JP6457841B2 - キラル−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 - Google Patents
キラル−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6457841B2 JP6457841B2 JP2015041696A JP2015041696A JP6457841B2 JP 6457841 B2 JP6457841 B2 JP 6457841B2 JP 2015041696 A JP2015041696 A JP 2015041696A JP 2015041696 A JP2015041696 A JP 2015041696A JP 6457841 B2 JP6457841 B2 JP 6457841B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- propanol
- difluoro
- reaction
- enzyme
- difluoroacetone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 title description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 56
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 56
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 42
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- XHILZHAQBOLGFD-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluoropropan-2-one Chemical compound CC(=O)C(F)F XHILZHAQBOLGFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 16
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 15
- 241001099341 Ogataea polymorpha Species 0.000 claims description 14
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 9
- AKVKBTWZKYWPNV-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluoropropan-2-ol Chemical compound CC(O)C(F)F AKVKBTWZKYWPNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 47
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 27
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 20
- FHUDAMLDXFJHJE-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trifluoropropan-2-one Chemical compound CC(=O)C(F)(F)F FHUDAMLDXFJHJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 11
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 8
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 6
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 6
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 6
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 102000005751 Alcohol Oxidoreductases Human genes 0.000 description 5
- 108010031132 Alcohol Oxidoreductases Proteins 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 5
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- AKVKBTWZKYWPNV-UWTATZPHSA-N (2r)-1,1-difluoropropan-2-ol Chemical compound C[C@@H](O)C(F)F AKVKBTWZKYWPNV-UWTATZPHSA-N 0.000 description 4
- AKVKBTWZKYWPNV-REOHCLBHSA-N (2s)-1,1-difluoropropan-2-ol Chemical compound C[C@H](O)C(F)F AKVKBTWZKYWPNV-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 244000286779 Hansenula anomala Species 0.000 description 4
- 235000014683 Hansenula anomala Nutrition 0.000 description 4
- 241001489174 Ogataea minuta Species 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 4
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 4
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 4
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 235000019000 fluorine Nutrition 0.000 description 3
