CN107854418A - 一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法 - Google Patents

一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107854418A
CN107854418A CN201711104768.3A CN201711104768A CN107854418A CN 107854418 A CN107854418 A CN 107854418A CN 201711104768 A CN201711104768 A CN 201711104768A CN 107854418 A CN107854418 A CN 107854418A
Authority
CN
China
Prior art keywords
umbilical cord
stem cells
mesenchymal stem
human umbilical
cord mesenchymal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711104768.3A
Other languages
English (en)
Inventor
祁守岗
胡建华
王晶晶
程琴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Nine Saint Biological Polytron Technologies Inc
Original Assignee
Nanjing Nine Saint Biological Polytron Technologies Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Nine Saint Biological Polytron Technologies Inc filed Critical Nanjing Nine Saint Biological Polytron Technologies Inc
Priority to CN201711104768.3A priority Critical patent/CN107854418A/zh
Publication of CN107854418A publication Critical patent/CN107854418A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/36—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/65—Collagen; Gelatin; Keratin; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/67—Vitamins
    • A61K8/673—Vitamin B group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/805—Corresponding aspects not provided for by any of codes A61K2800/81 - A61K2800/95

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法，以解决如何有效诱导人脐带间充质干细胞大量合成和分泌具有针对性促进表皮和真皮层细胞增殖、分裂、分化，并促进胶原纤维、网状纤维、弹性纤维的形成，调节胶原蛋白和粘多糖的分泌功能的间充质干细胞外泌体的问题。本发明提供的乳霜包括人脐带间充质干细胞外泌体提取液和乳霜基础配方，质量比为（1:20）~（3:10）；人脐带间充质干细胞外泌体提取液为P2~P5代人脐带间充质干细胞经饥饿培养后，用表皮细胞生长因子刺激后所得。所制得的乳霜达到改善肤质，阻止皮肤细胞衰老，恢复皮肤正常结构和生理功能，改善萎缩皮肤的缺水状态，滋润皮肤组织的效果。

Description

一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法
技术领域
本发明涉及干细胞领域，具体涉及一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法。
背景技术
随着人们物质生活水平的逐渐提高，生活的富裕使得人们开始追求更高层面的生活。爱美之心人皆有之，所有人都希望自己能够永远年轻、漂亮，皮肤作为人体最大的组织器官，覆盖于人体的外表，是美学美容研究的主要组织器官。
如何延缓和阻止皮肤细胞的衰老既是美容抗衰老的根本问题，也是皮肤保健的关键。随年龄增长，基底细胞分裂能力逐渐降低，皮肤生长因子水平降低，作用减弱，细胞凋亡随年龄增长而增加，成纤维细胞逐渐减少，成纤维细胞分泌的胶原蛋白也在逐渐减少，从而表现出皮肤的弹性降低、出现皱纹等现象。
目前，市面上的外用化妆品只是通过遮掩缺陷或是在皮肤表层起作用来达到美丽的目的，但是只是治标，而不能治本。
干细胞(stem cells, SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。随着干细胞的功能不断的被发现，干细胞在生命科学的基础研究与临床应用中起着越来越重要的作用，干细胞在细胞治疗、组织器官修复、发育生物学、药物学等领域有着极为广阔的应用前景。
间充质干细胞（mesenchymal stromal cells,MSCs）是干细胞的一个研究分支，间充质干细胞是来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，MSCs最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。
