CN108950013A - 一种皮肤相关基因位点库及其构建方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种皮肤相关基因位点库，通过采用SNPedia分析与美白、防晒、皮肤弹性、抗氧化、抗糖化、保湿、抗痘、控油、毛孔和红血丝相关的关键酶活性，得到影响酶活性的基因位点。运用该位点库的步骤包括：采集用户的唾液样本；提取样本中的mRNA，筛选样品mRNA；将样品mRNA纯化和片段化，然后逆转录成cDNA；对cDNA进行末端修复、加接头，PCR扩增，得PCR产物；将PCR产物预处理测，然后上机测序；根据测序结果，在皮肤相关基因位点库中搜索目标基因型，评分，判断皮肤状态。本发明提供的基因位点库将皮肤问题细分成各种小类，能精准地确定引起皮肤问题的原因，为解决皮肤问题提供依据，实现真正的个性化美容。

Description

一种皮肤相关基因位点库及其构建方法和应用
技术领域
本发明属于基因检测技术领域，尤其涉及一种皮肤相关基因位点库及其构建方法和应用。
背景技术
随着科学与技术的发展，研究表明人类的皮肤状态与基因有着密切的关系。目前，市面上存在诸多基于基因检测的“量肤定制”方案，其主要是基于SNP位点(基因多态性)的基因检测，数据来源是通过大规模全基因组相关联分析(GWAS)而来。其实就是把基因的不同和表征的不同联系起来。比如，研究的表征是双眼皮，那么就找来100个双眼皮的女生和100个单眼皮的女生，把她们的基因都测一遍。如果发现某个位点在100个双眼皮女生中都是A，在100个双眼皮女生中都是C，那么就认为这个位点和眼皮单双有关。当检测出样品基因型为A，那么可以判断该女生双眼皮的几率较大。
现有检测方案的问题在于寻找的SNP样本量有限，缺乏一定的科学依据和论证，很大程度上影响对样本检测结果的准确判断。此外，市面上多数与皮肤问题相关的基因都是编码与皮肤问题直接相关的蛋白质，无异于直接检测相关蛋白的表达量，因此，解决问题的出发点也并不是问题的根源所在。举个例子，皮肤的过敏问题，可以是A、B、C三种物质，通过三个代谢途径，最后都生成了物质D，表现为过敏反应。现有的大多数基因检测都是检测物质D的基因表达情况，而非A/B/C的基因多态性，因此，所选用的护肤品也没有从根本上解决问题。
发明内容
本发明的目的在于将决定皮肤状态的关键酶进行分类及分析，找出决定蛋白活性的相关基因位点，构建皮肤相关基因位点库，再通过基因检测出个体蛋白水平的差异，进而分析出相关蛋白活性，从而明确个体皮肤状态产生的根本原因，从而为下一步进行产品使用或者设计提供指导。
具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：
一方面，本发明提供了一种皮肤相关基因位点库，该基因位点库包括：
美白相关基因TYR、TYRP1、OCA2、MC1R、SLC45A2、SLC24A5、SIRT1、RAB27A、MYO5A、CaM、SOD2、GPX1、KITLG和KIT；
防晒相关基因MCR1、XRCC1、ERCC2、TYR、IL-6、TNF-alpha、SLC45A2和STXBP5L；
皮肤弹性相关基因MMP1、MMP9、LOX、BMP1和PCOLCE2；
抗氧化相关基因NQO1、CAT、SOD1、SOD2、NFE2L2和GPX1；
抗糖化相关基因RAGE、SRAGE和AGER；
保湿相关基因AQP3、ST14、DAG和FLG；
抗痘相关基因BCMO1，SELL、DDB2、IL-6、TNF-alpha；
控油相关基因Dsg4、BCMO1、AQP3和ST14；
毛孔相关基因MCR1、XRCC1、ERCC2、MMP1、MMP9、LOX、BMP1、BCMO1、Dsg4、AQP3、ST14和CaM；
红血丝相关基因CaM、DAG、LOX、BMP1、IL-6和TNF-alpha。
优选的，所述TYR的位点在rs1393350和rs1126809；所述TYRP1的位点在rs2733832；所述OCA2的位点在rs1800401和rs1800414；所述MC1R的位点在rs2228479和rs1805008；所述SLC45A2的位点在rs16891982和rs26722；所述SLC24A5的位点在rs1426654；所述SIRT1的位点在rs10997875；所述RAB27A的位点在rs2194437；所述MYO5A的位点在rs2222656；所述CaM的位点在rs5871和rs12885713；所述GPX1的位点在rs1050450和rs8179164；所述KITLG的位点在rs755383；所述KIT的位点在rs794726675；所述MCR1的位点在rs2228479和rs1805008；所述XRCC1的位点在rs25487；所述ERCC2的位点在rs13181；所述STXBP5L的位点在rs322458和rs11707293；所述IL-6的位点在rs1474347、rs1548216和rs1800795；所述TNF-alpha的位点在rs1800629和rs361525；所述LOX的位点在rs1050283和rs1050286；所述BMP1的位点在rs121917835；所述MMP1的位点在rs1799750和rs17576；所述MMP9的位点在rs11568818和rs1799750；所述PCOLCE2的位点在rs920466、rs2248811和rs2608069；所述NQO1的位点在rs1800566、rs1695和rs947895；所述CAT的位点在rs475043和rs480496；所述SOD1的位