CN107643343A - 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 - Google Patents
一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107643343A CN107643343A CN201611263466.6A CN201611263466A CN107643343A CN 107643343 A CN107643343 A CN 107643343A CN 201611263466 A CN201611263466 A CN 201611263466A CN 107643343 A CN107643343 A CN 107643343A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yunü
- yunü decoction
- standard
- soup
- finger
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,属于中药技术领域,包括如下步骤:(1)供试样品溶液的制备;(2)混合对照品溶液的制备;(4)分别精密吸取供试样品溶液、混合对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定,分别得到供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱;(5)采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,对供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱进行数据匹配,即得标准指纹图谱。本发明玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,有效的控制了玉女煎标准颗粒剂的质量,保证了药物的疗效,使经典名方得到了更为正规的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及属于中药技术领域,具体是一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法。
背景技术
中药经典名方汤剂作为传统的中医临床用药的主要剂型,具有组方合理、疗效确切、易于吸收、起效较快等优点,深受广大患者的信赖。却因调配、携带、临时煎煮、久置容易发生霉败变质、汤液味苦和量大,以及标准难以统一,严重影响其临床疗效等缺点,不能适应现代人的生活要求。为了保持汤剂的优势,克服汤剂的种种不足,在国家科技部“重大新药创制”科技重大专项项目的大力支持下及院士、行业专家的反复探讨后,以经典名方标准汤的质量属性为评价指标,生产出与其在质量及药效基本保持一致的标准颗粒剂。
“经典名方标准颗粒研究”隶属于国家科技部“重大新药创制”科技重大专项“三重”项目,在科技部、国家中医药管理局的大力支持下及院士、行业专家的反复探讨后,以经典名方标准汤的质量属性为评价指标,生产出与其在质量及药效方面同一的标准颗粒剂。作为其子课题,玉女煎标准颗粒从药材的提取到制粒的过程中,均按照“经典名方标准颗粒研究”的要求进行。虽玉女煎标准颗粒从提取到制粒过程中,均以其基准煎为基础进行研究,但是为生产出与传统汤剂在药效、质量方面高度一致性的颗粒,缺少一种有效手段对其颗粒进行质量控制。“质量标准”的建立对加强对药品质量的控制及行政管理,保障广大百姓用药安全具有重要意义。
“经典名方标准颗粒”系指以标准汤剂的关键质量属性为评价指标,对颗粒制备过程的药材提取、浓缩、干燥等关键工艺进行研究,应用现代生产技术制备与标准汤剂的关键质量属性基本一致的颗粒。根据《经典名方标准颗粒研究专家共识—标准汤剂定义、制备、质量属性及应用》有关要求,进行玉女煎标准汤的相关考察和研究。
与指标成分含量测定的质量分析方法相比,指纹图谱能够比较全面地反映中药化学成分的种类和数量,在中药复方制剂有效成分尚未完全阐明的现状下,可实现对中药内在质量的综合评价和对其整体物质的有效控制,是目前中药及其制剂质量控制的有效手段之一。中药指纹图谱的检测方法有色谱法、光谱法、波谱法等。色谱法主要包括薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱、毛细管电泳等,其中高效液相色谱法具有高效、快速、灵敏、重现性好的特点,与紫外检测器(UV)、二甲管阵列检测器(DAD)、蒸发光散射检测器(ELSD)和质谱检测器(MS)等多种检测器联用,可用于中药中多种复杂成分的分析检测,现已成为中药指纹图谱研究的主流方法。
