RU2269356C2 - Способ лечения онкологических заболеваний - Google Patents

Способ лечения онкологических заболеваний Download PDF

Info

Publication number
RU2269356C2
RU2269356C2 RU2004108061/14A RU2004108061A RU2269356C2 RU 2269356 C2 RU2269356 C2 RU 2269356C2 RU 2004108061/14 A RU2004108061/14 A RU 2004108061/14A RU 2004108061 A RU2004108061 A RU 2004108061A RU 2269356 C2 RU2269356 C2 RU 2269356C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
dna
blood
agent
extracellular
dnase
Prior art date
Application number
RU2004108061/14A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2004108061A (ru
Inventor
Дмитрий Дмитриевич Генкин (RU)
Дмитрий Дмитриевич Генкин
Виктор Вениаминович Тец (RU)
Виктор Вениаминович Тец
Георгий Викторович Тец (RU)
Георгий Викторович ТЕЦ
Original Assignee
Дмитрий Дмитриевич Генкин
Виктор Вениаминович Тец
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/RU2003/000304 external-priority patent/WO2005007187A1/ru
Application filed by Дмитрий Дмитриевич Генкин, Виктор Вениаминович Тец filed Critical Дмитрий Дмитриевич Генкин
Priority to RU2004108061/14A priority Critical patent/RU2269356C2/ru
Priority to PCT/RU2004/000261 priority patent/WO2005004903A1/ru
Priority to PL04748955T priority patent/PL1655036T3/pl
Priority to US10/564,861 priority patent/US7612032B2/en
Priority to EP04748955.4A priority patent/EP1655036B1/en
Priority to ES04748955T priority patent/ES2427091T3/es
Priority to US10/564,615 priority patent/US20080004561A1/en
Publication of RU2004108061A publication Critical patent/RU2004108061A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2269356C2 publication Critical patent/RU2269356C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/21—Endodeoxyribonucleases producing 5'-phosphomonoesters (3.1.21)
    • C12Y301/21001—Deoxyribonuclease I (3.1.21.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения злокачественных опухолей. Для этого обеспечивают введение в кровь агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови. Этот агент вводят в дозах, обеспечивающих изменение электрофоретического профиля внеклеточной ДНК крови. Агент также можно вводить в дозах и режимах, обеспечивающих уровень ДНК-гидролитической активности плазмы крови, измеряемый в плазме крови и превышающий 150 единиц Кунца на литр плазмы, на протяжении суммарно более 12 часов в сутки. Лечение может осуществляться непрерывно не менее 2 суток. В качестве агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови, может быть использован ДНКаза, в частности, бычья панкреатическая ДНКаза или рекомбинантная человеческая ДНКаза. Способ предполагает также введение агента, связывающего внеклеточную ДНК крови, например, анти-ДНК антитела. Способ обеспечивает малотоксичное и эффективное лечение опухолей, в частности, при длительной, даже пожизненной терапии указанными средствами. 10 з.п. ф-лы, 6 табл.

