CN110904207B - 一种与皮肤老化表征相关的易感基因检测panel及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于基因检测领域，具体涉及一种与皮肤老化表征相关的易感基因检测panel及其应用，所述检测panel用于检测人基因组DNA的33个皮肤老化表征相关易感基因，所述检测panel包括45个SNP位点的多重PCR扩增引物和单碱基延伸引物。与现有技术相比，本发明涵盖的皮肤老化表征相关易感基因位点数量多，且专门针对亚洲人群(尤其中国人群)的皮肤基因检测，能够更加高效科学评定个体皮肤状态，并对诱发肌肤问题的根源性进行分析，为亚洲人群(尤其中国人群)提供精准护肤和个性化护肤品定制提供科学依据。
Description
技术领域
本发明属于基因检测领域，具体涉及一种与皮肤老化表征相关的易感基因检测panel及其应用。
背景技术
P&G Beauty首席科学家杰伊·特斯曼博士认为：“通过人类基因组计划，我们可以对衰老过程中发生的数百种遗传变化进行分析。皮肤通过八种不同方法不断衰老，每一种衰老方式都由它自己的基因组控制。无论你是像克利夫·理查(Cliff Richard)一样慢慢衰老，还是像基思、理查兹(Keith Richards)一样长满皱纹，这些都由你的生活方式决定，并由这些基因起着部分作用”。
皮肤老化由多种复杂的原因造成，可概括为两大类：内因和外因。外部因素常见的如长期紫外线辐射、恶劣的气候和环境、不良生活习惯和过度工作压力等；内部因素即遗传因素。科学研究表明皮肤老化表征与遗传基因有着密不可分的关系，如肌肤天然保湿因子主要与FLG基因功能有关，FLG基因编码丝聚合蛋白，丝聚合蛋白在外表皮含量丰富，对角化细胞分化起着至关重要的作用，其分解产物形成皮肤天然保湿屏障，对表皮组织屏障的形成及水合作用极为重要；SPINK5基因编码一种多域丝氨酸蛋白酶抑制剂可能在皮肤和毛发的形态发生、黏膜上皮的抗炎和抗菌保护中发挥作用，该基因功能薄弱，会导致皮肤锁水能力差，皮肤易干燥。肌肤敏感性相关易感基因如DDB2基因、IL6基因和ELN基因，研究报道此类基因与肌肤敏感性、痤疮形成、皮肤炎症等关联性较强。IL6基因编码一种炎性细胞因子，其表达量与炎症表现呈正相关，该基因多态性SNP位点与炎症因子、皮肤抗炎能力、过敏性皮炎、雄激素过多相关；DDB2基因的表达产物DNA损伤特异结合蛋白2，通过参与雄性激素代谢与毛囊抗细菌过程，影响痤疮严重性。肌肤损伤修复表征相关的易感基因报道的有NQO1基因、CAT基因、XRCC3基因、GSTP1基因等，这些基因与肌肤的损伤(紫外线损伤、空气污染、辐射等)修复能力关联性较强，如NQO1基因编码的蛋白为一种保护性还原酶，能够减少PM2.5、抽烟、空气污染物等造成的氧化伤害；同时，NQO1酶参与苯醌代谢途径，对多环芳烃类化学物质的解毒有重要作用；CAT基因编码的过氧化氢酶是体内一种重要的抗氧化酶，在活性氧(ROS)清除的过程中起重要作用，能有效清除自由基，对维持体内氧化还原态平衡有重要作用。类似的研究成果还有许多，随着基因检测在美容领域的应用，越来越多的皮肤基因检测产品服务于市场，通过基因检测，为精准护肤及个性化护肤品的定制提供科学依据。
皮肤老化与基因的单核苷酸多态性有关，这一点已被科学界广泛证实。过去已经发展出多种检测基因多态性的方法，用来预测皮肤抵抗衰老的能力。专利(201320009798.7)美白及老化基因芯片，涵盖了7个与美白相关的基因单核苷酸多态性位点，7个与皮肤氧化作用相关的基因单核苷酸多态性位点，将14个位点集成在一张芯片上进行检测。该专利采用的基因芯片法比较繁琐，只试用在研发阶段，无法实现大规模的商业转化。发明专利(201610367682.9)公开了一种检测皮肤锁水的引物和探针，使用方法是荧光定量PCR，检测两个单核苷酸多态性位点，检测基因不全面，且荧光定量PCR法适于检测5个左右的已知SNP位点，位点增加时，操作复杂耗时长。专利201710964440.2公开了一种基因检测试剂盒，包括雀斑基因芯片、痤疮基因芯片、肤色基因芯片，该专利虽然检测了雀斑及痤疮相关基因，达到了便于个性化定制预防医疗方案的效果，但是其检测位点少，准确率低。专利CN105886645A公开了用于评估皮肤抗皱情况的引物和探针及试剂盒，使用的方法是荧光定量PCR，检测位点共7个，检测皮肤表征单一且位点较少，操作复杂，耗时长。专利CN201810213173X公开了皮肤老化、皱纹和胶原蛋白降解、抗氧化、糖基化、锁水能力相关的22个基因29个SNP位点，检测技术是核酸质谱，检测基因类别和位点数量相对较全面。
皮肤基因多态性具有明显的种族性和地域性，欧美人群和亚洲人群存在明显差异，科学研究表明欧美人群皮肤衰老的典型标志是皱纹，而亚洲人群皮肤衰老的典型标志是色素斑及鱼尾纹。因此基于中国人群数据库选取检测基因位点和解读报告更科学、更合理。中国医师协会皮肤科医师分会开展了“国人皮肤状况大型网络调查”，近4万名网民参与调查，其中45.45％为男性，54.55％为女性。29～39岁年龄段人数最多，占39.45％，结果表明约70％的人存在皮肤亚健康，仅有14％的人皮肤状况良好。鉴于近七成国人皮肤亚健康问题，但是上述现有检测技术存在的局限性，没有专门针对亚洲人群(尤其中国人群)的检测与皮肤老化表征相关易感基因的检测panel。
，该检测panel涵盖的基因类别归类科学、检测位点覆盖最新科研成果，评估体系专门针对亚洲人群，为后续精准护肤方案的选择提供了科学依据。
发明内容
针对上述技术问题，本发明一方面提供一种低成本、高效率的与皮肤老化表征相关的易感基因检测panel；本发明另一方面提供一种与皮肤老化表征相关易感基因检测panel的应用，为精准护肤与个性化护肤品定制提供科学依据。