发明内容
有鉴于此,本发明旨在提供一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,有效的控制了玉女煎标准颗粒剂的质量,保证了药物的疗效,使经典名方得到了更为正规的质量控制。
为达到上述目的,本发明的技术方案是这样实现的:一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,包括如下步骤:
(1)供试样品溶液的制备:取玉女煎标准汤5体积份数,用水饱和正丁醇萃取,合并萃取液,用纯水洗涤,弃去水相,正丁醇相水浴蒸干,50%甲醇复溶,定容至2体积份数,离心,取上清液过微孔滤膜,即得;
(2)混合对照品溶液的制备:精密称定芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量,加50%甲醇制成每1体积份数含芒果苷0.05质量份数、β -蜕皮甾酮0.012质量份数、毛蕊花糖苷0.01质量份数的溶液,即得;
(4)分别精密吸取供试样品溶液、混合对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定,分别得到供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱;
(5)采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,对供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱进行数据匹配,即得标准指纹图谱。
所述重量份数与所述体积份数的关系为g/mL。
进一步地,所述步骤(4)的色谱条件如下:
色谱柱:Ultimate XB C18,4.6×250mm,5μm,00201-31043;
检测波长:280nmBW40;
流动相:乙腈-0.1%甲酸水;
流速:1mL/min;
进样量:20μL;
柱温:35℃
按照以下梯度洗脱条进行洗脱:
进一步地,所述标准指纹图谱包括25个共有峰:峰1、2、4、8、12、14、19、20、24来自熟地,峰2、13、22来自麦冬,峰2、8、18、20、22、 24来自牛膝,峰1-11、13、15-17、20-23、25来自知母。
进一步地,所述供试样品溶液的制备:取制备的玉女煎标准汤5mL,用水饱和正丁醇萃取5次,每次10mL,合并萃取液,用纯水洗涤2次,每次 5mL,弃去水相,正丁醇相水浴蒸干,50%甲醇复溶,定容至2mL,离心10min,取上清液过0.45μm的微孔滤膜,即得。
进一步地,所述玉女煎标准汤的制备方法:取不同产地和不同批次的按中国药典检验合格的药材或饮片,分别称取生石膏15g,熟地15g,麦冬6g,知母4.5g,牛膝4.5g,加入300mL去离子水浸泡60min,武火(220V)10min 煮沸,文火(140V)煎煮35min(煎液量约140mL),趁热倾倒,制得玉女煎标准汤。放置室温,定容至250mL,即得。
进一步地,混合对照品溶液的制备:精密称定芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量,加50%甲醇制成每1mL含芒果苷50μg、β-蜕皮甾酮12μg、毛蕊花糖苷10μg的溶液,即得。
本发明还提供了上述方法在玉女煎的药物制剂的质量检测和质量控制中的应用。
本发明还提供了玉女煎标准颗粒的质量控制方法,包括以下步骤:
(1)按照上述测定方法建立玉女煎标准汤的标准指纹图谱;
(2)取待检的玉女煎标准颗粒,按照上述测定方法得到指纹图谱;
(3)将步骤(2)得到的指纹图谱与步骤(1)得到的标准指纹图谱进行对比,符合即为合格产品,不符合即为不合格产品。
玉女煎标准颗粒供试样品溶液的制备:取装量差异下的玉女煎标准颗粒,混匀,研细,取1.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入25mL纯水,称定重量,超声处理(功率220W,频率50Hz)30min,放冷,再称定重量,用纯水补足减失的重量,摇匀后,精密移取5mL,并用水饱和正丁醇萃取5次,每次10mL,合并萃取液,用纯水洗涤两次,每次5mL,弃去水相,正丁醇相水浴蒸干,50%甲醇复溶,定容至2mL,离心(转速为每分钟10000 转)10min,取上清液过0.45μm的微孔滤膜,即得。
相对于现有技术,本发明具有以下优势:
(1)本发明在建立玉女煎标准颗粒的指纹图谱过程中,确认了25个共有特征峰,并对其相对保留时间和相对峰面积进行了研究,保证了制剂的化学组成稳定性和使用安全性。
(2)玉女煎标准颗粒中化学成分复杂,要实现其特征指纹峰的分离难度大,本发明在建立起指纹图谱的过程中,采用了梯度洗脱的方法,解决了指纹特征峰难以分开和杂质峰的干扰问题。
