CN107449846A

CN107449846A - Hplc‑ms测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法

Info

Publication number: CN107449846A
Application number: CN201710801824.2A
Authority: CN
Inventors: 陈剑平; 张尚斌; 郑平; 胡兆流; 高厚明
Original assignee: Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital
Current assignee: Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital
Priority date: 2017-09-07
Filing date: 2017-09-07
Publication date: 2017-12-08
Anticipated expiration: 2037-09-07
Also published as: CN107449846B

Abstract

本发明涉及一种HPLC‑MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，包括以下步骤：(1)制得对照品溶液；制得供试品溶液；制得阴性对照溶液；(2)采用高效液相色谱法和质谱法检测所述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，分别获得对照品特征图谱、供试品特征图谱和阴性对照特征图谱；根据所述对照品特征图谱、供试品特征图谱和阴性对照特征图谱，确定小儿安神补脑颗粒中的有效成分。本发明的HPLC‑MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法具有准确、灵敏度高、快速、稳定性好的优点。

Description

HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法

技术领域

本发明涉及药物成分检测技术，特别涉及一种HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法。

背景技术

小儿安神补脑颗粒是儿科专家多年治疗小儿抽动症临床经验累积研制而成的中药制剂。该方由黄芪、陈皮、枳壳、远志、甘草等多味药组成，具有涤痰止惊、安神补脑的功效，主要用于小儿多发性抽动症(TS)、多动综合症、夜啼、梦游和夜寐不安等神明受扰诸症。传统中医辩证认为TS病根于脾、肾、肝、胃，症见于心、肝、肺诸窍，而处方中黄芪、陈皮滋补肺肾的功效，枳壳能补脾平肝，远志则补益心脾，甘草具有调和诸药的功效。现代研究表明，黄芪的有效成分为黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷；枳壳的指标成分为柚皮苷和新橙皮苷；远志的指标成分3,6′-二芥子酰基蔗糖酯；陈皮的成分为橙皮苷；甘草的指标成分为甘草苷和甘草酸铵。对于黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、柚皮苷、新橙皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、甘草苷和甘草酸铵，目前并不存在系统且有效地对以上8个成分的含量进行测定的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种HPLC-MS(高效液相色谱-串联质谱)测定小儿安神补脑中药制剂中的有效成分含量的方法，能有效地测定黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、柚皮苷、新橙皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、甘草苷和甘草酸铵8种有效成分含量，进而为小儿安神补脑颗粒的质量控制研究提供一种可行性的手段。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，包括以下步骤：

(1)分别称取甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷对照品中的至少一种，以有机溶剂溶解定容，制得对照品溶液；

取供试品，溶解定容后过微孔滤膜，制得供试品溶液；

按小儿安神补脑颗粒的处方比例和制备工艺制得不含黄芪、枳壳、陈皮、远志及甘草的阴性样品，溶解定容后过微孔滤膜，制得阴性对照溶液；

(2)采用高效液相色谱法和质谱法检测所述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，分别获得对照品特征图谱、供试品特征图谱和阴性对照特征图谱；

根据所述对照品特征图谱、供试品特征图谱和阴性对照特征图谱，确定小儿安神补脑颗粒中的有效成分。

本发明的有益效果在于：

本发明采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS)，在同一条件下对黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、柚皮苷、新橙皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、甘草苷和甘草酸铵8个成分进行测定，并进行了系统的方法学考察，可为小儿安神补脑颗粒的质量控制研究提供可行性的手段。具有灵敏度高、稳定性好和快速的优点，可用于小儿安神补脑颗粒的鉴别、质量评价与控制。

附图说明

图1a、1b和1c为本发明实施例的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法中的阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液的选择离子流图。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明最关键的构思在于：采用高效液相色谱-串联质谱法对小儿安神补脑颗粒中有效成分的含量进行测定，具有灵敏度高、稳定性好和快速的优点。

