CN116421543B - 促人皮肤成纤维细胞生长的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本申请提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物及其制备方法和应用，属于护肤品技术领域。促人皮肤成纤维细胞生长的组合物包括：干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白；其中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量比为1:（120‑350）。本申请采用干细胞外泌体与重组人源化胶原蛋白在特定配比下复配，可实现协同促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移）的作用，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
Description
技术领域
本申请涉及护肤品技术领域，具体而言，涉及一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
干细胞外泌体由干细胞分泌，干细胞外泌体中含有可溶性蛋白（如生长因子、白介素、趋化因子、抗体、酶、黏附分子、受体、激素以及抗菌肽等）、游离核酸以及生物活性脂质等“有效成分”，因而具有促进细胞分裂增殖、调节机体免疫反应等作用。
研究者发现，干细胞外泌体具有在上皮组织的增殖、迁移、再生以及炎症控制和瘢痕控制等方面的作用，因此，干细胞外泌体在护肤品领域具有良好的应用前景。
但是，干细胞外泌体的成本较高，单独采用干细胞外泌体作为护肤品中的有效成分，会使得制得的护肤品基成本较高；且现有的采用干细胞外泌体制备的护肤品在护肤功效上依旧存在较大的提升瓶颈，无法兼具较佳的肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等功效。
发明内容
本申请提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物及其制备方法和应用，其旨在提高采用干细胞外泌体制备的护肤品的护肤功效。
第一方面，本申请提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，组合物包括：干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白；其中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量比为1:（120-350）。
本申请采用干细胞外泌体与重组人源化胶原蛋白在特定配比下复配，可实现协同促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移）的作用，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
结合第一方面，本申请可选的实施方式中，组合物为液相，干细胞外泌体在组合物中的质量浓度为15-25μg/mL，重组人源化胶原蛋白在组合物中的质量浓度为3-5mg/mL。
上述技术方案，可在有效降低组合物的经济成本的基础上，充分发挥组合物促进人皮肤成纤维细胞生长的功效，进而提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
结合第一方面，本申请可选的实施方式中，组合物还包括生理盐水。
上述技术方案，组合物中含有生理盐水，组合物较为温和，且使得组合物为液相，有利于组合物直接涂覆于待护肤的皮肤表层。
结合第一方面，本申请可选的实施方式中，组合物还包括辅料，辅料包括生长因子、免疫因子、趋化因子、氨基酸以及维生素中的至少一种。
上述技术方案，组合物中含有上述物质作为辅料，有利于进一步促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移），进而有利于进一步提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
第二方面，本申请提供一种上述第一方面提供的组合物的制备方法，包括：将干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白按照质量比为1:（120-350）进行混合。
本申请提供的制备方法通过将干细胞外泌体与重组人源化胶原蛋白在特定配比下复配，可实现协同促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移）的作用，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
结合第二方面，本申请可选的实施方式中，干细胞外泌体的制备方法包括：采用间充质干细胞培养基培养间充质干细胞，收集采用间充质干细胞培养基培养间充质干细胞时的培养上清液，得到第一上清液；从第一上清液中分离得到干细胞外泌体。其中，间充质干细胞培养基包括第二上清液以及第一培养基，第二上清液的质量占第二上清液与第一培养基的总质量的50-70%；第一培养基为无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基；第二上清液为第三上清液依次经过去除细胞处理和除菌处理后所得的液相；第三上清液为采用第二培养基培养间充质干细胞时收集的培养上清液；第二培养基含有无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基。
在上述技术方案中，将特定的第一培养基与第二上清液（采用特定的第二培养基培养的间充质干细胞时收集的培养上清液）在特定的比例下复配，得到本申请提供的间充质干细胞培养基。相比于现有技术中的间充质干细胞完全培养基，采用本申请提供的间充质干细胞培养基培养间充质干细胞时，可使得间充质干细胞分泌的干细胞外泌体的形态更佳，更有利于干细胞外泌体在应用于护肤品时充分发挥其功效，进而有利于提高组合物的护肤效果。
结合第二方面，本申请可选的实施方式中，分离操作的温度为4-10℃。
在上述技术方案中，分离得到干细胞外泌体的操作温度为4-10℃，可抑制第一上清液（即待分离得到干细胞外泌体的体系）中酶的活性，有利于避免第一上清液中的酶将蛋白水解成较多的杂质小分子，进而有利于保证干细胞外泌体中有效成分的含量；也有利于避免分离得到的干细胞外泌体发生聚集，干细胞外泌体中的有效成分可以分散均匀，更有利于制得的干细胞外泌体在应用于护肤品时充分发挥其功效，进而有利于提高组合物的护肤效果。
