CN104382827A - 人羊膜间充质干细胞外泌体的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及干细胞领域，公开了干细胞外泌体的新用途，具体是公开了人羊膜间充质干细胞外泌体的新用途。实验结果显示人羊膜间充质干细胞能够促进HDF细胞的生长，并且可以提高细胞内SOD酶的活性，减少因紫外线辐射诱导产生的氧自由基对细胞的攻击和损害，降低细胞的死亡率。表明人羊膜间充质干细胞外泌体具有抗光老化的功效。同时表明所述人羊膜间充质干细胞外泌体无光毒性作用。因此本发明提供了人羊膜间充质干细胞外泌体在制备抗老化的制剂中的应用。本发明还提供了包含人羊膜间充质干细胞外泌体的抗老化的制剂。

Description

人羊膜间充质干细胞外泌体的用途

技术领域

本发明涉及干细胞领域，具体涉及干细胞外泌体的新用途，尤其是人羊膜间充质干细胞外泌体的新用途。

背景技术

外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的大小均一，直径为40～100nm，密度1.10～1.18g/ml的囊泡样小体。外泌体的应用主要集中在临床诊断及抗肿瘤方面。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是具有自我更新和多向分化能力的细胞，产生并释放营养性物质，通过旁分泌途径促进细胞修复及血管生成，在再生医学领域有重要作用。Lai等通过质谱技术分析发现:MSCs的外泌体中含有丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)人乳脂肪球EGF因子蛋白(milkfat globule-EGFfactor8protein，MFGE8)及跨膜四蛋白等857种蛋白质，它们参与细胞结构的维持运动信息交流以及组织的修复与再生。许多的研究表明MSCs外泌体在治疗组织损伤性疾病中具有重要的作用。

目前还没有人羊膜间充质干细胞外泌体在美容护肤品中的应用。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于针对现有技术存在的问题，提供人羊膜间充质干细胞外泌体在美容护肤品中的应用。

本发明采用MTT法测定人羊膜间充质干细胞外泌体对人真皮成纤维细胞生长的影响，结果显示人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉在浓度≦400μg/ml时对HDF细胞无明显的抑制作用，镜下观察细胞也无明显的死亡等症状。实验组的细胞存活率与对照组相比较，都没有出现显著的细胞死亡，而≦100μg/ml人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉能够促进HDF细胞的生长。

本发明还检测了人羊膜间充质干细胞外泌体对紫外损伤人真皮成纤维细胞的保护作用，结果显示，人羊膜间充质干细胞外泌体无论是20μg/ml，还是10μg/ml都在不同程度上提高了细胞内SOD酶的活性，可以减少因紫外线辐射诱导产生的氧自由基对细胞的攻击和损害，降低细胞的死亡率。

由此可见，人羊膜间充质干细胞外泌体具有抗光老化的功效。

进一步，本发明进行了光毒性试验结果显示涂抹人羊膜间充质干细胞外泌体后1h、24h、48h和72h均未观察到皮肤刺激反应，表明所述人羊膜间充质干细胞外泌体无光毒性作用。

因此本发明提供了人羊膜间充质干细胞外泌体在制备抗老化的制剂中的应用。

其中，所述制剂可以为药品或护肤品。

所述药品可以本领域公知的外用制剂，如搽剂、软膏剂、乳剂、糊剂、膜剂、涂膜剂、凝胶剂、气雾剂、喷雾剂、贴剂等等。所述护肤品可以本领域公知的类型，如面霜，乳液、精华液、面膜、眼霜、原液等等。

本发明还提供了一种抗老化的制剂，包含人羊膜间充质干细胞外泌体。

在一些实施方案中，所述人羊膜间充质干细胞外泌体为人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉。人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉更加便于储存、运输与应用。

在一些实施方案中，所述人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法为：取人羊膜间充质干细胞外泌体，加入海藻糖混匀后，滤膜过滤，分装后超低温冷冻12h，然后在10Pa的真空度、-50℃的条件下冷冻12h～48h。