请参照图1a-1c，一种HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，包括以下步骤：

取供试品，溶解定容后过微孔滤膜，制得供试品溶液；

从上述描述可知，本发明的有益效果在于：

本发明的小儿安神补脑颗粒，具体可为根据深圳中医院儿科专家多年治疗小儿抽动症临床经验累积研制而成的中药制剂。该方由黄芪、陈皮、枳壳、远志、甘草等十八味药组成，具有涤痰止惊、安神补脑的功效，主要用于小儿多发性抽动症(TS)、多动综合症、夜啼、梦游和夜寐不安等神明受扰诸症。传统中医辩证认为TS病根于脾、肾、肝、胃，症见于心、肝、肺诸窍，而处方中黄芪、陈皮滋补肺肾的功效，枳壳能补脾平肝，远志则补益心脾，甘草具有调和诸药的功效。现代研究表明，黄芪的有效成分为黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷、枳壳的指标成分为柚皮苷和新橙皮苷、远志的指标成分3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、陈皮的成分橙皮苷及甘草的指标成分为甘草苷和甘草酸铵。

进一步的，步骤(1)中，精密称取甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷对照品，制得的对照品溶液中，甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6′- 二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷对照品的质量比为1:1:1:10:0.5:2:4:0.5，所述有机溶剂的体积与对照品的总质量的比值为1/100mL/ μg。

进一步的，每1ml的有机溶剂中含有5μg甘草苷、5μg毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 5μg甘草酸铵、50μg柚皮苷、2.5μg 3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、10μg橙皮苷、20μg 新橙皮苷和2.5μg黄芪甲苷对照品。

进一步的，步骤(1)中，制得供试品溶液中的“溶解定容后过微孔滤膜”具体为：取供试品进行研磨，然后精密称取0.2g研磨后的供试品，加入30mL 甲醇进行溶解并进行称重，称重后于250w、40kHz的条件下超声处理45min，超声处理后进行冷却，然后用甲醇进行定容并摇匀，再过0.45μm的微孔滤膜。

进一步的，步骤(1)中，制得阴性对照溶液中的“溶解定容后过微孔滤膜”具体为：取阴性样品进行研磨，然后精密称取0.2g研磨后的阴性样品，加入30mL 甲醇进行溶解并进行称重，称重后于250w、40kHz的条件下超声处理45min，超声处理后进行冷却，然后用甲醇进行定容并摇匀，再过0.45μm的微孔滤膜。

进一步的，步骤(2)具体为：取步骤(1)制备得到的对照品溶液，采用逐级稀释法，用甲醇稀释对照品溶液，制成质量浓度在0.0048-50μg/mL的系列不同浓度的对照品溶液，然后取系列不同浓度的对照品溶液按高效液相色谱法和质谱法进行测定分析，以系列对照品溶液的浓度作为横坐标，以测得的相应标准品的峰面积作为纵坐标，获得各对照品的线性回归方程；取步骤(1)制备得到的供试品溶液，按高效液相色谱法和质谱法进行测定分析，并根据各对照品的线性回归方程计算供试品溶液中各有效成分的含量。

进一步的，所述高效液相色谱法按照下述色谱分析条件进行检测：色谱柱为Agilent TC-C18，尺寸为250mm×4.6mm×5μm；以浓度为10mmol/L的乙腈为流动相A液，乙酸铵为流动相B液，进行梯度洗脱。

进一步的，梯度洗脱的具体条件为：当流动相A液浓度为15％时，梯度洗脱0-0.01min；当流动相A液浓度为15-19％时，梯度洗脱0.01-5min；当流动相 A液浓度为19-35％时，梯度洗脱5-22min，流速为0.8mL/min；当流动相A液浓度为35-90％时，梯度洗脱22.1-35min，流速为1mL/min；当流动相A液浓度为90-95％时，梯度洗脱35.1-45min，流速为0.8mL/min，进样量为10μL。

进一步的，所述质谱法按照下述质谱检测条件进行检测：采用电喷雾离子化源，检测电压3.5kV；雾化器压力为241kPa；干燥气为N₂，流速为1.5L/min；离子喷雾温度为350℃；正负离子方式同时检测，扫描方式为选择离子监测；用于定量分析的监测离子为：甘草苷的[M-H]^-的质荷比为417m/z、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的[M+Cl]^-的质荷比为481.0m/z、柚皮苷的[M-H]^-的质荷比为579.53m/z、 3,6'-二芥子酰基蔗糖酯的[M-H]^-的质荷比为753.25m/z、橙皮苷的[M-H]^-的质荷比 609.15m/z、新橙皮苷的的[M-H]^-的质荷比为609.15m/z、黄芪甲苷的[M+Na]⁺的质荷比为807.4m/z；葛根素为内标，葛根素的[M-H]^-的质荷比为415.15m/z。