- -1 glutamic acid Organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- GILIYJDBJZWGBG-REOHCLBHSA-N (2s)-1,1,1-trifluoropropan-2-ol Chemical compound C[C@H](O)C(F)(F)F GILIYJDBJZWGBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- GILIYJDBJZWGBG-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trifluoropropan-2-ol Chemical compound CC(O)C(F)(F)F GILIYJDBJZWGBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001563619 Ogataea parapolymorpha Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235033 Zygosaccharomyces rouxii Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N borane Chemical compound B UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 125000001028 difluoromethyl group Chemical group [H]C(F)(F)* 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 2
- 125000004216 fluoromethyl group Chemical group [H]C([H])(F)* 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000009834 vaporization Methods 0.000 description 2
- 230000008016 vaporization Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HKIPCXRNASWFRU-UHFFFAOYSA-N 1,3-difluoropropan-2-one Chemical compound FCC(=O)CF HKIPCXRNASWFRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEJUGLKDZJDVFY-UHFFFAOYSA-N 9-borabicyclo[3.3.1]nonane Substances C1CCC2CCCC1B2 FEJUGLKDZJDVFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 description 1
- 241000222157 Candida viswanathii Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000580885 Cutaneotrichosporon curvatus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 241001123229 Debaryomyces maramus Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 241001661539 Kregervanrija fluxuum Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000235048 Meyerozyma guilliermondii Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000222051 Papiliotrema laurentii Species 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241000191440 Priceomyces haplophilus Species 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 241000223252 Rhodotorula Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 244000253911 Saccharomyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000018368 Saccharomyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 239000004280 Sodium formate Substances 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241001193070 Wickerhamomyces subpelliculosus Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000235029 Zygosaccharomyces bailii Species 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000002358 autolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229910000085 borane Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940055022 candida parapsilosis Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- PSEHHVRCDVOTID-UHFFFAOYSA-N chloro-bis(4,6,6-trimethyl-3-bicyclo[3.1.1]heptanyl)borane Chemical compound CC1C(C2(C)C)CC2CC1B(Cl)C(C1C)CC2C(C)(C)C1C2 PSEHHVRCDVOTID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- 238000003028 enzyme activity measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940031154 kluyveromyces marxianus Drugs 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M sodium formate Chemical compound [Na+].[O-]C=O HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019254 sodium formate Nutrition 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C19/00—Acyclic saturated compounds containing halogen atoms
