CN104984407B

CN104984407B - 一种组织工程人工皮肤及其制备方法

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Publication number: CN104984407B
Application number: CN201510376611.0A
Authority: CN
Inventors: 符斌; 张自强; 杨冰; 徐荣荣
Original assignee: Beijing Paisheng Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Beijing Paisheng Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2015-07-01
Filing date: 2015-07-01
Publication date: 2017-11-24
Anticipated expiration: 2035-07-01
Also published as: CN104984407A

Abstract

本发明提供了一种组织工程人工皮肤及其制备方法。该人工皮肤包括表皮层和真皮层，组成表皮层的材料为胶原蛋白或胶原蛋白与壳聚糖的共混材料，组成真皮层的材料为胶原蛋白或胶原蛋白与壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸盐或聚乙烯醇的共混材料。表皮层由半渗透性的薄膜组成，皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成。使用的胶原蛋白为无端肽胶原蛋白，去除了人工皮肤在应用时的免疫排斥、异物反应和病毒感染等方面的问题。本发明还提供了这种组织工程人工皮肤的制备方法。

Description

一种组织工程人工皮肤及其制备方法

技术领域

本发明属于组织工程生物医用材料和医疗器械领域，涉及一种组织工程人工皮肤及其制备方法。

背景技术

皮肤人体面积最大也是最重要的器官之一，具有呼吸、保持水分和生物屏障功能，但是由于烫伤、感染、摩擦等各种原因造成的皮肤缺损成为常见疾患之一，如何能够开发出一款替代人体皮肤的组织工程皮肤成为研究的热点。皮肤缺损成为组织工程皮肤的研究范围包括人工表皮、人工真皮和全层皮肤三个方面。其中，最受人们推崇的是同时含有真皮和表皮两种结构的人工皮肤（引自：人全层组织工程皮肤的研制，金岩等）。

为了解决皮肤缺损问题，美国已开发出数十种皮肤替代材料，包括有同种异体皮肤、异种皮肤、无细胞皮肤组织工程支架和人工合成材料皮肤。同种异体皮肤有AllopatchHD™、Alloskin™、Dermacell®等十余种，无细胞组织工程支架包括有Collaguard®、Integra™等多种皮肤替代材料，这些材料都存在免疫排斥或者需要再次植皮等问题。

我国在皮肤缺损治疗领域的发展较晚，经过近十年来的发展，有部分产品已经上市，如第四军医大学金岩教授开发的含人体表皮细胞和成纤维细胞的人工皮肤，也有部分产品进入开发应用阶段。刘永庆开发了一种人工皮肤的制备方法（专利公开号CN1485099A），制备一种含表皮层和真皮层的人工皮肤，但该皮肤存在表皮层和真皮层易分离和无法耐受手术缝合的问题。佘振定开发了一种生长因子缓释型双层人工皮肤（专利公开号为CN101716376A），高长友等开发的胶原-壳聚糖和硅橡胶双层皮肤再生支架及其制备方法（公开号CN1785444A）等也都存在表皮层与人体皮肤力学性能不匹配和需要二次植皮的问题。

为了克服现有人工皮肤的缺点，本发明提供了一种最接近人体皮肤组织的组织工程人工皮肤支架材料，作为缺损皮肤的永久性皮肤替代物，去除了人工皮肤在应用时的免疫排斥、异物反应和病毒感染等方面的问题。本发明所构建的组织工程人工皮肤接近生理状况，不仅可以同时将所缺损的表皮和真皮修复，而且这两种成分具有互相影响的机制，促进彼此的分化，比单纯的人工表皮或是人工真皮更能达到满意的效果，还可以作为载药和干细胞领域的支架载体。

发明内容

本发明针对现有产品的缺陷，目的在于提供一种新型组织工程人工皮肤及其制备方法，该人工皮肤具有表皮层和真皮层结构，表皮层接近于人体皮肤，既能够保持水分，又具有透气透湿等呼吸功能，具有力学强度接近人体表皮层，可以耐受手术缝合操作，真皮层更加接近人体皮肤真皮层的结构，为具有两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，这种高度仿生的结构更加有利于真皮再生。

