CN111407716A - 一种脐带间充质干细胞外泌体面膜 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种脐带间充质干细胞外泌体面膜,包括以下原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉份、甜杏仁油份、肉豆蔻酸异丙酯份、白及份、川芎份、紫草份、五元胜肽份、羧乙基纤维素纳份、乙二胺四乙酸二钠份、十二甲基环六硅氧烷份、蛋黄卵磷脂份、鲸蜡硬脂醇份、大豆异黄酮份、甘硼酸二钾份、抗菌剂份、乳化剂份、活性剂份和尿囊素份。本发明在使用时直接敷于脸上,无需准备和结束程序,操作简单;营养物质吸收速度快且吸收效果好,面膜贴合效果好;无添加任何防腐剂且渗透效果好,增加皮肤弹性、光泽与含水量,控制油脂分泌,细致收缩毛孔,淡化皮肤皱纹。
Description
技术领域
本发明涉及美容产品技术领域,具体为一种脐带间充质干细胞外泌体面膜。
背景技术
目前,目前比较流行的面膜有3种形式:泥状、织布状和啫喱状。泥状面膜的吸附能力较好,能去除皮肤表面的污渍,但是人们在使用此类面膜前都会用洗面奶洗脸,也同样起到去污的作用;同时,泥状面膜一般都比较厚,渗透系数低,不利于肌肤对营养物质的吸收。织布状面膜与脸部的贴合状况并不理想,不好吸收;并且由于此类面膜含水量高,要添加大量防腐剂,在某种程度上会对皮肤造成伤害。啫喱状面膜的渗透力较差,并且使用后需要水洗,带来使用上的不便。同时研究表明,间充质干细胞一个强大的功能就是分泌众多细胞生长因子。并且越来越多的研究表明间充质干细胞主要通过旁分泌的方式来分泌多种细胞因子作用于组织的祖细胞诱导其分化新的组织细胞以取代受损或衰老的细胞,起到组织修复等作用。与细胞治疗相比较,外泌体性质更稳定。鉴于此,我们提供一种脐带间充质干细胞外泌体面膜。
发明内容
本发明的目的在于提供一种脐带间充质干细胞外泌体面膜,以解决上述背景技术中提出现如今面膜在使用时准备程序复多、不利于皮肤对营养物质吸收、贴合状况差、添加防腐剂危害皮肤、渗透力差以及需要水洗及皮肤修复效果差的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种脐带间充质干细胞外泌体面膜,包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉60-75份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉60-75份、甜杏仁油50-60份、肉豆蔻酸异丙酯50-55份、白及30-35份、川芎20-25份、紫草16-20份、五元胜肽32-36份、羧乙基纤维素纳35-40份、乙二胺四乙酸二钠50-55份、十二甲基环六硅氧烷50-54份、蛋黄卵磷脂45-49份、鲸蜡硬脂醇40-45份、大豆异黄酮20-25份、甘硼酸二钾50-55份、抗菌剂6-10份、乳化剂6-10份、活性剂5-8份和尿囊素5-10份。
作为优选,包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉60份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉60份、甜杏仁油50份、肉豆蔻酸异丙酯50份、白及30份、川芎20、紫草16、五元胜肽32、羧乙基纤维素纳35、乙二胺四乙酸二钠50、十二甲基环六硅氧烷50、蛋黄卵磷脂45、鲸蜡硬脂醇40、大豆异黄酮20、甘硼酸二钾50、抗菌剂6、乳化剂6、活性剂5和尿囊素5。
作为优选,包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉70份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉70份、甜杏仁油55份、肉豆蔻酸异丙酯52份、白及32份、川芎22份、紫草18份、五元胜肽35份、羧乙基纤维素纳38份、乙二胺四乙酸二钠52份、十二甲基环六硅氧烷52份、蛋黄卵磷脂48份、鲸蜡硬脂醇42份、大豆异黄酮22份、甘硼酸二钾52份、抗菌剂8份、乳化剂8份、活性剂7份和尿囊素8份。
作为优选,包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉75份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉75份、甜杏仁油60份、肉豆蔻酸异丙酯55份、白及35份、川芎25份、紫草20份、五元胜肽36份、羧乙基纤维素纳40份、乙二胺四乙酸二钠55份、十二甲基环六硅氧烷54份、蛋黄卵磷脂49份、鲸蜡硬脂醇45份、大豆异黄酮25份、甘硼酸二钾55份、抗菌剂10份、乳化剂10份、活性剂8份和尿囊素10份。
作为优选,所述抗菌剂是由质量比为1:1:1:1的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成。