点在rs2234694和rs7277748；所述SOD2的位点在rs4880；所述NFE2L2的位点在rs35652124；所述RAGE的位点在rs1800624；所述SRAGE的位点在rs2070600；所述AGER的位点在rs1800624和rs1800625；所述AQP3的位点在rs17553719；所述ST14的位点在rs137852931；所述DAG的位点在rs4625和rs12583；所述FLG的位点在rs11103631和rs61816761；所述BCMO1的位点在rs7501331、rs119478057和rs12934922；所述SELL的位点在rs2229569和rs4987310；所述DDB2的位点在rs7531806和rs747650；所述Dsg4的位点在rs4799570和rs7234288。
另一面，本发明提供了前述基因位点库的构建方法，具体为确定与皮肤相关的关键酶，在SNPedia中输入关键酶的名称，查找到与皮肤相关的基因位点，构成基因位点库。
优选的，所述关键酶包括与美白、防晒、皮肤弹性、抗氧化、抗糖化、保湿、抗痘、控油、毛孔和红血丝相关的关键酶。
优选的，美白相关的关键酶包括TYR酶、TYRP1酶、OCA2酶、MC1R酶、SLC45A2酶、SLC24A5酶、SIRT1酶、RAB27A酶、MYO5A酶、CaM酶、SOD2酶、GPX1酶、KITLG酶和KIT酶；防晒相关的关键酶包括MCR1酶、XRCC1酶、ERCC2酶、TYR酶、IL-6酶、TNF-alpha酶、SLC45A2酶和STXBP5L酶；皮肤弹性相关的关键酶包括MMP1酶、MMP9酶、LOX酶、BMP1酶和PCOLCE2酶；抗氧化相关的关键酶包括NQO1酶、CAT酶、SOD1酶、SOD2酶、NFE2L2酶和GPX1酶；抗糖化相关的关键酶包括RAGE酶、SRAGE酶和AGER酶；保湿相关的关键酶包括AQP3酶、ST14酶、DAG酶和FLG酶；抗痘相关基因的关键酶包括BCMO1酶，SELL酶、DDB2酶、IL-6酶、TNF-alpha酶；控油相关的关键酶包括Dsg4酶、BCMO1酶、AQP3酶和ST14酶；毛孔相关的关键酶包括MCR1酶、XRCC1酶、ERCC2酶、MMP1酶、MMP9酶、LOX酶、BMP1酶、BCMO1酶、Dsg4酶、AQP3酶、ST14酶和CaM酶；红血丝相关的关键酶包括CaM酶、DAG酶、LOX酶、BMP1酶、IL-6酶和TNF-alpha酶。
再一方面，本发明提供了前述皮肤相关基因位点库在皮肤个体化护理中的应用。
优选的，所述应用包括以下步骤：
S1.采集样本；
S2.提取样本中的总RNA，筛选出样品mRNA；
S3.将样品mRNA纯化和片段化，然后逆转录成cDNA；
S4.对cDNA进行末端修复、加接头，然后进行PCR扩增，得到PCR产物；
S5.将PCR产物预处理，得到待测样品，然后上机测序；
S6.根据测序结果，在皮肤相关基因位点库中搜索目标基因型，评分，判断皮肤状态。
优选的，还包括至少一种以下技术特征：
步骤S1所述的样本为用户的唾液样本；
步骤S2所述样品mRNA通过Agilent 2100BioAnalyzer检测结果为RIN≥7；
步骤S3中将样品mRNA片段化的方法为配制反应体系A，然后在PCR仪上运行程序1；
步骤S3中逆转录成cDNA的过程包括：配制反应体系B，然后在PCR仪上运行程序2，
合成cDNA的第一条链，再配制反应体系C，然后在PCR仪上运行程序3，合成cDNA的
第二条链，即得cDNA。
优选的，所述程序1的条件为94℃、15min，然后4℃保存；程序2的条件为25℃、10min，42℃、50min，70℃、15min，然后4℃保存；程序3的条件为16℃、1小时。
优选的，步骤S5所述的PCR产物预处理方法为准确定量，然后将其变性、稀释，再加入经变性、稀释处理的PhiX，得到待测样品。
与现有技术相比，本发明的效果和益处在于：
1.本发明的基因多态性位点(SNP位点)是来自美国国立生物技术信息中心(NCBI)的大数据库，数据来源广且有确切的科学依据，以该数据库为基础，筛选、构建得到的皮肤相关基因位点库更加准确、全面。
2.本发明通过将决定皮肤状态的关键酶进行分类及分析，找出决定蛋白活性的相关基因位点，构建得到皮肤相关基因位点库。该构建方法科学、容易操作；基因位点库中的基因位点状态直接影响相关的蛋白水平，而蛋白能够直接反应个体的皮肤状况，故而本发明构建的基因位点库能用于评判皮肤状况。
3.本发明提供的基因位点库将皮肤问题细分成各种小类，比如黑色素沉积可以进一步归因于酪氨酸酶活性相关基因、黑色素合成相关基因、黑素体成熟相关基因、黑色素代谢相关基因、角质层分化相关基因、黑色素氧化相关基因和黑色素细胞增殖相关基因；对用户进行基因多态性检测，能精准地确定引起皮肤问题的原因，为解决皮肤问题提供依据，实现真正的个性化美容。
具体实施方式
本发明提供了一种皮肤相关基因位点库，该基因位点库包括美白、防晒、皮肤弹性、抗氧化、抗糖化、保湿、抗痘、控油、毛孔和红血丝相关基因。皮肤相关基因位点被划分成多个类别，具体如下：
美白相关的基因包括：酪氨酸酶活性相关基因TYR、TYRP1和OCA2，黑色素合成相关基因MC1R，黑素体成熟相关基因SLC45A2和SLC24A5，黑色素代谢相关基因SIRT1、RAB27A和MYO5A，角质层分化相关基因CaM，黑色素氧化相关基因SOD2和GPX1，黑色素细胞增殖相关基因KITLG和KIT；
防晒相关基因包括：抗紫外线相关基因MCR1、XRCC1和ERCC2，光保护修复相关基因TYR、IL-6和TNF-alpha，光保护相关基因SLC45A2和STXBP5L；
