CN110812327A - 一种自组装纳米载药胶束及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了一种自组装纳米载药胶束及其制备方法与应用，属于药物制剂和高分子材料及纳米技术领域。本发明的制剂是由紫杉醇二聚体前药、粉防己碱、两亲性共聚物材料制成的共递送还原敏感型纳米胶束给药系统。本发明合成药物包覆于聚合物材料中，制成纳米胶束。本发明中二聚体前药合成中引入二硫键，可实现先释放粉防己碱以抑制肿瘤细胞内过多P‑糖蛋白所致的多药耐药，而后紫杉醇二聚体在肿瘤细胞内还原性环境下被还原为紫杉醇，抑制肿瘤细胞的增殖和分裂，达到了逆转肿瘤细胞多药耐药性的目的。同时，本发明胶束颗粒分布均匀，呈单分散状态，可实现体内被动靶向效应，显著增加了药物在细胞中的积累。

Description

一种自组装纳米载药胶束及其制备方法与应用
技术领域
本申请涉及药物制剂和高分子材料及纳米技术领域，具体而言，涉及一种自组装纳米载药胶束及其制备方法与应用。
背景技术
癌症是目前世界上致死率最高的疾病之一，化疗是治疗癌症的主要手段，但化疗药物通常由于其较差的生物相容性容易引起全身毒性。目前，使用纳米载体材料递送抗癌药物的给药系统得到了广泛研究，但仍有很多缺陷，例如载药量低、胶束粒径过大或过小等。同时化疗药物容易引起肿瘤细胞的多药耐药性而导致化疗失败。多药耐药主要由于肿瘤细胞内存在过多P-糖蛋白(P-gp)可将药物泵出胞外，从而降低肿瘤细胞内的药物浓度所致，而大多数疏水性药物是P-gp的底物。研究发现粉防己碱(TET)能与P-gp特异结合, 改变P-gp的构型导致其活性位点不能识别抗肿瘤药物以逆转多药耐药。
发明内容
本申请的第一方面公开了一种自组装的纳米载药胶束，纳米载药胶束包括两亲性的载体材料以及包覆于两亲性的载体材料内的还原条件敏感释药的抗肿瘤药物前药和P-糖蛋白抑制剂；纳米载药胶束粒径为100-200nm，多分散系数0.08-0.11。
肿瘤组织细胞内存在高浓度的谷胱甘肽GSH，相较于胞外生理条件具有更高的还原环境。本申请提供的自组装的纳米载药胶束，先释放出P-糖蛋白抑制剂，抑制P-糖蛋白，防止药物分子被P-糖蛋白泵出靶细胞；然后释放出抗肿瘤药物，通过抗肿瘤药物杀伤靶细胞；达到抑制或者治疗治疗的目的。
在前述的第一方面的一些实施例中，两亲性的载体材料为单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸、甲氧基聚乙二醇-聚乳酸、甲氧基聚乙二醇-聚己内酯或甲氧基聚乙二醇-聚三亚甲基碳酸酯。
本申请中主要采用聚乙二醇PEG作为亲水端，采用聚乳酸羟基乙酸PLGA（mPEG-PLGA）、聚乳酸、聚己内酯以及聚三亚甲基碳酸酯作为疏水端物质，将两种组分构成聚合形成两亲性的聚合物，在体内可以降解为无毒的物质，且是很好的药物递送系统。
在前述的第一方面的一些实施例中，抗肿瘤药物为紫杉醇二聚体，P-糖蛋白抑制剂为粉防己碱。
在实施例中，通过疏水作用，将作为抗肿瘤药物的紫杉醇二聚体（PTX2）和作为P-糖蛋白抑制剂的粉防己碱（TET）包裹在两亲性的载体材料内部。
粉防己碱主要是为了防止药物被P-糖蛋白泵出细胞，可以使得抗癌药物能更好的发挥抗癌的效果。
紫杉醇二聚体通过二硫键连接形成，二硫键在细胞内的谷胱甘肽GSH氧化还原条件下；可以有效的破坏紫杉醇二聚体的二硫键，将抗癌药物紫杉醇以原型药的形式释放出来，起到抑制肿瘤或治疗癌症的目的。
本申请的第二方面提供了的自组装的纳米载药胶束的制备方法，制备方法包括以下步骤：
将紫杉醇二聚体和粉防己碱溶解于有机溶剂，得到紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液；
在紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液中加入两亲性的载体材料混匀，得到混合溶液；将混合液与去离子水或缓冲液按照1-5:3-6的比例混合，得到纳米胶束原溶液，由纳米胶束原溶液制备得到自组装的纳米载药胶束。
在实施例中，紫杉醇二聚体和粉防己碱溶解于有机溶剂中，并混匀，有利于紫杉醇二聚体和粉防己碱共存而提高药效，然后加入两亲性的载体材料，将两亲性的载体材料与紫杉醇二聚体和粉防己碱混合；两亲性的载体材料通过疏水作用将紫杉醇二聚体和粉防己碱缓慢的通过共沉淀的方式包裹在纳米胶束的内部，自组装形成纳米载药胶束。