为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：
一种与皮肤老化表征相关的易感基因检测panel，所述检测panel用于检测人基因组DNA的33个皮肤老化表征相关易感基因；
所述检测panel包括45个SNP位点的多重PCR扩增引物和单碱基延伸引物。
进一步地，所述人基因组DNA的33个皮肤老化表征相关易感基因为COL1A1、FLG、SOD2、CAT、BNC2、HAS1、DCT、IL6、SLC45A2、NQO1、MC1R、DDB2、SLC24A5、STXBP5L、MMP9、TYR、XRCC3、AHR、KITLG、MMP1、AKAP1/MS/2、HERC2、MMP3、PPARGC1B、IRF4、ELN、ASIP、GSTP1、OCA2、RYLY/ASIP、SPINK5、COL3A1、EMILIN1。
进一步地，所述45个SNP位点为rs1800012、rs200519781、rs4880、rs1001179、rs10733310、rs11084111、rs2031526、rs1800795、rs185146、rs1800566、rs1805007、rs1060573、rs1426654、rs322458、rs3918242、rs1042602、rs873601、rs11084109、rs2066853、rs642742、rs1799750、rs17833789、rs12913832、rs679620、rs4268748、rs251468、rs885479、rs2228479、rs12203592、rs2071307、rs146466242、rs1015362、rs1695、rs4911414、rs10810635、rs747650、rs74653330、rs6059655、rs2303067、rs3126085、rs62543565、rs2228478、rs591058、rs1800255、rs2011616。
进一步的，所述45个SNP位点的多重PCR扩增引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ IDNO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24、SEQ IDNO.25和SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30、SEQID NO.31和SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33和SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35和SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.37和SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41和SEQ IDNO.42、SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45和SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47和SEQID NO.48所示的核苷酸序列，所述rs4268748位点的PCR扩增引物序列、SEQ ID NO.49和SEQID NO.50、SEQ ID NO.51和SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53和SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55和SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.57和SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59和SEQ ID NO.60、SEQ IDNO.61和SEQ ID NO.62、SEQ ID NO.63和SEQ ID NO.64、SEQ ID NO.65和SEQ ID NO.66、SEQID NO.67和SEQ ID NO.68、SEQ ID NO.69和SEQ ID NO.70、SEQ ID NO.71和SEQ ID NO.72、SEQ ID NO.73和SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.75和SEQ ID NO.76、SEQ ID NO.77和SEQ IDNO.78、SEQ ID NO.79和SEQ ID NO.80、SEQ ID NO.81和SEQ ID NO.82、SEQ ID NO.83和SEQID NO.84、SEQ ID NO.85和SEQ ID NO.86、SEQ ID NO.87和SEQ ID NO.88、SEQ ID NO.89和SEQ ID NO.90所示的核苷酸序列。