结合第二方面，本申请可选的实施方式中，去除细胞处理的步骤包括：于300-400g的离心力下对第三上清液进行离心处理，然后对离心处理后所得的液相依次进行第一过滤处理和第二过滤处理，收集第二过滤处理后的液相；其中，第一过滤处理和第二过滤处理使用的滤孔孔径分别为0.4-0.6μm以及0.1-0.25μm。
上述技术方案，可有效去除第三上清液中游离的完整细胞、细胞凋亡小体以及细胞碎片等物质，可使得间充质干细胞分泌的干细胞外泌体的形态较佳，有利于制得的干细胞外泌体在应用于护肤品时充分发挥其功效，进而有利于提高组合物的护肤效果。
结合第二方面，本申请可选的实施方式中，第三上清液为采用第二培养基培养间充质干细胞至细胞融合度≥90%时收集的培养上清液；或/和，第三上清液为采用第二培养基培养间充质干细胞至P4或P5代时收集的培养上清液。
上述技术方案，可使得间充质干细胞分泌的干细胞外泌体的形态较佳，有利于制得的干细胞外泌体在应用于护肤品时充分发挥其功效，进而有利于提高组合物的护肤效果。
第三方面，本申请提供一种上述第一方面提供的组合物在用于制备护肤品中的应用。
由于本申请第一方面提供的组合物可促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移），因此，采用上述第一方面提供的组合物制备护肤品，有利于提高护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本申请提供的干细胞外泌体的制备工艺流程图。
图2为采用本申请实施例1制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞的细胞图（A代表0h后，B代表12h后，C代表24h后）。
图3为采用本申请对比例1制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞的细胞图（A代表0h后，B代表12h后，C代表24h后）。
图4为采用本申请对比例2制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞的细胞图（A代表0h后，B代表12h后，C代表24h后）。
图5为采用本申请对比例3制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞的细胞图（A代表0h后，B代表12h后，C代表24h后）。
图6为采用本申请对比例4制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞的细胞图（A代表0h后，B代表12h后，C代表24h后）。
图7为采用本申请实施例6制得的组合物作用于受试者1后的面部对比图（A代表0天，B代表28天）。
图8为采用本申请实施例6制得的组合物作用于受试者1后的面部VISA扫描结果对比图（A代表0天，B代表15天，C代表28天）。
图9为采用本申请实施例6制得的组合物作用于受试者2后的右侧面部VISA扫描结果对比图（A代表0天，B代表28天）。
图10为采用本申请实施例6制得的组合物作用于受试者2后的左侧面部VISA扫描结果对比图（A代表0天，B代表28天）。
图11为采用本申请实施例6制得的组合物作用于受试者3后的面部对比图（A代表0天，B代表28天）。
图12为采用本申请实施例6制得的组合物作用于受试者3后的面部VISA扫描结果对比图（A代表0天，B代表28天）。
具体实施方式
本申请提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，组合物包括：干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白；其中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量比为1:（120-350）。
相比于单独使用干细胞外泌体或单独使用重组人源化胶原蛋白，本申请采用干细胞外泌体与重组人源化胶原蛋白在特定配比下复配，可实现协同促进人皮肤成纤维细胞（Human Skin Fibroblasts，HSFs）的生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移）的作用，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
此外，相比于胶原蛋白选用牛源胶原蛋白或猪源胶原蛋白，促人皮肤成纤维细胞生长的组合物中的胶原蛋白选用重组人源化胶原蛋白，可实现显著促进人皮肤成纤维细胞的生长的作用，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
作为示例性地，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量比可以为1:120、1:150、1:200、1:250、1:266、1:300、1:320和1:350中的任意一者点值或者任意两者之间的范围值。
进一步地，促人皮肤成纤维细胞生长的组合物中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量比为1:（180-220）。上述技术方案，可在有效降低组合物的经济成本的基础上，充分发挥组合物促进人皮肤成纤维细胞生长的功效，进而提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
在本申请一些可选的实施方式中，组合物为液相，干细胞外泌体在组合物中的质量浓度为15-25μg/mL，重组人源化胶原蛋白在组合物中的质量浓度为3-5mg/mL；上述技术方案，可在有效降低组合物的经济成本的基础上，充分发挥组合物促进人皮肤成纤维细胞生长的功效，进而提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
作为示例性地，干细胞外泌体在组合物中的质量浓度可以为15μg/mL、17μg/mL、20μg/mL、22μg/mL和25μg/mL中的任意一者点值或者任意两者之间的范围值；重组人源化胶原蛋白在组合物中的质量浓度可以为3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL和5mg/mL中的任意一者点值或者任意两者之间的范围值。
在本申请一些可选的实施方式中，促人皮肤成纤维细胞生长的组合物中含有生理盐水；上述方案，可使得制得的组合物较为温和，且使得的组合物为液相，有利于组合物直接涂覆于待护肤的皮肤表层。
