CN108251521A - 用于检测与皮肤衰老相关易感基因snp的成套引物及其应用 - Google Patents

用于检测与皮肤衰老相关易感基因snp的成套引物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物及其应用，所述的成套引物包括人基因组DNA的22个皮肤衰老相关易感基因的29个SNP位点的扩增引物对和延伸引物。每个位点分别设计一对多重PCR扩增引物，和一条单碱基延伸引物，并采用MALDI‑TOF MS（基质辅助激光解析电离飞行时间质谱）法检测待测样本SNP位点分型。本发明建立一种基于基因分子分型的皮肤衰老相关易感基因的检测方法，可以在同一个反应内同一时间完成多个SNP分型，准确高效且成本低。本发明的基因检测用以预测皮肤先天的抗衰老能力，从而为外部护肤方案提供科学依据。

Description

用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物及其应用
技术领域
本发明涉及基因检测技术领域，具体来说，涉及用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物及其应用。
背景技术
中国医师协会皮肤科医师分会开展了“国人皮肤状况大型网络调查”，近4万名网名在参与调查，其中45.45％为男性，54.55％为女性。29～39岁年龄段人数最多，占39.45％，结果表明约70％的人存在皮肤亚健康，仅有14％的人皮肤状况良好。25岁以上人体皮肤开始走入自然衰老的进程，皮肤的老化主要集中在三个方面：质地、色泽、细腻程度，具体在面部，皮肤老化可表现为皮肤松弛、缺乏弹性、皱纹、色泽暗淡、毛孔粗大、毛细血管孔张、各种色素斑点等。皮肤老化可有多种复杂的原因造成，大体概括为两大类就是内因和外因。外原性因素所造成的皮肤生理和功能性的改变如：长期紫外线辐射、恶劣的气候和环境、不良生活习惯和过度工作压力等。内部因素就是遗传因素。通过基因检测能够了解个体对各种皮肤问题的先天易感性，从而为有针对性的预防和护肤品或护肤方案的选择提供科学的参考依据。
导致皮肤衰老的几个重要的问题与遗传基因有密不可分的关系，如：光老化是皮肤外在老化的最主要形式，紫外线辐射则是导致皮肤光老化的主要原因，黑色素的形成与酪氨酸酶的活性有关；水合作用决定了人类皮肤分子能否吸水保湿，存在基因缺陷的个体，控制水合作用的基因活性降低，皮肤保湿功能开始下降，储水能力逐渐变差，导致皱纹和衰老的出现；丝状的胶原蛋白纤维能使皮肤保持结实而有弹性的状态，当肌肤开始衰老时，负责降解胶原蛋白的基因过度活跃，过度降解胶原蛋白，导致支撑皮肤的胶原网状结构被打破，出现松弛和皱纹；人类的衰老和疾病都与自由基的形成有关，人体本身存在抗氧化机制对抗自由基，抗氧化主要由一些酶来进行，当这些酶的功能发生变异时，氧化-抗氧化平衡被打破，人体倾向更容易衰老；糖基化作用于胶原蛋白和弹性蛋白，导致皮肤出现皱纹，弹性下降，缺水，糖基化产物AGE的堆积导致皮肤出现色斑，所以个体对抗糖化的能力是延缓衰老的关键，且糖基化作用不仅与皮肤衰老有关系，他和很多疾病如糖尿病并发症、阿兹海默综合征都有密切关系。
皮肤的衰老与特定人类基因的单核苷酸多态性有关，这一点已经得到确认。过去已经发展出多种检测基因多态性的方法，用来预测皮肤抵抗衰老的能力。其中比较全面的就是美白及老化基因芯片(201320009798.7)，涵盖了7个与美白相关的基因单核苷酸多态性位点，7个与皮肤氧化作用相关的基因单核苷酸多态性位点，将14个位点集成在一张芯片上进行检测。该专利采用的基因芯片法比较繁琐，只试用在研发阶段，无法实现大规模的商业转化。英国专利(GB20110021917)检测了与美容产品成分生物学途径相关的靶基因SNP位点，进而判断该产品是否适用于使用者，该专利设计的SNP位点有4个，主要与胶原蛋白降解，抗氧化作用相关的基因。发明专利(201610367682.9)公开了一种检测皮肤锁水情况的引物和探针，使用的方法的是荧光定量PCR的方法，检测的基因单核苷酸多态性位点是两个，检测基因不全面，且荧光定量PCR法适于检测5个左右的已知SNP位点，位点增加时，操作复杂，耗时长。
发明内容
针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物及其应用，使用MALDI-TOF MS法，能够在同一个反应内同一时间完成29个SNP分型，提高检测效率并降低成本；利用生物技术中基因检测手段对皮肤光老化、抗氧化、锁水能力、糖基化作用、皱纹和胶原
蛋白降解相关易感基因单核苷酸多态性位点进行检测，使用飞行时间质谱方法进行SNP分型，用以预测皮肤先天的抗衰老能力，从而为外部护肤方案提供科学依据。
为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：
用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物包括人基因组DNA的22个皮肤衰老相关易感基因的29个SNP位点的PCR扩增引物对和单碱基延伸引物。
进一步的，所述的人基因组DNA的22个皮肤衰老相关易感基因为BNC2、ASIP、STXBP5L、IFR4、MMP1、AGER、GLO1、SLC45A2、KITLG、TYR、DCT、MC1R、OCA2、SOD2、CAT、GPX1、NQO1、NFE2L2、GSTP1、AQP、HAS1、FLG。
进一步的，所述的SNP位点为：rs10733310、rs62543565、rs1015362、rs4911414、rs322458、rs1540771、rs1799750、rs2070600、rs2071288、rs1130534、rs16891982、rs1834640、rs642742、rs1042602、rs2031526、rs885479、rs74653330、rs1800414、rs4880、rs1001179、rs1050450、rs1800566、rs35652124、rs1695、rs17553719、rs11084109、rs11084111、rs761789405、rs200519781。
进一步的，所述的用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物包括：
rs10733310位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO1和SEQ ID NO2，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO59；
rs62543565位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO3和SEQ ID NO4，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO60；
rs1015362位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO5和SEQ ID NO6，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO61；
rs4911414位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO7和SEQ ID NO8，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO62；
rs322458位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO9和SEQ ID NO10，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO63；
rs1540771位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO11和SEQ ID NO12，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO64；