作为优选,所述活性剂是由质量比为1:1:1:1的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成。
作为优选,所述乳化剂是由质量比为1:1:1:1的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯制成。
作为优选,所述P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉和脐带间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法包括如下步骤:
S1:从新鲜人脐带中分离脐带沃顿胶,消化液消化,用100-120μm细胞过滤器进行过滤,收集滤液,将滤液置于1300-1500r/min条件下离心3-4min,用平衡盐缓冲液洗涤细胞沉淀2-3次,再用2倍体积的平衡盐缓冲液重悬细胞,利用密度梯度离心法纯化细胞悬液,得脐带间充质原代干细胞,将脐带间充质原代干细胞接种于含有 100U/ml青霉素和100g/ml链霉素的无血清培养基中进行贴壁培养;
S2:待脐带间充质原代干细胞90%-95%融合,更换新鲜的不含抗生素的无血清培养基,并进行传代培养,分开收集第1代干细胞外泌体、第2代干细胞外泌体以及第2代的细胞培养液;
S3:将第1代干细胞外泌体和第2代干细胞外泌体分别用 0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤,取滤液,将第1代干细胞外泌体和第2代干细胞外泌体的滤液混合均匀,即得脐带间充质干细胞外泌体;
S4:将脐带间充质干细胞外泌体与冻干保护剂混匀后,用 0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤除菌,之后使用注射用水调节蛋白浓度至50±0.5μg/ml,冷冻干燥,即得脐带间充质干细胞外泌体冻干粉;
S5:将第2代的细胞培养液分别用 0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤,取滤液,即得P2代脐带间充质干细胞培养液;
S6:将P2代脐带间充质干细胞培养液与冻干保护剂混匀后,用 0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤除菌,之后使用注射用水调节蛋白浓度至50±0.5μg/ml,冷冻干燥,即得P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉。
作为优选,冻干保护剂为海藻糖,脐带间充质干细胞外泌体冻干粉采用冻干保护剂用量为5%-8%wt的脐带间充质干细胞外泌体,P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉采用冻干保护剂用量为6%-10%wt的P2代脐带间充质干细胞培养液。
作为优选,冷冻干燥具体为:在-85℃至-90℃的超低温冰箱中预冻10-12h,之后置于真空冷冻干燥机中,在-35℃至-40℃保持45-60min,真空度为1.0×10-2至1.5×10-2mbar且温度在-5℃至-10℃条件下冻干8-10h,保持真空度,在15-20℃继续冻干3-5h。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:本脐带间充质干细胞外泌体面膜在使用时直接敷于脸上,无需准备和结束程序,操作简单;营养物质吸收速度快且吸收效果好,面膜贴合效果好;无添加任何防腐剂且渗透效果好。采用P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉和脐带间充质干细胞外泌体冻干粉,含有多种短肽、多肽细胞因子以及核酸、多种氨基酸等多种营养成分为小分子,具有卓越的趋化活性,可透皮吸收、深层渗透,在分子水平活化自体真皮层干细胞,滋养、修复真皮及基底层细胞,构建皮肤最佳微生态环境,促进成纤维细胞分泌自体胶原蛋白,恢复皮肤弹性和光泽、保持水分;调节内分泌功能,平衡激素水平,改善过油或过干肤质、细致毛孔;活化的干细胞可分化发育为新生皮肤细胞,修复、替换受损、衰老的皮肤细胞;生长因子调控皮肤细胞新陈代谢,促进深层沉积的重金属、毒素等毒害物质的排出;细胞因子诱导自体产生分泌型免疫球蛋白A等免疫蛋白可发挥长期免疫防御作用,从而加强皮肤抵御自由基、细菌及病毒的侵害。细胞因子可促进皮肤基底细胞、血管内皮细胞、神经细胞的新生,调节成纤维细胞的生成及胶原酶的活性,减轻真皮及表皮深层的炎症反应,改善皮肤微循环,防止结缔组织过度增生,减少斑痕形成,从而活化皮肤。本脐带间充质干细胞外泌体面膜用于皮肤可达到生理性恢复皮肤细腻、柔嫩等皮肤保健效果。可用于皮肤保健、恢复皮肤年轻态;增加皮肤抗感染及免疫能力,减少各种皮肤病患病几率;增加皮肤弹性、光泽与含水量,控制油脂分泌,细致收缩毛孔,淡化皮肤皱纹,促进皮肤深层的重金属及毒素排出。