本申请的第二方面的一些实施例中，有机溶剂为四氢呋喃、乙腈或二甲基亚砜；缓冲液是pH值为7.4的PBS缓冲液；
混合溶液中两亲性的载体材料、紫杉醇二聚体和粉防己碱的质量比为5-30:1-2:1-3。
在实施例中，通过有机溶剂的溶解，可以更好的分散紫杉醇二聚体和粉防己碱，能更好的混合，形成均匀的混合溶液。pH值为7.4的PBS缓冲液可以较好的保证药物的环境稳定，避免酸或者碱性环境影响药物的稳定性。
在前述的第二方面的一些实施例中，有机溶剂为四氢呋喃；混合液滴加入去离子水或缓冲液，混合液滴加的速度为10-15s/滴；并以180-2000rpm的速度搅拌45-55h；分离纯化前还包括在28-33℃条件下旋转蒸发18-25min，并以4750-5500rpm的转速离心处理280-350s；分离纯化的方法是采用3500-10000分子量的透析膜进行透析。
在实施例中，通过缓慢滴加混合液并且同时采用高速搅拌的方式，有利于除去四氢呋喃，由于纳米载药胶束已经形成；两亲性的载体材料已经将紫杉醇二聚体和粉防己碱包裹，不需要分散介质，因此滴加到去离子水或者缓冲液中，能很好的分散自组装的纳米载药胶束；然后在通过旋转蒸发进一步的挥发四氢呋喃。然后离心分离处理除去未被包裹的紫杉醇二聚体和粉防己碱，纯化纳米载药胶束；然后通过透析，进一步的去除四氢呋喃，纯化纳米载药胶束。
在前述的第二方面的一些实施例中，有机溶剂为乙腈时；去离子水或缓冲液与混合溶液的体积比为3-5:1；分离纯化的方法包括透析过滤或超声过滤；
透析过滤的透析膜分子量为3500-10000，透析时间为24h，且间隔两小时换水一次，透析过滤的滤膜孔径为0.22μm；
超声过滤的超声功率为50%，超声0.6s，停0.2s，总时间1min；所述超声过滤的滤膜孔径为0.22μm。
在实施例中，通过加入3-5倍体积于混合溶液的去离子水或者缓冲液，降低混合溶液的浓度，方便分离纯化。
通过透析膜，或者超声处理后用透析膜过滤，就能分离纯化得到纯度较高的自组装的纳米载药胶束。
在前述的第二方面的一些实施例中，有机溶剂为乙腈时；得到纳米胶束原溶液前包括在48-55℃条件下旋转蒸发，形成纳米载药胶束薄膜；纳米胶束薄膜与3-5倍乙腈体积的去离子水，并在42-48℃条件下水浴水化50-70min，制得自组装的纳米载药胶束。
在实施例中，通过直接旋转蒸发纳米胶束原溶液，除去乙腈，使mPEG-PLGA、PTX2、TET形成一层纳米载药胶束薄膜，然后加入3-5倍乙腈体积的去离子水，在在42-48℃条件下水浴条件下，纳米载药胶束薄膜水化，就能制得自组装的纳米载药胶束。
在前述的第二方面的一些实施例中，紫杉醇二聚体的制备包括：
将紫杉醇溶解于甲烷的液态氯代物中，并加入3,3’-二硫代二丙酸、1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲基氨基吡啶搅拌反应50-90min；
再次加入1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲基氨基吡啶并在保护气氛中搅拌反应20-30h；
纯化得到紫杉醇二聚体。
在实施例中，紫杉醇二聚体的简要合成路线见图9。
紫杉醇二聚体在靶细胞中谷胱甘肽作用下的分解过程见图10。
本申请的第三方面提供了上述的自组装的纳米载药胶束在制备抑制肿瘤生长的药物中的应用。
在实施例中，将上述的自组装的纳米载药胶束用于制备抑制肿瘤生长的药物中，通过独特的释药方式，能提高药物抑制肿瘤的效果。
本申请的第四方面提供了药物缀合物，药物缀合物包括抗体、连接基和上述的自组装的纳米载药胶束。
在实施例中，通过药物缀合物上的抗体的特异性识别功能，药物缀合物与目的细胞结合，然后自组装的纳米载药胶束可以进入细胞内，并进一步的释药，达到抑制肿瘤的目的和效果。
在前述第四方面的一些实施例中，抗体为抗Her2抗体，抗LAG3抗体，抗PD-1抗体，抗PD-L1抗体，抗CD20抗体，抗CLDN18.1抗体。
抗体可以是单抗，当然也是可以双特异性抗体，或者单域抗体等。
与现有技术相比，本申请的有益效果为：自组装的纳米载药胶束通过两亲性的载体材料包裹P-糖蛋白抑制剂和还原敏感的抗肿瘤药物前药，可实现先释放药物抑制肿瘤细胞内过多P-糖蛋白(P-gp)，避免将药物泵出靶细胞，而后二聚体前药在肿瘤细胞内还原性环境下被还原为抗肿瘤药物，抑制肿瘤细胞的增殖和分裂，，起到治疗肿瘤的目的；其次，纳米载药胶束的制备方法能制备出效果均一，粒径和分数系数合适的的纳米载药胶束。
术语
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE001
本说明书中，有时候将自组装的纳米载药胶束与mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束互换使用，指示相同的物质。
附图说明
图1是实施例1中制备的紫杉醇二聚体核磁共振氢谱图；
图2是实施例1中制备的紫杉醇二聚体UHPLC-Orbitrap HRMS图谱；
图3是实验例3中制备的mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束TEM图像；
图4是实验例3中制备的mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束的粒径分布和多分散系数图；
图5是实验例3中制备的mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束的平均粒径和PDI变化趋势图；
图6是实验例3中制备的mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束中PTX和TET的体外释放速度变化趋势图；
图7是实验例3中mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束细胞抑制效果图；
图8是实验例3中药物靶向性的荧光显微镜图像。
图9是紫杉醇二聚体的简要合成路线图。
图10是紫杉醇二聚体在靶细胞中谷胱甘肽作用下的分解过程。
具体实施方式
下面将结合实施例对本申请的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种紫杉醇二聚体的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
1.1称取136mg (0.16m mol) PTX，溶解于5mL 二氯甲烷（DCM）中；
1.2加入18.7mg (0.089 m mol)DTDP，再依次加入67.1mg (0.35 m mol) 1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC.HCl）和2.2mg (0.018 m mol) 4-二甲基氨基吡啶（DMAP）；
1.3以600rpm的转速在20℃下搅拌50-90min；
1.4再依次加入32.1mg (0.17 m mol) EDC.HCl和2.2mg (0.018 m mol)DMAP，氮气保护继续搅拌20-30小时；
1.5使用TLC点板检测反应过程；反应产物用硅胶柱层析纯化，使用二氯甲烷(DCM)：乙酸乙酯(EA)=2：1作为流动相，使用旋转蒸发仪（30℃）去除多余液体后即得PTX2。
通过核磁共振1H-NMR和UHPLC-Orbitrap HRMS检测反应产物，结果如图1和图2所示；从图中特征峰可以看出PTX2合成成功。
实施例2
本实施例提供制备空白的未载药的空白纳米胶束，本实施例中的纳米胶束优选为mPEG-PLGA空白纳米胶束，制备方法包括以下步骤：
1.1称取10mg载体材料mPEG-PLGA，溶解于4mL 四氢呋喃（THF）溶液中；
1.2将此溶液逐滴滴加到10mL剧烈搅拌的去离子水中，控制滴速15s/滴，滴加结束后继续搅拌48h；
1.3使用旋转蒸发仪在35℃下旋转蒸发20min以去除未挥发的THF；
1.4将此溶液以5000rmp离心5min除去未形成胶束的mPEG-PLGA；
1.5取上清液通过分子量3500~10000透析膜透析再次除去残余有机溶剂，即为mPEG-PLGA空白纳米胶束溶液。
实施例3
本实施例提供一种自组装的纳米载药胶束的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
1.1称取10mg的PTX2和10mg的TET溶解于10mL THF溶液中，制得含有1mg/mL PTX2和1mg/mL TET的THF溶液（紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液）；
1.2从中取出1mL紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液加入载体材料mPEG-PLGA，mPEG-PLGA、紫杉醇二聚体、粉防己碱的质量比为10:1:1；定容至4mL，得到混合溶液；
1.3将混合溶液逐滴加入到10mL剧烈搅拌的去离子水中，控制溶液滴速15s/滴，滴加结束后继续搅拌48h以挥发THF溶液；
1.4以500rpm的速度搅拌48h；
1.5在30℃条件下旋转蒸发20min，除未挥发的THF溶液；再以5000rpm的转速离心处理300s，除去未包覆的PTX2和TET;
1.6取上清液通过分子量3500~10000透析膜透析再次除去残余有机溶剂，即为mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束溶液。
实施例4
本实施例提供一种自组装的纳米载药胶的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
1.1称取10mg的PTX2和10mg的TET溶解于10mL THF溶液中，制得含有1mg/mL PTX2和1mg/mL TET的THF溶液（紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液）；
1.2从中取出1mL紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液加入载体材料mPEG-PLGA，mPEG-PLGA、紫杉醇二聚体、粉防己碱的质量比为30:1:1；定容至4mL，得到混合溶液；
1.3将混合溶液逐滴加入到24mL剧烈搅拌的去离子水中，控制溶液滴速10s/滴，滴加结束后继续搅拌45h以挥发THF溶液；
1.4以1000rpm的速度搅拌45h；
1.5在28℃条件下旋转蒸发25min，除未挥发的THF溶液；再以4000rpm的转速离心处理8min，除去未包覆的PTX2和TET;
1.6取上清液通过分子量3500~10000透析膜透析再次除去残余有机溶剂，即为mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束溶液。
实施例5
本实施例提供一种自组装的纳米载药胶的制备方法，该制备方法中的与有机溶剂选用乙腈（ACN）；该制备方法包括以下步骤：
1.1称取PTX2和TET溶解于乙腈ACN溶液中，制得含有PTX2和TET的ACN溶液（紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液）；
1.2取紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液加入载体材料mPEG-PLGA，mPEG-PLGA、紫杉醇二聚体、粉防己碱的质量比为15:2:1；得到混合溶液；
1.3将3倍于乙腈体积的去离子水逐滴加入到混合溶液中，控制溶液滴速12s/滴；
1.4并用分子量为3500-10000Da的透析袋进行透析，时间为24h，并间隔2h换水一次；
1.5然后用孔径为0.22μm的滤膜过滤，制备得到mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束溶液。
当然，实施例中也可以用pH值为7.4的PBS缓冲液替代去离子水。
实施例6
本实施例提供一种自组装的纳米载药胶的制备方法，该制备方法中的与有机溶剂选用乙腈（ACN）；该制备方法包括以下步骤：
1.1称取PTX2和TET溶解于乙腈ACN溶液中，制得含有PTX2和TET的ACN溶液（紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液）；
1.2取紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液加入载体材料mPEG-PLGA，mPEG-PLGA、紫杉醇二聚体、粉防己碱的质量比为15:2:1；得到混合溶液；
1.3用旋转蒸发仪除去乙腈，加入三倍于乙腈体积的去离子水；
1.4冰浴条件下超声处理，超声功率为50%，超声0.6s，停0.2s，总时间1min；
1.5采用5000rpm转速离心10min，去上清；
1.6用孔径为0.22的滤膜过滤，制备得到mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束溶液。
