CN107709566A - 光学活性含氟烷基环氧乙烷的工业制造方法 - Google Patents

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Abstract

[课题]提供光学活性含氟烷基环氧乙烷的工业制造方法。[解决方案]通过使具有不对称还原含氟烷基氯甲基酮的活性的微生物或具有该活性的酶与该含氟烷基氯甲基酮作用，从而可以以高的光学纯度且收率良好地制造光学活性含氟烷基氯甲醇。接着，通过使该醇与碱作用，可以得到含氟烷基环氧乙烷。本发明的制造方法容易在工业上实施。

Description

光学活性含氟烷基环氧乙烷的工业制造方法
技术领域
本发明涉及光学活性含氟烷基环氧乙烷的工业制造方法。
背景技术
光学活性含氟烷基环氧乙烷作为各种医药农药中间体是重要的化合物。作为光学活性2-三氟甲基环氧乙烷的制造方法，非专利文献1中，公开了使用微生物的1,1,1-三氟丙烯的基于不对称氧化的方法，非专利文献2中，公开了消旋体的2-三氟甲基环氧乙烷的基于动力学光学拆分的方法，非专利文献3中，公开了将3-溴-1,1,1-三氟-2-丙酮用不对称还原剂进行不对称还原，使所得光学活性1-溴-3,3,3-三氟异丙醇与碱作用并进行闭环的方法，非专利文献4中，公开了使用光学拆分剂，得到光学活性3,3,3-三氟乳酸，经过利用对取代基的保护基的保护、脱保护和酯化等多级工序，使所得磺酸酯与碱作用的方法，专利文献1中，公开了将光学活性3,3,3-三氟-1,2-丙二醇通过重结晶提高光学纯度，衍生为光学活性1-氯-3,3,3-三氟异丙醇后，使碱作用而闭环的方法。
另一方面，本发明人等在专利文献2中，还公开了由光学活性3,3,3-三氟乳酸衍生光学活性3,3,3-三氟-1,2-丙二醇，经过环状硫酸酯体，转化为卤代醇体，衍生为光学活性2-三氟甲基环氧乙烷的方法。
另外，对于光学活性2-单氟甲基环氧乙烷，非专利文献2中公开了，消旋体的2-单氟甲基环氧乙烷的基于动力学光学拆分的方法。
另一方面，对于光学活性2-二氟甲基环氧乙烷，迄今未知合成例。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开平6-247953号公报
专利文献2：日本特开2006-328011号公报
非专利文献
非专利文献1：Chirality in Industry,Wiley,New York,1992
非专利文献2：S.E.Schaus,B.D.Brandes,J.F.Larrow,M.Tokunaga,.B.Hansen,A.E.Gould,M.E.Furrow,and E.N.Jacobsen,Journal of the American ChemicalSociety,2002,124,1307-1315
非专利文献3：P.V.Ramachandran,B.Gong,H.C.Brown,J.Org.Chem,1995,60,41-46
非专利文献4：C.von dem Bussche-Hunnefeld,C.Cescato,D.Seebach,Chem.Ber.,1992,125,2795-2802
发明内容
发明要解决的问题
如前述，对于2-三氟甲基环氧乙烷，非专利文献1中，公开了利用微生物的1,1,1-三氟丙烯的基于不对称氧化的方法，示出可以应用生物学的不对称氧化，但仅可以制造S体的对映体。非专利文献2中，公开了使用化学催化剂的消旋体的2-三氟甲基环氧乙烷的基于动力学光学拆分的方法，公开了可以得到极高至99％ee以上的光学纯度的光学活性2-三氟甲基环氧乙烷，但利用具有不理想的立体化学的2-三氟甲基环氧乙烷再次进行光学拆分时，其操作中存在困难。即，极难以使2-三氟甲基环氧乙烷水解而生成的3,3,3-三氟-1,2-丙二醇衍生为消旋体或目标立体化学的2-三氟甲基环氧乙烷的前体，因此作为结果，对于具有目标立体化学的光学活性2-三氟甲基环氧乙烷，无法期待50％以上的收率，工业上难以采用。非专利文献3中，公开了使用不对称还原剂的3-溴-1,1,1-三氟-2-丙酮的基于不对称还原的方法，经过高至96％ee的光学纯度的光学活性1-溴-3,3,3-三氟异丙醇，得到光学活性2-三氟甲基环氧乙烷，但需要以计算量地使用昂贵的不对称还原剂，不能说是工业上的方法。非专利文献4中，公开了由光学活性3,3,3-三氟乳酸得到2-三氟甲基环氧乙烷的方法，但反应不仅为多级且复杂，而且理论收率也最大为50％，不能说是工业上的方法。
专利文献1中，公开了将各种方法中得到的、光学活性3,3,3-三氟-1,2-丙二醇衍生为1-氯-3,3,3-三氟异丙醇，利用碱进行闭环的方法，但存在收率低的问题。
本发明的课题在于，提供工业上制造光学活性含氟烷基环氧乙烷的方法。
用于解决问题的方案
本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现如下方法：通过使含氟烷基氯甲基酮与特定的生物体催化剂(微生物或酶)作用，从而不对称还原有效地进行，可以以高的立体选择性得到光学活性含氟烷基氯甲醇。另外，获得如下见解：维持光学纯度不变地由该醇以高的收率衍生为含氟烷基环氧乙烷，完成了本发明。
即，本发明提供以下的[发明1]-[发明17]中记载的发明。
[发明1]
一种式[2]所示的光学活性含氟烷基氯甲醇的制造方法，其包括如下工序：使具有不对称还原式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮的活性的微生物或具有该活性的酶与该式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮作用。
[式中，Rf表示具有至少1个以上氟原子的碳数1～6的直链或支链的氟烷基。]
[式中，*表示不对称原子。Rf与式[1]相同。]
[发明2]
根据发明1所述的制造方法，其中，式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮中的Rf为三氟甲基(CF3)或二氟甲基(CF2H)。
[发明3]
根据发明1或2所述的制造方法，其中，前述微生物为选自由弯曲隐球酵母(Cryptococcus curvatus)、粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)、戴尔凯氏有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、可可假丝酵母(Candida cacaoi)、胶红酵母(Rhodotorulamucilaginosa)、约氏掷孢酵母(Sporidibolus johnsonii)和皮状丝孢酵母(Trichosporoncutaneum)组成的组中的至少1种。
[发明4]
根据发明3所述的制造方法，其特征在于，前述微生物为具有下述所示的保藏编号的微生物。
[表1]
[发明5]
根据发明1所述的制造方法，其特征在于，前述酶为醇脱氢酶或羰基还原酶。
[发明6]
根据发明5所述的制造方法，其特征在于，醇脱氢酶或羰基还原酶为银耳科、酵母科、红酵母属、掷孢酵母属、丝孢酵母科的微生物、该处理物、该培养液和/或由该微生物得到的酶。
[发明7]
根据发明1至6中任一项所述的制造方法，其特征在于，前述反应中的温度(反应温度)为5～60℃。
[发明8]
根据发明1至7中任一项所述的制造方法，其特征在于，前述反应中的pH(反应时的pH)为4.0～8.0的范围。
[发明9]
根据发明1至8中任一项所述的制造方法，其包括如下工序：将前述反应结束后得到的含有光学活性含氟醇和杂质的混合液进行蒸馏，从而从该混合液分离杂质，将光学活性含氟醇纯化。
[发明10]
一种式[3]所示的光学活性含氟烷基环氧乙烷的制造方法，其特征在于，利用发明1至9中任一项所述的方法制造式[2]所示的光学活性含氟烷基氯甲醇，接着使该醇与碱作用。
[式中，*表示不对称原子。Rf与发明1中的式[1]相同。]
[发明11]
根据发明10所述的制造方法，其中，碱为选自由碱金属氢化物、碱土金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐和碱土金属碳酸氢盐组成的组中的至少一种。
[发明12]
根据发明10或发明11所述的制造方法，其还包括如下工序：将前述光学活性含氟烷基环氧乙烷水解，从而衍生为式[4]所示的含氟烷基-1,2-乙二醇。
[式中，*表示不对称原子。Rf与发明1中的式[1]相同。]
[发明13]
根据发明12所述的方法，其中，水解通过使酸或碱作用来进行。
[发明14]
根据发明13所述的制造方法，其中，碱为选自由碱金属氢化物、碱土金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐和碱土金属碳酸氢盐组成的组中的至少一种。
[发明15]
根据发明12至14中任一项所述的制造方法，其中，将前述反应中得到的光学活性含氟烷基环氧乙烷直接水解而不进行分离来进行衍生为含氟烷基-1,2-乙二醇的工序。
[发明16]
一种下式所示的光学活性1-氯-3,3-二氟异丙醇。
[式中，*表示不对称原子。]
[发明17]
一种下式所示的光学活性2-二氟甲基环氧乙烷。
[式中，*表示不对称原子。]
本发明人等从微生物菌体、酶之类的生物体催化剂中，深入实施能达成本发明的目的的生物体催化剂的筛选，发现了提供便利性高的光学活性含氟烷基氯甲醇作为光学活性含氟烷基环氧乙烷的中间体的生物体催化剂，至此完成了本发明。