Description

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения преимущественно солидных опухолей.
Популяции опухолевых клеток, развивающиеся в организме больного, обладают чрезвычайно высокой степенью генетической изменчивости, намного превышающей таковую у здоровых клеток. Генетическая изменчивость популяций раковых клеток позволяет им в процессе заболевания генерировать фенотипы, нечувствительные к иммунному и морфогенетическому контролю, способные к инвазии и метастазированию и нечувствительные к противоопухолевой терапии. Считается, что селекционный отбор и клональная экспансия раковых клеток лежат в основе биологической и клинической "прогрессии" опухолей. В соответствии с этими представлениями стратегия современной противоопухолевой терапии основана на принципе уничтожения клонов опухолевых клеток в организме больного с помощью методов - химиотерапии, радиотерапии, иммунотерапии, биотерапии, хирургического удаления и различных их комбинаций.
Из нехирургических методов лечения онкологических заболеваний наибольшее распространение получили способы химиотерапии, радиотерапии, биотерапии, а в последнее время и иммунотерапии, направленные на уничтожение, повреждение или инактивацию внутриклеточной ДНК опухолевой клетки.
Известны химиотерапевтические методы лечения при помощи препаратов платины, см. "Molecular mechanisms involved in cisplatin cytotoxicity". Jordan P, Carmo-Fonseca M, Cell Mol Life Sci 2000 Aug. v 57: pp.1229-35, антрациклиновых антибиотиков, см. "Daunorubicin and doxorubicin, anthracycline antibiotics, a physicochemical and biological review", Aubel-Sadron G, Londos-Gagliardi D, Biochimie 1984 May v.66: pp.333-52, алкилирующих агентов, см. "An overview of cyclophosphamide and ifosfamide pharmacology". Fleming RA, Pharmacotherapy 1997 Sep-Oct v.17: pp.146S-154S, и производных подофилотоксинов, см. "Podophyllotoxins: current status and recent developments", Damayanthi Y, Lown JW, Curr Med Chem 1998 Jun 5: v 3 205-52.
Получают распространение радиоиммунотералевтические методы, позволяющие облучать ядра опухолевых клеток, содержащие внутриклеточную ДНК, альфа-частицами из альфа-эмиттеров, специально доставляемых внутрь раковых клеток для повышения эффективности воздействия на внутриклеточную ДНК, см. "Targeted alpha therapy: evidence for potential efficacy of alpha-immunoconjugates in the management of micrometastatic cancer" Alien BJ, Australas Radiol 1999 Nov v.43: pp 480-6.
Известны биотерапевтические и иммунотерапевтические методы, направленные на индукцию апоптоза опухолевых клеток - процесса гибели раковой клетки, запускаемого активацией внутриклеточных нуклеаз и последующим разрушением внутриклеточной ДНК опухолевой клетки, например, путем введения больному генотерапевтических конструкций, содержащих гены, запускающие процесс апоптоза, см. "Phase I trial of adenovirus-mediated p53 gene therapy for recurrent glioma: biological and clinical results" Lang FF, Bruner JM, Fuller ON, Aldape K, Prados MD, Chang S, Berger MS, McDermott MW, Kunwar SM, Junck LR, Chandler W, Zwiebel JA, Kaplan RS, Yung WK, J Clin Oncol 2003 Jul 1 21:13 2508-18, или гены, кодирующие факторы, активирующие внутриклеточные индуцирующие апоптоз нуклеазы, см. "Adenovirus-mediated transfer of caspase-8 augments cell death in gliomas: implication for gene therapy." Shinoura N, Koike H, Furitu T, Hashimoto M, Asai A, Kirino T, Hamada H, Hum Gene Ther 2000 May 20 11:8 1123-37, или путем введения противоопухолевых вакцин, см. "Vaccine-induced apoptosis: a novel clinical trial end point?" Amin S, Robins RA, Maxwell-Armstrong CA, Scholefield JH, Durrant LG, Cancer Res 2000 Jun 60: 3132-6.
В патенте US 6455250 описано использование эндонуклеазы Endo-SR для лечения раковых заболеваний путем ее внутриклеточной доставки в клетку-мишень.
Среди перечисленных способов метод химиотерапевтического лечения опухолей с помощью Этопозида-4'-Деметилпиподофиллотоксин 9-[4,6-O-R)-этилиден]-b-D-гликопиранозида избран нами в качестве прототипа. Топоизомераза II является необходимым клеточным ферментом, регулирующим многие аспекты функционирования внутриклеточной ДНК. Фермент осуществляет интерконверсию различных топологических форм внутриклеточной ДНК, генерируя при этом транзиторные разрывы двухцепочечной ДНК. Этопозид, являясь ингибитором Топоизомеразы II, увеличивает внутриклеточную концентрацию комплексов Топоизомераза II - разрезанная ДНК. В результате воздействия препарата происходит накопление большого количества двухнитевых разрывов внутриклеточной ДНК, что и является причиной гибели клетки, см. "Topoisomerase II as a target for anticancer drugs: when enzymes stop being nice". Fortune JM, Osheroff N., Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 2000, v.64: pp.221-53.
Недостатком способа-прототипа, как и других известных способов, является низкая эффективность. Это объясняется следующим. Способ-прототип, как и другие известные способы, имеет мишенью терапевтического воздействия опухолевую клетку, в первую очередь ее внутриклеточную ДНК. Опыт подобной терапии свидетельствует, что:
- вследствие высокой генетической изменчивости опухолевые клетки, как правило, приобретают нечувствительность к применяемой терапии до того, как используемая методика позволяет их в необходимой степени уничтожить;
- внутриклеточная ДНК является относительно труднодоступной мишенью, что влечет за собой необходимость применения высоких доз противоопухолевых препаратов и/или сложных систем их доставки (Drug Delivery Systems).
Кроме того, следует отметить, что способ-прототип, предусматривающий воздействие на внутриклеточную ДНК опухолевых клеток, влечет за собой неизбежное разрушение ДНК здоровых клеток, что обуславливает его высокую токсичность.
В основу настоящего изобретения положено решение задачи создания высокоэффективного и малотоксичного способа лечения онкологических заболеваний.
Согласно изобретению эта задача решается за счет того, что вводят в кровь агент, разрушающий внеклеточную ДНК крови; этот агент может вводиться в дозах, обеспечивающих изменение электрофоретического профиля внеклеточной ДНК крови, выявляемое пульс-гельэлектрофорезом; этот агент может вводиться в дозах и режимах, обеспечивающих уровень ДНК-гидролитической активности плазмы крови, измеряемый в плазме крови и превышающий 150 единиц Кунца на литр плазмы, на протяжении суммарно более 12 часов в сутки; лечение может осуществляться непрерывно не менее 2 суток; в качестве агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови, может быть использован фермент ДНКазы, в частности, бычья панкреатическая ДНКаза, которую вводят парэнтерально в дозах от 50000 единиц Кунца до 250000000 единиц Кунца в сутки ежедневно на протяжении 5-360 дней, или рекомбинантная человеческая ДНКаза, при этом может быть использована рекомбинантная человеческая ДНКаза I (дорназу-альфа), которую вводят парэнтерально в дозах 0,15-500 мг/кг массы тела в сутки ежедневно на протяжении 5-360 дней; лечение может проводиться пожизненно; дополнительно в кровь может вводиться агент, связывающий внеклеточную ДНК крови; в качестве этого агента могут быть использованы анти-ДНК антитела.
Факт циркуляции внеклеточной ДНК в крови больных онкологическими заболеваниями описан в ряде работ (P.Anker et al., Clinica Chimica Acta, v.313, 2001, pp.143-146; Fedorov N.A. et.al., Bull.Exp.Biol.Med., v 102, 1986, pp.281-283). В патенте US 5952170 описано определение внеклеточной ДНК в крови для диагностики и прогнозирования течения онкологических заболеваний. В патентах US 6465177 и US 6156504 описывают использование внеклеточной ДНК крови для определения мутаций в онкогенах и микросателлитных участках генов, изучения геномной нестабильности в опухолях и использования результатов наблюдений для диагностики, мониторирования и прогнозирования течения заболевания.
