CN108703938A - 一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，由下述按重量份数计的组分组成：间充质干细胞外泌体提取物90‑110份、甜杏仁油30‑45份、肉豆蔻酸异丙酯32‑40份、白及20‑25份、川芎12‑18份、紫草10‑15份、五元胜肽25‑30份、羧乙基纤维素纳23‑31份、乙二胺四乙酸二钠42‑46份、十二甲基环六硅氧烷42‑47份、蛋黄卵磷脂36‑40份、鲸蜡硬脂醇31‑35份、大豆异黄酮13‑15份、甘硼酸二钾35‑44份、抗菌剂2‑5份、乳化剂4‑5份、活性剂3‑4份。制备方法：一、对白及、川芎、紫草粉碎干燥处理；二、加入其他成分混合搅拌；三、蒸发浓缩；四、均质静置。本发明提供的面膜具有抗皱、保湿的功效，增强细胞活力，增加肌肤弹性。

Description

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜

技术领域

本发明涉及化妆品面膜技术领域，具体是涉及一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜。

背景技术

随着年龄的增长，环境污染的加剧，饱受工作重压的年轻白领因紫外线、粉尘、废气、电脑辐射等原因导致皮肤状况出现诸多问题，再加上人们对美的不断追求以及对健康的需求，以美白、保湿、去皱、淡斑等为主要功效的美容面膜类产品得到了大多数消费者的青睐。面膜敷于面部可使皮肤清洁、绷紧、使表皮增温，从而产生刺激皮肤返老还童作用的美容品。它的主要功用是吸附皮肤上的污物，去除多余的脂类化合物和坏死的细胞，并通过面膜的收缩力，改善血液循环，使皮肤光洁细腻。如何延缓和阻止皮肤细胞的衰老既是美容抗衰老的根本问题，也是皮肤保健的关键。加上基底细胞分裂能力逐渐降低，皮肤生长因子水平降低，作用减弱，细胞凋亡随年龄增长而增加，成纤维细胞逐渐减少，成纤维细胞分泌的胶原蛋白也在逐渐减少，从而表现出皮肤的弹性降低、出现皱纹等现象。

研究表明，间充质干细胞一个强大的功能就是分泌众多的营养性细胞因子。现在越来越多的研究倾向于认为间充质干细胞主要通过旁分泌机制来分泌多种细胞因子作用于其他细胞来发挥作用。外泌体是一种直径在30-100nm的脂质双分子层囊泡，最早在1983年研究羊的网织红细胞成熟过程中分泌的囊泡而提出，其可携带细胞特异表达的蛋白、脂质和核酸等物质，然后通过与细胞的接触直接将所携带的物质传递给邻近或者远距离的细胞。目前大量研究表明，间充质干细胞来源的外泌体可以通过其内容的蛋白、RNA成分胞间转移，发挥与间充质干细胞相类似的组织修复、免疫抑制、调节免疫功能等作用。与细胞治疗相比较，外泌体性质更稳定。

目前，目前比较流行的面膜有3种形式：泥状、织布状和啫喱状。泥状面膜的吸附能力较好，能去除皮肤表面的污渍，但是人们在使用此类面膜前都会用洗面奶洗脸，也同样起到去污的作用；同时，泥状面膜一般都比较厚，渗透系数低，不利于肌肤对营养物质的吸收。织布状面膜与脸部的贴合状况并不理想，不好吸收；并且由于此类面膜含水量高，要添加大量防腐剂，在某种程度上会对皮肤造成伤害。啫喱状面膜的渗透力较差，并且使用后需要水洗，带来使用上的不便。

发明内容

针对以上技术问题，本发明采用一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜。

本发明的技术方案是：一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，由下述按重量份数计的组分组成：间充质干细胞外泌体提取物90-110份、甜杏仁油30-45份、肉豆蔻酸异丙酯32-40份、白及20-25份、川芎12-18份、紫草10-15份、五元胜肽25-30份、羧乙基纤维素纳23-31份、乙二胺四乙酸二钠42-46份、十二甲基环六硅氧烷42-47份、蛋黄卵磷脂36-40份、鲸蜡硬脂醇31-35份、大豆异黄酮13-15份、甘硼酸二钾35-44份、抗菌剂2-5份、乳化剂4-5份、活性剂3-4份。