需要说明的是，在其他可行的实施方式中，促人皮肤成纤维细胞生长的组合物中也可以不含有生理盐水，例如，促人皮肤成纤维细胞生长的组合物中含有无菌水，以使得组合物形成液相。
需要说明的是，在其他可行的实施方式中，促人皮肤成纤维细胞生长的组合物也可以不为液相，例如，促人皮肤成纤维细胞生长的组合物可以为冻干粉状或乳状等。
在本申请一些可选的实施方式中，促人皮肤成纤维细胞生长的组合物中还具有辅料，辅料包括生长因子、免疫因子、趋化因子、氨基酸以及维生素中的至少一种；上述技术方案，有利于进一步促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移），进而有利于进一步提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
作为示例性地，生长因子可以选自肝细胞生长因子（HGF）、重组人酸性成纤维细胞生长因子（FGF1）、血管生成素-1（Angiopoietin-1）以及血管内皮生长因子（VEGF）中的至少一种；免疫因子可以选自白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）以及白细胞介素-10（IL-10）中的至少一种；趋化因子选自肿瘤坏死因子α（TNF-α）；氨基酸选自L-精氨酸；维生素选自维生素B12。
需要说明的是，在其他可行的实施方式中，辅料也不限于上述提及的生长因子、免疫因子、趋化因子、氨基酸以及维生素等；促人皮肤成纤维细胞生长的组合物也可以不含辅料。
本申请提供一种上述提供的促人皮肤成纤维细胞生长的组合物的制备方法，制备方法包括：将干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白按照质量比为1:（120-350）进行混合。
本申请提供的组合物的制备方法通过将干细胞外泌体与重组人源化胶原蛋白在特定配比下复配，可实现协同促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移）的作用，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
需要说明的是，本申请不对干细胞外泌体与重组人源化胶原蛋白的混合方式进行限定，例如，混合方式可以为超声分散混合或磁力搅拌混合等。
为了使得干细胞外泌体的形态更佳，更有利于干细胞外泌体在应用于护肤品时充分发挥其功效，进而有利于提高组合物的护肤效果；在本申请一些可选的实施方式中，干细胞外泌体的制备方法包括：采用间充质干细胞培养基培养间充质干细胞，收集采用间充质干细胞培养基培养间充质干细胞时的培养上清液，得到第一上清液；从第一上清液中分离得到干细胞外泌体。
其中，间充质干细胞培养基包括第二上清液以及第一培养基，第二上清液的质量占第二上清液与第一培养基的总质量的50-70%。第一培养基为无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基。第二上清液为第三上清液依次经过去除细胞处理和除菌处理后所得的液相；第三上清液为采用第二培养基培养间充质干细胞时收集的培养上清液；第二培养基含有无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基。
本申请提供的干细胞外泌体的制备方法，将特定的第一培养基与第二上清液（采用特定的第二培养基培养的间充质干细胞时收集的培养上清液）在特定的比例下复配，得到本申请提供的间充质干细胞培养基。相比于现有技术中的间充质干细胞完全培养基，采用本申请提供的间充质干细胞培养基培养间充质干细胞时，可使得间充质干细胞分泌的干细胞外泌体的形态更佳，更有利于干细胞外泌体在应用于护肤品时充分发挥其功效，进而有利于提高组合物的护肤效果。
为了更佳清楚地描述本申请提供的干细胞外泌体的制备方法，请参阅图1，本申请提供了干细胞外泌体的制备工艺流程图，干细胞外泌体的制备方法包括：
S10，采用第二培养基培养间充质干细胞，收集培养上清液，得到第三上清液；其中，第二培养基含有无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基。
在本申请一些可选的实施方式中，间充质干细胞为脐带间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）。
作为示例性地，当间充质干细胞为脐带间充质干细胞，使用第二培养基培养脐带间充质干细胞的培养温度为37℃。
需要说明的是，在其他可行的实施方式中，间充质干细胞也可以为脂肪间充质干细胞或骨髓间充质干细胞等等；此外，对于不同种类的间充质干细胞，使用第二培养基培养间充质干细胞的培养温度为对应种类的间充质干细胞的常规培养温度即可。
在本申请一些可选的实施方式中，无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基为无血清无酚红的α-MEM基础培养基。
需要说明的是，在其他可行的实施方式中，无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基也可以为无血清无酚红的OriCell间充质干细胞完全培养基（无血清II型）培养基或无血清无酚红的Opti Vitro MSC增生无血清培养基培养基等。
作为示例性地，第二培养基可以选用商品化的培养基，只要满足第二培养基中含有无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基即可；例如，当间充质干细胞为脐带间充质干细胞时，第二培养基采用体积比为（80-120）：1的友康公司的NC0103型号的培养基与友康公司的NC0103.S型号的培养基复配而成。
在本申请一些可选的实施方式中，第三上清液为采用第二培养基培养间充质干细胞至细胞融合度≥90%时收集的培养上清液；换言之，采用第二培养基培养间充质干细胞，当培养的间充质干细胞至细胞融合度≥90%时收集培养上清液，所收集的培养上清液即为第三上清液。
上述技术方案，可使得间充质干细胞分泌的干细胞外泌体的形态较佳，有利于干细胞外泌体在应用于护肤品时充分发挥其功效，进而有利于提高组合物的护肤效果。
作为示例性地，采用第二培养基培养间充质干细胞，当培养的间充质干细胞至细胞融合度为90%、91%、92%、93%、94%或95%时收集培养上清液，得到第三上清液。
在本申请一些可选的实施方式中，第三上清液为采用第二培养基培养间充质干细胞至P4或P5代时收集的培养上清液；有利于进一步使得间充质干细胞分泌的干细胞外泌体的形态较佳，有利于制得的干细胞外泌体在应用时充分发挥其功效。