研究表明，间充质干细胞一个强大的功能就是分泌众多的营养性细胞因子。现在越来越多的研究倾向于认为间充质干细胞主要通过旁分泌机制来分泌多种细胞因子作用于其他细胞来发挥作用。外泌体是一种直径在30-100nm的脂质双分子层囊泡，最早在1983年研究羊的网织红细胞成熟过程中分泌的囊泡而提出，其可携带细胞特异表达的蛋白、脂质和核酸等物质，然后通过与细胞的接触直接将所携带的物质传递给邻近或者远距离的细胞。目前大量研究表明，间充质干细胞来源的外泌体可以通过其内容的蛋白、RNA成分胞间转移，发挥与间充质干细胞相类似的组织修复、免疫抑制、调节免疫功能等作用。与细胞治疗相比较，外泌体性质更稳定，保存运输方便，没有移植细胞带来的免疫排斥反应和肿瘤形成风险，因此有望成为一种新的治疗策略。
因此如何取得能够针对性促进表皮和真皮层细胞（特别是成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞）增殖、分裂、分化，新生细胞增多，使皮肤增厚，逐渐恢复皮肤正常结构和生理功能；同时促进胶原纤维、网状纤维、弹性纤维的形成，调节胶原蛋白和粘多糖的分泌，维持皮肤组织中水分含量和电解质代谢，改善萎缩皮肤的缺水状态，滋润皮肤组织的间充质干细胞外泌体，并且如何将其应用于皮肤表面，安全、高效的延缓和阻止皮肤细胞的衰老，成为当前的研究重点。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法。
本发明的技术方案如下：
一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，包括人脐带间充质干细胞外泌体提取液和乳霜基础配方；
所述人脐带间充质干细胞外泌体提取液为P2~P5代人脐带间充质干细胞经饥饿培养后，用表皮细胞生长因子刺激后所得；
所述人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方质量比为（1:20）~（3:10）；
所述基础配方包括质量百分比如下的成分：
保湿剂 12~15%
柔润剂 7~12%
皮肤调理剂 5-10%
乳化剂 4~7%
防腐剂 1~3%
PH调节剂 0.5~1%
余量为水；
所述皮肤调理剂包括胶原蛋白、表皮细胞生长因子、透明质酸、维生素B3、阿魏酸中的一种或几种。
进一步的，所述保湿剂包括甘油、甘氨酸、精氨酸、乳酸、丙二醇、丁二醇、山梨醇、透明质酸钠、海藻提取物、生育酚中的一种或几种。
进一步的，所述柔润剂包括环己硅氧烷、角鲨烷、异十二烷、油醇油酸酯、油醇、胆甾醇、氢化椰油、氢化棕榈油、鲸蜡硬酸酯醇、鲸蜡醇乙基己酸脂、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、二苯基甲硅烷氧基苯基聚三甲基硅氧烷中的一种或几种。
进一步的，所述乳化剂包括硬脂醇、辛基十二醇、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-8二异硬脂酸酯、聚山梨醇酯-20、PEG-7橄榄油羧酸钠、月桂醇聚醚-7中的一种或几种；
进一步的，所述防腐剂包括苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯、甲基氯异噻唑啉酮中的一种或几种；所述PH调节剂包括柠檬酸、柠檬酸钠、偏磷酸钠、碳酸钠、氢氧化钠中的一种或几种。
本发明还提供了一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：配制DMEM/F12培养液，所述培养液含质量浓度20% FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；
S2：将脐带75%乙醇浸泡4min，PBS浸泡清洗3次，剔除血管后剪成1-2cm2小块，浸没于质量浓度0.1％的Ⅱ型胶原酶，37℃消化50-70分钟,加入0.25%胰酶，37℃消化10-20分钟，加入血清终止胰酶消化，将前述细胞组织液过滤，离心，弃去上层清液，取下层细胞；
S3：将S2得到的下层细胞加S1配制的DMEM/F12培养液进行细胞计数，达到106~107/ml后原代培养，按（1~5）×106cells/ml接种到T25或T75细胞培养瓶，每个细胞培养瓶中DMEM/F12培养液体积为5~20 ml，置于CO2体积比浓度5%的37℃培养箱中培养，3d后换液去除非贴壁细胞，以后每3~4d半量换液1次，细胞达80%融合时，用质量浓度0.25%胰酶于37℃下消化，以1×104cells/ml传代扩增，取繁殖能力强的P2~P5代的人脐带间充质干细胞；
S4：将S3得到的P2~P5代的人脐带间充质干细胞置于O2体积比浓度为 21％的37℃培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养，直到细胞达60～70％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养12-16h，将无血清的饥饿培养液换为含有10ng/ml表皮细胞生长因子的DMEM/F12培养液，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液300g~10000g梯度离心60-120min，将离心所得上清液用0.22um滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液；
S5：将S4得到的人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方按质量比（1:20）~（3:10）混合，得到人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜。