皮肤弹性相关基因包括：胶原蛋白分解相关基因MMP1和MMP9，胶原蛋白生成相关基因LOX和BMP1，胶原蛋白保护相关基因PCOLCE2；
抗氧化相关基因包括：机体清除自由基功能相关基因NQO1和CAT，机体自由基生成能力相关基因SOD1、SOD2和NFE2L2，过氧化氢分解相关基因GPX1，醌类化合物降解相关基因NQO1；
抗糖化相关基因包括：糖基化末端产物生成相关基因RAGE和SRAGE，糖基化末端产物代谢相关基因AGER；
保湿相关基因包括：角质层水分流失相关基因AQP3，角质层水合度相关基因ST14，角蛋白生成相关基因DAG，皮肤天然保湿因子生成相关基因FLG；
抗痘相关基因包括：皮脂腺分泌相关基因BCMO1，微生物易感相关基因SELL、DDB2，炎症因子分泌相关基因IL-6和TNF-alpha；
控油相关基因包括：皮脂腺增殖相关基因Dsg4，油脂分泌过多相关基因BCMO1，皮肤干燥相关基因AQP3和ST14；
毛孔相关基因包括：光老化相关基因MCR1、XRCC1和ERCC2，胶原蛋白分解相关基因MMP1、MMP9，胶原蛋白生成相关基因LOX和BMP1，油脂分泌相关基因BCMO1，皮脂细胞增殖相关基因Dsg4，皮肤干燥相关基因AQP3、ST14，角质层堆积相关基因CaM；
红血丝相关基因包括：角质细胞增殖相关基因CaM，角蛋白相关基因DAG，毛细血管弹性蛋白相关基因LOX、BMP1，炎症因子相关基因IL-6、TNF-alpha。
前述基因位点库的构建方法为：通过SNPedia分析各基因表达的酶活性，确定与皮肤相关的基因位点，所有确定的基因位点构成与皮肤相关的基因位点库。
本发明构建的基因位点库将皮肤问题细分成各种小类，在对用户进行基因多态性检测后，能精准地确定引起皮肤问题的原因，为解决皮肤问题提供依据，实现真正的个性化美容。
前述基因位点库可以应用于皮肤个体化护理，精准确定引起皮肤问题的根本原因，具体的应用方法步骤包括：S1.采集用户的唾液样本；S2.提取样本中的mRNA，筛选出样品mRNA；S3.将样品mRNA纯化和片段化，然后逆转录成cDNA；S4.对cDNA进行末端修复、加接头，然后进行PCR扩增，得到PCR产物；S5.将PCR产物预处理，得到待测样品，然后上机测序；S6.根据测序结果，在皮肤相关基因位点库中搜索目标基因型，评分，判断皮肤状态。
本发明给出的评分标准适用于任何一次采用本发明提供的基因位点库及方法进行基因多态性检测后，对检测结果的评价。本发明中述及的皮肤是指用户的面部皮肤。
当基因位点库中的某个基因位点与多种导致皮肤问题的原因相关，且在不同原因下的评分不同时，采用高分计算。比如：NQO1在醌类化合物降解时的评分为100、50和1，在机体自由基清除相关基因时的评分为20、10和1，则用户的NQO1基因型以高评分计算。
当基因位点库中的某个基因位点与多种导致皮肤问题的原因相关，且在各原因下的评分相同时，需考虑该基因位点反映了样本用户是因为多种原因引起了皮肤问题，后续护肤产品的使用需要联合多种机理。
下面以具体的实例来进一步介绍本发明。
实施例1
通过SNPedia分析与皮肤相关的关键酶的活性，确定与皮肤相关的基因位点，所有确定的基因位点构成与皮肤相关的基因位点库。其中，与皮肤相关的关键酶包括与美白、防晒、皮肤弹性、抗氧化、抗糖化、保湿、抗痘、控油、毛孔和红血丝相关的关键酶；具体如下：
美白相关的关键酶包括TYR酶、TYRP1酶、OCA2酶、MC1R酶、SLC45A2酶、SLC24A5酶、SIRT1酶、RAB27A酶、MYO5A酶、CaM酶、SOD2酶、GPX1酶、KITLG酶和KIT酶。防晒相关的关键酶包括MCR1酶、XRCC1酶、ERCC2酶、TYR酶、IL-6酶、TNF-alpha酶、SLC45A2酶和STXBP5L酶。皮肤弹性相关的关键酶包括MMP1酶、MMP9酶、LOX酶、BMP1酶和PCOLCE2酶。抗氧化相关的关键酶包括NQO1酶、CAT酶、SOD1酶、SOD2酶、NFE2L2酶和GPX1酶。抗糖化相关的关键酶包括RAGE酶、SRAGE酶和AGER酶。保湿相关的关键酶包括AQP3酶、ST14酶、DAG酶和FLG酶。抗痘相关基因的关键酶包括BCMO1酶，SELL酶、DDB2酶、IL-6酶、TNF-alpha酶。控油相关的关键酶包括Dsg4酶、BCMO1酶、AQP3酶和ST14酶。毛孔相关的关键酶包括MCR1酶、XRCC1酶、ERCC2酶、MMP1酶、MMP9酶、LOX酶、BMP1酶、BCMO1酶、Dsg4酶、AQP3酶、ST14酶和CaM酶。红血丝相关的关键酶包括CaM酶、DAG酶、LOX酶、BMP1酶、IL-6酶和TNF-alpha酶。
上述酶相应的基因位点如下：