(3)建立玉女煎标准颗粒的指纹图谱,克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷,可以从整体上、宏观上控制玉女煎标准颗粒剂的内在质量,保证了药物的疗效,使经典名方得到了更为正规的质量控制。
(4)以玉女煎标准颗粒中各有效成分指纹图形作为一个整体看待,注重各个特征峰的前后顺序和相互关系,既避免了因只测定一、二个化学成分而判定玉女煎标准颗粒整体质量的片面性,又减少了为质量达标而人为处理的可能性。为完整、准确评价玉女煎标准颗粒的质量提供了新的方法和手段。
(5)本发明方法稳定性好、精密度高、重现性好、便捷且易于掌握。
附图说明
图1不同波长下玉女煎标准汤化学成分指纹图谱检测结果。
图2玉女煎标准汤指纹图谱色谱柱选择考察结果。
图3玉女煎标准汤指纹图谱流动相溶剂选择考察结果。
图4梯度洗脱条件Ⅰ下玉女煎标准汤指纹图谱。
图5梯度洗脱条件Ⅱ下玉女煎标准汤指纹图谱。
图6梯度洗脱条件Ⅲ下玉女煎标准汤指纹图谱。
图7梯度洗脱条件Ⅳ下玉女煎标准汤指纹图谱。
图8梯度洗脱条件Ⅴ下玉女煎标准汤指纹图谱。
图9梯度洗脱条件Ⅵ下玉女煎标准汤指纹图谱。
图10玉女煎标准汤指纹图谱不同柱温考察结果。
图11玉女煎标准汤150min指纹图谱。
图12玉女煎标准汤指纹图谱前处理方法考察结果。
图13玉女煎标准汤指纹图谱供试品萃取次数考察结果。
图14不同复溶溶剂玉女煎标准汤色谱指纹图谱。
图15玉女煎标准汤HPLC指纹图谱重复性试验色谱图。
图16玉女煎标准汤HPLC指纹图谱精密度试验色谱图。
图17玉女煎标准汤HPLC指纹图谱稳定性试验色谱图。
图18玉女煎标准汤HPLC指纹图谱专属性试验色谱图。
图19 10批玉女煎标准汤HPLC-UV叠加图。
图20 10批玉女煎标准汤对照指纹图谱。
图21玉女煎标准汤共有指纹峰来源归属。
图1中:由上到下依次为:330nm、296nm、262nm、205nm;
图2中:由上到下依次为:Ultimate XB C18、ZORBAX Eclipse Plus C18、 WondasilC18、Kromasil C18;
图3中:由上到下依次为:乙腈-0.1%甲酸水、为乙腈-0.1%磷酸水;
图10中:由上到下依次为:35℃、30℃、25℃;
图12中:由上到下依次为:离心、水饱和正丁醇萃取、乙酸乙酯萃取;
图13中:由上到下依次为:萃取5次、萃取4次、萃取3次;
图14中:由上到下依次为:50%乙醇、甲醇、80%甲醇、50%甲醇、30%甲醇、水;
图15中:由上到下依次为:第6次、第5次、第4次、第3次、第2 次、第1次;
图16中:由上到下依次为:第6批、第5批、第4批、第3批、第2 批、第1批;
图17中:由上到下依次为:24h、18h、15h、9h、5h、3h;
图18中:由上到下依次为:玉女煎、为葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖醛酸、半乳糖、甘露醇、阿拉伯糖、L-岩藻糖、L-鼠李糖、50%甲醇;
图21中:由上到下依次为:10批、熟地、牛膝、麦冬、知母。
具体实施方式
实施例一 玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法
1.1仪器和试剂
仪器:
试剂:
对照品:
1.2样品制备:
1.2.1样品及供试样品溶液的制备
(1)样品的制备:取不同产地和不同批次的按中国药典检验合格的药材或饮片,分别称取生石膏15g,熟地15g,麦冬6g,知母4.5g,牛膝4.5g,加入300mL去离子水浸泡60min,武火(220V)10min煮沸,文火(140V) 煎煮35min(煎液量约140mL),趁热倾倒,制得玉女煎标准汤,放置室温,定容至250mL,即得。
(2)供试样品溶液的制备:取制备的玉女煎标准汤5mL,用水饱和正丁醇萃取5次,每次10mL,合并萃取液,用纯水洗涤2次,每次5mL,弃去水相,正丁醇相水浴蒸干,50%甲醇复溶,定容至2mL,离心10min,取上清液过0.45μm的微孔滤膜,即得。
1.2.2混合对照品溶液的制备:精密称定芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量,加50%甲醇制成每1mL含芒果苷50μg、β-蜕皮甾酮12 μg、毛蕊花糖苷10μg的溶液,即得。
1.3色谱条件
色谱柱:Ultimate XB C18,4.6×250mm,5μm,00201-31043;
检测波长:280nmBW40;
流动相:乙腈-0.1%甲酸水;
流速:1mL/min;
进样量:20μL;
柱温:35℃
按照以下梯度洗脱条进行洗脱:
表1梯度洗脱条件
