CN108117559A - 从发酵茶中分离泰德诺a和泰德诺b的混合物的方法 - Google Patents

从发酵茶中分离泰德诺a和泰德诺b的混合物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种从发酵茶中分离泰德诺A和泰德诺B的混合物的方法，包括以下步骤：A)提供含有泰德诺A和泰德诺B的发酵茶；B)将所述发酵茶进行开水浸提或有机溶剂浸提，以得到浸提液；C)用有机溶剂对所述浸提液进行萃取，以得到含有泰德诺A和泰德诺B的提取物；D)对所述提取物进行硅胶柱分离，以得到粗分离物；和E)对所述粗分离物进行大孔树脂柱分离，其中采用20％体积至60％体积的乙醇或甲醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，从而得到泰德诺A和泰德诺B的混合物。本发明的方法获得的所述混合物含有高纯度的泰德诺A和泰德诺B，并且操作简单，成本低，步骤少，易于大量生产。

Description

从发酵茶中分离泰德诺A和泰德诺B的混合物的方法
技术领域
本发明属于化学技术领域，具体而言，涉及从发酵茶中分离泰德诺A和泰德诺B的混合物的方法。
背景技术
山茶属植物茶及其加工产品如绿茶、红茶、普洱茶等中均含有具有良好生物活性的儿茶素类化合物，如从绿茶中分离出的没食子儿茶素3-O-没食子酸(EGCG)、从红茶中分离出的茶黄素类成分，均具有良好的抗氧化、抗衰老等活性。除此之外，茶产品中还含有许多具有降脂、抗菌、抗癌的儿茶素衍生物的生物成分，都是农业和医药研究的热点。
泰德诺A(Teadenol A)和泰德诺B(Teadenol B)均为白色粉末，其分子式为C14H12O6，其精确分子量为276.0638，结构式分别如下式(I)和(II)所示：
泰德诺A和泰德诺B是最初由日本学者从发酵茶中分离得到的儿茶素类衍生物，具有显著的减肥和降血脂功效。但现有技术中仍然缺乏有效的从发酵茶中从发酵茶中分离泰德诺A和泰德诺B的混合物的方法。
发明内容
为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供了从发酵茶中分离泰德诺A和泰德诺B的混合物的方法。
具体而言，本发明提供了：
(1)一种从发酵茶中分离泰德诺A和泰德诺B的混合物的方法，所述泰德诺A的结构式如下式(I)所示，泰德诺B的结构式如下式(II)所示：
其中所述方法包括以下步骤：
A)提供含有泰德诺A和泰德诺B的发酵茶；
B)将所述发酵茶进行开水浸提或有机溶剂浸提，以得到浸提液；
C)用有机溶剂对所述浸提液进行萃取，以得到含有泰德诺A和泰德诺B的提取物；
D)对所述提取物进行硅胶柱分离，以得到粗分离物；和
E)对所述粗分离物进行大孔树脂柱分离，其中采用20％体积至60％体积的乙醇水溶液或甲醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，从而得到泰德诺A和泰德诺B的混合物。
(2)根据(1)所述的方法，其中在步骤D)中，采用体积比为(10-30):1的氯仿:甲醇洗脱液进行洗脱，以得到所述粗分离物。
(3)根据(1)所述的方法，其中在步骤D)中，所述硅胶柱为200-300目的硅胶柱。
(4)根据(1)所述的方法，其中在步骤B)中，所述开水浸提或有机溶剂浸提在30000-50000HZ的超声波下进行2-4次，每次10-50分钟。
(5)根据(1)所述的方法，其中在步骤B)中，按所述发酵茶与开水的质量比为1:(1-3)的比例混合所述发酵茶和开水，以进行所述开水浸提；其中所述开水的温度为80℃至100℃。
(6)根据(1)所述的方法，其中在步骤B)中，按所述发酵茶与所述有机溶剂的质量比为1:(1-3)的比例混合所述发酵茶和所述有机溶剂，以进行所述有机溶剂浸提；其中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇和丙酮。
