CN113384518A - 一种干细胞外泌体应用于面膜的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，由以下材料的重量份的成分组成：白茅萃1‑5份，洋甘菊2‑4份，海藻醣1‑3份，牛油果5‑15份，金盏花2‑5份，薄荷油4‑6份，忍冬花10‑15份，麦冬5‑10份，半胱氨酸1‑3份，丝氨酸1‑3份，胸腺嘧啶1‑3份，胞嘧啶1‑2份，蚕丝1‑2份。该干细胞外泌体应用于面膜的方法，对白茅萃和洋甘菊进行萃取，并得到萃取液与分泌体干冰粉进行混合，不仅可以增加面膜对皮肤的补水性和锁水性，同时在此原料中混入海藻醣，在原有的基础上，增加面膜对皮肤的镇静效果，使材料分子处于平稳状态，便于皮肤组织对内部的养分物质充分吸收，促进皮肤组织的新陈代谢。

Description

一种干细胞外泌体应用于面膜的方法

技术领域

本发明涉及干细胞应用技术领域，具体为一种干细胞外泌体应用于面膜的方法。

背景技术

外泌体是一类直径30-150nm，具有完整膜结构的细胞外囊泡，主要负责细胞间的物质运输和信息传递，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，起源于细胞内吞过程中形成的内体，最后再从细胞中释放到胞外，作为细胞间的一种通讯方式，多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，例如细胞培养液、血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中，外泌体的电镜是鉴定外泌体形态大小的一个常规手段，电镜下呈典型的杯状形态，细胞外囊泡 是机体远距离细胞间交流的一种手段，目前主要被分为3大类：外泌体、微囊泡和凋亡小体，临床研究中主要关注的是外泌体，外泌体，再大的就属于微囊泡直径100~350nm，富含金属蛋白酶和磷脂酰丝氨酸，再大就是凋亡小体了，由细胞凋亡产生。

然而干细胞在紧致皮肤的化妆品中的应用也成为了研究的热点，尤其面膜上的应用较为广泛，但是现有的大多数面膜，脸部皮肤对面膜内部的营养成分吸收不佳，无法对面膜内部的EGF因子吸收到位，并且不适用于部分过敏性皮肤，导致整体的实用性降低，因此需要一种干细胞外泌体应用于面膜的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，以解决上述背景技术中提出脸部皮肤对面膜内部的营养成分吸收不佳，无法对面膜内部的EGF因子吸收到位，并且不适用于部分过敏性皮肤，导致整体的实用性降低的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，由以下材料的重量份的成分组成：白茅萃1-5份，洋甘菊2-4份，海藻醣1-3份，牛油果5-15份，金盏花2-5份，薄荷油4-6份，忍冬花10-15份，麦冬5-10份，半胱氨酸1-3份，丝氨酸1-3份，胸腺嘧啶1-3份，胞嘧啶1-2份，蚕丝1-2份。

作为本发明的优选技术方案，其具体步骤如下：

S1、将计量好的白茅萃与洋甘菊投入到萃取分离机内，升温到80-130℃，第一次蒸发温度不小于80°，蒸发后酸值到达原定的4，最后一次蒸发温度不超过130℃，蒸发后酸值提高到5.12，自然冷却10-20min；

S2、将计量好的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬放入到药碾子内部碾碎碎末状，碾碎后的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬粉末放入到搅拌机内部，并在搅拌机内部加入薄荷油，搅拌温度控制在70-90℃之间，搅拌时长控制在5-10min；

S3、提取干细胞放入到培养基内培养，并加入半胱氨酸、丝氨酸、胸腺嘧啶和胞嘧啶，其中半胱氨酸的浓度为10-30ng/mol，丝氨酸的浓度为5-15ng/mol，胸腺嘧啶的浓度为15-25ng/mol，胞嘧啶的浓度为3-8ng/mol；

S4、使用离心管将干细胞分泌体进行提取，在4℃条件下依次以300G，2000G，10000G的转速离心去除细胞和细胞碎片，再次100000G超速离心得到外泌体；

S5、收集搅拌机内部的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬混合液体，使用40μm规格的无菌细胞过滤器进行过滤，随后以低温冷冻后进行干燥处理，制备出蛋白营养液冻干粉；