进一步的，S2中所述细胞组织液过滤，为经100-200目筛网过筛，所述离心时间为10-20min，转速为1200rpm。
进一步的，S4中所述P2~P5代的人脐带间充质干细胞为处于对数生长期的细胞。
进一步的，所述得到的人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜于-18~4℃保存。
本发明具有以下有益效果：
（1）脐带间充质干细胞取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、活力强，便于扩增和传代，同时又没有配型、排异等问题，极其适合于临床研究和应用。
（2）取P2~P5代的人脐带间充质干细胞，采用无血清培养使细胞处于饥饿状态，再加入表皮细胞生长因子诱导，培养至细胞处于对数生长期，能够有效诱导人脐带间充质干细胞大量合成和分泌具有针对性促进表皮和真皮层细胞（特别是成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞）增殖、分裂、分化，并促进胶原纤维、网状纤维、弹性纤维的形成，调节胶原蛋白和粘多糖的分泌，维持皮肤组织中水分含量和电解质代谢功能的间充质干细胞外泌体。
（3）外泌体体积较小，直径通常只有30-100nm，相对于干细胞，外泌体更容易通过皮肤表层细胞之间的间隙，有利于吸收。
（4）乳霜中加入皮肤调理剂，如胶原蛋白、表皮细胞生长因子、透明质酸、维生素B3等，为天然保湿成分，防止皮肤水分的流失。而阿魏酸由中药材中萃取而得，来源包括川芎、当归等中药材，成分安全，且阿魏酸分子中有双键与酚的结构，有清除自由基的效果。皮肤调理剂与人脐带间充质干细胞外泌体共同作用与皮肤细胞，使外泌体促进下新生成的表皮、真皮层细胞具有更好的细胞状态，达到改善肤质，阻止皮肤细胞衰老，恢复皮肤正常结构和生理功能，改善萎缩皮肤的缺水状态，滋润皮肤组织的功效。
具体实施方式
实施例1
配制DMEM/F12培养液，培养液含质量浓度20% FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；
将脐带75%乙醇浸泡4min，PBS浸泡清洗3次，剔除血管后剪成1cm2小块，浸没于质量浓度0.1％的Ⅱ型胶原酶，37℃消化50分钟,加入0.25%胰酶，37℃消化10分钟，加入血清终止胰酶消化，将前述细胞组织液过滤，离心，弃去上层清液，取下层细胞；
将下层细胞加DMEM/F12培养液进行细胞计数，达到106/ml后原代培养，按5×106cells/ml接种到T75细胞培养瓶，每个细胞培养瓶中DMEM/F12培养液体积为20 ml，置于CO2体积比浓度5%的37℃培养箱中培养，3d后换液去除非贴壁细胞，以后每4d半量换液1次，10d时细胞达80%融合时，用质量浓度0.25%胰酶于37℃下消化，以1×104cells/ml传代扩增，取P2~P5代的人脐带间充质干细胞；
P2代的人脐带间充质干细胞置于O2体积比浓度为 21％的37℃培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养，直到细胞达70％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养12h，将无血清的饥饿培养液换为含有10ng/ml表皮细胞生长因子的DMEM/F12培养液，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液300g~10000g梯度离心60-120min，将离心所得上清液用0.22um滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液；
将人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方按质量比1:20混合，基础配方包括质量百分比如下的成分：
保湿剂 15%
柔润剂 7%
皮肤调理剂 10%
乳化剂 4%
防腐剂 1%
PH调节剂 0.7%
余量为水；
皮肤调理剂为胶原蛋白、表皮细胞生长因子、透明质酸、阿魏酸；保湿剂为甘油、甘氨酸、精氨酸；柔润剂为环己硅氧烷、角鲨烷、异十二烷、油醇油酸酯；乳化剂为硬脂醇、辛基十二醇、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯；防腐剂为苯氧乙醇；PH调节剂为柠檬酸钠；得到人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜并于-18℃保存。
实施例2
配制DMEM/F12培养液，培养液含质量浓度20% FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；
将脐带75%乙醇浸泡4min，PBS浸泡清洗3次，剔除血管后剪成2cm2小块，浸没于质量浓度0.1％的Ⅱ型胶原酶，37℃消化70分钟,加入0.25%胰酶，37℃消化20分钟，加入血清终止胰酶消化，将前述细胞组织液过滤，离心，弃去上层清液，取下层细胞；
将下层细胞加DMEM/F12培养液进行细胞计数，达到107/ml后原代培养，按1×106cells/ml接种到T2细胞培养瓶，每个细胞培养瓶中DMEM/F12培养液体积为5 ml，置于CO2体积比浓度5%的37℃培养箱中培养，3d后换液去除非贴壁细胞，以后每3d半量换液1次，12d时细胞达80%融合时，用质量浓度0.25%胰酶于37℃下消化，以1×104cells/ml传代扩增，取P2~P5代的人脐带间充质干细胞；