当然，实施例中也可以用pH值为7.4的PBS缓冲液替代去离子水。
实施例7
本实施例提供一种自组装的纳米载药胶的制备方法，该制备方法中的与有机溶剂选用乙腈（ACN）；该制备方法包括以下步骤：
1.1称取PTX2和TET溶解于乙腈ACN溶液中，制得含有PTX2和TET的ACN溶液（紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液）；
1.2取紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液加入载体材料mPEG-PLGA，mPEG-PLGA、紫杉醇二聚体、粉防己碱的质量比为10:2:1；得到混合溶液；
1.3用旋转蒸发仪在48-55℃范围内，蒸发除去乙腈，形成薄膜；
1.4然后加入3-5倍于乙腈体积的去离子水；
1.5在42-48条件下下水化1h，制备得到mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束溶液。
当然，实施例中也可以用pH值为7.4的PBS缓冲液替代去离子水。
实验例1
以实施例1和3的方法制备紫杉醇二聚体和mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束溶液，并测定mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束的粒径、多分散系数、稳定性、生物相容性和靶向性。
结果如图3、图4和图5所示，纳米载药胶束粒径为100-200nm，平均粒径为146nm，多分散系数0.08-0.11，最优的多分散系数为0.1；说明胶束颗粒分布均匀，呈单分散状态，而TEM显示其外观形貌圆整，大小均一，胶束颗粒之间无粘连。实验证明mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束在两周内保持胶束粒径和分散情况不发生较大变化。
体外释放实验结果如图6所示，实验表明，24h时，有30%的TET释放，达到最高浓度。在释放介质中加入模拟胞内还原条件的谷胱甘肽(GSH)后，48h时有87%的PTX2水解为PTX。
在测定生物相容性和靶向性实验中，还包括同制备mPEG-PLGA/PTX2纳米胶束作为对比。mPEG-PLGA和PTX2都可溶于DCM、THF等有机溶剂，可以通过溶剂挥发法制备mPEG-PLGA/PTX2纳米胶束。具体操作如下：称取10mg PTX2溶解于10mL THF溶液中，制得含有1mg/mL PTX2的THF溶液。从其中取出1mL此溶液(含有1mg PTX2)，加入一定量的载体材料mPEG-PLGA，并加入THF溶液至4mL，将此溶液(含有1mg PTX2和一定量mPEG-PLGA)逐滴滴加到10mL剧烈搅拌的去离子水中，控制溶液滴速15s/滴，滴加结束后继续搅拌48h以挥发THF溶液。使用旋转蒸发仪在30℃下旋转蒸发20min以去除未挥发的THF。将此溶液以5000rmp离心5min以除去未包覆的PTX2，取上清液通过分子量3500~10000透析膜透析再次除去残余有机溶剂，即为mPEG-PLGA/PTX2纳米胶束溶液。
生物相容性和靶向性实验结果如图7和图8所示，图7中A作为空白对照，使用空白载体；B用mPEG-PLGA/PTX2纳米胶束进行比较，C中选用本申请制备的mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束；在不同浓度不同作用时间对MCF-7细胞的抑制率。与相同浓度PTX的DMSO溶液相比，mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束对MCF-7细胞的抑制率与其基本一致，但mPEG-PLGA/PTX2/TET纳米胶束能实现控制释放，并具有更好的生物相容性和靶向性。而mPEG-PLGA 空白胶束对MCF-7细胞的抑制率很低，说明此载药材料对细胞无明显毒性。
以上所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。本申请的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本申请的范围，而是仅仅表示本申请的选定实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