S6、取出自然沉降的白茅萃取液与洋甘菊萃取液，加入海藻醣与白茅萃取液和洋甘菊萃取液进行搅拌混合，10℃条件下进行储藏；

S7、将制备完成的蛋白营养液冻干粉与海藻醣、白茅萃取液和洋甘菊萃取液在15℃条件下进行混合，分1-3次加入有机溶剂进行溶解，溶解时间控制在30min；

S8、将S7溶解的液体与干细胞分泌体放置到容器内，加入蚕丝布混合，浸泡时间为15-20min，浸泡完成后以蚕丝吧布载体制成面膜。

采用上述技术方案，将多种材料以混合搅拌与升温反应溶解的方式进行制备，便于将面膜原料产出。

作为本发明的优选技术方案，所述S1中，海藻醣与白茅萃和洋甘菊在高温条件下混合，并依次加入抗菌剂、乳化剂和保水剂，加入时间间隔为5min。

采用上述技术方案，通过依次加入抗菌剂、乳化剂和保水剂，保证在混合的过程中不会滋生细菌，保证材料内部分子的活性，同时还可以避免结构层破裂。

作为本发明的优选技术方案，所述S2中，牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬碾压后的粉末在40℃-50℃之间进行隔温储存。

采用上述技术方案，牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬碾压后的粉末在与其他物料混合之前需要保温，避免温度过低或过高而影响粉末内部的干燥性，提高材料的混合质量。

作为本发明的优选技术方案，所述有机溶剂的溶解时间之差均为正负40min，且有机溶剂与蛋白营养液冻干粉混合搅拌延长5min，并且白茅萃取液和洋甘菊萃取液以分别以10min时间间隔混入溶解。

采用上述技术方案，通过有机溶剂混入在蛋白营养液冻干粉与其他物料之间，便于进行充分混合，确保材料的活性，同时使各种原料都能发挥其作用，提高使用脸部皮肤的吸收效率，使得保养物质更容易渗透被吸收。

作为本发明的优选技术方案，所述搅拌机在工作前需要预热至70℃-90℃，且牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬液体的混合的时长维持在10min，并且薄荷油的混合的时长维持在5-10min之间，混合后的物料降温至40℃进行存储添加其他原料。

采用上述技术方案，牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬液体与薄荷油需要单独混合，两者混合完成后再一起混入进行混合，避免在混合过程中出现内部因子流失，保证了材料制备后的质量，提高面膜整体的实用性。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：该干细胞外泌体应用于面膜的方法：

1.在干细胞提取前，使用离心管进行混合，并以在4℃条件下依次以300G、2000和10000G的转速离心，不仅可以依次去除细胞和细胞碎片，还可以起到缓冲作用，避免急速的离心力导致外泌体破裂而影响质量，同时在分泌体与植物液内部加入溶液，并合理控制溶液的溶解时间，不仅可以提升分泌体的纯度，还可以避免混合时施加的压力比较大，导致体积大的囊泡变形和破裂，从而提高了面膜的作用效果。

2.在制备面膜时，对白茅萃和洋甘菊进行萃取，并得到萃取液与分泌体干冰粉进行混合，不仅可以增加面膜对皮肤的补水性和锁水性，同时在此原料中混入海藻醣，在原有的基础上，增加面膜对皮肤的镇静效果，使材料分子处于平稳状态，便于皮肤组织对内部的养分物质充分吸收，促进皮肤组织的新陈代谢；

3.在面膜制备原液里添加多种植物液，植物液在恒定温度内进行混合，薄荷油在使用前混合，随后将植物液与薄荷油相互混合，不仅可以促进皮肤细胞的分裂，活化及修复肌肤旧死细胞，刺激新细胞生长，同时还可以提升舒适感，减少肌肤老化速度，使皮肤更加具有光泽。

具体实施方式

所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种技术方案：一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，由以下材料的重量份的成分组成：白茅萃1-5份，洋甘菊2-4份，海藻醣1-3份，牛油果5-15份，金盏花2-5份，薄荷油4-6份，忍冬花10-15份，麦冬5-10份，半胱氨酸1-3份，丝氨酸1-3份，胸腺嘧啶1-3份，胞嘧啶1-2份，蚕丝1-2份。

