CN114259419B - 一种含重组胶原蛋白的复配组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含重组胶原蛋白的复配组合物，包括溶媒和冻干球，溶媒组分包括甘油、低分子量透明质酸钠、神经酰胺3、乙酰基六肽‑8、烟酰胺、积雪草苷、α熊果苷、苯氧乙醇；冻干球组分包括重组胶原蛋白、高分子透明质酸钠、海藻糖复合冻干球。与现有技术相比，本发明采用双组分提供，蕴含多肽和植物精粹，能够减少动态纹的发生与消除细纹，有效重组胶原弹力，可增加弹力蛋白的活性，保留重组胶原蛋白的生物活性，协助提高人体吸收、增加表皮修复速度、促进创伤愈合，使脸部线条放松，皱纹抚平，补水滋润透亮肤色，改善肌肤油脂，提亮紧致肌肤，让肌肤亮泽圆润若新生。

Description

一种含重组胶原蛋白的复配组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体地，本发明涉及一种含有重组胶原蛋白的复配组合物及其制备和应用。

背景技术

胶原蛋白是人体含量最多的蛋白质，分布在我们人体的各个器官组织中，在皮肤的真皮层中含量最高。年轻人的皮肤光滑、饱满有弹性，主要原因就是胶原蛋白比较充足。但是20岁以后，每年递减10％，人体表现为皱纹、塌陷缺水、长斑、皮肤暗沉、毛孔粗大、敏感等一系列症状。近年来，随着人们生活品质的提高以及人们对美的追求，抗衰老及美白祛皱类面膜受到越来越多东方女性的青睐。而面膜液作为面膜的重要组成部分，并通过利用面膜布浸润于面膜液中，使用时，将附带有面膜原液的面膜布覆盖在脸部，暂时隔离外界的空气和污染，肌肤温度提高而使皮肤的毛孔扩张，使得面膜原液渗入表皮的角质层，从而发挥功效。

相比动物胶原，重组胶原蛋白具有显著优势。随着基因重组技术的迅猛发展，重组表达所得胶原蛋白活性高，具有良好的亲水性及保水性，可以提高皮肤新陈代谢、无病毒残留、无免疫原性、无内毒素，仿皮肤角质层设计，是纯生物制剂，可长期使用且安全。可以补充皮肤各层所需的营养，使皮肤中胶原活性增强，有滋润皮肤、延缓衰老、美容、消皱等功效，在美容领域有较好的应用效果。重组胶原蛋白在其具备优势的同时，也存在一些问题，尤其是在面膜液中，其最大的缺陷是其不稳定性，因此大大限制了重组胶原蛋白的使用。CN106902381A公开了一种重组人源胶原蛋白原液，利用不同的重组人源胶原蛋白添加保湿剂、增稠剂和防腐剂制成，稳定性不佳，长期存放影响使用效果。除此之外，因为其稳定性问题导致与其他活性成分复配效果不理想，因此现有技术中对该类的研究报道很少，CN112494362为了克服胶原活性结果不稳定的缺陷，将重组人源胶原蛋白与其他成分与面膜一同冻干，形成冻干面膜，现溶现用，虽然一定程度上保证了重组人源胶原蛋白的稳定性，但是该产品在运输中极易损坏。

有鉴于此，提供一种性能稳定、功效优异的含有重组胶原蛋白的面膜液变得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种性能稳定、功效优异的含有重组胶原蛋白的复配组合物，并提供其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明一方面提供了一种含有重组胶原蛋白的复配组合物，其包括溶媒和冻干球；

所述溶媒按质量百分比计，包括：甘油10-30％，低分子量透明质酸0.01％～0.5％，神经酰胺3 0.01％～0.1％，乙酰基六肽-8 0.05～0.5％，烟酰胺0.01～0.5％，积雪草苷0.01％～0.1％，α熊果苷0.5％～5％，防腐剂0.1％～1％，余量为水；