Тем не менее, до настоящего времени отсутствовал систематический анализ спектра внеклеточной ДНК крови и ее биологической роли. Данные исследований внеклеточной ДНК крови без проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) в печати не обнаружены. ПЦР может сильно искажать состав внеклеточной ДНК крови в силу специфичности праймеров, применяемых для амплификации. До последнего времени проводился, в основном, генетический анализ ДНК плазмы, произведенный при помощи ПЦР или блот-гибридизации, и направленный на изучение изменений в определенных участках генома (например, в микростателлитах и отдельных генах) при опухолевом процессе (Sanchez-Cespedes M., et al., Ann Oncol, 1998, v 9(1), pp.113-116; Sozzi G., et al., Clin Can Res, 1999, v 5(10), pp.2689-2692; Chen X.Q., et al., Nat Med, 1996, v 2(9), pp.1033-1035).
Таким образом, в известных заявителю источниках отсутствуют знания о генетическом репертуаре внеклеточной ДНК крови больных при онкопатологии, биологической роли внеклеточной ДНК крови при онкопатологии и возможном терапевтическом эффекте ее уничтожения или инактивации для лечения этих заболеваний.
Заявителем было установлено, что внеклеточная ДНК крови онкологических больных содержит уникальный по своему качественному и количественному составу репертуар генов и регуляторных генетических элементов, резко отличающийся от репертуара ДНК, описанного в геноме человека. В отличие от внутриклеточной ДНК, внеклеточная ДНК крови онкологических больных содержит, в основном, уникальные гены человека, включая гены, вовлеченные в поддержание и формирование злокачественного поведения раковых клеток.
Показано, что внеклеточная ДНК крови при онкологической патологии способствует злокачественному росту.
Разрушение, в том числе вместе с модификацией и связыванием, внеклеточной ДНК крови при онкопатологии препятствует злокачественному росту. Подобное вмешательство имеет как самостоятельную терапевтическую ценность, так и повышает эффективность традиционных методов терапии.
Указанные выше новые свойства заявленного изобретения, базирующиеся на принципиально новых представлениях о механизме онкологических заболеваний, позволяют сделать вывод о соответствии заявленного способа критерию "изобретательский уровень".
Заявленный способ реализуется следующим образом.
Материалы и методы.
Использовали следующие агенты, разрушающие внеклеточную ДНК крови: бычью панкреатическую ДНКазу (Sigma и Самсон-Мед), рекомбинантную человеческую ДНКазу I (Дорназу альфа; Genetech), внеклеточную нуклеазу Serratia Mercenses. Раствор ДНКазы для введения готовился растворением матричного раствора ДНКазы в стерильном фосфатном буфере непосредственно перед введением.
ДНК плазмы крови выделяли следующим образом: свежую (не более 3-4 часов после забора) плазму крови с добавленным антикоагулянтом (цитрат натрия) центрифугировали на подушке из Ficoll-PlaquePlus (Amersham-Phannacia) при 1500g 20 минут при комнатной температуре. Плазму (1/2 от всего количества) аккуратно отбирали, не задевая остаток клеток на подушке фиколла, и откручивали при 10000g 30 минут, чтобы избавиться от обломков клеток и дебриса. Супернатант отбирали, не затрагивая осадок, добавляли до 1% саркозила, до 50 мМ трис-HCl, рН 7,6, до 20 мМ ЭДТА, до 400 мМ NaCl, и равный объем смеси фенол-хлороформ 1:1. Полученную эмульсию инкубировали при 65°С 2 часа, затем отделяли фенол-хлороформ центрифугированием при 5000g в течение 20 минут при комнатной температуре. Процедуру депротеинизации фенол-хлороформом повторяли идентичным способом трижды, после чего водную фазу обрабатывали хлороформом, затем диэтиловым эфиром. Отделение от органических растворителей производили центрифугированием при 5000g в течение 15 минут. К полученной водной фазе добавляли равный объем изопропанола и инкубировали в течение ночи при 0°С. После осаждения нуклеиновые кислоты отделяли центрифугированием при 0°С, 10000g в течение 30 минут. Осадок нуклеиновых кислот растворяли в буфере, содержащем 10 мМ трис-HCl, рН 7,6, 5 мМ ЭДТА, и наносили на подушку из ступенчатого хлористого цезия (1 М, 2.5 М, 5.7 М) в центрифужной пробирке для ротора SW60Ti. Объем ДНК составлял 2 мл, объем каждой ступеньки CsCL - по 1 мл. Ультрацентрифугирование проводили в приборе L80-80 (Beckman) 3 часа при 250000g. ДНК отбирали с поверхности ступеньки 5.7 М по фракциям. Фракции диализировали 12 часов при 4°С. Наличие ДНК во фракциях определяли агарозным электрофорезом, с визуализацией ДНК бромистым этидием. Количество ДНК определяли спектрофотометрически (Beckman DU70) в кювете объемом 100 мкл, снимая спектр от 220 до 320 нм.
В экспериментах использовались штаммы мышиной карциномы легких Люиса и карциномы Эрлиха. Клетки росли в среде RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% пенициллин-стрептомицина в среде с 5% углекислого газа.
Для индукции опухолей у мышей клетки выращивали до монослоя, отделяли с помощью раствора трипсин-ЭДТА. Клетки трижды отмывали центрифугированием в фосфатном буфере и ресуспендировали до 0,5·107 в миллилитре. Жизнеспособность определяли по включению метиленового синего в гемоцитометре. Для введения животным использовались суспензии с не менее 95% жизнеспособных клеток.
Использовались мыши линии С57В1 и белые беспородные мыши, полученные из питомника "Рапполово". Вес животных 24-26 грамм. Животные содержались по 6-7 штук в клетке на стандартной диете без ограничения воды. LLC клетки в дозе 5·105 в 100 мкл фосфатного буфера вводились в мягкие ткани бедра. Опухоль Эрлиха перевивалась под кожу правого бока введением 0,2 мл 10%-ной взвеси опухолевых клеток в изотоническом растворе хлорида натрия
В некоторых экспериментах исследовалось содержание внеклеточной ДНК в плазме крови. ДНК выделялась по ранее описанному протоколу. Содержание ДНК измерялось с помощью наборов Pico Green. Электрофорез внеклеточной ДНК крови проводили в 1% агарозном геле. ДНК окрашивали этидиум-бромидом. Сравнительное содержание высокомолекулярной (более 300 пар оснований) фракции ДНК в форезах оценивали денситометрически. В качестве маркера использовали фаг лямбда, обработанный рестриктазами EcoR и Hind III.
Пример 1. Торможение развития опухоли Эрлиха.
Использовали рекомбинантную человеческую ДНКазу I (Genetech).
1 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха - контроль. Мыши получали два раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли внутрибрюшинно инъекции 200 мкл фосфатного буфера.
2 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получавших ДНКазу четыре раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли в дозе 1 мг/кг внутрибрюшинно в 200 мкл фосфатного буфера.
3 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получавших ДНКазу четыре раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли в дозе 0,5 мг/кг внутрибрюшинно в 200 мкл фосфатного буфера.
4 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получавших ДНКазу четыре раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли в дозе 0,1 мг/кг внутрибрюшинно в 200 мкл фосфатного буфера.
5 группа - 10 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получавших ДНКазу четыре раза в день ежедневно с 3 по 7 день после перевивки опухоли в дозе 0,05 мг/кг внутрибрюшинно в 200 мкл фосфатного буфера.
Результаты экспериментов оценивали по торможению роста опухоли (ТРО, выраженное в процентах) в последний день введения ДНКазы. ТРО определяли по общепринятой методике. Определяли содержание внеклеточной ДНК крови и ее электрофоретическое фракционирование.
Результаты приведены в таблице 1: размер опухоли, содержание внеклеточной ДНК и ее электрофоретический профиль через 7 дней после перевивки опухоли.
Таблица 1
Группа Объем опухоли Торможение в % Содержание внеклеточной ДНК (нг/мл) Наличие высокомолекулярных фракций во внеклеточной ДНК
Контроль 98+/-14 - 104,8 100%
1 мг\кг 23+/-6 76% 38,3 0
0,5 мг\кг 32+/-6 67% 55,1 25%
0,1 мг\кг 58+/-12 37% 78,0 70%
0,05 мг\кг 87+/-11 10% 98,7 100%
Приведенные данные свидетельствуют, что для достижения наилучшего лечебного эффекта необходимо применение достаточно высоких доз препарата ДНКазы I.