- C07C19/08—Acyclic saturated compounds containing halogen atoms containing fluorine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C31/00—Saturated compounds having hydroxy or O-metal groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C31/02—Monohydroxylic acyclic alcohols
- C07C31/10—Monohydroxylic acyclic alcohols containing three carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C31/00—Saturated compounds having hydroxy or O-metal groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C31/34—Halogenated alcohols
- C07C31/38—Halogenated alcohols containing only fluorine as halogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/002—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by oxidation/reduction reactions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
下記式[1]:
で表されるキラル−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールの製造方法。
前記微生物が、キャンディダ・グイリエルモンディ(Candida guilliermondii)、キャンディダ・パラプシロシス(Candida parapsilosis)、キャンディダ・ビニ(Candida vini)、キャンディダ・ビスワナシィ(Candida viswanathii)、クリプトコッカス・ラウレンティ(Cryptococcus laurentii)、クリプトコッカス・カルバタス(Cryptococcus curvatus)、デバリョマイセス・マラムス(Debaryomyces maramus)、クルイベロマイセス・マーキシアヌス(Kluyveromyces marxianus)、オガタエア・ポリモルファ(Ogataea polymorpha)、ピキア・アノマラ(Pichia anomala)、ピキア・ファリノーサ(Pichia farinosa)、ピキア・ハプロフィラ(Pichia haplophila)、ピキア・ミヌタ(Pichia minuta)、ロドトルラ・ムシラギノーサ(Rhodotorula mucilaginosa)、ジゴサッカロマイセス・バイリィ(Zygosaccharomyces bailii)、トルラスポーラ・デルブルエキィ(Torulaspora delbrueckii)、ウィッカーハモマイセス・サブペリクロサ(Wickerhamomyces subpelliculosa)、およびジゴサッカロマイセス・ロウキシィ(Zygosaccharomyces rouxii)からなる群より選ばれる少なくとも1種である、発明1に記載の製造方法。
前記微生物が、下記表に示す受託番号の微生物であることを特徴とする、発明2に記載の製造方法。
前記微生物を、微生物菌体またはその細胞抽出物として作用させることを特徴とする、発明1乃至3の何れかに記載の製造方法。
前記酵素が、オガタエア・ポリモルファ(Ogataea polymorpha)、オガタエア・パラポリモルファ(Ogataea parapolymorpha)、ピキア・アノマラ(Pichia anomala)、またはピキア・ミヌタ(Pichia minuta)由来の精製酵素であることを特徴とする、発明1に記載の製造方法。
前記オガタエア・ポリモルファ(Ogataea polymorpha)が、オガタエア・ポリモルファ(Ogataea polymorpha)NBRC0799菌株である、発明5に記載の製造方法。
前記作用させる際の温度(反応温度)が、5℃〜60℃であることを特徴とする、発明1乃至6の何れかに記載の製造方法。
前記作用させる際のpH(反応時におけるpH)が、4.0〜8.0の範囲であることを特徴とする、発明1乃至7の何れかに記載の製造方法。
前記作用させた後(反応終了後)に得られる1,1−ジフルオロ−2−プロパノールおよび不純物を含む混合液(反応終了液)を蒸留することにより、該混合液から不純物を分離し、1,1−ジフルオロ−2−プロパノールを精製する工程を含む、発明1乃至8の何れかに記載の製造方法。
次に実施例を示すが、本発明は以下の実施例によって限定されるものではない。
蒸留水1000ml、ポリペプトン10g、酵母エキス5g、塩化ナトリウム10gの組成からなる液体培地を調製し、試験管(φ1.8cm×18cm)に5mlずつ分注し、下記表Aに示す各微生物を接種し、28℃、160spmで24時間の培養を行った。培養終了後、1,1−ジフルオロアセトンを1%wt/vとなるように添加し、28℃、160rpmで還元反応を24時間行った。反応後の変換率の測定は、19F−NMRの内部標準法により行い、光学純度の測定は、反応液に酢酸エチルを加えて混合し、1,1−ジフルオロ−2−プロパノールを有機層に抽出し、後述するキラルカラムを用いたガスクロマトグラフィー法での分析により行った。用いた微生物ごとに、変換率及び光学純度の測定結果をそれぞれ下記表Aに示した。(変換率及び光学純度の測定方法は以下同)
酢酸エチルに抽出された1,1−ジフルオロアセトンに対して、無水酢酸1.2当量、ピリジン1.2等量を反応させ、アセトキシ体に誘導し、分析試料とした。ガスクロマトグラフィーのカラムにはアジレント・テクノロジー社製のCyclosil−B(0.25mm×30m×0.25μm)を用い、キャリアガスは窒素、圧力は100kPa、カラム温度は60〜90℃(1℃/min)〜150℃(10℃/min)、気化室・検出器(FID)温度は230℃の分析条件で得られるピークの面積により光学純度を算出した。1,1−ジフルオロ−2−プロパノールのそれぞれのエナンチオマーの保持時間は、S体が4.6min、R体が5.3minであった。立体配置の決定は(-)-モッシャー酸クロリドを用いた新モッシャー法により決定した(1H−NMR化学シフト:[S−MTPAエステル]CF2H 6.06、H 5.42、CH3 1.44、[R−MTPAエステル]CF2H 6.18、H 5.44、CH3 1.36)。
前培養の培地として、蒸留水1000ml、ポリペプトン10g、酵母エキス5g、塩化ナトリウム10gの組成からなる液体培地を調製し、試験管(φ1.8cm×18cm)に5mlずつ分注し、121℃で15分間の蒸気滅菌を行った。この液体培地にOgataea polymorpha NBRC0799菌株を白金時で無菌的に接種し、28℃、160spmで16時間の培養を行い、1.4×107cfu/mlの前培養液を得た。本培養の培地として、蒸留水500ml、グルコース16.25g、酵母エキス12.5g、ポリペプトン7.5g、リン酸二水素カリウム1.2g、リン酸水素二カリウム0.625g、消泡剤(旭化成製、FC2901)0.2gの組成からなる液体培地を調製し、容量1Lの培養槽((株)エイブル製、BME01型)に張り込み、121℃で15分間の蒸気滅菌を行った。この培養槽に前培養液を無菌的に5ml接種し、28℃、通気1vvm、攪拌700rpmで18時間培養し、1.7×109cfu/ml(湿菌重として28g/L)の懸濁液を調製した。培養時のpHは20%重炭酸ナトリウム水溶液、42.5%リン酸水溶液を用いてpH6.5に調整した。培養終了後、通気を0vvmに変更し、培養液に対して1,1−ジフルオロアセトン1%wt/v、グルコースを6.25gwt/vとなるように添加し、28℃で還元反応を43時間行った。反応後の変換率は100%、光学純度は93.4%ee(S)であった。反応後の培養液から直接蒸留により(S)−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールの水溶液を9.8g回収した。この水溶液に水酸化カルシウム(無水)を加え脱水し、水分濃度2.1%の(S)−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールを4.1g得た。
実施例2で培養したOgataea polymorpha NBRC0799菌株の菌体懸濁液を500ml容の遠沈管に移液し、18,000×g、30分間の遠心分離を行い、菌体を回収した。回収した湿菌体に0.2MのpH7.0のリン酸緩衝液を15ml加え、懸濁液を調製した。ビーズ式細胞破砕装置(BioSpec社製、ビードビーター)を用いて、懸濁液中の細胞を破砕し、ガラスビースを除去後、20,000×g、30分間の遠心分離を行い、無細胞抽出液を調製した。この無細胞抽出液1mlに1,1−ジフルオロアセトンを1%wt/v、2Mグルコースを250μL添加し、28℃で還元反応を24時間行った。反応後の変換率は100%、光学純度は95.6%ee(S)であった。
Ogataea polymorpha NBRC0799菌株を、グルコース10g/L、ペプトン5g/L、酵母エキス3g/L、麦芽エキス3g/L、リン酸二水素カリウム3g/L、リン酸水素二カリウム2.0g/Lの組成からなるpH6.5の液体培地を5ml分注した試験管(φ1.4cm×18cm)を121℃で15分間蒸気滅菌した後、白金時で無菌的に接種し、30℃、300rpmで24時間の培養を行い、3.84×1010cfu/mlの前々培養液を調製した。
酵素活性は、酵素または微生物を含む168mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)にNADHを終濃度0.1mMとなるように添加し、この反応溶液に終濃度50mMとなるように1,1−ジフルオロアセトンを添加して反応を開始した(反応液1mL)。反応は30℃で行い、分光光度計(日本分光株式会社、V−630BIO)を用いてNADHの減少を340nmの吸光度でモニターした。なお、酵素活性は、1分当たり1μmolのNADHの酸化を触媒する酵素量を1U(ユニット)として定義した。
回収した菌体に10mMのリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)を菌体の5倍量加え、懸濁液を調製した。ビーズ式細胞破砕装置(安井器械株式会社、マルチビーズショッカー)を用いて、菌体を破砕し、20,000×g、10分間の遠心分離を行い、上清を無細胞抽出液として使用した。
30%飽和硫安濃度になるように硫安を無細胞抽出液に添加し、氷上で3時間撹拌した。20,000×g、30分間の遠心分離を行い、上清を30%飽和硫安画分として次の精製過程に使用した。
30%飽和硫安溶液で平衡化した60mlのPhenyl−Toyopearl(東ソー株式会社、TOYOPEARL(登録商標) Phenyl−650M)カラムに上記の30%飽和硫安上清画分を供した。300mMの硫安を含む、10mMリン酸緩衝液(pH7.0)300mlで洗浄し10mMリン酸ナトリウム緩衝液で溶出した。得られた活性画分をプールしPhenyl−Toyopearl活性画分として、次の精製ステップに使用した。
上記、Phenyl−Toyopearl活性画分を10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)で平衡化した30mlのQ−sepharose(GE Healthcare UK Ltd.、Q−sepharose Fast Flow)カラムに供した。そして、カラムを10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)150mlで洗浄後、0〜150mMの塩化ナトリウムのリニアグラジェントにより溶出した。得られた活性画分をQ−sepharose活性画分として次の精製ステップに用いた。
Q−sepharose活性画分を10mMリン酸緩衝液(pH7.0)で平衡化した10mLのHydroxyapatite(ナカライテスク株式会社、ヒドロキシアパタイト)カラムに供した。10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)100mlで洗浄し、10mMと300mMのリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)によるリニアグラジェントにより溶出した。活性を示した画分をプールし、遠心式フィルターユニット(Merck Millipore、Amicon Ultra−15、10kDa)で濃縮し、酵素を単離した。
精製酵素は最終的に比活性29.8U/mgとなった。
Ogataea polymorpha NBRC0799菌株から精製した酵素を含む168mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)にNADHを終濃度0.1mMとなるように添加し、この反応溶液に終濃度50mMとなるように、下記表Bに示す各基質を添加して反応を開始した(反応液1mL)。30℃で反応を行い、分光光度計(日本分光株式会社、V−630BIO)を用いてNADHの減少を吸光度340nmにより測定した。
1mlの200mM リン酸カリウム緩衝液(pH6.5、206mM ギ酸ナトリウム、222mM グルコース、5mM NAD+、(NAD+:ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド酸化型、以下同じ)5mM NADP+(NAD+:ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸酸化型、以下同じ)に1,1−ジフルオロアセトンを1重量%になるように添加し、下記表Cの「酵素名」に示す株式会社ダイセルのChiralscreen(登録商標) OH(アルコール脱水素酵素)を、それぞれ5mg加えてマグネチックスターラーで攪拌しながら25℃で2日間反応させた。反応後の変換率と光学純度を測定し、下記表Cに示した。
実施例5と同様の方法で、下記表Dの「酵素名」に示す株式会社ダイセルのChiralscreen(登録商標) OH(アルコール脱水素酵素)の、1,1−ジフルオロアセトンに対する反応性を評価し、下記表Dにその結果を示した。
前培養の培地として、蒸留水1000ml、ポリペプトン10g、酵母エキス5g、塩化ナトリウム10gの組成からなる液体培地を調製し、試験管(φ1.6cm×15cm)に5mlずつ分注し、121℃で15分間の蒸気滅菌を行った。この液体培地に、株式会社ダイセルのChiralscreen(登録商標) OH E031のアルコール脱水素酵素を大量発現する遺伝子組換え大腸菌を白金時で無菌的に接種し、30℃、160spmで一晩培養を行い、波長600nmでの光学濃度(OD600)7.7の前培養液を得た。
Claims (5)
- 前記微生物を、微生物の菌体またはその細胞抽出物として作用させることを特徴とする、請求項1に記載の製造方法。
- 前記作用させる際の温度が、5℃〜60℃であることを特徴とする、請求項1又は2に記載の製造方法。
- 前記作用させる際のpHが、4.0〜8.0の範囲であることを特徴とする、請求項1乃至3の何れかに記載の製造方法。
- 前記作用させた後に得られる1,1−ジフルオロ−2−プロパノールおよび不純物を含む混合液を蒸留することにより、該混合液から不純物を分離し、1,1−ジフルオロ−2−プロパノールを精製する工程を含む、請求項1乃至4の何れかに記載の製造方法。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015041696A JP6457841B2 (ja) | 2015-03-03 | 2015-03-03 | キラル−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 |
US15/554,999 US20180105840A1 (en) | 2015-03-03 | 2016-03-02 | Process for industrial production of chiral-1,1-difluoro-2-propanol |
CN201680013189.5A CN107406861B (zh) | 2015-03-03 | 2016-03-02 | 手性-1,1-二氟-2-丙醇的工业的制造方法 |
PCT/JP2016/056325 WO2016140233A1 (ja) | 2015-03-03 | 2016-03-02 | キラル-1,1-ジフルオロ-2-プロパノールの工業的な製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015041696A JP6457841B2 (ja) | 2015-03-03 | 2015-03-03 | キラル−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016158584A JP2016158584A (ja) | 2016-09-05 |
JP6457841B2 true JP6457841B2 (ja) | 2019-01-23 |
Family
ID=56843415
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015041696A Active JP6457841B2 (ja) | 2015-03-03 | 2015-03-03 | キラル−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20180105840A1 (ja) |
JP (1) | JP6457841B2 (ja) |
CN (1) | CN107406861B (ja) |
WO (1) | WO2016140233A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110283733B (zh) * | 2019-06-20 | 2020-10-27 | 浙江工业大学 | 土星轮头酵母zjph1807及其应用 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4219976B2 (ja) * | 2005-07-08 | 2009-02-04 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 1,1,1−トリフルオロアセトンの不斉還元 |
DE102005054282A1 (de) * | 2005-11-11 | 2007-05-16 | Degussa | Verfahren zur Herstellung von überwiegend ein Enantiomer enthaltendem 1,1,1-Trifluorisopropanol |
EP2034026A4 (en) * | 2006-06-05 | 2012-01-04 | Daicel Chem | PROCESS FOR PRODUCTION OF OPTICALLY ACTIVE ALCOHOL |
JP5804719B2 (ja) * | 2010-02-15 | 2015-11-04 | 富山県 | (s)−1,1,1−トリフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 |
JP5631641B2 (ja) * | 2010-06-23 | 2014-11-26 | 富山県 | (r)−1,1,1−トリフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 |
JP5656474B2 (ja) * | 2010-06-28 | 2015-01-21 | 関東化学株式会社 | 脂肪族光学活性フルオロアルコールの製造方法 |
-
2015
- 2015-03-03 JP JP2015041696A patent/JP6457841B2/ja active Active
-
2016
- 2016-03-02 WO PCT/JP2016/056325 patent/WO2016140233A1/ja active Application Filing
- 2016-03-02 CN CN201680013189.5A patent/CN107406861B/zh active Active
- 2016-03-02 US US15/554,999 patent/US20180105840A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20180105840A1 (en) | 2018-04-19 |
WO2016140233A1 (ja) | 2016-09-09 |
JP2016158584A (ja) | 2016-09-05 |
CN107406861B (zh) | 2021-04-02 |
CN107406861A (zh) | 2017-11-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Nakamura et al. | Asymmetric Reduction of Ketones by the Acetone Powder of Geotrichum c andidum | |
JP5804719B2 (ja) | (s)−1,1,1−トリフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 | |
Li et al. | Design and application of a novel ionic liquid with the property of strengthening coenzyme regeneration for whole-cell bioreduction in an ionic liquid-distilled water medium | |
Andreu et al. | Potential of some yeast strains in the stereoselective synthesis of (R)-(−)-phenylacetylcarbinol and (S)-(+)-phenylacetylcarbinol and their reduced 1, 2-dialcohol derivatives | |
JP6823266B2 (ja) | 光学活性含フッ素アルキルエチレンオキシドの工業的な製造方法 | |
JPH0767674A (ja) | 光学活性γ−置換β−ヒドロキシ酪酸誘導体 | |
JP4272231B2 (ja) | キラルなヒドロキシアルデヒド化合物の製造方法 | |
DE60128640T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von optisch aktivem 4-Halo-3-Hydroxybutanoat | |
JP6457841B2 (ja) | キラル−1,1−ジフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 | |
JP5631641B2 (ja) | (r)−1,1,1−トリフルオロ−2−プロパノールの工業的な製造方法 | |
Fantin et al. | Stereochemical Control in Bakers' Yeast Redox Biotransformations of Aryl Methyl Ketones and Carbinols | |
JP2010532992A (ja) | 3,4−エポキシ酪酸エチルの微生物速度論的分割 | |
CN102559553B (zh) | 一株无色杆菌及其不对称催化还原碳碳双键的方法 | |
JP4744916B2 (ja) | 光学活性アルキルアルコール誘導体の単離取得方法 | |
JP7344509B2 (ja) | 光学活性フルオロアルコールおよび光学活性クロロフルオロアルコールの製造方法 | |
JP2014521325A5 (ja) | ||
JP5474280B2 (ja) | 光学活性なtrans体含窒素環状β−ヒドロキシエステルの製造方法 | |
WO2000037666A1 (fr) | Procede de production de derive (r)-2-hydroxy-1-phenoxypropane | |
JPH1094399A (ja) | 酵素を用いる光学活性アルコールの製造法 | |
WO2002000585A1 (fr) | Derive de chlorohydroxyacetone et procede de production de derive de chloropropanediol optiquement actif a partir du derive de chlorohydroxyacetone | |
KR100591082B1 (ko) | 미생물 탈라세미화에 의한 광학활성 에틸 3-히드록시-3-페닐프로피오네이트의 제조방법 | |
JP6938269B2 (ja) | 光学活性2,2−二置換−3−ヒドロキシプロピオン酸またはその塩の製造方法 | |
JP2833769B2 (ja) | 新規アルコールアシルトランスフェラーゼ及びその用途 | |
JP4270910B2 (ja) | 光学活性2−ヒドロキシ−2−トリフルオロ酢酸類の製造方法 | |
JP2010505417A (ja) | (3)−アミノ−3−アリールプロピオン酸エステルのn−非保護(r)−エステルの特異的加水分解 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20171024 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20171031 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171207 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180717 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180914 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181113 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20181114 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181211 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20181221 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6457841 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |