CN108245483A - 一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种包载难溶性抗肿瘤药物紫杉醇的聚合物纳米胶束体系、制备方法及其应用。本发明的纳米胶束体系,以具有不同链长聚乙二醇(mPEG)和不同链长聚乳酸(PLA)的疏水段铰链的两亲性多聚物为载体,再包载疏水性药物紫杉醇而制得。(mPEG‑PLA)的纳米胶束其药物载体以疏水性的聚乳酸为内核,以亲水性的聚乙二醇为外壳;所装载的化疗药物为紫杉醇。本发明的聚合物胶束纳米体系实验结果表明具有良好的生物相容性,与游离药物相比,大大降低了化疗药物的毒副作用,可用于制备治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胃癌等的药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系、其制备方法以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
传统癌症治疗方法虽然已取得了一些可观的成效,但是彻底治愈和消除癌症仍然是当前社会医疗和人口健康的重大挑战之一。基于纳米技术的抗肿瘤治疗给癌症患者带来新的希望,与传统的化疗相比,纳米医药载体有以下几个优势:体内较稳定,对正常组织毒副作用低,可以实现药物可控释放,提高生物利用度。然而,基于传统纳米载药体系发展仍然不完善,受到体内外很大因素限制。
胶束化的抗肿瘤制剂NK911、NK105已进入临床试验,其中,基于PEG和可降解嵌段多聚物(PCL、PLA等)的胶束应用最为广泛,已被美国FDA批准用于临床。例如,韩国三星集团研发的基于PEG-PLA/PCL的纳米胶束制剂已经应用于临床:但是其血清稳定性及瘤内富集仍然不够。为进一步增强其性能,加载紫杉醇的PEG-PLA多聚物胶束,星形胆酸修饰的多聚物胶束,以及PH-敏感的mPEG-b-(PLA-co-PAE)嵌段物胶束已有文献报道,他们有较高的药物加载量以及快速和靶向的药物释放。因此,通过两亲性聚合物胶束能够解决胶束体系的稳定性及提高载药量。与其他纳米胶束相比,聚合物胶束具有强大的增溶能力,制得的聚合物胶束可过滤除菌,进一步制成冻干制剂,在储存时间和易用性方面都得到很大提高。
紫杉醇(paclitaxel,taxo1)是由红豆杉属植物中提取的一种二萜类化合物,被认为是目前市场上最有效的抗癌药物之一,临床试验显示紫杉醇能够治疗多种癌症,包括卵巢癌、乳腺癌、头颈癌、非小细胞肺癌等。由于紫杉醇在水溶液中溶解度极低,临床上将其增溶在聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇(50:50,v/v)的混合物中。然而,与该载体相关的毒副作用,如过敏反应、神经毒性,影响了紫杉醇的广泛应用。将紫杉醇制成脂质体,能够提高它的溶解度,延长药物在体内的循环时间,从而提高紫杉醇的疗效,同时还能降低药物的毒性。
专利文献CN102218027公开了一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物胶束冻干制剂,其中药物与聚合物材料的质量比为1%—28%,远低于本发明的药物与聚合物质量比,PEG:PLA的嵌段比为1:0.5-1.5即2:1-1:1.5,没有公开PEG:PLA比例为2.6:1、1:2.6,其中该文献中聚酯片段长度为1000-3000,远大于本申请聚乳酸的分子量范围1800-5000,药效数据采用不同细胞系,肿瘤治疗方案不同,实验数据也有差异。
专利文献US6322805公开了一种生物可降解的聚合胶束型药物组合物及其制备方法,但其疏水共聚物部分为PLA、聚乙醇酸、聚(乳酸-乙醇酸)、聚己内酯混合物,不同于本发明,并且不便于制备成药物。
专利文献US2003014184尽管公开了mPEG-PLA,但仅是为了说明没有加帽Bz和Ac的包封率高,与本发明有着本质的区别,并且治疗效果不尽如人意。
专利文献US5439686公开了一种难溶性药物的给药方案,但是其PEG需要以巯基或二硫键连接,并且仅有药代动力学数据,无从判断其药效。
专利文献CN100998870公开了一种增加药物溶解度的方案,其中需要脂质作为必要成分存在,并且仅有制剂稳定性研究数据,缺乏关键的药效数据。
发明内容
本发明的目的在于提供一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束。本发明的另一目的是提供上述包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束的制备方法,本发明的第三目的在于提供上述包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束在制备治疗肿瘤药物中的应用。
本发明制备的具有不同比例链长的聚乙二醇(mPEG)和聚乳酸(PLA)的疏水段铰链的两亲性多聚物,是通过不同的方法制备聚合物的载药纳米胶束,进行了物理化学、体外细胞水平评价及体内动物实验研究。
本发明的主要技术方案是:以乙二醇和乳酸单体为制备原材料,在催化剂的作用下,通过聚合反应合成具有亲水端mPEG和疏水端PLA的两亲性嵌段多聚物,然后溶解两亲性嵌段多聚物和药物于有机溶剂中,在水相PBS中透析,通过自组装形成内部为疏水核心、外表为亲水外壳的纳米载药胶束。然后进一步通过CCK-8实验对新合成的纳米胶束载体进行生物相容性评价,通过动态光散射仪、高效液相色谱等仪器对组装的纳米胶束进行特征分析。
本发明第一方面,涉及一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,其特征在于,以两亲性嵌段共聚物为载体,制成纳米胶束,将难溶性抗肿瘤药物载入胶束中,获得包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,所述的两亲性嵌段共聚物为聚乙二醇mPEG-聚乳酸PLA嵌段共聚物,其中聚乙二醇分子量范围为2000-5000,聚乳酸分子量范围为1800-5000,聚乙二醇与聚乳酸的嵌段比例为约1:3至3:1;优选为2.6:1至1:2.6;更优选为1:2.6;甚至更优选为1:1.04;最优选为1.06:1。
本发明第二方面,涉及第一方面所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,其特征在于,所述的难溶性抗肿瘤药物为紫杉醇或多西紫杉醇,优选为紫杉醇。
本发明第三方面,涉及第一方面或第二方面所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,其特征在于,所述的纳米胶束包封率为约10%~95%,优选50%—95%,更优选60%—95%,最优选约95%;载药量为约5%—50%,优选25%—50%,更优选30%—50%,最优选约50%;粒径分布为约10—600nm,优选为约30~110nm,更优选为约50nm;分布系数<0.3。
本发明第四方面,涉及第一方面或第二方面所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,其特征在于,所述的包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束采用透析法,旋蒸法,和/或薄膜水化法制备。
本发明第五方面,涉及第一至第四方面中任一项中所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系的方法,其特征在于,包括以下步骤:
A、两亲性嵌段聚合物的合成;
B、载药聚合物纳米胶束的合成。
本发明第六方面,涉及第五方面所述的制备方法,其特征在于,步骤A包括:
用充分干燥的聚乙二醇在真空条件下引发聚乳酸聚合制备嵌段共聚物,真空度要求<1mmHg,温度控制在130℃以上,聚合时间为1-12h;反应结束后未反应的单体加水除去,重金属催化剂通过加速离心的方法除去,制得嵌段共聚物;其中嵌段聚合物的PDI<1.2,未反应单体残留量<0.01%,重金属残留量<1ppm;催化剂<10ppm。
本发明第七方面,涉及第五方面所述的制备方法,其特征在于,步骤B包括:
透析法制备聚合物纳米胶束是将聚合物溶于有机溶剂与药物溶于有机溶剂,充分混合,加入到透析膜中用乙醇和纯水的混合液进行透析,一段足够时间后,换上蒸水透析。
本发明第八方面,涉及第七方面所述的制备方法,其特征在于,所述的有机溶剂为以下溶剂中的一种或者多种的混合物:二氯甲烷,三氯甲烷,四氢呋喃,乙腈,乙醇,丙酮,N,N-二甲基甲酰胺,N,N-二甲基乙酰胺,优选的为:乙腈,二氯甲烷,三氯甲烷中的一种或者多种的混合物,更优选为N,N-二甲基乙酰胺;所述的透析膜分子量为1KD-160KD,优选的为1KD。
本发明第九方面,涉及第五方面所述的制备一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系的方法,其特征在于,
所述的步骤A具体聚合过程如下:
mPEG2000(30g)蒸馏除水后溶解到150mL干燥甲苯中,加热到75℃加入聚乳酸(28.8g),反应24小时后体系冷却,于室温下加入冷的乙醚沉淀析出的固体经多次过滤,室温下真空干燥24小时;
所述的步骤B具体聚合过程如下:
称取2mg紫杉醇溶于1mL DMAC中半小时使其充分溶解,称取2mg嵌段聚合物溶于1mL DMAC中使其完全溶解,分别取1mL溶液1:1混合,剪5CM分子量为1KD的透析膜乙醇:纯水=3:7进行透析,三小时后换上蒸水透析,六小时后收集透析液。
本发明第十方面,涉及第一至第四方面中任一项所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系在制备治疗人或哺乳动物疾病的药物中的应用,其特征在于,所述疾病为耐药乳腺癌、肺癌、胃癌或卵巢癌。
本发明第十一方面,涉及第一至第四方面中任一项所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系的应用,其特征在于,以卵巢癌动物为疾病模型。
本发明的另一方面,提供一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,所述的纳米胶束体系包括:亲水端PEG和疏水端PLA的两亲性嵌段多聚物;通过自组装形成内部为疏水核心、外表为亲水外壳的纳米胶束载体;加入紫杉醇制备加载药物的纳米胶束体系。
所述的包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束,载药量为约5%-50%,包封率为约10%~95%;优选载药量为约25%-50%,包封率为约50%~95%;更优选载药量为约30%-50%,包封率为约60%~95%;最优选载药量为约50%,包封率为约95%。
所述的包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束,纳米粒径范围为约10~600nm,优选为约粒径为约10~110nm,更优选为约50nm;平均粒径为约10-100nm。
本发明的又一方面,提供一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束,该方法包括如下步骤:
A:两亲性嵌段共聚物的制备
用充分干燥的聚乙二醇在真空条件下引发聚乳酸聚合制备嵌段共聚物,真空度要求<1mmHg,温度控制在130℃以上,聚合时间为1-12h;反应结束后未反应的单体加水除去,重金属催化剂通过加速离心的方法除去,制得嵌段共聚物;其中嵌段聚合物的PDI<1.2,未反应单体残留量<0.01%,重金属残留量<1ppm;催化剂<10ppm。
B:载药纳米胶束的制备
透析法制备聚合物纳米胶束是将聚合物溶于有机溶剂与药物溶于有机溶剂,充分混合,加入到透析膜中用乙醇和纯水的混合液进行透析,一段时间后,换三蒸水透析。透析12-24小时,每间隔6-12小时更换透析液一次。
C:聚合物冻干制剂的制备
得到带有淡蓝色乳光的聚合物纳米胶束溶液,该溶液经0.22um的无菌滤膜过滤除菌后,分装冷冻干燥,制得包载紫杉醇的聚合物胶束冻干制剂。所述的步骤A具体聚合过程如下:
mPEG(30g,15mM,Mn=2000g/mol)蒸馏除水后溶解到150mL干燥甲苯中,加热到75℃加入PLA(28.8g,Mn=1800、2000、5000),反应24小时后体系冷却,于室温下加入冷的乙醚沉淀析出的固体经多次过滤,室温下真空干燥24小时。
所述的步骤B具体聚合过程如下:
称取2mg紫杉醇(PTX)溶于1mL二甲基乙酰胺(DMAC)中半小时使其充分溶解,称取2mg嵌段聚合物溶于1mL DMAC中使其完全溶解,分别取1mL溶液1:1混合,剪5CM分子量为1KD的透析膜乙醇:纯水=3:7进行透析,6-12小时后更换透析液一次,再透析6-12小时后收集透析液。
本发明的再一方面,提供一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明通过卵巢癌SKOV3细胞株,对游离PTX、Micelle-PTX的细胞毒性进行评价。
本发明制备的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束具有如下优点:
(1)本发明选用的mPEG2000-聚乳酸嵌段聚合物材料,无毒,无免疫副作用,在体内可生物降解,具有良好的生物相容性;对于难溶性药物的包载增溶性是利用其在水溶液中可自组装形成聚合物胶束实现,无需使用增溶剂等辅助制剂,消除了由传统溶媒所带来的用药隐患,大大提高了用药的安全性;
(2)在载体浓度一致的情况下,由于载药量的不同,其杀伤作用也有所差异,主要表现为:不同臂长载药体系的载药量随着PLA链长的减小而增高,其对肿瘤细胞的杀伤作用也随着PLA链长的减小而增强。
本发明制备得到包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束,其在氘代氯仿中的核磁氢谱,羟基和甲基的出峰位置分别在5.2ppm和1.5ppm处,表明聚合物具有正确的结构;其在去离子水中的粒径范围为30-110nm,载药量为约5%-50%,包封率为约10%-95%,表明聚合物胶束具有合适的粒径范围,较高的载药量和包封率。
本发明制备得到的聚合物胶束冻干制剂细胞水平实验,卵巢癌SKOV3细胞株,对游离PTX、Micelle-PTX的细胞毒性进行评价,见附图及实施例。
本发明制备得到的聚合物胶束冻干制剂动物水平实验,见附图及实施例。
附图说明
图1.纳米胶束体系构建示意图;
图2.嵌段共聚物的核磁共振氢谱图,图2.1、2.2、2.3分别对应于mPEG2000-b-PLA1800、mPEG5000-b-PLA2000、mPEG2000-b-PLA5000;
图3.粒径分布图,其中图3.1中为约10nm-600nm,图3.2中为约30nm-110nm,图3.3中为约50nm,分布系数均<0.3;
图4.HPLC出峰时间检测图;
图5.紫杉醇对三株细胞的细胞毒性检测图;
图6.紫杉醇对卵巢癌细胞的毒性检测图,由图可见毒性作用明显;
图7.三种紫杉醇胶束的细胞毒性检测图;
图8.动物水平检测紫杉醇胶束治疗肿瘤效果图;
图9.不同比例载体与紫杉醇对细胞毒性的检测图;
图10.紫杉醇胶束治疗肿瘤结果图;
图11.紫杉醇纳米胶束与非纳米药物对胃癌细胞N87、肺癌细胞A549、卵巢癌细胞SKOV3、乳腺癌细胞MCF-7抑制作用对比图;
图12.紫杉醇胶束治疗过程中小鼠的存活时间折线图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
下述具体实施例中的方法,如无特殊说明,均为常规方法。
实施例1:载药纳米胶束的制备方法
1.称取2mg PTX于1.5mL的EP管中,加入1.0mL DMAC进行溶解,浓度为2mg/mL;
2.称取2mg聚合物溶解于1mL DMAC中,浓度为2mg/mL;
3.载体溶液与药物溶液体积比1:1混合均匀;
4.剪取长度约为8cm的透析袋,其截流量为1000,然后放入含有上蒸水的烧杯中,浸泡2h左右;
5.取1.5mL的EP管,三个为一组,依次标记为
mPEG2000-b-PLA1800、mPEG5000-b-PLA2000、mPEG2000-b-PLA5000。然后按标号依次加入1mL混合液;
6.完全混合的溶液静置2~3h后加入到透析袋中,放入乙醇:水=3:7溶液中透析,隔3小时换双蒸水,透析8h;
7.收集。
实施例2:纳米胶束粒径测定
1.取已制备好的纳米胶束2mL;
2.让其静置一段时间,使其中的大粒子沉淀下去,方便下一步测定。
3.把已经准备好的纳米胶束加入到干净的玻璃管中,上端用塞子封住,用标签笔注明样品名,玻璃管的下端用丙酮清洗,加入到动态光散射仪中进行测定。测定完成后读取粒径分布和平均粒径数据,绘制分布图。测量条件为:90度散射角,25℃。结果见附图3。
实施例3:纳米胶束载药量和包封率测定
1.取0.2mL乙腈和水的混合液和0.2mL的制备好的载药纳米胶束进行混合,然后通过涡旋的方法裂解载药纳米胶束载体5min(使载药纳米胶束破裂,从而释放紫杉醇)。
2.混匀之后,在紫外激发波长为485nm的条件下(纳米胶束空载体自身对阿霉素影响很小,标定容液为同浓度的纳米胶束空载体溶液),用紫外分光光度计测定紫杉醇的紫外吸光度,重复3次。
3.将测量得到的载药纳米胶束的紫外吸光值带入紫杉醇浓度/吸光度标准曲线中,从而得到紫杉醇的浓度,进而通过计算得到包封率和载药量,载药量=紫杉醇/高分子浓度*100%,包封率=包裹的紫杉醇的量/总紫杉醇的量*100%。结果见表1:
表1
实施例4:载药纳米胶束对不同癌细胞的增值抑制情况
1.复苏和培养胃癌细胞N87、肺癌细胞A549、卵巢癌细胞SKOV3、乳腺癌细胞MCF-7,于37℃,5%CO2条件下培养,每2天传代一次。
2.待细胞生长状态良好时进行铺板(96孔),5×103/孔,于37℃,5%CO2条件下培养12h。
3.对四种细胞进行纳米胶束药物处理,药物浓度为0.001、0.01、0.1、1ug/mL;同时使用非纳米药物做对比。各3个复孔,在培养箱中孵育24h。
4.弃旧培养液,每孔加入含10%CCK-8的细胞培养基,培养2h后,在酶联免疫检测仪450nm处测量各孔的吸光值。使用Excel软件统计学分析数据。在所有的评估中,认为P<0.05时,样品之间的差异具有统计学显著性。分析结果以细胞存活率来显示载药纳米胶束能明显抑制四种细胞的增殖。而非纳米药物组在高浓度下对癌细胞有一定的细胞毒性,表明本发明制备的载药纳米胶束具有很好的抑制癌细胞的增殖生长能力。结果见附图11。
实施例5:肿瘤动物模型的建立
1.小鼠耐药肿瘤模型的建立:SKOV3卵巢癌细胞作为肿瘤模型细胞,首先取对数期生长的SKOV3细胞进行扩增,扩增到足够量时,用PBS洗涤两次后,再用胰酶消化3min。
2.把消化下的细胞收集到50mL的离心管中,1000转/分、离心5分钟,接着用无菌PBS重悬,取少量进行计数,使重悬液的细胞浓度稀释为1×106细胞/100uL。
3.对10只已经适应1~2周左右的裸鼠进行肿瘤种植,用1mL的注射器吸取适量的细胞悬液,然后在裸鼠右腋窝上方皮下注射肿瘤细胞悬液,每只小鼠注射100uL,注射之后,小鼠放入动物培养中心进行饲养。每隔两天更换饲料、水、以及垫料,同时观察肿瘤生长情况并进行测量。
4.裸鼠卵巢癌肿瘤模型的建立,方法如下:
购买的雌性Balb/c裸鼠(4周龄,约20g),在进行皮下接种肿瘤细胞实验前,先在恒温(25~27℃)、恒湿(45~50%)、新鲜空气高度除尘除菌、无特殊病原体(SPF级)环境下适应一周,动物饲养在有机玻璃饲养盒内,安放层流式超净架内,每只饲养盒内饲养5只动物,灭菌处理的水和饲料供动物自由摄入。观察一切正常后,方可进行后续实验;取对数生长期的人SKOV3卵巢癌细胞,用胰酶进行消化处理,用无菌PBS重悬细胞,制备成SKOV3卵巢癌细胞悬液,调整细胞浓度至1×107个/mL;选取Balb/c裸鼠(雌性,5周龄,约20g),取细胞悬液接种至裸鼠右背部皮下,每只裸鼠接种的细胞数为1×106个;裸鼠精心饲养2周后,选择肿瘤生长良好,肿瘤体积长至约50mm3的裸鼠,作为实验模型,然后每只荷瘤裸鼠注射D-Luciferase底物的剂量为150mg/kg,通过小动物活体成像仪(Caliper Life Sciences,Hokpinton,MA)初步观察裸鼠卵巢癌模型的构建情况。
肿瘤体积计算公式:体积V=长×宽×宽/2。
当裸鼠的肿瘤体积达到50-60mm3时,即可进行体内抗肿瘤实验。
5.用PBS透析制备Micelle-PTX胶束,然后根据小鼠体重和胶束载药量制备适量体积的胶束溶液。用精密天平称取4mg阿霉素,溶于4mL的PBS中,浓度为1mg/mL。
6.用旋蒸法对上述制备的胶束进行浓缩,使其TPX浓度到达20mg/mL。7.当卵巢癌小鼠的肿瘤体积超过50mm3时,对其进行随机分组,分别为PBS组、20mg/mL TPX组、20mg/mLMicelle-TPX组、60mg/mLMicelle-TPX组、阳性对照组。
8.接着对每组肿瘤小鼠进行编号,以100uL/只的剂量尾静脉注射别为PBS组、TPX组、20mg/mL Micelle-TPX组、60mg/mL Micelle-TPX组、阳性对照组。除PBS组不含阿霉素外,其他每组的阿霉素浓度都是相同的,为20mg/mL,一次注射。注射药物后,每天测量小鼠肿瘤体积大小和体重变化,连续观察3周。结果见附图12。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明,但本发明创造并不限于所述实施例,熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种等同的变型或替换,这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
Claims (11)
1.一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,其特征在于,以两亲性嵌段共聚物为载体,制成纳米胶束,将难溶性抗肿瘤药物载入胶束中,获得包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,所述的两亲性嵌段共聚物为聚乙二醇mPEG-聚乳酸PLA嵌段共聚物,其中聚乙二醇分子量范围为2000-5000,聚乳酸分子量范围为1800-5000,聚乙二醇与聚乳酸的嵌段比例为约1:3至3:1;优选为2.6:1至1:2.6;更优选为1:2.6;甚至更优选为1:1.04;最优选为1.06:1。
2.根据权利要求1所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,其特征在于,所述的难溶性抗肿瘤药物为紫杉醇或多西紫杉醇,优选为紫杉醇。
3.根据权利要求1或2所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,其特征在于,所述的纳米胶束包封率为约10%~95%,优选50%—95%,更优选60%—95%,最优选约95%;载药量为约5%—50%,优选25%—50%,更优选30%—50%,最优选约50%;粒径分布为约10—600nm,优选为约30~110nm,更优选为约50nm;分布系数<0.3。
4.根据权利要求1或2所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系,其特征在于,所述的包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束采用透析法,旋蒸法,和/或薄膜水化法制备。
5.一种制备如权利要求1-4中任一项中所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系的方法,其特征在于,包括以下步骤:
A、两亲性嵌段聚合物的合成;
B、载药聚合物纳米胶束的合成。
6.一种如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤A包括:
用充分干燥的聚乙二醇在真空条件下引发聚乳酸聚合制备嵌段共聚物,真空度要求<1mmHg,温度控制在130℃以上,聚合时间为1-12h;反应结束后未反应的单体加水除去,重金属催化剂通过加速离心的方法除去,制得嵌段共聚物;其中嵌段聚合物的PDI<1.2,未反应单体残留量<0.01%,重金属残留量<1ppm;催化剂<10ppm。
7.一种如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤B包括:
透析法制备聚合物纳米胶束是将聚合物溶于有机溶剂与药物溶于有机溶剂,充分混合,加入到透析膜中用乙醇和纯水的混合液进行透析,一段足够时间后,换上蒸水透析。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述的有机溶剂为以下溶剂中的一种或者多种的混合物:二氯甲烷,三氯甲烷,四氢呋喃,乙腈,乙醇,丙酮,N,N-二甲基甲酰胺,N,N-二甲基乙酰胺,优选的为:乙腈,二氯甲烷,三氯甲烷中的一种或者多种的混合物,更优选为N,N-二甲基乙酰胺;所述的透析膜分子量为1KD-160KD,优选的为1KD。
9.根据权利要求5所述的制备一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系的方法,其特征在于,
所述的步骤A具体聚合过程如下:
mPEG2000(30g)蒸馏除水后溶解到150mL干燥甲苯中,加热到75℃加入聚乳酸(28.8g),反应24小时后体系冷却,于室温下加入冷的乙醚沉淀析出的固体经多次过滤,室温下真空干燥24小时;
所述的步骤B具体聚合过程如下:
称取2mg紫杉醇溶于1mL DMAC中半小时使其充分溶解,称取2mg嵌段聚合物溶于1mLDMAC中使其完全溶解,分别取1mL溶液1:1混合,剪5CM分子量为1KD的透析膜乙醇:纯水=3:7进行透析,三小时后换上蒸水透析,六小时后收集透析液。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系在制备治疗人或哺乳动物疾病的药物中的应用,其特征在于,所述疾病为耐药乳腺癌、肺癌、胃癌或卵巢癌。
11.根据权利要求1-4中任一项所述的一种包载难溶性抗肿瘤药物的聚合物纳米胶束体系的应用,其特征在于,以卵巢癌动物为疾病模型。
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