Пример 2. Торможение развития опухоли Эрлиха.
Использовали рекомбинантную человеческую ДНКазу I (Genetech).
В эксперименте участвовало 5 групп мышей, привитых LLC.
1 группа - 7 мышей - контроль.
2 группа - 6 мышей, получавших внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки с 3 по 5 день после перевивки.
3 группа - 6 мышей, получавших внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки с 3 по 10 день после перевивки.
4 группа - 6 мышей, получавших терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки с 3 по 15 день после перевивки.
5 группа - 6 мышей, получавших терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки с 3 по 18 день после перевивки.
6 группа - 6 мышей, получавших терапию ДНКазой в дозе 1 мг/кг 2 раза в сутки на 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 и 17 день после перевивки.
7 группа - 6 мышей, получавших внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 0,5 мг/кг 4 раза в сутки с 3 по 10 день после перевивки.
Результаты эксперимента оценивали по выживаемости животных на 30 и 50 день после перевивки опухоли - таблица 2
Таблица 2.
Группа 30 день(число живых/павших животных в группе) 50 день(число живых/павших животных в группе)
1 0-7 0-7
2 0-6 0-6
3 3-3 0-6
4 5-1 3-3
5 6-0 6-0
6 0-6 0-6
7 4-2 1-5
Приведенные данные свидетельствуют, что эффективность проводимого лечения увеличивается по мере увеличения длительности лечения. Эффективность лечения падает, если оно не является непрерывным. Многократное введение в течение суток является предпочтительным.
Пример 3. Лечение карциномы легких.
Больной мужчина, 54 лет поступил в клинику с диагнозом карцинома легких.
С согласия больного, с учетом исчерпания всех возможных методов лечения, ему были назначены ежедневные подкожные инъекции препарата дорназы альфа. Лечение начали с введения суточной дозы 50 мкг/кг. Каждый последующий день осуществляли измерение содержания внеклеточной ДНК крови и ее электрофоретическое фракционирование. Один раз в неделю осуществляли ЯМР и рентгенологический контроль первичной опухоли и метастазов. Через семь дней ввиду отсутствия изменений в содержании внеклеточной ДНК крови, ее электрофоретической картины и отсутствия реакции со стороны первичной опухоли и метастазов суточную дозу препарата увеличили до 100 мкг/кг. Ввиду отсутствия изменений еще через 7 дней произвели увеличение суточной дозы препарата до 150 мкг/кг. Через 2 дня после первого введения препарата в дозе 150 мкг/кг в препарате внеклеточной ДНК крови на фоне несущественного снижения общего количества внеклеточной ДНК крови (менее 20%) отмечалось существенное (более 50%) снижение содержания фракции внеклеточной ДНК крови с размером более 300 пар оснований. В последующие 4 дня самочувствие пациента значительно улучшилось, а по результатам контрольного ЯМР-исследования в конце семидневного цикла отмечалось уменьшение размера первичной опухоли на 25% и имелись рентгенологические признаки регрессии двух костных метастатических узлов.
Образцы внеклеточной ДНК данного больного, взятые до начала лечения и через 21 день после начала терапии, были клонированы с использованием метода, позволяющего конструировать неамплифицированные плазмидные библиотеки внеклеточной ДНК крови с представительностью до миллиона клонов со средним размером в 300-500 пар оснований.
Выделенная по ранее описанному протоколу ДНК была подвергнута дополнительной тщательной депротеинизации с применением протеиназы К (Sigma) при 65°С для удаления прочно связанных белков. После депротеинизации и однократной обработки фенол-хлороформом при 65°С, ДНК осаждали 2,5 объемами этанола в течение ночи. Затем ДНК либо обрабатывали рестриктазой EcoRI в течение 3 часов, либо Pfu полимеразой (Stratagene) в присутствии 300 мкМ всех дезоксинуклеотидтрифосфатов для удаления липких концов. Достроенную ДНК фосфорилировали полинуклеотидкиназой Т4 (30U, 2 ч). Полученные препараты лигировали в плазмиду pBluescript (Stratagene), переваренную EcoRI или PvuII соответственно и дефосфорилированную щелочной фосфатазой CIP (Fermentas) в течение 1 часа. Для лигирования обычно использовали 1 мкг вектора и 0,1-0,5 мкг сывороточной ДНК. Лигирование проводили при помощи Rapid Ligation Kit (Roche) 10 часов при 16°С. Объем лигазной смеси составлял 50 мкл. Лигированную библиотеку трансформировали в клетки DH12S (Life Technologies) с применением электропоратора Е.Coli porator (BioRad). Для трансформации одной библиотеки использовали 12-20 электропорационных кювет. Для контроля на чашки с 1,5% агаром и средой LB, содержащей 100 мкг/мл ампициллина, высевали разведения библиотеки 10-4, 10-5 и 10-6. В обоих случаях представительность библиотеки составляла примерно 2-3·106 клонов.
Анализ случайно выбранных 96 клонов с длиной от 300 до 1000 пар оснований из библиотеки, полученной из внеклеточной ДИК крови больного до начала лечения, показал, что 55 из 96 клонов представляют собой уникальные последовательности ДНК человека. Из 55 фрагментов уникальной ДНК функция или продукт соответствующего гена с помощью Human Gene Bank были идентифицированы для 15 последовательностей:
Таблица 3
Gene or corresponding protein product Reported role in cancerogenesis and cancer progression
G-protein coupled receptor protein Key role in neoplastic transformation,apoptosis inhibition, hormone independence and metastasis
Snf2 coupled CBP activator (SCARP) Transcription activator, reported in synovial sarcoma and leukemia.
SRY-box containing gene Transcription modulator expressed in embryogenesis. Reported in medulloblastoma, gonadal tumors, highly metastatic melanoma.
Tyrosine kinase Key role in cancer cell regulation network. Some class homologues are the products of cellular oncogenes.
Fibroblast activation protein, cell surface protease Involved into cancer invasion and metastasis.
Brain testican Reported in embryonic rhabdomyosarcoma.
KRAB domain, Zn-finger protein. Reported in early embryogenesis, neuroblastoma, Ewing sarcoma, T-cell lymphoma, linked with acquisition of drug resistance in lung cancer.
Melanoma associated antigen Antigen expressed in melanoma cells.
N-cadherin Involved into cancer invasion and metastasis.
Interleukin 7 Proposed essential autocrine-paracrine growth factor for many cancers
DEAD Box RNA helicaselike protein Expressed in highly proliferating and cancer cells.
Lipin-1 Involved into cancer cell response to cytotoxic drugs.
Dynein Participate in p53 intracellular traffic, reported in prostate cancer and hepatocellular carcinoma.
Ramp protein Reported in human embryonic carcinoma
Анализ случайно выбранных 100 клонов из библиотеки, полученной из внеклеточной ДНК крови больного через 21 день после начала лечения, показал, что более 90% выявленных последовательностей клонов представляют собой короткие фрагменты повторяющейся ДНК генома человека, в основном альфа сателлитную ДНК.
Таким образом, применение доз ДНКазы, достаточных для разрушения внеклеточной ДНК крови с размером более 300 пар оснований, ведет к исчезновению из внеклеточной ДНК крови уникальных фрагментов генома человека, в том числе вовлеченных в процесс формирования и поддержания злокачественного поведения раковых клеток. При этом наблюдается регрессия опухоли согласно заявляемому способу.
Пример 4. Лечение злокачественной низкодифференцированной лимфомы с диффузным поражением селезенки и ворот печени с метастатическими узлами в печени.
Женщина 49 лет поступила в клинику в тяжелом состоянии, с лихорадкой до 39°С, прогрессирующей желтухой и проявлениями печеночной недостаточности с подозрением на острый гепатит. При исследовании выявлена злокачественная низкодифференцированная лимфома с диффузным поражением селезенки и ворот печени с многочисленными метастатическими узлами в печени. С согласия больной, с учетом невозможности применения специфического лечения и постоянно прогрессирующей картины заболевания, ей была прописана внутривенная инфузия бычьей панкреатической ДНКазы. Два раза в сутки осуществляли измерение содержания внеклеточной ДНК крови и ее электрофоретическое фракционирование. В первые сутки было введено 500000 ЕД фермента в виде двух шестичасовых инфузий. В дальнейшем суточную дозу увеличивали на 1000000 ЕД в сутки ежедневно.
