CN108020613A - 一种中药组合物中薄荷脑的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明要求保护一种中药组合物中薄荷脑的含量测定方法，该中药组合物由以下药材组成：连翘、金银花、板蓝根、苦杏仁、薄荷脑、鱼腥草、大黄、广藿香、绵马贯众、红景天、麻黄、甘草、石膏，该含量测定方法，采用气相色谱法测定方中薄荷脑的含量，可以有效的控制方中薄荷脑的含量，该方法可节约能源，降低分析成本。

Description

一种中药组合物中薄荷脑的含量测定方法
技术领域
本发明涉及到一种中药组合物中薄荷脑的含量测定方法。
背景技术
气相色谱法是将分析样品在进样口中气化后，由载气带入色谱柱，通过对欲检测混合物中组分有不同保留性能的色谱柱，使各组分分离，依次导入检测器，以得到各组分的检测信号。按照导入检测器的先后次序，经过对比，可以区别出是什么组分，根据峰高度或峰面积可以计算出各组分含量。
薄荷脑系由薄荷的叶和茎中所提取，白色晶体，为薄荷和欧薄荷精油中的主要成分。在世界上，印度是主要的天然薄荷生产国。薄荷脑和消旋薄荷脑均可用作牙膏；香水；饮料和糖果等的赋香剂。在医药上用作刺激药，作用于皮肤或粘膜，有清凉止痒作用；内服可作为驱风药，用于头痛及鼻；咽；喉炎症等。其酯用于香料和药物。目前气相色谱在中药的质量控制方面应用较多，特别是在挥发性成分检测方面的应用。复方中药的质量控制和评价是中药现代化的关键问题之一，也是中药研究的难点和热点，特别是易挥发性化学成分的控制，中药质量控制的目的是保证中药的有效性和安全性。中药质量控制就是监测中药的药效物质、有毒物质及其变化规律，是依据一系列质量标准对中药生产过程中的每一个环节进行质量检测与控制，而中药质量评价的技术、方法和策略的研究是制订科学、合理、先进的质量标准的基础。
本发明要求保护一种中药组合物中薄荷脑的含量测定方法，该中药组合物由以下药材组成：连翘、金银花、板蓝根、苦杏仁、薄荷脑、鱼腥草、大黄、广藿香、绵马贯众、红景天、麻黄、甘草、石膏，该含量测定方法，采用气相色谱法测定方中薄荷脑的含量，可以有效的控制方中薄荷脑的含量，该方法可节约能源，降低分析成本，而现有技术中并没有公开该技术内容。
发明内容
本发明提供一种中药组合物的含量测定方法。
该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200-300 、麻黄60-100 、大黄40-60 、鱼腥草200-300、金银花200-300 、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100 、甘草60-100 、石膏200-300，所述薄荷脑的含量测定方法如下：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.2-0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷20-30 mL，顺逆时针递次振摇约20-50秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25μm)；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持5-20 min；检测器温度为300-400℃；进样口温度为300-400℃；载气为氮气，流速：0.8-1.2 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：0.5-2 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5-2 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
本发明所述中药组合物制剂是由如下重量份的原料药制成：
连翘 200 、金银花 300 、板蓝根 200、大黄 40 、广藿香 60、绵马贯众 300 、红景天100 、薄荷脑 9 、麻黄 60 、苦杏仁 100、鱼腥草 200 、甘草 100 、石膏200。
本发明所述中药组合物制剂优选的重量份如下：
连翘 300 、金银花 200 、板蓝根 300 、大黄 60、广藿香100、绵马贯众 200、红景天60、薄荷脑 5 、麻黄100 、苦杏仁 60 、鱼腥草 300、甘草 60 、石膏 300。
本发明所述中药组合物制剂优选的重量份如下：
连翘 278 、金银花 294 、板蓝根 285、大黄 55、广藿香 95、绵马贯众 290 、红景天87 、薄荷脑 8.5、麻黄 88 、苦杏仁 80、鱼腥草 284、甘草 95 、石膏277。
本发明所述中药组合物制剂优选的重量份如下：
连翘 255、金银花255、板蓝根255、大黄51、广藿香85、绵马贯众255、红景天85、 薄荷脑7.5、麻黄 85、苦杏仁 85 、鱼腥草 255 、甘草 85、石膏255。
本发明所述中药组合物制剂的制备方法为：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤（5）所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（6）所得颗粒，密闭，混匀，压片或者装胶囊、或者装袋。
本发明所述中药组合物制剂的制备方法为：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷25 mL，顺逆时针递次振摇约30秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25μm)；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持10 min；检测器温度为300℃；进样口温度为300℃；载气为氮气，流速：1 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：1 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
优选的本发明所述含量测定方法如下：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷20 mL，顺逆时针递次振摇约20秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25μm)；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持5-20 min；检测器温度为350℃；进样口温度为350℃；载气为氮气，流速：0.8 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：0.5 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