TYR的位点在rs1393350和rs1126809；TYRP1的位点在rs2733832；OCA2的位点在rs1800401和rs1800414；MC1R的位点在rs2228479和rs1805008；SLC45A2的位点在rs16891982和rs26722；SLC24A5的位点在rs1426654；SIRT1的位点在rs10997875；RAB27A的位点在rs2194437；MYO5A的位点在rs2222656；CaM的位点在rs5871和rs12885713；GPX1的位点在rs1050450和rs8179164；KITLG的位点在rs755383；KIT的位点在rs794726675；MCR1的位点在rs2228479和rs1805008；XRCC1的位点在rs25487；ERCC2的位点在rs13181；STXBP5L的位点在rs322458和rs11707293；IL-6的位点在rs1474347、rs1548216和rs1800795；TNF-alpha的位点在rs1800629和rs361525；LOX的位点在rs1050283和rs1050286；BMP1的位点在rs121917835；MMP1的位点在rs1799750和rs17576；MMP9的位点在rs11568818和rs1799750；PCOLCE2的位点在rs920466、rs2248811和rs2608069；NQO1的位点在rs1800566、rs1695和rs947895；CAT的位点在rs475043和rs480496；SOD1的位点在rs2234694和rs7277748；SOD2的位点在rs4880；NFE2L2的位点在rs35652124；所述RAGE的位点在rs1800624；所述SRAGE的位点在rs2070600；AGER的位点在rs1800624和rs1800625；AQP3的位点在rs17553719；ST14的位点在rs137852931；DAG的位点在rs4625和rs12583；FLG的位点在rs11103631和rs61816761；BCMO1的位点在rs7501331、rs119478057和rs12934922；SELL的位点在rs2229569和rs4987310；DDB2的位点在rs7531806和rs747650；Dsg4的位点在rs4799570和rs7234288。
以上基因位点共同构成了本发明所述的皮肤相关基因位点库。
实施例2
运用实施例1构建的皮肤相关基因位点库，进行用户皮肤状态检测。
S1.采集用户的唾液样本：在取样前30分钟，未进食或饮水，取样时以舌尖刮擦上颚刺激唾液腺分泌唾液，并将唾液与唾液保存液1:1比例混匀。
S2.提取样本中的总RNA，筛选出样品mRNA。唾液样本中的总RNA提取采用的是Omega试剂盒法。然后选择质量合格的RNA作为mRNA测序的建库起始样品mRNA，其通过Agilent 2100BioAnalyzer的检测结果为RIN≥7，28S和18S的RNA的比值等于1.5：1。采用QUBIT RNA ASSAY KIT对起始的样品mRNA进行准确定量，样品mRNA的起始量为0.1ug。
S3.将样品mRNA纯化和片段化，然后逆转录成cDNA。采用带有Oligod(T)的Beads对样品mRNA进行纯化。纯化后，对mRNA进行片段化，片段化的方法为配制反应体系A(见表1)，然后在PCR仪上运行程序1，将mRNA片段化到300～800bp的片段。
表1.
合成cDNA的第一条链：按照表2制备反应体系B，在PCR仪上运行程序2，即得。
表2.
合成cDNA的第二条链：按照表3配制反应体系C，然后在PCR仪上运行程序3，得到cDNA第二链产物，用144uL AMPure XP Beads对其进行纯化，然后用60μL Nuclease freewater进行重悬，取出55.5μL用于下一步的末端修复。
表3.
S4.对cDNA进行末端修复、加接头，然后进行PCR扩增，得到PCR产物。cDNA末端修复的方法为按照表4配制反应体系，然后在PCR仪上运行程序4，得到dA-tail cDNA。
表4.
加接头的方法为按照表5配制反应体系，在PCR仪上运行程序5和程序6，得到反应混合物。然后加入Nuclease-free Water至总体积为100uL，用100uLAMPure XP Beads对反应混合物进行纯化，再用52.5μL的Resuspension Buffer进行重悬，再次用50uL AMPure XPBeads纯化，最后用22μL的Resuspension Buffer进行重悬，取出20μL以备下一步使用。
表5.
PCR扩增：根据表6制备反应体系，然后在PCR仪上运行程序7，然后用45μL AMPureXP Beads对PCR产物进行纯化，最后用23μL的Resuspension Buffer进行重悬，取出20μL以备下一步使用。
表6.
S5.将PCR产物预处理，得到待测样品，然后上机测序。
采用QUBITDNAHSASSAYKIT对PCR产物进行准确定量。
(1)2100Bioanalyzer chip质控
用2100Bioanalyzer chip判断PCR切胶产物片段大小是否复合后续测序的要求，即片段大小需要在300～400bp。
(2)文库摩尔浓度准确定量
通过q-PCR标准品的摩尔浓度对构建的文库(PCR产物)进行摩尔浓度的绝对定量，以保证文库上机用量的准确性，采用Illumina推荐的KAPA定量试剂盒(Catno.KK4602)进行绝对定量操作。
根据文库的定量和定性结果，将其摩尔浓度调整到2nM，体积为10μL，置于-80℃保存。
PCR产物(文库)的变性和稀释，变性的步骤为：
准备新鲜配置的NaOH溶液，将其浓度调整到0.1N；取0.1N的NaOH(10μL)加入浓度2nM的PCR产物(10μL)的进行混合涡流，280rpm离心1min，室温放置5min，然后冰上放置，得到变性成单链DNA的文库。将20μL已经变性成单链DNA的文库加入到980μL预冷的HT1(Hybridizationbuffer)中，使文库的终浓度为20pM，冰上放置。
稀释方法如表7。
终浓度 10pM 12pM 15pM 18pM 20pM
20pM变性DNA 500μl 600μl 750μl 900μl 1000μl
预冷的HT1 500μl 400μl 250μl 100μl 0μl
表7.