1.3.1检测波长的选择
玉女煎中的各味药材(石膏除外)中成分除糖类以外,主要有熟地中的环烯醚萜(苷)类、苯乙醇苷类,麦冬中的皂苷类、黄酮类,知母中的甾体皂苷类、双苯吡酮类,和牛膝中的植物甾酮类、皂苷类化合物。采用二极管阵列检测器,根据玉女煎中各类成分的主要吸收波长,初步选定在205nm、 262nm、296nm、330nm下进行指纹图谱构建,不同波长下玉女煎标准汤化学成分指纹图谱,见图1。
从图1可知:205nm波长下出峰较多,但基线不稳,不利于分析;330nm 波长下则缺少牛膝的指标成分β-蜕皮甾酮的色谱峰。综合考虑玉女煎中知母、牛膝、熟地中重要的指标成分及麦冬高异黄酮类特征成分紫外吸收特点,在280nmBW40(260-300nm)波长范围进行检测,可以同时兼顾芒果苷、β- 蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷以及高异黄酮类成分的检测,色谱峰信息量较大,且图谱基线平稳、干扰小,有利于指纹峰的识别,因此选择采用280nmBW40作为检测波长。
1.3.2色谱柱考察
分别采用不同色谱柱,①Kromasil 300-5C18(250×4.6mm,SN E99428);②Wondasil C18(4.6×200mm,5μm,SN 4E9601-10);③ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6×250mm,5-Micron,SN USUXA13817);④Ultimate XB-C18 (4.6×250mm,5-Micron,SN211203861),考察对指纹图谱主要色谱峰的分离情况,结果均能对主要色谱峰进行较好分离,结果见图2。
从图2可知:Ultimate XB C18色谱柱的色谱峰峰形和分离度均更好,因此选择Ultimate XB C18色谱柱进行玉女煎指纹图谱的分析。
1.3.3流动相溶剂的选择
选用Ultimate XB C18色谱柱,分别以乙腈-0.1%磷酸、乙腈-0.1%甲酸为流动相,考察不同溶剂系统对测定结果的影响,结果见图3。
从图3可知:两个流动相系统分析情况均较好,含0.1%甲酸时,色谱峰峰形和分离效果更优,因此选择乙腈-0.1%甲酸系统进行测定。
1.3.4流动相洗脱条件选择
以乙腈-0.1%甲酸为流动相,考察不同梯度洗脱条件下的色谱峰数目和各色谱峰分离情况,选出最佳梯度洗脱条件,不同梯度洗脱条件,见表2-7,结果见图4-9。
从图4-9可知:采用梯度洗脱条件Ⅵ,主要色谱峰的分离效果较好,因此选择梯度洗脱条件Ⅵ作为最佳洗脱条件。
表2梯度洗脱条件Ⅰ
表3梯度洗脱条件Ⅱ
表4梯度洗脱条件Ⅲ
表5梯度洗脱条件Ⅳ
表6梯度梯度洗脱条件Ⅴ
表7梯度洗脱条件Ⅵ
1.3.5柱温的选择
试验中采用Ultimate XB-C18色谱柱,比较25℃、30℃、35℃不同柱温的测定结果,结果见图10。
从图10可知:不同柱温对测定的影响不大,色谱图中主要色谱峰均能得到较好分离,耐用性较好,选取35℃为测定条件。
1.3.5玉女煎标准汤2h色谱图
玉女煎标准汤指纹图谱的记录时间为85min,试验考察了150min的色谱图,以考察85min后的色谱峰情况,结果见图11。
从图11可知:85min后不再有色谱峰出现。
1.4供试样品溶液的制备
1.4.1样品前处理方法考察
玉女煎中熟地、牛膝、麦冬等药材富含糖类等强极性成分,影响对标准汤指纹图谱的干扰较大,而且会降低色谱柱寿命,因此有必要对前处理方法进行考察,结果见图12。
①离心:取玉女煎汤剂10mL,水浴蒸干,用50%甲醇复溶,定容至2mL, 10000r/min离心10min过0.45μm针式滤器。
②水饱和正丁醇萃取:取玉女煎汤剂10mL,用水饱和正丁醇萃取5次,每次10mL,合并正丁醇液,用去离子水洗涤两次,每次5mL,正丁醇液水浴蒸干,用50%甲醇复溶,定容至2mL,10000r/min离心10min,过0.45μm 针式滤器。
③乙酸乙酯萃取:取玉女煎汤剂10mL,用乙酸乙酯萃取5次,每次10mL,合并正丁醇液,用去离子水洗涤两次,每次5mL,正丁醇液水浴蒸干,用50%甲醇复溶,定容至2mL,10000r/min离心10min,过0.45μm针式滤器。
从图12可知:用水饱和正丁醇进行萃取,玉女煎复方标准汤化学成分信息基本得到保留,并使基线更平稳,有助于指纹信息的分析比对,因此选择水饱和正丁醇萃取作为玉女煎复方标准汤的前处理方法。
1.4.2萃取次数考察
分别萃取3次、4次、5次制备供试样品溶液,考察对指纹图谱的影响,结果见图13。
从图13可知:不同萃取次数下,玉女煎指纹图谱的色谱峰数目相差不大,但是当萃取次数为4次和5次时,得到的玉女煎标准汤指纹图谱的色谱峰已无明显变化,因此确定最终萃取次数为5次
