DNA的平均水平。
63.如权利要求61或62所述的用途，其中所述胞外DNA是原核来源的。
64.如权利要求61或62所述的用途，其中所述胞外DNA是人源的。
65.如权利要求59-64中任一项所述的用途，其中所述治疗有效剂量的DNA酶足以破坏患者的血液或脑脊液或肠中的所述胞外DNA。
66.如权利要求59-64中任一项所述的用途，其中所述DNA酶的治疗有效剂量足以降低通过凝胶电泳测量的所述胞外DNA的平均分子量。
67.如权利要求59-66中任一项所述的用途，其中所述DNA酶是重组DNA酶。
68.如权利要求59-67中任一项所述的用途，其中所述DNA酶是DNA酶I。
69.如权利要求59-68中任一项所述的用途，其中所述DNA酶具有延长的半衰期。
70.如权利要求69所述的用途，其中所述DNA酶与聚唾液酸缀合。
71.如权利要求69所述的用途，其中通过修饰肌动蛋白结合位点保护所述DNA酶不与肌动蛋白结合。
72.如权利要求59-71中任一项所述的用途，其中所述DNA酶通过静脉内、皮下或肌内途径施用。
73.如权利要求72所述的用途，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且在至少一天内以至少0.04mg/kg/天的量施用。
74.如权利要求72所述的用途，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且在至少一天内以每千克每天0.05-10000孔尼茨单位的量施用。
75.如权利要求59-72中任一项所述的用途，其中所述DNA酶经肠施用。
76.如权利要求75所述的用途，其中所述DNA酶经口服给药。
77.如权利要求74或75所述的用途，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且在至少一天内以至少0.04mg/kg/天的量施用。
78.如权利要求74或75所述的用途，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且在至少一天内以0.05-10000孔尼茨单位/kg/天的量施用。
79.如权利要求59-71中任一项所述的用途，其中所述DNA酶被施用到脑脊液中。
80.如权利要求79所述的用途，其中所述DNA酶是DNA酶I，并且以每天至少0.1mg的量施用。
81.如权利要求59-80中任一项所述的用途，其中所述患者已被诊断患有阿尔茨海默病。
82.如权利要求81所述的用途，其中所述阿尔茨海默病是迟发型阿尔茨海默病。
83.如权利要求59-80中任一项所述的用途，其中所述患者已被诊断患有帕金森病。
84.如权利要求59-80中任一项所述的用途，其中所述患者已被诊断为患有肌萎缩侧索硬化症。
85.如权利要求59-80中任一项所述的用途，其中所述患者已被诊断为患有亨廷顿病。
86.如权利要求59-80中任一项所述的用途，其中所述患者已被诊断患有精神分裂症。
87.如权利要求59-80中任一项所述的用途，其中所述患者已经被诊断患有双相型障碍。
88.如权利要求59-80中任一项所述的用途，其中所述患者是人。
89.如权利要求59-80中任一项所述的用途，其中所述患者是实验动物模型。
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