PhiX的变性和稀释处理：Phix control的原始浓度为10nM，将2μL的Phix control与8μL的HT1混合，使Phix control稀释到2nM(10μL)的体系。
变性方法为：取0.1N的NaOH(10μL)与2nM的Phix control(10μL)的进行混合涡流，离心，室温放置5min，然后冰上放置，得到变性成单链DNA的Phix control。将20μL已经变性成单链DNA的Phix control加入到980μL预冷的HT1(Hybridizationbuffer)中，使Phixcontrol的终浓度为20pM，冰上放置。然后将20pM的Phix control(600μL)+HT1(400μL)，得到浓度5pM的Phix control。
将5pM的Phix control与变性处理后的浓度为20pM的文库混合，得到待测样品，准备上机测序。测序步骤如下：
取已经变性并加了标样Phix的混合待测样品120uL，加入8连管中的某一管内，然后置于冰上待用。打开cBot仪器，用自带清洗程序进行预清洗，选择运行程序，按照仪器说明安装反应试剂，安装测序芯片flow cell，导液管和装有8连管的测序模板管。
运行自检并开始反应程序，运行3h，反应完成后cBot保持芯片温度在20℃直到取出芯片。
根据不同的测序类型以及测序长度，选择正确的Recipe，平均完成1个碱基的测序大概需要9分钟，所以测序周期不测序的长度直接相关。测序程序正式运行前，首先根据First Base Report判断每条Lane上A，T，C，G碱基信号是否正常，从而判断测序引物结合是否有问题；其次根据First Base Report中cluster数量估测生成的数据量是否满足测序实验要求。
具体操作为：仪器准备，保证电脑磁盘空间在500GB以上，对HiSeq2500进行VolumeCheck，选择Rapid Run Mode/RAPID RUN模式，使用去离子水和旧的Flow cell并将flowcell对应的废液导管插入15ml离心管，运行结束后离心管中体积应当是9.5ml±10％。
输入运行参数：Flow Cell Setup中选择Flow Cell Type为HiSeq Rapid FlowCell v1，勾选Confirm First Base，勾选加了Phix的泳道。在Recipe界面下选择SingleIndex，Read1所需循环数126，read2运行循环数126。在Sample Sheet界面下选择TemplateHybridization on cBot。在Reagent界面下扫描试剂kit上的条形码输入试剂的参数。装载测序试剂，分别有SBS试剂和Paired-end试剂。安装芯片并开始测序。
S6.根据测序结果，在皮肤相关基因位点库中搜索目标基因型，评分，判断皮肤状态。
美白相关基因包括：
与酪氨酸酶活性过高相关的基因包括TYR、TYRP1和OCA2，其评分标准如下：
rs1393350：酶活性AA＞AG＞GG，评分为20、10、1
rs1126809：酶活性AA＞AG＞GG，评分为20、10、1
rs2733832：酶活性CC＞CT＞TT，评分为20、10、1
rs1800401：酶活性GG＞AG＞AA，评分为20、10、1
rs1800414：酶活性CC＞CT＞TT，评分为20、10、1
与黑色素合成相关的基因包括MC1R，评分标准为：
rs2228479：AA＞AG＞GG评分为50、25、1
rs1805008：TT＞CT＞CC评分为50、25、1
与黑素体成熟相关的基因包括SLC45A2和SLC24A5，评分标准如下：
rs16891982：GG＞GC＞CC评分为50、25、1
rs26722：CC＞CT＞TT评分为50、25、1
rs1426654：AA＞AG＞GG评分为33、16.5、1
本实施例中提供唾液样本的用户的基因检测结果为：TYR基因在rs1393350位点为AA型，TYRP1基因在rs2733832位点为CC型，OCA2基因在rs1800401位点为AG型，在rs1800414位点为CC型，MC1R基因在rs1805008位点为CT型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(70分)的为酪氨酸酶活性过高相关的基因位点，可判断该用户存在由于酪氨酸酶活性过高导致的黑色素沉积，皮肤偏黑。在此指导下，该用户针对性的使用抑制酪氨酸酶活性的美白产品，效果非常明显。
实施例3
本实施例涉及的用户共8位，对采集得到的样本编号1-8，然后采用实施例2相同的步骤对各样本进行处理，不同之处在于：
步骤S1中唾液与唾液保存液是按照1:1.2比例混匀。步骤S2中建库起始样品mRNA通过Agilent 2100BioAnalyzer检测结果为RIN＝8，28S和18S的RNA的比值等于2：1，样品mRNA的起始量为1ug。步骤S5中，在对文库摩尔浓度准确定量后，需要将每个文库的摩尔浓度均调整到2nM，然后根据实验设计选择性的将需要混合的文库进行等量等浓度混合，保证混合后的文库浓度也是2nM，且体积超过10μL，置于-80℃保存。此外，在测序过程中需在8连管上编号，取已经变性并加了标样Phix的混合待测样品120uL，依次加入8连管，每管加入一个文库，避免交叉污染。其余步骤同实施例2。
评分标准如下：
美白相关基因包括：
与黑色素代谢相关的基因包括SIRT1、RAB27A和MYO5A，评分标准为：
rs10997875：TT＞CT＞CC评分为33、16.5、1
rs2194437：TT＞GT＞GG评分为33、16.5、1
rs2222656：GG＞AG＞AA评分为33、16.5、1
与角质层分化相关基因CaM，评分标准为：
rs5871：TT CT CC评分为33、16.5、1
rs12885713：TT CT CC评分为33、16.5、1
与黑色素氧化相关基因包括SOD2和GPX1，评分标准为：
rs4880：GG＞AG＞AA评分为33 16.5 1
rs1050450：TT＞CT＞CC评分为33 16.5 1
rs8179164：TT＞AT＞AA评分为33 16.5 1
与黑色素细胞增殖相关基因包括KITLG和KIT；评分标准为：
rs755383：TT＞CT＞CC评分为50 25 1