需要说明的是，在其他可行的实施方式中，第三上清液也可以为采用第二培养基培养间充质干细胞传代2代后收集的培养上清液。
S20，对第三上清液依次进行去除细胞处理和除菌处理，收集所得的液相，得到第二上清液。
需要说明的是，在本申请中，去除细胞处理是指：去除第三上清液中游离的完整细胞、细胞凋亡小体以及细胞碎片等物质；第二上清液是指：对第三上清液进行去除细胞处理后，对去除细胞处理后得到的液相进行除菌处理，除菌处理后所得的液相即为第二上清液。
在本申请一些可选的实施方式中，去除细胞处理的步骤包括：于300-400g的离心力下对第三上清液进行离心处理，然后对离心处理后所得的液相依次进行第一过滤处理和第二过滤处理，收集第二过滤处理后的液相；其中，第一过滤处理和第二过滤处理使用的滤孔孔径分别为0.4-0.6μm以及0.1-0.25μm。
上述技术方案，可有效去除第三上清液中游离的完整细胞、细胞凋亡小体以及细胞碎片等物质，更有利于使得间充质干细胞分泌的干细胞外泌体的形态较佳，有利于制得的干细胞外泌体在应用于护肤品时充分发挥其功效，进而有利于提高组合物的护肤效果。
作为示例性地，对第三上清液进行离心处理的离心力可以为300g、320g、340g、350g、360g、370g和400g中的任意一者点值或者任意两者之间的范围值；第一过滤处理使用的滤孔孔径可以为0.4μm、0.42μm、0.45μm、0.47μm、0.5μm、0.52μm、0.55μm、0.57μm和0.6μm中的任意一者点值或者任意两者之间的范围值；第二过滤处理使用的滤孔孔径可以为0.1μm、0.12μm、0.15μm、0.17μm、0.2μm、0.22μm和0.25μm中的任意一者点值或者任意两者之间的范围值。
进一步地，对第三上清液进行离心处理的时间为5-10min；作为示例性地，对第三上清液进行离心处理的时间可以为5min、6min、7min、8min、9min和10min中的任意一者点值或者任意两者之间的范围值。
作为示例性地，在本申请的实施例中，第一过滤处理和第二过滤处理均采用抽滤装置进行。
作为示例性地，对去除细胞处理后的液相进行除菌处理的操作可以为：在生物安全柜中，用0.1-0.25μm（例如，0.22μm）的无菌滤头对去除细胞处理后的液相过滤至无菌离心管中。
需要说明的是，在其他可行的实施方式中，除菌处理也可以采用其他常规的除菌操作，本申请不进行限定。
S30，将第二上清液和第一培养基混合，得到间充质干细胞培养基；其中，第二上清液的质量占第二上清液与第一培养基的总质量的50-70%，第一培养基为无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基。
需要说明的是，本申请不对第二上清液与第一培养基的混合方式进行限定，例如，混合方式可以为超声分散混合或磁力搅拌混合等。
作为示例性地，第二上清液的质量占第二上清液与第一培养基的总质量的百分数可以为50%、52%、55%、57%、60%、62%、65%、67%和70%的任意一者点值或者任意两者之间的范围值。
进一步地，在本申请一些可选的实施方式中，第二上清液的质量占第二上清液与第一培养基的总质量的55-65%。第二上清液与第一培养基在上述配比条件下，可在有效降低间充质干细胞培养基的经济成本的基础上，使得间充质干细胞分泌的干细胞外泌体的形态更佳。
在本申请一些可选的实施方式中，无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基为无血清无酚红的α-MEM基础培养基。需要说明的是，在其他可行的实施方式中，无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基也可以为无血清无酚红的OriCell间充质干细胞完全培养基（无血清II型）培养基或无血清无酚红的Opti Vitro MSC增生无血清培养基培养基等。
S40，采用S30步骤得到的间充质干细胞培养基培养间充质干细胞，收集培养上清液，得到第一上清液；从第一上清液中分离干细胞外泌体。
需要说明的是，若分离后得到的干细胞外泌体需较短期保存（即1天内），则于2-8℃下保存备用即可；若分离后得到的干细胞外泌体需短期保存（即3天内），则于-20℃下保存备用即可；若分离后得到的干细胞外泌体需长期保存（大于3天），则需于-80℃下保存备用。
进一步地，分离操作的温度为4-10℃；可抑制第一上清液（即待分离得到干细胞外泌体的体系）中酶的活性，有利于避免第一上清液中的酶将蛋白水解成较多的杂质小分子，进而有利于保证干细胞外泌体中有效成分的含量；也有利于避免分离得到的干细胞外泌体发生聚集，干细胞外泌体中的有效成分可以分散均匀，更有利于制得的干细胞外泌体在应用时充分发挥其功效。
作为示例性地，分离操作的温度可以为4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃和10℃中的任意一者点值或者任意两者之间的范围值。
需要说明的是，本申请不对从第一上清液中分离干细胞外泌体的步骤进行限定，例如，从第一上清液中分离得到干细胞外泌体的分离方式可以超高速离心分离或者切向流过滤等分离方式。
作为示例性地，当从第一上清液中分离得到干细胞外泌体的分离方式为超高速离心分离时，分离步骤如下：于4-10℃（例如，4℃）下，先对第一上清液进行1500-2500g（例如，2000g）离心20-40min（例如，30min），得到第一滤液；对第一滤液进行11000-13000g（例如，12000g）离心20-40min（例如，30min），得到第二滤液；然后对第二滤液进行0.1-0.25μm（例如，0.22μm）的滤孔孔径过滤，得到第三滤液；最后对第三滤液进行45000-55000g（例如，50000g）离心20-40min（例如，30min），得到的滤液即为干细胞外泌体。
作为示例性地，当从第一上清液中分离得到干细胞外泌体的分离方式切向流过滤分离时，分离步骤如下：于4-10℃（例如，4℃）下，将比例为1g：150-250mL（例如，1g：200mL）的医用级活性炭与第一上清液混合后，静置5-15min（例如，10min）；真空抽滤后，得到第一滤液；对第一滤液进行0.4-0.6μm（例如，0.45μm）的滤孔孔径过滤，得到第二滤液；对第二滤液进行0.1-0.25μm（例如，0.22μm）的滤孔孔径过滤，得到第三滤液；对第三滤液进行切向膜包过滤，得到的滤液即为干细胞外泌体。
本申请还提供一种上述提供的组合物在用于制备护肤品中的应用。
由于本申请上述提供的组合物可促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移），因此，采用上述提供的组合物制备护肤品，有利于提高护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