实施例1

本发明的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，具体阐述如下：

1仪器与试药

1.1仪器

LC-20AT型高效液相色谱(HPLC)仪、LC-2020型质谱仪、LC solution色谱工作站(日本岛津公司)；Sartorius BP 211D型电子天平(十万分之一，德国 Sartorius公司)；CQ-250L-DST型超声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂)。

1.2药材、药品及试剂

小儿安神补脑颗粒(深圳市中医院制剂科，批号：20160802、20160905、20161014)、甘草苷(批号：111610-201106)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷(批号： 111920-201505)、甘草酸铵(批号：110731-201418)、柚皮苷(批号： 110722-201312)、橙皮苷(批号：110721-201316)、新橙皮苷(批号：11857-201102)、黄芪甲苷(批号：100021)、葛根素(批号:110752-200912)均采购自中国食品药品检定研究院，3,6′-二芥子酰基蔗糖酯购于中药检测实验室(中国香港)(批号:70069)；甲醇、乙酸铵、乙腈均为色谱纯；流动相用水为蒸馏水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为Agilent TC-C18(4.6×250mm，5μm)；乙腈(A)-10mmol·L^-1乙酸铵(B)为流动相进行梯度洗脱，洗脱条件为：0～0.01min，15％A；0.01～5min，15％→19％A；5～22min，19％→35％A，流速0.8mL·min^-1；22.1～35min，35％→90％A，流速1mL·min^-1；35.1～45min，90％→15％A，流速0.8mL·min-1；进样量10 μL。

2.2质谱条件

采用电喷雾离子化源(ESI)，检测电压3.5kV；雾化器压力为241kPa；干燥气为N₂，流速为1.5L·min^-1；离子喷雾温度为350℃。正负离子方式同时检测，扫描方式为选择离子监测(SIM)，用于定量分析的监测离子为：甘草苷：m/z 417 [M-H]^-、毛蕊异黄酮葡萄糖苷：m/z481.0[M+Cl]^-、柚皮苷：m/z579.53[M-H]^-、3，6'-二芥子酰基蔗糖酯：m/z753.25[M-H]^-、橙皮苷：m/z 609.15[M-H]^-、新橙皮苷： m/z 609.15[M-H]^-、黄芪甲苷：m/z807.4[M+Na]⁺；葛根素为内标，监测离子为 m/z415.15[M-H]^-。

2.3溶液制备

2.3.1对照品溶液的制备分别取甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含5、5、5、50、2.5、10、20和2.5μg的混匀溶液，即得。

2.3.2供试品溶液的制备取供试品(20160802)10袋，除去包装，混匀，取适量，研细，取约0.2g，精密称定，加30mL甲醇溶解，称重，超声(250W， 40kHz)45min取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜。

2.3.3阴性对照溶液的制备按小儿安神补脑颗粒处方比例以及制备工艺制得不含黄芪、枳壳、陈皮、远志及甘草的阴性样品，按“2.3.2”所述操作方法制得阴性对照溶液。

2.4专属性试验

取以上混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，在上述色谱质谱条件下进行测定。结果供试品在与对照品相同的保留时间处有相同色谱峰；而阴性对照溶液未见相应色谱峰，表明无干扰，其选择离子流图见图1a、1b和 1c。图1a、1b和1c中，左边一列为阴性对照溶液的选择离子流图，中间一列为对照品溶液的选择离子流图，最右边一列为供试品溶液的选择离子流图。

2.5线性关系考察及检测下限、定量下限测定

精密吸取对照品贮备液加甲醇逐级稀释，分别制得质量浓度在0.0048-50 μg·mL^-1的一系列对照品溶液，按上述色谱-质谱条件测得峰面积，并以峰面积 (Y)与质量浓度(X，μg·mL^-1)绘制标准曲线并进行线性回归计算，得相应的标准曲线回归方程，结果表明各成分在相应的线性范围内线性关系良好。同时，以峰面积为噪音3倍(S/N＝3)和10倍(S/N＝10)的进样浓度为检测下限和定量下限，结果见表1，表1为线性范围、检测下限及定量下限考察结果表。