rs794726675：TT＞AT＞AA评分为50 25 1
防晒相关基因包括：
与抗紫外线相关基因包括MCR1、XRCC1和ERCC2，评分标准为：
与光保护修复相关基因包括TYR、IL-6和TNF-alpha，评分标准为：
与光保护相关基因包括SLC45A2和STXBP5L，评分标准为：
皮肤弹性相关基因包括：
与胶原蛋白分解相关基因包括MMP1和MMP9，评分标准为：
与胶原蛋白生成相关基因包括LOX和BMP1，评分标准为：
与胶原蛋白保护相关基因PCOLCE2，评分标准为：
抗氧化相关基因包括：
与机体清除自由基功能相关基因包括NQO1和CAT，评分标准为：
与机体自由基生成能力相关基因包括SOD1、SOD2和NFE2L2，评分标准为：
与过氧化氢分解相关基因GPX1，评分标准为：
与醌类化合物降解相关基因NQO1，评分标准为：
rs1800566 GG AG AA评分为100 50 1
根据上述评分标准，本实施例中8个样本的基因检测结果为：
样本1：SIRT1基因在rs10997875位点为CT型，MYO5A基因在rs2222656位点为GG型，CaM基因在rs12885713位点为CT型，KITLG基因在rs755383位点为TT型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(50分)的为黑色素细胞增殖相关基因，判断该用户存在由于黑色素细胞增殖导致的黑色素沉积，皮肤偏黑。该用户的皮肤确实偏黑。在此指导下，该用户针对性的使用抑制黑色素细胞增殖的美白产品，效果非常明显。
样本2：SIRT1基因在rs10997875位点为TT型，RAB27A基因在rs2194437位点为GT型，GPX1基因在rs8179164位点为TT型，MCR1基因在rs2228479位点为AA型、在rs1805008位点为TT型，XRCC1基因在rs25487位点为GG型，ERCC2基因在rs13181位点为GG型，IL-6基因在rs1474347位点为TT型，STXBP5L基因在rs322458位点为AG型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(80分)的为抗紫外线相关基因，判断该用户存在由于抗紫外线能力差导致的易晒黑、易晒伤的皮肤问题，与真实情况相符合。在此指导下，该用户针对性的使用提高抗紫外线能力的防晒产品，效果非常明显。
样本3：KITLG基因在rs755383位点为TT型和KIT基因在rs794726675位点为TT型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(100分)的为黑色素细胞增殖相关基因，判断该用户存在由于黑色素细胞增殖导致的黑色素沉积，皮肤偏黑。该用户确实皮肤偏黑，在此指导下，该用户针对性的使用抑制黑色素细胞增殖的美白产品，效果非常明显。
样本4：SIRT1基因在rs10997875位点为CT型，RAB27A基因在rs2194437位点为TT型，GPX1基因在rs8179164位点为AT型，MCR1基因在rs2228479位点为AA型、在rs1805008位点为CT型，XRCC1基因在rs25487位点为AG型，ERCC2基因在rs13181位点为TT型，IL-6基因在rs1474347位点为GT型，PCOLCE2基因在rs920466位点为GG型、在rs2248811位点为GG型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(100分)的为胶原蛋白保护相关基因，判断该用户存在由于胶原蛋白保护能力差导致的皮肤弹性差。在此指导下，该用户针对性的使用提高胶原蛋白保护能力的产品，皮肤弹性明显变好。
样本5：MMP1基因在rs1799750位点为GG型，PCOLCE2基因在rs920466位点为AG型，NQO1基因在rs1800566位点为GG型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(100分)的为醌类化合物降解相关基因，判断该用户存在由于醌类化合物降解难导致的皮肤抗氧化能力差、有衰老问题。在此指导下，该用户针对性的使用促进醌类化合物降解的产品，显著提高抗氧化能力，皮肤衰老变慢。
样本6：SLC45A2基因在rs16891982位点为GC型，TNF-alpha基因在rs1800629位点为AA型，LOX基因在rs1050283位点为CC型、在rs1050286位点为GG型，BMP1基因在rs121917835位点为GG型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(150分)的为LOX和BMP1，对毛细血管弹性蛋白影响最大(皮肤表现为红血丝)，其次是影响胶原蛋白生成，判断该用户存在红血丝，以及由于胶原蛋白生成困难导致的皮肤弹性差。在此指导下，该用户针对性的使用护肤产品，显著提高皮肤弹性，并且红血丝也消失了。
样本7：ERCC2基因在rs13181位点为GG型，SOD2在rs4880位点为AG型，SIRT1在rs10997875位点为TT型，RAB27A基因在rs2194437位点为TT型，MYO5A基因在rs2222656位点为GG型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(99分)的为黑色素代谢相关基因，判断该用户存在由于黑色素代谢问题导致的黑色素沉积，皮肤黑。在此指导下，该用户针对性的使用促进黑色素代谢的产品，皮肤明显变白。
样本8：SIRT1在rs10997875位点为CC型，RAB27A基因在rs2194437位点为GT型，MYO5A基因在rs2222656位点为AG型，NQO1基因在rs1800566位点为GG型，其他基因位点上的基因型均正常，故其评分最高(100分)的为醌类化合物降解相关基因，判断该用户存在由于醌类化合物降解难导致的皮肤抗氧化能力差、有衰老问题。在此指导下，该用户针对性的使用促进醌类化合物降解的产品，显著提高抗氧化能力，皮肤衰老变慢。
实施例4
本实施例与实施例3的区别在于，共测试了5位用户提供的唾液样本，编号1-5；步骤S1中唾液与唾液保存液是按照1:1比例混匀。步骤S2中建库起始样品mRNA通过Agilent2100BioAnalyzer检测结果为RIN＝7，28S和18S的RNA的比值等于1.6：1，样品mRNA的起始量为0.5ug。其余同实施例3。