本实施例提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，采用如下方法制备：将干细胞外泌体、重组人源化胶原蛋白以及DMEM高糖培养基混合，得到促人皮肤成纤维细胞生长的组合物。
该组合物中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量浓度分别为20μg/mL和4.0mg/mL；DMEM高糖培养基中含有胎牛血清，且胎牛血清在DMEM高糖培养基中的质量占比为1%。
其中，干细胞外泌体的制备包括如下步骤：
（1）复苏P3代脐带间充质干细胞，根据计数结果，按照6000个细胞/cm2接种于T150细胞培养瓶中，并用脐带间充质干细胞完全培养基于37℃、5%CO2培养箱中培养70h至脐带间充质干细胞的融合度为95%，以准备收获P4代脐带间充质干细胞。
其中，脐带间充质干细胞完全培养基中含有：有血清有酚红的α-MEM培养基、血替以及L-Gul，且血替的质量以及L-谷氨酰胺（L-Gul）的质量分别占有血清有酚红的α-MEM培养基的质量的5%以及1%。
（2）弃去步骤（1）培养70h后的T150细胞培养瓶中的上清液，进行三次洗涤。
其中，第一次洗涤：用移液管向T150细胞培养瓶中加入10mL的生理盐水，并用10mL移液管轻柔冲洗细胞培养面，倒掉生理盐水。
第二次洗涤：用移液管向T150细胞培养瓶中加入10mL的生理盐水，水平摇晃T150细胞培养瓶清洗细胞培养面，倒掉生理盐水。
第三次洗涤：重复上述第二次洗涤的操作。
（3）向步骤（2）进行三次洗涤后的T150细胞培养瓶中加入2mL胰酶，水平摇晃培养瓶直至胰酶覆盖整个细胞培养面，在显微镜下观察细胞变圆，用手拍打T150细胞培养瓶侧边使细胞掉落，然后向T150细胞培养瓶中加入6mL生理盐水终止消化。离心收集细胞，并用无血清无酚红的第二培养基重悬细胞后，取适量细胞悬液计数。根据计数结果，按照7500个细胞/cm2接种于T150细胞培养瓶，并用第二培养基于37℃、5%CO2培养箱中培养70h至脐带间充质干细胞的融合度为95%，以准备收获第二上清液及收获P5代脐带间充质干细胞。
其中，第二培养基采用体积比为100：1的友康公司的NC0103型号的培养基与友康公司的NC0103.S型号的培养基复配而成。
（4）收集步骤（3）培养70h后的T150细胞培养瓶中的上清液（即为第二上清液），于350g的离心力下对第二上清液进行离心处理8min，然后使用抽滤装置依次对离心处理后所得的上清液进行第一过滤处理和第二过滤处理，收集第二过滤处理后的液相于离心管中。然后将装有第二过滤处理后的液相的离心管转移至生物安全柜中，用0.22μm的无菌滤头及一次性注射器过滤第二过滤处理后的液相于无菌50mL离心管中，并用无菌封口膜封口备用，得到的上清液即为第一上清液。
其中，第一过滤处理和第二过滤处理使用的滤孔孔径分别为0.45μm以及0.22μm。
（5）将步骤（4）得到的第一上清液与友康公司的NC0103型号的培养基（即第一培养基）混合，得到间充质干细胞培养基。
其中，第一上清液的质量占第一上清液与第一培养基的总质量的60%。
（6）复苏P3代脐带间充质干细胞，根据计数结果，按照6000个细胞/cm2接种于T150细胞培养瓶中，并用步骤（1）使用的脐带间充质干细胞完全培养基于37℃、5%CO2培养箱中培养70h至脐带间充质干细胞的融合度为95%，以准备收获P4代脐带间充质干细胞。
（7）弃去步骤（6）培养70h后的T150细胞培养瓶中的上清液，进行三次洗涤。
其中，第一次洗涤：用移液管向T150细胞培养瓶中加入10mL的生理盐水，并用10mL移液管轻柔冲洗细胞培养面，倒掉生理盐水。
第二次洗涤：用移液管向T150细胞培养瓶中加入10mL的生理盐水，水平摇晃T150细胞培养瓶清洗细胞培养面，倒掉生理盐水。
第三次洗涤：重复上述第二次洗涤的操作。
（8）向步骤（7）进行三次洗涤后的T150细胞培养瓶中加入2mL胰酶，水平摇晃培养瓶直至胰酶覆盖整个细胞培养面，在显微镜下观察细胞变圆，用手拍打T150细胞培养瓶侧边使细胞掉落，然后向T150细胞培养瓶中加入6mL生理盐水终止消化。离心收集细胞，并用步骤（5）制得的间充质干细胞培养基分别重悬细胞后，取适量细胞悬液计数。根据计数结果，按照7500个细胞/cm2接种于T150细胞培养瓶，并用步骤（5）制得的间充质干细胞培养基于37℃、5%CO2培养箱中培养70h至脐带间充质干细胞的融合度为95%，以准备收获P5代脐带间充质干细胞和P5代脐带间充质干细胞的培养上清液。
（9）于4℃下，先对步骤（8）收集的培养上清液进行2000g离心30min，得到第一滤液；对第一滤液进行12000g离心30min，得到第二滤液；然后使用抽滤装置对第二滤液进行0.22μm的滤孔孔径过滤，得到第三滤液；最后对第三滤液进行50000g离心30min，得到的滤液即为干细胞外泌体。
实施例2
本实施例提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，本实施例与实施例1的区别在于：组合物中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量浓度分别为20μg/mL和2.4mg/mL。
实施例3
本实施例提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，本实施例与实施例1的区别在于：组合物中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量浓度分别为20μg/mL和7.0mg/mL。
实施例4
本实施例提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，本实施例与实施例1的区别在于：组合物中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量浓度分别为15μg/mL和4.0mg/mL。
实施例5
本实施例提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，本实施例与实施例1的区别在于：干细胞外泌体的制备方法不同，本实施例不进行步骤（1）至步骤（5）的操作，直接进行步骤（6）至步骤（9）的操作，且步骤（8）中使用的间充质干细胞培养基均替换为实施例1步骤（1）中使用的脐带间充质干细胞完全培养基。
实施例6