При достижении суточной дозы в 5500000 ЕД отмечено значительное (более 50%) снижение содержания внеклеточной ДНК крови и исчезновение фракции ДНК с размером более 300 пар оснований при электрофоретическом фракционировании. На фоне продолжающихся инфузий в дозе 5500000 ЕД в сутки состояние больной начало улучшаться, исчезли лихорадка и желтуха, улучшились биохимические показатели крови. Контрольное ультразвуковое исследование, проведенное на 20 день после начала лечения, выявило значительное (более 40%) сокращение площади поражения селезенки и исчезновение более половины метастатических узлов в печени. Больная была переведена в другое лечебное учреждение для проведения химиотерапевтического лечения.
Таким образом, применение доз ДНКазы, достаточных для разрушения внеклеточной ДНК крови с размером более 300 пар оснований ведет к регрессии опухоли согласно заявляемому способу.
Пример 5. Исследование влияния поликлональной сыворотки, содержащей антитела против ДНК, на рост карциномы Эрлиха у мышей, получающих лечение ДНКазой.
Антитела против ДНК выделялись из крови больных системной красной волчанкой по методике Shuster A.M. (Shuster A.M. et.al., Science, v.256, 1992, pp.665-667). Подобные анти-ДНК антитела способны не только связывать, но и осуществлять гидролиз ДНК. В качестве ДНКазы использовалась человеческая рекомбинантная ДНКаза I (Genetech).
1 группа - 7 мышей с привитой карциномой Эрлиха - контроль.
2 группа - 6 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получивших на третий день после перевивки опухоли внутривенную инъекцию фракции человеческих анти-ДНК антител (IgG) по 200 мкг на одно животное. Животные также получали внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 0,5 мг/кг 4 раза в сутки с 3 по 7 день после перевивки.
3 группа - 6 мышей с привитой карциномой Эрлиха, получивших на третий день после перевивки опухоли внутривенную инъекцию фракции неспецифического человеческого иммуноглобулина (IgG) по 200 мкг на одно животное. Животные также получали внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 0,5 мг/кг 4 раза в сутки с 3 по 7 день после перевивки.
4 группа - 6 мышей с привитой карциномой Эрлиха получали внутрибрюшинно терапию ДНКазой в дозе 0,5 мг/кг 4 раза в сутки с 3 по 7 день после перевивки.
Эффект определяли по торможению роста опухоли на 7 день после перевивки (ТРО, выраженное в процентах)
Размер опухоли через 7 дней после перевивки приведен в таблице 4
Таблица 4
Группа Объем опухоли Т %
1 105+/-12 -
2 25+/-5 ~75%
3 37+/-6 ~66%
4 35+/-7 ~67%
Приведенные данные свидетельствуют, что совместное применение ДНКазы и агента, связывающего внеклеточную ДНК крови, приводит к более выраженному противоопухолевому эффекту. Ниже приводим электрофоретический профиль внеклеточной ДНК плазмы крови мышей в группах 1, 2 и 3 через 7 дней после перевивки опухоли.
Группы: 2 1 3
Отчетливо заметно, что совместное применение анти-ДНК антител и ДНКазы приводит к более выраженному разрушению внеклеточной ДНК крови, что проявляется не только в снижении ее содержания, но и исчезновении более высокомолекулярных фракций.
Пример 6. Изучение кинетики деградации фракции высокомолекулярной фракции (размер более 300 пар оснований) внеклеточной ДНК крови больной раком молочной железы в присутствии бычьей панкреатической ДНКазы, Протеиназы К и бычьей панкреатической ДНКазы, Липазы и бычьей панкреатической ДНКазы и внеклеточной дезоксирибонуклеазы Serratia Mercenses, обладающей рибонуклеазной активностью и являющейся как разрушающим, так и модифицирующим агентом.
В образцы плазмы больной добавляли фермент и инкубировали 45 минут при 37°С. Через 45 минут реакцию прекращали и осуществляли выделение и электрофоретическое фракционирование с денситометрией внеклеточной ДНК крови. Результаты представлены в таблице 5.
Таблица 5
Способ обработки % деградации высокомолекулярной фракции
Необработанный контроль 0
Протеиназа К (0,1 мкг/мл) 0
Панкреатическая липаза (0,1 мкг/мл) 0
Бычья панкреатическая ДНКаза (1 Kuntz Units/ml) 25
Бычья панкреатическая ДНКаза (1 Kuntz Units/ml) + Протеиназа К (0,1 мкг/мл) 35
Бычья панкреатическая ДНКаза (1 Kuntz Units/ml) + Панкреатическая липаза (0,1 мкг/мл) 40
Внеклеточная дезоксирибонуклеазы Serratia Mercenses (1 Kuntz Units/ml) 45
Приведенные данные свидетельствуют, что совместное применение ДНКазы и агента, модифицирующего связь внеклеточной ДНК крови с белками, липидами и рибонуклеиновыми кислотами, приводит к более эффективной деградации высокомолекулярной (более 300 пар оснований) фракции внеклеточной ДНК крови.
Пример 7. Изучение влияния различных способов разрушения внеклеточной ДНК на ее патогенные свойства.
Мыши С57В1 получили прививку высокометастатического или низкометастатического штамма опухоли LLC. На 9 день после перевивки животных усыпляли и собирали суммарную плазму крови мышей. Суммарная фракция внеклеточной ДНК крови после выделения хранилась при -20°С в фосфатном буфере.
В эксперименте участвовало 7 групп мышей, привитых низкометастатическим штаммом LLC.
1 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC.
2 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции внеклеточной ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворялись в 500 мкл свежей гепаринизированной крови).
3 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей плазмы). Перед введением образец ДНК подвергали фотохимической дезинфекции (добавление 1 мкМ метиленового синего с последующим облучением красным светом в течение 10 минут (~60000 Люкс)).
4 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей плазмы). Перед введением образец ДНК смешивали с 10 мкг гидролитических анти-ДНК антител.
5 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей гепаринизированной крови). Перед введением в образец добавляли 1 мкг фрагмента А растительного токсина Рицина и инкубировали 1 час при 37°С. Рицин является представителем семейства RIP (белки инактивирующие рибосомы) токсинов, широко используемых для создания иммунотоксинов. Кроме способности инактивировать рибосомы эти белки обладают способностью деаденилировать и гидролизовать ДНК. Для реализации токсического эффекта каталитическая единица А токсинов RIP II типа должна быть доставлена в клетку субъединицей В. В отсутствие субъединицы В цепь А не токсична, однако полинуклеотид-аденингликозидазная активность цепи А может быть использована для разрушения ДНК, циркулирующей в плазме.
6 группа - 6 мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей гепаринизированной крови. ДНК. Образец ДНК перед введением подвергалась ферментативному метилированию (I.Muiznieks et al., FEBS Letters, 1994, v.344, pp.251-254).
7 группа - 6 мышей мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции внеклеточной ДНК мышей, привитых низкометастатическим штаммом LLC.
8 группа - 6 мышей мышей с привитым низкометастатическим штаммом LLC + внутривенное двукратное (на седьмой и восьмой день после перевивки) введение суммарной фракции ДНК мышей с привитым высокометастатическим штаммом (0,05 мкг ДНК перед введением растворяли в 500 мкл свежей гепаринизированной крови). Образец ДНК перед введением инкубировали в присутствии 200 нг/мл дорназы - альфа 30 минут при 37°С.
Оценивали количество метастатических узлов в легких на 15 день после перевивки.
Результаты эксперимента приведены в таблице 6.
Таблица 6
Группа Ncp.
1 12,0
2 22,5
3 14,1
4 15,5
5 15,1
6 12,3
7 13,3
8 13,5
Таким образом, внеклеточная ДНК крови мышей с высокозлокачественным штаммом опухоли усиливает метастазирование менее злокачественной опухоли. Разрушение, связывание и модификация внеклеточной ДНК крови препятствуют этому согласно заявляемому способу.