实施例1

由以下材料的重量份的成分组成：白茅萃5份，洋甘菊4份，海藻醣3份，牛油果15份，金盏花5份，薄荷油6份，忍冬花15份，麦冬10份，半胱氨酸3份，丝氨酸3份，胸腺嘧啶3份，胞嘧啶2份，蚕丝1份；材料使用分量较多，可与后续测试结果相互比较，取之最优的数值为参考，便于对内部因子稳定性能进行测试。

实施例2

白茅萃3份，洋甘菊3份，海藻醣2份，牛油果10份，金盏花3份，薄荷油5份，忍冬花10份，麦冬6份，半胱氨酸2份，丝氨酸2份，胸腺嘧啶2份，胞嘧啶12份，蚕丝1份；相比之前分量使用较少，便于对内部因子稳定性能进行测试。

实施例3

由以下材料的重量份的成分组成：白茅萃1份，洋甘菊2份，海藻醣1份，牛油果5份，金盏花2份，薄荷油4份，忍冬花10份，麦冬5份，半胱氨酸1份，丝氨酸1份，胸腺嘧啶1-份，胞嘧啶1份，蚕丝1份；相比之前分量使用最少，便于对内部因子稳定性能进行测试。

作为本发明的优选技术方案，其具体步骤如下：

S1、将计量好的白茅萃与洋甘菊投入到萃取分离机内，升温到80-130℃，第一次蒸发温度不小于80°，蒸发后酸值到达原定的4，最后一次蒸发温度不超过130℃，蒸发后酸值提高到5.12，自然冷却10-20min；

S2、将计量好的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬放入到药碾子内部碾碎碎末状，碾碎后的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬粉末放入到搅拌机内部，并在搅拌机内部加入薄荷油，搅拌温度控制在70-90℃之间，搅拌时长控制在5-10min；

S3、提取干细胞放入到培养基内培养，并加入半胱氨酸、丝氨酸、胸腺嘧啶和胞嘧啶，其中半胱氨酸的浓度为10-30ng/mol，丝氨酸的浓度为5-15ng/mol，胸腺嘧啶的浓度为15-25ng/mol，胞嘧啶的浓度为3-8ng/mol；

S4、使用离心管将干细胞分泌体进行提取，在4℃条件下依次以300G，2000G，10000G的转速离心去除细胞和细胞碎片，再次100000G超速离心得到外泌体；

S5、收集搅拌机内部的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬混合液体，使用40μm规格的无菌细胞过滤器进行过滤，随后以低温冷冻后进行干燥处理，制备出蛋白营养液冻干粉；

S6、取出自然沉降的白茅萃取液与洋甘菊萃取液，加入海藻醣与白茅萃取液和洋甘菊萃取液进行搅拌混合，10℃条件下进行储藏；

S7、将制备完成的蛋白营养液冻干粉与海藻醣、白茅萃取液和洋甘菊萃取液在15℃条件下进行混合，分1-3次加入有机溶剂进行溶解，溶解时间控制在30min；

S8、将S7溶解的液体与干细胞分泌体放置到容器内，加入蚕丝布混合，浸泡时间为15-20min，浸泡完成后以蚕丝吧布载体制成面膜；将多种材料以混合搅拌与升温反应溶解的方式进行制备，便于将面膜原料产出。

S1中，海藻醣与白茅萃和洋甘菊在高温条件下混合，并依次加入抗菌剂、乳化剂和保水剂，加入时间间隔为5min；通过依次加入抗菌剂、乳化剂和保水剂，保证在混合的过程中不会滋生细菌，保证材料内部分子的活性，同时还可以避免结构层破裂。

S2中，牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬碾压后的粉末在40℃-50℃之间进行隔温储存；牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬碾压后的粉末在与其他物料混合之前需要保温，避免温度过低或过高而影响粉末内部的干燥性，提高材料的混合质量。

有机溶剂的溶解时间之差均为正负40min，且有机溶剂与蛋白营养液冻干粉混合搅拌延长5min，并且白茅萃取液和洋甘菊萃取液以分别以10min时间间隔混入溶解；通过有机溶剂混入在蛋白营养液冻干粉与其他物料之间，便于进行充分混合，确保材料的活性，同时使各种原料都能发挥其作用，提高使用脸部皮肤的吸收效率，使得保养物质更容易渗透被吸收。