进一步地，所述45个SNP位点的单碱基延伸引物序列为SEQ ID NO.91、SEQ IDNO.92、SEQ ID NO.93、SEQ ID NO.94、SEQ ID NO.95、SEQ ID NO.96、SEQ ID NO.97、SEQ IDNO.98、SEQ ID NO.99、SEQ ID NO.100、SEQ ID NO.101、SEQ ID NO.102、SEQ ID NO.103、SEQ ID NO.104、SEQ ID NO.105、SEQ ID NO.106、SEQ ID NO.107、SEQ ID NO.108、SEQ IDNO.109、SEQ ID NO.110、SEQ ID NO.111、SEQ ID NO.112、SEQ ID NO.113、SEQ ID NO.114、SEQ ID NO.115、SEQ ID NO.116、SEQ ID NO.117、SEQ ID NO.118、SEQ ID NO.119、SEQ IDNO.120、SEQ ID NO.121、SEQ ID NO.122、SEQ ID NO.123、SEQ ID NO.124、SEQ ID NO.125、SEQ ID NO.126、SEQ ID NO.127、SEQ ID NO.128、SEQ ID NO.129、SEQ ID NO.130、SEQ IDNO.131、SEQ ID NO.132、SEQ ID NO.133、SEQ ID NO.134和SEQ ID NO.135所示的核苷酸序列。
进一步地，所述皮肤老化表征相关的易感基因检测panel的检测结果包括皮肤锁水能力相关基因、皮肤弹性能力相关基因、皮肤抗色素沉积能力相关基因、皮肤抗过敏能力相关基因、皮肤抗衰老能力相关基因和皮肤损伤修复能力相关基因。
进一步地，所述的皮肤老化表征相关的易感基因检测panel的检测方法为：
步骤一，从人的口腔黏膜、外周血和组织中提取人基因组DNA作为样本DNA；
步骤二，利用检测panel的45个SNP位点的多重PCR扩增引物和单碱基延伸引物，对步骤一得到的样本DNA进行多重PCR扩增，然后后采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法检测样本SNP分型，得到样本SNP位点的基因型结果；
步骤三，根据步骤二得到的样本SNP位点的基因型结果，利用建立的综合评估体系，评定个体皮肤状态。
一种与皮肤老化表征相关的易感基因检测panel的应用，包括：个体皮肤状态评定、诱发肌肤问题的根源性分析、精准护肤和个性化护肤品定制中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
①本发明涵盖的皮肤老化表征相关易感基因位点数量多，且专门针对亚洲人群(尤其中国人群)的皮肤基因检测，能够更加高效科学评定个体皮肤状态，并对诱发肌肤问题的根源性进行分析，为亚洲人群(尤其中国人群)提供精准护肤和个性化护肤品定制提供科学依据。
②本发明的检测panel科学归类了皮肤老化表征各功能基因，包括皮肤锁水能力相关基因、皮肤弹性能力相关基因、皮肤抗色素沉积能力相关基因、皮肤抗过敏能力相关基因、皮肤抗衰老能力相关基因和皮肤损伤修复能力相关基因，检测结果科学。
③本发明的检测panel利用多重PCR技术，通过多重PCR进行扩增，使用飞行时间质谱检测，一次性检测45个SNP位点，检测效率高、准确率高、且成本低。
附图说明
图1为CAT基因rs1001179位点复孔1基因型核酸质谱峰图；
图2为CAT基因rs1001179位点复孔2基因型核酸质谱峰图；
图3为CAT基因rs1001179位点复孔3基因型核酸质谱峰图；
图4为FLG基因rs3126085位点复孔1基因型核酸质谱峰图；
图5为FLG基因rs3126085位点复孔2基因型核酸质谱峰图；
图6为FLG基因rs3126085位点复孔3基因型核酸质谱峰图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行详细说明，但是本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
实施例1
1.皮肤老化表征相关的易感基因检测方案
根据人体皮肤老化表征与遗传基因的关系，确定皮肤老化表征相关易感基因及SNP位点(如表1)，形成检测panel。
针对检测panel涉及的所有SNP位点，设计多重PCR扩增引物对SEQ ID NO.1-SEQID NO.90所示核苷酸序列，和单碱基延伸引物SEQ ID NO.91-SEQ ID NO.113所示核苷酸序列。
以人基因组DNA为样本(口腔黏膜、外周血、组织)，利用多重PCR技术扩增技术获得扩增和延伸产物。
采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法进行样本的SNP基因分型，从遗传角度，评估个体皮肤状态，为精准护肤提供科学依据。
表1皮肤老化表征相关易感基因及SNP位点
实施例2样本提取及分析
为验证本发明的用于检测与皮肤老化表征相关易感基因检测panel，引物准确度及有效性，选取2个样本，分别编号为RY-BS-1和RY-BS-2，每个样本设置3个复孔，在核酸质谱平台上进行SNP分型，过程如下：
A.口腔黏膜DNA提取：利用杭州博日口腔拭子基因组DNA提取试剂盒进行口腔黏膜脱落细胞DNA提取。在WB1和WB试剂中加入一定量的无水乙醇。从采样管中取出采样棉签转置于2ml离心管中，用剪刀将棉签部分从其杆上剪下；加入600uL Lysis Buffer和10uL PKSolution，震荡混匀15秒；56℃温育15分钟；在上述离心管加入300uL无水乙醇，充分震荡混匀，离心；将上述步骤液体转移至Spin column中，10000×g离心1min，弃去外套管内废液；将500uL WB1Buffer加入Spin column上，10000×g离心1min，弃去外套管内废液；将500uLWash Buffer加入Spin column上，10000×g离心1min，弃去外套管内废液；重复上述步骤一次；将Spin column放回接液管，10000×g离心2min；将Spin column转移至一只干净的1.5ml离心管中。向离心柱内加入30uL Elution Buffer，于室温静置2min，10000×g离心1min，并弃Spin column，离心管内液体中含有基因组DNA。