本实施例提供一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，本实施例与实施例1的区别在于：组合物中不含有DMEM高糖培养基。
对比例1
本对比例提供一种组合物，本对比例与实施例1的区别在于：组合物中的重组人源化胶原蛋白为牛源胶原蛋白。
对比例2
本对比例提供一种组合物，本对比例与实施例1的区别在于：组合物中的重组人源化胶原蛋白为猪源胶原蛋白。
对比例3
本对比例提供一种组合物，本对比例与实施例1的区别在于：组合物中不含有重组人源化胶原蛋白，干细胞外泌体在组合物中的质量浓度为20μg/mL。
对比例4
本对比例提供一种组合物，本对比例与实施例1的区别在于：组合物中不含有干细胞外泌体，重组人源化胶原蛋白在组合物中的质量浓度为4.0mg/mL。
对比例5
本对比例提供一种组合物，本对比例与实施例1的区别在于：组合物中不含有重组人源化胶原蛋白，干细胞外泌体在组合物中的质量浓度为4.02mg/mL。
对比例6
本对比例提供一种组合物，本对比例与实施例1的区别在于：组合物中不含有干细胞外泌体，重组人源化胶原蛋白在组合物中的质量浓度为4.02mg/mL。
对比例7
本对比例提供一种组合物，本对比例与实施例1的区别在于：组合物中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量浓度分别为5μg/mL和4.0mg/mL。
对比例8
本对比例提供一种组合物，本对比例与实施例1的区别在于：组合物中，干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量浓度分别为10μg/mL和4.0mg/mL。
实验例1
取生长期的HSF细胞（人皮肤成纤维细胞），消化、离心、重悬、计数后，按照每毫升5×105个细胞接种于6孔板中，每孔2mL，放入37℃、5%CO2的培养箱培养。24h后用200μL枪头进行细胞划痕操作后，用DMEM高糖培养基清洗，换取实施例1以及对比例1-4制得的组合物，放入37℃、5%CO2的培养箱中分别培养0h、12h以及24h后，人皮肤成纤维细胞的细胞图分别如图2至图6所示；其中，图2至图6中的标尺为50μm。
从图2至图4的对比可以看出，相比于对比例1-2（采用牛源胶原蛋白或猪源胶原蛋白与干细胞外泌体复配），采用实施例1制得的组合物（采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配）培养人皮肤成纤维细胞，可有效促进人皮肤成纤维细胞的迁移；表明：采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配形成的组合物，可提高人皮肤成纤维细胞的迁移能力，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
从图2以及图5至图6的对比可以看出，相比于对比例3-4（单独使用重组人源化胶原蛋白或单独使用干细胞外泌体），采用实施例1制得的组合物（采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配）培养人皮肤成纤维细胞，可有效促进人皮肤成纤维细胞的迁移；表明：采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配形成的组合物，可协同提高人皮肤成纤维细胞的迁移能力，进而有利于协同提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
实验例2
采用实施例1-5以及对比例1-8制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞，培养12h以及24h后，分别测试人皮肤成纤维细胞的细胞迁移能力，细胞迁移结果如表1所示。
细胞迁移能力的测试方法如下：取生长期的HSF细胞（人皮肤成纤维细胞），消化、离心、重悬、计数后，按照每毫升5×105个细胞接种于6孔板中，每孔2mL，放入37℃、5%CO2的培养箱培养。24h后用200μL枪头进行细胞划痕操作后，用DMEM高糖培养基清洗并拍照（为0h对应的细胞照片）。分别换取不同的实施例1-5、对比例1-8制得的组合物以及对照组的培养基，放入37℃、5%CO2的培养箱中分别培养12h、24h后拍照，用Image J测量划痕面积，划痕宽度的平均值=划痕空隙面积/划痕长度，细胞迁移率（%）=[(0h时划痕宽度的平均值-12h或24h时划痕宽度的平均值)/0h时划痕宽度的平均值]×100%。其中，对照组中的培养基为含有胎牛血清的DMEM高糖培养基，且胎牛血清在DMEM高糖培养基中的质量占比为1%。
表1
从表1可以看出，实施例1-5以及对比例1-8制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞的细胞迁移能力均优于对比例1-8，表明本申请提供的组合物可提高人皮肤成纤维细胞的细胞迁移能力，可促进人皮肤成纤维细胞生长，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
从实施例1与对比例1-2可以看出，相比于对比例1-2（采用牛源胶原蛋白或猪源胶原蛋白与干细胞外泌体复配），采用实施例1制得的组合物（采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配）培养人皮肤成纤维细胞，可有效促进人皮肤成纤维细胞的迁移；表明：采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配形成的组合物，可提高人皮肤成纤维细胞的迁移能力，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
从实施例1与对比例3-6可以看出，相比于对比例3-6（单独使用重组人源化胶原蛋白或单独使用干细胞外泌体），采用实施例1制得的组合物（采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配）培养人皮肤成纤维细胞，可有效促进人皮肤成纤维细胞的迁移；表明：采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配形成的组合物，具有协同提高人皮肤成纤维细胞的迁移能力，进而有利于协同提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
从实施例1-4以及对比例7-8可以看出，重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体的配比，可以影响人皮肤成纤维细胞的迁移能力；当干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量比为1:（120-350）时，可有效提高人皮肤成纤维细胞的迁移能力。