面膜可以适用于不同人群,在间充质干细胞外泌体提取时,提高细胞膜通透性,便于提取,使用面膜时能够激活细胞、增加细胞活力,促进面部的微循环和促进新陈代谢,保证肌肤的紧致有光泽。通过与中草药的混合,能够达到疏风清热解毒、恢复皮肤的正常结构和生理功能,滋润皮肤,便于对营养物质的吸收,保湿能力强,减少肌肤不适感。能够对皮肤的肌肉进行舒缓,避免肌肉过度收缩,对皱纹进行活动,使肌肤弹性组织恢复柔顺平滑的状态,达到抗皱效果,弹性性能强,与面部贴合程度高,对面部毛孔污渍进行吸附。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种脐带间充质干细胞外泌体面膜,包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉60份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉60份、甜杏仁油50份、肉豆蔻酸异丙酯50份、白及30份、川芎20、紫草16、五元胜肽32、羧乙基纤维素纳35、乙二胺四乙酸二钠50、十二甲基环六硅氧烷50、蛋黄卵磷脂45、鲸蜡硬脂醇40、大豆异黄酮20、甘硼酸二钾50、抗菌剂6、乳化剂6、活性剂5和尿囊素5。
实施例2
一种脐带间充质干细胞外泌体面膜,包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉70份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉70份、甜杏仁油55份、肉豆蔻酸异丙酯52份、白及32份、川芎22份、紫草18份、五元胜肽35份、羧乙基纤维素纳38份、乙二胺四乙酸二钠52份、十二甲基环六硅氧烷52份、蛋黄卵磷脂48份、鲸蜡硬脂醇42份、大豆异黄酮22份、甘硼酸二钾52份、抗菌剂8份、乳化剂8份、活性剂7份和尿囊素8份。
实施例3
一种脐带间充质干细胞外泌体面膜,包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉75份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉75份、甜杏仁油60份、肉豆蔻酸异丙酯55份、白及35份、川芎25份、紫草20份、五元胜肽36份、羧乙基纤维素纳40份、乙二胺四乙酸二钠55份、十二甲基环六硅氧烷54份、蛋黄卵磷脂49份、鲸蜡硬脂醇45份、大豆异黄酮25份、甘硼酸二钾55份、抗菌剂10份、乳化剂10份、活性剂8份和尿囊素10份。
将上述三组实施例按照以下步骤制备脐带间充质干细胞外泌体面膜,具体为:
S1:白及、川芎、紫草在负压条件下研磨粉碎,加入重量为2-3倍的乙醇溶液中混合搅拌,通过冷风对混合液进行风吹,再进行速冻干燥处理,控制温度为-20至-10℃,真空度10-12KPa,控制粉碎物的表面温度为-25至-15℃,处理时间为40-50min,然后调节压强到20-30KPa,过滤浓缩,进行离心喷雾干燥处理20-30min,待用;
S2:将P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉、甜杏仁油、肉豆蔻酸异丙酯、十二甲基环六硅氧烷、蛋黄卵磷脂、鲸蜡硬脂醇、大豆异黄酮、甘硼酸二钾溶于丙三醇溶液中进行完全溶解,得到混合溶液,在真空环境下加热至60-70℃,并在转速为1000-1800r/min的条件下搅拌均匀,然后加入体积的1-2倍的水,将五元胜肽、羧乙基纤维素纳、乙二胺四乙酸二钠按顺序加入溶解,通过振荡分散处理20-30min;
S3:将振荡分散处理后的混合溶液,进行蒸发浓缩至原体积的2/3,然后与低温干燥环境下,低温温度为2-6℃,控制压强为80-90KPa,将抗菌剂、活性剂、乳化剂分别加入到浓缩液内,通过磁力棒进行搅拌,搅拌速率不断增加,起始速度为300r/min,经过30-50min,最终速率为800r/min,每次加入期间静置5-10min进行再次添加;
S4:将步骤S1和步骤S3所得的溶液进行混合搅拌均匀,调节pH值到6.0-6.7,高压均质处理12-20min,静置10-15h,将所得的溶液以蚕丝布为载体,制得面膜。
具体的,抗菌剂是由质量比为1:1:1:1的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成;活性剂是由质量比为1:1:1:1的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成;所述乳化剂是由质量比为1:1:1:1的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯制成。
