CN110004222A - 一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 - Google Patents
一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110004222A CN110004222A CN201910344457.7A CN201910344457A CN110004222A CN 110004222 A CN110004222 A CN 110004222A CN 201910344457 A CN201910344457 A CN 201910344457A CN 110004222 A CN110004222 A CN 110004222A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antipsychotics
- gene
- pcr
- site
- detection kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法。本发明采用多重PCR结合片段长短/质量分析方法，同步快速定性检测与抗精神病药物代谢、转运、靶点作用相关的CYP2D6、MC4R、CYP1A2、CYP3A5、EPM2A、和SLC6A2等6个基因上7个单核苷酸多态性(SNP)位点。检测步骤：(1)采集口腔脱落细胞保存于细胞采集卡，或采集血液样本并提取核酸；(2)采用步骤1所述细胞采集卡或核酸为模板进行多重PCR扩增；(3)按PCR产物片段长短/质量同步分离7个SNP位点、3个人类DNA内参基因及1个PCR反应内参的PCR产物；(4)结果分析判读。本发明的优势是快速、灵敏度高、重复性好、特异性强、通量高、成本低。
Description
技术领域
本发明涉及一种多重基因检测试剂盒，具体涉及一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法。
背景技术
随着我国社会经济的快速发展和竞争压力的不断加大，精神疾病发病率逐年提高。我国精神疾病患病率约为17％。精神分裂症 (schizophrenia)是最严重的精神疾病之一，世界各地人群中的发病率约为1％。精神分裂症具有多种复杂临床表现，以基本个性改变，思维、情感、行为之间不协调，精神活动与现实脱离为主要特征。精神分裂症不仅给患者本人及其家属带来极大的痛苦，而且也给家庭、医疗系统以及整个社会带来沉重的经济负担。
精神分裂症的发病机制与脑内多巴胺(dopamine，DA)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)功能增强有关。目前抗精神病药物(antipsychotic agents)是治疗精神分裂症最主要的治疗手段，但是抗精神病药物的疗效存在巨大的个体差异。药物基因组研究显示，药物个体差异大的最主要原因是患者的基因多态性。在神经递质系统中有大范围的药物靶点，编码这些蛋白的DNA多态性可以改变神经递质和酶的功能与表达水平，以及药物受体和转运体的结合特点，从而使不同个体对药物的反应存在差异。
人类基因组80％以上基因多态性都是单核苷酸多态性(Single Nucleotidepolymorphism，SNP)。SNP指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，包括碱基转换、颠换、缺失和插入。大部分抗精神病药物都经CYP2D6代谢。CYP2D6基因SNP位点发生突变可使酶活性发生变化，导致药物前体或中间活性产物浓度过高或过低，从而使患者疗效不佳，甚至发生严重毒副反应。与药物转运和药物靶点作用相关的SNP位点发生突变也对药物反应有重要影响。目前，神经精神药理学药物监测治疗共识指南(2017)和pharmGKB数据库已公布了部分抗精神病药物的代谢、转运和靶点基因。通过对药物代谢、转运和靶点相关的SNP位点进行检测，可判断患者对不同药物的反应，为患者量身定制一套用药方案，提高治疗效率，减轻患者医疗负担和痛苦，节省大量医院及社会资源(见表1)。
表1抗精神病药物用药相关基因
目前市场上，SNP分型检测技术主要有三种：测序法、荧光定量 PCR法、基因芯片法。
(1)荧光定量PCR法
荧光定量PCR采用荧光淬灭及双末端标记技术，针对SNP位点设计特异性的探针，具有灵敏度高、准确性高和特异性高等优势。但荧光定量PCR通量低，若要同时检测多个个SNP位点，需要分管检测，操作复杂，样品用量大，难以适应临床需求。此外，荧光定量 PCR难以设置内参质控，无法避免假阳性和假阴性。
(2)基因芯片法
基因芯片是通过微加工技术，将数以万计的特定序列的DNA片段(基因探针)有规律地排列固定于硅片、玻片等支持物上，构成的一个二维DNA探针阵列利用这类芯片与标记的生物样品进行杂交，可对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。其优点是通量高、操作简便；缺点是检测成本昂贵、重复性差、灵敏度较低。芯片的种类较多，难以制定一个统一的质量控制标准也限制了基因芯片技术的普及。
(3)测序法
Sanger测序法是SNP分型金标准，不仅能检测已知SNP，也能发现未知SNP。但Sanger测序法操作复杂，成本较高。当测序位点较多时需要逐个位点测序，耗时长，累计价格相对昂贵。二代测序技术实现了边合成边测序，具有高通量、高效率的优势，然而二代测序平台价格昂贵、普及度低，作为SNP检测技术在临床上的应用还不够成熟。
由于与抗精神病药物用药指导相关的基因SNP数量较多，以上技术均具有明显局限性，因此很难应用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测。
目前，国内尚无有关以多重PCR和CE分离技术为基础的抗精神病药物用药指导的多重基因检测方案的报道。
发明内容
本发明提供了一种快速、灵敏度高、重复性好、准确性高、特异性强、通量高、成本低的抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法。其特征在于，使用多重PCR结合片段长短/质量分析方法，在一个反应管中同步快速定性检测与抗精神病药物用药相关的7个单核苷酸多态性(SNP)位点。本试剂盒在检测上述7个SNP 位点的PCR反应系统中加入了3个人基因组DNA(huDNA)内参和 1个PCR反应内参(如表2所示)，同步进行PCR扩增，用于监测核酸提取及PCR反应过程，可避免假阴性和假阳性。