一种组织工程人工皮肤，包括表皮层和真皮层，其特征在于：所述的表皮层由致密的、带有微孔结构的内部分子取向的半渗透性的薄膜组成，厚度为0.05~1mm，所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，其中所述两层中的一层被交联，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，厚度为1.5~8mm，该人工皮肤可赋予呼吸功能。

其中，组成表皮层的材料为胶原蛋白或胶原蛋白与壳聚糖的共混材料，组成真皮层的材料为胶原材料或胶原蛋白与壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸盐或聚乙烯醇的共混材料。

其中，所述胶原蛋白为无端肽胶原蛋白。

其中，组成的表皮层材料在微观结构上是分子取向的，可以接受手术中的缝合操作，厚度为0.05~1mm。

所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，真皮层厚度为1.5mm~8mm，其中贴近表皮层的上层多孔支架的孔隙率较低，为70~90%，贴近人体组织的下层多孔支架的孔隙率较高，为90~98%；贴近人体组织的下层多孔支架材料为交联结构。

真皮层中的贴近人体组织的下层多孔支架材料为交联结构，其特征在于：所述的交联结构，是海绵通过物理方法、化学方法或两者结合的方法进行交联后形成的。

表皮层若为胶原与壳聚糖的共混材料，其中胶原的含量为50~99wt%；真皮层若为胶原与壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸盐或聚乙烯醇的共混材料，其中胶原的其中胶原的含量为30~99wt%。

同时本发明还提供了该人工皮肤的制备方法，制备方法包括以下步骤：

步骤1：以弱酸溶液为溶剂，配置浓度较高的胶原或胶原复合溶液，浓度为0.6~2wt%，装入透析袋中透析2~7天，形成溶液I；

步骤2：以弱酸溶液为溶剂，配置浓度较低的胶原或胶原复合溶液，浓度为0.2~1wt%，形成溶液II；

步骤3：将溶液II注入一定深度的模具中，在-80~-20℃下冷冻干燥成海绵，作为真皮层的下层；

步骤4：将步骤3所得到的海绵，使用物理方法、化学方法或两者结合的方法进行交联，得到交联的海绵层；

步骤5：将溶液I注入一定深度的模具中，在0~80℃下通风干燥成薄膜；

步骤6：在步骤5所得的薄膜上注入一定厚度的溶液I，流平一段时间后，将步骤4所得到的海绵层直接帖附在溶液I上，再在-80~-20℃下冷冻干燥成型，从而形成带有含梯度孔隙率结构的真皮层和带有微孔结构的表皮层的人工皮肤。

其中，步骤1中，所述浓度较高的胶原或胶原复合溶液，浓度为0.6~2wt%，若为胶原复合溶液，其中材料为胶原蛋白和壳聚糖的共混材料，共混材料中胶原的含量为50~99wt%；步骤2中，所述的浓度较低的胶原或胶原复合溶液，浓度为0.2~1wt%，若为胶原复合溶液，其中材料为胶原与壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸盐或聚乙烯醇的共混材料，共混材料中胶原的含量为30~99wt%；步骤1和步骤2中，所述的弱酸为稀盐酸、醋酸、甲酸、丙酸、丁酸或乳酸中的一种或多种；步骤1中所述的透析，透析介质为弱酸溶液或水或两者交替进行。

其中，步骤4中，所述的交联方法中，物理方法有紫外辐照、热脱氢法、辐照灭菌法；化学交联方法有使用碳化二亚胺、二胺、环氧化合物、羟基琥珀酰亚胺、二苯基磷酸盐(DPPA)、戊二醛、甲醛、乙醛酸、京尼平进行交联，使用化学交联剂后，需要经过洗脱程序去除交联剂的残留。

一种人工皮肤，由上述的方法制备而得，其特征在于：表皮层和真皮层中，所使用的胶原蛋白，是从动物的皮肤、跟腱等组织，通过酶解、盐析、透析等步骤提取的去端肽胶原蛋白，可以是I型胶原蛋白，也可以是I型和III型胶原蛋白的混合物。