Claims (11)

1. Способ лечения злокачественных опухолей, отличающийся тем, что обеспечивают введение в кровь агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что агент, разрушающий внеклеточную ДНК крови, вводят в дозах, обеспечивающих изменение электрофоретического профиля внеклеточной ДНК крови, выявляемое пульс-гельэлектрофорезом.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что агент, разрушающий внеклеточную ДНК крови, вводят в дозах и режимах, обеспечивающих уровень ДНК-гидролитической активности плазмы крови, измеряемый в плазме крови и превышающий 150 единиц Кунца на литр плазмы, на протяжении суммарно более 12 ч в сутки.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что лечение осуществляют непрерывно не менее 2 суток.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве агента, разрушающего внеклеточную ДНК крови, используют фермент ДНКазу.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что используют бычью панкреатическую ДНКазу, которую вводят парэнтерально в дозах от 50000 единиц Кунца до 250000000 единиц Кунца в сутки ежедневно на протяжении 5-360 дней.
7. Способ по п.5, отличающийся тем, что используют рекомбинантную человеческую ДНКазу.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что используют рекомбинантную человеческую ДНКазу I (дорназу-альфа), которую вводят парэнтерально в дозах 0,15-500 мг/кг массы тела в сутки ежедневно на протяжении 5-360 дней.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что лечение проводят пожизненно.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно обеспечивают введение в кровь агента, связывающего внеклеточную ДНК крови.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что в качестве агента, связывающего внеклеточную ДНК крови, используют анти-ДНК антитела.
RU2004108061/14A 2003-07-14 2004-03-12 Способ лечения онкологических заболеваний RU2269356C2 (ru)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2004108061/14A RU2269356C2 (ru) 2003-07-14 2004-03-12 Способ лечения онкологических заболеваний
PCT/RU2004/000261 WO2005004903A1 (fr) 2003-07-14 2004-07-01 Methode de traitement de maladies oncologiques
PL04748955T PL1655036T3 (pl) 2003-07-14 2004-07-01 Sposób leczenia chorób onkologicznych
US10/564,861 US7612032B2 (en) 2003-07-14 2004-07-01 Method for treating oncological diseases
EP04748955.4A EP1655036B1 (en) 2003-07-14 2004-07-01 Method for treating oncological diseases
ES04748955T ES2427091T3 (es) 2003-07-14 2004-07-01 Método para el tratamiento de enfermedades oncológicas
US10/564,615 US20080004561A1 (en) 2003-07-14 2005-01-27 Method for Treating Oncological, Virulent and Somatic Diseases, Method for Controlling Treatment Efficiency, Pharmaceutical Agents and Composition for Carrying Out Said Treatment

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2003/000304 WO2005007187A1 (fr) 2003-07-14 2003-07-14 Methode de traitement des maladies oncologiques, infectieuses et somatiques, procedes de controle de l'efficacite du traitement, agents et compositions pharmaceutiques associes
RUPCT/RU03/00304 2003-07-14
RU2004108061/14A RU2269356C2 (ru) 2003-07-14 2004-03-12 Способ лечения онкологических заболеваний