表2抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒检测位点和引物
本试剂盒包括以下组分：引物组合物Sch Primer Mix、PCR反应液和阳性对照品、超纯水。阳性对照品，内含上述7个SNP位点和内参基因所对应的质粒混合物，用于SNP检测系统测试及每次引物订购后的质量控制。PCR反应液包括以下组分：超纯水、2×PCR缓冲液、DNA聚合酶、dNTP。
使用本试剂盒检测步骤如下：
(1)采集口腔脱落细胞保存于细胞采集卡，或采集血液样本并提取核酸。其中，保存于细胞采集卡上的口腔脱落细胞，可不需进行核酸提取，直接用于PCR扩增，节省了核酸提取的时间；
(2)以细胞采集卡或提取的核酸为模板进行多重PCR扩增。PCR 反应条件为：95℃5min；94℃10s，61℃1min；70℃30s，循环 29次；60℃，3min；4℃直至收取PCR产物；
(3)按PCR产物片段长短/质量同步分离7个SNP位点及4个内参。本发明采用毛细电泳分离PCR产物：在96孔样品板中配制电泳样品，取高纯甲酰胺8.7μL，标准品SIZE-5000.3μL，PCR产物1 μL，混匀离心。将配制好的电泳样品置于3500基因分析仪中，按操作说明进行毛细电泳；
(4)根据所设计的每个检测位点的片段长度进行结果分析。
根据检测峰图，可获得每个SNP位点的基因型，结合各个基因对应的临床参考信息(表3.1～3.6)，判断患者对各种抗精神病药物的反应，从而指导抗精神病药物的个性化使用。
表3.1 CYP2D6基因对应的临床参考信息
a.*5位点的突变类型为基因缺失突变。DW代表至少一条染色体未发生缺失突变；DD代表两条染色体都发生缺失突变。
表3.2 CYP1A2基因对应的临床参考信息
表3.3 CYP3A5基因对应的临床参考信息
表3.4 EPM2A基因对应的临床参考信息
表3.5 MC4R基因对应的临床参考信息
表3.6 SLC6A2基因对应的临床参考信息
与现有技术相比，本发明具有以下优势：
本发明基于3500基因分析仪创立了一种用同步检测与抗精神病药物用药相关的4个基因上7个SNP位点的检测方案；特异性和准确度可达到qPCR水平；可在短时间内(2.5小时)同时完成多个样品7个SNP位点的检测；DNA内参和反应内参的使用可监测DNA 提取及PCR反应的效率，避免了假阴性和假阳性。
综上所述，本发明提供了一种同步检测与抗精神病药物用药相关的4个基因上7个SNP位点的检测方案，具有快速、灵敏度高、重复性好、特异性强、通量高、成本低等优势。
附图说明
图1一个精神分裂症患者的口腔脱落细胞采集卡样本(未经核酸提取，直接进行PCR)的检测结果；
图2为一个精神分裂症患者的全血样本的检测结果。
具体实施方式
为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体实施例和附图作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于对本发明进一步说明，而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明的内容后，该领域的技术人员对本发明作出一些非本质的改动或调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1和2所述引物组合物Sch Primer Mix为表2所述用于扩增7 个SNP位点的各3条引物和4个内参基因的各2条引物：SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.29。
实施例1和2所述PCR反应液包括以下组分：超纯水、2×PCR缓冲液、DNA聚合酶和dNTP。
实施例1和2所述阳性对照品Sch POS为表2所述内含7个SNP位点和4个内参基因所对应的质粒混合物。
实施例1
本实施例采集一个精神分裂症患者的口腔脱落细胞，以口腔脱落细胞采集卡为模板直接进行多重PCR反应，最终用毛细电泳方法分离样品，具体步骤如下：
1.生产用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒，包括以下组分：
1)引物组合物Sch Primer Mix；
2)PCR反应液；
3)阳性对照品Sch POS；
4)超纯水。
2.采集样本
使用口腔拭子采集一个精神病症患者的的口腔脱落细胞，保存于细胞采集卡上。
3.以细胞采集卡为模板进行PCR反应
1)按表4在96孔样品板/PCR八联管中加入试剂和样品。
表4 PCR反应体系
2)将配制好的PCR体系混匀离心，按表5的程序进行PCR反应：
表5 PCR扩增程序
| 步骤 | 程序 | 时间 |
| 1 | 95℃ | 5min |
| 2 | 94℃ | 10s |
| 3 | 61℃ | 1min |
| 4 | 70℃ | 30s |
| 5 | N/A | 重复2～4步骤29次 |
| 6 | 60℃ | 3min |
| 7 | 4℃ | 持续直至收取PCR产物 |
4.毛细电泳分离样品
1)制备电泳样品
按表6在96孔样品板中配制电泳样品。
2)毛细电泳分离样品
将样品板置于3500DX基因分析仪中，选择“fragment”电泳方法，进行电泳，详见ABI3500操作说明书。
表6电泳样品配制
| 试剂 | 量(μL)/孔 |
| Hi-Di | 8.7 |
| SIZE-500 | 0.3 |
| PCR产物 | 1 |
| Total | 10 |
5.结果分析
根据各特征峰出现的位置和数量，确定基因型，从而判断患者对各种抗精神病药物的反应，给出用药指导。图1为一个精神分裂症患者的口腔脱落细胞采集卡样本检测峰图，表7为该患者的基因型结果，表8为该患者的用药指导。