优选的本发明所述含量测定方法如下：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷30 mL，顺逆时针递次振摇约50秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25μm)；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持5-20 min；检测器温度为400℃；进样口温度为400℃；载气为氮气，流速： 1.2 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：2 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
试验例
用实施例1制备的样品，对本发明中药组合物的含量测定方法，从多个方面评价其可行性，评价方法如下：
1仪器与试药
仪器：PerKinElmer Clarus 680气相色谱仪、AL204型和AB135-S电子天平、Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm)、数控超声波清洗器（型号：KQ-500DB，500W，40KHZ）、0.22 μm微孔滤膜（天津市津腾实验设备有限公司）。
试剂：正己烷（色谱纯，美国Fisher)）；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯（分析纯，北京化工厂）。
药品：薄荷脑对照品（购SIGMA-ALORICH，批号：M2772-100G-A，纯度为99%），本发明中药组合物（石家庄以岭药业股份有限公司提供，批号：A1601015)
2色谱条件
色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm)；柱温为程序升温：初始温度98°C，保持12 min，以每分钟8°C的速率升至140°C，保持2.5 min，再以140°C的速率升至280°C，保持10 min；检测器温度为300°C；进样口温度为300°C；载气为氮气，流速：1 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：1 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）。
供试品溶液和对照品溶液的制备
3.1供试品溶液制备方法考察
3.1.1提取溶媒的考察
取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，不同提取溶媒各平行2份，分别精密吸取提取溶媒石油醚（60~90℃）、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯50 mL，顺逆时针递次振摇约30秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
分别吸取供试品溶液1 µL，注入气相色谱仪，并以薄荷脑对照品做对照，比较供试品溶液中薄荷脑的百分含量，结果显示以正己烷为提取溶媒时，待测成分的百分含量较高，故选择正己烷作为提取溶媒。见表1。
提取方法的考察
取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，冷浸与超声提取各平行2份。冷浸提取：精密吸取正己烷50 ml，冷浸20 min后，顺逆时针递次振摇约30秒钟；超声提取：精密吸取正己烷50 ml，超声处理前称重，超声处理20 min后，加正己烷补足重量。取适量各提取方法下的溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
分别吸取供试品溶液1 µL，注入气相色谱仪，并以薄荷脑对照品做对照，比较供试品溶液中薄荷脑的百分含量，结果显示两种提取方法效果相当，考虑到冷浸提取方便，故选择冷浸提取。见表2。
提取时间的考察
取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，冷浸提取时间分别为0 min、20 min、40 min，不同提取时间各平行2份，顺逆时针递次振摇约30秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
分别吸取供试品溶液1 µL，注入气相色谱仪，并以薄荷脑对照品做对照，比较供试品溶液中薄荷脑的百分含量，结果显示三种提取时间下薄荷脑的百分含量相当，故选择冷浸0 min。见表3。
溶媒用量的考察
取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3g，精密称定，置塞锥形瓶中，不同溶媒量各平行2份，精密吸取溶媒量分别为25 mL、50 mL、75 mL，顺逆时针递次振摇约30秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
分别吸取供试品溶液1 µL，注入气相色谱仪，并以薄荷脑对照品做对照，比较供试品溶液中薄荷脑的百分含量，结果显示25 mL、50 mL、75 mL提取效果相当，故选择溶媒量为25 mL。见表4。
供试品溶液制备方法的确定
根据上述试验结果，最终确定供试品溶液的制备方法为：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷25 mL，顺逆时针递次振摇约30秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
对照品溶液的制备
取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得。
专属性
吸取溶剂、阴性对照溶液、对照品溶液、供试品溶液，按照确定的色谱条件进行检测，结果阴性对照对所测成分无干扰，专属性良好。（溶剂、阴性对照、对照品、供试品色谱图见附图1）。
线性关系考察