1.4.3复溶溶剂筛选
分别选择水、30%甲醇、50%甲醇、80%甲醇、甲醇和50%乙醇作为供试样品复溶溶剂,考察其对指纹图谱的影响,结果见图14。
从图14可知:以50%甲醇作为复溶溶剂色谱峰峰形和分离度均较好,玉女煎色谱峰峰面积相对较大,因此选择50%甲醇作为复溶溶剂。
1.5指纹图谱方法学考察
1.5.1重复性试验
取玉女煎标准汤,依供试样品溶液制备方法制备1份供试样品溶液,按 1.3项下色谱条件,重复进样6次,记录色谱图。并按国家药典会提供的中药色谱指纹相似度评价系统A版对其进行相似度评价,以6次测定的图谱生成对照图谱,见图15,并以此计算相似度,结果见表8-10。
表8相似度结果-重复性试验
表9重复性试验-相对峰面积
表10精密度试验-相对保留时间
结果表明:玉女煎各色谱峰的相对峰面积RSD小于3%、相对保留时间 RSD小于0.2%,表明重复性良好。
1.5.2精密度试验
取玉女煎标准汤,依供试样品溶液制备方法制备六批供试样品溶液,精密吸取20μL,按1.3项下色谱条件进样,见图16,记录色谱峰的保留时间和峰面积。以芒果苷为参照,计算谱图中各峰的相对保留时间及峰面积相对比值,并计算RSD的值,以考察色谱峰的相对保留时间、峰面积比值的一致性,结果见表11-13。
表11相似度结果-精密度试验
表12精密度试验-相对峰面积
表13重复性试验-相对保留时间
结果表明:玉女煎各色谱峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD均小于 3%,表明玉女煎液相色谱指纹图谱重复性试验符合要求。
1.5.3稳定性试验
取玉女煎标准汤,依供试样品溶液制备方法制备供试样品溶液,精密吸取20μL,按1.3项下色谱条件,分别于0、3、6、9、15、18、24h进样,见图17,记录色谱峰的保留时间和峰面积。以芒果苷为参照,计算谱图中各峰的相对保留时间及峰面积相对比值,并计算RSD的值,以考察色谱峰的相对保留时间、峰面积比值的一致性,结果见表14-16。
表14相似度结果-稳定性试验
表15稳定性试验-相对峰面积
表16稳定性试验-相对保留时间
结果表明:玉女煎各色谱峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD均小于 3%,表明玉女煎液相色谱指纹图谱稳定性试验符合要求。
1.5.4专属性实验
取本品空白溶剂、糖液,进行测定,供试品色谱图中主要成分色谱峰无干扰,结果表明:溶剂空白对指纹图谱测定没有影响,见图18。
1.6玉女煎标准汤指纹图谱的建立
2.6.1玉女煎标准汤HPLC对照指纹图谱的建立
取玉女煎标准汤10批,依供试样品溶液制备方法制备供试样品溶液,分别精密吸取20μL,按1.3项下色谱条件进样测定,得到10批玉女煎标准汤HPLC指纹图谱,见图19。
2.6.2共有模式对照图谱及峰归属
将色谱图导入国家药典委颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004版”软件,得到10批图生成的共有模式对照图谱,确定共有峰有25 个,各共有峰依次标号为1,2,…,25,见图20。
2.6.3玉女煎标准汤指纹图谱共有峰来源归属
峰1、2、4、8、12、14、19、20、24来自熟地,峰2、13、22来自麦冬,峰2、8、18、20、22、24来自牛膝,峰1-11、13、15-17、20-23、25 来自知母,以芒果苷为参照峰,见图21。
以芒果苷为参照峰,对供试样品溶液各共有峰相对保留时间及相对峰面积比值进行计算,结果见表17、18。
表17 10批玉女煎标准汤HPLC-UV指纹图谱共有峰相对保留时间
表18 10批玉女煎标准汤HPLC-UV指纹图谱共有峰相对峰面积
结果表明:10批玉女煎标准汤正丁醇部位HPLC法指纹图谱的各共有峰相对保留时间RSD均小于1%,说明各批次样品间色谱峰保留时间具有较高的一致性;10批玉女煎标准汤正丁醇部位HPLC法指纹图谱的各共有峰相对峰面积的RSD较大,反映出各批次样品间共有峰成分含量存在一定的差异。
2.6.4玉女煎标准汤正丁醇部位指纹图谱中共有峰的定性鉴别
为了进一步阐明玉女煎标准汤的化学组成,我们对共有峰进行定性分析,采用Waters 2695/Waters Quatrro MicroTMAPI分析仪并结合文献,对指纹图谱中的色谱峰进行指认,结果见表19。
表19玉女煎标准汤正丁醇部位HPLC指纹图谱特征峰指认结果
实施例二 玉女煎标准颗粒的质量控制方法
一种玉女煎标准颗粒的质量控制方法,包括以下步骤:
(1)按照实施例一中1.2.1(1)中的方法制备玉女煎标准汤,采用实施例一中的测定方法建立玉女煎标准汤的标准指纹图谱;
(2)取待检的玉女煎标准颗粒,按照实施例一中的测定方法得到指纹图谱;