如图1所示，横坐标为PCR片段大小，纵坐标为荧光信号强度，根据特征峰的位置即可获得各位点的基因型。该患者CYP3A5基因 rs776746位点的基因型为AG；CYP1A2基因rs762551位点的基因型为 AC；MC4R基因rs489693位点的基因型为AC；CYP2D6*5位点的基因型为DW；EPM2A基因rs1415744位点的基因型为CC；SLC6A2基因 rs5569位点的基因型为GG；CYP2D6*10位点的基因型为TT。其中 CYP2D6*10位点和CYP1A2基因rs762551位点的基因型影响药物治疗效果，需调整用药方案。其他基因位点不影响药物治疗效果，可按照推荐剂量服药(详见表7和表8)。
表7一个精神分裂症患者口腔脱落细胞采集卡样本的检测结果
表8一个精神分裂症患者的抗精神病药物用药指导
实施例2
本实施例采集一个精神分裂症患者全血样本并提取核酸，以提取的核酸为模板进行多重PCR反应，最终用毛细电泳方法分离样品，具体步骤如下：
1.生产用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒，试剂盒组分如实施例1所述。
2.采集样本
采集一个精神分裂症患者的全血样本并提取核酸。
3.以提取的核酸为模板进行PCR反应
1)按表9在96孔样品板/PCR八联管上加入试剂和样品。
表9 PCR反应体系
| 试剂 | 量(μL)/孔 |
| PCR反应液 | 14 |
| 引物组合物 | 2 |
| 核酸 | 2 |
| 水 | 2 |
| Total | 20 |
2)将配制好的PCR体系混匀离心，进行PCR反应，PCR程序如实施例1所述。
3)毛细电泳分离样品，操作步骤如实施例1所述。
4.结果分析
根据各特征峰出现的位置和数量，确定基因型，从而判断患者对各种抗精神病的反应，给出用药指导。图2为一个人类的全血样本检测峰图，表10为该患者的基因型结果，表11为该患者的用药指导。
如图2所示，横坐标为PCR片段大小，纵坐标为荧光信号强度，根据特征峰的位置即可获得各位点的基因型。该患者CYP3A5基因 rs776746位点的基因型为AG；CYP1A2基因rs762551位点的基因型为 CC；MC4R基因rs489693位点的基因型为CC；CYP2D6*5位点的基因型为DW；CYP2D6*10位点的基因型为CT；EPM2A基因rs1415744位点的基因型为CC；SLC6A2基因rs5569位点的基因型为GG；其中 CYP1A2基因rs762551位点的基因型影响药物治疗效果，需调整用药方案。其他基因位点不影响药物治疗效果，可按推荐剂量服药(详见表10、表11)。
表10一个精神病症患者的基因检测结果
表11一个精神病症患者的抗精神病药物用药指导
本发明采用的SNP检测方法基于多重PCR和毛细管电泳(CE)分离技术。在同一个反应管中同时加入多对特异性基因扩增引物及内参引物，获得大小不一的基因扩增片段，使用毛细管电泳进行分离，进而分析SNP基因型。本发明所采用的检测方法和试剂盒能快速有效地检测多个SNP位点，克服了传统方法存在的缺陷，具有以下优势：
1、高通量：能实现同步检测多达7个SNP位点。
2、准确性高：采用CE技术对PCR产物进行分离，可将非特异性扩增产物、引物二聚体和特异性扩增产物分离，最大程度降低假阳性。
3、灵敏度高：本系统能检测含量低至1ng/反应的DNA样品，具有超高灵敏度。
4、方法简便，使用经济：本发明提供试剂、多重PCR引物设计、结果分析等全套实验方案；检测成本低，利于大规模推广。
上述说明并非对发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在发明的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
序列表
<110> 宁波海尔施基因科技有限公司
<120> 一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法
<130> 2019-03-01
<160> 29
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 1
ggtccaaaca gggaagagac at 22
<210> 2
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 2
gacgtggtcc aaacagggaa gagatcc 27
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 3
cagtggcata ggagataccc 20
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 4
gccatctacc atgcgtccta t 21
<210> 5
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 5
gatcctccat ctaccatgcg tccagg 26
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 6
tggaaactga gatgatgtgt gga 23
<210> 7
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 7
ggccacgctg taaacattta acaaaag 27
<210> 8
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 8
gtagctgcca cgctgtaaac atttaacaac ct 32
<210> 9
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 9
cgaagtctgc ctaccggtct aaaat 25
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 10
gctcctcaag tgtggtcaga 20
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 11
gctatakgcc agggctacct ac 22
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 12
