CN108158831A

CN108158831A - 一种创面可用的复合干细胞因子面膜液及面膜的制备方法

Info

Publication number: CN108158831A
Application number: CN201810101752.5A
Authority: CN
Inventors: 吴金芸; 张炬
Original assignee: Bio Tech Development (yancheng) Co Ltd
Current assignee: Bio Tech Development (yancheng) Co Ltd
Priority date: 2018-02-01
Filing date: 2018-02-01
Publication date: 2018-06-15

Abstract

一种创面可用的复合干细胞因子面液的制备方法，将浓度为5％的甘油、3％的丁二醇、1％的透明质酸钠和88％的蒸馏水混合搅拌后，进行高压灭菌，即为A组分；将浓度为1％的卷柏提取物、1％的蚕丝提取物和1％的石榴提取物混合后过滤除菌，即为B组分；将A组分降温至40℃后，在无菌条件下，加入B组分，并搅拌混合，待A组分和B组分混合稳定静置4个小时后，加入复合干细胞因子冻干粉，并充分混合均匀，静置24小时后灌装。本发明将具有高活性的复合干细胞因子在低温条件下添加到面膜液中，并用蚕丝面膜吸附，充分发挥干细胞面膜的作用，达到祛除皱纹，恢复弹性肌肤的抗衰作用。

Description

一种创面可用的复合干细胞因子面膜液及面膜的制备方法

技术领域

本发明属于日用品技术领域，涉及一种面膜的制备方法，尤其涉及一种创面可用的复合干细胞因子面膜液的制备方法。

背景技术

创面是正常皮肤(组织)在外界致伤因子如外科手术、外力、热、电流、化学物质、低温以及机体内在因素如局部血液供应障碍等作用下所导致的损害。常伴有皮肤完整性的破坏以及一定量正常组织的丢失，同时，皮肤的正常功能受损；也称为伤口或者创伤。

创面造成后，局部组织需通过再生(Regeneration)、修复(Repair)、重建(Reconstruction)，进行修补，创面修复的本质是机体对各种有害因素作用所致的组织细胞损伤的一种固有的防御性适应性反应。创面修复的过程需要血小板衍生生长因子(PDGF)，β转型生长因子(β-TGF)和α转型生长因子(α-TGF)等细胞因子的参与，而干细胞所分泌的细胞因子可参与到创面修复过程。

现今，爱美的人士越来越多，进行微针、水光针面部调理之后，由于物质的渗透吸收及肌肤的创伤修复，均需要水分的补充，常规采用的补水面膜，仅仅只是为皮肤补充些许水分，并无法真正参与到创面的修复过程。面膜是人们日常生活中最常使用的化妆品之一。对人体面部皮肤起到补充水分是目前的面膜产品最有保障的功能。然而人们更期待解决的问题是面膜能够促进人体面部皮肤的新陈代谢，起到美容作用。为此，需要研制一种具有皮肤营养作用的面膜，其中的主要活性物质是面膜能否达到预期效果的关键。如果能在面膜中添加有干细胞细胞因子，则可在补水的同时对创面进行修复，将为爱美女性带来更好的体验。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种创面可用的复合干细胞因子面膜液的制备方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种创面可用的复合干细胞因子面液的制备方法，包括以下步骤：

⑴、复合干细胞因子冻干粉的制备：

在无菌条件下，收取健康的脐带、胎盘和脂肪组织；分离、培养并传代，获取脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞；再将脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞三种培养上清加入10％BSA作为赋形剂，充分溶解后，0.45um过滤装入冻干瓶中；将冻干瓶置于-80℃进行预冻，预冻24h后取出置于冻干机冻干；