在一些优选实施方案中，所述海藻糖的加入量为至海藻糖终浓度为10wt％。

在一些优选实施方案中，所述滤膜孔径为0.22μm。

在一些优选实施方案中，所述超低温为-80℃。

在一些实施方案中，本发明所述抗老化的制剂为护肤品。

本发明还提供了一种抗老化的润肤霜，包括人羊膜间充质干细胞外泌体和基质，所述基质包括乳化剂、增溶剂、抗结剂、润滑剂、润肤剂、稳定剂、溶剂、防腐剂。

在一些实施方案中，所述乳化剂选自ZY-92、ZY-921、白油、硬脂酸、汉生胶、三乙醇胺中的一种或几种。

在一些实施方案中，所述增溶剂选自C16-18OH中的一种或几种。

在一些实施方案中，所述抗结剂为BTH。

在一些实施方案中，所述润滑剂为DC-200。

在一些实施方案中，所述润肤剂为甘油。

在一些实施方案中，所述防腐剂为极美。

在一些实施方案中，所述稳定剂为乙二胺四乙酸二钠、0.01M磷酸盐缓冲液。

在一些实施方案中，所述溶剂为水。

在一些实施方案中，所述抗老化的润肤霜由如下重量份原料制成：

其中，所述ZY-92、ZY-921、DC-200为乳化剂，BTH为抗氧化剂。

所述C16-18OH是指碳原子数为16～18的醇类化合物。

所述极美为英文名为Germall，是一种高效的、广谱的抗微生物防腐剂体系，能有效的抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母菌、霉菌，几乎可以与所有个人护理品原料相容。