tgcraactyg tcactggtca 20
<210> 13
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 13
gaggtgaccc tatgaacatc aggata 26
<210> 14
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 14
gcgaagaggt gaccctatga acatcaggtc g 31
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 15
tggttaacag tgacctaaac aaatatt 27
<210> 16
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 16
gaagtcatct gccaggtcc 19
<210> 17
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 17
gcgtagaagt catctgccag gcgt 24
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 18
tgtgacgaga ggatggggaa 20
<210> 19
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 19
gtggtagggg gcctggtggt t 21
<210> 20
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 20
gtgatgtggc agggggcctg ttga 24
<210> 21
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 21
cagctctctt tataagggaa gggtc 25
<210> 22
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 22
actaggatcc tgcttcctgg ta 22
<210> 23
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 23
gttgaaggtc atcacagagc catg 24
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 24
aggcgcagta ggggttactt 20
<210> 25
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 25
gggtggtgct tacggtcatc t 21
<210> 26
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 26
tcccaggtgt tgctgagttt a 21
<210> 27
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 27
ggaggttgaa ggtgcaactc aggtc 25
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 28
gccagatata cgcgttgaca 20
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 29
gggcgtactt ggcatatgat 20
Claims (9)
1.一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，包括如下表所示的同步快速定性检测与抗精神病药物用药相关的7个SNP位点和4个内参基因的引物组合物：SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.29、PCR反应液、阳性对照品和超纯水；所述7个SNP位点为：CYP2D6基因的*5和*10位点，CYP1A2基因的rs762551位点，CYP3A5基因的rs776746位点，EPM2A基因的rs1415744位点，MC4R基因的rs489693位点，SLC6A2基因的rs5569位点；
2.如权利要求1所述的一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述7个SNP位点除CYP2D6*5位点外，针对每一个SNP位点设计了3条引物，其中野生型引物和突变型引物分别与野生型基因和突变型基因互补结合，1条共用的引物分别与野生型和突变型引物形成引物对，扩增出片段长度有2～10个碱基差异的PCR产物。
3.如权利要求1所述的一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2D6*5位点为特殊SNP位点，其突变型为缺失突变，对基因上游、基因内部和基因下游设计引物，通过片段大小判断*5位点是否发生缺失突变。
4.如权利要求1所述的一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，在多重PCR反应中加入3个人基因组DNA内参和一个PCR反应内参。
5.如权利要求1所述的一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品包括所述7个SNP位点和所述4个内参基因所对应的质粒混合物。
6.如权利要求1所述的一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括以下组分：超纯水、2×PCR缓冲液、DNA聚合酶和dNTP。
7.一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集口腔脱落细胞保存于细胞采集卡，或采集血液样本并提取核酸；(2)采用步骤1所述细胞采集卡或核酸为模板进行多重PCR扩增；(3)按PCR产物片段长短/质量同步分离7个SNP位点及4个内参；(4)结果分析判读。