表1

2.6精密度试验

精密量取上述对照品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积并计算其RSD。结果：甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6'- 二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷的RSD％分别是1.69％、0.37％、 0.42％、1.49％、1.31％、1.24％、0.36％和1.86％(n＝6)，表明该仪器精密度良好。

2.7稳定性试验

取上述供试品溶液(批号20160802)，分别于0、2、4、6、8、24h进样，每次10μL，记录峰面积。结果甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6'-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷峰面积的RSD分别为1.73％、1.33％、0.82％、1.88％、1.63％、1.61％、1.84％和1.86％(n＝6)，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8重复性试验

取同批样品(批号20160802)6份，按“2.3.2”所述操作方法平行制备6 份溶液进行测定，记录峰面积并计算样品含量。结果甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6'-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷RSD分别为1.14％、1.69％、1.83％、1.54％、1.60％、1.09％、1.96％和1.76％ (n＝6)，表明该方法重复性良好。

2.9加样回收率试验

取已知含量的样品(批号20160802)约0.2g，精密称定，共6份，分别加入混合对照品溶液，按“2.3.2”所述操作方法制备溶液，进样测定，计算回收率，结果见表2，表2为加样回收率考察结果(n＝6)表，表明本方法加样回收率良好。

表2

2.10样品测定

取不同批号的小儿安神补脑颗粒的样品，精密称定，按“2.3.2”所述进行制备，计算含量，结果见表3，表3为样品含量测定结果(mg·g^-1，n＝3)表。

表3

3分析与结论

在实验前期的探索中，发明人采用HPLC-DAD法对小儿安神补脑颗粒中的主要成分进行分析，发现制剂中陈皮含有中的橙皮苷与远志含有的3,6'-二芥子酞基蔗糖酯色谱峰互相干扰，影响成分分离。发明人尝试采用不同梯度洗脱条件、不同流动相和不同色谱柱，但均达不到基线分离的效果。黄芪中的黄芪甲苷在紫外检测器上没有吸收，现行版《中国药典》采用HPLC-ELSD法进行测定。 ELSD作为通用型检测器，几乎能够测定所有的物质，选用HPLC-ELSD法能够同时测定以上所有的成分，但是其灵敏度比DAD检测约低一个数量级，需要较高的样品浓度。本实验结果也可以得出，黄芪甲苷含量较少，采用ELSD检测将影响实验的灵敏度和重复性。随着联用技术的日趋成熟，HPLC-MS日益显现出较优的性能，如检测限低。同时MS具有高灵敏度，其检测能力比传统紫外和ELSD可以提高一个数量级以上，特别是对于那些没有紫外吸收的样品检测。此外，MS分离能力强，不要求被测成分在色谱上完全分离，通过特征离子质量色谱图来进行定性定量分析，这对于分析中药复方制剂中含有相对复杂的化学成分具有较强的优势。

经过长期的实验，发明人发现HPLC-MS法解决了制剂中橙皮苷与3,6'-二芥子酞基蔗糖酯色谱峰的分离问题，以及达到同时测定制剂中黄芪甲苷的含量。本研究的MS采用SIM的模式，相比于多反应监测模式(MRM)专属性较低。橙皮苷和新橙皮苷具有相同的分子式及分子量，都属于黄酮体化合物中的二氢黄酮类，在负离子下它们的分子离子均为m/z609.15[M-H]^-，为解决这一问题，发明人在试验过程中通过借助紫外检测器确认两个成分色谱峰的保留时间，从而进行指认和区分，弥补了这一不足。在对各被测成分的质谱参数进行优化中发现，黄芪甲苷在正离子检测模式下响应较好，其他7个成分在负离子模式下的响应高于正离子模式，综合以上情况确定同时选择正负离子模式对小儿安神补脑颗粒制剂中8个主要成分进行检测。此外，本试验还对甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲酸水溶液、乙腈-乙酸铵水溶液、乙腈-氨水溶液等流动相体系进行了考察。结果表明，采用乙腈-乙酸铵水溶液作为流动相时，不仅能提高待测成分的响应值，且样品中各成分的色谱峰分离较好。因此，最终选用乙腈-10mmol·mL^-1乙酸铵水溶液作为本实验的流动相。