所述0.01M磷酸盐缓冲液为稳定剂。

进一步，本发明还提供了一种制备所述抗老化的润肤霜的方法，包括如下步骤：

(1)、将A组分中各成分于70～80℃水浴溶解；

(2)、B组分中用甘油将汉生胶和乙二胺四乙酸二钠分散均匀后水浴溶解；

(3)、D组分中先用稳定剂溶解人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉；

(4)、将A组分倒入B组分中，均质乳化，降温到37～50℃后加入C组分和D组分各成分，均质均匀得到人羊膜间充质干细胞外泌体润肤霜；

其中，步骤(1)、(2)和(3)不分先后顺序。

进一步的，所述均质为负压下均质1～2次，每次15～30分钟。

本发明还提供了一种抗老化的眼霜，包括人羊膜间充质干细胞外泌体和基质，所述基质包括乳化剂、润滑剂、增稠剂、增溶剂、润肤剂、稳定剂、溶剂、防腐剂、抗皱剂。

在一些实施方案中，所述乳化剂为PEA。

在一些实施方案中，所述润滑剂为IPP。

在一些实施方案中，所述增稠剂为AVC。

在一些实施方案中，所述增溶剂选自C16-18OH中的一种或几种。

在一些实施方案中，所述润肤剂为合成角鲨烷。

在一些实施方案中，所述稳定剂为0.01M磷酸盐缓冲液。

在一些实施方案中，所述溶剂为水。

在一些实施方案中，所述防腐剂为极美。

在一些实施方案中，所述抗皱剂选自Polylift或Polylift中的一种或几种。

在一些实施方案中，所述抗老化的眼霜，由如下重量份原料制成：

其中，所述PEA为乳化剂，Polylift为紧肤剂，Fermiskin为去皱剂。

进一步，本发明还提供了一种制备所述抗老化的眼霜的方法，包括如下步骤：

(1)、将A组分中各成分于70～80℃水浴溶解；

(2)、B组分用部分去离子水加热溶解、搅拌均匀；

(3)、D组分中先用稳定剂溶解人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉；

(4)、将A组分倒入B组分中，搅拌均匀，降温至37～50℃后加入C组分和D组分，搅拌均匀，得到人羊膜间充质干细胞外泌体眼霜；

其中，步骤(1)、(2)和(3)不分先后顺序。

本发明提供了人羊膜间充质干细胞外泌体的新用途。实验结果显示人羊膜间充质干细胞能够促进HDF细胞的生长，并且可以提高细胞内SOD酶的活性，减少因紫外线辐射诱导产生的氧自由基对细胞的攻击和损害，降低细胞的死亡率。表明人羊膜间充质干细胞外泌体具有抗光老化的功效。同时表明所述人羊膜间充质干细胞外泌体无光毒性作用。本发明还提供了包含人羊膜间充质干细胞外泌体的抗老化的制剂。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示实施例3人羊膜间充质干细胞外泌体对人真皮成纤维细胞生长的影响图，其中横坐标为人羊膜间充质干细胞外泌体的浓度，单位μg/ml；纵坐标为细胞存活率；

图2示实施例3人羊膜间充质干细胞外泌体对人真皮成纤维细胞SOD酶的活性的影响图，其中横坐标为人羊膜间充质干细胞外泌体的浓度，单位μg/ml；纵坐标为SOD酶活性，单位U/ml；

图3示实施例6不同配方的人羊膜间充质干细胞外泌体润肤露对皮肤纹理变化的影响图，其中横坐标为使用天数，纵坐标为算术平均粗糙度，为配方1，为配方2，为配方3，为配方4，为配方5，为配方6；

图4示实施例6不同配方的人羊膜间充质干细胞外泌体润肤露对皮肤弹性变化的影响图，其中横坐标为使用天数，纵坐标为弹性相对变化率，为配方1，为配方2，为配方3，为配方4，为配方5，为配方6；

图5示实施例8不同配方的人羊膜间充质干细胞外泌体眼霜对眼周皮肤纹理变化的影响图，其中横坐标为使用天数，纵坐标为算术平均粗糙度，为配方1，为配方2，为配方3，为配方4，为配方5，为配方6。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。如无特殊说明，所述原料均通过商业渠道购买。其中，说明书和权利要求书中所使用的缩写的含义列于下表中：

实施例1、人羊膜间充质干细胞的培养及培养上清的收集

1、人羊膜间充质干细胞的培养：

取生长良好的人羊膜间充质干细胞，用无血清培养基培养，0.25％胰酶消化传代，传至P2代，待其生长至融合度80％，弃培养上清，用PBS洗三遍，加入1640基础培养基，每天收集培养上清，并更换新鲜的1640培养基，连续收集培养3到5天后收集培养上清用于外泌体的提取。其中，用于收集培养上清的细胞状态如图1所示。

2、外泌体的提取(提取全过程除特别说明外，均在4℃下进行)：

(1)、将收集的所有培养上清300g离心10min，保留上清液，弃沉淀，去除培养液中的细胞；

(2)、上清液2000g～3000g离心20min～30min，保留上清液，弃沉淀，去除细胞碎片；

(3)、上清液10000g离心60min～100min，保留上清液，弃沉淀，再次去除细胞碎片；

(4)、上清液100000g离心60min～120min，弃上清，保留沉淀；

(5)、沉淀加入PBS重悬后，100000g离心60min～120min弃上清，保留沉淀，去除培养基中蛋白质，所获即为纯化后的人羊膜间充质干细胞的外泌体，用PBS缓冲液重悬，用BCA试剂盒测蛋白浓度。

实施例2、人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的制备：

取实施例1纯化后的外泌体，加入海藻糖至终浓度为10％，混匀后，过0.22μm滤膜，分装后置于超低温冰箱(-80℃)12h，然后将样品转移至真空冻干仓冻干，冻干的真空度保持在10Pa，温度在-50℃冷冻12到48h得到人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉。

实施例3、人羊膜间充质干细胞外泌体体外抗光老化试验

1、MTT法测定人羊膜间充质干细胞外泌体对人真皮成纤维细胞生长的影响

检测样品：实施例3制备的人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉(蛋白含量为50.0±0.5μg/支)。

受试生物体：人成纤维细胞(HDF细胞)。

具体步骤如下所示：

(1)利用10％(v/v)FBS的DMEM/F12培养基(青霉素200U/ml、链霉素250U/ml，pH7.2)培养HDF细胞，当细胞密度达到100％融合时，利用细胞消化液消化细胞，调整细胞浓度为为1×10⁵cell/ml，接种到96孔板中，每孔100μL，设定4个复孔，37℃、5％CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中继续培养；

(2)24h后，弃去培养基，用含1％FBS的DMEM/F1培养基稀释外泌体终浓度为400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml，每孔加入100μL，设定4个复孔，对照组加入1％FBS的DMEM/F12培养基。37℃、5％CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中继续培养；

(3)48h后，加入20μL/孔的MTT溶液，继续培养4h，弃上清，加入DMSO100μL/孔，避光震荡15min，利用酶标仪在波长为570nm、参考波长为630nm处测定吸光度，并计算细胞存活率。统计细胞存活率，结果如图1。其中细胞存活率计算公式如下：

细胞存活率(％)＝(实验组平均吸光度值/对照组平均吸光度值)×100％。

由图1结果可见，人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉在浓度≦400μg/ml时对HDF细胞无明显的抑制作用，镜下观察细胞也无明显的死亡等症状。实验组的细胞存活率与对照组相比较，都没有出现显著的细胞死亡，而≦100μg/ml人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉能够促进HDF细胞的生长。

2、人羊膜间充质干细胞外泌体对紫外损伤人真皮成纤维细胞的保护作用

检测样品：实施例3制备的人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉(蛋白含量为50.0±0.5μg/支)。

受试生物体：HDF细胞。

具体步骤如下所示：

(1)当人真皮成纤维细胞生长至80％融合时，用UVA紫外线照射细胞，每天照射2小时，共照射4天，阴性对照组用锡纸包住细胞培养瓶。在显微镜下观察细胞的形态，发现细胞开始出现皱缩，个别细胞漂浮在培养基中；第五天，加入人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉，终浓度为20μg/ml和10μg/ml，以20μg/ml维生素C作为阳性对照，继续培养48h，收集细胞；

(2)加入0.25％胰酶1-3ml每瓶消化各组细胞，用每瓶4-6ml10％(v/v)FBS的DMEM/F12培养基终止酶解后,在1500g、4℃条件下离心10min。收集细胞沉淀悬浮在遇冷的缓冲液中(50mM的Tris–HCl、5mM EDTA和1mM DTT)进行超声，裂解液在10000g、4℃条件下离心10min，取上清利用SOD检测试剂盒(购自日本同仁化学研究所，货号S311)中的说明方法进行分析，结果见图2。

由图2结果可见，人羊膜间充质干细胞外泌体无论是20μg/ml，还是10μg/ml都在不同程度上提高了细胞内SOD酶的活性，从而减少因紫外线辐射诱导产生的氧自由基对细胞的攻击和损害，降低细胞的死亡率，起到保护细胞的作用，具有抗光老化的功效。

实施例4：人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的家兔皮肤光毒性试验

受试物：实施例3制备的人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉。

受试生物体：成年白色家兔(广东省动物实验中心)50只，雌性各半。

UV光源：波长为320nm～400nm的UVA。

照射时间：1.5h。

试验步骤：进行正式光毒试验前18～24h，将家兔脊柱两侧皮肤去毛，试验部位皮肤需完好，无损伤及异常；备4块去毛区，每块去毛面积约为2cm×2cm，去毛皮的试验安排如表1所示。

表1去毛皮区的试验安排

去毛区编号	试验处理
		1	涂受试物，不照射
2	涂受试物，照射
		3	不涂受试物，不照射
4	不涂受试物，照射

将动物固定，根据表1，在动物去毛区1和2分别涂敷1ml含10μg/ml、20μg/ml受试物水溶液；30min后，左侧(去毛区1和3)用铝箔复盖，胶带固定，右侧(去毛区2和4)用UVA进行照射，结束后分别于1h、24h、48h和72h观察皮肤反应，根据表2(皮肤刺激反应评分表)判断是否对皮肤有刺激反应。