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2004108061A RU2004108061A (ru) 2005-09-27
RU2269356C2 true RU2269356C2 (ru) 2006-02-10

Family

ID=34067504

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004108061/14A RU2269356C2 (ru) 2003-07-14 2004-03-12 Способ лечения онкологических заболеваний

Country Status (6)

Country Link
US (2) US7612032B2 (ru)
EP (1) EP1655036B1 (ru)
ES (1) ES2427091T3 (ru)
PL (1) PL1655036T3 (ru)
RU (1) RU2269356C2 (ru)
WO (1) WO2005004903A1 (ru)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8388951B2 (en) 2003-07-14 2013-03-05 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic DNA mutation disease
US8431123B2 (en) 2003-07-14 2013-04-30 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection
US8710012B2 (en) 2003-07-14 2014-04-29 Cls Therapeutics Limited Method for treating oncological diseases
US8871200B2 (en) 2006-11-28 2014-10-28 Cls Therapeutics Limited Method for treating human diseases associated with an increased deoxyribonucleic acid content in extracellular spaces of tissues and a medicinal preparation for carrying out said method
US8916151B2 (en) 2005-04-25 2014-12-23 Cls Therapeutics Limited Method for treating a reduction of fertility
US10617743B2 (en) 2014-06-19 2020-04-14 Cls Therapeutics Limited Method to improve safety and efficacy of anti-cancer therapy
RU2804775C2 (ru) * 2017-06-27 2023-10-05 Новартис Аг Режимы дозирования для антител против tim-3 и их применения
US11905522B2 (en) 2018-01-16 2024-02-20 Cls Therapeutics Limited Treatment of diseases by liver expression of an enzyme which has a deoxyribonuclease (DNase) activity

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003298972A1 (en) * 2003-07-14 2005-02-04 Dmitry Dmitrievich Genkin Method for treating oncological, virulent and somatic diseases, method for controlling treatment efficiency, pharmaceutical agents and composition for carrying out said treatment
GB0713074D0 (en) 2007-07-05 2007-08-15 Univ London A method of hyperpolarising a magnetic resonance agent
WO2009134027A2 (en) * 2008-04-30 2009-11-05 Ajou University Industry-Academic Cooperation Foundation Anti-nucleic acid antibody inducing cell death of cancer cells and composition for preventing or treating cancers comprising the same
WO2012071420A1 (en) * 2010-11-23 2012-05-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Enzyme combinations to reduce brain tissue swelling
US9701740B2 (en) * 2011-04-01 2017-07-11 Yale University Cell-penetrating anti-DNA antibodies and uses thereof inhibit DNA repair
WO2012166611A2 (en) 2011-05-27 2012-12-06 Immune Disease Institute, Inc. Methods for treating and preventing neutrophil-derived net toxicity and thrombosis
US9603906B2 (en) 2012-02-01 2017-03-28 Protalix Ltd. Inhalable liquid formulations of DNase I
GB201208879D0 (en) * 2012-05-21 2012-07-04 London School Hygiene & Tropical Medicine Therapeutic for treating Clostridium difficile infection
US10040867B2 (en) 2014-03-04 2018-08-07 Yale University Cell penetrating anti-guanosine antibody based therapy for cancers with Ras mutations
US10238742B2 (en) 2014-06-25 2019-03-26 Yale University Cell penetrating nucleolytic antibody based cancer therapy
CA2970216A1 (en) 2015-01-04 2016-07-07 Protalix Ltd. Modified dnase and uses thereof
US11701410B2 (en) 2015-05-22 2023-07-18 Cls Therapeutics Limited Extracellular DNA as a therapeutic target in neurodegeneration
JP6761857B2 (ja) 2015-10-29 2020-09-30 シーエルエス セラピューティクス リミテッドＣＬＳ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ 抗癌療法の安全性および有効性を改善する方法
DE102016001407A1 (de) 2016-02-09 2017-08-24 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Blutbehandlung mit Inaktivierung von freien Nukleinsäuren
WO2017218825A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Yale University Antibody-mediated autocatalytic, targeted delivery of nanocarriers to tumors
EP3351263A1 (en) 2017-01-20 2018-07-25 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Pharmaceutical preparation for treating or preventing tissue adhesion
WO2018197547A1 (en) 2017-04-25 2018-11-01 Lipoxen Technologies Limited Methods of treating diseases related to net formation with parenteral administration of polysialylated dnase i
BR112020003403A2 (pt) 2017-08-18 2020-08-25 Neutrolis Inc. enzimas de dnase engenheiradas e uso na terapia
CN111433605B (zh) 2017-09-18 2023-09-08 圣特萨斯股份公司 用于针对循环无细胞dna纯化血液的方法和装置
US20210247408A1 (en) * 2018-04-30 2021-08-12 Viktor Veniaminovich Tets Tetz-proteins and prion-like proteins and associated methods
EP3852774A4 (en) 2018-06-29 2022-03-23 Tets, Viktor, Veniaminovich METHODS OF DIAGNOSIS AND TREATMENT OF TYPE 1 DIABETES
US11058724B2 (en) 2018-10-08 2021-07-13 Neutrolis, Inc. Methods of using DNASE1-like 3 in therapy
SG11202103426XA (en) 2018-10-08 2021-05-28 Neutrolis Inc Engineering of dnase enzymes for manufacturing and therapy
US10988746B2 (en) 2018-10-08 2021-04-27 Neutrolis, Inc. Manufacturing and engineering of DNASE enzymes for therapy
US11352613B2 (en) 2019-02-04 2022-06-07 Neutrolis, Inc. Engineered human extracellular DNASE enzymes
WO2022074656A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Protalix Ltd. Long-acting dnase
US20240327889A1 (en) * 2021-04-05 2024-10-03 Victor TETS Regulation of cells and organisms
US20240245758A1 (en) * 2021-05-21 2024-07-25 Cls Therapeutics Limited Immunomodulation of tumor microenvironment
US12053567B2 (en) 2021-12-27 2024-08-06 Santersus Ag Method and device for removal of circulating cell free DNA