另外，该过程中，本发明人等获得如下非常有用的见解：通过改变使用的生物体催化剂，可以分别制作光学活性含氟烷基氯甲醇的两光学异构体。
本发明中，作为生物体催化剂的基质，也举出式[5]：
所示的含氟烷基溴甲基酮作为候补，但使用生物体催化剂的方法中，需要以水为溶剂，化合物中的溴原子在水中脱离，确认了无法得到目标光学活性含氟烷基溴醇(参照后述的比较例)。如此，鉴于使用生物体催化剂的方法中无法使用含氟烷基溴甲基酮的见解，本发明中，使用的是，在水的存在下也稳定的、导入了氯原子的前述化合物。
含氟烷基氯甲基酮的浓度是指反应液中的该酮的浓度(w/v)(未考虑(排除)经过还原的产物的浓度)，不限制通过反应整体的该酮的添加总量。
反应液中生成的光学活性含氟烷基氯甲醇可以通过蒸馏、提取等来回收，通过使该醇与碱作用，从而可以维持光学纯度不变地转化为光学活性含氟烷基环氧乙烷。进而，将该光学活性含氟烷基环氧乙烷通过水解，可以维持光学纯度不变地转化为光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇。
如本发明那样，发现以高的光学纯度提供光学活性含氟烷基氯甲醇的生物体催化剂，可以效率良好地制造两光学异构的光学活性含氟烷基氯甲醇，可以维持光学纯度不变地转化为光学活性含氟烷基环氧乙烷，这样的见解以往未知。
特别是，对于本发明中的作为对象之一的Rf具有二氟甲基的基质，极难以利用通常的化学方法进行含氟烷基氯甲基酮的不对称还原，现有技术中，无法得到高的光学纯度的光学活性二氟氯甲醇(参照参考例1)。
需要说明的是，光学活性2-二氟甲基环氧乙烷(式[3]所示的光学活性含氟烷基环氧乙烷的、Rf为二氟甲基的情况)、和作为其前体的光学活性1-氯-3,3-二氟异丙醇(式[2]所示的光学活性含氟烷基氯甲醇的、Rf为二氟甲基的情况)是新型化合物。
发明的效果
根据本发明，可以效率良好地制造作为医药农药中间体重要的光学活性含氟烷基环氧乙烷。
另外，提供该环氧乙烷的前体即光学活性含氟烷基氯甲醇的生物体催化剂可以以将含氟烷基氯甲基酮水合体用于基质的筛选而得到，进而，通过进行不对称还原反应(利用脱氢酶使其再生而不从外部新加入辅酶NAD(P)H的方法等)，可以以工业上能采用的生产率得到光学活性含氟烷基氯甲醇。
具体实施方式
以下，对本发明进行详细说明。本发明的范围不限定于这些说明，对于以下的示例以外，在不有损本发明的主旨的范围内也可以适宜变更而实施。
本发明为：使具有不对称还原式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮的活性的微生物或具有该活性的酶与该式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮作用，得到式[2]所示的光学活性含氟烷基氯甲醇的(本说明书中称为“工序1”)制造方法；而且，为：利用工序1的方法制造光学活性含氟烷基氯甲醇，使碱对该醇作用，通过闭环反应，得到式[3]所示的光学活性含氟烷基环氧乙烷的(本说明书中称为“工序2”)制造方法。
进而，还包括：以工序2的方法制造光学活性含氟烷基环氧乙烷，将该环氧乙烷水解，通过开环反应，得到式[4]所示的光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇的(本说明书中称为“工序3”)制造方法，以下，作为反应方案进行归纳。
[工序1]
[工序2]
[工序3]
式中，Rf表示碳数1～6的直链或支链的氟烷基，
*表示不对称原子。
[工序1]
对工序1进行说明。式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮为公知的化合物，本领域技术人员可以基于现有技术适宜制备，也可以使用市售的产品。
式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮中，Rf为具有至少1个以上氟原子的碳数1～6的直链或支链的氟烷基。作为具体的结构，可以举出三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基、九氟丁基、二氟甲基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、1,1-二氟丙基、2,2-二氟丙基、3,3-二氟丙基、1,1-二氟丁基、2,2-二氟丁基、3,3-二氟丁基、4,4-二氟丁基、单氟甲基、1-单氟乙基、2-单氟乙基、1-单氟丙基、2-单氟丙基、3-单氟丙基、1-单氟丁基、2-单氟丁基、3-单氟丁基、4-单氟丁基，其中，优选三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基、九氟丁基、二氟甲基，特别优选三氟甲基、二氟甲基。
工序1的主要反应为如下反应：使具有不对称还原含氟烷基氯甲基酮的活性的微生物或具有该活性的酶与该含氟烷基氯甲基酮作用，得到式[2]所示的光学活性含氟烷基氯甲醇。通过该反应，可以得到便利性高的含氟烷基氯甲醇作为光学活性含氟环氧乙烷的中间体。
需要说明的是，式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮如后述的实施例所示那样，也可以同样地使用该酮加成有水或醇的、式[6]：
所示的含氟烷基氯甲基酮水合体、和式[7]
[式[6]或式[7]中，Rf与式[1]相同。R表示碳数1～6的直链或支链的烷基。]
所示的醇加成体。因此，这些水合体和醇加成体也作为包含于本申请方案1的情况进行处理。
式[7]中的R表示碳数1～6的直链或支链的烷基。具体而言，可以举出甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、异丁基、叔丁基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-1-丁基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、3-甲基-2-丁基、新戊基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2-甲基-3-戊基、3-甲基-3-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、2,3-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、2-乙基-1-丁基、1-环丙基、1-环戊基、1-环己基，其中，表示甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、异丁基、叔丁基、1-戊基、1-己基、1-环己基，其中，特别优选甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、异丁基、叔丁基、1-环己基。
此处使用的微生物没有特别限定，可以适宜选自细菌、酵母、丝状菌等，例如可以举出选自由弯曲隐球酵母(Cryptococcus curvatus)、粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)、戴尔凯氏有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、可可假丝酵母(Candida cacaoi)、胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、约氏掷孢酵母(Sporidibolus johnsonii)、皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)组成的组中的至少1种，优选可以举出选自由弯曲隐球酵母(Cryptococcus curvatus)、粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)、可可假丝酵母(Candidacacaoi)、皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)组成的组中的至少1种，更优选可以举出选自由弯曲隐球酵母(Cryptococcus curvatus)、粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)、皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)组成的组中的至少1种。另外，对于属于与它们为相同生物的种的微生物，也可以等同使用。
对于这些微生物，分别得到下述表所示的保藏编号，保藏于国家高级工业科学技术学院(〒151-0066东京都涉谷西原2-49-10)。这些微生物有时也在其他微生物株保存机构相互保藏，可以同样地利用。需要说明的是，这些微生物是一般公开的微生物，本领域技术人员可以容易获得。
[表2]
作为本发明中使用的微生物，当然可以直接使用经培养的菌体，也可以使用：用超声波、玻璃珠裂解的菌体、用丙烯酰胺等固定化的菌体、用丙酮、戊二醛等有机化合物处理的菌体、负载于氧化铝、二氧化硅、沸石和硅藻土等无机载体的菌体、由该微生物制备的无细胞提取液。