表2皮肤刺激评反应评分表

结果显示，50只受试家兔在处理后1h、24h、48h和72h均未观察到皮肤刺激反应，表明本发明的人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉无光毒性作用。

实施例5、人羊膜间充质干细胞外泌体润肤霜

配方如下表3所示。制备得到3种配方的含有实施例3制备的人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的润肤霜：

表3润肤霜配方表

其中：配方1和配方4、配方2和配方5、配方3和配方6的ABC组分相同。

润肤霜的制备工艺包括如下步骤：

(1)、将A组分中各成分于70～80℃水浴溶解；

(2)、B组分中用甘油将汉生胶和乙二胺四乙酸二钠分散均匀后水浴溶解；

(3)、D组分中先用稳定剂溶解人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉；

(4)、将A组分倒入B组分中，均质(负压、均质1～2次，每次15～30分钟)乳化，降温到37～50℃后加入C组分和D组分各成分，均质均匀得到人羊膜间充质干细胞外泌体润肤霜；

其中，步骤(1)、(2)和(3)不分先后顺序。

实施例6、人羊膜间充质干细胞外泌体润肤霜效果测试

招募20名中国女性受试者，年龄35～65岁，平均年龄(42.51±3.12)岁。每位受试者均被告知整个研究过程，并签署知情同意书。实验产品为配方1到6生产出来的润肤霜。对20名受试者的左、右脸颊依次循环标记：受试区域涂抹配方1、2、3制备的润肤霜，空白对照区域涂抹基料相同但不添加人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的配方4、5、6，每天早晚在试验区域和空白对照区域涂抹相应样品2次，每次分别涂抹0。3g，在连续使用7d、14d、21d和28d后，每周同一时问将受试者的涂抹部位洗净，由测试者使用皮肤弹性测试仪和MicroSkinlI多功能皮肤镜图像分析系统测定涂抹部位的皮肤纹理和皮肤弹性值。每点测5次，取平均值。

(1)皮肤纹理变化情况

按照算数平均粗糙度统计使用护肤霜后的皮肤纹理变化情况，结果见图3。

由图3结果可见，润肤霜基质对皮肤的没有明显变化，而含人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的润肤霜在0.1×10^-9g～20.0×10^-9g范围内，含量越高，效果越明显，皮肤粗糙度随使用时间的增加而降低。

(2)皮肤弹性变化情况

按照皮肤弹性相对变化率统计使用护肤霜后的皮肤弹性变化情况，结果见图4。

其中弹性相对变化率的计算公式如下，弹性相对变化率越大，说明润肤霜的抗衰老效果越明显。

弹性相对变化率＝(受试区域弹性-空白对照区域弹性)/空白对照区域弹性。

由图4结结果可见，润肤霜基质对皮肤的弹性没有明显影响，而含人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的润肤霜在0.1×10^-9g～20.0×10^-9g范围内，含量越高，效果越明显。

实施例7、人羊膜间充质干细胞外泌体眼霜

配方如下表4所示。制备得到3种配方的含有实施例3制备的人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的眼霜。

表4眼霜配方表

其中：配方1和配方4、配方2和配方5、配方3和配方6的ABC组分相同。眼霜的制备工艺包括如下步骤：

(1)、将A组分中各成分于70～80℃水浴溶解；

(2)、B组分用部分去离子水加热溶解、搅拌均匀；

(3)、D组分中先用稳定剂溶解人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉；

(4)、将A组分倒入B组分中，搅拌均匀，降温至37～50℃后加入C组分和D组分，搅拌均匀，得到人羊膜间充质干细胞外泌体眼霜；

其中，步骤(1)、(2)和(3)不分先后顺序。

实施例8、人羊膜间充质干细胞外泌体眼霜效果测试

招募20名中国女性受试者，年龄35～65岁，平均年龄(42.51±3.12)岁。每位受试者均被告知整个研究过程，并签署知情同意书。实验产品为配方1到6生产出来的眼霜。对20名受试者的左、右眼周依次循环标记：受试区域涂抹配方1、2、3制备的眼霜，空白对照区域涂抹基料相同但不添加人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的配方4、5、6，每天早晚在试验区域和空白对照区域涂抹相应样品2次，每次分别涂抹0.1g，在连续使用7d、14d、21d和28d后，每周同一时问将受试者的涂抹部位洗净，由测试者使用MicroSkinlI多功能皮肤镜图像分析系统测定涂抹部位的皮肤纹理。每点测5次，取平均值。统计使用眼霜后的眼周皮肤纹理变化情况，结果如图5。

由图5结果可见，眼霜基质对眼周皮肤有一定的抗皱作用，但含人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的眼霜效更加明显，在0.1×10^-9g～20.0×10^-9g范围内，含量越高，效果越明显，皮肤粗糙度随使用时间的增加而降低。

Claims (14)

1.人羊膜间充质干细胞外泌体在制备抗老化的制剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，所述制剂为药品或护肤品。

3.一种抗老化的制剂，包含人羊膜间充质干细胞外泌体。

4.根据权利要求3所述的制剂，所述人羊膜间充质干细胞外泌体为人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉。

5.根据权利要求4所述的制剂，所述人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法为：取人羊膜间充质干细胞外泌体，加入海藻糖混匀后，滤膜过滤，分装后超低温冷冻12h，然后在10Pa的真空度、-50℃的条件下冷冻12h～48h。

6.根据权利要求3所述的制剂，其为护肤品。

7.一种抗老化的润肤霜，包括人羊膜间充质干细胞外泌体和基质，所述基质包括乳化剂、增溶剂、抗结剂、润滑剂、润肤剂、稳定剂、溶剂、防腐剂。

8.根据权利要求7所述的润肤霜，所述乳化剂选自ZY-92、ZY-921、白油、硬脂酸、汉生胶、三乙醇胺中的一种或几种；所述增溶剂选自C16-18OH中的一种或几种；所述抗结剂为BTH；所述润滑剂为DC-200；所述润肤剂为甘油；所述防腐剂为极美；所述稳定剂为乙二胺四乙酸二钠、0.01M磷酸盐缓冲液；所述溶剂为水。

9.根据权利要求7或8所述的润肤霜，由如下重量份原料制成：

10.一种制备权利要求9所述抗老化的润肤霜的方法，包括如下步骤：

(1)、将A组分中各成分于70～80℃水浴溶解；

(2)、B组分中用甘油将汉生胶和乙二胺四乙酸二钠分散均匀后水浴溶解；

(3)、D组分中先用稳定剂溶解人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉；

(4)、将A组分倒入B组分中，均质乳化，降温到37～50℃后加入C组分和D组分中各成分，均质均匀得到人羊膜间充质干细胞外泌体润肤霜；

其中，步骤(1)、(2)和(3)不分先后顺序。

11.一种抗老化的眼霜，包括人羊膜间充质干细胞外泌体和基质，所述基质包括乳化剂、润滑剂、增稠剂、增溶剂、润肤剂、稳定剂、溶剂、防腐剂、抗皱剂。

12.根据权利要求11所述的眼霜，所述乳化剂为PEA；所述润滑剂为IPP；所述增稠剂为AVC；所述增溶剂选自C16-18OH中的一种或几种；所述润肤剂为合成角鲨烷；所述稳定剂为0.01M磷酸盐缓冲液；所述溶剂为水；所述防腐剂为极美；所述抗皱剂选自Polylift或Polylift中的一种或几种。

13.根据权利要求11或12所述的眼霜，由如下重量份原料制成：

14.一种制备权利要求13所述抗老化的眼霜的方法，包括如下步骤：

(1)、将A组分中各成分于70～80℃水浴溶解；

(2)、B组分用部分去离子水加热溶解、搅拌均匀；

(3)、D组分中先用稳定剂溶解人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉；

(4)、将A组分倒入B组分中，搅拌均匀，降温至37～50℃后加入C组分和D组分，搅拌均匀，得到人羊膜间充质干细胞外泌体眼霜；

其中，步骤(1)、(2)和(3)不分先后顺序。