评分标准如下：
抗糖化相关基因包括：
与糖基化末端产物生成相关基因包括RAGE和SRAGE，评分标准为：
与糖基化末端产物代谢相关基因AGER，评分标准为：
保湿相关基因包括：
与角质层水分流失相关基因AQP3，评分标准为：
rs17553719 GG AG AA评分为50 25 1
与角质层水合度相关基因ST14，评分标准为：
rs137852931 AA AC CC评分为50 25 1
与角蛋白生成相关基因DAG，评分标准为：
与皮肤天然保湿因子生成相关基因FLG，评分标准为：
rs11103631 GG AG AA评分为100 50 1
抗痘相关基因包括：
与皮脂腺分泌相关基因BCMO1，评分标准为：
与微生物易感相关基因包括SELL和DDB2，评分标准为：
与炎症因子分泌相关基因包括IL-6和TNF-alpha，评分标准为：
控油相关基因包括：
与皮脂腺增殖相关基因Dsg4，评分标准为：
与油脂分泌过多相关基因BCMO1，评分标准为：
与皮肤干燥相关基因包括AQP3和ST14，评分标准为：
毛孔相关基因包括：
与光老化相关基因包括MCR1、XRCC1和ERCC2，评分标准为：
与胶原蛋白分解相关基因MMP1、MMP9，评分标准为：
与胶原蛋白生成相关基因LOX和BMP1，评分标准为：
与油脂分泌相关基因BCMO1，评分标准为：
与脂细胞增殖相关基因Dsg4，评分标准为：
与皮肤干燥相关基因包括AQP3、ST14，评分标准为：
与角质层堆积相关基因CaM，评分标准为：
红血丝相关基因包括：
与角质细胞增殖相关基因CaM，评分标准为：
与角蛋白相关基因DAG，评分标准为：
与毛细血管弹性蛋白相关基因LOX、BMP1，评分标准为：
与炎症因子相关基因IL-6、TNF-alpha，评分标准为：
根据上述评分标准，本实施例中8个样本的基因检测结果为：
样本1：角质层水分流失相关基因AQP3在rs17553719位点为AG型，角蛋白生成相关基因DAG在rs4625位点为AA型、在rs12583位点为CC型，最高总评分200分，存在由角蛋白生成引起的皮肤干燥问题。该用户确实存在皮肤干燥缺水的问题。在此指导下，用户针对性地使用护肤产品，皮肤变得更加水润。
样本2：微生物易感相关基因SELL在rs2229569位点为AG，皮脂腺分泌相关基因BCMO1在rs7501331位点为CC、在rs119478057位点为AA、在rs12934922位点为TT，最高总评分99分，存在因皮脂腺分泌引起的痤疮(痘痘)、油脂过多，以及毛孔粗大的皮肤问题。该用户确实存在皮肤油腻、毛孔粗大，长痘痘的问题。此指导下，针对性使用作用于BCMO1基因的护肤产品，用户的毛孔变小，面部不再油腻，痘痘也消失了。
样本3：CAM基因在rs5871位点为TT型、在rs12885713位点为TT型，最高评分为100分，该基因导致角质层堆积，用户存在毛孔粗大问题，同时该基因也会影响角质细胞增殖，导致红血丝；影响角质层分化、导致黑色素沉积。基因检测结果的判断与该用户的真实皮肤状态相符合。
样本4：SOD2基因在rs4880位点为GG型，评分为33分，影响黑色素氧化，判断该用户存在黑色素沉积，皮肤偏黑。该判断结果与用户的真实皮肤状态相符合。
样本5：SOD1基因在rs2234694位点为CC型、在rs7277748位点为GG型，NFE2L2基因在rs35652124位点为GG型，总评分为75分，这些位点均与机体的自由基生成相关，判断用户的皮肤抗氧化能力差、易衰老。该判断结果与用户的真实皮肤状态相符合。
实施例5
本实施例与实施例3的区别在于，本实施例测试了3位用户提供的唾液样本，编号1-3。步骤S1中唾液与唾液保存液是按照1:1.1比例混匀。步骤S2中建库起始样品mRNA通过Agilent 2100BioAnalyzer检测结果为RIN＝9，28S和18S的RNA的比值等于1.5：1，样品mRNA的起始量为0.8ug。其余同实施例3。
根据上述评分标准，本实施例中3个样本的基因检测结果为：
样本1：FLG基因在rs11103631位点为GG型，总评分100分，判断用户存在因天然保湿因子生成困难导致的皮肤干燥，与真实情况相符合。在该指导下，用户针对性地使用补水保湿产品，皮肤明显变得水润。
样本2：SELL基因在rs2229569位点为GG型、在rs4987310位点为AG型，DDB2基因在rs7531806位点为AA型、在rs747650位点为GG型，总评分为87.5分，判断该用户的皮肤存在容易感染微生物的问题，容易长痘痘，与用户的真实情况相符合。
样本3：Dsg4基因在rs4799570位点为CC型、在rs7234288位点为GG型，总评分100分；该基因与脂细胞增殖相关、与皮脂腺增殖相关，判断用户存在皮肤油脂多、毛孔大的问题，与用户的皮肤真实情况相符合。
综上，运用本发明构建的皮肤相关基因位点数据库能够精准判断引起皮肤问题的根本原因，为后续的产品应用和设计提供指导。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种皮肤相关基因位点库，其特征在于，所述基因位点库包括：
美白相关基因TYR、TYRP1、OCA2、MC1R、SLC45A2、SLC24A5、SIRT1、RAB27A、MYO5A、CaM、SOD2、GPX1、KITLG和KIT；
防晒相关基因MCR1、XRCC1、ERCC2、TYR、IL-6、TNF-alpha、SLC45A2和STXBP5L；
皮肤弹性相关基因MMP1、MMP9、LOX、BMP1和PCOLCE2；
抗氧化相关基因NQO1、CAT、SOD1、SOD2、NFE2L2和GPX1；
抗糖化相关基因RAGE、SRAGE和AGER；
保湿相关基因AQP3、ST14、DAG和FLG；
抗痘相关基因BCMO1，SELL、DDB2、IL-6、TNF-alpha；
控油相关基因Dsg4、BCMO1、AQP3和ST14；
毛孔相关基因MCR1、XRCC1、ERCC2、MMP1、MMP9、LOX、BMP1、BCMO1、Dsg4、AQP3、ST14和CaM；
红血丝相关基因CaM、DAG、LOX、BMP1、IL-6和TNF-alpha。