⑵、面膜液的制备及干细胞因子的添加：

将浓度为5％的甘油、3％的丁二醇、1％的透明质酸钠和88％的蒸馏水混合搅拌后，进行高压灭菌，即为A组分；将浓度为1％的卷柏提取物、1％的蚕丝提取物和1％的石榴提取物混合后过滤除菌，即为B组分；将A组分降温至40℃后，在无菌条件下，加入B组分，并搅拌混合，待A组分和B组分混合稳定静置4个小时后，加入1％的步骤⑴获得复合干细胞因子冻干粉，并充分混合均匀，静置24小时后灌装。

上述方案中，相关内容解释如下：

1、上述方案中，在无菌条件下，收取健康的脐带和胎盘，养在GMP实验室生物安全柜将胎盘剪碎至1.5-2.5mm³大小的组织块，将所述组织块分别置于T175培养瓶所盛的DMEM-LG细胞培养液中，置37℃，5％CO₂培养箱中培养；每隔2-3天换液，直至有大量干细胞爬出后，弃去组织块；细胞长满后，记为第一代，用0.28％胰酶进行消化传代；第二代后改用无抗生素DMEM-LG培养基进行培养；依次传代培养；获取脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞；其中，所述DMEM-LG细胞培养液中含10％FBS、bFGF 5ng/mL、L-谷氨酰胺2mM、青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL和两性霉素B 1μg/mL；所述无抗生素DMEM-LG培养基含10％FBS、bFGF 5ng/mL和L-谷氨酰胺2mM。

2、上述方案中，在无菌条件下，获取健康人的脂肪组织100mg；将所述脂肪组织放入超净台中，用PBS反复冲洗，直至无明显血污；收集到离心管中，加入0.5％的胰酶和0.1％胶原酶各10ml，将离心管密封，放入37℃恒温摇床中，180r×min^-1，震荡消化30min；消化后从所述恒温摇床上取出，在1000rpm的条件下离心10min，去上清，以去除悬浮脂肪；再用0.16mol/L的NH4Cl溶解红细胞，PBS洗涤3次，200目过滤，分离单个核细胞；移入DMEM-LG培养基进行培养；并进行传代，获取脂肪间充质干细胞。

3、上述方案中，所述冻干机为真空冻干机。

一种创面可用的复合干细胞因子面膜的制备方法，包括以下步骤：

Ⅰ、将面膜吸水纸置于权利要求1中所得面膜液中，浸泡完成后取出，并将多余的面膜液抖落；

Ⅱ、定型、包装：将步骤Ⅰ中浸泡后的面膜进行剪裁，剪裁后的面膜的表面涂抹合成防腐剂，涂抹防腐剂后的额面膜进行包装作为后续使用。

优选的，所述面膜吸水纸为蚕丝面膜。

蚕丝面膜主要的原材料是蚕丝纤维和活性蚕丝蛋白。蚕丝面膜本是用于医学界处理烫伤的仿生真皮——“蚕丝薄膜”。由于蚕丝蛋白中含有对人体极具营养价值的18种氨基酸(是珍珠粉含量的10倍，这些氨基酸能直接为人体毛发，皮肤吸收与吸附，即在人体表皮的外层更容易渗透，加速皮肤的新陈代谢)，属多孔性物质，透气性好，吸水性极佳，在美国和日本被广泛用于手术过后伤口敷料、烧伤创面敷料来使用，有助于创面愈合且无刺激，被著称为“人工皮肤”。蚕丝面膜具有以下几个特征：

1、吸附性强

蚕丝面膜的吸附性比普通的无纺布面膜纸要好得多，能吸收更多的精华液，敷脸的时候也非常服帖，不会掉下来不会有精华液滴落的状态；

2、质地轻薄

蚕丝面膜采用的是最为轻柔最为细腻的蚕丝，可以紧密贴合肌肤的纹理，所以敷面的时候服帖度很高，而且非常薄，透明、透气，鼻翼、嘴角都能紧密填补，锁水持久，补水深入。

3、补水修复

蚕丝面膜能加速皮肤自身的修复机能，如果是晒后肌肤处于敏感脆弱状态，就可以通过蚕丝纤维的细腻贴合来让受损肌肤迅速得到修复。还可以促进胶原蛋白的分泌、强效增白、抗UV作用、抗发炎、痘疱能力。