从实施例1与实施例5可以看出，相比现有技术中的脐带间充质干细胞完全培养基（对应实施例5），采用“本申请实施例1提供的间充质干细胞培养基培养脐带间充质干细胞而获得的干细胞外泌体”制备形成组合物，有利于进一步提高人皮肤成纤维细胞的迁移能力。
实验例3
采用实施例1-5以及对比例1-8制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞，培养1天、3天以及5天后，分别测试人皮肤成纤维细胞的细胞增殖能力，细胞增殖结果如表2所示。
细胞增殖能力的测试方法如下：取生长期的HSF细胞（人皮肤成纤维细胞），消化、离心、重悬、计数后，按照每孔2×103个细胞接种于96孔板中，24h后分别换取实施例1-5、对比例1-8制得的组合物以及对照组的培养基，放入37℃、5%CO2的培养箱中分别培养1、3、5天，在第3天时，倒去孔板中的液相，再分别加入实施例1-5、对比例1-8制得的组合物以及对照组的培养基后继续培养至第5天。每孔加入10μL的CCK8溶液后于培养箱中继续培养2h后，用酶标仪在450nm处测吸光度（即OD值）；其中，对照组中的培养基为含有胎牛血清的DMEM高糖培养基，且胎牛血清在DMEM高糖培养基中的质量占比为1%。
表2
表2中，对照组的培养1天、培养3天以及培养5天时的细胞相对增殖能力的数值均记为1；实施例1-5或对比例1-8的培养1天时的细胞相对增殖能力的数值为：实施例1-5或对比例1-8的培养1天时的OD值与对照组的培养1天时的OD值之比，实施例1-5或对比例1-8的培养3天时的细胞相对增殖能力的数值为：实施例1-5或对比例1-8的培养3天时的OD值与对照组的培养3天时的OD值之比，实施例1-5或对比例1-8的培养5天时的细胞相对增殖能力的数值为：实施例1-5或对比例1-8的培养5天时的OD值与对照组的培养5天时的OD值之比。
从表2可以看出，实施例1-5以及对比例1-8制得的组合物培养人皮肤成纤维细胞的细胞增殖能力均优于对比例1-8，表明本申请提供的组合物可提高人皮肤成纤维细胞的细胞增殖能力，可促进人皮肤成纤维细胞生长，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
从实施例1与对比例1-2可以看出，相比于对比例1-2（采用牛源胶原蛋白或猪源胶原蛋白与干细胞外泌体复配），采用实施例1制得的组合物（采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配）培养人皮肤成纤维细胞，可有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖；表明：采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配形成的组合物，可提高人皮肤成纤维细胞的增殖能力，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
从实施例1与对比例3-6可以看出，相比于对比例3-6（单独使用重组人源化胶原蛋白或单独使用干细胞外泌体），采用实施例1制得的组合物（采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配）培养人皮肤成纤维细胞，可有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖；表明：采用重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体复配形成的组合物，具有协同提高人皮肤成纤维细胞的增殖能力，进而有利于协同提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果。
从实施例1-4以及对比例7-8可以看出，重组人源化胶原蛋白与干细胞外泌体的配比，可以影响人皮肤成纤维细胞的增殖能力；当干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白的质量比为1:（120-350）时，可有效提高人皮肤成纤维细胞的增殖能力。
从实施例1与实施例5可以看出，相比于实施例5，采用本申请实施例1提供的间充质干细胞培养基培养脐带间充质干细胞而获得的干细胞外泌体，有利于进一步提高人皮肤成纤维细胞的增殖能力。
实验例4
按照《化妆品安全技术规范》（2015年版）第六章8，对实施例6制得的组合物进行细菌回复突变试验。
细菌回复突变试验报告结果为：致突变性阴性，表明本申请实施例6提供的组合物的安全性较高。
实验例5
按照SN/T 2329-2009《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验》，对实施例6制得的组合物进行试验。
试验报告结果为：阴性，表明本申请实施例6提供的组合物的安全性较高。
实验例6
按照《化妆品安全技术规范》（2015年版）第六章5，对实施例6制得的组合物进行急性眼刺激性试验。
急性眼刺激性试验报告结果为：无刺激性，表明本申请实施例6提供的组合物的安全性较高。
实验例7
采用实施例6制得的组合物作用于受试者1的面部；组合物的使用方法如下：采用医用滚针的手段将5mL的实施例6制得的组合物作用于受试者1的面部，3天后开始每天早晚涂抹2.5mL实施例6制得的组合物于受试者1的面部，然后采集受试者1使用组合物0天时、15天时以及28天时的面部图片，对比结果如图7和图8所示。
从图7和图8可以看出，相比于受试者1使用本申请实施例6制得的组合物0天，受试者1使用本申请实施例6制得的组合物28天后，受试者1的面部肌肤屏障修复度、肤色提亮、雀斑减淡。
实验例8
采用实施例6制得的组合物作用于受试者2的面部，组合物的使用方法如下：采用医用滚针的手段将5mL的实施例6制得的组合物作用于受试者2的面部，3天后开始每天早晚涂抹2.5mL实施例6制得的组合物于受试者1的面部，然后采集受试者2使用组合物0天时以及涂抹28天时的面部图片，对比结果如图9和图10所示。
从图9和图10可以看出，相比于受试者2使用本申请实施例6制得的组合物0天，受试者2使用本申请实施例6制得的组合物28天后，受试者2的面部敏感肌修复，红血丝减少。
实验例10
采用实施例6制得的组合物作用于受试者3的面部，组合物的使用方法如下：采用医用滚针的手段将5mL的实施例6制得的组合物作用于受试者2的面部，3天后开始每天早晚涂抹2.5mL实施例6制得的组合物于受试者1的面部，然后采集受试者3使用组合物0天时以及涂抹28天时的面部图片，对比结果如图11和图12所示。