以上三种实施例制备的面膜属性与传统面膜在准备和结束阶段、营养物质吸收速度、营养物质吸收效果、面膜贴合效果、防腐剂以及渗透效果的对比如表1和表2所示:
对比参数 | 准备和结束阶段 | 营养物质吸收速度 | 营养物质吸收率 |
实施例1 | 直接将面膜敷于脸上 | 10-12min | 95-97% |
实施例2 | 直接将面膜敷于脸上 | 9-12min | 93-96% |
实施例3 | 直接将面膜敷于脸上 | 11-15min | 96-98% |
传统面膜 | 使用前用洗面奶洗脸→贴上面膜→使用后再用水洗 | 20-30min | 45-52% |
表1为准备和结束阶段、营养物质吸收速度、营养物质吸收效果的对比。
对比参数 | 面膜贴合效果 | 防腐剂 | 渗透效果 |
实施例1 | 始终贴合于面部 | 无 | 95-97% |
实施例2 | 始终贴合于面部 | 无 | 93-96% |
实施例3 | 始终贴合于面部 | 无 | 96-98% |
传统面膜 | 前期贴于面部,10min后易脱落 | 防腐剂含量高 | 50-65% |
表2为面膜贴合效果、防腐剂以及渗透效果的对比。
由上表可以看出,本发明实施例制备的脐带间充质干细胞外泌体面膜在使用时直接敷于脸上,无需准备和结束程序,操作简单;营养物质吸收速度快且吸收效果好,面膜贴合效果好;无添加任何防腐剂且渗透效果好。
本实施例的脐带间充质干细胞外泌体面膜中添加尿囊素,尿囊素是一种两性化合物,能结合多种物质形成复盐,具有避光、杀菌防腐、止痛、抗氧化作用,能使皮肤保持水份,滋润和柔软,是美容美发等化妆品的特效添加剂,广泛用于雀斑霜、粉刺液、香波、香皂、牙膏、刮脸洗剂、护发剂、收敛剂、抗汗除臭洗剂等的添加剂。 添加尿囊素的化妆品具有保护组织、亲水、吸水和防止水分散发等作用;添加尿囊素的发乳、发膏、洗发露,对头发有保护作用,可使头发不分叉、不断发;添加尿囊素的唇膏、面霜能使皮肤、嘴唇柔软且富有弹性,并有美丽的光泽。尿囊素促进组织生长,细胞新陈代谢,软化角质层蛋白,可以护理滋润温和去死皮唇膜的软化角质、保湿和增加光泽。本脐带间充质干细胞外泌体面膜采用P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉和脐带间充质干细胞外泌体冻干粉,含有多种短肽、多肽细胞因子以及核酸、多种氨基酸等多种营养成分为小分子,具有卓越的趋化活性,可透皮吸收、深层渗透,在分子水平活化自体真皮层干细胞,滋养、修复真皮及基底层细胞,构建皮肤最佳微生态环境,促进成纤维细胞分泌自体胶原蛋白,恢复皮肤弹性和光泽、保持水分;调节内分泌功能,平衡激素水平,改善过油或过干肤质、细致毛孔;活化的干细胞可分化发育为新生皮肤细胞,修复、替换受损、衰老的皮肤细胞;生长因子调控皮肤细胞新陈代谢,促进深层沉积的重金属、毒素等毒害物质的排出;细胞因子诱导自体产生分泌型免疫球蛋白A等免疫蛋白可发挥长期免疫防御作用,从而加强皮肤抵御自由基、细菌及病毒的侵害。细胞因子可促进皮肤基底细胞、血管内皮细胞、神经细胞的新生,调节成纤维细胞的生成及胶原酶的活性,减轻真皮及表皮深层的炎症反应,改善皮肤微循环,防止结缔组织过度增生,减少斑痕形成,从而活化皮肤。本脐带间充质干细胞外泌体面膜用于皮肤可达到生理性恢复皮肤细腻、柔嫩等皮肤保健效果。可用于皮肤保健、恢复皮肤年轻态;增加皮肤抗感染及免疫能力,减少各种皮肤病患病几率;增加皮肤弹性、光泽与含水量,控制油脂分泌,细致收缩毛孔,淡化皮肤皱纹,促进皮肤深层的重金属及毒素排出。
实施例4
作为本发明的第四种实施例,P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉和脐带间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法包括如下步骤:
S1:从新鲜人脐带中分离脐带沃顿胶,消化液消化,用100-120μm细胞过滤器进行过滤,收集滤液,将滤液置于1300-1500r/min条件下离心3-4min,用平衡盐缓冲液洗涤细胞沉淀2-3次,再用2倍体积的平衡盐缓冲液重悬细胞,利用密度梯度离心法纯化细胞悬液,得脐带间充质原代干细胞,将脐带间充质原代干细胞接种于含有 100U/ml青霉素和100g/ml链霉素的无血清培养基中进行贴壁培养;
S2:待脐带间充质原代干细胞90%-95%融合,更换新鲜的不含抗生素的无血清培养基,并进行传代培养,分开收集第1代干细胞外泌体、第2代干细胞外泌体以及第2代的细胞培养液;
S3:将第1代干细胞外泌体和第2代干细胞外泌体分别用 0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤,取滤液,将第1代干细胞外泌体和第2代干细胞外泌体的滤液混合均匀,即得脐带间充质干细胞外泌体;
S4:将脐带间充质干细胞外泌体与冻干保护剂混匀后,用 0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤除菌,之后使用注射用水调节蛋白浓度至50±0.5μg/ml,冷冻干燥,即得脐带间充质干细胞外泌体冻干粉;