(3)将步骤(2)得到的指纹图谱与步骤(1)得到的标准指纹图谱进行对比,符合即为合格产品,不符合即为不合格产品。
玉女煎标准颗粒供试样品溶液的制备:取装量差异下的玉女煎标准颗粒,混匀,研细,取1.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入25mL纯水,称定重量,超声处理(功率220W,频率50Hz)30min,放冷,再称定重量,用纯水补足减失的重量,摇匀后,精密移取5mL,并用水饱和正丁醇萃取5次,每次10mL,合并萃取液,用纯水洗涤两次,每次5mL,弃去水相,正丁醇相水浴蒸干,50%甲醇复溶,定容至2mL,离心(转速为每分钟10000 转)10min,取上清液过0.45μm的微孔滤膜,即得。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)供试样品溶液的制备:取玉女煎标准汤5体积份数,用水饱和正丁醇萃取,合并萃取液,用纯水洗涤,弃去水相,正丁醇相水浴蒸干,50%甲醇复溶,定容至2体积份数,离心,取上清液过微孔滤膜,即得;
(2)混合对照品溶液的制备:精密称定芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量,加50%甲醇制成每1体积份数含芒果苷0.05质量份数、β-蜕皮甾酮0.012质量份数、毛蕊花糖苷0.01质量份数的溶液,即得;
(4)分别精密吸取供试样品溶液、混合对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定,分别得到供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱;
(5)采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,对供试样品溶液和混合对照品溶液的液相色谱进行数据匹配,即得标准指纹图谱。
所述重量份数与所述体积份数的关系为g/mL。
2.根据权利要求1所述的玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,其特征在于:所述步骤(4)的色谱条件如下:
色谱柱:Ultimate XB C18,4.6×250mm,5μm,00201-31043;
检测波长:280nmBW40;
流动相:乙腈-0.1%甲酸水;
流速:1mL/min;
进样量:20μL;
柱温:35℃
按照以下梯度洗脱条进行洗脱:
3.根据权利要求1所述的玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,其特征在于:所述标准指纹图谱包括25个共有峰:峰1、2、4、8、12、14、19、20、24来自熟地,峰2、13、22来自麦冬,峰2、8、18、20、22、24来自牛膝,峰1-11、13、15-17、20-23、25来自知母。
4.根据权利要求1所述的玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,其特征在于:所述供试样品溶液的制备:取制备的玉女煎标准汤5mL,用水饱和正丁醇萃取5次,每次10mL,合并萃取液,用纯水洗涤2次,每次5mL,弃去水相,正丁醇相水浴蒸干,50%甲醇复溶,定容至2mL,离心10min,取上清液过0.45μm的微孔滤膜,即得。
5.根据权利要求1所述的玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,其特征在于:所述玉女煎标准汤的制备方法:取不同产地和不同批次的按中国药典检验合格的药材或饮片,分别称取生石膏15g,熟地15g,麦冬6g,知母4.5g,牛膝4.5g,加入300mL去离子水浸泡60min,武火10min煮沸,文火煎煮35min,煎液量约140mL,趁热倾倒,制得玉女煎标准汤,放置室温,定容至250mL,即得。
6.根据权利要求1所述的玉女煎标准汤的HPLC指纹图谱测定方法,其特征在于:混合对照品溶液的制备:精密称定芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷对照品适量,加50%甲醇制成每1mL含芒果苷50μg、β-蜕皮甾酮12μg、毛蕊花糖苷10μg的溶液,即得。
7.权利要求1-6任一项所述的方法在玉女煎的药物制剂的质量检测和质量控制中的应用。
8.一种玉女煎标准颗粒的质量控制方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)按照权利要求1-6所述的测定方法建立玉女煎标准汤的标准指纹图谱;
(2)取待检的玉女煎标准颗粒,按照权利要求1-6所述的测定方法得到指纹图谱;