8.如权利要求7所述一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述口腔脱落细胞保存于细胞采集卡上，可不需要核酸提取，直接用于PCR扩增。
9.如权利要求7所述一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述PCR反应条件为：95℃5min；94℃10s，61℃1min；70℃30s，循环29次；60℃3min；4℃直至收取PCR产物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910344457.7A CN110004222A (zh) | 2019-04-26 | 2019-04-26 | 一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910344457.7A CN110004222A (zh) | 2019-04-26 | 2019-04-26 | 一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110004222A true CN110004222A (zh) | 2019-07-12 |
Family
ID=67174539
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910344457.7A Pending CN110004222A (zh) | 2019-04-26 | 2019-04-26 | 一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110004222A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111808943A (zh) * | 2020-06-18 | 2020-10-23 | 重庆浦洛通基因医学研究院有限公司 | 一种精神类个体化用药基因检测方法 |
| CN112921099A (zh) * | 2019-12-06 | 2021-06-08 | 宁波海尔施基因科技有限公司 | 一种检测人类科学气质潜力基因型的试剂盒和方法 |
| CN113584147A (zh) * | 2021-06-16 | 2021-11-02 | 郑州大学 | 一种用于指导精神病用药的基因多态性检测试剂盒 |
| CN113584151A (zh) * | 2021-07-17 | 2021-11-02 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | 一种抗精神病个体化用药相关基因分型检测的复合扩增体系及试剂盒 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080248470A1 (en) * | 2007-04-04 | 2008-10-09 | Sungkyunkwan University Foundation For Corporate Collaboration | Genetic screening for predicting antidepressant drug response based on the monoamine transporter gene polymorphism combination |
| CN108342466A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-07-31 | 广州海思医疗科技有限公司 | 一种神经精神类药物相关基因的高通量测序方法及其应用 |
| CN108823299A (zh) * | 2018-06-11 | 2018-11-16 | 苏州艾达康医疗科技有限公司 | 一种抑郁症用药相关基因的检测方法及试剂盒 |
| CN109022555A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-18 | 宁波海尔施基因科技有限公司 | 一种检测ryr1基因多态性的多重基因检测试剂盒及其使用方法 |
| CN109234383A (zh) * | 2018-11-07 | 2019-01-18 | 上海康黎医学检验所有限公司 | 与抗精神疾病药相关的试剂盒、目标基因及其制备、snp标记、snp识别和应用 |
| CN109468377A (zh) * | 2018-12-30 | 2019-03-15 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 用于精神类药物相关基因多态性位点检测的引物组、试剂盒和方法 |
-
2019
- 2019-04-26 CN CN201910344457.7A patent/CN110004222A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080248470A1 (en) * | 2007-04-04 | 2008-10-09 | Sungkyunkwan University Foundation For Corporate Collaboration | Genetic screening for predicting antidepressant drug response based on the monoamine transporter gene polymorphism combination |
| CN108342466A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-07-31 | 广州海思医疗科技有限公司 | 一种神经精神类药物相关基因的高通量测序方法及其应用 |
| CN108823299A (zh) * | 2018-06-11 | 2018-11-16 | 苏州艾达康医疗科技有限公司 | 一种抑郁症用药相关基因的检测方法及试剂盒 |
| CN109022555A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-18 | 宁波海尔施基因科技有限公司 | 一种检测ryr1基因多态性的多重基因检测试剂盒及其使用方法 |