与现有技术相比，本发明的优势在于：

本发明将具有高活性的复合干细胞因子在低温条件下添加到面膜液中，并用蚕丝面膜吸附，既利用干细胞因子的修复作用，又利用蚕丝面膜吸附性强、质地轻薄、促进吸收等特点，充分发挥干细胞面膜的作用，达到祛除皱纹，恢复弹性肌肤的抗衰作用。

而含有干细胞细胞因子的面膜，又可利用覆盖在脸部的短暂时间，暂时隔离外界的空气与污染，提高肌肤温度，皮肤的毛孔扩张，促进汗腺分泌与新陈代谢，使肌肤的含氧量上升，有利于肌肤排除表皮细胞新陈代谢的产物和累积的油脂类物质，面膜中的细胞因子渗入表皮层到达真皮层，促进成纤维细胞、胶原蛋白生成，使得皮肤变得柔软，肌肤自然光亮有弹性，抵抗岁月的痕迹。

具体实施方式

以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。

实施例：

一种创面可用的复合干细胞因子面液的制备方法，包括以下步骤：

⑴、复合干细胞因子冻干粉的制备：

在无菌条件下，收取健康的脐带、胎盘和脂肪组织；分离、培养并传代，获取脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞；再将脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞三种培养上清加入10％BSA作为赋形剂，充分溶解后，0.45um过滤装入冻干瓶中；将冻干瓶置于-80℃进行预冻，预冻24h后取出置于冻干机冻干；所述冻干机为真空冻干机。

⑵、面膜液的制备及干细胞因子的添加：

将浓度为5％的甘油、3％的丁二醇、1％的透明质酸钠和88％的蒸馏水混合搅拌后，进行高压灭菌，即为A组分；将浓度为1％的卷柏提取物、1％的蚕丝提取物和1％的石榴提取物混合后过滤除菌，即为B组分；将A组分降温至40℃后，在无菌条件下，加入B组分，并搅拌混合，待A组分和B组分混合稳定静置4个小时后，加入1％的步骤⑴获得复合干细胞因子冻干粉，并充分混合均匀，静置24小时后灌装。上述各成分配比如下表所示：

序号	名称	浓度	使用目的
				1	甘油	5％	保湿剂
2	丁二醇	3％	保湿剂
				3	卷柏提取物	1％	皮肤调理剂
4	蚕丝提取物	1％	皮肤调理剂
				5	石榴提取物	1％	皮肤调理剂
6	透明质酸钠	1％	皮肤调理剂
				7	双蒸水	88％	溶剂

在灌装后，抽取面膜液进行理化指标检查，包括PH、耐寒、耐热测试，结果如下表所示：

脐带、胎盘间充质干细胞的分离培养：

在无菌条件下，收取健康的脐带和胎盘，养在GMP实验室生物安全柜将胎盘剪碎至1.5-2.5mm³大小的组织块，将所述组织块分别置于T175培养瓶所盛的DMEM-LG细胞培养液中，置37℃，5％CO₂培养箱中培养；每隔2-3天换液，直至有大量干细胞爬出后，弃去组织块；细胞长满后，记为第一代，用0.28％胰酶进行消化传代；第二代后改用无抗生素DMEM-LG培养基进行培养；依次传代培养；获取脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞；其中，所述DMEM-LG细胞培养液中含10％FBS、bFGF 5ng/mL、L-谷氨酰胺2mM、青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL和两性霉素B 1μg/mL；所述无抗生素DMEM-LG培养基含10％FBS、bFGF 5ng/mL和L-谷氨酰胺2mM。