S5:将第2代的细胞培养液分别用 0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤,取滤液,即得P2代脐带间充质干细胞培养液;
S6:将P2代脐带间充质干细胞培养液与冻干保护剂混匀后,用 0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤除菌,之后使用注射用水调节蛋白浓度至50±0.5μg/ml,冷冻干燥,即得P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉。
进一步的,冻干保护剂为海藻糖,脐带间充质干细胞外泌体冻干粉采用冻干保护剂用量为5%-8%wt的脐带间充质干细胞外泌体,P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉采用冻干保护剂用量为6%-10%wt的P2代脐带间充质干细胞培养液,采用海藻糖作为冻干保护剂,将P2代脐带间充质干细胞培养液和脐带间充质干细胞外泌体制成冻干粉,冻干粉具有良好的外观性状,将冻干粉进行复溶,溶解较快,溶解完全。动物实验证明其刺激性小,安全性高,使用可靠。冻干粉能较好地保持人脐带间充质干细胞培养上清液细胞因子的生物活性。经细胞试验证明,本发明冻干粉可显著提高人皮肤成纤维细胞的活力,并显著增强细胞SOD活性,有效地对抗紫外线对人成纤维细胞氧化损伤。经动物试验证明,本发明冻干粉可显著提高裸鼠皮肤弹性和水分含量,并促进裸鼠皮肤Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白合成,提高皮肤中胶原蛋白的含量。
值得说明的是,冷冻干燥具体为:在-85℃至-90℃的超低温冰箱中预冻10-12h,之后置于真空冷冻干燥机中,在-35℃至-40℃保持45-60min,真空度为1.0×10-2至1.5×10-2mbar且温度在-5℃至-10℃条件下冻干8-10h,保持真空度,在15-20℃继续冻干3-5h。
本实施例的脐带间充质干细胞外泌体面膜采用密度梯度离心法纯化细胞悬液,得到纯度较高的人脐带间充质原代干细胞,分离得到的人脐带间充质原代干细胞在体外培养中具有活力高、分化能力好、扩增倍数高的特点,为实现P2代脐带间充质干细胞培养液和脐带间充质干细胞外泌体的产业化应用奠定了基础。以海藻糖作为冻干保护剂,将人脐带间充质干细胞提取物制成冻干粉,能较好地保持人脐带间充质干细胞提取物的生物活性,在长期储存过程中不易降解,且使用方便。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例,并不用来限制本发明,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (10)
1.一种脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉60-75份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉60-75份、甜杏仁油50-60份、肉豆蔻酸异丙酯50-55份、白及30-35份、川芎20-25份、紫草16-20份、五元胜肽32-36份、羧乙基纤维素纳35-40份、乙二胺四乙酸二钠50-55份、十二甲基环六硅氧烷50-54份、蛋黄卵磷脂45-49份、鲸蜡硬脂醇40-45份、大豆异黄酮20-25份、甘硼酸二钾50-55份、抗菌剂6-10份、乳化剂6-10份、活性剂5-8份和尿囊素5-10份。
2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉60份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉60份、甜杏仁油50份、肉豆蔻酸异丙酯50份、白及30份、川芎20、紫草16、五元胜肽32、羧乙基纤维素纳35、乙二胺四乙酸二钠50、十二甲基环六硅氧烷50、蛋黄卵磷脂45、鲸蜡硬脂醇40、大豆异黄酮20、甘硼酸二钾50、抗菌剂6、乳化剂6、活性剂5和尿囊素5。
3.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉70份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉70份、甜杏仁油55份、肉豆蔻酸异丙酯52份、白及32份、川芎22份、紫草18份、五元胜肽35份、羧乙基纤维素纳38份、乙二胺四乙酸二钠52份、十二甲基环六硅氧烷52份、蛋黄卵磷脂48份、鲸蜡硬脂醇42份、大豆异黄酮22份、甘硼酸二钾52份、抗菌剂8份、乳化剂8份、活性剂7份和尿囊素8份。