P5代的人脐带间充质干细胞置于O2体积比浓度为 21％的37℃培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养，直到细胞达60％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养16h，将无血清的饥饿培养液换为含有10ng/ml表皮细胞生长因子的DMEM/F12培养液，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液300g~10000g梯度离心60-120min，将离心所得上清液用0.22um滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液；
将人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方按质量比3:10混合，基础配方包括质量百分比如下的成分：
保湿剂 12%
柔润剂 12%
皮肤调理剂 5%
乳化剂 7%
防腐剂 3%
PH调节剂 1%
余量为水；
皮肤调理剂为胶原蛋白、表皮细胞生长因子、维生素B3、阿魏酸；保湿剂为丙二醇、丁二醇、山梨醇；柔润剂为油醇、胆甾醇、氢化椰油；乳化剂为聚山梨醇酯-20、PEG-7橄榄油羧酸钠；防腐剂为甲基氯异噻唑啉酮；PH调节剂为碳酸钠、氢氧化钠。得到人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜并于-10℃保存。
实施例3
配制DMEM/F12培养液，培养液含质量浓度20% FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；
将脐带75%乙醇浸泡4min，PBS浸泡清洗3次，剔除血管后剪成1.5cm2小块，浸没于质量浓度0.1％的Ⅱ型胶原酶，37℃消化60分钟,加入0.25%胰酶，37℃消化15分钟，加入血清终止胰酶消化，将前述细胞组织液过滤，离心，弃去上层清液，取下层细胞；
将下层细胞加DMEM/F12培养液进行细胞计数，达到106/ml后原代培养，按3×106cells/ml接种到T75细胞培养瓶，每个细胞培养瓶中DMEM/F12培养液体积为15 ml，置于CO2体积比浓度5%的37℃培养箱中培养，3d后换液去除非贴壁细胞，以后每4d半量换液1次，10d时细胞达80%融合，用质量浓度0.25%胰酶于37℃下消化，以1×104cells/ml传代扩增，取P2~P5代的人脐带间充质干细胞；
P3代的人脐带间充质干细胞置于O2体积比浓度为 21％的37℃培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养，直到细胞达65％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养14h，将无血清的饥饿培养液换为含有10ng/ml表皮细胞生长因子的DMEM/F12培养液，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液300g~10000g梯度离心60-120min，将离心所得上清液用0.22um滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液；
将人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方按质量比1:10混合，基础配方包括质量百分比如下的成分：
保湿剂 14%
柔润剂 10%
皮肤调理剂 8%
乳化剂 6%
防腐剂 2%
PH调节剂 0.5%
余量为水；
皮肤调理剂为胶原蛋白、表皮细胞生长因子、维生素B3、阿魏酸；保湿剂为透明质酸钠、海藻提取物、生育酚；柔润剂为鲸蜡醇乙基己酸脂、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯；乳化剂为甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯；防腐剂为羟苯丙酯；PH调节剂为柠檬酸；得到人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜并于4℃保存。
本发明制得的人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜具有以下特点：
（1）脐带间充质干细胞取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、活力强，便于扩增和传代，同时又没有配型、排异等问题，极其适合于临床研究和应用。
（2）取P2~P5代的人脐带间充质干细胞，采用无血清培养使细胞处于饥饿状态，再加入表皮细胞生长因子诱导，培养至细胞处于对数生长期，能够有效诱导人脐带间充质干细胞大量合成和分泌具有针对性促进表皮和真皮层细胞（特别是成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞）增殖、分裂、分化，并促进胶原纤维、网状纤维、弹性纤维的形成，调节胶原蛋白和粘多糖的分泌，维持皮肤组织中水分含量和电解质代谢功能的间充质干细胞外泌体。
（3）外泌体体积较小，直径通常只有30-100nm，相对于干细胞，外泌体更容易通过皮肤表层细胞之间的间隙，有利于吸收。
（4）乳霜中加入皮肤调理剂，如胶原蛋白、表皮细胞生长因子、透明质酸、维生素B3等，为天然保湿成分，防止皮肤水分的流失。而阿魏酸由中药材中萃取而得，来源包括川芎、当归等中药材，成分安全，且阿魏酸分子中有双键与酚的结构，有清除自由基的效果。皮肤调理剂与人脐带间充质干细胞外泌体共同作用与皮肤细胞，使外泌体促进下新生成的表皮、真皮层细胞具有更好的细胞状态，达到改善肤质，阻止皮肤细胞衰老，恢复皮肤正常结构和生理功能，改善萎缩皮肤的缺水状态，滋润皮肤组织的功效。

Claims (8)

1.一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，包括人脐带间充质干细胞外泌体提取液和乳霜基础配方；