直接使用微生物的菌体时，由于在菌体内存在多个的、“保有相反的立体选择性的还原酶的相互作用”的影响而光学纯度也有成为中等程度(40～70％ee)的情况，但通过将目标酶纯化而使用，从而可以得到比原始菌体显示的光学纯度高的光学纯度。例如，如果由提供上述光学活性体的微生物纯化醇脱氢酶(可逆地还原酮的酶)、羰基还原酶(不可逆地还原酮的酶)之类的催化该反应的酶，则该酶的纯化可以应用硫酸铵分馏、疏水色谱法、离子交换色谱法、凝胶过滤色谱法等一般的蛋白质的纯化方法。另外，也可以同样地使用导入了由该微生物克隆的酶的基因的基因重组体。
酶的分离源可以以筛选中得到的微生物为对象，由该微生物所属的种、即、银耳科、酵母科、红酵母属、掷孢酵母属、丝孢酵母科的微生物，可以得到能用于本发明的方法的醇脱氢酶或羰基还原酶。
本发明的方法中能使用的酶也可以使用市售的产品，可以通过进行将含氟烷基氯甲基酮用于基质的筛选来选拔。市售的酶例如可以举出选自Oriental Yeast Co.,Ltd.的“醇脱氢酶、源自酵母”、Unitika株式会社的“醇脱氢酶(ZM-ADH、源自运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis))”、株式会社Daicel的Chiralscreen(注册商标)OH E001(以下相同)、E004、E007、E008、E039、E048、E052、E073、E077、E085、E094中的至少1种，优选为E001、E007、E039、E085、E094，更优选为E001、E039、E094。另外，也可以同样地使用表达该酶的基因重组体。
前述微生物的培养中，通常可以使用包含微生物的培养中使用的营养成分的培养基(固体培养基或液体培养基)，进行为水溶性的含氟烷基氯甲基酮的还原反应时，优选液体培养基。培养基中，作为碳源，可以使用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、海藻糖、甘露糖、甘露醇、右旋糖等糖类、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、甘油等醇类、柠檬酸、谷氨酸、苹果酸等有机酸类，而且作为氮源，可以使用氨、铵盐、氨基酸、蛋白胨、聚蛋白胨、酸水解酪蛋白、尿素、酵母提取物、麦芽提取物、玉米浆等。进而，可以适宜添加磷酸二氢钾、磷酸氢二钾等其他无机盐、肌醇、烟酸等维生素类等、铁、铜、镁、硼、锰、钼等微量金属类等培养基组成。
这些碳源、氮源、无机盐中，对于碳源，优选加入微生物充分增殖的量且不妨碍增殖的量，通常相对于培养基1L，加入5～80g、优选加入10～40g。对于氮源，也同样地，优选加入微生物充分增殖的量且不妨碍增殖的量，通常相对于培养基1L，加入5～60g、优选加入10～50g，对于作为营养源的无机盐，必须加入微生物的增殖所需的元素，但为高浓度的情况下，妨碍增殖，因此，通常相对于培养基1L，加入0.001～10g。需要说明的是，它们可以根据微生物而组合多种使用。
培养基中的pH必须以适合于微生物的增殖的范围进行调整，通常以4.0～10.0、优选以6.0～9.0进行。培养中的温度范围必须以适合于微生物的增殖的范围进行调整，通常以10～50℃、优选以20～40℃进行。培养中，必须对培养基通入空气，优选以0.3～4vvm(“vvm”是指每1分钟相对于培养基体积的通气量。是“体积/体积/分钟(volume/volume/minute)”的简记)、更优选以0.5～2vvm进行。对于氧气的要求量多的微生物，可以使用氧气发生器等，通入提高了氧气浓度的空气。另外，对于试管、烧瓶等难以设定任意的通气量的器具，相对于该器具的容积，可以将培养基量设定为20％以下，安装棉塞、硅塞等通气塞。为了使培养顺利进行，优选搅拌培养基，培养槽的情况下，该装置的搅拌能力优选以10～100％、更优选以20～90％进行。另一方面，试管、烧瓶等小规模的器具的情况下，可以使用振荡机，优选以50～300rpm、更优选以100～280rpm进行。培养时间只要为约束微生物的增殖的时间即可，以6～72小时、优选以12～48小时进行。
使作为基质的含氟烷基氯甲基酮与前述微生物作用时，通常可以将培养有微生物的悬浮液直接用于反应。培养中产生的成分对还原反应造成不良影响的情况下，可以利用离心分离等操作从培养液1次回收菌体，使用所得菌体(静止菌体)，再次制备悬浮液并用于反应。另外，也可以将培养的微生物菌体的细胞进行裂解等而得到的物质、由培养的微生物菌体制备的酶等各种细胞提取物用于反应。另一方面，使作为基质的含氟烷基氯甲基酮与前述酶(纯化酶)作用的情况下，可以在溶解有该酶的缓冲液中进行。本反应为还原反应，因此，优选弱酸性的缓冲液，可以举出磷酸钠缓冲液、磷酸钾缓冲液、柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸钾缓冲液、乙酸钠缓冲液、乙酸钾缓冲液。
为了有效地进行使用前述微生物的反应，需要提高这些悬浮液中的菌体的密度，但密度过高时，由于自溶酶的产生、终末代谢物的蓄积等而有时妨碍反应，因此，通常以106～1012cfu/ml(“cfu”是指在琼脂培养基上形成的菌落的数量、菌落形成单位：colonyforming units)、优选以107～1011cfu/ml、更优选以108～1010cfu/ml进行。另一方面，为了有效地进行使用前述酶的反应，需要提高缓冲液中的酶的浓度，但过度使用酶时是不经济的，因此，优选以0.01～20g/L、更优选以0.1～10g的范围使用。
含氟烷基氯甲基酮对这些悬浮液或缓冲液的添加中，该酮的浓度优选维持还原反应顺利地进行且不会对微生物或酶的活性造成不良影响的浓度。该酮的浓度高于20％(w/v)时，有时微生物死亡、或酶变性，因此，以该数值以下的浓度、即、通常以0.01～15％(w/v)、优选以0.05～10％(w/v)进行。该酮浓度算出的容量的依据例如可以考虑后述的实施例1中分注至蒸汽灭菌前的试管的培养液量作为标准，考虑后述的实施例7中培养后的微生物的悬浮液总量作为标准。
使作为基质的含氟烷基氯甲基酮与前述微生物或酶作用时的温度(即反应温度)必须维持适合于该微生物或酶的范围，通常5～60℃、优选15～50℃、更优选15～38℃。另外，上述作用时的pH(即反应时的pH)也必须维持适合的范围，通常4.0～8.0、优选5.5～8.0、更优选5.5～7.0。
微生物悬浮液或酶缓冲液处于静置状态时，反应效率降低，因此，反应时边搅拌反应液边进行。另外，反应时可以以无通气进行，但也可以根据需要进行通气。此时，通气量过多时，含氟烷基氯甲基酮和光学活性含氟烷基氯甲醇有向体系外以气体的形式飞散的担心，通气量优选0.3vvm以下，更优选0.1vvm以下。反应时间可以根据目标物的生成情况而确定，通常为6～312小时。
本发明中，还原反应中利用的辅酶NAD(P)H(供氢体)可以通过辅酶再生酶(葡萄糖脱氢酶、甲酸脱氢酶、甘油脱氢酶、醇脱氢酶、以下相同)由辅酶NAD(P)再生，对于微生物中的反应，对于微生物本来所具有的辅酶再生酶、重组体，可以使用掺入期望的基因而表达的辅酶再生酶。作为辅酶再生酶的基质，必须添加与各酶对应的基质，边添加葡萄糖、甲酸、甘油或醇边进行。对于辅酶NAD(P)H，也可以另行加入市售的产品而进行还原反应，但非常昂贵，因此是不经济的。如本发明那样，通过辅酶再生酶使其再生而不从外部新加入辅酶NAD(P)H，从而每1个菌体(1个酶)的还原次数增加，可以经济且以高的生产率制造目标物。
从反应结束液(包含反应结束后的杂质等的混合液)回收生成的光学活性含氟烷基氯甲醇时，可以采用蒸馏、利用有机溶剂的提取、固相提取等有机合成中的一般的分离方法。特别是，本化合物在如下方面与现有技术相比也是非常有用的：从反应结束液、或根据需要通过过滤去除菌体后的滤液直接进行蒸馏，从而可以将粗产物以水溶液的形式简便且收率良好地进行回收。所得粗产物的水溶液可以根据需要进行脱水、活性炭、分馏蒸馏、柱色谱法等纯化操作，但从工业的观点出发，可以直接以粗体的形式用于后续工序的光学活性含氟烷基环氧乙烷的合成这一点也是理想的方式之一。
作为纯化粗产物的方法，特别优选利用有机溶剂的提取和紧接着其的分馏蒸馏。作为有机溶剂，可以采用醚系溶剂、酯系溶剂、卤素系溶剂、脂肪族烃系溶剂、芳香族烃系溶剂等。具体而言，可以举出乙醚、二异丙醚、二丁醚、甲基-叔丁醚、环戊基甲醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸叔丁酯、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、正己烷、环己烷、正庚烷、正壬烷、正辛烷、甲苯、二甲苯等，优选乙醚、二异丙醚、甲基-叔丁醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、正己烷、环己烷、正庚烷、甲苯，特别优选乙醚、二异丙醚、甲基-叔丁醚、2-甲基四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、正己烷、甲苯。可以将这些溶剂单独使用或组合使用。
另外，通过直接利用上述所示的有机溶剂提取从反应结束液去除菌体后的滤液，并对其进行浓缩，从而也可以回收光学活性含氟烷基氯甲醇。
[工序2]
接着，对工序2进行说明。工序2为如下工序：以前述工序中制造的式[2]所示的光学活性含氟烷基氯甲醇为原料，使该醇与碱作用，从而得到式[3]所示的光学活性含氟烷基环氧乙烷。此处通过使碱作用而闭环，从而可以衍生为光学活性含氟烷基环氧乙烷而不使光学纯度降低。