所述冻干球按干重计，包括：重组胶原蛋白12.5mg～50mg、高分子量透明质酸12.5mg～25mg、海藻糖0.25g～1.25g。

作为本发明的一些优选实施方案，所述低分子量透明质酸的分子量范围为20～40万，所述高分子量透明质酸的分子量范围为100～200万。

作为本发明的一些优选实施方案，所述重组胶原蛋白的分子量范围为25kDa～90kDa。

作为本发明的一些优选实施方案，所述重组胶原蛋白采用基因重组技术及微生物发酵法获得。

作为本发明的一些优选实施方案，所述防腐剂为苯氧乙醇。

本发明另一方面提供了一种上述含有重组胶原蛋白的复配美容面膜原液的制备方法，具体包括制备溶媒的步骤和制备冻干球的步骤。

作为本发明的一些优选实施方案，所述溶媒的制备方法如下：

(1)将低分子量透明质酸溶解于纯化水中得到相①；

(2)将神经酰胺、乙酰基六肽-8、烟酰胺、积雪草苷、α熊果苷、甘油溶解于纯化水中得到相②；

(3)将相①和相②混合并搅拌均匀，加入苯氧乙醇，纯化水将余量补足并搅拌均匀，测定pH值在5.5-7.5之间；

(4)将得到的溶液过滤除菌，分装于西林瓶中，即得。

作为本发明的一些优选实施方案，所述冻干球的制备方法如下：

S1将海藻糖溶解于纯化水中得到相a；

S2将透明质酸溶解于纯化水中得到相b；

S3将相a和相b混合并搅拌均匀，加入重组胶原蛋白，纯化水将余量补足并搅拌均匀，得到重组胶原蛋白复合原液；

S4将得到的重组胶原蛋白复合原液置于半球型模具中，使用冷冻干燥机真空冻结水分，然后两半球合而为一、再次真空冷冻干燥得到复合冻干球，分装于西林瓶中，即得。

本发明再一方面提供了一种上述含有重组胶原蛋白的复配组合物用于浸泡面膜的用途。

作为本发明的一些优选实施方案，具体方法如下：取出冻干球加到溶媒中，使其充分溶解备用；取一次性面膜布，用水浸湿，拧干，取溶解后的复配面膜原液浸润面膜布，待液体被面膜布完全吸收后即可。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：

本发明所提供的含有重组胶原蛋白的复配组合物，蕴含蛋白多肽和植物精粹，相互协调，具有保湿、美白、祛皱、提亮紧致肌肤等功效，可以改善收敛毛孔、提亮肤色，抗衰老淡化皱纹，提升肌肤紧致弹性，对皮肤起到很好的保健作用。

本发明组合物采用溶液及冻干品双组份提供，将重组胶原活性成分采用冻干球形式提供。

重组胶原蛋白成分安全性和生物活性高、能成膜保护皮肤，极易被皮肤均匀吸收，增加表皮修复速度、促创伤愈合。同时添加透明质酸和海藻糖成分，在冻干过程中不仅有效地保护重组胶原分子结构不被破坏，长期保持了其生物活性，而且透明质酸和海藻糖本身也具有优良的保湿效果，滋润肌肤细胞，有效保护DNA免受由放射线引起的损伤。三者复配可协同地发挥各活性成分的功效。

溶媒液组分中添加植物精粹积雪草和熊果苷，可抑制体内酪氨酸酶的活性和自由基活性，淡化黑色素沉着，祛除色斑和雀斑，改善肌肤血液循环，更新肌肤细胞再生，同时还有杀菌、消炎的作用，使用后肌肤光滑细嫩，镁白亮丽。

本发明能够减少动态纹的发生与消除细纹，有效重组胶原弹力，可增加弹力蛋白的活性，使脸部线条放松，皱纹抚平，补水滋润透亮肤色，改善肌肤油脂，提亮紧致肌肤，让肌肤亮泽圆润若新生。

本发明组合物纯度高、无病毒隐患、生物相容性良好，室温状态下活性成分长期稳定。冻干技术与生物技术的不断发展，解决了含生物活性成分化妆品不易运输，容易变质，不能长期储存等问题。

冻干粉表面粗糙是一种碎渣碎粉状态，倒放和运输的过程中，由于西林瓶的滑动、滚动甚至碎裂，最终会使冻干粉四散开来；而本发明制备的冻干球塑型稳定，表面光滑。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为含重组胶原蛋白的复配美容面膜原液的与单组分面膜液12个月稳定性对比电泳图。M-蛋白分子量maker，1-复配面膜液，2-单组分面膜液。

图2为含重组胶原蛋白的复配美容面膜原液的与单组分面膜液24个月稳定性对比电泳图。M-蛋白分子量maker，1-复配面膜液，2-单组分面膜液。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对发明进行清楚、完整的描述。

本实施方式中，重组胶原蛋白采用中国专利202011366731.X、名称为“一种重组人III型胶原蛋白及其制备方法和用途”的发明专利中公开的方法制备获得。

实施例1

本实施例的含重组胶原蛋白的复配美容面膜原液的组成如下(％表示质量百分比)：

溶媒的制备方法如下：

(1)将低分子量透明质酸溶解于纯化水中得到相①；

(2)将神经酰胺、乙酰基六肽-8、烟酰胺、积雪草苷、α熊果苷、甘油溶解于纯化水中得到相②；

(3)将相①和相②混合并搅拌均匀，加入苯氧乙醇，纯化水将余量补足并搅拌均匀，测定pH值在5.5-7.5之间；

(4)将得到的溶液过滤除菌，分装于西林瓶中，25ml/瓶，即为组分A-溶液。

冻干球的制备包括如下步骤：

(1)将0.5g海藻糖溶解于5ml纯化水中得到相c；

(2)将12.5mg透明质酸溶解于5ml纯化水中得到相d；

(3)将相c和相d混合并搅拌均匀，加入重组胶原蛋白25mg，纯化水将余量补足10ml并搅拌均匀，得到重组胶原蛋白复合原液；

(4)将得到的重组胶原蛋白复合原液置于半球型模具中，使用冷冻干燥机真空冻结水分，然后两半球合而为一、再次真空冷冻干燥得到复合冻干球，分装于西林瓶中，1颗/瓶，密封保存，即得。