Claims (10)

1.一种自组装的纳米载药胶束，其特征在于，所述纳米载药胶束包括两亲性的载体材料以及包覆于所述两亲性的载体材料内的还原条件敏感释药的抗肿瘤药物前药和P-糖蛋白抑制剂；所述纳米载药胶束粒径为100-200nm，多分散系数0.08-0.11。
2.根据权利要求1所述的自组装的纳米载药胶束，其特征在于，所述两亲性的载体材料为单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸、甲氧基聚乙二醇-聚乳酸、甲氧基聚乙二醇-聚己内酯或甲氧基聚乙二醇-聚三亚甲基碳酸酯;所述抗肿瘤药物为紫杉醇二聚体，所述P-糖蛋白抑制剂为粉防己碱。
3.权利要求1-2所述任一项所述的自组装的纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
将紫杉醇二聚体和粉防己碱溶解于有机溶剂，得到紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液；
在所述紫杉醇二聚体-粉防己碱有机溶液中加入两亲性的载体材料混匀，得到混合溶液；将所述混合液与去离子水或缓冲液按照1-5:3-6的比例混合，得到纳米胶束原溶液，由所述纳米胶束原溶液制备得到所述自组装的纳米载药胶束。
4.根据权利要求3所述的自组装的纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为四氢呋喃、乙腈或二甲基亚砜；所述缓冲液是pH值为7.4的PBS缓冲液；
所述混合溶液中所述两亲性的载体材料、所述紫杉醇二聚体和所述粉防己碱的质量比为5-30:1-2:1-2。
5.根据权利要求4所述的自组装的纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为四氢呋喃；所述混合液滴加入所述去离子水或所述缓冲液，所述混合液滴加的速度为10-15s/滴；并以300-3000rpm的速度搅拌45-55h；所述分离纯化前还包括在28-33℃条件下旋转蒸发18-25min，并以4750-5500rpm的转速离心处理280-350s；所述分离纯化的方法是采用3500-10000分子量的透析膜进行透析；或
所述有机溶剂为乙腈时；所述去离子水或所述缓冲液与所述混合溶液的体积比为3-5:1；所述分离纯化的方法包括透析过滤或超声过滤；所述透析过滤的透析膜分子量为3500-10000，透析时间为24h，且间隔两小时换水一次，所述透析过滤的滤膜孔径为0.22μm；所述超声过滤的超声功率为50%，超声0.6s，停0.2s，总时间1min；所述超声过滤的滤膜孔径为0.22μm。
6.根据权利要求5所述的自组装的纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙腈时；得到所述纳米胶束原溶液前包括在48-55℃条件下旋转蒸发，形成纳米载药胶束薄膜；所述纳米胶束薄膜与3-5倍所述乙腈体积的去离子水，并在42-48℃条件下水浴水化50-70min，制得所述自组装的纳米载药胶束。
7.根据权利要求3所述的自组装的纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，所述紫杉醇二聚体的制备包括：
将紫杉醇溶解于甲烷的液态氯代物中，并加入3,3’-二硫代二丙酸、1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲基氨基吡啶搅拌反应50-90min；
再次加入1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲基氨基吡啶并在保护气氛中搅拌反应20-30h；
纯化得到紫杉醇二聚体。
8.如权利要求1-2任一项所述的自组装的纳米载药胶束在制备抑制肿瘤生长的药物中的应用。
9.一种药物缀合物，其特征在于，所述药物缀合物包括抗体、连接基和如权利要求1-2任一项所述的自组装的纳米载药胶束。
10.根据权利要求9所述的药物缀合物，其特征在于，所述抗体为抗Her2抗体，抗LAG3抗体，抗PD-1抗体，抗PD-L1抗体，抗CD20抗体，抗CLDN18.1抗体。
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