本工序中使用的碱可以举出无机碱或有机碱。作为无机碱，可以举出碱金属氢化物、碱土金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐、氨基碱金属、碱金属等。
其中，优选碱金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐，特别优选碱金属氢化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐或碱金属碳酸氢盐。
具体而言，可以举出氢化锂、氢化钠、氢化钾、氢化铷、氢化铯、氢化镁、氢化钙、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铷、氢氧化铯、氢氧化镁、氢氧化钙、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铷、碳酸铯、碳酸镁、碳酸钙、碳酸氢锂、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铷、碳酸氢铯、碳酸氢镁、碳酸氢钙、氨基钠、氨基钾、钠、钾，其中，优选氢化锂、氢化钠、氢化钾、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铷、氢氧化铯、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铷、碳酸铯、碳酸钙、碳酸钙、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铷、碳酸氢铯、碳酸氢镁、碳酸氢钙，特别优选氢化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸钙、碳酸氢钾、碳酸氢铯。它们可以单独使用1种或组合2种以上使用。
另一方面，作为有机碱，可以举出吡啶类、三烷基胺类、N,N-二烷基苯胺类等，优选吡啶类、三烷基胺类。具体而言，可以举出吡啶、甲基吡啶、乙基吡啶、二甲基吡啶、甲基乙基吡啶、二乙基吡啶、三甲基吡啶、二甲基氨基吡啶、2,2’-联吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三甲基胺、三乙基胺、三丙基胺、三丁基胺、二异丙基乙基胺、N,N-二甲基苯胺、N,N-二乙基苯胺，其中，特别优选吡啶、三甲基胺、三乙基胺、三丁基胺、二异丙基乙基胺。它们可以单独使用1种或组合2种以上使用。另外，也可以将这些有机碱和无机碱的2种以上组合而使用。
碱的用量相对于通式[2]所示的含氟烷基氯甲醇，可以使用0.1摩尔以上，优选0.2～20摩尔、特别优选0.3～10摩尔。
作为反应溶剂，除水之外，可以举出正己烷、正庚烷等脂肪族烃系、甲苯、二甲苯等芳香族烃系、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷等卤代烃系、乙醚、四氢呋喃、二异丙醚、四氢呋喃、叔丁基甲醚、1,2-二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚等醚系、乙酸乙酯、乙酸正丁酯等酯系、N,N-二甲基甲酰胺、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮等酰胺系、乙腈、丙腈等腈系、二甲基亚砜等。其中，优选水、正庚烷、甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈和二甲基亚砜。这些反应溶剂可以单独使用或组合使用。另外，本发明中也可以以无溶剂进行。
反应溶剂的用量相对于通式[2]所示的含氟烷基氯甲醇，可以使用0.01L以上，优选0.03～10L、特别优选0.05～7L。
反应时间可以在72小时以内的范围进行，根据原料基质和反应条件而不同，优选利用气相色谱法、液相色谱法、核磁共振等分析手段追踪反应的进行情况，将原料基质基本消失的时刻作为终点。
反应温度优选可以以-30～120℃的范围进行，通常优选-20～100℃、特别是更优选-10～80℃。本发明中，可以将全部试剂同时混合而使反应开始，由于为放热反应，因此，采用边冰冷边对含氟烷基氯甲醇缓慢添加碱的方法、或其相反的滴加方法从而可以维持优选的温度范围，因此，为优选的方式之一。温度过高时，体系内产生的光学活性含氟烷基环氧乙烷飞散至体系外，因此，可以边将其用冷凝器捕集边进行反应。
为了从反应结束液(包含反应结束后的杂质等的混合液)回收所得光学活性含氟烷基环氧乙烷，可以采用过滤、蒸馏、利用有机溶剂的提取等有机合成中的一般的分离方法。对于此处使用工序1中通过蒸馏操作回收光学活性含氟烷基氯甲醇而得到的物质作为本工序的起始原料的方法，杂质少、能抑制副反应，因此为优选的方式之一。作为提取时的溶剂，优选不与该环氧乙烷反应的溶剂，可以举出正庚烷、正己烷等脂肪族烃系、苯、甲苯等芳香族烃系、二氯甲烷、氯仿等卤代烃系、乙醚、叔丁基甲醚等醚系、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯等酯系溶剂等。这样的分离方法中，反应后，根据需要利用过滤去除固体成分后将反应液直接蒸馏从而取出目标物的作业是简便的，工业上是理想的。
[工序3]
接着，对工序3进行说明。本发明中，通过经过工序1～工序2，可以得到作为目标化合物的光学活性含氟烷基环氧乙烷，本工序中，通过将该环氧乙烷水解从而开环，可以简便地衍生为作为光学活性化合物的下述式[4]：
[式中，*表示不对称原子。Rf与式[1]相同。]
所示的光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇。
该环氧乙烷通过水解而开环时，加入无机碱、有机碱、无机酸、有机酸，从而也可以使反应加速。作为无机碱，可以举出碱金属氢化物、碱土金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、碱土金属碳酸氢盐、氨基碱金属或碱金属等。
其中，优选碱金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱土金属碳酸氢盐，特别优选碱金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐或碱金属碳酸氢盐。
具体而言，可以举出氢化锂、氢化钠、氢化钾、氢化铷、氢化铯、氢化镁、氢化钙、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铷、氢氧化铯、氢氧化镁、氢氧化钙、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铷、碳酸铯、碳酸镁、碳酸钙、碳酸氢锂、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铷、碳酸氢铯、碳酸氢镁、碳酸氢钙、氨基钠、氨基钾、钠、钾，其中，优选氢化锂、氢化钠、氢化钾、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铷、氢氧化铯、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铷、碳酸铯、碳酸钙、碳酸钙、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢铷、碳酸氢铯、碳酸氢镁、碳酸氢钙，特别优选氢化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸钙、碳酸氢钾、碳酸氢铯。
它们可以单独使用1种或组合2种以上使用。
作为有机碱，可以举出吡啶类、三烷基胺类、N,N-二烷基苯胺类等，其中，优选吡啶类、三烷基胺类。具体而言，可以举出吡啶、甲基吡啶、乙基吡啶、二甲基吡啶(卢剔啶)、甲基乙基吡啶、二乙基吡啶、三甲基吡啶(可力丁)、二甲基氨基吡啶、2,2’-联吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三甲基胺、三乙基胺、三丙基胺和三丁基胺、二异丙基乙基胺、N,N-二甲基苯胺、或N,N-二乙基苯胺等。其中，优选吡啶、三甲基胺、三乙基胺、三丁基胺。它们可以单独使用1种或组合2种以上使用。另外，也可以将这些有机碱和无机碱的2种以上组合而使用。
对于酸，作为无机酸，可以举出盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、硼酸等。作为有机酸，可以举出乙酸、柠檬酸、甲酸、乳酸、草酸、酒石酸、甲磺酸等。其中，从获得的容易性、成本方面、操作容易性的方面出发，优选盐酸、硫酸，它们可以单独使用1种或组合2种以上使用。
碱、酸的用量相对于通式[3]所示的含氟烷基环氧乙烷，可以使用0.01摩尔以上，优选0.02～20摩尔、特别优选0.03～10摩尔。
水的用量相对于通式[3]所示的含氟烷基环氧乙烷，可以使用0.5摩尔以上，优选0.7摩尔以上、特别优选0.9摩尔以上。