精密称取薄荷脑对照品100.51 mg，置50 mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容至刻度，摇匀，作为储备液，再从中分别精密量取1 mL、1.5 mL、2 mL、2.5 mL、3 mL、3.5 mL置于25 mL的容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，分别制成浓度为0.0804 mg/mL、0.1206 mg/mL、0.1608mg/mL、0.2010 mg/mL、0.2412mg/mL、0.2814 mg/mL的系列对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，检测峰面积，以进样浓度（mg/mL）为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归，结果表明薄荷脑在0.0804 mg/mL～0.2814 mg/mL范围内线性良好，回归方程为Y= 48583.7941X + 142.5821（R2=0.9996），结果见表5和图1。
检测限和定量限的确定
将薄荷脑0.0804 mg/ml的对照品溶液进一步稀释成28.944 μg/mL、24.120 μg/mL、19.296 μg/mL、17.688 μg/mL、16.080 μg/mL、12.060 μg/mL、8.040μg/mL、6.432 μg/mL、4.824 μg/mL、3.216 μg/mL的系列对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，记录信号强度与噪音强度的比值，将信号强度和噪音强度之比等于3时的浓度作为检测限，将信号强度与噪音强度之比等于10时的浓度作为定量限。薄荷脑的检测限和定量限分别为4.824 µg/mL和17.688 µg/mL。
方法学考察
7.1 精密度考察
取本发明中药组合物适量，研细，混匀，取0.3 g，精密称定，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，取薄荷脑对照品溶液（0.2292 mg/mL），按确定的色谱条件连续进样6次，记录薄荷脑的峰面积，计算其RSD，结果见表6。
表6结果显示供试品溶液和对照品溶液中薄荷脑的峰面积RSD小于2%，表明仪器精密度良好。
稳定性试验
取本发明中药组合物适量，研细，取0.3 g，精密称定，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按照确定的色谱条件，分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h进样，记录薄荷脑的峰面积，计算其RSD，考察溶液的稳定性，结果见表7。
由表7结果显示，供试品溶液中薄荷脑峰面积在24 h内RSD小于3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
重复性试验
取本发明中药组合物适量，研细，分别按供试品溶液制备方法中取样量的80%、100%和120%取样，即分别取约0.24、0.3、0.36 g，各平行3份，共9份样品，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按照确定的色谱条件测定，计算供试品溶液中薄荷脑的含量（%），计算其RSD，结果见表8。
由表8结果显示，9份供试品溶液中薄荷脑的平均含量为1.86%，其含量的RSD小于3%，表明该方法具有良好的重复性。
加样回收率试验
按取样量0.3 g的二分之一，即0.15 g称取样品，精密称定，平行9份，取已知含量的薄荷脑对照品溶液，按照样品含量的80%、100%、120%的比例分别加入样品中，各平行三份，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按照确定的色谱条件测定，计算本发明中药组合物中薄荷脑的加样回收率，计算其RSD，结果见表9。
由表9结果显示，9份供试品溶液中薄荷脑的回收率平均值为97.68%，RSD为2.49%，表明该法回收率良好。
系统耐用性试验
7.5.1 载气流速对薄荷脑含量测定的影响
取本发明中药组合物适量，研细，混匀，取0.3 g，精密称定，平行取样2份，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，固定其他色谱条件，分别在载气流速为0.80、1.00和1.20mL/min进行测定（每份样品平行进样两针），并以薄荷脑对照品做对照，计算本发明中药组合物中薄荷脑的的含量，比较载气流速变化对测定结果的影响，结果见表10。
由上述结果可知，载气流速变化后，薄荷脑含量测定结果的RSD值小于3%，说明载气流速的变化，对样品含量测定结果影响较小。
检测器温度变化对薄荷脑含量测定的影响
取供试品溶液，固定其他色谱条件，分别在FID检测器温度为295°C、300°C和305°C进行测定，并以薄荷脑对照品做对照，计算本发明中药组合物中薄荷脑的的含量，比较FID检测器温度变化对测定结果的影响，结果见表11。
由上述结果可知，检测器温度变化后，薄荷脑含量测定结果的RSD值小于3%，说明检测器温度的变化，对样品含量测定结果影响较小。
进样口温度变化对薄荷脑含量测定的影响
取供试品溶液，固定其他色谱条件，分别在进样口温度为295°C、300°C和305°C进行测定，并以薄荷脑对照品做对照，计算本发明中药组合物中薄荷脑的的含量，比较进样口温度变化对测定结果的影响，结果见表12。
由上述结果可知，进样口温度变化后，薄荷脑含量测定结果的RSD值小于3%，说明进样口温度的变化，对样品含量测定结果影响小。
不同毛细管柱对薄荷脑含量测定的影响
取供试品溶液，固定其他色谱条件，分别用Agilent DB-5、Agilent HP-5等不同的毛细管柱进行测定，并以薄荷脑对照品做对照，计算本发明中药组合物中薄荷脑的含量，比较不同的色谱柱对测定结果的影响，结果见表13。
由上述结果可知，选择同一品牌不同型号的毛细管柱，薄荷脑含量测定结果的RD值小于3%，说明此含量测定方法的耐用性好。
批本发明中药组合物中薄荷脑的含量测定结果
用所制定的含量测定方法，对10批本发明中药组合物中所含薄荷脑进行了测定，结果见表14。
本发明建立了本发明中药组合物的薄荷脑的含量测定方法，由以上实验结果可知，本方法具有良好的精密度和稳定性，以及重复性，为提高该中药组合物的质量控制提供一种新方法。
附图说明
图1：薄荷脑的标准曲线
图2：空白试剂色谱图
图3：阴性对照溶液色谱图
图4：对照品溶液色谱图
图5：供试品溶液色谱图。
具体实施方式
实施例1
