CN111214431A - 促进皮肤恢复组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种促进皮肤恢复组合物及其应用。该促进皮肤恢复组合物包括脐带血单个核细胞和外周血单个核细胞中的至少一种置于培养基培养后的上清液。脐带血和外周血细胞包括大量的免疫细胞、少量的内皮组细胞和微量的循环成纤维细胞。免疫细胞能够分泌丰富的白细胞介素、转化生长因子及各类生长因子等，能够促进细胞和组织的修复，消除色素沉着。成纤维细胞是真皮组织中的主要细胞，能分泌胶原等细胞外基质蛋白以及细胞生长因子，分泌的基质蛋白能够重建皮肤组织，恢复原来的整体性，对除皱、增加皮肤光滑性有很好的促进作用。因此，将其经过一定分离、体外诱导培养之后得到的上清液能够较好地促进肌肤弹性的恢复、抑制皮肤衰老。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其是涉及一种促进皮肤恢复组合物及其应用。
背景技术
面膜如今已成为大多数女性必备的化妆品之一。面膜在敷于人体面部时，会促使皮肤的毛孔扩张，促进其新陈代谢从而有利于人体排除各类有害物质以及累积的油脂等，恢复肌肤的弹性光亮。然而，尽管市面上宣称有此功效的面膜或其它类型的护肤品数不胜数，但当其真正作用于人体时实现的效果仍然有限。因此，有必要提供一种能有效促进皮肤恢复的组合物。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种有效促进皮肤恢复的组合物及其应用。
第一方面，本发明的一个实施例提供了一种促进皮肤恢复组合物，包括脐带血单个核细胞和外周血单个核细胞中的至少一种置于培养基培养后的上清液。
本发明实施例的促进皮肤恢复组合物至少具有如下有益效果：
脐带血和外周血细胞包括大量的免疫细胞、少量的内皮组细胞和微量的循环成纤维细胞。免疫细胞能够分泌丰富的白细胞介素、转化生长因子及各类生长因子等，包括TGF-β(转化生长因子-β)、EGF(表皮细胞生长因子)、FGF(成纤维细胞生长因子)、IL-2(白细胞介素-2)等，能够促进细胞和组织的修复，还能消除色素沉着。成纤维细胞是真皮组织中的主要细胞，能够分泌胶原等细胞外基质蛋白以及细胞生长因子，分泌的基质蛋白能够有秩序的重建皮肤组织，恢复其原来的整体性，对除皱、增加皮肤的光滑性有很好的促进作用。因此，将脐带血单个核细胞和外周血单个核细胞中的至少一种经过一定分离、体外诱导培养之后得到的上清液能够较好地促进肌肤弹性的恢复、抑制皮肤衰老。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，培养基包括完全培养基。完全培养基为基础培养基中添加氨基酸、维生素等一些适于细胞生长的成分后得到的细胞培养基，用以满足细胞生长和维持的需要。采用完全培养基培养外周血单个核细胞能够使培养后的上清液中的各类生长因子含量更高，以更好地促进皮肤弹性光亮的恢复，延缓皮肤衰老。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，培养基还包括细胞因子。细胞因子由免疫细胞或一些非免疫细胞受刺激合成分泌的蛋白类物质，具体可以采用细胞生长因子，例如表皮生长因子(EGF)、干细胞因子(SCF)、转化生长因子(TGF)等。培养基中添加这些细胞因子能够有效提高核细胞的生长增殖，促进上清液中细胞分泌物含量上升。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，细胞因子包括碱性成纤维细胞生长因子和干细胞因子。碱性成纤维细胞生长因子是一种能够促进细胞分裂增殖的多肽因子，而干细胞因子是一种广泛表达的Ⅰ型跨膜糖蛋白，发明人意外地发现，将这两种活化细胞因子组合添加到培养基中后能够有效促进外周血单个核细胞的增殖，提高上清液中各类生长因子的产量，从而达到促进皮肤恢复的目的。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，完全培养基包括基础培养基和B27无血清添加剂。其中，基础培养基可以是DMEM基础培养基、MEM基础培养基、BME基础培养基、GMEM基础培养基、αMEM基础培养基等基础培养基中的一种或几种。B27无血清添加剂的终浓度(体积浓度)为0～2％，在该范围内可以根据实际需要进行适应性调整。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，基础培养基为无酚红DMEM/F12基础培养基。