作为反应溶剂，除水之外，可以举出正己烷、正庚烷等脂肪族烃系、甲苯、二甲苯等芳香族烃系、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等卤代烃系、乙醚、四氢呋喃、二异丙醚、四氢呋喃、叔丁基甲醚等醚系、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸正丁酯等酯系、N,N-二甲基甲酰胺、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮等酰胺系、乙腈、丙腈等腈系、二甲基亚砜等。其中，优选正庚烷、甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、水、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、四氢呋喃、叔丁基甲醚和二甲基亚砜。这些反应溶剂可以单独使用或组合使用。另外，本发明中也可以以无溶剂进行。
反应溶剂的用量相对于通式[3]所示的含氟烷基环氧乙烷1摩尔，可以使用0.01L以上，优选0.03～10L、特别优选0.05～7L。
反应时间可以以72小时以内的范围进行，根据原料基质和反应条件而不同，因此，优选利用气相色谱法、液相色谱法、核磁共振等分析手段追踪反应的进行情况，将原料基质基本消失的时刻作为终点。
反应温度优选可以以-30～150℃的范围进行，通常优选0～120℃、特别是更优选10～100℃。本发明中，可以将全部试剂同时混合而使反应开始，与工序2同样地，该反应也是放热反应，因此，采用将内温保持为适当的温度、并对含氟烷基环氧乙烷缓慢添加酸、碱的方法、或其相反的滴加方法，可以维持优选的温度范围，因此，是优选的方式之一。
为了从反应结束液(包含反应结束后的杂质等的混合液)回收所得光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇，可以采用过滤、蒸馏、利用有机溶剂的提取等有机合成中的一般的分离方法。提取时，作为溶剂，可以举出正庚烷、正己烷等脂肪族烃系、苯、甲苯等芳香族烃系、二氯甲烷、氯仿等卤代烃系、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙醚、叔丁基甲醚、环戊基甲醚等醚系、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯等酯系、正丁醇、正戊醇、正己醇等不与水混和的醇系溶剂等，其中，优选四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、乙醚、叔丁基甲醚、环戊基甲醚、正丁醇、正戊醇。通过减压蒸馏将目标物从提取液、反应结束液进行馏出的情况下，馏分中混入水时，将得到的馏分利用迪安-斯达克榻装置等进行脱水，得到高纯度的目标物的方法是该工序的优选方案之一。
然而，进行本工序时，可以连续地实施工序3而不进行工序2的后处理。具体而言，工序2结束后，在工序2的反应结束液中加入工序3所需的试剂而不使所得含氟烷基环氧乙烷分离，从而可以得到光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇。
另外，实施工序2时，除工序2的目标物即光学活性含氟烷基环氧乙烷之外，有时在反应体系内生成该氧化物水解而成的化合物、即、光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇(本工序的目标物)。
此时，为了制造本工序中的光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇的情况下，工序2中制造光学活性含氟烷基环氧乙烷与光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇的混合物，接着进行纯化操作，从而可以制造工序3的目标化合物即光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇(例如参照后述的实施例8)。
以该纯化操作分离的光学活性含氟烷基环氧乙烷也可以作为工序3中的起始原料另行再利用。这是本发明中的优选实施方式之一。
用于从含氟烷基氯甲醇直接得到光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇的最优选的方案，为在水存在下，一次性使用工序2和工序3中共通的有机碱、无机碱的试剂的方案，特别通过使用无机碱，可以有效地衍生为光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇。对于后处理，同样地进行工序3中记载的处理，从而也可以制造高纯度的光学活性含氟烷基-1,2-乙二醇。
本发明的方法通过以含氟烷基氯甲基酮为起始原料，应用适合的反应条件，从而可以大量地制造作为光学活性含氟烷基环氧乙烷的前体的便利性高的光学活性含氟烷基氯甲醇，接着，通过使该醇与碱作用，可以简便地衍生为光学活性含氟烷基环氧乙烷。作为工业上制造方法的优势性高。
需要说明的是，作为实用上能采用的光学纯度，可以以40％ee以上、特别优选以80％ee以上得到。本化合物的反应性高，作为合成光学活性含氟有机化合物的中间体是非常有用的。另外，化合物的光学纯度也可以在利用柱色谱法的光学拆分、重结晶法等中得到提高。
[实施例]
接着，示出实施例，但本发明不受以下的实施例的限定。
实施例1
[微生物对3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体的反应性调查(筛选)结果]
制备由蒸馏水1000ml、聚蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g的组成构成的液体培养基，向试管(φ1.6cm×15cm)中每5ml地分注，接种下述表3所示的各微生物，以28℃、160rpm进行48～72小时的培养。培养结束后，添加90wt％的3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体使其成为1.0％wt/v，添加葡萄糖使其成为0.1mol/L，以28℃、160rpm进行48小时还原反应。反应后的转化率的测定通过19F-NMR的内标法进行(以下，全部化合物中相同)，对于1-氯-3,3-二氟异丙醇的光学纯度的测定，在反应液中加入乙酸乙酯并混合，将该醇提取至有机层，通过利用后述的手性柱的气相色谱法进行分析(以下，相同)。将每个使用的微生物的转化率和光学纯度的测定结果示于下述表3。
[表3]
如此，利用使用微生物的不对称还原反应，可以得到光学活性1-氯-3,3-二氟异丙醇。对于本筛选中使用的菌株，高者为68.8％ee的光学纯度，但通过扩展筛选的幅度，可以发现提供更高的光学纯度的菌株。另外，通过利用显示出高的立体选择性的菌株纯化酶，也可以将提供高的光学纯度的酶分离。
[光学活性1-氯-3,3-二氟异丙醇的光学纯度的分析条件]
使1-氯-3,3-二氟异丙醇与无水乙酸1.2当量、吡啶1.2当量反应，衍生为乙酰氧基体，作为分析试样。气相色谱法的柱使用Agilent Technologies Ltd.制的Cyclosil-B(0.25mm×30m×0.25μm)，根据在载气为氮气、压力为163kPa、柱温为60～90℃(1℃/分钟)～150℃(10℃/分钟)、气化室·检测器(FID)温度为230℃的分析条件下得到的峰的面积算出光学纯度。各对映体的保留时间如下：R体为15.7分钟、S体为16.4分钟。立体构象如下确定：使光学活性1-氯-3,3-二氟异丙醇与48％NaOH作用，衍生为光学活性2,2-二氟环氧乙烷后，使20％H2SO4作用，衍生为公知的化合物的光学活性3,3-二氟-1,2-丙二醇，从而确定(如后述，光学纯度得以维持)。
[比较例1]
[微生物对3-溴-1,1,1-三氟-2-丙酮水合体的反应性调查(筛选)]
利用与实施例1同样的方法，利用微生物实施3-溴-1,1,1-三氟-2-丙酮水合体的还原反应，表4中记载结果。未生成目标光学活性1-溴-3,3,3-三氟异丙醇，对反应后的化合物进行鉴定，结果为1,1,1-三氟-3-羟基-2-丙酮和3,3,3-三氟-1,2-丙二醇。本化合物的溴原子在水中脱离，因此可知，作为利用生物体催化剂的基质，无法采用。
需要说明的是，后述使用以化学的方式制备的光学活性体的光学纯度的测定方法。
[表4]
[光学活性1-溴-3,3,3-三氟异丙醇的光学纯度的分析条件]
使1-溴-3,3,3-三氟异丙醇与无水三氟乙酸1.2当量、吡啶1.2当量反应，衍生为三氟乙酰氧基体，作为分析试样。气相色谱法的柱使用BGB Analytik AG公司制的BGB-174(0.25mm×30m×0.25μm)，根据在载气为氮气、压力为163kPa、柱温为60～90℃(1℃/分钟)～150℃(10℃/分钟)、气化室·检测器(FID)温度为230℃的分析条件下得到的峰的面积算出光学纯度。各对映体的保留时间如下：R体为12.9分钟、S体为13.2分钟。
实施例2
[来自粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)NBRC 0462菌株的酶的粗纯化]
对于粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)NBRC 0462菌株，用由蒸馏水1000ml、聚蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g的组成构成的试管(φ1.6cm×15cm)中制备的5ml的液体培养基进行预培养。将该培养液投入至容量5L的培养槽(B.E.MARUBISHI CO.,LTD.制、MDN型5L(S))中制备的由蒸馏水2500ml、葡萄糖25g、蛋白胨12.5g、酵母提取物7.5g、麦芽提取物7.5g、磷酸二氢钾7.5g、磷酸氢二钾5.0g的组成构成的高压蒸汽灭菌后的液体培养基。以温度30℃、通气1.25L/分钟、搅拌叶片转速400rpm进行培养，培养中的pH如下：使用42.5％磷酸和14％氨水，调整为pH6.5。将培养后的培养液回收，使用500ml容积的沉淀管，通过离心分离将菌体回收。在回收的湿菌体中加入0.2M的pH7.0的磷酸盐缓冲液100ml，制备悬浮液。使用珠式细胞裂解装置(BioSpec公司制、打浆机)，将悬浮液中的细胞裂解，除去玻璃珠后，进行20000×g、30分钟的离心分离，制备无细胞提取液。在该无细胞提取液1ml中添加3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体1％wt/v、2M葡萄糖250μL，以30℃进行24小时还原反应。反应后的转化率为100％、光学纯度为62.0％ee(R)。
实施例3
[市售的醇脱氢酶对3-氯-1,1,1-三氟-2-丙酮水合体和3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体的反应性的调查(筛选)结果]
在1ml的200mM磷酸钾缓冲液(pH6.5、206mM甲酸钠、222mM葡萄糖、5mM NAD+、(NAD+:烟酰胺腺嘌呤双核苷酸氧化型、以下相同)5mM NADP+(NAD+：烟酰胺腺嘌呤双核苷酸磷酸氧化型、以下相同)中添加3-氯-1,1,1-三氟-2-丙酮水合体或3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体，使其成为1重量％，分别加入下述表5和表6的“酶名称”所示的株式会社Daicel的Chiralscreen(注册商标)OH(醇脱氢酶)5mg，边用磁力搅拌器进行搅拌边以25℃反应2天。对于1-氯-3,3,3-三氟异丙醇的光学纯度，用乙酸乙酯提取，通过利用后述的手性柱的气相色谱法来测定。测定各反应后的转化率和光学纯度，下述表5和表6中分别示出。对于光学活性1-氯-3,3,3-三氟异丙醇的光学纯度，衍生为光学活性2-三氟甲基环氧乙烷，以后述的分析条件进行分析。
[表5]
[表6]
如此，使用纯化酶的情况下也可以得到目标光学活性体，通过扩展筛选的幅度，还可以发现提供更高的光学纯度的纯化酶。
[光学活性1-氯-3,3,3-三氟异丙醇的光学纯度的分析条件]
使1-氯-3,3,3-三氟异丙醇与无水三氟乙酸1.2当量、吡啶1.2当量反应，衍生为三氟乙酰氧基体，作为分析试样。气相色谱法的柱使用BGB Analytik AG公司制的BGB-174(0.25mm×30m×0.25μm)，根据以载气为氮气、压力为163kPa、柱温为60～90℃(1℃/分钟)～150℃(10℃/分钟)、气化室·检测器(FID)温度为230℃的分析条件得到的峰的面积算出光学纯度。各对映体的保留时间如下：R体为13.4分钟、S体为13.7分钟。
[比较例2]
利用与实施例3同样的方法，评价下述表7和表8的“酶名称”所示的株式会社Daicel的Chiralscreen(注册商标)OH(醇脱氢酶)对3-氯-1,1,1-三氟-2-丙酮水合体或3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体的反应性，下述表7和表8中示出各结果。
[表7]
[表8]
实施例4
[利用表达醇脱氢酶的基因重组大肠杆菌的(R)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的制造]
作为预培养的培养基，制备由蒸馏水1000ml、聚蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g的组成构成的液体培养基，向试管(φ1.6cm×15cm)中每5ml地分注，以121℃进行15分钟的蒸汽灭菌。在该液体培养基中，用接种环、以无菌的方式接种大量表达株式会社Daicel的Chiralscreen(注册商标)OH E039的醇脱氢酶的基因重组大肠杆菌，以30℃、160rpm进行一晩培养，得到波长600nm下的光学浓度(OD600)8.2的预培养液。
作为正式培养的培养基，在蒸馏水2500ml中制备由酵母提取物、谷氨酸钠、葡萄糖、乳糖、无机盐类、消泡剂构成的液体培养基，混入至容量5L的培养槽(B.E.MARUBISHICO.,LTD.制、MDN型5L(S))，以121℃进行30分钟的蒸汽灭菌。在该培养槽中，以无菌的方式接种预培养液5ml，边以30℃、通气0.5vvm进行搅拌边培养40小时，制备光学浓度(OD600)24的悬浮液。对于培养时的pH，使用20％碳酸钠水溶液、42.5％磷酸水溶液，调整为pH7.0附近。培养结束后，将通气变更为0vvm，对于培养液，添加80％wt/wt的3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体6.25％wt/v(156.25g、以含量计为125.0g、853mmol)，边利用甲酸脱氢酶进行辅酶的再生边以20℃、pH6.2进行还原反应24小时。反应后的转化率为96％、光学纯度为83.0％ee(R)。
通过减压蒸馏(内压19.2kPa、蒸汽温度57～61℃)，从反应后的培养液回收包含80g(613mmol)的(R)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的水溶液443g。收率成为72％。
实施例5
[(S)-2-二氟甲基环氧乙烷的制造]
从实施例4中回收的(R)-1-氯-3,3-二氟异丙醇水溶液取出一部分(166g)水溶液，使得该醇的含量成为30g(230mmol)，边进行冰冷边滴加48％氢氧化钠水溶液1.0当量。滴加通过边确认内部的温度边维持0～3℃而进行。滴加后，以1℃搅拌120分钟，实施闭环反应。反应后，通过蒸馏，以蒸汽温度50～70℃(大气压)进行馏出，回收(S)-2-二氟甲基环氧乙烷17g(182mmol)，在后述的分析条件下分析光学纯度，结果为83.1％ee。收率成为79％。
[光学活性2-二氟甲基环氧乙烷的光学纯度的分析条件]
对于2-二氟甲基环氧乙烷，添加2-萘硫醇1.1当量、三乙基胺1.1当量，衍生为硫化物，作为分析试样。高效液相色谱法的柱使用株式会社Daicel制的CHIRALCEL OD-H(4.6mm×25cm、粒径5μm)，根据以流动相为己烷/IPA＝95/5、流速0.7ml、柱温15℃、检测波长230nm得到的峰的面积算出光学纯度。各对映体的保留时间如下：R体为24.2分钟、S体为27.4分钟。
实施例6
[(S)-3,3-二氟-1,2-丙二醇的制造]
在实施例5中得到的(S)-2-二氟甲基环氧乙烷17g(182mmol)中添加20％硫酸水溶液0.2当量，以50℃进行8小时搅拌。反应后，用氢氧化钠将溶液的pH调整为5，通过过滤去除无机盐后，利用减压蒸馏(内压1.5kPa、蒸汽温度80～81℃)进行馏出，测定所得馏分的水分，结果为4.2％。向其中加入甲苯20ml，使用迪安-斯达克榻装置，进行回流脱水5小时。釜残中，产物和甲苯发生二层分离，因此，通过使甲苯分离，得到17g(152mmol)的(S)-3,3-二氟-1,2-丙二醇。另外，在后述的分析条件下分析光学纯度，结果为83.1％ee。水分值为0.3％、收率成为84％。
[光学活性3,3-二氟-1,2-丙二醇的光学纯度的分析条件]
使3,3-二氟-1,2-丙二醇与无水乙酸2.5当量、吡啶2.5当量反应，衍生为二乙酰氧基体，作为分析试样。气相色谱法的柱使用Agilent Technologies Ltd.制的Cyclosil-B(0.25mm×30m×0.25μm)，根据以载气为氮气、压力为163kPa、柱温为50℃(5分钟)、50～150℃(5℃/分钟)、150℃(15分钟)、气化室·检测器(FID)温度为230℃的分析条件得到的峰的面积算出光学纯度。各对映体的保留时间如下：R体为16.3分钟、S体为17.2分钟。立体构象基于公知的信息而确定。
实施例7
[(S)-3,3-二氟-1,2-丙二醇的制造]
从包含实施例4中制备的(R)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的水溶液取出一部分(139g)水溶液，使得该醇的含量成为25g(192mmol)，边冰冷边滴加48％氢氧化钠水溶液1.0当量。滴加通过边确认内部的温度边维持0～3℃来进行。滴加后，以1℃搅拌120分钟，之后，用30mL的2-甲基四氢呋喃进行3次提取，从而得到包含(S)-2-二氟甲基环氧乙烷14g的2-甲基四氢呋喃溶液。在该溶液中添加20％硫酸水溶液0.2当量，以60℃进行7小时搅拌。
反应后，用氢氧化钠将溶液的pH调整为5，通过过滤去除无机盐后，进行减压蒸馏(内压1.5kPa、蒸汽温度80～81℃)，从而得到14g(125mmol)的(S)-3,3-二氟-1,2-丙二醇。另外，在前述的分析条件下分析光学纯度，结果为83.2％ee。收率成为65％。
实施例8
[(S)-3,3-二氟-1,2-丙二醇的制造]
边将包含实施例4中制备的13g(100mmol)的(R)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的水溶液(72g)冰冷，边滴加48％氢氧化钠水溶液1.5当量。滴加通过边确认内部的温度边维持0～3℃来进行。滴加后，以1℃搅拌12小时，从而产物的(S)-2-二氟甲基环氧乙烷与(S)-3,3-二氟-1,2-丙二醇的比率成为21：79。反应后，对于产物，用甲基叔丁醚进行提取，进行减压蒸馏，从而得到4g(36mmol)的(S)-3,3-二氟-1,2-丙二醇。收率成为36％。
另外，在前述分析条件下分析光学纯度，结果为83.0％ee。
实施例9
[(S)-2-三氟甲基环氧乙烷的制造]
在前述筛选条件下，使3-氯-1,1,1-三氟-2-丙酮水合体与皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)NBRC 1198菌株作用，确认了，提供61.0％ee的(R)-1-氯-3,3,3-三氟异丙醇。
制备由离子交换水2000ml、葡萄糖60g、蛋白胨30g、酵母提取物50g、磷酸二氢钾4.8g、磷酸氢二钾2.5g的组成构成的液体培养基，混入至容量5L的发酵槽(B.E.MARUBISHICO.,LTD.制、MDN型5L(S))，以121℃进行60分钟的蒸汽灭菌。在该液体培养基中，以混入有相同组成的液体培养基50ml的300ml容积的带挡板的三角烧瓶进行预培养，接种所得皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)NBRC 1198菌株(分别评价光学纯度，为61.5％ee)的2.0×109cfu/ml的悬浮液50ml，以30℃、通气1vvm、搅拌叶片转速500rpm进行24小时培养，制备5.2×109cfu/ml(以湿菌重计为92g/L)的悬浮液。此时的pH的调整使用20％wt/wt碳酸钠水溶液来进行，调整为6.5。培养结束后，停止通气，将搅拌叶片转速变更为50rpm，使在其他容器中准备的300ml的离子交换水与3-氯-1,1,1-三氟-2-丙酮125g(853mmol)、葡萄糖200g水合并溶解，使用在线的糖浓度传感器(在线生物传感器BF-410、株式会社Biott制)，以将葡萄糖浓度维持为2％的方式，以计算机程序自动添加悬浮液。利用微生物的基质的还原每隔24小时监测，144小时后，确认转化率成为86.3％，使反应结束。
为了将由反应结束后的反应液生成的(R)-1-氯-3,3,3-三氟异丙醇回收，以减压条件进行蒸馏。将馏出液588ml回收，通过19F-NMR的内标法确认了在水溶液中包含54.5g(367mmol)的(R)-1-氯-3,3,3-三氟异丙醇。通过前述分析条件测定光学纯度，为60.9％ee(R体)。收率成为43％。
边将包含该(R)-1-氯-3,3,3-三氟异丙醇的水溶液冰冷，边滴加48％氢氧化钠水溶液1.5当量。滴加通过边确认内部的温度边维持0℃来进行。滴加后，以0℃搅拌120分钟，实施闭环反应。反应后，利用2-甲基四氢呋喃进行提取，用旋转蒸发仪将有机层浓缩，从而回收生成的(S)-2-三氟甲基环氧乙烷39g，在后述的分析条件下分析光学纯度，结果为60.8％ee(S)。以含量计包含23g(206mmol)，收率成为56％。
[利用使用手性柱的高效液相色谱法的光学活性2-三氟甲基环氧乙烷的光学纯度的分析条件]
对于2-三氟甲基环氧乙烷，添加2-萘硫醇1.1当量、三乙基胺1.1当量，衍生为硫化物，作为分析试样。高效液相色谱法的柱使用株式会社Daicel制的CHIRALCEL OD-H(4.6mm×25cm、粒径5μm)，根据以流动相为己烷/IPA＝95/5、流速0.7ml、柱温15℃、检测波长230nm得到的峰的面积算出光学纯度。各对映体的保留时间如下：R体为16.1分钟、S体为18.2分钟。
实施例10
[(S)-3,3,3-三氟-1,2-丙二醇的制造]
从实施例9中制备的(S)-2-三氟甲基环氧乙烷溶液取出一部分溶液，使得该环氧乙烷的含量成为10g(89mmol)，添加20％硫酸水溶液0.2当量，衍生为(S)-3,3,3-三氟-1,2-丙二醇。对于生成的(S)-3,3,3-三氟-1,2-丙二醇，以后述的分析条件分析光学纯度，结果为61.0％ee。
[光学活性3,3,3-三氟-1,2-丙二醇的光学纯度的分析条件]
使3,3,3-三氟-1,2-丙二醇与无水乙酸2.5当量、吡啶2.5当量反应，衍生为二乙酰氧基体，作为分析试样。气相色谱法的柱使用Agilent Technologies Ltd.制的Cyclosil-B(0.25mm×30m×0.25μm)，根据以载气为氮气、压力为163kPa、柱温为50℃(5分钟)、50～150℃(5℃/分钟)、150℃(15分钟)、气化室·检测器(FID)温度为230℃的分析条件得到的峰的面积算出光学纯度。各对映体的保留时间如下：R体为11.3分钟、S体为12.2分钟。
实施例11
[利用表达醇脱氢酶的基因重组大肠杆菌的(S)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的制造]
作为预培养的培养基，制备由蒸馏水1000ml、聚蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g的组成构成的液体培养基，向试管(φ1.6cm×15cm)中每5ml地分注，以121℃进行15分钟的蒸汽灭菌。在该液体培养基中，用接种环、以无菌的方式接种大量表达株式会社Daicel的Chiralscreen(注册商标)OH E094的醇脱氢酶的基因重组大肠杆菌，以30℃、160rpm进行一晩培养，得到波长600nm下的光学浓度(OD600)6.4的预培养液。
作为正式培养的培养基，在蒸馏水2500ml中制备由酵母提取物、谷氨酸钠、葡萄糖、乳糖、无机盐类、消泡剂构成的液体培养基，混入至容量5L的培养槽(B.E.MARUBISHICO.,LTD.制、MDN型5L(S))，以121℃进行30分钟的蒸汽灭菌。在该培养槽中以无菌的方式接种预培养液5ml，边以30℃、通气0.5vvm进行搅拌边培养40小时，制备光学浓度(OD600)22的悬浮液。对于培养时的pH，使用20％碳酸钠水溶液、42.5％磷酸水溶液，调整为pH7.0附近。培养结束后，将通气变更为0vvm，对于培养液，添加90％wt/wt的3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体6.25％wt/v(156.25g、以含量计为140.6g、960mmol)，边利用葡萄糖脱氢酶进行辅酶的再生边以30℃、pH6.0进行还原反应24小时。反应后的转化率为99％、光学纯度为89.2％ee(S)。
通过减压蒸馏(内压19.2kPa、蒸汽温度57～61℃)，从反应后的培养液回收包含85g(651mmol)的(S)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的水溶液526g。收率成为68％。
实施例12
[(R)-2-二氟甲基环氧乙烷的制造]
边将实施例11中回收的85g的(S)-1-氯-3,3-二氟异丙醇水溶液(以含量计为14g、105mmol)冰冷，边滴加48％氢氧化钠水溶液1.0当量。滴加通过边确认内部的温度边维持0～3℃来进行。滴加后，以1℃搅拌120分钟，实施闭环反应。反应后，通过蒸馏，以蒸汽温度50～70℃(大气压)，回收生成的(R)-2-二氟甲基环氧乙烷49g。根据19F-NMR的内标法，产物的含量为8g(85mmol)、收率成为81％。在前述分析条件下分析光学纯度，结果为89.1％ee。
实施例13
[(R)-3,3-二氟-1,2-丙二醇的制造]
在实施例12中制备的49g的(R)-2-二氟甲基环氧乙烷水溶液(以含量计为8g、85mmol)中添加20％硫酸水溶液0.2当量，以60℃进行7小时搅拌。反应后，用氢氧化钠将溶液的pH调整为5，通过过滤去除无机盐后，进行减压蒸馏(内压1.5kPa、蒸汽温度80～81℃)，从而将46g的(R)-3,3-二氟-1,2-丙二醇溶液回收，根据19F-NMR的内标法，产物的含量为7g(66mmol)、收率成为78％。另外，在前述分析条件下分析光学纯度，结果为89.2％ee。
实施例14
[利用表达醇脱氢酶的基因重组大肠杆菌的(S)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的制造]
作为预培养的培养基，制备由蒸馏水1000ml、聚蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g的组成构成的液体培养基，向试管(φ1.6cm×15cm)中每5ml地分注，以121℃进行15分钟的蒸汽灭菌。在该液体培养基中，用接种环、以无菌的方式接种大量表达株式会社DaicelのChiralscreen(注册商标)OH E094的醇脱氢酶的基因重组大肠杆菌，以30℃、160rpm进行一晩培养，得到波长600nm下的光学浓度(OD600)7.2的预培养液。
作为正式培养的培养基，在蒸馏水2500ml中制备由酵母提取物、谷氨酸钠、葡萄糖、乳糖、无机盐类、消泡剂构成的液体培养基，混入至容量5L的培养槽(B.E.MARUBISHICO.,LTD.制、MDN型5L(S))，以121℃进行30分钟的蒸汽灭菌。在该培养槽中，以无菌的方式接种预培养液5ml，边以30℃、通气0.5vvm进行搅拌边培养40小时，制备光学浓度(OD600)23的悬浮液。对于培养时的pH，使用20％碳酸钠水溶液、42.5％磷酸水溶液，调整为pH7.0附近。培养结束后，将通气变更为0vvm，对于培养液，添加93％wt/wt的3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体6.25％wt/v(151.2g、以含量计为140.6g、960mmol)，边利用葡萄糖脱氢酶进行辅酶的再生边以30℃、pH6.0进行还原反应24小时。反应后的转化率为99％、光学纯度为90.7％ee(S)。
对于反应后的培养液，加入氯化钙二水合物(36g)后，通过减压蒸馏(内压19.2kPa、蒸汽温度57～61℃)，将包含(S)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的水溶液467g回收。在回收的水溶液中加入甲基叔丁醚450ml并搅拌，从而进行提取。进行二层分离，在水层中再次加入甲基叔丁醚450ml并提取，进行合并的有机层的浓缩，将甲基叔丁醚蒸馏去除(内压23kPa)。残渣成为包含(S)-1-氯-3,3-二氟异丙醇(74g、563mmol、90.6％ee)的、73.5wt％甲基叔丁醚溶液100g，收率为59％。
实施例15
[(R)-2-二氟甲基环氧乙烷的制造]
在室温下，在碳酸钾(8.3g、0.060mmol)与二甘醇二甲醚(25ml)的溶液中，滴加实施例14中得到的9.0g的(S)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的73.5wt％甲基叔丁醚溶液(以含量计为6.6g、0.050mmol)。滴加后，将内温保持为40℃，搅拌21小时。反应后，通过抽滤进行无机盐的除去，对于滤液，通过减压蒸馏(内压43kPa、蒸汽温度47℃)，以收率78％得到(R)-2-二氟甲基环氧乙烷7.1g(51.4wt％、0.039mol)。在前述分析条件下分析光学纯度，结果为90.6％ee。
实施例16
[(R)-3,3-二氟-1,2-丙二醇的制造]
在室温下，在48wt％的碳酸钾水溶液(37.5g、0.13mmol)中滴加实施例14中得到的17.7g的(S)-1-氯-3,3-二氟异丙醇的73.5wt％甲基叔丁醚溶液(以含量计为13.0g、0.10mmol)。直接在60℃的浴中进行5小时反应，从而转化率成为99％。反应后，在冰冷下进行冷却后进行抽滤，进行无机盐的除去。将滤液用THF20ml进行提取，经分离的水层进一步用THF20ml提取。总计进行3次提取，对于合并的有机层，通过减压蒸馏(内压3.0kPa、蒸汽温度87℃)，以收率88％得到(R)-3,3-二氟-1,2-丙二醇9.9g、0.088mol。用气相色谱法测定纯度时，为99.3％。在前述分析条件下分析光学纯度，结果为90.6％ee。
[参考例1]
[使用化学催化剂的3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体的还原反应]
在氩气气氛下，在20mL的高压釜中投入钌络合物(0.008mmol、基质/催化剂比700)、甲酸钾(0.967g、11.5mmol)、溴化四丁基铵(TBAB)(0.181g、0.56mmol)、水(0.56mL)、甲酸(0.63mL、16.7mmol、相对于使用酮为0.3当量)和3-氯-1,1-二氟-2-丙酮水合体(5.6mmol)。将容器密闭，以30℃搅拌21小时。将每个使用的钌络合物的转化率和光学纯度的测定结果示于下述表9。
[表9]
(上述式中，从左起表示RuCl[(S,S)-Tsdpen](均三甲苯)([(S,S)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺]氯化(均三甲苯)钌)、RuCl[(S,S)-Tsdpen](对甲基异丙基苯)([(S,S)-N-对甲苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺]氯化(对甲基异丙基苯)钌)、RuCl[(S,S)-Fsdpen](对甲基异丙基苯)([(S,S)-N-五氟苯磺酰基-1,2-二苯基乙二胺]氯化(对甲基异丙基苯)钌)、(S,S)-Ts-DENEB(氯化[(S,S)-N-[2-[2-(4-甲基苄氧基)乙基]氨基-1,2-二苯乙基]-对甲苯基磺酰胺]钌)的结构。需要说明的是，Ph表示苯基，Ts表示对甲苯磺酰基。)
如此，使用化学催化剂的不对称还原反应中，1-氯-3,3-二氟异丙醇的光学纯度成为低的结果。
产业上的可利用性
作为本发明的制造方法的对象的光学活性含氟烷基环氧乙烷可以作为医药农药中间体利用。

Claims (17)

1.一种式[2]所示的光学活性含氟烷基氯甲醇的制造方法，其包括如下工序：使具有不对称还原式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮的活性的微生物或具有该活性的酶与该式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮作用，
式[1]中，Rf表示具有至少1个以上氟原子的碳数1～6的直链或支链的氟烷基，
式[2]中，*表示不对称原子，Rf与式[1]相同。
2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，式[1]所示的含氟烷基氯甲基酮中的Rf为三氟甲基(CF3)或二氟甲基(CF2H)。
3.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，所述微生物为选自由弯曲隐球酵母(Cryptococcus curvatus)、粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)、戴尔凯氏有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、可可假丝酵母(Candida cacaoi)、胶红酵母(Rhodotorulamucilaginosa)、约氏掷孢酵母(Sporidibolus johnsonii)和皮状丝孢酵母(Trichosporoncutaneum)组成的组中的至少1种。
4.根据权利要求3所述的制造方法，其特征在于，所述微生物为具有下述所示的保藏编号的微生物，
5.根据权利要求1或2所述的制造方法，其特征在于，所述酶为醇脱氢酶或羰基还原酶。
6.根据权利要求5所述的制造方法，其特征在于，醇脱氢酶或羰基还原酶为银耳科、酵母科、红酵母属、掷孢酵母属、丝孢酵母科的微生物、该处理物、该培养液和/或由该微生物得到的酶。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的制造方法，其特征在于，所述反应中的温度即反应温度为5～60℃。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的制造方法，其特征在于，所述反应中的pH即反应时的pH为4.0～8.0的范围。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的制造方法，其包括如下工序：将所述反应结束后得到的含有光学活性含氟醇和杂质的混合液进行蒸馏，从而从该混合液分离杂质，将光学活性含氟醇纯化。
10.一种式[3]所示的光学活性含氟烷基环氧乙烷的制造方法，其特征在于，利用权利要求1至9中任一项所述的方法制造式[2]所示的光学活性含氟烷基氯甲醇，接着使该醇与碱作用，
式[3]中，*表示不对称原子，Rf与权利要求1中的式[1]相同。
11.根据权利要求10所述的制造方法，其中，碱为选自由碱金属氢化物、碱土金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐和碱土金属碳酸氢盐组成的组中的至少一种。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的制造方法，其还包括如下工序：将所述光学活性含氟烷基环氧乙烷水解，从而衍生为式[4]所示的含氟烷基-1,2-乙二醇，
式[4]中，*表示不对称原子，Rf与权利要求1中的式[1]相同。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，水解通过使酸或碱作用来进行。
14.根据权利要求13所述的制造方法，其中，衍生为含氟烷基-1,2-乙二醇的工序中，在使用的碱为选自由碱金属氢化物、碱土金属氢化物、碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐和碱土金属碳酸氢盐组成的组中的至少一种碱性化合物的存在下进行。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的制造方法，其中，将所述反应中得到的光学活性含氟烷基环氧乙烷直接水解而不进行分离来进行衍生为含氟烷基-1,2-乙二醇的工序。
16.一种下式所示的光学活性1-氯-3,3-二氟异丙醇，
式中，*表示不对称原子。
17.一种下式所示的光学活性2-二氟甲基环氧乙烷，
式中，*表示不对称原子。
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