按比例称取：连翘 200g、金银花 300g、板蓝根 200g、大黄 40g、广藿香 60g、绵马贯众300g、红景天 100g、薄荷脑 9g、麻黄 60g、苦杏仁 100g、鱼腥草 200g、甘草 100g、石膏200g，按照以下工艺提取：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.15的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，装胶囊，即得。
薄荷脑含量测定方法：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷25 mL，顺逆时针递次振摇约30秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25μm)；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持10 min；检测器温度为300℃；进样口温度为300℃；载气为氮气，流速：1 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：1 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
结论：结果薄荷脑分离度较好，可以用于控制该中药组合物的质量。
实施例2
按比例称取：连翘 300g、金银花 200g、板蓝根 300g、大黄 60g、广藿香100g、绵马贯众200g、红景天 60g、薄荷脑 5g、麻黄100g、苦杏仁 60g、鱼腥草 300g、甘草 60g、石膏 300g，按照以下工艺提取：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤（5）所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤 （6）所得颗粒，压片，即得。
薄荷脑含量测定方法：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷20 mL，顺逆时针递次振摇约20秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25μm)；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持5-20 min；检测器温度为350℃；进样口温度为350℃；载气为氮气，流速：0.8 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：0.5 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
结 论：结果薄荷脑分离度较好，可以用于控制该中药组合物的质量。
实施例3
原料药配方为：连翘 278g、金银花 294g、板蓝根 285g、大黄 55g、广藿香 95g、绵马贯众290g 、红景天 87g、薄荷脑 8.5g、麻黄 88g、苦杏仁 80g、鱼腥草 284g、甘草 95g、石膏277g，按照以下工艺提取：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.13的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.18的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，装袋，即得。
含量测定方法：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷30 mL，顺逆时针递次振摇约50秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25μm)；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持5-20 min；检测器温度为400℃；进样口温度为400℃；载气为氮气，流速： 1.2 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：2 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
结果：结果薄荷脑分离度较好，可以用于控制该中药组合物的质量。
实施例4
原料药配方为：按比例称取：连翘 255g、金银花255g、板蓝根255g、大黄51g、广藿香85g、绵马贯众255g、红景天85g、 薄荷脑 7.5g、麻黄 85g、苦杏仁 85g、鱼腥草 255g、甘草85g、石膏255g，按照以下工艺提取：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.14的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.19的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤(5)所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤(6)所得颗粒，装胶囊，即得。
含量测定方法：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷20 mL，顺逆时针递次振摇约40秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱(30 m × 0.25 mm, 0.25μm)；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持5-20 min；检测器温度为350℃；进样口温度为350℃；载气为氮气，流速： 1.1 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：1 μL；燃气比例：空气-氢气（450:45）；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
结果：结果薄荷脑分离度较好，可以用于控制该中药组合物的质量。

Claims (9)

1.一种中药组合物中薄荷脑的含量测定方法，该中药组合物制剂由如下重量份的原料药制成：连翘200-300 、麻黄60-100 、大黄40-60 、鱼腥草200-300、金银花200-300 、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100 、甘草60-100 、石膏200-300，其特征在于所述薄荷脑的含量测定方法如下：