脂肪间充质干细胞的分离培养：

在无菌条件下，获取健康人的脂肪组织100mg；将所述脂肪组织放入超净台中，用PBS反复冲洗，直至无明显血污；收集到离心管中，加入0.5％的胰酶和0.1％胶原酶各10ml，将离心管密封，放入37℃恒温摇床中，180r×min^-1，震荡消化30min；消化后从所述恒温摇床上取出，在1000rpm的条件下离心10min，去上清，以去除悬浮脂肪；再用0.16mol/L的NH4Cl溶解红细胞，PBS洗涤3次，200目过滤，分离单个核细胞；移入DMEM-LG培养基进行培养；并进行传代，获取脂肪间充质干细胞。

优选的，所述面膜吸水纸为蚕丝面膜。

蚕丝面膜主要的原材料是蚕丝纤维和活性蚕丝蛋白。蚕丝面膜本是用于医学界处理烫伤的仿生真皮——“蚕丝薄膜”。由于蚕丝蛋白中含有对人体极具营养价值的18种氨基酸(是珍珠粉含量的10倍，这些氨基酸能直接为人体毛发，皮肤吸收与吸附，即在人体表皮的外层更容易渗透，加速皮肤的新陈代谢)，属多孔性物质，透气性好，吸水性极佳，在美国和日本被广泛用于手术过后伤口敷料、烧伤创面敷料来使用，有助于创面愈合且无刺激，被著称为“人工皮肤”。

在此描述并且要求保护的本发明不限于在此披露的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。预期任何等效方面都处于本发明的范围内。实际上，除在此所示和描述的那些之外，本发明的不同修改对于本领域普通技术人员而言从前述描述将变得清楚。此类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在有冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。

Claims

1.一种创面可用的复合干细胞因子面膜液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

⑴、复合干细胞因子冻干粉的制备：

⑵、面膜液的制备及干细胞因子的添加：

2.根据权利要求1所述的复合干细胞因子面膜液的制备方法，其特征在于：在无菌条件下，收取健康的脐带和胎盘，养在GMP实验室生物安全柜将胎盘剪碎至1.5-2.5mm³大小的组织块，将所述组织块分别置于T175培养瓶所盛的DMEM-LG细胞培养液中，置37℃，5％CO₂培养箱中培养；每隔2-3天换液，直至有大量干细胞爬出后，弃去组织块；细胞长满后，记为第一代，用0.28％胰酶进行消化传代；第二代后改用无抗生素DMEM-LG培养基进行培养；依次传代培养；获取脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞；其中，所述DMEM-LG细胞培养液中含10％FBS、bFGF 5ng/mL、L-谷氨酰胺2mM、青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL和两性霉素B 1μg/mL；所述无抗生素DMEM-LG培养基含10％FBS、bFGF 5ng/mL和L-谷氨酰胺2mM。

3.根据权利要求1所述的复合干细胞因子面膜液的制备方法，其特征在于：在无菌条件下，获取健康人的脂肪组织100mg；将所述脂肪组织放入超净台中，用PBS反复冲洗，直至无明显血污；收集到离心管中，加入0.5％的胰酶和0.1％胶原酶各10ml，将离心管密封，放入37℃恒温摇床中，180r×min^-1，震荡消化30min；消化后从所述恒温摇床上取出，在1000rpm的条件下离心10min，去上清，以去除悬浮脂肪；再用0.16mol/L的NH₄Cl溶解红细胞，PBS洗涤3次，200目过滤，分离单个核细胞；移入DMEM-LG培养基进行培养；并进行传代，获取脂肪间充质干细胞。

4.根据权利要求1所述的复合干细胞因子面膜液的制备方法，其特征在于：所述冻干机为真空冷冻干燥机。

5.一种创面可用的复合干细胞因子面膜的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

Ⅱ、定型、包装：将步骤Ⅰ中浸泡后的面膜进行剪裁，剪裁后的面膜的表面涂抹合成防腐剂，涂抹防腐剂后的面膜进行包装作为后续使用。

6.根据权利要求5所述的复合干细胞因子面膜的制备方法，其特征在于：所述面膜吸水纸为蚕丝面膜纸。