| CN109234383A (zh) * | 2018-11-07 | 2019-01-18 | 上海康黎医学检验所有限公司 | 与抗精神疾病药相关的试剂盒、目标基因及其制备、snp标记、snp识别和应用 |
| CN109468377A (zh) * | 2018-12-30 | 2019-03-15 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 用于精神类药物相关基因多态性位点检测的引物组、试剂盒和方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Q XU等: "Association studies of genomic variants with treatment response to risperidone, clozapine, quetiapine and chlorpromazine in the Chinese Han population", 《PHARMACOGENOMICS J.》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112921099A (zh) * | 2019-12-06 | 2021-06-08 | 宁波海尔施基因科技有限公司 | 一种检测人类科学气质潜力基因型的试剂盒和方法 |
| CN111808943A (zh) * | 2020-06-18 | 2020-10-23 | 重庆浦洛通基因医学研究院有限公司 | 一种精神类个体化用药基因检测方法 |
| CN111808943B (zh) * | 2020-06-18 | 2021-07-20 | 重庆浦洛通基因医学研究院有限公司 | 一种精神类个体化用药基因检测方法 |
| CN113584147A (zh) * | 2021-06-16 | 2021-11-02 | 郑州大学 | 一种用于指导精神病用药的基因多态性检测试剂盒 |
| CN113584151A (zh) * | 2021-07-17 | 2021-11-02 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | 一种抗精神病个体化用药相关基因分型检测的复合扩增体系及试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110004222A (zh) | 一种用于抗精神病药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN109207579B (zh) | 一种检测恶性高热易感基因的多重检测试剂盒及其用途 | |
| CN109825573A (zh) | 一种用于抗抑郁药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN109082466A (zh) | 一种检测cacna1s基因多态性的多重基因检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN106591273B (zh) | 一组与先天性代谢缺陷病相关的基因新突变及检测试剂盒 | |
| CN104789672B (zh) | 一种地中海贫血基因的条码化磁珠液相芯片检测试剂盒 | |
| CN111235272B (zh) | 一次性检测肺癌多重基因突变的组合物及其应用 | |
| CN107488728A (zh) | 3d数字pcr检测egfr特定基因突变的引物探针组合物、试剂盒及方法 | |
| CN109022555A (zh) | 一种检测ryr1基因多态性的多重基因检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN102776286B (zh) | 用于检测ros1基因融合突变的引物、探针及检测试剂盒 | |
| CN106498036A (zh) | 一种用于高通量测序检测的药物基因组snp变异文库的构建方法及其应用 | |
| CN103898226B (zh) | 一种线粒体snp荧光标记复合扩增试剂盒及其应用 | |
| CN109825574A (zh) | 一种用于抗癫痫药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN102925554B (zh) | 用于检测结核分枝杆菌及其耐吡嗪酰胺药性的引物组 | |
| CN108998511A (zh) | 一种检测TRECs和KRECs基因的实时荧光定量PCR试剂盒及其应用 | |
| CN110699440A (zh) | 一种检测二甲双胍个体化用药相关基因snp位点的引物及方法 | |
| CN108192965A (zh) | 一种检测线粒体基因组a3243g位点异质性的方法 | |
| CN102719537A (zh) | 耐多药结核分枝杆菌非荧光dna微阵列检测方法及试剂盒 | |
| CN109337956A (zh) | 捕获探针的设计方法、捕获探针、捕获探针组和试剂盒 | |
| CN110938685A (zh) | 新生儿遗传代谢病与血红蛋白病的基因检测探针组及其应用 | |
| CN107641649A (zh) | 检测微卫星nr27位点稳定性的引物对、试剂盒及方法 | |
| CN110079596A (zh) | 一种用于抗躁狂药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN109777867A (zh) | 一种重叠延伸PCR结合Sanger测序检测耳聋易感基因突变的方法 | |
| CN112080556B (zh) | 一种对淋球菌耐药基因进行多重快速测序的方法 | |
| CN112779322A (zh) | 一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒、检测方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20190712 |