第二方面，本发明的一个实施例提供了一种面膜液，该面膜液包括上述任一种促进皮肤恢复组合物。除该促进皮肤恢复组合物外，面膜液中还可以包括化妆品中可接受的辅料、溶剂等。辅料具体包括但不限于保湿剂、增稠剂、增溶剂、防腐剂、pH调节剂、赋香剂等。辅料、溶剂以及促进皮肤恢复组合物的配比可以基于本领域的认识进行合理调整。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，保湿剂选自透明质酸钠、甘油、聚甘油-10、丁二醇、岩藻糖、甘露糖醇中的至少一种。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，增稠剂选自鲸蜡醇、硬脂醇、卡波姆、黄原胶、羟乙基纤维素、甜菜碱中的至少一种。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，增溶剂选自PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、辛基十二醇聚醚-16中的至少一种。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，防腐剂选自苯甲醇、苯氧乙醇、羟苯甲脂、对羟基苯乙酮中的至少一种。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，pH调节剂例如可以是氢氧化钠、氢氧化钾、三乙醇胺、氨丁三醇、氨甲基丙醇中的至少一种。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，赋香剂可以是香精。
根据本发明的一些实施例的促进皮肤恢复组合物，基于面膜液的总重量，包括1wt％至12wt％的所述促进皮肤恢复组合物、3wt％至30wt％的辅料和60wt％至96wt％的溶剂。
第三方面，本发明的一个实施例提供了一种面膜，包括面膜基材和上述任一种面膜液。面膜基材具体可以选用无纺布、蚕丝布等材料。
附图说明
图1是本发明的一个实施例的面膜使用实验的面部不同部位的皮肤含水量检测结果。
图2是本发明的一个实施例的面膜使用实验的面部不同部位的不同检测位置的皮肤弹性检测结果。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种促进皮肤恢复的组合物。该组合物为外周血单个核细胞培养的上清液，该上清液的制备包括如下步骤：
步骤1)：离心自体外周血，获得自体血浆层与细胞层；
步骤2)：对细胞层进一步分离获得人外周血单个核细胞；
步骤3)：将分离的人外周血单个核细胞置于完全细胞培养基中诱导培养48-72h；
步骤4)：离心获取富含混合细胞因子的上清液。
其中，完全培养基包括：无酚红DMEM/F12基础培养基、1％体积浓度的B27无血清添加剂、20ng/mL的bFGF、20ng/mL的SCF。
实施例2
本实施例提供一种面膜液和面膜。
基于面膜液的总重量，该面膜液包括以下组分：
该面膜的制备方法包括如下步骤：
1)组分1制备：将称量好的甜菜碱、甘油、卡波姆、一部分水等加入主锅中，加热至82.5℃±2.5℃，保温搅拌。
2)冷却一：边搅拌边开启冷却水，冷却至52.5±2.5℃，将透明质酸钠、三乙醇胺、丁二醇、余量水等依次加入主锅，搅拌至溶解均匀。
3)冷却二：边搅拌边开启冷却水，冷却至40.5±2.5℃，将甘露糖醇、明串球菌/萝卜(RAPHANUS SATIVUS)根发酵产物滤液、β-葡聚糖、酵母菌溶胞物提取物、岩藻糖、苯氧乙醇、香精等以及实施例1中的促进皮肤恢复组合物按比例依次加入主锅，搅拌。
4)出料：冷却32.5±2.5℃，IPC取样检测，检测合格后出料，即得面膜液，将该面膜液放置于2-8℃冰箱保存。
5)灌装，取面膜包装管，管内装好生物纤维面膜，用移液管分装步骤4)中的面膜液，每管30ml，盖上盖子，颠倒2～3次，使面膜完全浸湿。灌装完成放置于2-8℃冰箱保存。
实施例3