所述人脐带间充质干细胞外泌体提取液为P2~P5代人脐带间充质干细胞经饥饿培养后，用表皮细胞生长因子刺激后所得；
所述人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方质量比为（1:20）~（3:10）；
所述基础配方包括质量百分比如下的成分：
保湿剂 12~15%
柔润剂 7~12%
皮肤调理剂 5-10%
乳化剂 4~7%
防腐剂 1~3%
PH调节剂 0.5~1%
余量为水；
所述皮肤调理剂包括胶原蛋白、表皮细胞生长因子、透明质酸、维生素B3、阿魏酸中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述保湿剂包括甘油、甘氨酸、精氨酸、乳酸、丙二醇、丁二醇、山梨醇、透明质酸钠、海藻提取物、生育酚中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述柔润剂包括环己硅氧烷、角鲨烷、异十二烷、油醇油酸酯、油醇、胆甾醇、氢化椰油、氢化棕榈油、鲸蜡硬酸酯醇、鲸蜡醇乙基己酸脂、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、二苯基甲硅烷氧基苯基聚三甲基硅氧烷中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述乳化剂包括硬脂醇、辛基十二醇、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-8二异硬脂酸酯、聚山梨醇酯-20、PEG-7橄榄油羧酸钠、月桂醇聚醚-7中的一种或几种；
根据权利要求1所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述防腐剂包括苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯、甲基氯异噻唑啉酮中的一种或几种；所述PH调节剂包括柠檬酸、柠檬酸钠、偏磷酸钠、碳酸钠、氢氧化钠中的一种或几种。
5.根据权利要求1-5任一项所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：配制DMEM/F12培养液，所述培养液含质量浓度20% FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；
S2：将脐带75%乙醇浸泡4min，PBS浸泡清洗3次，剔除血管后剪成1-2cm2小块，浸没于质量浓度0.1％的Ⅱ型胶原酶，37℃消化50-70分钟,加入0.25%胰酶，37℃消化10-20分钟，加入血清终止胰酶消化，将前述细胞组织液过滤，离心，弃去上层清液，取下层细胞；
S3：将S2得到的下层细胞加S1配制的DMEM/F12培养液进行细胞计数，达到106~107/ml后原代培养，按（1~5）×106cells/ml接种到T25或T75细胞培养瓶，每个细胞培养瓶中DMEM/F12培养液体积为5~20 ml，置于CO2体积比浓度5%的37℃培养箱中培养，3d后换液去除非贴壁细胞，以后每3~4d半量换液1次，细胞达80%融合时，用质量浓度0.25%胰酶于37℃下消化，以1×104cells/ml传代扩增，取P2~P5代的人脐带间充质干细胞；
S4：将S3得到的P2~P5代的人脐带间充质干细胞置于O2体积比浓度为 21％的37℃培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养，直到细胞达60～70％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养12-16h，将无血清的饥饿培养液换为含有10ng/ml表皮细胞生长因子的DMEM/F12培养液，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液300g~10000g梯度离心60-120min，将离心所得上清液用0.22um滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液；
S5：将S4得到的人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方按质量比（1:20）~（3:10）混合，得到人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜。
6.根据权利要求6所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，S2中所述细胞组织液过滤，为经100-200目筛网过筛，所述离心时间为10-20min，转速为1200rpm。
7.根据权利要求6所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，S4中所述P2~P5代的人脐带间充质干细胞为处于对数生长期的细胞。
8.根据权利要求6所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述得到的人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜于-18~4℃保存。
CN201711104768.3A 2017-11-10 2017-11-10 一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法 Pending CN107854418A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711104768.3A CN107854418A (zh) 2017-11-10 2017-11-10 一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711104768.3A CN107854418A (zh) 2017-11-10 2017-11-10 一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107854418A true CN107854418A (zh) 2018-03-30