4.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:包括以下重量份的原料:P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉75份、脐带间充质干细胞外泌体冻干粉75份、甜杏仁油60份、肉豆蔻酸异丙酯55份、白及35份、川芎25份、紫草20份、五元胜肽36份、羧乙基纤维素纳40份、乙二胺四乙酸二钠55份、十二甲基环六硅氧烷54份、蛋黄卵磷脂49份、鲸蜡硬脂醇45份、大豆异黄酮25份、甘硼酸二钾55份、抗菌剂10份、乳化剂10份、活性剂8份和尿囊素10份。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:所述抗菌剂是由质量比为1:1:1:1的辛基酚聚氧乙烯醚、溴苯基三甲氧基硅烷、二十二烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯山梨醇制成。
6.根据权利要求1-4任意一项所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:所述活性剂是由质量比为1:1:1:1的聚氧乙烯油醇醚、烯丙基脂肪醇聚氧乙烯醚、1-乙基溴化吡啶、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵制成。
7.根据权利要求1-4任意一项所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:所述乳化剂是由质量比为1:1:1:1的三氯乙基磷酸酯、鲸蜡硬脂醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、曲酸二棕榈酸酯制成。
8.根据权利要求1-4任意一项所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:所述P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉和脐带间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法包括如下步骤:
S1:从新鲜人脐带中分离脐带沃顿胶,消化液消化,用100-120μm细胞过滤器进行过滤,收集滤液,将滤液置于1300-1500r/min条件下离心3-4min,用平衡盐缓冲液洗涤细胞沉淀2-3次,再用2倍体积的平衡盐缓冲液重悬细胞,利用密度梯度离心法纯化细胞悬液,得脐带间充质原代干细胞,将脐带间充质原代干细胞接种于无血清培养基中进行贴壁培养;
S2:待脐带间充质原代干细胞90%-95%融合,更换新鲜的不含抗生素的无血清培养基,并进行传代培养,分开收集第1代干细胞外泌体、第2代干细胞外泌体以及第2代的细胞培养液;
S3:将第1代干细胞外泌体和第2代干细胞外泌体分别用0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤,取滤液,将第1代干细胞外泌体和第2代干细胞外泌体的滤液混合均匀,即得脐带间充质干细胞外泌体;
S4:将脐带间充质干细胞外泌体与冻干保护剂混匀后,用0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤除菌,之后使用注射用水调节蛋白浓度至50±0.5μg/ml,冷冻干燥,即得脐带间充质干细胞外泌体冻干粉;
S5:将第2代的细胞培养液分别用0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤,取滤液,即得P2代脐带间充质干细胞培养液;
S6:将P2代脐带间充质干细胞培养液与冻干保护剂混匀后,用0.15-0.22μm的无菌过滤器过滤除菌,之后使用注射用水调节蛋白浓度至50±0.5μg/ml,冷冻干燥,即得P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉。
9.根据权利要求8所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:冻干保护剂为海藻糖,脐带间充质干细胞外泌体冻干粉采用冻干保护剂用量为5%-8%wt的脐带间充质干细胞外泌体,P2代脐带间充质干细胞培养液冻干粉采用冻干保护剂用量为6%-10%wt的P2代脐带间充质干细胞培养液。
10.根据权利要求9所述的脐带间充质干细胞外泌体面膜,其特征在于:冷冻干燥具体为:在-85℃至-90℃的超低温冰箱中预冻10-12h,之后置于真空冷冻干燥机中,在-35℃至-40℃保持45-60min,真空度为1.0×10-2至1.5×10-2mbar且温度在-5℃至-10℃条件下冻干8-10h,保持真空度,在15-20℃继续冻干3-5h。
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