一种人工皮肤，由上述的方法制备而得，其特征在于：真皮层中，还可以加入抗生素、维生素、其他组织中提取的表皮细胞或自体组织提取的骨髓间充质干细胞。

本发明所具有的优点有：

1.表皮层透析工艺制得，内部分子具有取向性结构，使得表皮层具有与人体皮肤类似的有力学强度，手术中可以耐受缝合操作；

2. 表皮层通过溶解挥发法制得，材料与人体表皮相同，具有微孔结构，可使得人工皮肤具有与人体皮肤相似的透氧透湿性能，赋予人工皮肤呼吸功能，同时方面愈合过程中的消毒和给药操作；

3.真皮层更加接近人体皮肤真皮层的结构，为具有两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，利于不同类型的细胞长入和增殖，这种高度仿生的结构更加有利于真皮再生；

4. 真皮层的海绵结构经过交联，支架结构更加稳定、更富有韧性，有助于自体细胞的的增殖；

5. 使用的胶原蛋白为无端肽胶原蛋白，去除了人工皮肤在应用时的免疫排斥、异物反应和病毒感染等方面的问题。

具体实施方式

以下实施例，进一步的详细说明本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步的理解本发明，而不构成对其权利的限制。

实施例1：组织工程人工皮肤包括表皮层和真皮层，表皮层由致密的、带有微孔结构的半渗透性的薄膜组成，材质为胶原蛋白，所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，材质也是胶原蛋白。

组织工程人工皮肤的制备方法如下：

步骤1：以1%浓度的醋酸溶液为溶剂，取一定量的I型胶原蛋白，配置浓度较高的胶原蛋白溶液，浓度为0.6wt%的溶液，装入透析袋中透析7天，形成溶液I；

步骤2：以1%浓度的醋酸溶液溶剂，取一定量的I型胶原蛋白，配置浓度较低的胶原蛋白溶液，浓度为0.3wt%的溶液，形成溶液II；

步骤3：将溶液II注入深度为2mm的模具中，在-80℃下冷冻，然后使用冷冻干燥机冷冻干燥成海绵，作为真皮层的下层；

步骤4：将步骤3所得到的海绵，使用0.01%甲醛的乙醇溶液进行交联24h，交联后使用纯化水清洗以去除甲醛残留，然后再次冷冻干燥，得到交联的海绵层；

步骤5：将溶液I注入深度为5mm的模具中，在55℃下通风干燥成薄膜；

步骤6：在步骤5所得的薄膜上注入厚度为5mm的溶液I，流平一段时间后，将步骤4所得到的海绵层直接帖附在溶液I上，再在-80℃下冷冻干燥成型，从而形成带有含梯度孔隙率结构的真皮层和带有微孔结构的表皮层的人工皮肤。

该人工皮肤为双层结构，表皮层提供了主要的力学强度，吸水后经检测湿态抗张强度为19.8MPa，真皮层为两个梯度的孔隙率的三维多孔支架结构。

实施例2：组织工程人工皮肤包括表皮层和真皮层，表皮层由致密的、带有微孔结构的半渗透性的薄膜组成，材质为胶原蛋白，所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，材质胶原蛋白和硫酸软骨素的混合物。

组织工程人工皮肤的制备方法如下：

步骤1：以0.01%浓度的盐酸溶液为溶剂，取一定量的I型胶原蛋白，配置浓度较高的胶原蛋白溶液，浓度为1.2wt%的溶液，装入透析袋中透析5天，形成溶液I；

步骤2：以0.01%浓度的盐酸溶液溶剂，取一定量的I型胶原蛋白，配置浓度较低的胶原蛋白和硫酸软骨素的混合溶液，浓度为0.5wt%的溶液，混合溶液中溶质胶原蛋白和硫酸软骨素的重量比为5:1，形成溶液II；