Family

ID=61701617

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711104768.3A Pending CN107854418A (zh) 2017-11-10 2017-11-10 一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107854418A (zh)

Cited By (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108703938A (zh) * 2018-08-07 2018-10-26 深圳市莱利赛生物科技有限公司 一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜
CN109097326A (zh) * 2018-08-10 2018-12-28 广东唯泰生物科技有限公司 一种制备间充质干细胞外泌体的方法及其应用
CN109172859A (zh) * 2018-09-06 2019-01-11 上海长海医院 人干细胞来源外泌体复合外源性透明质酸在制备皮肤创面缺损修复药物或材料中的应用
CN109295001A (zh) * 2018-11-14 2019-02-01 姜大奎 一种脐带间充质干细胞复合外泌体及其制备方法
CN109793758A (zh) * 2019-02-18 2019-05-24 江苏拓弘生物科技有限公司 间充质干细胞外泌体微针贴剂及其制备和应用
CN110151677A (zh) * 2019-06-12 2019-08-23 山东兴瑞生物科技有限公司 基因修饰的间充质干细胞提取物、提取方法及在皮肤紧致和抗衰老方面的应用
CN110179679A (zh) * 2019-06-25 2019-08-30 贵州医科大学 含脐带间充质干细胞培养液提取物的生物养颜修护面膜精华、面膜及其制备方法
CN110302134A (zh) * 2019-07-23 2019-10-08 西安本妆童颜医学美容有限公司 一种含人脐带间充质干细胞外泌体眼霜制剂及其制备方法
CN110448522A (zh) * 2019-09-06 2019-11-15 天津珂芬迪斯生物医药科技有限公司 一种冻肽颈霜及其制备方法
CN110522727A (zh) * 2019-09-30 2019-12-03 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 一种含促渗肽的干细胞生长因子醇质体及其制备方法
CN110548001A (zh) * 2019-09-06 2019-12-10 沈阳细胞治疗工程技术研发中心有限公司 一种含脐带间充质干细胞外泌体的修复抗衰护肤品
CN110804607A (zh) * 2019-11-18 2020-02-18 深圳市润科生物科技有限公司 一种高浓度人源间充质干细胞裂解液的制备方法
CN110840819A (zh) * 2019-11-18 2020-02-28 深圳市人民医院 干细胞外泌体凝胶延缓衰老的应用及制备
CN110934815A (zh) * 2019-12-24 2020-03-31 盛世荣恩生物科技有限公司 一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法
CN111088226A (zh) * 2019-12-30 2020-05-01 广东唯泰生物科技有限公司 一种胎盘间充质干细胞外泌体的制备和储存方法
CN111110699A (zh) * 2020-04-01 2020-05-08 北京岳昊科技发展有限公司 多肽偶联物与表皮干细胞外泌体的组合在药品和化妆品中的应用
CN111437244A (zh) * 2020-04-15 2020-07-24 北京本真工坊生物科技有限公司 干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法和产品
CN112516067A (zh) * 2020-12-09 2021-03-19 广州美邦生物科技有限公司 一种含脐带间充质干细胞外泌体的组合物及其应用
CN112852724A (zh) * 2021-01-05 2021-05-28 首玺(广州)医疗科技有限责任公司 一种含干细胞活性因子的美容组合物及其制备方法和应用
CN113116743A (zh) * 2021-05-25 2021-07-16 郑州来复医学科技有限公司 一种含有细胞活性因子的面部抗衰乳液及其制备方法
CN113388584A (zh) * 2020-03-10 2021-09-14 路宝特（南京）环保科技有限公司 一种促进皮肤组织损伤后修复用工程化外泌体的制备方法及其应用
CN113662906A (zh) * 2021-08-19 2021-11-19 蓝海细胞(北京)生物科技有限公司 一种干细胞外泌体抗衰精华液制备方法
CN114231483A (zh) * 2021-12-21 2022-03-25 广州市新甡命科技有限公司 一种干细胞外泌体及其在促进生发中的应用
CN114469855A (zh) * 2022-01-18 2022-05-13 吉林省真承药业有限公司 一种人脐带间充质干细胞诱导分化为成纤维细胞组合应用技术