实施例2

本实施例的含重组胶原蛋白的复配美容面膜原液的组成如下(％表示质量百分比)：

制备方法同实施例1。

实施例3

本实施例的含重组胶原蛋白的复配美容面膜原液的组成如下(％表示质量百分比)：

制备方法同实施例1。

应用实施例1

取出冻干球加到溶媒中，使其充分溶解。

对比例1

按照以下方式制备重组胶原蛋白美容面膜液：甘油20g，低分子量透明质酸0.05g，神经酰胺3 0.05g，乙酰基六肽-8 0.02g，烟酰胺0.1g，积雪草苷0.02g，α熊果苷3g，苯氧乙醇0.3g，重组胶原蛋白0.1g、海藻糖2g、高分子透明质酸0.05g、水100ml。

制备方法如下：将低分子量及高分子量透明质酸溶解于50ml纯化水中得到相e；将重组胶原蛋白、海藻糖、神经酰胺、乙酰基六肽-8、烟酰胺、积雪草苷、α熊果苷、甘油溶解于50ml纯化水中得到相f；将相e和相f混合并搅拌均匀，加入苯氧乙醇，纯化水将余量补足100ml并搅拌均匀，测定pH值在5.5-7.5之间；将得到的溶液过滤除菌，分装于西林瓶中，25ml/瓶，即得。

对比例2

同实施例1，不同之处在于，冻干球中只有重组胶原蛋白单一组分。

对比例3

同实施例1，不同之处在于，冻干球中不加重组胶原蛋白。

对比例4

同实施例1，不同之处在于，溶媒液中不加乙酰基六肽-8。

对比例5

同实施例1，不同之处在于，溶媒液中不加神经酰胺、烟酰胺。

对比例6

同实施例1，不同之处在于，溶媒液中不加积雪草苷和α熊果苷。

考察例1稳定性实验

将对比例1得到的面膜液在12个月和24个月与实施例1得到的组合物在12和24个月按照应用实施例1得到复配面膜液进行电泳分析，稳定性结果见图1和图2，实施例1得到的面膜液稳定性明显优于对比例1。

考察例2安全性评价

(1)皮肤刺激性试验

按2015版《化妆品安全技术规范》中规定的皮肤刺激性试验进行试验和评定，具体为：取白色家兔4只，试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。取复配面膜液约0.5mL直接涂在皮肤上，然后用二层纱布(2.5cm×2.5cm)覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封闭试验，敷用时间为2h。试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。于清除受试物后的1、24、48和72h观察涂抹部位皮肤反应，按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48和72h各观察时点最高积分均值，按表2判定皮肤刺激强度。

表1皮肤刺激反应评分表

表2皮肤刺激强度分级

表3产品皮肤刺激反应评分结果

根据表3中产品皮肤刺激反应评分结果，判定本产品对皮肤无刺激性。

(2)急性眼刺激性试验

按2015版《化妆品安全技术规范》中规定的急性眼刺激性试验进行试验和评定，具体为：取3只健康成年白色家兔。在试验开始前的24h内要对试验动物的两只眼睛进行检查(包括使用荧光素钠检查)。有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑，将受试物0.1ml滴入(或涂入)结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1s，以防止受试物丢失。另一侧眼睛不处理作自身对照。滴入受试物后24h内不冲洗眼睛。临床检查和评分：在滴入受试物后1、24、48、72h对动物眼睛进行检查。在每次检查中均应按表4眼损害的评分标准记录眼刺激反应的积分。以给受试物后动物角膜、虹膜或结膜各自在24、48或72h观察时点的刺激反应的最高积分均值和恢复时间评价，按表5眼刺激反应分级判定受试物对眼的刺激强度。

表4眼损害的评分标准

表5眼刺激性反应分级

注：当角膜、虹膜、结膜积分为0时，可判为无刺激性。

表6产品眼刺激反应评分结果

根据表6中产品眼刺激反应评分结果，判定本产品对眼无刺激性。

(3)皮肤变态反应试验

按2015版《化妆品安全技术规范》中规定的皮肤变态反应试验-局部封闭涂皮试验(Buehler Test，BT)进行试验和评定，具体为：取健康豚鼠15只，分成2组，对照组(5只)，实验组(10只)。试验前约24h，将豚鼠背部左侧去毛，去毛范围为4cm²-6cm²。诱导接触阶段，将受试物约0.2ml涂在实验动物去毛区皮肤上，以二层纱布和一层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定6h。第7d和第14d以同样方法重复一次。激发接触阶段，末次诱导后14-28d，将约0.2ml的受试物涂于豚鼠背部右侧2cm×2cm去毛区(接触前24h脱毛)，然后用二层纱布和一层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布固定6h。激发接触后24h和48h观察皮肤反应，按表7评分。实验以无菌水作为阴性对照组，在诱导接触时仅涂水作为对照，在激发接触时涂以受试物。

表7变态反应试验皮肤反应评分

表8变态反应试验皮肤反应评分

根据表8中产品皮肤变态反应试验-局部封闭涂皮试验评分结果，判定本产品未见皮肤变态反应。

考察例3功效测试结果

将实施例1～3和对比例2～6制得的面膜液分别发给测试人员测试使用。测试人员将面膜布分别浸泡于8种复配面膜液中，然后将其分别敷于手臂的8个区域，并以此方式连续使用2个月，每周两次，测试人员根据自己对复配面膜液的使用效果进行评分，各项评分均采用10分制，分数越高则表明效果越好。

使用效果评分结果见表9。

表9面膜液使用效果评分表

从表9的实施例1～3的数据可知，测试人员对实施例1-3的复配面膜液的功效均给予较高的评价，总分均在25分以上，结果表明本发明制备的含重组胶原蛋白的复配美容面膜原液，各成分之间功效相互促进，对皮肤有优异的保湿锁水的作用，同时具有美白祛皱、提亮紧致肌肤等功效，对皮肤起到很好的修复保健作用。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种含有重组胶原蛋白的复配组合物，其特征在于，其由溶媒和冻干球组成，该复配组合物用于浸泡面膜布；

所述溶媒按质量百分比计，包括：甘油10-30%，低分子量透明质酸0.01％～0.5％，神经酰胺3 0.01％～0.1％，乙酰基六肽-8 0.05～0.5％，烟酰胺0.01～0.5％，积雪草苷0.01％～0.1％，α熊果苷0.5％～5％，防腐剂0.1％～1％，余量为水；

所述冻干球按干重计，由如下成分组成：重组胶原蛋白12.5mg～50mg、高分子量透明质酸12.5mg～25mg、海藻糖0.25g～1.25g；

所述低分子量透明质酸的分子量范围为20～40万，所述高分子量透明质酸的分子量范围为100～200万；

所述重组胶原蛋白的分子量范围为25kDa～90kDa。

2.根据权利要求1所述的一种含有重组胶原蛋白的复配组合物，其特征在于，所述重组胶原蛋白采用基因重组技术及微生物发酵法获得。

3.根据权利要求1所述的一种含有重组胶原蛋白的复配组合物，其特征在于，所述防腐剂为苯氧乙醇。

4.一种如权利要求1-3任一项所述的含有重组胶原蛋白的复配组合物的制备方法，其特征在于，具体包括制备溶媒的步骤和制备冻干球的步骤。

5.根据权利要求4所述的含有重组胶原蛋白的复配组合物的制备方法，其特征在于，所述溶媒的制备方法如下：

(1)将低分子量透明质酸溶解于纯化水中得到相a；

(2)将神经酰胺、乙酰基六肽-8、烟酰胺、积雪草苷、α熊果苷、甘油溶解于纯化水中得到相b；

(3)将相a和相b混合并搅拌均匀，加入苯氧乙醇，纯化水将余量补足并搅拌均匀，测定pH值在5.5-7.5之间；

(4)将得到的溶液过滤除菌，分装于西林瓶中，即得。

6.根据权利要求4所述的含有重组胶原蛋白的复配组合物的制备方法，其特征在于，所述冻干球的制备方法如下：

S1将海藻糖溶解于纯化水中得到相c；

S2将高分子量透明质酸溶解于纯化水中得到相d；

S3将相c和相d混合并搅拌均匀，加入重组胶原蛋白，纯化水将余量补足并搅拌均匀，得到重组胶原蛋白复合原液；

S4将得到的重组胶原蛋白复合原液置于半球型模具中，使用冷冻干燥机真空冻结水分，然后两半球合而为一、再次真空冷冻干燥得到复合冻干球，分装于西林瓶中，即得。

7.一种如权利要求1-3任一项所述的含有重组胶原蛋白的复配组合物用于浸泡面膜布的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，具体方法如下：取出冻干球加到溶媒中，使其充分溶解备用；取一次性面膜布，用水浸湿，拧干，取溶解后的复配组合物浸润面膜布，待液体被面膜布完全吸收后即可。

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