供试品溶液制备：取本品内容物，研细，混匀，取0.2-0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷20-30 mL，顺逆时针递次振摇约20-50秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱30 m × 0.25 mm, 0.25μm；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持5-20 min；检测器温度为300-400℃；进样口温度为300-400℃；载气为氮气，流速：0.8-1.2 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：0.5-2 μL；燃气比例：空气-氢气450:45；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5-2 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述中药组合物制剂是由如下重量份的原料药制成：
连翘 200 、金银花 300 、板蓝根 200、大黄 40 、广藿香 60、绵马贯众 300 、红景天100 、薄荷脑 9 、麻黄 60 、苦杏仁 100、鱼腥草 200 、甘草 100 、石膏200。
3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述中药组合物制剂由下列重量份的原料药制成：
连翘 300 、金银花 200 、板蓝根 300 、大黄 60、广藿香100、绵马贯众 200、红景天60、薄荷脑 5 、麻黄100 、苦杏仁 60 、鱼腥草 300、甘草 60 、石膏 300。
4.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述中药组合物制剂由下列重量份的原料药制成：
连翘 278 、金银花 294 、板蓝根 285、大黄 55、广藿香 95、绵马贯众 290 、红景天87 、薄荷脑 8.5、麻黄 88 、苦杏仁 80、鱼腥草 284、甘草 95 、石膏277。
5.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述中药组合物制剂由下列重量份的原料药制成：
连翘 255、金银花255、板蓝根255、大黄51、广藿香85、绵马贯众255、红景天85、 薄荷脑7.5、麻黄 85、苦杏仁 85 、鱼腥草 255 、甘草 85、石膏255。
6.如权利要求1-5任一项所述的含量测定方法，其特征在于所述中药组合物制剂的制备方法为：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，备用；
(6) 将步骤（5）所得干膏粉加入适当药学上可接受的辅料制粒；
(7) 将薄荷脑、步骤（2）所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤（6）所得颗粒，密闭，混匀，压片或者装胶囊、或者装袋。
7.如权利要求1-5任一项所述的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法如下：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷25 mL，顺逆时针递次振摇约30秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱30 m × 0.25 mm, 0.25μm；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持10 min；检测器温度为300℃；进样口温度为300℃；载气为氮气，流速：1 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：1 μL；燃气比例：空气-氢气450:45；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
8.如权利要求1-5任一项所述的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法如下：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷20 mL，顺逆时针递次振摇约20秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱30 m × 0.25 mm, 0.25μm；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持5 min；检测器温度为350℃；进样口温度为350°C；载气为氮气，流速：0.8 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：0.5 μL；燃气比例：空气-氢气450:45；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
9.如权利要求1-5任一项所述的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法如下：
供试品溶液制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷30 mL，顺逆时针递次振摇约50秒钟，取适量溶液，0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
对照品溶液的制备：取薄荷脑对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL含0.23 mg薄荷脑溶液，即得；
色谱条件：色谱柱：Agilent J&W Scientific HP-5毛细管柱30 m × 0.25 mm, 0.25μm；柱温为程序升温：初始温度98℃，保持12 min，以每分钟8℃的速率升至140℃，保持2.5min，再以140℃的速率升至280℃，保持20 min；检测器温度为400℃；进样口温度为400℃；载气为氮气，流速： 1.2 mL/min；分流进样，分流比：25:1；进样量：2 μL；燃气比例：空气-氢气450:45；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2 µL，注入气相色谱仪，测定，即得。
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