综上所述，本发明建立了测定甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖酯、黄芪甲苷和甘草酸铵含量的方法，该方法具有准确、灵敏度高、快速、稳定性好等特点，可作为小儿安神补脑颗粒制剂中化学指标成分含量测定的质量控制手段。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.一种HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

取供试品，溶解定容后过微孔滤膜，制得供试品溶液；

2.根据权利要求1所述的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，步骤(1)中，精密称取甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷对照品，制得的对照品溶液中，甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草酸铵、柚皮苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、橙皮苷、新橙皮苷和黄芪甲苷对照品的质量比为1:1:1:10:0.5:2:4:0.5，所述有机溶剂的体积与对照品的总质量的比值为1/100mL/μg。

3.根据权利要求3所述的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，每1ml的有机溶剂中含有5μg甘草苷、5μg毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5μg甘草酸铵、50μg柚皮苷、2.5μg 3,6′-二芥子酰基蔗糖酯、10μg橙皮苷、20μg新橙皮苷和2.5μg黄芪甲苷对照品。

4.根据权利要求1所述的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，步骤(1)中，制得供试品溶液中的“溶解定容后过微孔滤膜”具体为：取供试品进行研磨，然后精密称取0.2g研磨后的供试品，加入30mL甲醇进行溶解并进行称重，称重后于250w、40kHz的条件下超声处理45min，超声处理后进行冷却，然后用甲醇进行定容并摇匀，再过0.45μm的微孔滤膜。

5.根据权利要求1所述的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，步骤(1)中，制得阴性对照溶液中的“溶解定容后过微孔滤膜”具体为：取阴性样品进行研磨，然后精密称取0.2g研磨后的阴性样品，加入30mL甲醇进行溶解并进行称重，称重后于250w、40kHz的条件下超声处理45min，超声处理后进行冷却，然后用甲醇进行定容并摇匀，再过0.45μm的微孔滤膜。

6.根据权利要求1所述的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，步骤(2)具体为：取步骤(1)制备得到的对照品溶液，采用逐级稀释法，用甲醇稀释对照品溶液，制成质量浓度在0.0048-50μg/mL的系列不同浓度的对照品溶液，然后取系列不同浓度的对照品溶液按高效液相色谱法和质谱法进行测定分析，以系列对照品溶液的浓度作为横坐标，以测得的相应标准品的峰面积作为纵坐标，获得各对照品的线性回归方程；取步骤(1)制备得到的供试品溶液，按高效液相色谱法和质谱法进行测定分析，并根据各对照品的线性回归方程计算供试品溶液中各有效成分的含量。

7.根据权利要求6所述的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法按照下述色谱分析条件进行检测：

色谱柱为Agilent TC-C18，尺寸为250mm×4.6mm×5μm；以浓度为10mmol/L的乙腈为流动相A液，乙酸铵为流动相B液，进行梯度洗脱。

8.根据权利要求7所述的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，梯度洗脱的具体条件为：当流动相A液浓度为15％时，梯度洗脱0-0.01min；当流动相A液浓度为15-19％时，梯度洗脱0.01-5min；当流动相A液浓度为19-35％时，梯度洗脱5-22min，流速为0.8mL/min；当流动相A液浓度为35-90％时，梯度洗脱22.1-35min，流速为1mL/min；当流动相A液浓度为90-95％时，梯度洗脱35.1-45min，流速为0.8mL/min，进样量为10μL。

9.根据权利要求6、7或8所述的HPLC-MS测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法，其特征在于，所述质谱法按照下述质谱检测条件进行检测：

采用电喷雾离子化源，检测电压3.5kV；雾化器压力为241kPa；干燥气为N₂，流速为1.5L/min；离子喷雾温度为350℃；正负离子方式同时检测，扫描方式为选择离子监测；用于定量分析的监测离子为：甘草苷的[M-H]^-的质荷比为417m/z、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的[M+Cl]^-的质荷比为481.0m/z、柚皮苷的[M-H]^-的质荷比为579.53m/z、3,6'-二芥子酰基蔗糖酯的[M-H]^-的质荷比为753.25m/z、橙皮苷的[M-H]^-的质荷比609.15m/z、新橙皮苷的的[M-H]^-的质荷比为609.15m/z、黄芪甲苷的[M+Na]⁺的质荷比为807.4m/z；葛根素为内标，葛根素的[M-H]^-的质荷比为415.15m/z。