rs1799750位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO13和SEQ ID NO14，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO65；
rs2070600位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO15和SEQ ID NO16，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO66；
rs2071288位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO17和SEQ ID NO18，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO67；
rs1130534位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO19和SEQ ID NO20，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO68；
rs16891982位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO21和SEQ ID NO22，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO69；
rs1834640位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO23和SEQ ID NO24，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO70；
rs642742位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO25和SEQ ID NO26，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO71；
rs1042602位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO27和SEQ ID NO28，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO72；
rs2031526位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO29和SEQ ID NO30，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO73；
rs885479位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO31和SEQ ID NO32，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO74；
rs74653330位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO33和SEQ ID NO34，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO75；
rs1800414位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO35和SEQ ID NO36，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO76；
rs4880位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO37和SEQ ID NO38，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO77；
rs1001179位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO39和SEQ ID NO40，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO78；
rs1050450位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO41和SEQ ID NO42，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO79；
rs1800566位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO43和SEQ ID NO44，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO80；
rs35652124位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO45和SEQ ID NO46，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO81；
rs1695位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO47和SEQ ID NO48，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO82；
rs17553719位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO49和SEQ ID NO50，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO83；
rs11084109位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO51和SEQ ID NO52，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO84；
rs11084111位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO53和SEQ ID NO54，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO85；
rs761789405位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO55和SEQ ID NO56，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO86；
rs200519781位点的PCR扩增引物序列SEQ ID NO57和SEQ ID NO58，单碱基延伸引物序列SEQ ID NO87。
一种基因检测试剂盒，其特征在于，其含有权利要求1-4任一项所述的用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物。
进一步的，所述的皮肤衰老相关易感基因包括BNC2、ASIP、STXBP5L、IFR4、MMP1、AGER、GLO1、SLC45A2、KITLG、TYR、DCT、MC1R、OCA2、SOD2、CAT、GPX1、NQO1、NFE2L2、GSTP1、AQP、HAS1、FLG。
进一步的，所述的皮肤衰老相关易感基因SNP位点包括rs10733310、rs62543565、rs1015362、rs4911414、rs322458、rs1540771、rs1799750、rs2070600、rs2071288、rs1130534、rs16891982、rs1834640、rs642742、rs1042602、rs2031526、rs885479、rs74653330、rs1800414、rs4880、rs1001179、rs1050450、rs1800566、rs35652124、rs1695、rs17553719、rs11084109、rs11084111、rs761789405、rs200519781。
进一步的，所述的成套引物由权利要求7中每个SNP位点的扩增引物对和单碱基延伸引物组成。
进一步的，所述的试剂盒基因检测结果显示涵盖皮肤老化、皱纹和胶原蛋白降解、抗氧化、糖基化、锁水能力相关的基因。
进一步的，所述的试剂盒基因检测以人基因组DNA为样本，将成套引物经多重PCR扩增后采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法检测样本SNP位点分型，所述的成套引物多重PCR扩增产物的基因检测结果显示样本皮肤抗衰老能力。
更进一步的，通过对人皮肤衰老相关易感基因进行检测，预测皮肤先天的抗衰老能力，从而为外部护肤方案提供科学依据。
本发明的有益效果：
1.通过对光老化、皱纹和胶原蛋白降解、抗氧化、糖基化、锁水能力相关的基因进行检测，指导美容和护肤。
2.将与皮肤衰老相关的基因联合检测，一次检测出所有的项目，是目前为止最全面的皮肤基因检测项目。
3.通过特异引物的设计，所有的位点放在同一个反应中，通过多重PCR进行扩增，使用飞行时间质谱检测，一次同时检测29个位点，减少操作复杂程度，降低成本，节约时间。
具体实施方式
为了方便理解本发明的上述技术方案，以下通过具体实施方式对本发明的上述技术方案进行详细说明，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1技术方案的确立
S1根据人体皮肤衰老与遗传基因的关系，确定皮肤衰老相关易感基因及SNP位点(表1)。
S2每个SNP位点分别设计一套引物，包括扩增引物对(表2)和一条单碱基延伸引物(表3)。
S3以人基因组DNA为样本，将成套引物经多重PCR扩增。
S4采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法检测样本SNP位点分型，预测样本的皮肤抗衰老能力。
表1皮肤衰老相关易感基因及SNP位点
表2多重PCR扩增引物序列
表3单碱基延伸引物序列
位点 序列号 延伸引物序列
rs10733310 59 AGCCCTCAGGATGAT
rs62543565 60 GGAACGTGGGAGGCG
rs1015362 61 AGGAGATGAAAACATCTCA
rs4911414 62 GGCTGAGAAATTCATT
rs322458 63 CCACCTTTCTGAGCTT
rs1540771 64 ACTGCACGAGTTGG
rs1799750 65 TTTGAGATAAGTCATATC
rs2070600 66 GAAGGAAGAGGGAGC
rs2071288 67 CCACAGAGCCTGTA
rs1130534 68 AACAGGCAAACTTACCGAA
rs16891982 69 TTGGGATGTTGGGGCTT
rs1834640 70 ACCTCAGAAACCAC
rs642742 71 TAATGGAAAAACTGAA
rs1042602 72 CAATGTCTCTCCAGATTTCA
rs2031526 73 TTTGAGGGTAGGAA
rs885479 74 ATGGCCGCAACGGCT
rs74653330 75 GCCCGATGGCAGTGG
rs1800414 76 CCCGTCAGATATCCTA
rs4880 77 GGCCCAGATACCCCAAA
rs1001179 78 CTGGGTTCGGCTAT
rs1050450 79 CCCTGCTGTCTCAAGGGC
rs1800566 80 TGTGGCTTCCAAGTCTTAGAA
rs35652124 81 AAGTGGGAGTTCAGAGG
rs1695 82 ACCTCCGCTGCAAATAC
rs17553719 83 GGCAGGGGTGGCGGGAGGCGG
rs11084109 84 TCGTCATCCATATC
rs11084111 85 TTGTTAAGGATCCGCAC
rs761789405 86 TCATGCCTTTTCCCCCC
rs200519781 87 TCCAGACCTTCCCCC
实施例2样本提取及分析
为验证本发明的用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物的检测准确度及有效性，选4个样本进行基因检测，过程如下：
A.唾液DNA提取：利用康为世纪口腔拭子基因组DNA提取试剂盒进行唾液DNA提取。在GW1和GW2试剂中加入一定量的无水乙醇。从采样管中取500μL唾液样本，加入300μL GR、20μL Proteinase K和300μL GL，震荡混匀，56℃震荡孵育15min，加入300μL无水乙醇，震荡混匀；将750μL该溶液加入到收集管的吸附柱中，12000rpm离心1min，弃液；向吸附柱中加入400μL GW1，12000rpm离心1min，弃液；向吸附柱中加入400μL GW2，12000rpm离心1min，弃液；12000rpm离心2min，静置晾干；将吸附柱置于新的1.5mL离心管中，悬空加入40μL GE，静置5min，12000rpm离心1min，收集DNA溶液，质检，4℃保存。
B.PCR扩增：将步骤A提取的待测样本的DNA分别加入到384孔板中，进行多重PCR扩增。按照多重PCR扩增的反应体系(5μL)加入到每个反应孔中，反应体系：模板DNA 1μL，引物mix 5μL，10×Buffer 0.5μL，MgCl2(25mM)0.8μL，dNTP(25mM)0.2μL，ddH2O2μL，Hotstar(5U/μL)补足至5μL。反应体系配制好后使用PCR封口膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀，离心；将密封的384孔板置于ABI9700 PCR仪上反应，反应条件：95℃预变性2min(95℃30s，56℃30s，72℃1min)45个循环；72℃5min，4℃保持；得到PCR扩增产物，离心备用。
C.SAP消化：利用Sequenom平台配套试剂和操作步骤，完成待测样本SNP位点分型结果。将步骤B中得到的PCR扩增产物，按照SAP消化的反应体系(2μL)加入到每个反应孔中，反应体系：SAP×Buffer 0.17μL，SAP Enzyme(1U/μL)0.6μL，ddH2O1.53μL。反应体系配制好后使用PCR封口膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀，离心；将密封的384孔板置于ABI9700PCR仪上反应，反应条件：37℃40min，85℃5min，4℃保持；得到碱性磷酸化酶处理后的PCR产物，离心备用。
D.单碱基延伸反应：利用Sequenom平台配套试剂和操作步骤，完成待测样本SNP位点分型结果。将步骤C中得到的碱性磷酸化酶处理后的PCR产物，按照单碱基延伸反应体系(2μL)加入到对应的每个反应孔中，反应体系：延伸引物mix 0.94μL，Gold×Buffer 0.2μL，Extension mix 0.2μL，Iplex Enzyme 0.041μL，ddH2O0.619μL。反应体系配制好后使用PCR封口膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀，离心；将密封的384孔板置于ABI9700PCR仪上反应，反应条件：94℃30s，{94℃5s，(52℃5s，80℃5s)5个内部循环}40个外部循环，72℃3min，4℃保持；得到单碱基延伸产物，离心备用。
E.树脂纯化：利用Sequenom平台配套试剂和操作步骤，完成待测样本SNP位点分型结果。将步骤D的单碱基延伸产物的384孔板，轻轻撕下封口膜后，每孔加入16μL ddH2O；取干净的A4纸将6MG 384板置于其上，用小勺取适量纯化树脂；用塑料板反复左右推平纯化树脂，压实，使每孔树脂含量均匀；将384板倒置压在6MG 384板上，两板对调，6MG板在上，敲打6MG板背面，使树脂落入装有单碱基延伸产物的384孔板中；封口膜封好后，15rpm上下颠倒混匀30min，充分纯化。
F.芯片点样：将步骤E中的384孔板离心，启动MassARRAY Nanodispenser RS1000点样仪，将树脂纯化后的延伸产物移至384孔SpectroCHIP芯片上；点样后的芯片使用MALDI-TOF分析，检测结果使用TYPER4.0软件分型并输出结果。
实施例3基因检测结果分析
对实施例2中的4个样本的29个SNP位点基因检测结果(表5)进行分析，结合皮肤衰老相关易感基因SNP位点分型意义解读(表6)，对受检样本的皮肤抗衰老能力进行分析。
表5 SNP位点基因检测结果
位点 样本1 样本2 样本3 样本4
rs10733310 GT GT GT G
rs62543565 C C C C
rs1015362 CT C CT C
rs4911414 GT G GT G
rs322458 CT C C C
rs1540771 C C C C
rs1799750 C C C C
rs2070600 C C C C
rs2071288 C C C C
rs1130534 T T T T
rs16891982 C C C C
rs1834640 G G G G
rs642742 TC C CT C
rs1042602 C C C C
rs2031526 AG AG G AG
rs885479 GA GA G G
rs74653330 C C C C
rs1800414 C CT CT CT
rs4880 A A A A
rs1001179 C C C C
rs1050450 G G G G
rs1800566 GA GA GA AG
rs35652124 TT TC CT CT
rs1695 A A AG A
rs17553719 C CT CT CT
rs11084109 T T T T
rs11084111 AG A AG AG
rs761789405 T DEL.T T T
rs200519781 T T T T
由表5可见，29个位点的基因型均能正确检出，检出率100％，基因型分布符合中国汉族人基因型分布频率。
表6皮肤衰老相关易感基因SNP位点分型意义解读
本发明设计的扩增引物和延伸引物能在同一个反应内检测出29个SNP位点，用于开发皮肤衰老易感基因检测试剂盒并指导合理护肤。在皮肤护理方面，本发明的基因检测可了解人类机体的皮肤抗衰老能力，为合理护肤提供科学的参考依据。本发明将与皮肤衰老相关的基因联合检测，一次检测出所有的项目，是目前为止皮肤基因检测产品中检测基因覆盖面最全面的。
实施例4基因检测结果解读
结合表5及表6可对受检样本的皮肤抗衰老能力进行分析，以样本1为例进行检测结果解读，见下表(表7)：
表7样本1基因检测结果解读
由表7可知，样本1的皮肤不易产生晒斑，但一定程度上易出现皱纹，且黑色素合成能力、抗氧化能力及皮肤锁水能力均较差，其皮肤抗衰老能力较差，需要补充营养及水分。本发明的基因检测方法适用于中国汉族人基因型检测及其皮肤抗衰老能力的预测。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
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<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs10733310上游引物
<400> 1
acgttggatg ccaatgctaa cttagccctc 30
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs10733310下游引物
<400> 2
acgttggatg gaactttggg caagagagtg 30
<210> 3
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs62543565上游引物
<400> 3
acgttggatg aggagaatgg cgtgaacgtg 30
<210> 4
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs62543565下游引物
<400> 4
acgttggatg agacagatct cgctctgtcg 30
<210> 5
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1015362上游引物
<400> 5
acgttggatg ctgaacaaat agtcccgacc 30
<210> 6
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1015362下游引物
<400> 6
acgttggatg ccttaagtgt gtactgtgtg 30
<210> 7
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs4911414上游引物
<400> 7
acgttggatg ccccagtctc tttttgtttg 30
<210> 8
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs4911414下游引物
<400> 8
acgttggatg ggcaactaga gaaaagcatc 30
<210> 9
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs322458上游引物
<400> 9
acgttggatg gctgtgtgac cttagataaa 30
<210> 10
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs322458下游引物
<400> 10
acgttggatg cctcacagta aaaggtatgt c 31
<210> 11
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1540771上游引物
<400> 11
acgttggatg atggtagaag agagaggagg 30
<210> 12
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1540771下游引物
<400> 12
acgttggatg accacacacg tgatagactg 30
<210> 13
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1799750上游引物
<400> 13
acgttggatg cttcagtata tcttggattg 30
<210> 14
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1799750下游引物
<400> 14
acgttggatg gttatgccac ttagatgagg 30
<210> 15
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2070600上游引物
<400> 15
acgttggatg caccggaaaa tcccctcatc 30
<210> 16
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2070600下游引物
<400> 16
acgttggatg acagtgtggc tcgtgtcctt 30
<210> 17
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2071288上游引物
<400> 17
acgttggatg ctagagttcc cagccctgat 30
<210> 18
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2071288下游引物
<400> 18
acgttggatg aaaggaatgg tgagtggtgg 30
<210> 19
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1130534上游引物
<400> 19
acgttggatg cacataaaaa caggcaaac 29
<210> 20
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1130534下游引物
<400> 20
acgttggatg ctgaagatga tgagacccag 30
<210> 21
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs16891982上游引物
<400> 21
acgttggatg tctacgaaag aggagtcgag 30
<210> 22
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs16891982下游引物
<400> 22
acgttggatg aaagtgagga aaacacggag 30
<210> 23
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1834640上游引物
<400> 23
acgttggatg ccgttagaga cccatacttg 30
<210> 24
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1834640下游引物
<400> 24
acgttggatg ggcattgatt attccttggt 30
<210> 25
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs642742上游引物
<400> 25
acgttggatg ggatctttag ggaataatgg 30
<210> 26
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs642742下游引物
<400> 26
acgttggatg cttcctttgt agtgagaacc 30
<210> 27
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1042602上游引物
<400> 27
acgttggatg ggtgcttcat gggcaaaatc 30
<210> 28
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1042602下游引物
<400> 28
acgttggatg tgacctcttt gtctggatgc 30
<210> 29
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2031526上游引物
<400> 29
acgttggatg ggtcaaatgt catttgaggg 30
<210> 30
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2031526下游引物
<400> 30
acgttggatg aagtgctggg attacaggtg 30
<210> 31
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs885479上游引物
<400> 31
acgttggatg atgaagagcg tgctgaagac 30
<210> 32
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs885479下游引物
<400> 32
acgttggatg taccacagca tcgtgaccct 30
<210> 33
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs74653330上游引物
<400> 33
acgttggatg ctcagctctt ggttggaaac 30
<210> 34
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs74653330下游引物
<400> 34
acgttggatg aagtcctgat tgcagaagtg 30
<210> 35
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1800414上游引物
<400> 35
acgttggatg aacactgtca ggcatttggc 30
<210> 36
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1800414下游引物
<400> 36
acgttggatg gcagagtaaa tgagctgtgg 30
<210> 37
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs4880上游引物
<400> 37
acgttggatg ttctgcctgg agcccagata 30
<210> 38
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs4880下游引物
<400> 38
acgttggatg ctgtgctttc tcgtcttcag 30
<210> 39
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1001179上游引物
<400> 39
acgttggatg ctgaaggatg ctgataaccg 30
<210> 40
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1001179下游引物
<400> 40
acgttggatg agcaattgga gagcctcgc 29
<210> 41
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1050450上游引物
<400> 41
acgttggatg ttgacatcga gcctgacatc 30
<210> 42
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1050450下游引物
<400> 42
acgttggatg actgcaactg ccaagcagcc 30
<210> 43
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1800566上游引物
<400> 43
acgttggatg gcatttctgt ggcttccaag 30
<210> 44
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1800566下游引物
<400> 44
acgttggatg gatttgaatt cgggcgtctg 30
<210> 45
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs35652124上游引物
<400> 45
acgttggatg tttgcctttg acgacctgag 30
<210> 46
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs35652124下游引物
<400> 46
acgttggatg agctcgtgtt cgcagtcacc 30
<210> 47
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1695上游引物
<400> 47
acgttggatg tggtggacat ggtgaatgac 30
<210> 48
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1695下游引物
<400> 48
acgttggatg gcagatgctc acatagttgg 30
<210> 49
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs17553719上游引物
<400> 49
acgttggatg agctccttct gtcgacccat 30
<210> 50
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs17553719下游引物
<400> 50
acgttggatg agcgctggag gccgctgctc 30
<210> 51
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs11084109上游引物
<400> 51
acgttggatg tccaagccta tcccatcttc 30
<210> 52
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs11084109下游引物
<400> 52
acgttggatg tcaagctgag tttggtgtgg 30
<210> 53
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs11084111上游引物
<400> 53
acgttggatg aggagtccag agggttaagg 30
<210> 54
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs11084111下游引物
<400> 54
acgttggatg atggcactgc tggagctcgt 30
<210> 55
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs761789405上游引物
<400> 55
acgttggatg ttcagaacta gattcatgcc 30
<210> 56
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs761789405下游引物
<400> 56
acgttggatg ccctcaagtc tggaaagaag 30
<210> 57
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs200519781上游引物
<400> 57
acgttggatg acctggtaga tgaaagaccc 30
<210> 58
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs200519781下游引物
<400> 58
acgttggatg atcagcagag ccaccaagag 30
<210> 59
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs10733310单碱基延伸引物
<400> 59
agccctcagg atgat 15
<210> 60
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs62543565单碱基延伸引物
<400> 60
ggaacgtggg aggcg 15
<210> 61
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1015362单碱基延伸引物
<400> 61
aggagatgaa aacatctca 19
<210> 62
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs4911414单碱基延伸引物
<400> 62
ggctgagaaa ttcatt 16
<210> 63
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs322458单碱基延伸引物
<400> 63
ccacctttct gagctt 16
<210> 64
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1540771单碱基延伸引物
<400> 64
actgcacgag ttgg 14
<210> 65
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1799750单碱基延伸引物
<400> 65
tttgagataa gtcatatc 18
<210> 66
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2070600单碱基延伸引物
<400> 66
gaaggaagag ggagc 15
<210> 67
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2071288单碱基延伸引物
<400> 67
ccacagagcc tgta 14
<210> 68
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1130534单碱基延伸引物
<400> 68
aacaggcaaa cttaccgaa 19
<210> 69
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs16891982单碱基延伸引物
<400> 69
ttgggatgtt ggggctt 17
<210> 70
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1834640单碱基延伸引物
<400> 70
acctcagaaa ccac 14
<210> 71
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs642742单碱基延伸引物
<400> 71
taatggaaaa actgaa 16
<210> 72
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1042602单碱基延伸引物
<400> 72
caatgtctct ccagatttca 20
<210> 73
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs2031526单碱基延伸引物
<400> 73
tttgagggta ggaa 14
<210> 74
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs885479单碱基延伸引物
<400> 74
atggccgcaa cggct 15
<210> 75
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs74653330单碱基延伸引物
<400> 75
gcccgatggc agtgg 15
<210> 76
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1800414单碱基延伸引物
<400> 76
cccgtcagat atccta 16
<210> 77
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs4880单碱基延伸引物
<400> 77
ggcccagata ccccaaa 17
<210> 78
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1001179单碱基延伸引物
<400> 78
ctgggttcgg ctat 14
<210> 79