2.根据权利要求1所述的基因位点库，其特征在于，所述TYR的位点在rs1393350和rs1126809；所述TYRP1的位点在rs2733832；所述OCA2的位点在rs1800401和rs1800414；所述MC1R的位点在rs2228479和rs1805008；所述SLC45A2的位点在rs16891982和rs26722；所述SLC24A5的位点在rs1426654；所述SIRT1的位点在rs10997875；所述RAB27A的位点在rs2194437；所述MYO5A的位点在rs2222656；所述CaM的位点在rs5871和rs12885713；所述GPX1的位点在rs1050450和rs8179164；所述KITLG的位点在rs755383；所述KIT的位点在rs794726675；所述MCR1的位点在rs2228479和rs1805008；所述XRCC1的位点在rs25487；所述ERCC2的位点在rs13181；所述STXBP5L的位点在rs322458和rs11707293；所述IL-6的位点在rs1474347、rs1548216和rs1800795；所述TNF-alpha的位点在rs1800629和rs361525；所述LOX的位点在rs1050283和rs1050286；所述BMP1的位点在rs121917835；所述MMP1的位点在rs1799750和rs17576；所述MMP9的位点在rs11568818和rs1799750；所述PCOLCE2的位点在rs920466、rs2248811和rs2608069；所述NQO1的位点在rs1800566、rs1695和rs947895；所述CAT的位点在rs475043和rs480496；所述SOD1的位点在rs2234694和rs7277748；所述SOD2的位点在rs4880；所述NFE2L2的位点在rs35652124；所述RAGE的位点在rs1800624；所述SRAGE的位点在rs2070600；所述AGER的位点在rs1800624和rs1800625；所述AQP3的位点在rs17553719；所述ST14的位点在rs137852931；所述DAG的位点在rs4625和rs12583；所述FLG的位点在rs11103631和rs61816761；所述BCMO1的位点在rs7501331、rs119478057和rs12934922；所述SELL的位点在rs2229569和rs4987310；所述DDB2的位点在rs7531806和rs747650；所述Dsg4的位点在rs4799570和rs7234288。
3.根据权利要求1或2所述的基因位点库的构建方法，其特征在于，所述基因位点库的构建方法为：确定与皮肤相关的关键酶，在SNPedia中输入关键酶的名称，查找到与皮肤相关的基因位点，构成基因位点库。
4.根据权利要求3所述的基因位点库的的构建方法，其特征在于，所述关键酶包括与美白、防晒、皮肤弹性、抗氧化、抗糖化、保湿、抗痘、控油、毛孔和红血丝相关的关键酶。
5.根据权利要求4所述的基因位点库的的构建方法，其特征在于，美白相关的关键酶包括TYR酶、TYRP1酶、OCA2酶、MC1R酶、SLC45A2酶、SLC24A5酶、SIRT1酶、RAB27A酶、MYO5A酶、CaM酶、SOD2酶、GPX1酶、KITLG酶和KIT酶；防晒相关的关键酶包括MCR1酶、XRCC1酶、ERCC2酶、TYR酶、IL-6酶、TNF-alpha酶、SLC45A2酶和STXBP5L酶；皮肤弹性相关的关键酶包括MMP1酶、MMP9酶、LOX酶、BMP1酶和PCOLCE2酶；抗氧化相关的关键酶包括NQO1酶、CAT酶、SOD1酶、SOD2酶、NFE2L2酶和GPX1酶；抗糖化相关的关键酶包括RAGE酶、SRAGE酶和AGER酶；保湿相关的关键酶包括AQP3酶、ST14酶、DAG酶和FLG酶；抗痘相关基因的关键酶包括BCMO1酶，SELL酶、DDB2酶、IL-6酶、TNF-alpha酶；控油相关的关键酶包括Dsg4酶、BCMO1酶、AQP3酶和ST14酶；毛孔相关的关键酶包括MCR1酶、XRCC1酶、ERCC2酶、MMP1酶、MMP9酶、LOX酶、BMP1酶、BCMO1酶、Dsg4酶、AQP3酶、ST14酶和CaM酶；红血丝相关的关键酶包括CaM酶、DAG酶、LOX酶、BMP1酶、IL-6酶和TNF-alpha酶。
6.权利要求1或2所述的皮肤相关基因位点库在皮肤个体化护理中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
S1.采集样本；
S2.提取样本中的总RNA，筛选出样品mRNA；
S3.将样品mRNA纯化和片段化，然后逆转录成cDNA；
S4.对cDNA进行末端修复、加接头，然后进行PCR扩增，得到PCR产物；
S5.将PCR产物预处理，得到待测样品，然后上机测序；
S6.根据测序结果，在皮肤相关基因位点库中搜索目标基因型，评分，判断皮肤状态。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，还包括至少一种以下技术特征：
步骤S1所述的样本为用户的唾液样本；
步骤S2所述样品mRNA通过Agilent 2100 BioAnalyzer检测结果为RIN≥7；
步骤S3中将样品mRNA片段化的方法为配制反应体系A，然后在PCR仪上运行程序1；
步骤S3中逆转录成cDNA的过程包括：配制反应体系B，然后在PCR仪上运行程序2，
合成cDNA的第一条链，再配制反应体系C，然后在PCR仪上运行程序3，合成cDNA的第二条链，即得cDNA。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述程序1的条件为94℃、15min，然后4℃保存；程序2的条件为25℃、10min，42℃、50min，70℃、15min，然后4℃保存；程序3的条件为16℃、1小时。
10.根据权利要求7-9任一项所述的应用，其特征在于，步骤S5所述的PCR产物预处理方法为准确定量，然后将其变性、稀释，再加入经变性、稀释处理的PhiX，得到待测样品。
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