CN114533935A (zh) * 2022-02-28 2022-05-27 浙江卫未生物医药科技有限公司 一种用于解决青春痘的细胞因子敷料及其制备方法
CN116421543A (zh) * 2023-06-13 2023-07-14 成都康景生物科技有限公司 促人皮肤成纤维细胞生长的组合物及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104382827A (zh) * 2014-11-28 2015-03-04 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 人羊膜间充质干细胞外泌体的用途
US20150190429A1 (en) * 2012-07-18 2015-07-09 Universitaet Duisburg-Essen Use of Preparations Comprising Exosomes Derived From Mesenchymal Stem Cells (MSCs) in the Prevention and Therapy of Inflammatory Conditions
CN107245472A (zh) * 2017-06-08 2017-10-13 黄兵 一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法、使用方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150190429A1 (en) * 2012-07-18 2015-07-09 Universitaet Duisburg-Essen Use of Preparations Comprising Exosomes Derived From Mesenchymal Stem Cells (MSCs) in the Prevention and Therapy of Inflammatory Conditions
CN104382827A (zh) * 2014-11-28 2015-03-04 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 人羊膜间充质干细胞外泌体的用途
CN107245472A (zh) * 2017-06-08 2017-10-13 黄兵 一种人间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法、使用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中华人民共和国卫生部: "《化妆品卫生规范》", 31 January 2007 *

Cited By (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108703938A (zh) * 2018-08-07 2018-10-26 深圳市莱利赛生物科技有限公司 一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜
CN109097326A (zh) * 2018-08-10 2018-12-28 广东唯泰生物科技有限公司 一种制备间充质干细胞外泌体的方法及其应用
CN109172859A (zh) * 2018-09-06 2019-01-11 上海长海医院 人干细胞来源外泌体复合外源性透明质酸在制备皮肤创面缺损修复药物或材料中的应用
CN109295001A (zh) * 2018-11-14 2019-02-01 姜大奎 一种脐带间充质干细胞复合外泌体及其制备方法
CN109793758A (zh) * 2019-02-18 2019-05-24 江苏拓弘生物科技有限公司 间充质干细胞外泌体微针贴剂及其制备和应用
CN110151677A (zh) * 2019-06-12 2019-08-23 山东兴瑞生物科技有限公司 基因修饰的间充质干细胞提取物、提取方法及在皮肤紧致和抗衰老方面的应用
CN110179679A (zh) * 2019-06-25 2019-08-30 贵州医科大学 含脐带间充质干细胞培养液提取物的生物养颜修护面膜精华、面膜及其制备方法
CN110302134A (zh) * 2019-07-23 2019-10-08 西安本妆童颜医学美容有限公司 一种含人脐带间充质干细胞外泌体眼霜制剂及其制备方法
CN110448522A (zh) * 2019-09-06 2019-11-15 天津珂芬迪斯生物医药科技有限公司 一种冻肽颈霜及其制备方法
CN110548001A (zh) * 2019-09-06 2019-12-10 沈阳细胞治疗工程技术研发中心有限公司 一种含脐带间充质干细胞外泌体的修复抗衰护肤品
CN110522727A (zh) * 2019-09-30 2019-12-03 陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司 一种含促渗肽的干细胞生长因子醇质体及其制备方法
CN110804607A (zh) * 2019-11-18 2020-02-18 深圳市润科生物科技有限公司 一种高浓度人源间充质干细胞裂解液的制备方法
CN110840819A (zh) * 2019-11-18 2020-02-28 深圳市人民医院 干细胞外泌体凝胶延缓衰老的应用及制备
CN110934815A (zh) * 2019-12-24 2020-03-31 盛世荣恩生物科技有限公司 一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法