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜的制备方法，包括以下步骤：

(1)白及、川芎、紫草在负压条件下研磨粉碎，加入重量为2-3倍的甲醇溶液中混合搅拌，通过冷风对混合液进行风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度为-20～-10℃，真空至10-12KPa，控制粉碎物的表面温度为-25～-15℃，处理时间为40-50min，然后调节压强到20-30KPa，过滤浓缩，进行离心喷雾干燥处理20-30min，待用；

(2)将间充质干细胞外泌体提取物、甜杏仁油、肉豆蔻酸异丙酯、十二甲基环六硅氧烷、蛋黄卵磷脂、鲸蜡硬脂醇、大豆异黄酮、甘硼酸二钾溶于丙三醇溶液中进行完全溶解，得到混合溶液，在真空环境下加热至60-70℃，并在转速为1000-1800r/min的条件下搅拌均匀，然后加入体积的1-2倍的水，将五元胜肽、羧乙基纤维素纳、乙二胺四乙酸二钠按顺序加入溶解，通过振荡分散处理20-30min；

(3)将振荡分散处理后的混合溶液，进行蒸发浓缩至原体积的2/3，然后与低温干燥环境下，低温温度为2-6℃，控制压强为80-90KPa，将抗菌剂、活性剂、乳化剂分别加入到浓缩液内，通过磁力棒进行搅拌，搅拌速率不断增加，起始速度为300r/min，经过30-50min，最终速率为800r/min,每次加入期间静置5-10min进行再次添加；

(4)将步骤(1)和步骤(3)所得的溶液进行混合搅拌均匀，调节pH值到6.0-6.7，高压均质处理12-20min，静置10-15h，将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。

间充质干细胞外泌体提取物的提取方法，采用如下步骤：

(1)取间充质干细胞外泌体，加入缓冲液混合搅拌均匀后，在压强为40-70MPa下进行均质处理1-2次，得到悬浊液，将悬浊液在3℃搅拌静置2h，通过液氮循环对悬浊液进行-15℃冰冻处理2h，对冰冻后的悬浊液在水浴条件下进行微波破碎处理，通过生理盐水进行往复水洗处理，再进行离心处理，离心速度为1100～2200g，离心时间为15～25min；

(2)将步骤(1)所得离心液的上清液通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液，洗脱液经超滤膜过滤，去除体液中的细胞成分和细胞碎片，往复2-3次，在10-15℃的低温干燥的环境下，每次按照1300～1800g离心浓缩8～12min，得到浓缩液，将每次所得的浓缩液进行混合，静置15-30min，留取沉淀物；

(3)将所得的沉淀物加入到pH为7-9的硼酸盐缓冲液中，通过振荡分层，静置悬浮15-20min，使外泌体悬浮于液体上层，吸取上层含有外泌体的液体，通过疏水层析纯化上层液，流速为2-15ml/min，压力为2-3bar，室温环境下进行提纯，得到间充质干细胞外泌体提取物。

进一步地，抗菌剂是由质量比为4:2:2:3的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成，该配比能够更好的提供消炎抗菌的性能。

进一步地，活性剂是由质量比为3:2:2:3的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成，该配比能够对面膜中的成分提高溶解度和稳定性。

进一步地，乳化剂是由质量比为3:1:2:2的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯，该配比能够对面膜中成分分散均匀，使用面膜时，保证皮肤对面膜成分的吸收。

进一步地，步骤(2)中分散条件为：温度为10-20℃，通过磁力棒300-400rmp搅拌下进行真空脱水处理，能够保证各个成分混合均匀，分散性强。

进一步地，对间充质干细胞外泌体进行提取过程中加入按照重量比为3:6:5的聚乙烯吡咯烷酮、烷基醇酰胺聚氧乙烷醚、氢化异麦芽酮糖，能够改变间充质干细胞外泌体中细胞膜的通透性，可显著改善其对细胞膜的亲和性。