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5484589A (en) * 1992-04-20 1996-01-16 Rufeld, Inc. Anti-viral methods using RNAse and DNAse
CH686982A5 (fr) 1993-12-16 1996-08-15 Maurice Stroun Méthode pour le diagnostic de cancers.
RU2099080C1 (ru) * 1994-02-11 1997-12-20 Дмитрий Иванович Финько Способ предотвращения развития рака
CA2248981C (en) * 1996-03-15 2009-11-24 The Penn State Research Foundation Detection of extracellular tumor-associated nucleic acid in blood plasma or serum using nucleic acid amplification assays
CN1243545C (zh) * 1998-07-16 2006-03-01 研究发展基金会 切割dna的抗肿瘤剂
US6465177B1 (en) 1998-10-26 2002-10-15 John Wayne Cancer Institute Detection of loss of heterozygosity in tumor and serum of melanoma patients
WO2001074905A1 (en) * 2000-04-03 2001-10-11 Antisoma Research Limited Compounds for targeting

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DEOCHARAN B. et al. Alpha-actinin a cross-reactive renalt target pathogenic anti-DNA antibodies. J. Immunology. 2002 Mar 15; 168(6); 3072-8. MUTIRANGURA A. Serum/plasma viral DNA: mechanisms and diagnostic applications to nasopharyngeal and cervical carcinoma. Ann. N.Y. Acad. Sci., 2001 Sep: 945: 59-67. GORRINI G. et al. Effect of apoptogenic stimuli on colon carcinoma cell lenes with a different c-myc expression level. Int. J. Mol. Med 2003 Jun; 11(6): 737-42. *

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9463223B2 (en) 2003-07-14 2016-10-11 Cls Therapeutics Limited Method for monitoring development of somatic mosaicism
US9248166B2 (en) 2003-07-14 2016-02-02 Cls Therapeutics Limited Method for treating oncological diseases
US8535663B2 (en) 2003-07-14 2013-09-17 Cls Therapeutics Limited Method for treating delayed-type hypersensitivity
US8710012B2 (en) 2003-07-14 2014-04-29 Cls Therapeutics Limited Method for treating oncological diseases
US8796004B2 (en) 2003-07-14 2014-08-05 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic DNA mutation disease
US9845461B2 (en) 2003-07-14 2017-12-19 Cls Therapeutics Limited Method for treating oncological diseases
US8431123B2 (en) 2003-07-14 2013-04-30 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection
US9072733B2 (en) 2003-07-14 2015-07-07 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection
US9770492B2 (en) 2003-07-14 2017-09-26 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic DNA mutation disease
US8388951B2 (en) 2003-07-14 2013-03-05 Cls Therapeutics Limited Method for treating systemic DNA mutation disease
US8916151B2 (en) 2005-04-25 2014-12-23 Cls Therapeutics Limited Method for treating a reduction of fertility
US8871200B2 (en) 2006-11-28 2014-10-28 Cls Therapeutics Limited Method for treating human diseases associated with an increased deoxyribonucleic acid content in extracellular spaces of tissues and a medicinal preparation for carrying out said method
US10617743B2 (en) 2014-06-19 2020-04-14 Cls Therapeutics Limited Method to improve safety and efficacy of anti-cancer therapy
RU2804775C2 (ru) * 2017-06-27 2023-10-05 Новартис Аг Режимы дозирования для антител против tim-3 и их применения
US11905522B2 (en) 2018-01-16 2024-02-20 Cls Therapeutics Limited Treatment of diseases by liver expression of an enzyme which has a deoxyribonuclease (DNase) activity

Also Published As

Publication number Publication date
EP1655036A1 (en) 2006-05-10
US20060233780A1 (en) 2006-10-19
US20080004561A1 (en) 2008-01-03
EP1655036B1 (en) 2013-07-17
WO2005004903A1 (fr) 2005-01-20
EP1655036A4 (en) 2009-06-17
PL1655036T3 (pl) 2014-02-28
US7612032B2 (en) 2009-11-03
RU2004108061A (ru) 2005-09-27
ES2427091T3 (es) 2013-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2269356C2 (ru) Способ лечения онкологических заболеваний
US9845461B2 (en) Method for treating oncological diseases
JP5307042B2 (ja) アルギニンを欠乏させることによってヒト悪性腫瘍を治療する医薬品及び方法
JPS58157723A (ja) インタ−ロイキン２を含有してなる免疫療法剤
JPH09511397A (ja) 遺伝子型改変バクテリオファージによる抗菌治療
JP7239910B2 (ja) 治療剤、ならびに腫瘍および／またはがんの治療のための薬物のためのその使用
CN101965361A (zh) 生物材料及其应用
WO2021224849A1 (en) Masked chimeric antigen receptor specific to tyrosine-protein kinase like 7 (ptk7) and immune cells expressing such
EP1666055A1 (en) Method for treating oncological, virulent and somatic diseases, method for controlling treatment efficiency, pharmaceutical agents and composition for carrying out said treatment
JPH11514990A (ja) ２−メルカプトエタノールアミン（２−ｍｅａ）と類縁アミノチオール化合物および３，５−ジイソプロピルサリチル酸銅（▲ｉｉ▼）と類縁化合物の、各種疾患を予防および治療するための使用
JP2009541319A (ja) リポソマーゼによる治療物質の腫瘍特異的送達
US7662792B2 (en) Modulation of Fas and FasL expression
CN113227384A (zh) 用于治疗肿瘤的药物组合物、药盒和方法
ES2246831T3 (es) Fracciones de membranas bacterianas inmunoestimulantes en el tratamiento de canceres.
JP2005538709A (ja) アルギニンを欠乏させることによってヒト悪性腫瘍を治療する医薬品及び方法
JP2024515113A (ja) 重篤な疾患を処置するためのｂ細胞ベースのタンパク質工場の操作
JPH07505893A (ja) 免疫学的機能不全を伴う疾患の治療のための方法および組成物
WO2003092708A1 (fr) Agents antitumoraux utilisant le hsv
WO2023077925A1 (zh) 一种治疗和/或预防癌症的药物和应用
JPH09509649A (ja) 免疫化同種異系骨髄ドナーからの活性腫瘍特異的免疫化の移入のための方法および組成物
US20030236189A1 (en) Two synthetic peptides for treatment and prevention of cancers
US4559228A (en) Composition and method for the treatment of cancer
AU2004217830B2 (en) A recombinant constructed by a virus vector and a human tumor suppressor gene and its use
CN118001427A (zh) miR-320抑制剂在制备治疗非酒精性脂肪性肝病或高脂血症药物中的应用
CN118576624A (zh) 一种自溶沙门氏菌-纳米胶囊输送系统、免疫刺激水凝胶及其应用