(7)根据(1)所述的方法，其中步骤C)包括：
C1)用1,2-二氯乙烷或氯仿对所述浸提液进行萃取，以得到水相和有机相；其中所述1,2-二氯乙烷或氯仿与所述浸提液的体积比为1:(1-3)；
C2)用乙酸乙酯对步骤C1)得到的水相进行萃取，以得到所述含有泰德诺A和泰德诺B的提取物；其中所述乙酸乙酯与所述水相的体积比为1:(1-3)。
(8)根据(1)所述的方法，其中步骤A)包括将毛茶潮水至含水量为基于毛茶干重计为大于40重量％至65重量％，将所得经潮水的毛茶灭菌，然后接种黑曲霉单一菌种，经发酵培养后得到含有泰德诺A和泰德诺B的发酵茶。
(9)根据(8)所述的方法，其中所述发酵培养在28-40℃下进行10-25天。
(10)根据(8)所述的方法，其中所述毛茶选自晒青毛茶、毛绿茶、毛白茶、毛黄茶和毛青茶。
本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：
1.本发明提供了从发酵茶中分离泰德诺A和B的混合物的方法，并优化了工艺和条件，该方法操作简单，成本低，步骤少，易于大量生产，获得的泰德诺A和泰德诺B的混合物的纯度高，所使用的有机试剂易于回收。
2.进一步地，本发明优化了用微生物发酵茶的工艺和条件，使得发酵茶中含有更高的泰德诺A和泰德诺B，从而进一步有利于分离得到纯度高的产物。
生物材料保藏信息
本发明所述的黑曲霉(Aspergillus niger)CGMCC NO.12763菌株已于2016年7月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC NO.12763。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
本发明的发明人通过大量的理论研究和试验摸索，优化了从发酵茶中拆分并分离泰德诺A和B的工艺和条件，使得获得的产物纯度高，并且工艺操作简单，易于工艺大生产。
具体而言，本发明提供了一种从发酵茶中分离泰德诺A和泰德诺B的混合物的方法，所述泰德诺A的结构式如下式(I)所示，泰德诺B的结构式如下式(II)所示：
其中所述方法包括以下步骤：
A)提供含有泰德诺A和泰德诺B的发酵茶；
B)将所述发酵茶进行开水浸提或有机溶剂浸提，以得到浸提液；
C)用有机溶剂对所述浸提液进行萃取，以得到含有泰德诺A和泰德诺B的提取物；
D)对所述提取物进行硅胶柱分离，以得到粗分离物；和
E)对所述粗分离物进行大孔树脂柱分离，其中采用20％体积至60％体积的乙醇水溶液或甲醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，从而得到泰德诺A和泰德诺B的混合物。
通过核磁共振C谱、H谱、DEPT谱、HMBC、HMQC和TOCOSY谱分析，证明本发明获得的泰德诺A和泰德诺B与日本学者发现的Teadenol A和Teadenol B相同。
本领域技术人员可以理解的是，在步骤A)和步骤B)之间，还可以增加将所述发酵茶粉碎的步骤。其中，优选粉碎至30-60目。
本发明的发明人进一步优化了本发明方法的工艺条件。
在步骤E)中，优选洗脱2-3倍柱子体积；更优选采用30-50体积％的乙醇水溶液进行洗脱。
优选地，在步骤D)中，采用体积比为(10-30):1，更优选15:1的氯仿:甲醇洗脱液进行洗脱，以得到所述粗分离物。还优选地，所述硅胶柱为200-300目的硅胶柱。在优选的实施方案中，先用上述洗脱液洗脱1-1.5倍柱子体积以除去杂质，然后继续洗脱2-3倍柱子体积，从而得到所述粗分离物。本领域技术人员可以理解的是，可以将得到的粗分离物合并浓缩。
在步骤B)中，所述开水浸提或有机溶剂浸提优选在30000-50000HZ的超声波下进行2-4次，每次10-50分钟，更优选进行3次，每次30分钟。