从图11和图12可以看出，相比于受试者3使用本申请实施例6制得的组合物0天，受试者3使用本申请实施例6制得的组合物28天后，受试者3的面部泛红区域的面积减少，面部敏感程度得到缓解。
综上，本申请采用干细胞外泌体与重组人源化胶原蛋白在特定配比下复配，可实现协同促进人皮肤成纤维细胞生长（包括促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移）的作用，进而有利于提高采用该组合物制备得到的护肤品的护肤效果（包括肤色提亮、皮肤弹性增加、皮肤屏障修复、淡斑、疤痕修复、法令纹修复、减少皮肤红血丝以及收缩毛孔等）。
以上所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。本申请的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本申请的范围，而是仅仅表示本申请的选定实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
Claims (10)
1.一种促人皮肤成纤维细胞生长的组合物，其特征在于，所述组合物包括：干细胞外泌体和重组人源化胶原蛋白；
其中，所述干细胞外泌体和所述重组人源化胶原蛋白的质量比为1:（120-350）。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物为液相，所述干细胞外泌体在所述组合物中的质量浓度为15-25μg/mL，所述重组人源化胶原蛋白在所述组合物中的质量浓度为3-5mg/mL。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括生理盐水。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括辅料，所述辅料包括生长因子、免疫因子、趋化因子、氨基酸以及维生素中的至少一种。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括：将所述干细胞外泌体和所述重组人源化胶原蛋白按照质量比为1:（120-350）进行混合。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述干细胞外泌体的制备方法包括：采用间充质干细胞培养基培养间充质干细胞，收集采用所述间充质干细胞培养基培养间充质干细胞时的培养上清液，得到第一上清液；从所述第一上清液中分离得到所述干细胞外泌体；
其中，所述间充质干细胞培养基包括第二上清液以及第一培养基；所述第二上清液的质量占所述第二上清液与所述第一培养基的总质量的50-70%；
所述第一培养基为无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基；
所述第二上清液为第三上清液依次经过去除细胞处理和除菌处理后所得的液相；所述第三上清液为采用第二培养基培养间充质干细胞时收集的培养上清液；所述第二培养基含有无血清无酚红的间充质干细胞基础培养基。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述分离操作的温度为4-10℃。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述去除细胞处理的步骤包括：于300-400g的离心力下对所述第三上清液进行离心处理，然后对所述离心处理后所得的液相依次进行第一过滤处理和第二过滤处理，收集所述第二过滤处理后的液相；
其中，所述第一过滤处理和所述第二过滤处理使用的滤孔孔径分别为0.4-0.6μm以及0.1-0.25μm。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述第三上清液为采用所述第二培养基培养间充质干细胞至细胞融合度≥90%时收集的培养上清液；
或/和，所述第三上清液为采用所述第二培养基培养间充质干细胞至P4或P5代时收集的培养上清液。
10.一种如权利要求1-4中任一项所述的组合物在用于制备护肤品中的应用。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107854418A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-03-30 | 南京九圣生物科技股份有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法 |
| TW201934131A (zh) * | 2018-02-12 | 2019-09-01 | 國立陽明大學 | 一種組合物用於製備治療腹膜受損後膠原蛋白異常增生之藥物的用途 |
| CN114306098A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-04-12 | 中科(广州)再生医学科技开发有限公司 | 一种负载有干细胞外泌体和重组胶原蛋白的水凝胶及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (1)
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| TW201934131A (zh) * | 2018-02-12 | 2019-09-01 | 國立陽明大學 | 一種組合物用於製備治療腹膜受損後膠原蛋白異常增生之藥物的用途 |
| CN114306098A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-04-12 | 中科(广州)再生医学科技开发有限公司 | 一种负载有干细胞外泌体和重组胶原蛋白的水凝胶及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 胎盘间充质干细胞外泌体对高糖培养的成纤维细胞衰老的影响;边晓玮;胎盘间充质干细胞外泌体对高糖培养的成纤维细胞衰老的影响;第42卷(第12期);1163-1173 * |
Also Published As
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| CN116421543A (zh) | 2023-07-14 |
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