CN111088226A (zh) * 2019-12-30 2020-05-01 广东唯泰生物科技有限公司 一种胎盘间充质干细胞外泌体的制备和储存方法
CN113388584A (zh) * 2020-03-10 2021-09-14 路宝特（南京）环保科技有限公司 一种促进皮肤组织损伤后修复用工程化外泌体的制备方法及其应用
CN111110699B (zh) * 2020-04-01 2020-07-17 广州市新纪元化妆品有限公司 多肽偶联物与表皮干细胞外泌体的组合在药品和化妆品中的应用
CN111110699A (zh) * 2020-04-01 2020-05-08 北京岳昊科技发展有限公司 多肽偶联物与表皮干细胞外泌体的组合在药品和化妆品中的应用
CN111437244A (zh) * 2020-04-15 2020-07-24 北京本真工坊生物科技有限公司 干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法和产品
CN111437244B (zh) * 2020-04-15 2022-08-23 北京本真工坊生物科技有限公司 干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法和产品
CN112516067A (zh) * 2020-12-09 2021-03-19 广州美邦生物科技有限公司 一种含脐带间充质干细胞外泌体的组合物及其应用
CN112852724A (zh) * 2021-01-05 2021-05-28 首玺(广州)医疗科技有限责任公司 一种含干细胞活性因子的美容组合物及其制备方法和应用
CN112852724B (zh) * 2021-01-05 2022-09-06 首玺(广州)医疗科技有限责任公司 一种含干细胞活性因子的美容组合物及其制备方法和应用
CN113116743A (zh) * 2021-05-25 2021-07-16 郑州来复医学科技有限公司 一种含有细胞活性因子的面部抗衰乳液及其制备方法
CN113662906A (zh) * 2021-08-19 2021-11-19 蓝海细胞(北京)生物科技有限公司 一种干细胞外泌体抗衰精华液制备方法
CN114231483A (zh) * 2021-12-21 2022-03-25 广州市新甡命科技有限公司 一种干细胞外泌体及其在促进生发中的应用
CN114469855A (zh) * 2022-01-18 2022-05-13 吉林省真承药业有限公司 一种人脐带间充质干细胞诱导分化为成纤维细胞组合应用技术
CN114533935A (zh) * 2022-02-28 2022-05-27 浙江卫未生物医药科技有限公司 一种用于解决青春痘的细胞因子敷料及其制备方法
CN116421543A (zh) * 2023-06-13 2023-07-14 成都康景生物科技有限公司 促人皮肤成纤维细胞生长的组合物及其制备方法和应用
CN116421543B (zh) * 2023-06-13 2023-08-11 成都康景生物科技有限公司 促人皮肤成纤维细胞生长的组合物及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107854418A (zh) 一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法
CN107260570A (zh) 一种间充质干细胞因子组合物及其制备方法和用途
Zarei et al. Application of cell therapy for anti-aging facial skin
CN101461772A (zh) 用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法
CN107823632A (zh) 一种骨髓间充质干细胞注射液及制备方法
CN110339147A (zh) 一种皮肤外用组合物及其用途
CN103585097B (zh) 一种白及多糖载表皮生长因子复合物及其制备方法和应用
CN101791283B (zh) 一种可消除妊娠纹和疤痕的化妆品
CN103908424A (zh) 一种用于美容保养的精华液及其制备方法
CN105056303A (zh) 一种组合物、制剂及其用途
WO2018049608A1 (zh) 量子光波除皱养肤霜及其制备方法
CN104546639B (zh) 一种干细胞精华素及其制备方法
CN106137916A (zh) 一种祛痘控油美白的化妆品组合物及其应用
CN104997708A (zh) 干细胞条件培养基的获取及在防皮肤老化方面的应用
CN106420390A (zh) 一种用于美容护肤的干细胞制剂及其制备方法
CN104971031A (zh) 一种针对电磁辐射及雾霾污染的皮肤再生修复减龄的面贴膜
CN105193697A (zh) 一种面膜组合物及其制备方法
CN105232426A (zh) 一种快速嫩肤型美容组合物及其应用
CN105232393A (zh) 一种具有经典活血祛斑抗皱养颜功效的美容组合物及其应用
CN105560092A (zh) 一种微修护精华霜及其制备方法
CN106176561A (zh) 一种自体皮肤成纤维细胞用于美容抗衰的制备方法
KR20100096447A (ko) 돼지 태반 조직 유래 줄기세포의 배양물 및 그 추출 단백질을 함유한 화장료용 조성물
CN111568851A (zh) 一种利用围产期msc生产活性因子的方法及美容制剂
CN106420391A (zh) 一种具有紧肤袪斑功效的蚕丝蛋白面膜及其制备方法
CN107174536A (zh) 一种大鲵美容护肤品及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180330