在进行开水浸提时，优选按所述发酵茶与开水的质量比为1:(1-3)的比例混合所述发酵茶和开水，该比例更优选为1:3。
在本发明中，开水优选是指温度为80℃至100℃的水。
在进行有机溶剂浸提时，按所述发酵茶与所述有机溶剂的质量比为1:(1-3)的比例混合所述发酵茶和所述有机溶剂，该比例更优选为1:3。此步所用的有机溶剂优选选自甲醇、乙醇和丙酮。
优选地，所述步骤C)包括：
C1)用1,2-二氯乙烷或氯仿对所述浸提液进行萃取(优选萃取3次)，以得到水相和有机相；其中所述1,2-二氯乙烷或氯仿与所述浸提液的体积比为1:(1-3)，更优选为1:1；和
C2)用乙酸乙酯对步骤C1)得到的水相进行萃取(优选取3次)，以得到所述含有泰德诺A和泰德诺B的提取物；其中所述乙酸乙酯与所述水相的体积比为1:(1-3)，更优选为1:1。
在本发明一个具体的实施方案中，步骤C)包括，将步骤B)中各次获得的浸提液过滤并合并滤液，向滤液中按1,2-二氯乙烷与滤液的体积比为1:1加入1,2-二氯乙烷进行萃取，共萃取3次，得到水相和有机相；所得水相继续用乙酸乙酯按体积比1:1进行萃取，共萃取3次，合并有机相并浓缩，获得所述含有泰德诺A和泰德诺B的提取物。
本发明还进一步优化了用微生物发酵茶的工艺和条件，使得发酵茶中含有更高的泰德诺A和泰德诺B。
优选地，步骤A)包括将毛茶潮水至含水量为基于毛茶干重计为大于40重量％至65重量％，将所得经潮水的毛茶灭菌，然后接种黑曲霉单一菌种，经发酵培养后得到含有泰德诺A和泰德诺B的发酵茶。
本文所用的术语“潮水”是指对茶叶人为加水至一定含水量。
本文所用的术语“晒青毛茶”和“毛茶”均是本领域的常用术语，本领域的技术人员理解并知晓这些术语的含义，故不赘述。
优选地，将毛茶潮水至含水量为基于茶叶干重计为50重量％至60重量％。该含水量使所得发酵茶的泰德诺A和泰德诺B的含量最高。
优选地，可以以大于或等于105个的孢子量接种所述黑曲霉菌种，例如以105数量级的孢子量接种。
所述发酵培养优选在28-40℃下进行10-25天。所述发酵温度更优选为30-37℃(更优选35-37℃)，在此温度区间内，黑曲霉生长最为旺盛。所述发酵时间更优选为15-20天，在此时间内发酵完全，有益成分聚集较多。
优选地，灭菌在110-121℃下进行10-30分钟，优选进行15-20分钟。灭菌时间过短容易造成灭菌不彻底，时间过长容易破坏茶叶中的有益成分。
优选地，在发酵培养的过程中，在第3-10天时将茶叶与菌体混匀一次。
优选地，在发酵培养之后，将所得发酵茶在40-60℃下烘干。优选烘干至含水量低于基于茶叶干重计为10％。
在本发明的方法中，所用的黑曲霉可以是市售的，优选来自传统普洱茶渥堆发酵，经分离纯化培养后所得，安全卫生有保障。所述黑曲霉生长过程中易产生黑色孢子，在20-40℃下生长良好。所述的黑曲霉可以使用已于2016年7月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏的保藏编号为CGMCC NO.12763的黑曲霉(Aspergillus niger)菌株。优选地，本发明所用黑曲霉菌种来自单一菌株，例如为该CGMCC NO.12763菌株。
黑曲霉菌种可以通过以下方法提供：将毛茶潮水至含水量为基于毛茶干重计为10-30重量％，然后灭菌，从而提供菌种培养基；将黑曲霉接种于该菌种培养基中，培养3-7天(也可以待孢子完全覆盖菌种培养基)，从而提供黑曲霉菌种。其中，黑曲霉的接种量可以为大于或等于105个孢子量，例如以105数量级的孢子量接种。灭菌可以在115-121℃下进行10-30分钟。优选第，将毛茶潮水至含水量为基于茶叶干重计为20-30重量％，这更有利于黑曲霉的生长和产生孢子。培养时间优选为4-5天，这样孢子的活力最好。
所述毛茶优选选自晒青毛茶、毛绿茶、毛白茶、毛黄茶和毛青茶，其中最优选晒青毛茶。
本发明方法的发酵方式包括但不限于三角瓶发酵、浅盘式发酵、发酵槽发酵、罐式发酵。
本发明还提供了由本发明所述的方法分离得到的泰德诺A和泰德诺B的混合物。
以下通过例子的方式进一步解释或说明本发明的内容，但这些例子不应被理解为对本发明的保护范围的限制。
实施例
实施例所用材料和仪器的来源如下：
黑曲霉得自中科院北京微生物研究所
硅胶柱得自临沂海祥化工公司，200-300目
大孔树脂得自三菱公司，型号为HP20
Dubhe C-18柱得自汉邦公司
高效液相色谱得自Waters，型号为2695
实施例一
A、原料发酵：称取1kg晒青毛茶，潮水至基于干重的含水量为55重量％，115℃灭菌15分钟，按接种量2×105的孢子量接入黑曲霉，35℃培养15天，取出茶叶，在50℃的条件下烘干至含水量8％；
B、粉碎：将发酵后的茶叶粉碎至50目；
C、开水浸提：将粉碎的茶叶按与开水的质量比为1:3加入90℃的开水，40000HZ超声提取3次，每次30分钟，过滤后合并滤液；
D、1,2-二氯乙烷萃取：将上述C步骤中的滤液按体积比1:1加入1,2-二氯乙烷进行萃取，总共萃取3次，留下水相，有机相回收；
E、乙酸乙酯萃取：将上述D步骤中的水相继续用乙酸乙酯按体积比1:1进行萃取，总共萃取3次，取有机相，合并后浓缩，获得乙酸乙酯提取物113g；
F、硅胶柱分离：将上述E步骤中获得乙酸乙酯提取物上硅胶柱进行分离，先以氯仿:甲醇＝15:1(体积比)洗脱1柱子体积，然后再以此体积比洗脱2倍柱子体积，收集此2倍柱子体积的洗脱液，浓缩干后获得硅胶粗分离物25.2g；
G、大孔树脂分离：将上述F步骤中获得的硅胶粗分离物经大孔树脂分离，以20％乙醇水溶液洗脱，每个梯度洗脱2.5倍柱子体积，收集洗脱液，浓缩干后得到红褐色粉末状精分离物17.6g，经HPLC检测(下述试验例1)，泰德诺A和泰德诺B的总含量约为70重量％，实测分子量为276.06，并且经过核磁共振检测，确认精分离物为泰德诺A和泰德诺B。核磁共振结果如下：
表1.泰德诺A的1H、13C NMR数据及2D NMR的分析结果(溶剂：氘代二甲亚砜(DMSO-d6))
表2泰德诺B的1H、13C NMR数据及2D NMR的分析结果(溶剂：氘代二甲亚砜(DMSO-d6))
实施例二
A、原料发酵：称取1kg晒青毛茶，潮水至基于干重的含水量为60％，115灭菌15分钟，按接种量2×105的孢子量接入黑曲霉，35℃培养15天，取出茶叶，在50℃的条件下烘干至含水量8％；
B、粉碎：将发酵后的茶叶粉碎至50目；
C、开水浸提：将粉碎的茶叶按与开水的质量比为1:3加入90℃的开水，30000HZ超声提取3次，每次30分钟，过滤后合并滤液；
D、1,2-二氯乙烷萃取：将上述C步骤中的滤液按体积比1:1加入1,2-二氯乙烷萃取，总共萃取3次，留下水相，有机相回收；
E、乙酸乙酯萃取：将上述D步骤中的水相继续用乙酸乙酯按体积比1:1进行萃取，总共萃取3次，取有机相，合并后浓缩，获得乙酸乙酯提取物118g；
F、硅胶柱分离：将上述E步骤中获得乙酸乙酯提取物上硅胶柱进行分离，先以氯仿:甲醇＝15:1(体积比)洗脱1柱子体积，然后再以此体积比洗脱2倍柱子体积，收集此2倍柱子体积的洗脱液，浓缩干后获得硅胶粗分离物27.5g；
G、大孔树脂分离：将上述F步骤中获得的硅胶粗分离物经大孔树脂分离，以30％乙醇水溶液洗脱，每个梯度洗脱2.5倍柱子体积，收集洗脱液，浓缩干后得到红褐色粉末状精分离物18.5g，经HPLC检测(下述试验例1)，泰德诺A和泰德诺B的总含量约为70重量％，实测分子量为276.06，并且经过核磁共振检测(同实施例1)，确认精分离物为泰德诺A和泰德诺B。
实施例三
A、原料发酵：称取1kg晒青毛茶，潮水至基于干重的含水量为60％，115灭菌15分钟，按接种量2×105的孢子量接入黑曲霉，35℃培养20天，取出茶叶，在50℃的条件下烘干至含水量8％；
B、粉碎：将发酵后的茶叶粉碎至50目；
C、开水浸提：将粉碎的茶叶按与开水的质量比为1:3加入90℃的开水，50000HZ超声提取3次，每次30分钟，过滤后合并滤液；
D、1,2-二氯乙烷萃取：将上述C步骤中的滤液按体积比1:1加入1,2-二氯乙烷萃取，总共萃取3次，留下水相，有机相回收；
E、乙酸乙酯萃取：将上述D步骤中的水相继续用乙酸乙酯按体积比1:1进行萃取，总共萃取3次，取有机相，合并后浓缩，获得乙酸乙酯提取物121g；
F、硅胶柱分离：将上述E步骤中获得乙酸乙酯提取物上硅胶柱进行分离，先以氯仿:甲醇＝15:1(体积比)洗脱1柱子体积，然后再以此体积比洗脱2倍柱子体积，收集此2倍柱子体积的洗脱液，浓缩干后获得硅胶粗分离物28.6g；
G、大孔树脂分离：将上述F步骤中获得的硅胶粗分离物经大孔树脂分离，以40％乙醇水溶液洗脱，每个梯度洗脱2.5倍柱子体积，收集洗脱液，浓缩干后得到红褐色粉末状精分离物19.2g，经HPLC检测(下述试验例1)，泰德诺A和泰德诺B的总含量约为70重量％，实测分子量为276.06，并且经过核磁共振检测(同实施例1)，确认精分离物为泰德诺A和泰德诺B。
实施例四
A、原料发酵：称取1kg晒青毛茶，潮水至基于干重的含水量为50％，115灭菌15分钟，按接种量2×105的孢子量接入黑曲霉，35℃培养20天，取出茶叶，在50℃的条件下烘干至含水量8％；
B、粉碎：将发酵后的茶叶粉碎至50目；
C、开水浸提：将粉碎的茶叶按与开水的质量比为1:3加入90℃的开水，40000HZ超声提取3次，每次30分钟，过滤后合并滤液；
D、1,2-二氯乙烷萃取：将上述C步骤中的滤液按体积比1:1加入1,2-二氯乙烷萃取，总共萃取3次，留下水相，有机相回收；
E、乙酸乙酯萃取：将上述D步骤中的水相继续用乙酸乙酯按体积比1:1进行萃取，总共萃取3次，取有机相，合并后浓缩，获得乙酸乙酯提取物114g；
F、硅胶柱分离：将上述E步骤中获得乙酸乙酯提取物上硅胶柱进行分离，先以氯仿:甲醇＝15:1(体积比)洗脱1柱子体积，然后再以此体积比洗脱2倍柱子体积，收集此2倍柱子体积的洗脱液，浓缩干后获得硅胶粗分离物25.5g；
G、大孔树脂分离：将上述F步骤中获得的硅胶粗分离物经大孔树脂分离，以50％乙醇水溶液洗脱，每个梯度洗脱2.5倍柱子体积，收集洗脱液，浓缩干后得到红褐色粉末状精分离物17.1g，经HPLC检测(下述试验例1)，泰德诺A和泰德诺B的总含量约为70重量％，实测分子量为276.06，并且经过核磁共振检测(同实施例1)，确认精分离物为泰德诺A和泰德诺B。
实施例五
A、原料发酵：称取1kg晒青毛茶，潮水至基于干重的含水量为65％，115灭菌15分钟，按接种量2×105的孢子量接入黑曲霉，35℃培养20天，取出茶叶，在50℃的条件下烘干至含水量8％；
B、粉碎：将发酵后的茶叶粉碎至50目；
C、开水浸提：将粉碎的茶叶按与开水的质量比为1:3加入90℃的开水，40000HZ超声提取3次，每次30分钟，过滤后合并滤液；
D、1,2-二氯乙烷萃取：将上述C步骤中的滤液按体积比1:1加入1,2-二氯乙烷萃取，总共萃取3次，留下水相，有机相回收；
E、乙酸乙酯萃取：将上述D步骤中的水相继续用乙酸乙酯按体积比1:1进行萃取，总共萃取3次，取有机相，合并后浓缩，获得乙酸乙酯提取物108g；
F、硅胶柱分离：将上述E步骤中获得乙酸乙酯提取物上硅胶柱进行分离，先以氯仿:甲醇＝15:1(体积比)洗脱1柱子体积，然后再以此体积比洗脱2倍柱子体积，收集此2倍柱子体积的洗脱液，浓缩干后获得硅胶粗分离物23.5g；
G、大孔树脂分离：将上述F步骤中获得的硅胶粗分离物经大孔树脂分离，以60％乙醇水溶液洗脱，每个梯度洗脱2.5倍柱子体积，收集洗脱液，浓缩干后得到红褐色粉末状精分离物15.4g，经HPLC检测(下述试验例1)，泰德诺A和泰德诺B的总含量约为70重量％，实测分子量为276.06，并且经过核磁共振检测(同实施例1)，确认精分离物为泰德诺A和泰德诺B。