搅拌机在工作前需要预热至70℃-90℃，且牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬液体的混合的时长维持在10min，并且薄荷油的混合的时长维持在5-10min之间，混合后的物料降温至40℃进行存储添加其他原料；牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬液体与薄荷油需要单独混合，两者混合完成后再一起混入进行混合，避免在混合过程中出现内部因子流失，保证了材料制备后的质量，提高面膜整体的实用性。

性能测试

对实施例1~3所得干细胞外泌体与材料的中和性能进行检测，取市面现有干细胞外泌体和材料作为对比例，所得检测数据记录于下表：

检测项目	同源性（%）	混合效果	吸收能力	分化速度（s）	保湿牢度
						实施例一	80%	优	较强	6~8	7级
实施例二	70%	良	较强	5~9	7级
						实施例三	90%	优	强	2~3	8级
对比例	70%	良	较强	5~9	6级

综上所述，实施例一~三中，实施例三中制备出来的面膜各项指标均优于其他实施例及对比例，原料的同源性极高，吸收性能强，同时在保湿牢度高，能够增加脸部皮肤对面膜内部物质的吸收效率。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，由以下材料的重量份的成分组成包括：白茅萃1-5份，洋甘菊2-4份，海藻醣1-3份，牛油果5-15份，金盏花2-5份，薄荷油4-6份，忍冬花10-15份，麦冬5-10份，半胱氨酸1-3份，丝氨酸1-3份，胸腺嘧啶1-3份，胞嘧啶1-2份，蚕丝1-2份。

2.根据权利要求1所述的一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，其具体步骤如下：

S1、将计量好的白茅萃与洋甘菊投入到萃取分离机内，升温到80-130℃，第一次蒸发温度不小于80°，蒸发后酸值到达原定的4，最后一次蒸发温度不超过130℃，蒸发后酸值提高到5.12，自然冷却10-20min；

S2、将计量好的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬放入到药碾子内部碾碎碎末状，碾碎后的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬粉末放入到搅拌机内部，并在搅拌机内部加入薄荷油，搅拌温度控制在70-90℃之间，搅拌时长控制在5-10min；

S3、提取干细胞放入到培养基内培养，并加入半胱氨酸、丝氨酸、胸腺嘧啶和胞嘧啶，其中半胱氨酸的浓度为10-30ng/mol，丝氨酸的浓度为5-15ng/mol，胸腺嘧啶的浓度为15-25ng/mol，胞嘧啶的浓度为3-8ng/mol；

S4、使用离心管将干细胞分泌体进行提取，在4℃条件下依次以300G，2000G，10000G的转速离心去除细胞和细胞碎片，再次100000G超速离心得到外泌体；

S5、收集搅拌机内部的牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬混合液体，使用40μm规格的无菌细胞过滤器进行过滤，随后以低温冷冻后进行干燥处理，制备出蛋白营养液冻干粉；

S6、取出自然沉降的白茅萃取液与洋甘菊萃取液，加入海藻醣与白茅萃取液和洋甘菊萃取液进行搅拌混合，10℃条件下进行储藏；

S7、将制备完成的蛋白营养液冻干粉与海藻醣、白茅萃取液和洋甘菊萃取液在15℃条件下进行混合，分1-3次加入有机溶剂进行溶解，溶解时间控制在30min；

S8、将S7溶解的液体与干细胞分泌体放置到容器内，加入蚕丝布混合，浸泡时间为15-20min，浸泡完成后以蚕丝吧布载体制成面膜。

3.根据权利要求2所述的一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，其特征在于：所述S1中，海藻醣与白茅萃和洋甘菊在高温条件下混合，并依次加入抗菌剂、乳化剂和保水剂，加入时间间隔为5min。

4.根据权利要求2所述的一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，其特征在于：所述S2中，牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬碾压后的粉末在40℃-50℃之间进行隔温储存。

5.根据权利要求2所述的一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，其特征在于：所述有机溶剂的溶解时间之差均为正负40min，且有机溶剂与蛋白营养液冻干粉混合搅拌延长5min，并且白茅萃取液和洋甘菊萃取液以分别以10min时间间隔混入溶解。

6.根据权利要求2所述的一种干细胞外泌体应用于面膜的方法，其特征在于：所述搅拌机在工作前需要预热至70℃-90℃，且牛油果、金盏花、忍冬花和麦冬液体的混合的时长维持在10min，并且薄荷油的混合的时长维持在5-10min之间，混合后的物料降温至40℃进行存储添加其他原料。