对实施例1中培养48h的细胞进行形态学、纯度、细胞表型检测、细胞数量、活率、无菌、内毒素等。具体操作包括以下步骤：取细胞液采用台盼蓝染色计细胞活率，流式细胞仪检测细胞表型。
对于收集到的上清液，采用梅里埃全自动微生物检测系统检测细菌和真菌，LONZA支原体检测试剂盒检测常见支原体，鲎试剂检测内毒素。
经检测，台盼蓝染色计细胞活率达到95.3％，细胞表型检测CD34+细胞达到0.9％，其中CD42b+CD31+双阳性细胞占到75.2％，Vimentin阳性细胞为20.8％，免疫细胞的比例为60.8％。
上清液经全自动微生物分析仪检测细菌、真菌均为阴性，肺炎支原体检测结果为阴性，内毒素含量≤0.5EU/ml。
实施例4
面膜恢复皮肤弹性检测
招募28-59岁的10名女性受试者使用实施例2中的面膜一个月，每周使用两次，每周二和五晚各使用一片，第一次使用前和使用30天后应用德国CK皮肤检测仪进行检测。检测结果如图1和图2所示，其中，图1是本发明的一个实施例的面膜使用实验的面部不同部位的皮肤含水量检测结果。图2是本发明的一个实施例的面膜使用实验的面部不同部位的不同检测位置的皮肤弹性检测结果，图1和图2的横坐标分别以百分数和小数进行表示。从图1和图2中可以看到，受试者面部各部位皮肤含水量提升了10％左右(见图1)，而前额部位弹性提升了15％左右(见图2)，差异有统计学意义。同时，面部各部位皮肤弹性均有改善，尤其是脸颊部位的弹性提升了8％左右。
实施例5
面膜综合评价结果
招募28-59岁的10名女性受试者使用实施例2中的面膜一个月，每周使用两次，每周二和五晚各使用一片，在使用面膜期间，对保湿、美白、抗皱、弹性功能及不良反应每天进行记录，其中，保湿、美白、抗皱、弹性按照0～10分进行打分，0分最低、10分最高。记录数据显示无一例过敏反应发生。一个月后保湿、美白、抗皱及弹性评分均有提升趋势，保湿评分提升率为100％，抗皱和弹性评分提升率为47％，美白评分提升率为40％。
实施例6
本实施例提供一种促进皮肤恢复的组合物，该组合物与实施例1的区别在于，完全培养基包括：α-MEM基础培养基、1.2％体积浓度的胎牛血清、10ng/mL的bFGF、10ng/mL的SCF。
采用该方法制备得到的促进皮肤恢复的组合物按照实施例2中的方法制备得到的面膜同样具有较好的保湿、抗皱效果，能够有效促进皮肤的恢复。
实施例7
本实施例提供一种面膜液，与实施例2的区别在于，以鲸蜡醇、黄原胶分别替代甜菜碱和卡波姆。
将该面膜液按照实施例2中的方法制备得到的面膜同样具有较好的保湿、抗皱效果，能够有效促进皮肤的恢复。
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所述技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
Claims (9)
1.一种促进皮肤恢复组合物，其特征在于，包括脐带血单个核细胞和外周血单个核细胞中的至少一种置于培养基培养后的上清液。
2.根据权利要求1所述的促进皮肤恢复组合物，其特征在于，所述培养基包括完全培养基。
3.根据权利要求2所述的促进皮肤恢复组合物，其特征在于，所述培养基还包括细胞因子。
4.根据权利要求3所述的促进皮肤恢复组合物，其特征在于，所述细胞因子包括碱性成纤维细胞生长因子和干细胞因子。
5.根据权利要求2所述的促进皮肤恢复组合物，其特征在于，所述完全培养基包括基础培养基和B27无血清添加剂。
6.根据权利要求5所述的促进皮肤恢复组合物，其特征在于，所述基础培养基为无酚红DMEM/F12基础培养基。
7.一种面膜液，其特征在于，包括权利要求1至6任一项所述的促进皮肤恢复组合物。
8.根据权利要求7所述的面膜液，其特征在于，基于所述面膜液的总重量，包括1wt％至12wt％的所述促进皮肤恢复组合物、3wt％至30wt％的辅料和60wt％至96wt％的溶剂。
9.一种面膜，其特征在于，包括面膜基材和权利要求7至8任一项所述的面膜液。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200602 |
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