试验例1
将实施例G步骤中的精分离物用HPLC分析，其中HPLC的条件为：柱子用Dubhe C-18制备柱，用甲醇与水的体积比为5:5的甲醇/水混合溶液作为流动相，流速为1ml/分钟。由HPLC峰面积推算泰德诺A和泰德诺B的总含量。
按照实施例1的方法进行以下例子，不同之处和评价结果列于表3中。
表3

Claims (10)

1.一种从发酵茶中分离泰德诺A和泰德诺B的混合物的方法，所述泰德诺A的结构式如下式(I)所示，泰德诺B的结构式如下式(II)所示：
其中所述方法包括以下步骤：
A)提供含有泰德诺A和泰德诺B的发酵茶；
B)将所述发酵茶进行开水浸提或有机溶剂浸提，以得到浸提液；
C)用有机溶剂对所述浸提液进行萃取，以得到含有泰德诺A和泰德诺B的提取物；
D)对所述提取物进行硅胶柱分离，以得到粗分离物；和
E)对所述粗分离物进行大孔树脂柱分离，其中采用20％体积至60％体积的乙醇水溶液或甲醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，从而得到泰德诺A和泰德诺B的混合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤D)中，采用体积比为(10-30):1的氯仿:甲醇洗脱液进行洗脱，以得到所述粗分离物。
3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤D)中，所述硅胶柱为200-300目的硅胶柱。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤B)中，所述开水浸提或有机溶剂浸提在30000-50000HZ的超声波下进行2-4次，每次10-50分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤B)中，按所述发酵茶与开水的质量比为1:(1-3)的比例混合所述发酵茶和开水，以进行所述开水浸提；其中所述开水的温度为80℃至100℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤B)中，按所述发酵茶与所述有机溶剂的质量比为1:(1-3)的比例混合所述发酵茶和所述有机溶剂，以进行所述有机溶剂浸提；其中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇和丙酮。
7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤C)包括：
C1)用1,2-二氯乙烷或氯仿对所述浸提液进行萃取，以得到水相和有机相；其中所述1,2-二氯乙烷或氯仿与所述浸提液的体积比为1:(1-3)；
C2)用乙酸乙酯对步骤C1)得到的水相进行萃取，以得到所述含有泰德诺A和泰德诺B的提取物；其中所述乙酸乙酯与所述水相的体积比为1:(1-3)。
8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤A)包括将毛茶潮水至含水量为基于毛茶干重计为大于40重量％至65重量％，将所得经潮水的毛茶灭菌，然后接种黑曲霉单一菌种，经发酵培养后得到含有泰德诺A和泰德诺B的发酵茶。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述发酵培养在28-40℃下进行10-25天。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述毛茶选自晒青毛茶、毛绿茶、毛白茶、毛黄茶和毛青茶。
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