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1050450单碱基延伸引物
<400> 79
ccctgctgtc tcaagggc 18
<210> 80
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1800566单碱基延伸引物
<400> 80
tgtggcttcc aagtcttaga a 21
<210> 81
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs35652124单碱基延伸引物
<400> 81
aagtgggagt tcagagg 17
<210> 82
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs1695单碱基延伸引物
<400> 82
acctccgctg caaatac 17
<210> 83
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs17553719单碱基延伸引物
<400> 83
ggcaggggtg gcgggaggcg g 21
<210> 84
<211> 14
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs11084109单碱基延伸引物
<400> 84
tcgtcatcca tatc 14
<210> 85
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs11084111单碱基延伸引物
<400> 85
ttgttaagga tccgcac 17
<210> 86
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs761789405单碱基延伸引物
<400> 86
tcatgccttt tcccccc 17
<210> 87
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial
<223> rs200519781单碱基延伸引物
<400> 87
tccagacctt ccccc 15

Claims (10)

1.用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物，其特征在于：包括人基因组DNA的22个皮肤衰老相关易感基因的29个SNP位点的PCR扩增引物对和单碱基延伸引物。
2.根据权利要求1所述的用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物，其特征在于：所述的人基因组DNA的22个皮肤衰老相关易感基因为BNC2、ASIP、STXBP5L、IFR4、MMP1、AGER、GLO1、SLC45A2、KITLG、TYR、DCT、MC1R、OCA2、SOD2、CAT、GPX1、NQO1、NFE2L2、GSTP1、AQP、HAS1、FLG。
3.根据权利要求2所述的所述的用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物，其特征在于：所述的皮肤衰老相关易感基因的29个SNP位点为rs10733310、rs62543565、rs1015362、rs4911414、rs322458、rs1540771、rs1799750、rs2070600、rs2071288、rs1130534、rs16891982、rs1834640、rs642742、rs1042602、rs2031526、rs885479、rs74653330、rs1800414、rs4880、rs1001179、rs1050450、rs1800566、rs35652124、rs1695、rs17553719、rs11084109、rs11084111、rs761789405、rs200519781。
4.根据权利要求3所述的用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物，其特征在于：
所述的rs10733310位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO1和SEQ ID NO2所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO59所示的核苷酸序列；
所述的rs62543565位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO3和SEQ ID NO4所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO60所示的核苷酸序列；
所述的rs1015362位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO5和SEQ ID NO6所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO61所示的核苷
酸序列；
所述的rs4911414位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO7和SEQ ID NO8所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO62所示的核苷酸序列；
所述的rs322458位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO9和SEQ ID NO10所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO63所示的核苷酸序列；
所述的rs1540771位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO11和SEQ ID NO12所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO64所示的核苷酸序列；
所述的rs1799750位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO13和SEQ ID NO14所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO65所示的核苷酸序列；
所述的rs2070600位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO15和SEQ ID NO16所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO66所示的核苷酸序列；
所述的rs2071288位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO17和SEQ ID NO18所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO67所示的核苷酸序列；
所述的rs1130534位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO19和SEQ ID NO20所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO68所示的核苷酸序列；
所述的rs16891982位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO21和SEQ ID NO22所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO69所示的核苷酸序列；
所述的rs1834640位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO23和SEQ ID
NO24所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO70所示的核苷酸序列；
所述的rs642742位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO25和SEQ ID NO26所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO71所示的核苷酸序列；
所述的rs1042602位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO27和SEQ ID NO28所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO72所示的核苷酸序列；
所述的rs2031526位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO29和SEQ ID NO30所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO73所示的核苷酸序列；
所述的rs885479位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO31和SEQ ID NO32所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO74所示的核苷酸序列；
所述的rs74653330位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO33和SEQ ID NO34所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO75所示的核苷酸序列；
所述的rs1800414位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO35和SEQ ID NO36所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO76所示的核苷酸序列；
所述的rs4880位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO37和SEQ ID NO38所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO77所示的核苷酸序列；
所述的rs1001179位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO39和SEQ ID NO40所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO78所示的核苷酸序列；
所述的rs1050450位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO41和SEQ ID NO42所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO79所示的核苷酸序列；
所述的rs1800566位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO43和SEQ ID NO44所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO80所示的核苷酸序列；
所述的rs35652124位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO45和SEQ ID NO46所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO81所示的核苷酸序列；
所述的rs1695位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO47和SEQ ID NO48所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO82所示的核苷酸序列；
所述的rs17553719位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO49和SEQ ID NO50所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO83所示的核苷酸序列；
所述的rs11084109位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO51和SEQ ID NO52所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO84所示的核苷酸序列；
所述的rs11084111位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO53和SEQ ID NO54所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO85所示的核苷酸序列；
所述的rs761789405位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO55和SEQ ID NO56所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO86所示的核苷酸序列；
所述的rs200519781位点的PCR扩增引物序列为SEQ ID NO57和SEQ ID NO58所示的核苷酸序列，单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO87所示的
核苷酸序列。
5.一种基因检测试剂盒，其特征在于，其含有权利要求1-4任一项所述的用于检测与皮肤衰老相关易感基因SNP的成套引物。
6.由权利要求5所述的一种基因检测试剂盒，其特征在于:所述的22个皮肤衰老相关易感基因包括BNC2、ASIP、STXBP5L、IFR4、MMP1、AGER、GLO1、SLC45A2、KITLG、TYR、DCT、MC1R、OCA2、SOD2、CAT、GPX1、NQO1、NFE2L2、GSTP1、AQP、HAS1、FLG。
7.由权利要求5所述的一种基因检测试剂盒，其特征在于:所述的皮肤衰老相关易感基因的29个SNP位点包括rs10733310、rs62543565、rs1015362、rs4911414、rs322458、rs1540771、rs1799750、rs2070600、rs2071288、rs1130534、rs16891982、rs1834640、rs642742、rs1042602、rs2031526、rs885479、rs74653330、rs1800414、rs4880、rs1001179、rs1050450、rs1800566、rs35652124、rs1695、rs17553719、rs11084109、rs11084111、rs761789405、rs200519781。
8.由权利要求5所述的一种基因检测试剂盒，其特征在于:所述的成套引物由权利要求7中每个SNP位点的扩增引物对和单碱基延伸引物组成。
9.由权利要求5所述的一种基因检测试剂盒，其特征在于:所述的试剂盒基因检测结果显示涵盖皮肤老化、皱纹和胶原蛋白降解、抗氧化、糖基化、锁水能力相关的基因。
10.由权利要求5所述的一种基因检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒基因检测方法为：以人基因组DNA为样本，将成套引物经多重PCR扩增后采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法检测样本SNP位点分型，根据基因型判断样本相应SNP位点的皮肤抗衰老能力。
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