B.PCR扩增：配制PCR Mix(ddH2O 15.8uL，10×PCR Buffer 4.4μL，MgCl2 3.5μL，dNTP 0.9μL，PCR酶1.8uL)，震荡混匀后按照多重PCR扩增的反应体系(5μL)：PCR Mix 3uL，扩增引物Mix 1uL，模板DNA(20ng/uL)1uL依次添加至384孔板，封板膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀离心；将384孔板置于ABI 384Well Thermal Cycler进行扩增反应，反应条件：95℃预变性2min，(95℃30s，56℃30s，72℃1min)45个循环，72℃5min，4℃保持；得到PCR扩增产物，离心，备用。
C.SAP消化：取出B步骤中PCR扩增产物，离心后去封板膜，置于4℃冰板备用；配制SAP Mix(ddH2O 13.7ul，SAP Buffer 1.5μL，SAP酶2.7μL)，震荡混匀后添加至384孔板的每个反应孔2uL，使用封板膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀，离心；将密封的384孔板置于ABI384Well Thermal Cycler上进行SAP消化反应，反应条件：37℃40min，85℃5min，4℃保持；得到SAP消化产物，离心备用。
D.单碱基延伸反应：配制iPLEX Mix(ddH2O 5.9uL，iPLEX Buffer 1.9μL，Termination Mix 1.9μL，iPLEX酶0.4μL)，震荡混匀后添加至384孔板的每个反应孔1.06uL，然后在每个反应孔中分别加入对应的延伸引物Mix0.94uL，使用封板膜封紧，防止样品蒸发，震荡混匀，离心；将密封的384孔板置于ABI 384Well Thermal Cycler上进行延伸反应，反应条件：94℃预变性30s，94℃变性5s，(52℃5s，80℃5s)5个重复；72℃3min，4℃保持；得到延伸产物，离心备用。
E.树脂纯化：将步骤D中得到的单碱基延伸产物的384孔板，轻轻撕下封板膜后，每孔加入16μL ddH2O，震荡混匀，离心置于4℃冰板上备用；取干净的A4纸将6MG 384板置于其上，用小勺取适量纯化树脂，用塑料板反复左右推平纯化树脂，压实，使每孔树脂含量均匀；将384板倒置压在6MG 384板上，两板对调，6MG板在上，敲打6MG板背面，使树脂落入装有单碱基延伸产物的384孔板中；封板膜封好后，Rotational Mixer WH-986上下颠倒混匀15min，充分纯化。
F.芯片点样：将步骤E中的384孔板置于高速冷冻离心机ST16R中，3000rpm离心5min，去封板膜备用；启动MassARRAY Nanodispenser RS1000点样仪，将树脂纯化后的延伸产物移至384孔SpectroCHIP芯片上；点样后的芯片使用MALDI-TOF分析，使用TYPER4.0软件分型并输出检测结果。
实施例3基因检测结果分析
利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法进行SNP基因分型，经TYPER4.0软件分型并输出检测结果。表2和表3分别为实施例RY-BS-1和RY-BS-2的SNP位点基因检测结果，由表2和表3可以看出，两个实施例45个位点的基因型均能准确检出，检出率均为100％；所有位点3个复孔基因型进行比对后，符合率达到100％，随机选取实施例RY-BS-1样本2个位点的3个复孔质谱图谱在附图中进行展示说明，详见附图。
表2实施例样本RY-BS-1的SNP位点基因检测结果
| SNP位点 | 检测结果 | SNP位点 | 检测结果 | SNP位点 | 检测结果 |
| rs1001179 | C | rs322458 | C | rs2228479 | AG |
| rs1042602 | C | rs4880 | AG | rs2303067 | G |
| rs1060573 | A | rs679620 | C | rs251468 | C |
| rs10733310 | G | rs8736601 | AG | rs3126085 | GA |
| rs110084109 | T | rs11084111 | AG | rs4911414 | G |
| rs12913832 | A | rs17833789 | C | rs591058 | C |
| rs1426654 | G | rs642742 | CT | rs6059655 | G |
| rs1799750 | C | rs200519781 | DELT | rs62543565 | C |
| rs1800012 | C | rs3918242 | CT | rs74653330 | C |
| rs1800566 | G | rs1015362 | CT | rs747650 | T |
| rs1800795 | G | rs12203592 | C | rs885479 | G |
| rs1805007 | C | rs146466242 | T | rs10810635 | CT |
| rs185146 | C | rs1695 | G | rs2011616 | G |
| rs2031526 | A | rs1800255 | AG | rs2228478 | AG |
| rs20+66853 | G | rs20/1307 | G | rs4268/48 | TC |
表3实施例样本RY-BS-2的SNP位点基因检测结果
| SNP位点 | 检测结果 | SNP位点 | 检测结果 | SNP位点 | 检测结果 |
| rs1042602 | C | rs1001179 | CT | rs2011616 | G |
| rs1060573 | GA | rs17833789 | C | rs2071307 | G |
| rs10733310 | G | rs642742 | CT | rs2228478 | A |
| rs11084109 | T | rs679620 | CT | rs2228479 | AG |
| rs11084111 | G | r51800566 | GA | rs2303067 | G |
| rs12913832 | A | rs1805007 | C | rs251468 | C |
| rs1426654 | G | rs200519781 | T | rs3126085 | A |
| rs1800012 | C | rs1799750 | CDEL | rs4268748 | TC |
| rs1800795 | G | rs3918242 | CT | rs4911414 | G |
| rs185146 | C | rs1015362 | T | rs591058 | C |
| rs2031526 | A | rs10810635 | CT | rs6059655 | G |
| rs2066853 | G | rs12203592 | C | rs62543565 | C |
| rs322458 | CT | r5146466242 | T | rs74653330 | C |
| rs4880 | A | rs1695 | G | rs747650 | T |
| rs873601 | AG | rs1800255 | A | rs885479 | G |
实施例4基因检测结果解读
通过皮肤老化表征相关易感基因检测panel对受检者进行SNP基因分型后，利用对应的皮肤老化表征易感基因综合评估体系对受检者皮肤老化表征状态进行综合评估。以实施例样本RY-BS-1的基因检测结果为例，进行解读示例见表4。
表4实施例样本RY-BS-1基因检测结果解读
表4检测结果解读：是否突变一栏中，“+”风险基因型(突变)，“-”野生基因型(未突变)；风险评估体系针对每种类别基因检测出的突变位点数量及突变位点对皮肤相应表征的影响度，综合评估出受检者的皮肤老化表征状态。皮肤老化表征状态共分为四个等级——较好、适中、较弱、较差。
以上所述仅为发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的简单修改或变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
序列表
<110> 陕西九州医学检验有限公司
<120> 一种与皮肤老化表征相关的易感基因检测panel及其应用
<141> 2019-06-14
<160> 135
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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gtctttgctg agaaattcat t 21
<210> 125
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 125
gaaaagaata agcaaaggaa g 21
<210> 126
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 126
accacctcac aggaagaaaa cc 22
<210> 127
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 127
ggagggtccc cgatggcagt gg 22
<210> 128
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 128
gggctcagaa aggctgagtg gc 22
<210> 129
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 129
agattgtctt ttgtttcttg att 23
<210> 130
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 130
ggacaattct attaaaaagt cgt 23
<210> 131
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 131
gaatggcgtg aacgtgggag gcg 23
<210> 132
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 132
aaggacgctc aaggaggtgc tgac 24
<210> 133
<211> 25
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<400> 133
ataaattggt ccctatttaa gaaat 25
<210> 134
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 134
cggggcccca ggacttagag gtgga 25
<210> 135
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 135
cagtatagaa ctgcaatccc caagag 26
Claims (1)
1.一种与皮肤老化表征相关的易感基因检测panel，其特征在于，所述检测panel用于检测人基因组DNA的皮肤老化表征相关易感基因，所述检测panel包括45个SNP位点的多重PCR扩增引物和45个SNP位点的单碱基延伸引物；
所述45个SNP位点为rs1800012、rs200519781、rs4880、rs1001179、rs10733310、rs11084111、rs2031526、rs1800795、rs185146、rs1800566、rs1805007、rs1060573、rs1426654、rs322458、rs3918242、rs1042602、rs873601、rs11084109、rs2066853、rs642742、rs1799750、rs17833789、rs12913832、rs679620、rs4268748、rs251468、rs885479、rs2228479、rs12203592、rs2071307、rs146466242、rs1015362、rs1695、rs4911414、rs10810635、rs747650、rs74653330、rs6059655、rs2303067、rs3126085、rs62543565、rs2228478、rs591058、rs1800255、rs2011616；
所述45个SNP位点的多重PCR扩增引物的序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ IDNO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25和SEQ IDNO.26、SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31和SEQID NO.32、SEQ ID NO.33和SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35和SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.37和SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41和SEQ ID NO.42、SEQ IDNO.43和SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45和SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48、SEQID NO.49和SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.51和SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53和SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55和SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.57和SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59和SEQ IDNO.60、SEQ ID NO.61和SEQ ID NO.62、SEQ ID NO.63和SEQ ID NO.64、SEQ ID NO.65和SEQID NO.66、SEQ ID NO.67和SEQ ID NO.68、SEQ ID NO.69和SEQ ID NO.70、SEQ ID NO.71和SEQ ID NO.72、SEQ ID NO.73和SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.75和SEQ ID NO.76、SEQ IDNO.77和SEQ ID NO.78、SEQ ID NO.79和SEQ ID NO.80、SEQ ID NO.81和SEQ ID NO.82、SEQID NO.83和SEQ ID NO.84、SEQ ID NO.85和SEQ ID NO.86、SEQ ID NO.87和SEQ ID NO.88、SEQ ID NO.89和SEQ ID NO.90所示的核苷酸序列；
所述45个SNP位点的单碱基延伸引物的序列为SEQ ID NO.91、SEQ ID NO.92、SEQ IDNO.93、SEQ ID NO.94、SEQ ID NO.95、SEQ ID NO.96、SEQ ID NO.97、SEQ ID NO.98、SEQ IDNO.99、SEQ ID NO.100、SEQ ID NO.101、SEQ ID NO.102、SEQ ID NO.103、SEQ ID NO.104、SEQ ID NO.105、SEQ ID NO.106、SEQ ID NO.107、SEQ ID NO.108、SEQ ID NO.109、SEQ IDNO.110、SEQ ID NO.111、SEQ ID NO.112、SEQ ID NO.113、SEQ ID NO.114、SEQ ID NO.115、SEQ ID NO.116、SEQ ID NO.117、SEQ ID NO.118、SEQ ID NO.119、SEQ ID NO.120、SEQ IDNO.121、SEQ ID NO.122、SEQ ID NO.123、SEQ ID NO.124、SEQ ID NO.125、SEQ ID NO.126、SEQ ID NO.127、SEQ ID NO.128、SEQ ID NO.129、SEQ ID NO.130、SEQ ID NO.131、SEQ IDNO.132、SEQ ID NO.133、SEQ ID NO.134和SEQ ID NO.135所示的核苷酸序列。
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