步骤3：将溶液II注入深度为2mm的模具中，在-60℃下冷冻，然后使用冷冻干燥机冷冻干燥成海绵，作为真皮层的下层；

步骤4：将步骤3所得到的海绵，使用110℃高温交联36h，得到交联的海绵层；

步骤5：将溶液I注入深度为5mm的模具中，在30℃下通风干燥成薄膜；

步骤6：在步骤5所得的薄膜上注入厚度为5mm的溶液I，流平1h，将步骤4所得到的海绵层直接帖附在溶液I上，再在-60℃下冷冻干燥成型，从而形成带有含梯度孔隙率结构的真皮层和带有微孔结构的表皮层的人工皮肤。

该人工皮肤为双层结构，表皮层提供了主要的力学强度，吸水后经检测湿态抗张强度为21.2MPa，真皮层为两个梯度的孔隙率的三维多孔支架结构。

实施例3：组织工程人工皮肤包括表皮层和真皮层，表皮层由致密的、带有微孔结构的半渗透性的薄膜组成，材质为胶原蛋白和壳聚糖共混材料，所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，材质胶原蛋白和透明质酸钠的混合物。

组织工程人工皮肤的制备方法如下：

步骤1：以0.5%浓度的醋酸溶液为溶剂，取一定量的I型胶原蛋白和壳聚糖，配置浓度较高的胶原蛋白溶液，浓度为0.9wt%的溶液，其中溶质胶原蛋白和壳聚糖的重量比为1:1，装入透析袋中透析,3天，形成溶液I；

步骤2：以0.9%浓度的醋酸溶液溶剂，取一定量的I型胶原蛋白，配置浓度较低的胶原蛋白和透明质酸钠的混合溶液，浓度为0.4wt%的溶液，混合溶液中溶质胶原蛋白和透明质酸钠的重量比为1:1，形成溶液II；

步骤3：将溶液II注入深度为4mm的模具中，在-60℃下冷冻，然后使用冷冻干燥机冷冻干燥成海绵，作为真皮层的下层；

步骤4：将步骤3所得到的海绵，使用紫外辐照交联24h，得到交联的海绵层；

步骤5：将溶液I注入深度为10mm的模具中，在30℃下通风干燥成薄膜；

步骤6：在步骤5所得的薄膜上注入厚度为5mm的溶液I，流平30min，将步骤4所得到的海绵层直接帖附在溶液I上，再在-60℃下冷冻干燥成型，从而形成带有含梯度孔隙率结构的真皮层和带有微孔结构的表皮层的人工皮肤。

该人工皮肤为双层结构，表皮层提供了主要的力学强度，吸水后经检测湿态抗张强度为30.5MPa，真皮层为两个梯度的孔隙率的三维多孔支架结构。

实施例4：组织工程人工皮肤包括表皮层和真皮层，表皮层由致密的、带有微孔结构的半渗透性的薄膜组成，材质为胶原蛋白和壳聚糖共混材料，所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，材质胶原蛋白和聚乙烯醇的混合物。

组织工程人工皮肤的制备方法如下：

步骤1：以1%浓度的丙酸溶液为溶剂，取一定量的I型胶原蛋白和壳聚糖，配置浓度较高的胶原蛋白溶液，浓度为2.0wt%的溶液，其中溶质胶原蛋白和壳聚糖的重量比为2:1，装入透析袋中透析6天，形成溶液I；

步骤2：以2%浓度的丙酸溶液溶剂，取一定量的I型胶原蛋白，配置浓度较低的胶原蛋白和透明质酸钠的混合溶液，浓度为0.5wt%的溶液，混合溶液中溶质胶原蛋白和聚乙烯醇的重量比为2:1，形成溶液II；

步骤3：将溶液II注入深度为5mm的模具中，在-40℃下冷冻，然后使用冷冻干燥机冷冻干燥成海绵，作为真皮层的下层；

步骤4：将步骤3所得到的海绵，使用0.01%戊二醛的乙醇溶液交联24h，交联后使用纯化水清洗以去除戊二醛残留，然后再次冷冻干燥，得到交联的海绵层；

步骤5：将溶液I注入深度为3mm的模具中，在30℃下通风干燥成薄膜；

步骤6：在步骤5所得的薄膜上注入厚度为5mm的溶液I，流平15min，将步骤4所得到的海绵层直接帖附在溶液I上，再在-40℃下冷冻干燥成型，从而形成带有含梯度孔隙率结构的真皮层和带有微孔结构的表皮层的人工皮肤。

该人工皮肤为双层结构，表皮层提供了主要的力学强度，吸水后经检测湿态抗张强度为15.8MPa，真皮层为两个梯度的孔隙率的三维多孔支架结构。

实施例5：组织工程人工皮肤包括表皮层和真皮层，表皮层由致密的、带有微孔结构的半渗透性的薄膜组成，材质为胶原蛋白和壳聚糖共混材料，所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，材质胶原蛋白和透明质酸钠的混合物。

组织工程人工皮肤的制备方法如下：

步骤1：以0.5%浓度的醋酸溶液为溶剂，取一定量的胶原蛋白和壳聚糖，其中胶原蛋白由I型胶原蛋白和III型胶原蛋白组成，III型胶原蛋白在总蛋白中的含量为5%，配置浓度较高的胶原蛋白溶液，浓度为0.9wt%的溶液，其中溶质胶原蛋白和壳聚糖的重量比为1:1，其中，装入透析袋中透析,3天，形成溶液I；

步骤2：以0.9%浓度的醋酸溶液溶剂，取一定量的I型胶原蛋白，其中胶原蛋白由I型胶原蛋白和III型胶原蛋白组成，III型胶原蛋白在总蛋白中的含量为5%，配置浓度较低的胶原蛋白和透明质酸钠的混合溶液，浓度为0.4wt%的溶液，混合溶液中溶质胶原蛋白和透明质酸钠的重量比为1:1，形成溶液II；

对比例1：按照刘永庆的中国发明专利一种人工皮肤的制备方法（专利公开号CN1485099A），使用壳聚糖为原料制作双层人工皮肤，使用下述步骤进行：

步骤1：使用的壳聚糖浓度为1%，以三氯乙酸为溶剂；

步骤2：使用部分溶液倒在聚四氟乙烯，在45℃下干燥成保护膜；

步骤3：将部分所配壳聚糖溶液，倒入培养皿中，迅速冷冻结冰形成厚度为3mm的冰块；

步骤4：将步骤2中制备的保护膜，贴在步骤3制备的冰块上，在迅速冷冻结冰后冻干，制成海绵层；

步骤5：用氨水浸泡步骤4所得的样品，制得双层人工皮肤。

经检测，按照上述对比例的工艺所制备的样品中，无透析过程的方法，制备出的人工皮肤表皮，抗张强度很低，抗张强度为0.9Mpa，而且表皮层和真皮层易于脱落。

本发明是根据特定实施例进行描述的，但本领域的技术人员应明白在不脱离本发明范围时，可进行各种变化或等同替换。此外，为适应本发明技术的特定场合或材料，可对本发明进行诸多修改而不脱离其保护范围。因此，本发明并不限于在此公开的特定实施例，而包括所有落入权利要求保护范围的实施例。

本发明的人工皮肤具有表皮层和真皮层结构，真皮层为具有两层不同孔隙率的三维多孔支架，去掉一层三维多孔海绵或增加一层三位多孔海绵均为本发明的一种变化或等同替换。

Claims

1.一种组织工程人工皮肤的制备方法，该组织工程人工皮肤包括表皮层和真皮层，其特征在于：所述的表皮层由致密的、带有微孔结构的内部分子取向的半渗透性的薄膜组成，厚度为0.05～1mm，所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，其中所述两层中的一层被交联，两层因为孔隙率不同而形成两个层次的梯度结构，厚度为1.5～8mm，该人工皮肤可赋予呼吸功能，所述制备方法包括以下步骤：

步骤1：以弱酸溶液为溶剂，配置浓度较高的胶原或胶原复合溶液，浓度为0.6～2％wt，装入透析袋中透析2～7天，形成溶液I；

步骤2：以弱酸溶液为溶剂，配置浓度较低的胶原或胶原复合溶液，浓度为0.2～1％wt，形成溶液II；

步骤3：将溶液II注入一定深度的模具中，在-80～-20℃下冷冻干燥成海绵，作为真皮层的下层；

步骤5：将溶液I注入一定深度的模具中，在0～80℃下通风干燥成薄膜；

步骤6：在步骤5所得的薄膜上注入一定厚度的溶液I，流平一段时间后，将步骤4所得到的海绵层直接帖附在溶液I上，再在-80～-20℃下冷冻干燥成型，从而形成带有含梯度孔隙率结构的真皮层和带有微孔结构的表皮层的人工皮肤；

其中，组成表皮层的材料为胶原蛋白或胶原蛋白与壳聚糖的共混材料，组成真皮层的材料为胶原材料或胶原蛋白与壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸盐或聚乙烯醇的共混材料；

所述胶原蛋白为无端肽胶原蛋白。

2.如权利要求1所述的人工皮肤的制备方法，其特征在于：组成的表皮层材料在微观结构上是分子取向的，可以接受手术中的缝合操作，厚度为0.05～1mm。

3.如权利要求1所述的人工皮肤的制备方法，其特征在于：所述的真皮层由两层不同孔隙率的三维多孔支架结构组成，真皮层厚度为1.5～8mm，其中贴近表皮层的上层多孔支架的孔隙率较低，为70～90％，贴近人体组织的下层多孔支架的孔隙率较高，为90～98％；贴近人体组织的下层多孔支架材料为交联结构。

4.如权利要求3所述的人工皮肤的制备方法，其特征在于：所述的贴近人体组织的下层多孔支架材料中的交联结构，是海绵通过物理方法、化学方法或两者结合的方法进行交联后形成的。

5.如权利要求1所述的人工皮肤的制备方法，其特征在于：表皮层若为胶原蛋白与壳聚糖的共混材料，其中胶原的含量为50～99％wt；真皮层若为胶原与壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸盐或聚乙烯醇的共混材料，其中胶原的含量为30～99％wt。

6.如权利要求1所述的人工皮肤的制备方法，其特征在于：步骤1中，所述浓度较高的胶原或胶原复合溶液，浓度为0.6～2％wt，若为胶原复合溶液，其中材料为胶原蛋白和壳聚糖的共混材料，共混材料中胶原的含量为50～99％wt；步骤2中，所述的浓度较低的胶原或胶原复合溶液，浓度为0.2～1％wt，若为胶原复合溶液，其中材料为胶原与壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸盐或聚乙烯醇的共混材料，共混材料中胶原的含量为30～99％wt；步骤1和步骤2中，所述的弱酸为稀盐酸、醋酸、甲酸、丙酸、丁酸或乳酸中的一种或多种；步骤1中所述的透析，透析介质为弱酸溶液或水或两者交替进行。

7.如权利要求1所述的人工皮肤的制备方法，其特征在于：步骤4中，所述的交联方法中，物理方法有紫外辐照、热脱氢法；化学交联方法有使用碳化二亚胺、二胺、环氧化合物、羟基琥珀酰亚胺、二苯基磷酸盐、戊二醛、甲醛、乙醛酸、京尼平进行交联，使用化学交联剂后，需要经过洗脱程序去除交联剂的残留。

8.一种组织工程人工皮肤，其采用权利要求1～7中任一项所述的方法制备而得，其特征在于：表皮层和真皮层中，所使用的胶原蛋白，是从动物的皮肤、跟腱组织，通过酶解、盐析、透析步骤提取的去端肽胶原蛋白，其是I型胶原蛋白，或是I型和III型胶原蛋白的混合物。

9.一种组织工程人工皮肤，其采用权利要求1～7中任一项所述的方法制备而得，其特征在于：真皮层中，加入抗生素、维生素、其他组织中提取的表皮细胞或自体组织提取的骨髓间充质干细胞。