(3)将步骤(2)得到的指纹图谱与步骤(1)得到的标准指纹图谱进行对比,符合即为合格产品,不符合即为不合格产品。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201611263466.6A CN107643343B (zh) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201611263466.6A CN107643343B (zh) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107643343A true CN107643343A (zh) | 2018-01-30 |
CN107643343B CN107643343B (zh) | 2020-06-16 |
Family
ID=61109811
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201611263466.6A Active CN107643343B (zh) | 2016-12-30 | 2016-12-30 | 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107643343B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111103385A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-05-05 | 辽宁康辰药业有限公司 | 一种防参止痒颗粒的指纹图谱测定方法 |
CN113281428A (zh) * | 2021-04-30 | 2021-08-20 | 上海上药杏灵科技药业股份有限公司 | 一种玉女煎基准物质的制备方法与指纹图谱的质量控制方法 |
CN115372488A (zh) * | 2021-05-18 | 2022-11-22 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种检测玉女煎指纹图谱的方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1844913A (zh) * | 2006-03-22 | 2006-10-11 | 四川科伦药业股份有限公司 | 一种黄芪皂苷注射液指纹图谱的质量检测方法 |
CN101623432A (zh) * | 2008-07-08 | 2010-01-13 | 上海中医药大学 | 加减玉女煎在制备治疗甲状腺功能亢进症的药物中的应用 |
CN103267818A (zh) * | 2013-05-14 | 2013-08-28 | 钟可 | 知母药材hplc-elsd指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 |
CN104634888A (zh) * | 2014-11-25 | 2015-05-20 | 杭州胡庆余堂药业有限公司 | 一种强力枇杷露指纹图谱质量控制方法 |
-
2016
- 2016-12-30 CN CN201611263466.6A patent/CN107643343B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1844913A (zh) * | 2006-03-22 | 2006-10-11 | 四川科伦药业股份有限公司 | 一种黄芪皂苷注射液指纹图谱的质量检测方法 |
CN101623432A (zh) * | 2008-07-08 | 2010-01-13 | 上海中医药大学 | 加减玉女煎在制备治疗甲状腺功能亢进症的药物中的应用 |
CN103267818A (zh) * | 2013-05-14 | 2013-08-28 | 钟可 | 知母药材hplc-elsd指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 |
CN104634888A (zh) * | 2014-11-25 | 2015-05-20 | 杭州胡庆余堂药业有限公司 | 一种强力枇杷露指纹图谱质量控制方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
雷莉妍 等: "玉女煎HPLC指纹图谱研究", 《中药材》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111103385A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-05-05 | 辽宁康辰药业有限公司 | 一种防参止痒颗粒的指纹图谱测定方法 |