本发明的有益效果是：

(1)面膜可以适用于不同人群，在间充质干细胞外泌体提取时，提高细胞膜通透性，便于提取，使用面膜时能够激活细胞、增加细胞活力，促进面部的微循环和促进新陈代谢，保证肌肤的紧致有光泽。

(2)通过与中草药的混合，能够达到疏风清热解毒、恢复皮肤的正常结构和生理功能，滋润皮肤，便于对营养物质的吸收，保湿能力强，减少肌肤不适感。

(3)能够对皮肤的肌肉进行舒缓，避免肌肉过度收缩，对皱纹进行活动，使肌肤弹性组织恢复柔顺平滑的状态，达到抗皱效果，弹性性能强，与面部贴合程度高，对面部毛孔污渍进行吸附。

具体实施方式

实施例1

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，由下述按重量份数计的组分组成：间充质干细胞外泌体90份、甜杏仁油30份、肉豆蔻酸异丙酯32份、白及20份、川芎12份、紫草10份、五元胜肽25份、羧乙基纤维素纳23份、乙二胺四乙酸二钠42份、十二甲基环六硅氧烷42份、蛋黄卵磷脂36份、鲸蜡硬脂醇31份、大豆异黄酮13份、甘硼酸二钾35份、抗菌剂2份、乳化剂4份、活性剂3份

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜的制备方法，包括以下步骤：

(1)白及、川芎、紫草在负压条件下研磨粉碎，加入重量为2倍的甲醇溶液中混合搅拌，通过冷风对混合液进行风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度为-20℃，真空度10KPa，控制粉碎物的表面温度为-25℃，处理时间为40min，然后调节压强到20KPa，过滤浓缩，进行离心喷雾干燥处理20min，待用；

(2)将间充质干细胞外泌体提取物、甜杏仁油、肉豆蔻酸异丙酯、十二甲基环六硅氧烷、蛋黄卵磷脂、鲸蜡硬脂醇、大豆异黄酮、甘硼酸二钾溶于丙三醇溶液中进行完全溶解，得到混合溶液，在真空环境下加热至60℃，并在转速为1000r/min的条件下搅拌均匀，然后加入体积的1倍的水溶液，将五元胜肽、羧乙基纤维素纳、乙二胺四乙酸二钠按顺序加入溶解，通过振荡分散处理20min，分散条件为：温度为10℃，通过磁力棒300rmp搅拌下进行真空脱水处理，控制含水量至70％；

(3)将振荡分散处理后的混合溶液，进行蒸发浓缩至原体积的2/3，然后与低温干燥环境下，低温温度为2℃，控制压强为80KPa，将是由质量比为4:2:2:3的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成的抗菌剂、是由质量比为3:2:2:3的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成的活性剂、由质量比为3:1:2:2的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯制成的乳化剂分别加入到浓缩液内，通过磁力棒进行搅拌，搅拌速率不断增加，起始速度为300r/min，经过30min，最终速率为800r/min,每次加入期间静置5min进行再次添加；

(4)将步骤(1)和步骤(3)所得的溶液进行混合搅拌均匀，调节pH值到6.0，高压均质处理12min，静置10h，将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。

间充质干细胞外泌体提取物的提取方法，采用如下步骤：

(1)取间充质干细胞外泌体，加入PBS缓冲液混合搅拌均匀后，通过压强为40MPa下进行均质处理1次，得到悬浊液，将悬浊液在3℃搅拌静置2h，通过液氮循环对悬浊液进行-15℃冰冻处理2h，对冰冻后的悬浊液在水浴条件下进行微波破碎处理，通过生理盐水进行往复水洗处理，经过离心处理，离心速度为1100g，离心时间为15min；

(2)将步骤(1)所得离心液的上清液通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液，洗脱液经超滤膜过滤，去除体液中的细胞成分和细胞碎片，往复2次，在10℃的低温干燥的环境下，每次按照1300g离心浓缩8min，得到浓缩液，将每次所得的浓缩液进行混合，静置15min，留取沉淀物；

(3)将所得的沉淀物加入到pH为7的硼酸盐缓冲液中，通过振荡分层，静置悬浮15min，使外泌体悬浮于液体上层，吸取上层含有外泌体的液体，通过疏水层析纯化上层液，流速为2ml/min，压力为2bar，室温环境下进行提纯，得到间充质干细胞外泌体提取物。

实施例2

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，由下述按重量份数计的组分组成：间充质干细胞外泌体100份、甜杏仁油40份、肉豆蔻酸异丙酯38份、白及23份、川芎15份、紫草14份、五元胜肽27份、羧乙基纤维素纳28份、乙二胺四乙酸二钠44份、十二甲基环六硅氧烷45份、蛋黄卵磷脂38份、鲸蜡硬脂醇33份、大豆异黄酮14份、甘硼酸二钾40份、抗菌剂3份、乳化剂4份、活性剂3份。

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜的制备方法，包括以下步骤：

(1)白及、川芎、紫草在负压条件下研磨粉碎，加入重量为2倍的甲醇溶液中混合搅拌，通过冷风对混合液进行风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度为-15℃，真空度11KPa，控制粉碎物的表面温度为-20℃，处理时间为45min，然后调节压强到25KPa，过滤浓缩，进行离心喷雾干燥处理25min，待用；

(2)将间充质干细胞外泌体提取物、甜杏仁油、肉豆蔻酸异丙酯、十二甲基环六硅氧烷、蛋黄卵磷脂、鲸蜡硬脂醇、大豆异黄酮、甘硼酸二钾溶于丙三醇溶液中进行完全溶解，得到混合溶液，在真空环境下加热至65℃，并在转速为1500r/min的条件下搅拌均匀，然后加入体积的1.5倍的水，将五元胜肽、羧乙基纤维素纳、乙二胺四乙酸二钠按顺序加入溶解，通过振荡分散处理25min，分散条件为：温度为15℃，通过磁力棒350rmp搅拌下进行真空脱水处理，控制含水量至70％；

(3)将振荡分散处理后的混合溶液，进行蒸发浓缩至原体积的2/3，然后与低温干燥环境下，低温温度为3℃，控制压强为85KPa，将是由质量比为4:2:2:3的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成的抗菌剂、是由质量比为3:2:2:3的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成的活性剂、由质量比为3:1:2:2的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯制成的乳化剂分别加入到浓缩液内，其中，通过磁力棒进行搅拌，搅拌速率不断增加，起始速度为300r/min，经过40min，最终速率为800r/min,每次加入期间静置8min进行再次添加；

(4)将步骤(1)和步骤(3)所得的溶液进行混合搅拌均匀，调节pH值到6.5，高压均质处理15min，静置13h，将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。

间充质干细胞外泌体提取物的提取方法，采用如下步骤：

(1)取间充质干细胞外泌体，加入PBS缓冲液混合搅拌均匀后，在压强为50MPa下进行均质处理1次，得到悬浊液，将悬浊液在3℃搅拌静置2h，通过液氮循环对悬浊液进行-15℃冰冻处理2h，对冰冻后的悬浊液在水浴条件下进行微波破碎处理，通过生理盐水进行往复水洗处理，再进行离心处理，离心速度为1500g，离心时间为20min；

(2)将步骤(1)所得离心液的上清液通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液，洗脱液经超滤膜过滤，去除体液中的细胞成分和细胞碎片，往复2次，在13℃的低温干燥的环境下，每次按照1500g离心浓缩10min，得到浓缩液，将每次所得的浓缩液进行混合，静置25min，留取沉淀物；

(3)将所得的沉淀物加入到pH为8的硼酸盐缓冲液中，通过振荡分层，静置悬浮18min，使外泌体悬浮于液体上层，吸取上层含有外泌体的液体，通过疏水层析纯化上层液，流速为10ml/min，压力为2bar，室温环境下进行提纯，得到间充质干细胞外泌体提取物。

实施例3

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，由下述按重量份数计的组分组成：间充质干细胞外泌体110份、甜杏仁油45份、肉豆蔻酸异丙酯40份、白及25份、川芎18份、紫草15份、五元胜肽30份、羧乙基纤维素纳31份、乙二胺四乙酸二钠46份、十二甲基环六硅氧烷47份、蛋黄卵磷脂40份、鲸蜡硬脂醇35份、大豆异黄酮15份、甘硼酸二钾44份、抗菌剂5份、乳化剂5份、活性剂4份。

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜的制备方法，包括以下步骤：

(1)白及、川芎、紫草在负压条件下研磨粉碎，加入重量为3倍的甲醇溶液中混合搅拌，通过冷风对混合液进行风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度为-10℃，真空度12KPa，控制粉碎物的表面温度为-15℃，处理时间为50min，然后调节压强到30KPa，过滤浓缩，进行离心喷雾干燥处理30min，待用；

(2)将间充质干细胞外泌体提取物、甜杏仁油、肉豆蔻酸异丙酯、十二甲基环六硅氧烷、蛋黄卵磷脂、鲸蜡硬脂醇、大豆异黄酮、甘硼酸二钾溶于丙三醇溶液中进行完全溶解，得到混合溶液，在真空环境下加热至70℃，并在转速为1800r/min的条件下搅拌均匀，然后加入体积的2倍的水，将五元胜肽、羧乙基纤维素纳、乙二胺四乙酸二钠按顺序加入溶解，通过振荡分散处理30min，分散条件为：温度为20℃，通过磁力棒400rmp搅拌下进行真空脱水处理，控制含水量至70％；

(3)将振荡分散处理后的混合溶液，进行蒸发浓缩至原体积的2/3，然后与低温干燥环境下，低温温度为6℃，控制压强为90KPa，将是由质量比为4:2:2:3的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成的抗菌剂、是由质量比为3:2:2:3的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成的活性剂、由质量比为3:1:2:2的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯制成的乳化剂分别加入到浓缩液内，其中，通过磁力棒进行搅拌，搅拌速率不断增加，起始速度为300r/min，经过50min，最终速率为800r/min,每次加入期间静置10min进行再次添加；

(4)将步骤(1)和步骤(3)所得的溶液进行混合搅拌均匀，调节pH值到6.7，高压均质处理20min，静置15h，将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。

间充质干细胞外泌体提取物的提取方法，采用如下步骤：

(1)取间充质干细胞外泌体，加入PBS缓冲液混合搅拌均匀后，在压强为70MPa下进行均质处理2次，得到悬浊液，将悬浊液在3℃搅拌静置2h，通过液氮循环对悬浊液进行-15℃冰冻处理2h，对冰冻后的悬浊液在水浴条件下进行微波破碎处理，通过生理盐水进行往复水洗处理，再进行离心处理，离心速度为2200g，离心时间为25min；

(2)将步骤(1)所得离心液的上清液通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液，洗脱液经超滤膜过滤，去除体液中的细胞成分和细胞碎片，往复3次，在15℃的低温干燥的环境下，每次按照1800g离心浓缩12min，得到浓缩液，将每次所得的浓缩液进行混合，静置30min，留取沉淀物；

(3)将所得的沉淀物加入到pH为9的硼酸盐缓冲液中，通过振荡分层，静置悬浮20min，使外泌体悬浮于液体上层，吸取上层含有外泌体的液体，通过疏水层析纯化上层液，流速为15ml/min，压力为3bar，室温环境下进行提纯，得到间充质干细胞外泌体提取物。

实施例4

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，由下述按重量份数计的组分组成：间充质干细胞外泌体110份、甜杏仁油45份、肉豆蔻酸异丙酯40份、白及25份、川芎18份、紫草15份、五元胜肽30份、羧乙基纤维素纳31份、乙二胺四乙酸二钠46份、十二甲基环六硅氧烷47份、蛋黄卵磷脂40份、鲸蜡硬脂醇35份、大豆异黄酮15份、甘硼酸二钾44份、抗菌剂5份、乳化剂5份、活性剂4份。

一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜的制备方法，包括以下步骤：

(1)白及、川芎、紫草在负压条件下研磨粉碎，加入重量为3倍的甲醇溶液中混合搅拌，通过冷风对混合液进行风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度为-10℃，真空度12KPa，控制粉碎物的表面温度为-15℃，处理时间为50min，然后调节压强到30KPa，过滤浓缩，进行离心喷雾干燥处理30min，待用；

(2)将间充质干细胞外泌体提取物、甜杏仁油、肉豆蔻酸异丙酯、十二甲基环六硅氧烷、蛋黄卵磷脂、鲸蜡硬脂醇、大豆异黄酮、甘硼酸二钾溶于丙三醇溶液中进行完全溶解，得到混合溶液，在真空环境下加热至70℃，并在转速为1800r/min的条件下搅拌均匀，然后加入体积的2倍的水，将五元胜肽、羧乙基纤维素纳、乙二胺四乙酸二钠按顺序加入溶解，通过振荡分散处理30min，分散条件为：温度为20℃，通过磁力棒400rmp搅拌下进行真空脱水处理，控制含水量至70％；

(3)将振荡分散处理后的混合溶液，进行蒸发浓缩至原体积的2/3，然后与低温干燥环境下，低温温度为6℃，控制压强为90KPa，将是由质量比为4:2:2:3的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成的抗菌剂、是由质量比为3:2:2:3的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成的活性剂、由质量比为3:1:2:2的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯制成的乳化剂分别加入到浓缩液内，其中，通过磁力棒进行搅拌，搅拌速率不断增加，起始速度为300r/min，经过50min，最终速率为800r/min,每次加入期间静置10min进行再次添加；

(4)将步骤(1)和步骤(3)所得的溶液进行混合搅拌均匀，调节pH值到6.7，高压均质处理20min，静置15h，将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。

间充质干细胞外泌体提取物的提取方法，采用如下步骤：

(1)取间充质干细胞外泌体，加入PBS缓冲液混合搅拌均匀后，在压强为70MPa下进行均质处理2次，得到悬浊液，将悬浊液在3℃搅拌静置2h，通过液氮循环对悬浊液进行-15℃冰冻处理2h，对冰冻后的悬浊液在水浴条件下进行微波破碎处理，加入按照重量比为3:6:5的聚乙烯吡咯烷酮、烷基醇酰胺聚氧乙烷醚、氢化异麦芽酮糖，能够改变间充质干细胞外泌体中细胞膜的通透性，可显著改善其对细胞膜的亲和性，通过生理盐水进行往复水洗处理，再进行离心处理，离心速度为2200g，离心时间为25min；

(2)将步骤(1)所得离心液的上清液通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液，洗脱液经超滤膜过滤，去除体液中的细胞成分和细胞碎片，往复3次，在15℃的低温干燥的环境下，每次按照1800g离心浓缩12min，得到浓缩液，将每次所得的浓缩液进行混合，静置30min，留取沉淀物；

(3)将所得的沉淀物加入到pH为9的硼酸盐缓冲液中，通过振荡分层，静置悬浮20min，使外泌体悬浮于液体上层，吸取上层含有外泌体的液体，通过疏水层析纯化上层液，流速为15ml/min，压力为3bar，室温环境下进行提纯，得到间充质干细胞外泌体提取物。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，其特征在于，由下述按重量份数计的组分组成：间充质干细胞外泌体提取物90-110份、甜杏仁油30-45份、肉豆蔻酸异丙酯32-40份、白及20-25份、川芎12-18份、紫草10-15份、五元胜肽25-30份、羧乙基纤维素纳23-31份、乙二胺四乙酸二钠42-46份、十二甲基环六硅氧烷42-47份、蛋黄卵磷脂36-40份、鲸蜡硬脂醇31-35份、大豆异黄酮13-15份、甘硼酸二钾35-44份、抗菌剂2-5份、乳化剂4-5份、活性剂3-4份。

2.一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)白及、川芎、紫草在负压条件下研磨粉碎，加入重量为2-3倍的甲醇溶液中混合搅拌，通过冷风对混合液进行风吹，再进行速冻干燥处理，控制温度为-20～-10℃，真空度10-12KPa，控制粉碎物的表面温度为-25～-15℃，处理时间为40-50min，然后调节压强到20-30KPa，过滤浓缩，进行离心喷雾干燥处理20-30min，待用；

(2)将间充质干细胞外泌体提取物、甜杏仁油、肉豆蔻酸异丙酯、十二甲基环六硅氧烷、蛋黄卵磷脂、鲸蜡硬脂醇、大豆异黄酮、甘硼酸二钾溶于丙三醇溶液中进行完全溶解，得到混合溶液，在真空环境下加热至60-70℃，并在转速为1000-1800r/min的条件下搅拌均匀，然后加入体积的1-2倍的水，将五元胜肽、羧乙基纤维素纳、乙二胺四乙酸二钠按顺序加入溶解，通过振荡分散处理20-30min；

(3)将振荡分散处理后的混合溶液，进行蒸发浓缩至原体积的2/3，然后与低温干燥环境下，低温温度为2-6℃，控制压强为80-90KPa，将抗菌剂、活性剂、乳化剂分别加入到浓缩液内，通过磁力棒进行搅拌，搅拌速率不断增加，起始速度为300r/min，经过30-50min，最终速率为800r/min,每次加入期间静置5-10min进行再次添加；

(4)将步骤(1)和步骤(3)所得的溶液进行混合搅拌均匀，调节pH值到6.0-6.7，高压均质处理12-20min，静置10-15h，将所得的溶液以蚕丝布为载体，制得面膜。

3.如权利要求1所述的一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，其特征在于，所述间充质干细胞外泌体提取物的提取方法，包括以下步骤：

(1)取间充质干细胞外泌体，加入缓冲液混合搅拌均匀后，在压强为40-70MPa下进行均质处理1-2次，得到悬浊液，将悬浊液在3℃搅拌静置2h，通过液氮循环对悬浊液进行-15℃冰冻处理2h，对冰冻后的悬浊液在水浴条件下进行微波破碎处理，通过生理盐水进行往复水洗处理，再进行离心处理，离心速度为1100～2200g，离心时间为15～25min；

(2)将步骤(1)所得离心液的上清液通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液，洗脱液经超滤膜过滤，去除体液中的细胞成分和细胞碎片，往复2-3次，在10-15℃的低温干燥的环境下，每次按照1300～1800g离心浓缩8～12min，得到浓缩液，将每次所得的浓缩液进行混合，静置15-30min，留取沉淀物；

(3)将所得的沉淀物加入到pH为7-9的硼酸盐缓冲液中，通过振荡分层，静置悬浮15-20min，使外泌体悬浮于液体上层，吸取上层含有外泌体的液体，通过疏水层析纯化上层液，流速为2-15ml/min，压力为2-3bar，室温环境下进行提纯，得到间充质干细胞外泌体提取物。

4.如权利要求1所述的一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，其特征在于，所述抗菌剂是由质量比为4:2:2:3的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成。

5.如权利要求1所述的一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，其特征在于，所述活性剂是由质量比为3:2:2:3的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成。

6.如权利要求1所述的一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，其特征在于，所述乳化剂是由质量比为3:1:2:2的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯制成。

7.如权利要求2所述的一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，其特征在于，所述步骤(2)中分散条件为：温度为10-20℃，通过磁力棒300-400rmp搅拌下进行真空脱水处理，控制含水量至70％。

8.如权利要求1所述的一种含有间充质干细胞外泌体提取物的面膜，其特征在于，所述活性剂是由聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵按照质量比为3:2:2:3制成。