CN113281428A (zh) * | 2021-04-30 | 2021-08-20 | 上海上药杏灵科技药业股份有限公司 | 一种玉女煎基准物质的制备方法与指纹图谱的质量控制方法 |
CN113281428B (zh) * | 2021-04-30 | 2023-02-21 | 上海上药杏灵科技药业股份有限公司 | 一种玉女煎基准物质的制备方法与指纹图谱的检测方法 |
CN115372488A (zh) * | 2021-05-18 | 2022-11-22 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种检测玉女煎指纹图谱的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107643343B (zh) | 2020-06-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105181855B (zh) | Uhplc‑ms/ms同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的方法 | |
CN108226313A (zh) | 地黄中苷类成分的同时测定及指纹图谱构建方法 | |
CN106404942B (zh) | 一种康肾颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱 | |
CN109444290B (zh) | 车前草药材uplc特征图谱的构建方法和检测方法 | |
Xie et al. | Simultaneous determination of six main components in Bushen Huoxue prescription by HPLC-CAD | |
CN103808835B (zh) | Hplc-dad法同时测定四物汤煎剂中10种化学成分含量的方法 | |
CN107643343A (zh) | 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 | |
CN107271598B (zh) | 中成药咽炎片标准特征图谱的构建方法与应用 | |
CN110286186A (zh) | 一种检测新癀片指纹图谱的方法及新癀片标准指纹图谱和应用 | |
CN107367567B (zh) | 芪枣口服液的指纹图谱构建及其质量检测方法 | |
CN106706786A (zh) | 一种人参叶中六种人参皂苷类成分的含量测定方法 | |
CN109239220B (zh) | 一种玉屏风颗粒的质量检测方法 | |
CN107449846A (zh) | Hplc‑ms测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法 | |
CN106226435B (zh) | 一种益心舒片皂苷类成分的指纹图谱检测方法 | |
CN110441413A (zh) | 千柏鼻炎片hplc指纹图谱的构建方法和检测方法 | |
CN112903887B (zh) | 银杏叶滴丸hplc-vwd-elsd特征图谱的建立方法及其特征图谱 | |
CN112782308B (zh) | 一种杜仲补天素丸的hplc指纹图谱的建立方法 | |
CN112798724B (zh) | 一种适用于人参属中药材及药材提取物的皂苷类成分色谱指纹图谱的建立方法 | |
CN108872417A (zh) | 一种指纹图谱的构建方法及hplc指纹图谱 | |
CN102133333A (zh) | 一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法 | |
CN110274970A (zh) | 融差指纹图谱的建立方法及其在益血生胶囊质控中的应用 | |
CN109633035A (zh) | 一种山楂破壁饮片的hplc指纹图谱及其构建方法和应用 | |
CN108562681A (zh) | 杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法 | |
CN110346463A (zh) | 一种岗梅根药材hplc-elsd指纹图谱的建立方法 | |
CN109781884B (zh) | 一种前列欣胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |