CN107615062B

CN107615062B - 具有可调光学性质的水凝胶颗粒以及使用其的方法

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Publication number: CN107615062B
Application number: CN201680019908.4A
Authority: CN
Inventors: J·金; O·刘; J·阿格雷斯蒂; A·T·阮
Original assignee: Slingshot Biosciences Inc
Current assignee: Slingshot Biosciences Inc
Priority date: 2015-02-09
Filing date: 2016-02-08
Publication date: 2022-03-18
Anticipated expiration: 2036-02-08
Also published as: KR102683662B1; AU2023254913B2; JP2023086829A; CA2975301A1; US20200400546A1; AU2021218058A1; US20220260476A1; JP2022089870A; US11686661B2; JP7266731B2; AU2023254913A1; KR102656644B1; AU2020201783A1; JP6692834B2; JP2020128989A; KR20220119536A; US20230152202A1; US11747261B2; KR20170125846A; US9714897B2

Abstract

本申请描述了水凝胶颗粒和它们在细胞计数应用中的用途。本申请描述的水凝胶颗粒是选择性可调的，从而具有至少一种光学性质，其基本上相似于靶细胞的该至少一种光学性质。就此而言，在一个方面中，本申请提供的水凝胶颗粒用作检测样本中靶细胞的标定试剂。

Description

具有可调光学性质的水凝胶颗粒以及使用其的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年2月9日提交的美国临时申请62/114,004和2015年6月24日提交的美国临时申请62/184,192的优先权，它们各自的公开内容完全并入本申请以作参考。

背景技术

流式细胞计数法是这样的技术，其可快速分离、计数、和表征个体细胞，其通常用于多种应用的临床和实验室环境。该技术依赖于将光束导向到液体的流体聚焦流上。然后多个检测器瞄准下述点，其中液体流在所述点穿过光束：一个点与光束成一直线(前向散射或FSC)，几个点与光束垂直(侧向散射或SSC)。FSC与细胞体积相关，且SSC取决于颗粒的内在复杂性(例如，细胞核的形状，细胞质颗粒的数量和类型或细胞膜表面粗糙度)。由于这些相关性，不同的具体细胞类型表现出不同的FSC和SSC，使得可在流式细胞计数法中区别细胞类型。

但是，确认具体细胞类型的能力依赖于对仪器的适当标定，这是有赖于使用目标细胞类型的纯化细胞的方法。获得这些纯化细胞可能需要昂贵费力的过程，容易带来批次差异。因此，在本领域需要具有可调光学性质的合成组合物，其可以模拟在诸如流式细胞仪中的具体细胞类型。

发明内容

在本发明的一方面，提供了包含聚合的单体并且具有至少一个表面的水凝胶颗粒。水凝胶颗粒具有的至少一种光学性质基本上相似于靶细胞的至少一种光学性质。在一种实施方式中，光学性质是侧向散射波形(SSC)，前向散射波形(FSC)，荧光发射波形，或其组合。靶细胞可以是用户指定的任何靶细胞。例如，在一种实施方式中，靶细胞是免疫细胞，干细胞或癌细胞。

另一方面，提供了标定用于分析靶细胞的细胞计数装置的方法。在一种实施方式中，所述方法包括向所述装置中插入具有至少一种基本上相似于靶细胞的光学性质的水凝胶颗粒，其中所述水凝胶颗粒包含聚合的单体并且具有至少一个表面。所述方法进一步包括使用所述细胞计数装置测量所述水凝胶颗粒的所述至少一种光学性质。在一种实施方式中，所述至少一种光学性质用作检测样本中的靶细胞的参照物。

再在另一方面，提供了检测样本中靶细胞的方法。所述方法包括向所述装置中插入具有至少一种基本上相似于靶细胞的光学性质的水凝胶颗粒，其中所述水凝胶颗粒包含聚合的单体。所述方法还包括使用所述细胞计数装置测量所述水凝胶颗粒的所述至少一种光学性质。将包含细胞群体的样本插入所述细胞计数装置中，并测量所述群体中的个体细胞的至少一种光学性质。最后，基于所述光学性质测量结果确定所述靶细胞或其群体是否存在于所述样本中。

在本申请提供的方法的一种实施方式中，水凝胶颗粒包含可生物降解的单体。在进一步的实施方式中，可生物降解的单体是单糖，二糖，多糖，肽，蛋白质，或蛋白质结构域。在甚至进一步的实施方式中，可生物降解的单体用丙烯酰胺或丙烯酸酯官能化。

附图说明

图1说明公开的水凝胶颗粒相比于聚苯乙烯小珠的光学性质。

图2描述制备本申请标记的水凝胶颗粒的方法。

图3提供本申请标记的水凝胶颗粒的亮视野图像和荧光图像。

图4说明本申请水凝胶颗粒作为展示多种光学散射性质的细胞类型的标定物的用途。

图5提供显示流式细胞仪的液滴间延迟与水凝胶颗粒直径之间关系的数据(dating)。

图6提供中国仓鼠卵巢细胞(6A和6B)和本申请水凝胶颗粒(6C和6D)的亮视野图像(6A和6C)和荧光图像(6B和6D)。

图7提供数据，其显示人口腔黏膜细胞与包封不同量的DNA的水凝胶颗粒的比较，通过荧光激活细胞分选系统(FACS)测定。

图8提供包封不同浓度的纳米粒子的水凝胶颗粒的数据，其表明侧向散射的调节独立于前向散射。

图9提供用不同百分比聚合物制备的水凝胶颗粒的数据，其表明通过前向散射测量折射率的调节。

图10显示调节成匹配和/或模拟所需细胞种群指标的水凝胶参数的一种实施方式。

图11和12是显示如何调整水凝胶颗粒的前向散射性质、侧向散射性质和表面性质的实施方式的示意图。

图13是各种水凝胶颗粒(A)和(B)和商业血液样本(C)的散点图。

具体实施方式

除非上下文明确指出，否则不定冠词“一个”和“一种”和定冠词“这个”意在包括单数和复数两者。

“至少一种”和“一种或多种”可互换使用，表示该冠词可以包括一个或多于一个所列要素。

除非另有指出，否则应该理解说明书和权利要求书中使用的表达成分、反应条件等的量、比率、和数值性质的所有数目在所有情况下均可由术语“约”修饰。

流式细胞仪的几种临界标定(critical calibration)测量法需要精确的时间分辨率，例如设置激光之间的偏移时间，和计算对象的检测和分选之间的延迟时间。由于仪器内的流体条件，精确设置这些正时参数需要使用尺寸与待分析细胞尺寸一样的标定颗粒。正时标定通常使用具有可变荧光强度的聚苯乙烯小珠进行以标定激发源的响应和设置激光间正时延迟和分选延迟。流式细胞仪也可以使用前向散射和侧向散射信号标定，所述信号是靶样本的尺寸和粒度或复杂性的通用量度。这些标定对于细胞仪的精确性能和对于细胞种群(population)的任何下游分析或分选都是关键的。公开的水凝胶颗粒表现出可调的散射性质，且适宜用作多种哺乳动物或细菌细胞类型的标定试剂。对于临床、食品安全、和研究目的而言，散射是在非均相混合物中区分细胞类型的标准度量。

尽管聚苯乙烯颗粒可用于设置一些应用的激光间延迟和分选延迟，但是很多真核细胞类型都处于商购聚苯乙烯颗粒(1-20μm)的尺寸范围外，使其对于这些靶细胞而言几乎不可能精确标定流式细胞仪。同样，如图1所示，聚苯乙烯颗粒在光学性质上基本上是有限度的，其可具有例如侧向散射，这是细胞复杂性的一般量度。聚苯乙烯颗粒因此在用于流式细胞计数法的两种最重要的被动光学测量上是有限度的：FSC(前向散射)，和SSC(侧向散射)，它们分别测量靶细胞的尺寸和复杂性。由于聚苯乙烯的这些限度，用户必须依赖于纯化的细胞系来标定实验的荧光强度、激光间延迟，分选延迟、尺寸和细胞复杂性。这是费时费力的过程，会显著增加流式细胞计数法验证和研究管道的成本。最重要的是，这些标定细胞系会带来生物学变动，在解释数据时导致数据存在差异。

此外，当这些仪器用于临床应用例如为分离人调节性T细胞或干细胞而用于下游细胞疗法时，标定流式细胞仪的品质控制(QC)也是关键的考量。FDA规定，在施用给患者之前，必须证实细胞疗法产品的无菌、身份、纯度、和效力(Riley et al.(2009)。Immunity30，pp.656-665)。因此，聚苯乙烯QC颗粒污染细胞种群也是一个问题，因为聚苯乙烯已牵涉到某些癌症中。另外，由QC标准物污染的在施用给患者之后在体内酶降解或消化的细胞种群可能需要克服它们所引起的污染问题。

本发明解决这些和其它需要，如以下讨论。

一方面，提供了包含水凝胶颗粒群体(plurality)的组合物，其中所述水凝胶颗粒群体的个体水凝胶颗粒各自具有的一种或多种光学性质基本上相似于靶细胞的一种或多种光学性质。所述水凝胶颗粒群体的个体水凝胶颗粒各自包含水凝胶，所述水凝胶通过使一种或多种单体聚合、即从而形成均聚物或共聚物来合成。如以下进一步讨论，使用双官能单体允许将水凝胶进一步衍生化，例如，用荧光染料、细胞表面标记物或其抗原表位结合片段、或其组合衍生化。调节成满足/匹配所需细胞子群落指标的水凝胶参数的一个实例在图10中给出。调节水凝胶性质的方法如本申请所述。调整包括水凝胶组分及其浓度等参数范围的能力提供了调节颗粒以模拟广泛细胞例如本申请所述细胞类型之一的能力。

如上提供，一方面，本发明提供个体水凝胶颗粒，其各自具有的一种或多种光学性质基本上相似于靶细胞的一种或多种光学性质。在一种实施方式中，一种或多种光学性质是侧向散射波形，前向散射波形或二级标记物波形，例如荧光标记物波形，例如结合于水凝胶颗粒表面的荧光标记抗体的荧光标记物波形。本申请使用的“基本上相似”表示至少40％相似，至少50％相似，至少60％相似，至少70％相似，至少80％相似，至少90％相似，至少95％相似，至少96％相似，至少97％相似，至少98％相似或至少99％相似。

本发明部分基于以下预料不到的发现，水凝胶颗粒的一种或多种光学性质可以如下独立地调整：改变水凝胶颗粒的组成，例如，改变组合物中初始单体(或共聚单体)的量；改变表面官能化；改变聚合引发剂的量；或改变交联剂的量。例如，可以调整侧向散射(SSC)，而不会显著影响前向散射(FSC)，反之亦然。此外，可以调节水凝胶颗粒的光学性质(例如折射率)，而对颗粒密度不会产生显著应用。这是令人惊奇且有用的特性，因为用作细胞计数方法例如流式细胞计数法或(荧光激活细胞分选系统)FACS中的细胞替代品的水凝胶颗粒需要最小的密度以便于在这些试验中起作用。

另一方面，提供了制备水凝胶颗粒的方法，其中水凝胶颗粒具有的一种或多种光学性质基本上相似于一种或多种靶细胞的光学性质。在一种实施方式中，水凝胶颗粒具有预定的光学性质。在一种实施方式中，光学性质是SSC，FSC，荧光发射，或其组合。

再在另一方面，提供了标定用于分析靶细胞的细胞计数装置的方法。在一种实施方式中，所述方法包括(a)向所述装置中插入具有至少一种基本上相似于靶细胞的光学性质的水凝胶颗粒；b)使用所述细胞计数装置测量所述水凝胶颗粒的所述至少一种光学性质，从而标定用于分析靶细胞的细胞计数装置。细胞计数装置是本领域已知的，并且包括进行流式细胞计数法和FACS的商购装置。

如上提供，在本发明的一方面，提供了包含水凝胶颗粒的群体的组合物。水凝胶是包含大分子三维网络的材料，这种网络使得其当存在水时可溶胀，当不存在水(或减少水的量)时会收缩，但不溶解于水。溶胀，即，吸水，是由于存在连接于大分子网络或分散在大分子网络内的亲水性官能团产生的。相邻大分子间的交联使这些水凝胶在含水介质中不溶解。交联可能是由于化学结合(即，共价键)或物理结合(即，范德华力，氢键结合，离子力等)。合成制备的水凝胶可以如下制备：使单体性物质聚合以形成主链，和使主链与交联剂交联。本申请提及的术语“水凝胶”是指大分子物质，不管其是脱水状态还是水合状态。水凝胶特别有价值的特征是该物质不管是脱水还是水合状态均保持大体形状。因此，如果水凝胶在脱水状态具有近似球形的形状，则其在水合状态也将是球形的。

在一种实施方式中，本申请公开的水凝胶颗粒包含大于约30％的水、大于约40％的水、大于约50％的水、大于约55％的水、大于约60％的水、大于约65％的水、大于约70％的水、大于约75％的水、大于约80％的水、大于约85％的水、大于约90％的水、或大于约95％的水。在另一种实施方式中，水凝胶颗粒的水含量为约10重量％至约95重量％，或约20重量％至约95重量％，或约30重量％至约95重量％，或约40重量％至约95重量％，或约50重量％至约95重量％，或约60重量％至约95重量％，或约70重量％至约95重量％，或约80重量％至约95重量％。

本申请提供的水凝胶为颗粒形式，如下合成：使本申请提供的一种或多种单体聚合。进行合成以形成个体水凝胶颗粒。在一种实施方式中，单体性物质(单体)聚合以形成均聚物。但是，在另一种实施方式中，合成不同单体性单元(即，共聚单体)的共聚物并将其用于本申请提供的方法。在一种实施方式中，用于本申请所述方法和组合物的单体和共聚单体是双官能单体或包括双官能单体(其中使用共聚单体)。在一种实施方式中，水凝胶在交联剂的存在下合成。在进一步的实施方式中，水凝胶在聚合引发剂的存在下合成。

单体的量可以由本发明的用户改变，例如以获得基本上相似于靶细胞的特定光学性质。在一种实施方式中，单体性组分(即，单体，共聚单体，双官能单体，或其组合，例如，各种交联比率的双/丙烯酰胺，烯丙基胺或为二级标记/缀合提供化学官能度的其它共聚单体或藻酸盐)的存在量为水凝胶的10重量％至约95重量％。在进一步的实施方式中，单体性组分的存在量为水凝胶的约15重量％至约90重量％，或水凝胶的约20重量％至约90重量％。

可用于本发明的各种单体和交联化学的实例提供于Thermo Scientific交联技术手册中题为“Easy molecular bonding crosslinking technology”的内容(可查阅于tools.lifetechnologies.com/content/sfs/brochures/1602163-Crosslinking- Reagents-Handbbook.pdf，其公开内容全部并入本申请以作参考，用于所有目的。例如，肼偶联反应(例如，与NHS酯化合物)或EDC偶联反应(例如，与马来酰亚胺化合物)可用于构建本发明的水凝胶。

在一种实施方式中，用于本申请提供的水凝胶的单体是乳酸，乙醇酸，丙烯酸，甲基丙烯酸1-羟基乙基酯，甲基丙烯酸乙基酯，甲基丙烯酸2-羟基乙基酯(HEMA)，甲基丙烯酸丙二醇酯，丙烯酰胺，N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)，甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸缩水甘油酯，甲基丙烯酸甘油酯(GMA)，甲基丙烯酸甘油酯，乙二醇，富马酸，其衍生化类型，或其组合。

在一种实施方式中，一种或多种以下单体用于本申请以形成本发明的水凝胶：甲基丙烯酸2-羟基乙基酯，甲基丙烯酸羟基乙氧基乙基酯，甲基丙烯酸羟基二乙氧基乙基酯，甲基丙烯酸甲氧基乙基酯，甲基丙烯酸甲氧基乙氧基乙基酯，甲基丙烯酸甲氧基二乙氧基乙基酯，聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯，甲氧基-聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸，甲基丙烯酸钠，甲基丙烯酸甘油酯，甲基丙烯酸羟基丙基酯，甲基丙烯酸羟基丙基酯，或其组合。

在另一种实施方式中，一种或多种以下单体用于本申请以形成可调的水凝胶：丙烯酸苯基酯，甲基丙烯酸苯基酯，丙烯酸苄基酯，甲基丙烯酸苄基酯，丙烯酸2-苯基乙基酯，甲基丙烯酸2-苯基乙基酯，丙烯酸2-苯氧基乙基酯，甲基丙烯酸2-苯氧基乙基酯，丙烯酸苯基硫代乙基酯，甲基丙烯酸苯基硫代乙基酯，丙烯酸2，4，6-三溴苯基酯，甲基丙烯酸2，4，6-三溴苯基酯，丙烯酸五溴苯基酯，甲基丙烯酸五溴苯基酯，丙烯酸五氯苯基酯，甲基丙烯酸五氯苯基酯，丙烯酸2，3-二溴丙基酯，甲基丙烯酸2，3-二溴丙基酯，丙烯酸2-萘基酯，甲基丙烯酸2-萘基酯，丙烯酸4-甲氧基苄基酯，甲基丙烯酸4-甲氧基苄基酯，丙烯酸2-苄氧基乙基酯，甲基丙烯酸2-苄氧基乙基酯，丙烯酸4-氯苯氧基乙基酯，甲基丙烯酸4-氯苯氧基乙基酯，丙烯酸2-苯氧基乙氧基乙基酯，甲基丙烯酸2-苯氧基乙氧基乙基酯，N-苯基丙烯酰胺，N-苯基甲基丙烯酰胺，N-苄基丙烯酰胺，N-苄基甲基丙烯酰胺，N，N-二苄基丙烯酰胺，N，N-二苄基甲基丙烯酰胺，N-二苯基甲基丙烯酰胺，N-(4-甲基苯基)甲基丙烯酰胺，N-1-萘基丙烯酰胺，N-4-硝基苯基丙烯酰胺，N-(2-苯基乙基)丙烯酰胺，N-三苯基甲基丙烯酰胺，N-(4-羟基苯基)丙烯酰胺，N，N-甲基苯基丙烯酰胺，N，N-苯基苯基乙基丙烯酰胺，N-二苯基甲基甲基丙烯酰胺，N-(4-甲基苯基)甲基甲基丙烯酰胺，N-1-萘基甲基丙烯酰胺，N-4-硝基苯基甲基丙烯酰胺，N-(2-苯基乙基)甲基丙烯酰胺，N-三苯基甲基甲基丙烯酰胺，N-(4-羟基苯基)甲基丙烯酰胺，N，N-甲基苯基甲基丙烯酰胺，N，N′-苯基苯基乙基甲基丙烯酰胺，N-乙烯基咔唑，4-乙烯基吡啶，2-乙烯基吡啶，如描述于美国专利号6,657,030，其全部并入本申请以作参考，用于所有目的。

合成单体和生物单体都可用于本申请提供的水凝胶，以形成包含合成组分和生物组分(例如，存在于生物分子上的肽、蛋白质、单糖、二糖、多糖、伯胺巯基、羰基、碳水化合物、羧酸)的合成水凝胶、生物水凝胶、或杂合水凝胶。例如，蛋白质、肽或碳水化合物可以用作独立单体以形成水凝胶，该水凝胶包括或不包括合成单体(或聚合物)且与化学相容共聚单体和交联剂组合(参见例如，Thermo Scientific交联技术手册中题为“Easy molecularbonding crosslinking technology”的内容，可查阅于tools.lifetechnologies.com/ content/sfs/brochures/1602163-Crosslinking-Reagents-Handbook.pdf，其公开内容全部并入本申请以作参考，用于所有目的)。相容的交联剂包括但不限于，胺，羧基，和其它反应性化学侧基。可用于本申请所述水凝胶和单体的代表性的反应性基团列在下表1中。

通常，本领域技术人员常规已知的任何形式的聚合化学/方法可以用于形成聚合物。在一些实施方式中，聚合可以通过紫外线诱导的自由基形成和反应级数催化。在其它实施方式中，公开的水凝胶颗粒通过丙烯酰胺的聚合或丙烯酸酯的聚合制备。例如，在一种实施方式中，丙烯酰胺是可聚合碳水化合物衍生化的丙烯酰胺，如描述于美国专利号6,107,365，其公开内容全部并入本申请以作参考，用于所有目的。如本申请所述且如本领域技术人员已知，丙烯酰胺基团与糖的特异性连接便于施用于多种单糖或级数更高的多糖，例如，血清或组织中发现的合成多糖或源自天然来源的多糖例如糖蛋白。

在一种实施方式中，丙烯酸酯官能化的聚(亚乙基)二醇单体用作水凝胶单体。例如，在一种实施方式中，PEG是丙烯酸酯或丙烯酰胺官能化的PEG。

在一些实施方式中，水凝胶颗粒包含与至少一种双官能单体聚合的单官能单体。一个实例包括但不限于，使用丙烯酰胺和双丙烯酰胺(双官能单体)形成聚丙烯酰胺聚合物。在另一种实施方式中，本申请提供的水凝胶颗粒包含与第二双官能单体聚合的双官能单体。一个实例包括但不限于，用包含相容化学物质的混合组合物例如丙烯酰胺、双丙烯酰胺、和包含众多另外化学物质的双丙烯酰胺结构同系物形成聚合物。化学相容单体、双官能单体、和混合组合的反应对于本领域技术而言是显而易见的，且遵循本领域技术人员已知的化学反应原理。(参考Thermo手册和丙烯酰胺聚合手册)。参见，例如，Thermo Scientific交联技术手册中题为“Easy molecular bonding crosslinking technology”的内容(可查阅于tools.lifetechnologies.com/content/sfs/brochures/1602163-Crosslinking- Reagents-Handbook.pdf)，和聚丙烯酰胺乳化手册(SNF Floerger，可查阅于snf.com.au/downloads/Emulsion_Handbook_E.pdf)，其各自的公开内容完全并入本申请以作参考，用于所有目的。

在一种实施方式中，本申请提供的水凝胶颗粒包含可聚合的单官能单体并且是单官能丙烯酸类单体。用于本申请的单官能丙烯酸类单体的非限制性实例是丙烯酰胺；甲基丙烯酰胺；N-烷基丙烯酰胺，例如N-乙基丙烯酰胺，N-异丙基丙烯酰胺或N-叔丁基丙烯酰胺；N-烷基甲基丙烯酰胺，例如N-乙基甲基丙烯酰胺或N-异丙基甲基丙烯酰胺；N，N-二烷基丙烯酰胺，例如N，N-二甲基丙烯酰胺和N，N-二乙基-丙烯酰胺；N-[(二烷基氨基)烷基]丙烯酰胺，例如N-[3-(二甲基氨基)丙基]丙烯酰胺或N-[3-(二乙基氨基)丙基]丙烯酰胺；N-[(二烷基氨基)烷基]甲基丙烯酰胺，例如N-[3-二甲基氨基)丙基]甲基丙烯酰胺或N-[3-(二乙基氨基)丙基]甲基丙烯酰胺；丙烯酸(二烷基氨基)烷基酯，例如丙烯酸2-(二甲基氨基)乙基酯，丙烯酸2-(二甲基氨基)丙基酯，或丙烯酸2-(二乙基氨基)乙基酯；和甲基丙烯酸(二烷基氨基)烷基酯，例如甲基丙烯酸2-(二甲基氨基)乙基酯。

双官能单体是可与本申请单官能单体聚合以形成本申请所述水凝胶的任何单体，所述双官能单体进一步包含第二官能团，该第二官能团可参与第二反应，例如，荧光团或细胞表面受体(或其结构域)的缀合。

在一些实施方式中，双官能单体选自：烯丙基胺，烯丙基醇，异硫氰酸烯丙基酯，烯丙基氯，和烯丙基马来酰亚胺。

双官能单体可以是双官能丙烯酸类单体。双官能丙烯酸类单体的非限制性实例是N，N′-亚甲基双丙烯酰胺，N，N′-亚甲基双甲基丙烯酰胺，N，N′-亚乙基双丙烯酰胺，N，N′-亚乙基双甲基丙烯酰胺，N，N′-亚丙基双丙烯酰胺和N，N′-(1，2-二羟基亚乙基)双丙烯酰胺。

高阶支化链和直链共聚单体可在聚合物混合物中被取代，以调整折射率同时保持聚合物密度，如描述于美国专利号6,657,030，其全部并入本申请以作参考，用于所有目的。

在一些实施方式中，水凝胶包含调整水凝胶光学性质的分子。以下进一步讨论能够改变水凝胶光学性质的分子。

在一种实施方式中，个体水凝胶颗粒或其群体包含作为水凝胶单体的可生物降解的聚合物。在一种实施方式中，可生物降解的聚合物是基于聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚己内酯(PCL)的聚(酯)，和它们的共聚物。在一种实施方式中，可生物降解的聚合物是碳水化合物或蛋白质，或其组合。例如，在一种实施方式中，单糖、二糖、或多糖(例如，葡萄糖，蔗糖，或麦芽糊精)、肽、蛋白质(或其结构域)用作水凝胶单体。其它可生物降解的聚合物包括PHB-PHV类的聚(羟基玩醇酸酯)，另外的聚(酯)，和天然聚合物，例如，改性的多(糖)类，例如，淀粉，纤维素，和壳聚糖。在另一种实施方式中，生物相容聚合物是黏附蛋白，纤维素，碳水化合物，淀粉(例如，麦芽糊精，2-羟基乙基淀粉，海藻酸)，右旋糖苷，木质素，聚氨基酸，氨基酸，或壳质。这样的可生物降解的聚合物可商购，例如，购自Sigma Aldrich(St.Louis，MO)。

在一种实施方式中，蛋白质仅包含天然氨基酸。但是，本发明并不限于此。例如，自组装人工蛋白和含有非天然氨基酸(例如，结合到非核糖体肽或经合成方法合成引入的那些，参见例如，Zhang et al.(2013)。当前观点在Structural Biology 23，pp.581-587中，其公开内容全部并入本申请以作参考，用于所有目的)、或其蛋白质结构域的蛋白质也可以用作水凝胶单体。可结合到这些组合物中的非天然(非自然)氨基酸的范围是本领域技术人员熟知的(Zhang et al.(2013)。当前观点在Structural Biology 23，pp.581-587中；其完全并入本申请以作参考，用于所有目的)。在一种实施方式中，可生物降解的聚合物用作共聚单体，即，单体混合物中。在一种实施方式中，可生物降解的聚合物是双官能单体。

在一种实施方式中，生物单体用丙烯酰胺或丙烯酸酯官能化。例如，在一种实施方式中，可聚合丙烯酰胺官能化的生物分子是丙烯酰胺或丙烯酸酯官能化的蛋白质(例如，丙烯酰胺官能化的胶原蛋白或官能化的胶原蛋白结构域)，丙烯酰胺或丙烯酸酯官能化的肽，或丙烯酰胺或丙烯酸酯官能化的单糖、二糖或多糖。

任何单糖、二糖或多糖(官能化的或相反)可以用作水凝胶单体。在一种实施方式中，丙烯酰胺或丙烯酸酯官能化的单糖、二糖、或多糖用作可聚合的水凝胶单体。在一种实施方式中，结构多糖用作可聚合的水凝胶单体。在进一步的实施方式中，结构多糖是阿拉伯木聚糖，纤维素，壳质或胶质。在另一种实施方式中，海藻酸(海藻酸盐)用作可聚合的水凝胶单体。再在另一种实施方式中，糖胺多糖(GAG)在本申请提供的水凝胶中用作可聚合的单体。在进一步的实施方式中，GAG是硫酸软骨素，硫酸皮肤素，硫酸角质素，肝素，硫酸肝素或透明质酸(在本领域也称为透明质酸酶或透明质酸盐/酯)，其用作可聚合水凝胶单体。相容生物单体和它们的反应性化学的另外的范围是本领域技术人员已知的并且遵循一般化学反应性原理。

可以结合的生物相容单体的另外的范围是本领域已知的，参见，例如不可降解的生物相容单体公开于Shastri(2003)。Current Pharmaceutical Biotechnology 4，pp.331-337，其完全并入本申请以作参考，用于所有目的。其它单体提供于de MoraesPorto(2012).Polymer Biocompatibility，Polymerization，Dr.Ailton De Souza Gomes(Ed.)，ISBN：978-953-51-0745-3；InTech，DOI：10.5772/47786；Heller et al.(2010).Journal of Polymer Science Part A：Polymer Chemistry 49，pp.650-661；FinalReport for Biocompatible Materials(2004)，The Board of the BiocompatibleMaterials and the Molecular Engineering in Polymer Science programmes，ISBN91-631-4985-0，其各自的公开内容完全并入本申请以作参考。

在一种实施方式中，用于本申请所述水凝胶的生物相容单体包括而甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)，甲基丙烯酸2-羟基乙基酯(HEMA)，甲基丙烯酸甲酯(MMA)，甲基丙烯酰氧基甲基三甲基硅烷(TMS-MA)，N-乙烯基-2-吡咯烷酮(N-VP)，苯乙烯，或其组合。

用于本发明的天然存在的水凝胶包括可得自天然来源的各种多糖，例如植物，藻类，真菌，酵母，海洋无脊椎动物和节肢动物。非限制性实例包括琼脂糖，右旋糖苷，壳质，基于纤维素的化合物，淀粉，衍生化淀粉等。这些将通常具有重复的葡萄糖单元作为多糖主链的主要部分。这些多糖的交联化学是本领域已知的，参见例如Thermo Scientific交联技术手册中题为“Easy molecular bonding crosslinking technology”的内容，(可查阅于tools.lifetechnologies.com/content/sfs/brochures/1602163-Crosslinking- Reagents-Handbook.pdf)。

在一种实施方式中，透明质酸用作水凝胶单体(或作为单一单体或作为共聚单体)。在一种实施方式中，透明质酸例如用丙烯酸酯或丙烯酰胺官能化。透明质酸是由通过交替的β-1，4糖苷键和β-1，3糖苷键连接在一起的N-乙酰葡糖胺和葡糖醛酸的二糖重复单元构成的高分子量GAG。在人体中，透明质酸盐/酯存在于几种软结缔组织中，包括皮肤，脐带，滑膜液，和玻璃体。因此，在一种实施方式中，当需要模拟皮肤细胞、脐带细胞或玻璃体细胞时，在一种实施方式中，透明质酸用作水凝胶单体。制造水凝胶颗粒的方法描述于Xuet al.(2012).Soft Matter.8，pp.3280-3294，其公开内容完全并入本申请以作参考，用于所有目的。如本申请所述，根据所需的交联剂和用于形成水凝胶颗粒的其它单体，透明质酸可以用各种反应性臂(reactive handles)衍生化。

再在其它实施方式中，壳聚糖、由无规分布的β-(1-4)-连接的D-葡糖胺(脱乙酰基单元)和N-乙酰基-D-葡糖胺(乙酰化单元)组成的直链多糖用作水凝胶单体(或作为单独单体或作为共聚单体)。

用作水凝胶单体或共聚单体的其它多糖包括但不限于，琼脂，琼脂糖，海藻酸，微藻多糖酸(alguronic acid)，α-葡聚糖，支链淀粉，直链淀粉，阿拉伯木聚糖，β-葡聚糖，胼胝质，卡苏兰(capsulan)，角叉菜胶多糖(例如，κ、ι或λ类)，纤维糊精，动物纤维素，纤维素，壳质，壳聚糖，金藻昆布多糖，凝胶多糖，环糊精，α-环糊精，糊精，聚蔗糖，果聚糖，岩藻依聚糖，半乳葡甘露聚糖，半乳甘露聚糖，半乳糖胺半乳糖，结冷胶，葡聚糖，葡甘露聚糖，葡萄醛酸木聚糖，糖萼，糖原，半纤维素，同多糖，羟丙甲纤维素，艾考糊精，菊粉，开菲尔多糖，海带多糖，蘑菇多糖，果聚糖多糖，地衣多糖，甘露聚糖，混联葡聚糖，裸藻淀粉，果胶酸，果胶，喷他淀粉，植物糖原，平菇葡聚糖，聚葡萄糖，多糖肽，金属卟啉，普鲁兰多糖，裂褶菌多醣，左旋糖，西佐糖，文莱胶，黄原胶，木聚糖，木葡聚糖，酵母聚糖，或其组合。如全文所述，根据所需交联剂和/或用于水凝胶的另外的共聚单体，多糖可以是进一步官能化的。例如，在一种实施方式中，一种或多种本申请所述的多糖用丙烯酸酯或丙烯酰胺官能化。

在一种实施方式中，个体水凝胶颗粒或其群体包含肽、蛋白质、蛋白质结构域、或其组合作为水凝胶单体或其群体。在进一步的实施方式中，蛋白质是结构蛋白，或其结构域，例如，例如蚕丝蛋白，弹性蛋白，肌联蛋白或胶原蛋白，或其结构域。在一种实施方式中，蛋白质是细胞外基质(ECM)成分(例如，胶原蛋白，弹性蛋白，蛋白多糖)。在甚至进一步的实施方式中，结构蛋白是胶原蛋白。再在进一步的实施方式中，胶原蛋白是胶原蛋白I型，胶原蛋白II型，或胶原蛋白III型或其组合。在另一种实施方式中，水凝胶单体包括蛋白多糖。在进一步的实施方式中，蛋白多糖是核心蛋白多糖，双糖链蛋白多糖，睾丸蛋白聚糖，双库尼茨抑制剂，纤维调节素，光蛋白聚糖，或其结构域。

在另一种实施方式中，丙烯酸酯官能化的结构蛋白水凝胶单体用作本申请提供的水凝胶的组分(例如，丙烯酸酯官能化的蛋白质或蛋白质结构域，例如，蚕丝蛋白，弹性蛋白，肌联蛋白，胶原蛋白，蛋白多糖，或其官能化的结构域)。在进一步的实施方式中，丙烯酸酯官能化的结构蛋白水凝胶单体包括蛋白多糖，例如，核心蛋白多糖，双糖链蛋白多糖，睾丸蛋白聚糖，双库尼茨抑制剂，纤维调节素，光蛋白聚糖，或其结构域。

在一种实施方式中，PEG单体和寡肽可以模拟细胞外基质蛋白质用于本申请提供的水凝胶，例如，用乙烯基砜官能化的多臂PEG、整合素结合肽和双-半胱氨酸基质金属蛋白酶肽进行，如由Lutolf et al.(2003).Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100，5413-5418所述，其完全并入本申请以作参考，用于所有目的。在该特定的实施方式中，水凝胶通过二硫醇化寡肽和PEG上的乙烯基砜基团之间的Michael类型加成反应形成。可以结合到本申请的另外的相容性化学物质的范围是本领域技术人员显而易见的并且遵循一般化学反应性原理，参见例如Thermo Scientific交联技术手册中题为“Easy molecular bonding crosslinkingtechnology”的内容(可查阅于tools.lifetechnologies.com/content/sfs/brochures/ 1602163-Crosslinking-Reagents-Handbook.pdf)。

天然蛋白质中的其它生物活性结构域也可以用作水凝胶单体或其部分。例如，细胞粘附整合素结合结构域、控释亲和力结合结构域或谷氨酰胺转胺酶交联结构域可以用于本申请提供的水凝胶。制备这些水凝胶的详情可见Martino et al.(2009).Biomaterials30，1089；Martino et al.(2011).Sci.Trans.Med.3，100ra89；Hu and Messersmith(2003).J.Am.Chem.Soc.125，14298，其各自完全并入本申请以作参考，用于所有目的。

在一种实施方式中，重组DNA方法用于产生蛋白质，该蛋白质设计为响应pH温度的变化而胶凝，例如，通过Petka et al.(1998).Science 281，pp.389-392所述的方法进行，其完全并入本申请以作参考，用于所有目的。简言之，蛋白质由位于水溶性聚电解质段侧面的末端亮氨酸拉链结构域组成。在近乎中性的水性溶液中，末端结构域的卷曲螺旋聚集体形成三维水凝胶聚合物网络。

可用于使本申请提供的水凝胶交联的常用交联剂包括但不限于二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)，二甲基丙烯酸四甘醇酯，和N，N′-15-亚甲基双丙烯酰胺。可以使用的另外的交联剂的范围是本领域技术人员显而易见的并且遵循一般化学反应性原理，参见例如Thermo Scientific交联技术手册中题为“Easy molecular bonding crosslinkingtechnology”的内容(可查阅于tools.lifetechnologies.com/content/sfs/brochures/ 1602163-Crosslinking-Reagents-Handbook.pdf)。

在一种实施方式中，水凝胶的聚合由过硫酸盐或催化自由基形成的等效引发剂引发。相容引发剂的范围是本领域技术人员已知的并且遵循一般化学反应性原理，参见例如Thermo Scientific交联技术手册中题为“Easy molecular bonding crosslinkingtechnology”的内容(可查阅于tools.lifetechnologies.com/content/sfs/brochures/ 1602163-Crosslinking-Reagents-Handbook.pdf)。过硫酸盐可以是任何水溶性过硫酸盐。水溶性过硫酸盐的非限制性实例是过硫酸铵和碱金属过硫酸盐。碱金属包括锂，钠和钾。在一些实施方式中，过硫酸盐是过硫酸铵或过硫酸钾。在进一步的实施方式中，本申请提供的水凝胶的聚合由过硫酸铵引发。

水凝胶的聚合可以由可催化聚合不稳定的化学侧基的形成的促进剂加速。可用促进剂的范围是本领域技术人员已知的并且遵循一般化学反应性原理，参见例如ThermoScientific交联技术手册中题为“Easy molecular bonding crosslinking technology”的内容(可查阅于tools.lifetechnologies.com/content/sfs/brochures/1602163- Crosslinking-Reagents-Handbook.pdf)。在一种实施方式中，促进剂是叔胺。叔胺可以是任何水溶性叔胺。在一种实施方式中，促进剂用于聚合反应且为N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，3-二甲基氨基)丙腈，或N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(TEMED)。在另一种实施方式中，促进剂用于聚合反应且为偶氮二(异丁腈)(AIBN)。

如上讨论，用于本申请组合物和方法的水凝胶可以包括本申请所述的任何单体性单元和交联剂，且在一方面，作为水凝胶颗粒通过使液滴制备(参见，例如，图2)。制备多个液滴(包括流体液滴和僵化液滴)微流体方法是本领域技术人员已知的，且描述于美国专利公开号2011/0218123和美国专利号7,294,503，各自全部并入本申请以作参考，用于所有目的。这样的方法提供包含第一流体且基本上由第二流体包围的多个液滴，其中第一流体和第二流体基本上不溶混(例如，包含基本上由油基液体包围的水基液体液滴)。

多个流体液滴(例如，使用微流体装置制备)可以是多分散的(例如，具有一系列不同尺寸)，或在一些情况下，流体液滴可以是单分散的或基本上单分散的，例如，具有直径的均匀分布，例如，使得不多于约10％、约5％、约3％、约1％、约0.03％、或约0.01％的液滴具有的平均直径大于平均直径的约10％、约5％、约3％、约1％、约0.03％、或约0.01％。如本申请使用的液滴的群落的平均直径是指液滴的直径的算术平均值。可以例如通过光散射技术测量颗粒的平均直径。在一种实施方式中，如下调整水凝胶颗粒的平均直径：例如改变微流体装置的通道内第一和第二流体的液流的流速，或改变微流体装置的通道的体积。

另外，本申请提供水凝胶颗粒的群落，其包含多个水凝胶颗粒，其中水凝胶颗粒的群落基本上是单分散的。

术语微流体是指包括至少一个流体通道的装置、设备或系统，所述流体通道的横截面尺寸小于1mm，且长度与垂直于通道的最大横截面尺寸之比为至少约3∶1。包括微流体通道的微流体装置特别适于制备多个单分散液滴。

可用于本发明的微流体系统的非限制性实例公开于美国专利申请公开号2006/0163385；美国专利申请公开号2005/0172476；美国专利申请公开号2007/000342；国际专利申请公开号WO2006/096571；美国专利申请公开号2007/0054119；美国专利号7,776,927；和国际专利申请公开号WO2006/078841，各自全部并入本申请以作参考，用于所有目的。

液滴尺寸与微流体通常尺寸有关。微流体通道可以具有任何尺寸，例如，垂直于液流的最大尺寸为小于约5mm或2mm，或小于约1mm，或小于约500μm，小于约200μm，小于约100μm，小于约60μm，小于约50μm，小于约40μm，小于约30μm，小于约25μm，小于约10μm，小于约3μm，小于约1μm，小于约300nm，小于约100nm，小于约30nm，或小于约10nm。

液滴尺寸可以通过调整相对流速来调节。在一些实施方式中，液滴直径等于通道宽度，或在通道宽度的约10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％内。

公开的水凝胶颗粒的尺寸基本上相似于由其形成的小滴。因此，在一些实施方式中，水凝胶的直径为小于约1μm，小于约2μm，小于约5μm，小于约10μm，小于约15μm，小于约20μm，小于约25μm，小于约30μm，小于约35μm，小于约40μm，小于约45μm，小于约50μm，小于约60μm，小于约70μm，小于约80μm，小于约90μm，小于约100μm，小于约120μm，小于约150μm，小于约200μm，小于约250μm，小于约300μm，小于约350μm，小于约400μm，小于约450μm，小于约500μm，小于约600μm，小于约800μm，或小于1000μm。在一些实施方式中，水凝胶的直径为大于约1μm，大于约2μm，大于约5μm，大于约10μm，大于约15μm，大于约20μm，大于约25μm，大于约30μm，大于约35μm，大于约40μm，大于约45μm，大于约50μm，大于约60μm，大于约70μm，大于约80μm，大于约90μm，大于约100μm，大于约120μm，大于约150μm，大于约200μm，大于约250μm，大于约300μm，大于约350μm，大于约400μm，大于约450μm，大于约500μm，大于约600μm，大于约800μm，或大于1000μm。在一种实施方式中，水凝胶颗粒的直径为5μm至100μm。

在一些实施方式中，公开的水凝胶颗粒的形状为球形。

在一些实施方式中，公开的水凝胶颗粒不包含琼脂糖。

在一种实施方式中，水凝胶颗粒通过悬浮液聚合进行，该聚合法在本领域也称为成珠聚合、珠状聚合、或成粒聚合(参见Elbert(2011)。Acta Biomater.7，pp.31-56，其完全并入本申请以作参考，用于所有目的)。在悬浮液聚合中，单体不溶于连续相，例如单体水性溶液在油连续相中。在悬浮液聚合中，聚合引发在富含单体的液滴内进行，且在任何时候需要针对每个液滴存在大于一个自由基才能进行。在一种实施方式中，单体相包括可以是双官能单体或多种单体物质(共聚单体，其可以是多种双官能单体)的单体。在一种实施方式中，单体相包括引发剂和/或交联剂。

乳液聚合也可以用于形成本申请所述的水凝胶颗粒。但是，类似于悬浮液聚合，在乳液聚合中，单体在连续相中具有差的溶解性，聚合引发在单体液体之外进行(参见Elbert(2011).Acta Biomater.7，pp.31-56，其完全并入本申请以作参考，用于所有目的)。在乳液聚合实施方式中，引发剂引起溶解于连续相中的单体(或共聚单体)或在存在表面活性剂时包含在胶束中的单体的链增长。

在另一种实施方式中，水凝胶颗粒通过沉淀聚合形成，例如描述于Elbert(2011).Acta Biomater.7，pp.31-56，其完全并入本申请以作参考，用于所有目的。沉淀聚合是一种利用单体和聚合物溶解度之差来产生微粒子的技术。具体地，已知较大的聚合物链的溶解度通常小于较小的聚合物链。因此，针对具有的分子量，相分离可能是有利的。沉淀聚合最初作为在单一相、均匀系统中的溶液聚合开始。在一种实施方式中，在聚合开始以后，立即存在相对较高浓度的聚合物链，利于通过成核作用发生相分离。随着聚合的进行，聚合物链的浓度变低，在可出现新颗粒的成核之前，现存颗粒捕获链。因此，颗粒的成核仅在反应开始后即刻出现片刻，这在一种实施方式中使颗粒的尺寸分布较窄。另外的方法包括但不限于光刻粒子形成(Helgeson et al.(2011).Curr.Opin.Colloid.Interface Sci.16，pp.106-117，其完全并入本申请以作参考，用于所有目的)，膜乳化(例如，通过Nanomi B.V.(Netherlands)所述的微筛乳化(micosieve emulsification)工艺技术进行)，和微通道乳化(Sugiura et al.(2002).Languimir 18，pp.5708-5712，其完全并入本申请以作参考)，和本体乳化(SNF Floerger，可查阅于snf.com.au/downloads/Emulsion_Handbook_E.pdf，其完全并入本申请以作参考)。

在一种实施方式中，水凝胶颗粒在具有两个在单体水性溶液的中心流处交汇的油通道的微流体装置内形成。在该实施方式中，液滴在两个通道和中心流的界面处形成，打破油包水乳液中的液滴。在一种实施方式中，一旦形成液滴，它们在聚合之前稳定化，例如，通过向油相中添加表面活性剂稳定化。但是，在另一种实施方式中，液滴在聚合之前不稳定化。在一种实施方式中，单体的聚合如下触发：在形成初始液滴之后，向油通道之一或两者添加促进剂(例如，N，N，N′，N′-四甲基乙二胺)。

如上提供的单体水性溶液可以包括单一单体物质或多种单体物质。单体水性溶液可以包括共聚单体、双官能单体或其组合。在一种实施方式中，单体或单体的群体可以包括双官能单体，例如，上述单体之一。如下所述，共聚单体可以用于调整前向散射或侧向散射，例如，通过调节水凝胶颗粒的折射率进行。

在一种实施方式中，单体水性溶液的中心流包含交联剂，例如，N，N′-双丙烯酰胺。在进一步的实施方式中，除了单体之外，单体水性溶液的中心流还包含交联剂和促进剂。再在进一步的实施方式中，单体水性溶液包含引发剂，例如氧化剂，如过硫酸铵。

前向散射经由调节凝胶的折射率来调整，折射率的调节通过添加共聚单体丙烯酸烯丙基酯和甲基丙烯酸烯丙基酯实现(也参见图11和12)。前向散射也可以用包含足够光学分辨率/尺寸/密度的侧向散射纳米粒子调节，包括但不限于，二氧化硅和/或PMMA颗粒的较高密度胶态悬浮体。液滴的侧向散射如下调节：在聚合之前，将二氧化硅纳米粒子和/或PMMA(聚(甲基丙烯酸甲酯))粒子的胶态悬浮体(～100nm)添加到中心水相(图11和12)。

在一种实施方式中，小珠、多个小珠、生物分子、或多个生物分子嵌埋(包封)在水凝胶颗粒内。在一种实施方式中，包封的小珠或生物分子用于模拟靶细胞的一个或多个细胞内细胞器，或当细胞吞没颗粒后模拟细胞本身。在一种实施方式中，包封或嵌埋小珠或生物分子在水凝胶颗粒形成时完成。例如，小珠可以按适当的浓度悬浮，从而使平均一个小珠嵌埋/包封在单个水凝胶颗粒中。小珠悬浮液可以包含例如在单体的水性溶液内。类似地，生物分子或生物分子的混合物可以结合到单体的水性溶液中以包封一个或多个生物分子。

或者，一旦例如通过上述方法形成水凝胶颗粒，在一种实施方式中，其可以进一步如下处理：例如，将小珠、多个小珠、生物分子或多个生物分子嵌埋在水凝胶颗粒内。

因此，在本发明的一方面，提供了包含嵌埋物质的水凝胶。

在一种实施方式中，嵌埋物质是嵌埋分子，例如生物分子。生物分子可以是单一物质或多种不同物质。例如，蛋白质、肽、碳水化合物、核酸或其组合可以包封在本发明水凝胶颗粒内。此外，不同的核酸分子(例如，具有不同序列或核酸类型，例如基因组DNA，信使RNA或DNA-RNA杂合体)可以由本发明水凝胶颗粒包封。这些可以包含任何蛋白质或核酸作为包含不稳定化学侧基(或可以由供应商改性(例如，Integrated DNA Technology化学侧基改性)的生物材料的两种形式。这样的侧基与共聚单体组合物中常见的反应化学物质(例如丙烯酸酯化学物质，NHS酯，伯胺，铜催化的点击化学(Sharpless))相容。可用的包含相容化学物质的嵌埋分子的范围是本领域技术人员可理解的。

在一种实施方式中，制造水凝胶颗粒的不同子群落，每种具有不同浓度的生物分子。在进一步的实施方式中，生物分子是核酸，蛋白质，细胞内离子例如酸钙(或用户选择的其它生物分子，例如，钙)。在另一种实施方式中，制造水凝胶颗粒的不同子群落，每种具有不同浓度的药物物质。在一种实施方式中，药物物质是生物分子(即，生物药物，抗体药物，抗体药物缀合物，蛋白质/酶，肽，非核糖体肽，或有关分子)或小分子合成药物(例如，I/II/III型聚酮化合物，具有生物活性性质的非核糖体肽，或通常由本领域技术人员归类的其它小分子实体)。

在这点上，本发明特别适用于确定试验分辨率，其中将细胞中的各核酸或蛋白质内容物染色。在一种实施方式中，本申请提供的水凝胶颗粒的不同群落用已知的不同量的细胞内物质例如核酸或蛋白质包封。将个体水凝胶颗粒中的细胞内物质染色，通过细胞计数装置测量多种群落的个体水凝胶的荧光。这使得能够产生标准曲线以确立细胞内试验的灵敏度和动态量程。一旦确立，可以通过细胞仪运行样本以检测是否存在靶细胞，和定量各靶细胞中细胞内物质的量。在一种实施方式中，嵌埋的物质是传染病生物标记物，例如传染病生物标记物数据库(IDBD，参见Yang et al.(2008)IDBD：Infectious DiseaseBiomarker Database.Nucleic Acid Res.36，pp.D455-D460，其完全并入本申请以作参考，用于所有目的)中的传染病生物标记物之一。在进一步的实施方式中，传染病生物标记物是以下的生物标记物：胃肠道感染，呼吸道感染，神经系统感染，泌尿生殖器感染，病毒感染，出血热，动物传染病，虫媒病毒，抗生素耐药性或生物恐怖。在进一步的实施方式中，病毒感染是埃博拉病毒感染。

在一种实施方式中，本申请提供的方法用于确定细胞核酸定量试验的灵敏度和/或动态量程。在该实施方式中，对于样本，询查样本内(是否存在)的细胞类型，以及细胞内的细胞核酸的量。

在另一种实施方式中，本发明提供确定细胞内蛋白质定量试验的分辨率和/或灵敏度的手段。在一种实施方式中，水凝胶颗粒以各种浓度包封已知量的蛋白质，然后用适当的蛋白质抗体染色。测量各种颗粒的荧光以确定试验的灵敏度和/或动态量程。然后将该荧光值与从样本中的细胞获得的荧光值相比较，以确定是否存在靶细胞，以及其是否包含细胞内蛋白质，以及蛋白质的量。

在一种实施方式中，调节个体水凝胶颗粒，使其具有的至少一种光学性质基本上相似于存在于母血中存在的循环肿瘤细胞或胎儿细胞。个体颗粒用已知量的待分析生物分子嵌埋。对于特定细胞类型，颗粒用于产生生物分子检测试验的标准曲线。

如上提供，在本发明的一方面，提供包含嵌埋的物质的水凝胶。在一种实施方式中，嵌埋的物质是一个小珠或多个小珠。在一种实施方式中，水凝胶颗粒用单个小珠嵌埋。在另一种实施方式中，对于个体水凝胶，嵌埋的小珠在多个水凝胶颗粒中的平均数为1。

在将一个或多个小珠嵌埋进水凝胶颗粒的情况中，在一种实施方式中，为了流式细胞计数试验的品质控制，将一个或多个小珠的光学性质水凝胶颗粒的FSC和SSC性质组合使用。例如，在一种实施方式中，嵌埋的小珠用作标定流式细胞仪系统的控制物，包括激光源，光学性质，和流量。在另一种实施方式中，嵌埋的小珠用作定量样本例如特定细胞中的荧光量的手段。关于这点，各种浓度的嵌埋的小珠可以用于产生荧光标准曲线，以确定细胞是否表达某些标记物以及处于何种表达水平。

在一种实施方式中，直径为约1μm至约3μm、约2μm至约4μm或约3μm至约7μm的小珠嵌埋在本申请提供的水凝胶中。例如，在一种实施方式中，小珠的直径为约3μm至约3.5μm。在进一步的实施方式中，小珠是荧光小珠。在另一种实施方式中，小珠的直径为约1μm至约2.5μm或约1.5μm至约3μm。在进一步的实施方式中，小珠是荧光小珠且可以是内部染色的或在其表面染色。在甚至进一步的实施方式中，荧光小珠是内部染色的。不希望受任何理论限制，认为内部染色使荧光团与可引起荧光输出变化的环境相互作用隔绝。

如上提供，在一种实施方式中，嵌埋的小珠是荧光小珠，在进一步的实施方式中，荧光小珠是内部染色的。本领域技术人员能够选择适当的荧光团来与嵌埋的小珠联用。在一种实施方式中，小珠用以下荧光染料中的一种或多种衍生化：6-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基曙红；5-羧基荧光素；6羧基荧光素；5-(和-6)-羧基荧光素；S-羧基荧光素-二-(5-羧基甲氧基-2-硝基苄基)醚，-丙氨酸-甲酰胺、或琥珀酰亚胺酯；5-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯；6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯；5-(4，6-二氯三嗪基)氨基荧光素；2′，7′-二氟荧光素；曙红-5-异硫氰酸酯；赤藓红5-异硫氰酸酯；6-(荧光素-5-甲酰氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；6-(荧光素-5-(和-6)-甲酰氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；荧光素-S-EX琥珀酰亚胺酯；荧光素-5-异硫氰酸酯；荧光素-6-异硫氰酸酯；

488羧酸、或琥珀酰亚胺酯；

488异硫氰酸酯；

488-X琥珀酰亚胺酯；

500羧酸；

500羧酸、琥珀酰亚胺酯或三乙铵盐；

514羧酸；

514羧酸或琥珀酰亚胺酯；罗丹明绿^TM羧酸、琥珀酰亚胺酯或盐酸盐；罗丹明绿^TM羧酸、三氟乙酰胺或琥珀酰亚胺酯；罗丹明绿^TM-X琥珀酰亚胺酯或盐酸盐；罗德尔绿^TM羧酸，N，O-二-(三氟乙酰基)或琥珀酰亚胺酯；二-(4-羧基哌啶基)砜罗丹明或二(琥珀酰亚胺酯)；5-(和-6)羧基萘并荧光素，5-(和-6)羧基萘并荧光素琥珀酰亚胺酯；5-羧基罗丹明6G盐酸盐；6-羧基罗丹明6G盐酸盐，5-羧基罗丹明6G琥珀酰亚胺酯；6-羧基罗丹明6G琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基罗丹明6G琥珀酰亚胺酯；5-羧基-2′，4′，5′，7′-四溴砜荧光素琥珀酰亚胺酯或二-(二异丙基乙基铵)盐；5-羧基四甲基罗丹明；6-羧基四甲基罗丹明；5-(和-6)-羧基四甲基罗丹明；5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯；6-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯；6-羧基-X-罗丹明；5-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯；6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯；5-羧基-X-罗丹明三乙铵盐；丽丝胺^TM罗丹明B磺酰氯；孔雀绿；异硫氰酸酯；

单(磺基琥珀酰亚胺酯)；

21羧酸或琥珀酰亚胺酯；

7羧酸或琥珀酰亚胺酯；罗丹明红TM-X琥珀酰亚胺酯；6-(四甲基罗丹明-5-(和-6)-甲酰氨基)己酸；琥珀酰亚胺酯；四甲基罗丹明-5-异硫氰酸酯；四甲基罗丹明-6-异硫氰酸酯；四甲基罗丹明-5-(和-6)-异硫氰酸酯；

磺酰基；

磺酰氯；

-X STP酯或钠盐；

-X琥珀酰亚胺酯；

-X琥珀酰亚胺酯；和X-罗丹明-5-(和-6)异硫氰酸酯，商购自Invitrogen的

染料，其包括但不限于

FL；

TMR STP酯；

TR-X STP酯；

630/650-X STP酯；

650/665-X STP酯；6-二溴-4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3，5-二丙酸；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-戊酸；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-戊酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3丙酸；磺基琥珀酰亚胺酯或钠盐；6-((4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酰基)氨基)己酸；6-((4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酰基)氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；N-(4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酰基)磺基丙氨酸，琥珀酰亚胺酯或三乙铵盐；6-4，4-二氟-1，3-二甲基-5-(4-甲氧基苯基)-4-硼杂3a，4a4，4-二氟-5，7-二苯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；4，4-二氟-5，7-二苯基-4-硼杂3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-苯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；琥珀酰亚胺酯；6-((4，4-二氟-5-苯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酰基)氨基己酸或琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-(4-苯基-1，3-丁二烯基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-(2-吡咯基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；6-(((4，4-二氟-5-(2-吡咯基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-基)苯乙烯氧基)乙酰基)氨基己酸或琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-苯乙烯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；4，4-二氟-5-苯乙烯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-1，3，5，7-四甲基-4-硼杂-3a，4a二氮杂-对称-引达省-8-丙酸；4，4-二氟-1，3，5，7-四甲基-4硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-8-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；6-(((4-(4，4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a，4a二氮杂对称-引达省-3-基)苯氧基)乙酰基)氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；和6-(((4，4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-yl)苯乙烯氧基)乙酰基)氨基己酸或琥珀酰亚胺酯，商购自Invitrogen的Alexa fluor染料，其包括但不限于Alexa

350羧酸；Alexa

430羧酸；Alexa

488羧酸；Alexa

532羧酸；Alexa

546羧酸；Alexa

555羧酸；Alexa

568羧酸；Alexa

594羧酸；Alexa

633羧酸；Alexa

647羧酸；Alexa

660羧酸；和Alexa

680羧酸，商购自Amersham-Pharmacia Biotech的花青染料，其包括但不限于Cy3 NHS酯；Cy 5 NHS酯；Cy5.5 NHS酯；和Cy7 NHS酯。

可用于本发明的其它荧光团在以下表2中给出。

可商购的小珠包括但不限于由Bangs Laboratories，Inc，Sperhotech Inc.，Thermo Scientific，Inc.以及同等的供应商出售的那些，其可与本申请所述的水凝胶颗粒组合使用。本领域技术人员根据试验可以选择适当小珠直径、荧光发射和/或激发光谱和/或荧光强度的小珠。例如，与蓝色、红色、或紫外激光联用的品质控制小珠可以嵌埋进本申请提供的一个或多个水凝胶颗粒中。例如，对于蓝色激光(目录号A-16500(2.5μm)，A-16503(6.0μm))、红色激光(目录号A-16501(2.5μm)，A-16504(6.0μm))或紫外激光(目录号A-16502(2.5μm)，A-16505(6.0μm))，Alignflow^TM流式细胞仪定位小珠可以嵌埋在本申请提供的一个或多个水凝胶颗粒中。

在一种实施方式中，可在在365nm-650nm范围内任何波长激发的荧光小珠嵌埋在水凝胶颗粒中。在一种实施方式中，小珠是“彩虹粒子”，其包含荧光团的混合物，例如4个荧光团，5个荧光团，6个荧光团，7个荧光团或8个荧光团。鉴于此，用户根据待问询的荧光团选择用哪一波长来激发粒子。彩虹粒子可商购，例如，商购自BD Biosciences(目录号556298(中波程FL1荧光)，556286(6色，3.0-3.4μm)，556288(6色，6.0-6.4μm)，559123(8色))和各种直径的Spherotech(例如，目录号RCP20-5(4色)，RCP-30-5(6个峰)，RCP-30-5A(8个峰)

细胞分选设置小珠可以嵌埋在本申请提供的一个或多个水凝胶颗粒中。在一种实施方式中，细胞分选设置小珠在尺寸、发射波长、和强度上近似于生物样本，并且可以用于标定流式细胞仪的细胞分选系统，包括激光源、光学性质、和流量。在一种实施方式中，细胞分选设置小珠嵌埋在一个或多个水凝胶颗粒中并且可用于紫外激光、蓝色激光、绿色/黄色激光或红色激光。在一种实施方式中，当使用绿色激光时，嵌埋的小珠在570nm激发并在575nm发射，但是也可以在488nm激发。商购细胞分选设置小珠购自，例如LifeTechnologies(目录号C-16506(紫外激光)，C-16508(蓝色激光)，C-16509(绿色-黄色激光)，C-16507(红色激光))。

补偿控制小珠也可以嵌埋在本申请提供的一个或多个水凝胶颗粒中。精确补偿对于流式细胞计数法中的有效多色分析是重要参数。但是，基于细胞的补偿控制并不是完全有效的，因为很多抗原并不是高表达的，且依稀染色的细胞可能导致补偿设置不准确。

在一种实施方式中，补偿控制小珠包括荧光抗体缀合物捕获能力(正补偿小珠)或者是惰性的(负补偿小珠)。将补偿小珠与缀合荧光团的人、小鼠、大鼠、仓鼠、或兔子抗体混合；两种组分提供了明显的高信号正控制与适度的负群落，该负群落然后可用于适当地设置补偿，而不管细胞在实际实验中的浓度如何。一旦将抗体与小珠混合，则抗体嵌埋在本申请提供的一个或多个水凝胶颗粒中。商购补偿小珠购自，例如Life Technologies(目录号A-10344，A-10389，A10497，A10513)和Spherotech(目录号CMIg-P-08-2K，CMIg-P-30-2K，CMIg-P-50-3K，CMIg-P-70-3K)。

在一种实施方式中，含有嵌埋/包封小珠的水凝胶颗粒用作细胞试验的参照物，例如，吞噬试验，细胞毒性试验，运动性试验，细胞活性试验等。吞噬作用是下述过程，通过该过程细胞吞没固体颗粒，形成称为吞噬体的内囊。鉴于此，可以调节水凝胶颗粒，使其具有一种或多种基本上相似于在吞噬细胞吞没颗粒之前和之后吞噬细胞的光学性质。因此，在一种实施方式中，本申请提供的水凝胶颗粒用作吞噬试验的控制颗粒。在进一步的实施方式中，(i)水凝胶颗粒的一种或多种光学性质基本上相似于在吸收颗粒之前的吞噬细胞，和(ii)第二水凝胶颗粒的一种或多种光学性质基本上相似于在吸收颗粒之后的吞噬细胞。鉴于此，对于测量由吞噬细胞吸收的颗粒，产生控制。

在一种实施方式中，吞噬细胞是专业吞噬细胞。在另一种实施方式中，吞噬细胞是非专业吞噬细胞(即，消耗濒死细胞和外来有机体的细胞)。在进一步的实施方式中，非专业吞噬细胞是上皮细胞，内皮细胞，成纤维细胞或间充质细胞。在一种实施方式中，调解水凝胶颗粒，使其具有的一种或多种光学性质基本上相似于以下表3中列出的专业吞噬细胞(在颗粒吸收之前和/或之后)。

在一种实施方式中，由诸如核酸或小珠等物质嵌埋的本发明的水凝胶颗粒群体用作基因组细胞计数试验的控制试剂。鉴于此，特定染色体、RNA序列和/或DNA序列的特定数目的拷贝可以由嵌埋的物质模拟。水凝胶颗粒然后可以用作有待探测基因信息的样板的控制物，例如染色体的拷贝数目，RNA序列的拷贝数目和/或DNA序列的拷贝数目。

流式细胞计数法的反卷积的三种主要模式是颗粒的两种被动光学性质(前向散射，FSC，对应于折射率，或RI；和侧向散射，SSC)和存在于给定细胞类型表面上的生物标记物。因此，允许本申请水凝胶颗粒对于这三种模式模拟具体细胞类型的组合物用于为流式细胞计数法提供合成的强效的标定剂。

在一种实施方式中，公开的水凝胶颗粒的折射率(RI)大于约1.10，大于约1.15，大于约1.20，大于约1.25，大于约1.30，大于约1.35，大于约1.40，大于约1.45，大于约1.50，大于约1.55，大于约1.60，大于约1.65，大于约1.70，大于约1.75，大于约1.80，大于约1.85，大于约1.90，大于约1.95，大于约2.00，大于约2.10，大于约2.20，大于约2.30，大于约2.40，大于约2.50，大于约2.60，大于约2.70，大于约2.80，或大于约2.90。

在另一种实施方式中，公开的水凝胶颗粒的折射率(RI)为约1.10至约3.0，或约1.15至约3.0，或约1.20至约3.0，或约1.25至约3.0，或约1.30至约3.0，或约1.35至约3.0，或约1.4至约3.0，或约1.45至约3.0，或约1.50至约3.0，或约1.6至约3.0，或约1.7至约3.0，或约1.8至约3.0，或约1.9至约3.0，或约2.0至约3.0。

在一些实施方式中，公开的水凝胶颗粒的折射率(RI)小于约1.10，小于约1.15，小于约1.20，小于约1.25，小于约1.30，小于约1.35，小于约1.40，小于约1.45，小于约1.50，小于约1.55，小于约1.60，小于约1.65，小于约1.70，小于约1.75，小于约1.80，小于约1.85，小于约1.90，小于约1.95，小于约2.00，小于约2.10，小于约2.20，小于约2.30，小于约2.40，小于约2.50，小于约2.60，小于约2.70，小于约2.80，或小于约2.90。

最有意义的是将公开的水凝胶颗粒的SSC相比于靶细胞进行测量。在一些实施方式中，公开的水凝胶颗粒的SSC在靶细胞SSC的30％内、在其25％内、在其20％内、在其15％内、在其10％内、在其5％内、或在其1％内，通过细胞计数装置测得。

在一种实施方式中，如下调整水凝胶颗粒的SSC：将高折射率分子(或其群体)结合到水凝胶中。在一种实施方式中，将高折射率分子配置在水凝胶颗粒中，且在进一步的实施方式中，高折射率分子是硅胶，丙烯酸烷基酯，甲基丙烯酸烷基酯或其组合。因此，在一些实施方式中，公开的水凝胶颗粒丙烯酸烷基酯和/或甲基丙烯酸烷基酯。在一种实施方式中，调节单体的浓度，以进一步调节水凝胶颗粒的折射率。

丙烯酸烷基酯或甲基丙烯酸烷基酯可以在烷基中包含1至18个碳原子、1至8个碳原子、或2至8个碳原子，例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基或叔丁基，2-乙基己基，庚基或辛基。烷基可以是支化或直链的。

高折射率分子也可以包括乙烯基芳烃例如苯乙烯和甲基苯乙烯，其在芳环上任选取代有烷基例如甲基、乙基或叔丁基，或取代有卤素，例如氯苯乙烯。

在一些实施方式中，FSC如下调整：调节单体在组合物中存在的百分比，从而改变水凝胶形成过程中存在的水含量。在一种实施方式中，当使用单体和共聚单体时，调解单体和共聚单体的比率以改变水凝胶颗粒的前向散射性质。这在图11和图12中都有显示。

最有意义的是将公开的水凝胶颗粒的FSC相比于靶细胞进行测量。在一些实施方式中，公开的水凝胶颗粒的FSC在靶细胞FSC的30％内、在其25％内、在其20％内、在其15％内、在其10％内、在其5％内、或在其1％内，通过细胞计数装置测得。

FSC涉及颗粒体积，因此可以通过改变颗粒直径调整，如本申请所述。通常，已经观察到，相比于小的物体，大的物体折射折射更多的光，从而得到高的前向散射信号(反之亦然)。因此，在一种实施方式中，改变颗粒直径以调整水凝胶颗粒的FSC性质。例如，在一种实施方式中，水凝胶颗粒直径的增大是通过在流体形成过程中利用较大的微流体通道改变的。

SSC可如下设计：将纳米粒子包封在水凝胶内，以模拟靶细胞中的细胞器。在一些实施方式中，公开的水凝胶颗粒包含一种或多种类型的纳米粒子，其选自：聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)纳米粒子，聚苯乙烯(PS)纳米粒子，和二氧化硅纳米粒子。也参见图11和12，其表明添加各种浓度的纳米粒子使得可调整颗粒的侧向散射。不希望受理论限制，选择性调节本申请所述水凝胶的前向散射和侧向散射两者的能力可提供强效平台来模拟众多细胞类型。

尽管本发明主要描述光学性质的改性，但是本发明并不限于此。例如，可以制造和调整水凝胶颗粒，从而调节颗粒的容量，例如，从而标定库尔特计数器。在一种实施方式中，水凝胶颗粒的容量通过改变水凝胶单体在组合物中的量来调节。例如，聚苯胺，聚乙炔；聚亚苯基亚乙烯基；聚吡咯(X＝NH)和聚噻吩(X＝S)共聚单体；和聚苯胺(X＝NH/N)和聚亚苯基硫醚(X＝S)共聚单体浓度均可调节以改变容量。在一种实施方式中，提高这些单体的一种或多种的浓度，以提高水凝胶颗粒的容量。

在一些实施方式中，与具有相同直径的聚苯乙烯小珠相比，公开的水凝胶颗粒具有的材料模量性质(例如，弹性)更加极为相似于靶细胞的所述性质。

在水凝胶颗粒形成之后，可以将一个或多个颗粒表面官能化，例如，从而模拟靶细胞或标记靶细胞的一种或多种光学性质。官能化的水凝胶颗粒也可以包括嵌埋的小珠或物质例如生物分子，如上所述。在一种实施方式中，一个或多个水凝胶颗粒用一种或多种荧光染料、一种或多种细胞表面标记物(或其抗原表位结合区)、或其组合官能化。在一种实施方式中，水凝胶颗粒通过使至少一种双官能单体聚合形成，且在形成之后，水凝胶颗粒包括一个或多个可用于进一步连接细胞表面标记物、细胞表面标记物的抗原表位结合区、荧光染料、或其组合的官能团。在一种实施方式中，自由官能团是胺基，羧基，羟基或其组合。根据所需的官能化作用，应该理解的是，可以使用多种双官能单体，例如，以使用不同的化学方法和不同的分子将颗粒官能化。

水凝胶颗粒可以使用本领域已知的任何荧光染料官能化，包括The

Handbook-A Guide to Fluorescent Probes and LabelingTechnologies中列出的荧光染料，其全部并入本申请以作参考，用于所有目的。官能化可以通过包含自由胺基的化合物例如烯丙基胺介导，所述化合物可被引入所用的双官能单体中以形成水凝胶，如上讨论。

可用于将本申请所述水凝胶颗粒的表面官能化的已知荧光染料的非限制性实例包括：6-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基曙红；5-羧基荧光素；6羧基荧光素；5-(和-6)-羧基荧光素；S-羧基荧光素-二-(5-羧基甲氧基-2-硝基苄基)醚，-丙氨酸-甲酰胺、或琥珀酰亚胺酯；5-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯；6-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯；5-(4，6-二氯三嗪基)氨基荧光素；2′，7′-二氟荧光素；曙红-5-异硫氰酸酯；赤藓红5-异硫氰酸酯；6-(荧光素-5-甲酰氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；6-(荧光素-5-(和-6)-甲酰氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；荧光素-S-EX琥珀酰亚胺酯；荧光素-5-异硫氰酸酯；荧光素-6-异硫氰酸酯；

488羧酸、或琥珀酰亚胺酯；

488异硫氰酸酯；

488-X琥珀酰亚胺酯；

500羧酸；

500羧酸、琥珀酰亚胺酯或三乙铵盐；

514羧酸；

514羧酸或琥珀酰亚胺酯；罗丹明绿^TM羧酸，琥珀酰亚胺酯或盐酸盐；罗丹明绿^TM羧酸、三氟乙酰胺或琥珀酰亚胺酯；罗丹明绿^TM-X琥珀酰亚胺酯或盐酸盐；罗德尔绿^TM羧酸，N，O-二-(三氟乙酰基)或琥珀酰亚胺酯；二-(4-羧基哌啶基)砜罗丹明或二(琥珀酰亚胺酯)；5-(和-6)羧基萘并荧光素，5-(和-6)羧基萘并荧光素琥珀酰亚胺酯；5-羧基罗丹明6G盐酸盐；6-羧基罗丹明6G盐酸盐，5-羧基罗丹明6G琥珀酰亚胺酯；6-羧基罗丹明6G琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基罗丹明6G琥珀酰亚胺酯；5-羧基-2′，4′，5′，7′-四溴砜荧光素琥珀酰亚胺酯或二-(二异丙基乙基铵)盐；5-羧基四甲基罗丹明；6-羧基四甲基罗丹明；5-(和-6)-羧基四甲基罗丹明；5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯；6-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯；6-羧基-X-罗丹明；5-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯；6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯；5-(和-6)-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯；5-羧基-X-罗丹明三乙铵盐；丽丝胺^TM罗丹明B磺酰氯；孔雀绿；异硫氰酸酯；

单(磺基琥珀酰亚胺酯)；

21羧酸或琥珀酰亚胺酯；

7羧酸或琥珀酰亚胺酯；罗丹明红^TM-X琥珀酰亚胺酯；6-(四甲基罗丹明-5-(和-6)-甲酰氨基)己酸；琥珀酰亚胺酯；四甲基罗丹明-5-异硫氰酸酯；四甲基罗丹明-6-异硫氰酸酯；四甲基罗丹明-5-(和-6)-异硫氰酸酯；

磺酰基；

磺酰氯；

-X STP酯或钠盐；

-X琥珀酰亚胺酯；

-X琥珀酰亚胺酯；和X-罗丹明-5-(和-6)异硫氰酸酯。

用于本申请所述的水凝胶颗粒的荧光染料的其它实例包括但不限于，商购自Invitrogen的

染料，包括但不限于

FL；

TMR STP酯；

TR-X STP酯；

630/650-X STP酯；

650/665-X STP酯；6-二溴-4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3，5-二丙酸；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-戊酸；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-戊酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3丙酸；磺基琥珀酰亚胺酯或钠盐；6-((4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3丙酰基)氨基)己酸；6-((4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酰基)氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；N-(4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酰基)磺基丙氨酸，琥珀酰亚胺酯或三乙铵盐；6-4，4-二氟-1，3-二甲基-5-(4-甲氧基苯基)-4-硼杂3a，4a4，4-二氟-5，7-二苯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；4，4-二氟-5，7-二苯基-4-硼杂3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-苯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；琥珀酰亚胺酯；6-((4，4-二氟-5-苯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酰基)氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-(4-苯基-1，3-丁二烯基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-(2-吡咯基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；6-(((4，4-二氟-5-(2-吡咯基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-基)苯乙烯氧基)乙酰基)氨基己酸或琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-苯乙烯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；4，4-二氟-5-苯乙烯基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸；琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-1，3，5，7-四甲基-4-硼杂-3a，4a二氮杂-对称-引达省-8-丙酸；4，4-二氟-1，3，5，7-四甲基-4硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-8-丙酸琥珀酰亚胺酯；4，4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺酯；6-(((4-(4，4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a，4a二氮杂对称-引达省-3-基)苯氧基)乙酰基)氨基)己酸或琥珀酰亚胺酯；和6-(((4，4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-对称-引达省-3-基)苯乙烯氧基)乙酰基)氨基己酸或琥珀酰亚胺酯。

在一种实施方式中，用于衍生化一个或多个水凝胶颗粒的表面的荧光染料包括但不限于，商购自Invitrogen的Alexa fluor染料，其包括但不限于Alexa

350羧酸；Alexa

430羧酸；Alexa

488羧酸；Alexa

532羧酸；Alexa

546羧酸；Alexa

555羧酸；Alexa

568羧酸；Alexa

594羧酸；Alexa

633羧酸；Alexa

647羧酸；Alexa

660羧酸；和Alexa

680羧酸。在另一种实施方式中，用于本申请所述水凝胶颗粒和方法的荧光染料包括商购自Amersham-Pharmacia Biotech的花青染料，其包括但不限于Cy3 NHS酯；Cy5 NHS酯；Cy5.5NHS酯；和Cy7 NHS酯。

本领域技术人员可根据水凝胶颗粒的所需光谱激发和发射性质选择适宜的一种或多种染料。

水凝胶颗粒，在一种实施方式中用一种或多种细胞表面标记物(参见，例如，表4和7-8)或其片段(例如，在跨膜蛋白的情况中为其细胞外部分)衍生化，例如如下进行：将一种或多种细胞表面标记物，其细胞外部分或配套结合区经自由胺、存在于水凝胶颗粒表面上的自由胺、自由羧基和/或自由羟基连接于颗粒。用染料或细胞表面分子将水凝胶颗粒官能化也可以通过连接物例如链霉亲和素/生物素缀合物进行。

根据靶细胞，个体水凝胶颗粒科员用一种或多种细胞表面标记物或其片段(例如，在跨膜蛋白的情况下为其细胞外部分)衍生化，以进一步模拟靶细胞的结构性质。以下给出的表4和7-8列出根据靶细胞可用于将水凝胶颗粒衍生化的细胞表面标记物的非限制性清单。尽管提供的是细胞表面标记物，但是应该理解的是，细胞表面标记物的部分，例如受体结合部分、配体结合部分、或标记物的细胞外部分也可以用于将水凝胶颗粒衍生化(在自由官能团，如上所述)。也参见图11和12，其表明用例如细胞表面受体将水凝胶表面改性连同选择性调节FSC和/或SSC使得能够制造具有所需特性的水凝胶颗粒。

细胞类型包括但不限于各种细胞系，例如CHO，HEK-293，BHK-21，NS0，MDCK，VERO，MRC-S，W1-38和Sp2/0小鼠骨髓瘤(杂交瘤)。表5和表6各自提供了用于本申请所述的水凝胶颗粒的其它细胞类型。

表8.与本申请描述的水凝胶颗粒一起使用的细胞表面标记物。

14-3-3

14-3-3

14-3-3

14-3-3

14-3-3

15-脂肪氧合酶1

160 kD精神丝中肤

200 kD精神丝重肤

2H2

3G11唾液神经节苷酯抗原

4E-BP1

磷酸化4E-BP1(Thr37/46)

5-甲基胞苷

5HT3A受体

5T4

68kDa神经丝轻肤

7.1

70kD神经丝轻肤

A20

A2B5

AAK1

ABCA1

ABCA7

ABCB4

ABCB5

ABCC10

ABCC11

ABCG1

ABI2

ABIN3

ABL2

Abraxas

ACAA1

ACADM

ACAT2

ACBD3

ACD

ACE2

乙酰辅酶A羧化酶

乙酰辅酶A合酶

乙酰化的赖氨酸

顺乌头酸酶2

ACOT12

ACSA2

ACSF2

ACSM5

Act1

激活分子8(B细胞)

IB型激活素A受体

IIB型激活素A受体

ACTN3

ACY1

ACY3

ADA

ADAM12

ADE2

腺苷A1受体

腺苷A2aR

腺病毒

腺病毒纤维单体和三聚物

腺病毒六邻体蛋白

腺苷酸激酶1

腺苷酸琥珀酸裂解酶

ADFP

ADH1B

ADH6

ADH7

ADI1

脂联素

脂联素受体2

脂肪甘油三酯脂酶

ADP核糖基化因子

ADP-核糖基转移酶2.2基因

铁氧还蛋白

AF10

AFAP1

AFP

AG2

AGAP1

AGPAT5

AGR2

AHSG

AICDA

AID

AIF

AIM-2

Aiolos

AIPL1

AIRE

AK3

AK3L1

AK5

Akt

Akt(pS473)

Akt(pT308)

Akt1

Akt2

Akt3

自蛋白

醇脱氢酶

醛还原酶

ALDH1A1

ALDH1L1

ALDH2

ALDH3A1

ALDH3A2

ALDH5A1

ALDH6A1

ALDH7A1

ALDOB

缩醛酶B

Alexa Fluor 405/级联蓝

Alexa Fluor 488

ALG2

Alix

变应素1

α1抗胰蛋白酶

α1连环蛋白

α1钠钾ATP酶

α2连环蛋白

α2聚球蛋白

α肌动蛋白1

α肌动蛋白2

α辅肌动蛋白

α辅肌动蛋白2

α辅肌动蛋白3

α辅肌动蛋白4

α衔接蛋白

α内收

αB晶状体蛋白

α胞衬蛋白

α互联蛋白

α突触核蛋白

ALS1

AMACR

氨肤酶P

AML1

Amphiphysin

淀粉样蛋白

42

ANAPC2

AND1

雄激素受体

血管紧张素I

血管紧张素II受体2

血管紧张素III

ANKRD53

膜联蛋白IV

膜联蛋白V

ANP

Anti-Kudoa thrysites

布氏抗-T.原周期蛋白酶(procyclin)(GPEET)

布氏抗-T.原周期蛋白酶(磷酸化的GPEET)

抗球蛋白(Coombs)

抗凝血酶III

AP2

AP2

AP2

AP2M1

AP2S1

APAF1

APBB3

APC

APC-1

APC-10

APC-11

APC-2

APC-3

APC-5

APC-7

APC-8

APE1

APG12

APG3

APG5

APG7

APMAP

Apo-2.7

Apo-2.7(7A6)

ApoE

ApoE4

APOER2

载脂蛋白AI

载脂蛋白AII

载脂蛋白AIV

载脂蛋白B

载脂蛋白CIII

载脂蛋白D

载脂蛋白E

载脂蛋白F

载脂蛋白H

载脂蛋白J

载脂蛋白L1

载脂蛋白M

凋亡的嗜中性粒细胞

APP

水通道蛋白1

水通道蛋白5

ARF1

ARF5

ARFGAP1

ARFRP1

Argonaute-1

ARH

ARHGAP25

ARHGAP4

ARL11

ARL5B

ARPC5

Artemis

芳基烃受体

ASB-1

ASCC1

ASCC2

ASGPR

去唾液酸-GM1

ASK1

天冬酰胺合酶

Ataxin 1

ATF1

ATF2

ATG4A

ATG9A

ATIC

太平洋鲑鱼Ig

ATM

ATP柠檬酸裂解酶

ATP1B3

ATP5A

ATP5H

ATP5J

ATP5O

ATP6V0D1

ATP6V1B1

ATPB

ATRIP

Aurora A

磷酸化Aurora A(Thr288)

Aurora B

磷酸化Aurora B(Thr232)

AVEN

禽流感A神经氨酸酶

亲和素

虫漆脂2

Axl

B细胞和激活的T细胞

B细胞

B细胞亚基

B细胞(泛反应性)

B淋巴细胞抗体[UCH-B1]

b-內腓肤

磷酸化B-Raf(Thr598/Ser601)

B18R

B7-H4

BACE1

BACE2

BACH1

杆状病毒包膜gp64蛋白

BAG1

BAG2

BAG3

BAG4

BAIAP2

BAK

BAMBI

BAP31

BAP37

基底细胞细胞角蛋白

嗜碱性粒细胞

Bassoon

BATF

Bax

BCAR1

BCAR2

BCKD复合物E2亚基

Bcl-10

Bcl-2

Bcl-2(pS70)

Bcl-2样12

Bcl-2样2

Bcl-22

Bcl-2A1

Bcl-3

Bcl-6

Bcl-xL

Bcl-XS/L

BCR

BCSC1

BDH2

BDKRB2

BDNF

Beclin1

斑萎蛋白3

β2肾上腺素受体

B3肾上腺素受体

β3钠钾ATP酶

β肌动蛋白

β视紫红质抑制蛋白1

β视紫红质抑制蛋白2

β连环蛋白

β连环蛋白(npaa 27-37)

β连环蛋白(npaa 35-50)

β连环蛋白(pS45)

B营养不良蛋白聚糖

β半乳糖苷酶

B半乳糖苷酶融合蛋白

B突触核蛋白

β2微球蛋白

BHMT

Bid

双糖链蛋白多糖

胆红素氧化酶

Bim

BimL

BIN1

BIN3

蛋白生物素

BiP

BLBP

Blimp-1

BLK

BLNK

BLNK(pY84)

血型A抗原

血型AB抗原

血型B抗原

血型H ab抗原

血型H ab抗原/n抗原

血型H抑制剂

血型Lewis a

血型M抗原

血型N抗原

水华综合征

BM1

BMAL1

BMI1

Bmk

BMP15

BMP4

BMP7

BMPR1A

BMPR2

BMX

bMyc

BNIP2

BNIP3

BNIP3L

BOB1

BORA

Borealin

包柔氏螺旋体

BPI

BRaf

BRCA1

BRCC36

BRD3

BrdU

BRF1

BRG1

BRN3A

Btk

Btk(pY551)/Itk(pY511)

BTLN-2

BTN1A1

Bu1

Bu1a

Bu1a/Bu1b

Bu1b

BubR1

Bu1b

丁酰胆碱酯酶

C肤

C反应蛋白

C1抑制剂

C15orf40

C16orf72

C1orf50

C1Q

C1QA

C1QB

C1QC

C1QG

C1r

C1s

C20orf30

C20orf43

C21orf56

C21orf59

C2orf43

C3

C3aR

C3b

C3c

C3d

C4

C4结合蛋白

C4b

C4c

C4d

C4orf42

C5

C5aR1

C5L2

C6

C6orf64

C8A/B/G

C9

C9orf41

CA125

CA19.9

CAB39

CACNA1S

CACNA2

CACNG1

CAD

钙粘蛋白1

钙粘蛋白10

钙粘蛋白11

钙粘蛋白7

钙粘蛋白8

钙粘蛋白9

钙粘蛋白E

钙粘蛋白H

钙粘蛋白K

钙粘蛋白P

钙粘蛋白R

CAKC末端

CAKN末端

磷酸化CAK(Ser164/Thr170)

钙结合蛋白

钙调磷酸酶A

降血钙素受体

钙敏感受体

钙调结合蛋白

钙粒蛋白A

钙粒蛋白B

钙调蛋白

钙连接蛋白-ER膜标记物

钙蛋白酶1

钙蛋白酶2

钙蛋白酶9

钙蛋白酶S1(小亚基)

钙蛋白酶抑制蛋白

钙调蛋白

钙网蛋白

钙网膜蛋白

隐钙素2

CaMKI

CaMKII

磷酸化CaMKII(Thr286)

CamKIV

CAMLG

cAMP蛋白激酶催化亚基

大麻素受体I

大麻素受体II

CAP-G2

CAP18

CAP2

CAP3

碳酸酐酶I

碳酸酐酶IX

羧酯酶1

羧肤酶A1

羧肤酶A2

CARD11

CARD8

CARD9

心肌肌钙蛋白T

CARKL

CARM1

酪蛋白激酶1

酪蛋白激酶1

酪蛋白激酶2

半胱天冬酶1

半胱天冬酶10

半胱天冬酶11

半胱天冬酶12

半胱天冬酶2

半胱天冬酶2L

半胱天冬酶3

半胱天冬酶4

半胱天冬酶5

半胱天冬酶6

半胱天冬酶7

半胱天冬酶8

半胱天冬酶9

过氧化氢酶

儿茶酚-O-甲基转移酶

组织蛋白酶D

组织蛋白酶K

组织蛋白酶L

小窝蛋白1

小窝蛋白1(pY14)

小窝蛋白2

Cbl

CBP

CBWD1

CBX1

cCbl(pY700)

cCbl(pY774)

CCDC98

CCK4

CCL11

CCL17

CCL18

CCL19-Fc

CCL20

CCL21

CCL25

CCL3

CCL5

CCL6

CCNB1IP1

CCR10

CCR11

CCRD6

CCRL2

CD1

CD1.1

CD10

CD100

CD101

CD102

CD103

CD104

CD105

CD106

CD107a

CD107b

CD108

CD109

CD11

CD110

CD111

CD112

CD113

CD114

CD115

CD116

CD117

CD118

CD119

CD11a

CD11a，应变多态性

CD11a/CD18

CD11b

CD11b/c

CD11c

CD11d

CD120a

CD120b

CD121a

CD121b

CD122

CD123

CD124

CD125

CD126

CD127

CD129

CD13

CD130

CD131

CD132

CD133

CD133/2

CD134

CD135

CD136

CD137

CD137L

CD138

CD139

CD14

CD140a

CD140b

CD140b(pY1009)

CD140b(pY1021)

CD140b(pY771)

CD140b(pY857)

CD141

CD142

CD143

CD144

CD146

CD147

CD148

CD15

CD150

CD151

CD152

CD153

CD154

CD155

CD156c

CD157

CD158a

CD158a/h

CD158b

CD158b1/b2/j

CD158d

CD158e

CD158e/k

CD158e1

CD158e1/e2

CD158f

CD158g

CD158h

CD158i

CD158j

CD159a

CD159c

CD15s

CD16

CD16/32

CD16/56

CD160

CD161

CD161a

CD162

CD162R

CD163

CD164

CD165

CD166

CD167a

CD168

CD169

CD16b

CD17

CD170

CD171

CD172

CD172a

CD172a/b

CD172b

CD172g

CD173

CD177

CD178

CD178.1

CD179a

CD179b

CD18

CD180

CD181

CD182

CD183

CD184

CD185

CD186

CD19

CD191

CD192

CD193

CD194

CD195

CD195(细胞质的)

磷酸化CD195(Ser337)

磷酸化CD195(Ser349)

CD196

CD197

CD198

CD199

CD1a

CD1b

CD1b/c

CD1c

CD1d

复合物

CD2

CD20

CD200

CD200R

CD200R3

CD201

CD202b

CD203a

CD203c

CD204

CD205

CD206

CD207

CD208

CD209

CD209b

CD21

CD21/CD35

CD210

CD212

CD213a1

CD213a2

CD217

CD218a

CD22

CD22(pY822)

CD22.2

CD220

CD221

CD221(pY1131)

CD222

CD223

CD224

CD226

CD227

CD229

CD229.1

CD23

CD230

CD231

CD233

CD234

CD235a

CD235ab

CD236

CD239

CD24

CD240CE

CD240DCE

CD243

CD244

CD244.1

CD244.2

CD245

CD246

CD247

CD247(pY142)

CD249

CD25

CD252

CD253

CD254

CD255

CD256

CD257

CD258

CD26

CD261

CD262

CD263

CD264

CD265

CD266

CD267

CD268

CD269

CD27

CD270

CD271

CD272

CD273

CD274

CD275

CD276

CD277

CD278

CD279

CD28

CD280

CD281

CD282

CD283

CD284

CD284/MD2复合物

CD286

CD289

CD29

CD290

CD294

CD298

CD299

CD2a

CD3

CD3/CD44

CD30

CD300

CD300a

CD300e

CD300f

CD301

CD303

CD303a

CD304

CD305

CD307d

CD309

CD31

CD310

CD312

CD314

CD314(激活)

CD314(封闭)

CD317

CD318

CD319

CD32

CD321

CD323

CD324

CD325

CD326

CD328

CD329

CD32B

CD33

CD334

CD335

CD336

CD337

CD338

CD339

CD34

CD340

CD344

CD349

CD35

CD351

CD354

CD357

CD358

CD36

CD360

CD361

CD36L1

CD37

CD38

CD39

CD39L4

CD3D

CD3G

(CD3分子复合物)

CD4

CD4(结构域1)

CD4(结构域2)

CD4 v4

CD40

CD40bp

CD41

CD41/CD61

CD41a

CD41b

CD42a

CD42b

CD42d

CD43

CD44

CD44(v3)

CD44 (v4)

CD44(v5)

CD44(v6)

CD44(v7)

CD44.2

CD44std

CD44v6

CD44var(v10)

CD44var(v3)

CD44var(v3-v10)

CD44var(v4)

CD44var(v5)

CD44var(v6)

CD44var(v7)

CD44var(v7-v8)

CD45

CD45.1

CD45.2

CD45R

CD45RA

CD45RB

CD45RC

CD45RO

CD46

CD47

CD48

CD49a

CD49a/CD29

CD49b

CD49b/CD29

CD49b/CD61

CD49c

CD49d

CD49d/CD29

CD49e

CD49e/CD29

CD49f

CD49f/CD29

CD5

CD5.1

CD5.2

CD5.6

CD50

CD51

CD51/61

CD52

CD53

CD54

CD55

CD56

CD57

CD58

CD59

CD59a

CD6

CD60b

CD61

CD62E

CD62L

CD62P

CD63

CD64

CD64 a，b同种抗原

CD64.1

CD65

CD65s(CD65唾酸)

CD66

CD66a

CD66a/b/c/e

CD66a/c/d

CD66a/c/d/e

CD66a/c/e

CD66a/e

CD66b

CD66c

CD66c/e

CD66e

CD66f

CD68

CD69

CD7

CD70

CD70b

CD71

CD72

CD72 a，b，c同种抗原

CD72 b，c同种抗原

CD72.1

CD73

CD74

CD75

CD77

CD78

CD79a

CD79b

CD8

CD80

CD81

CD82

CD83

CD84

CD85

CD85a

CD85d

CD85g

CD85h

CD85j

CD85k

CD86

CD87

CD88

CD89

CD9

CD90.1

CD90.2

CD90.9

CD91

CD93

CD94

CD95

CD96

CD97

CD98

CD98hc

CD99

CD99R

Cdc-123

Cdc-2(p34)

磷酸化Cdc-25A(Ser17)

Cdc-25C

Cdc-37

Cdc-45L

Cdc-6

CDc-7

Cdk1

Cdk2

Cdk4

Cdk5

Cdk6

Cdk7

Cdk9

CdkA1

CdkN2A

CdkN3

CDT1

CDX2

CEACAM19

CEACAM20

CEACAM7

CEND1

CENPA

CENPE

CENPF

CENPH

中心体蛋白2

CFAH

cFos

CFTR

CGB5

cGK1

CH2

CHCHD5

CHD3

CHD4

趋化素

CHIPS，C末端

CHIPS，N封端

Chk1

Chk2

硫酸软骨素

CHOP

噬铬粒蛋白C

ChT1

chTOG

cIAP1

cIAP2

CIAS1

CIDEA

CIP4

CISD1

CITED1

CITED2

cJun

磷酸化cJun(Tyr91/Tyr93)

CKMT2

CLASP1

网格蛋白

紧密连接蛋白-1

紧密连接蛋白-10

紧密连接蛋白-15

紧密连接蛋白-16

紧密连接蛋白-18(C端)

紧密连接蛋白-18(中部)

紧密连接蛋白-4

紧密连接蛋白-5

紧密连接蛋白-8

CLAW-H

CLEC12A

CLEC1B

CLEC4A

CLEC4M

CLEC9A

CLIP

CLOCK

肉毒梭菌毒素B

CLPP

cMaf

cMet

CMKLR1

CMRF44

CMRF56

cMyb

cMyc

CNDP2

COASY

外被蛋白

丝切蛋白

Colec12

胶原蛋白I

胶原蛋白I/III

胶原蛋白II

胶原蛋白III

胶原蛋白IV

胶原蛋白V

胶原蛋白VI

胶原蛋白VII

COMMD1

补体因子B

复合物I免疫捕捉

缀合的胆碱戊二酸

连接蛋白26

连接蛋白30

连接蛋白30.2

连接蛋白30.3

连接蛋白32

连接蛋白36

连接蛋白37

连接蛋白37(C端)

连接蛋白37(中部)

连接蛋白39

连接蛋白39(中部)

连接蛋白40(C端)

连接蛋白40(中部)

连接蛋白43

连接蛋白45

连接蛋白45(C端)

连接蛋白46

连接蛋白47

连接蛋白57(C端)

连接蛋白57(中部)

接触蛋白2

COPS3

冠状病毒

冠蛋白1A

冠蛋白1B

皮动蛋白

皮层胸腺细胞

COX I

COX I/III

COX II

COX IV

COX VA

COX VIA1

柯萨奇腺病毒受体

CPF

Cpn10

CPO

CPS1

CPT2

CRABP1

CRABP2

CRALBP

肌酸激酶BB

肌酸激酶MM

CREB

磷酸化CREB(Ser133)

cRel

Cripto1

CRISP3

Crk p38

CrkL

CrkL(pY207)

CROT

CRRY

CRTAM

CRTC3

CRY2

隐花色素I

隐孢子虫

小球隐孢子虫

CRYZL1

CSK

CSK结合蛋白

CSPS

cSrc

CST2

CTDSP1

CTNNA3

CTNNBL1

滞蛋白1

滞蛋白2

滞蛋白3

滞蛋白4A

滞蛋白4A/B

滞蛋白4B

皮肤淋巴细胞抗原

CUTL1

CX3CL1

CX3CR1

CXCL1

CXCL10

CXCL13

CXCL9

CXCR7

CXorf26

花青

CYB5R2

CYB5R3

细胞周期蛋白A

细胞周期蛋白A2

细胞周期蛋白B1

细胞周期蛋白B2

细胞周期蛋白D1

细胞周期蛋白D2

细胞周期蛋白D3

细胞周期蛋白E

细胞周期蛋白E2

细胞周期蛋白H

细胞周期蛋白D1/D2/D3

亲环蛋白40

CYLD

CysLT1

血清胱抑素C

血清胱抑素S

细胞色素B245重链

细胞色素B245轻链

细胞色素c

细胞色素P450 17A1

细胞色素P450 19A1

细胞色素P450 1A2

细胞色素P450 2A6

细胞色素P450 2B6

细胞色素P450 2C9

细胞色素P450 2J2

细胞色素P450 3A4

细胞色素P450 3A5

细胞色素P450还原酶

细胞角蛋白

细胞角蛋白(酸性)

细胞角蛋白(碱性)

细胞角蛋白(泛反应性)

细胞角蛋白1

细胞角蛋白10

细胞角蛋白10/13

细胞角蛋白13

细胞角蛋白14

细胞角蛋白14/15/16/19

细胞角蛋白15

细胞角蛋白16

细胞角蛋白17

细胞角蛋白18

细胞角蛋白19

细胞角蛋白2

细胞角蛋白20

细胞角蛋白4

细胞角蛋白4/5/6/8/10/13/18

细胞角蛋白40

细胞角蛋白5

细胞角蛋白5/6/18

细胞角蛋白5/8

细胞角蛋白6

细胞角蛋白6a

细胞角蛋白7

细胞角蛋白7/17

细胞角蛋白8

细胞角蛋白8/18/19

D4-GDI

DAB2

DACH1

DAND5

DAP1

DAP12

DAPK1

DAPK2

DARPP32

Daxx

DAZL

DBC1

DCAMKL1

DCC

DCIR2

DCLRE1B

DCP1a

DcR3

DCTN2

DcTRAIL-R1

DcTRAIL-R2

DCXR

DDB1

DDDDK标签

DDX3

DDX4

DDX50

DECR1

Dectin1

Dectin2

DEF8

抵御素

DELETE

delta 1连环蛋白

Delta样蛋白1

Delta样蛋白4

Delta阿片受体

DeltaC

DeltaD

树突状细胞标记物

脱氧胞苷激酶

肌间线蛋白

桥粒核心糖蛋白2

桥粒核心糖蛋白1

桥粒斑蛋白

细胞骨架蛋白

右旋糖苷

DGKA

Dicer

DISC1(C端)

DISC1(中部)

Dishevelled 3

双唾液酸神经节苷脂GD2

双唾液酸神经节苷脂GD3

Dkk1

Dkk3

DLC8

DLK1

Dlx5

DM-GRASP

DMT1

DNA-PKcs

磷酸化DNA-PKcs(Thr2609)

DNAI1

DNAJA2

DNAJB2

DNAJC3

DNAPK

DNM1L

Dnmt1

Dnmt3b

DNP

DOK2

DOK7

多巴胺受体D1

多巴胺受体D3

多巴胺受体D5

多巴胺

羟化酶

双皮质素

DP1

DPH2

DPP10

DPP3

DPP9

Dppa4

DPYD

DR3

DRAK1

DRAK2

Drebrin

DTYMK

DUSP23

DUSP27

DUSP3

DUSP5

DUSP6

DUX4

DYKDDDDK表位标签

发动蛋白

发动蛋白1

Dynamitin

动力蛋白轻链2

Dysbindin

Dysferlin

Dystrobrevin

Dystrobrevin

磷酸化Dystroglycan(Tyr893)

E.Coli O/E

E2A-Pbx1

E2F1

E47

E4BP4

结合于I-A的Ea52-68肤

EAAT1

早期B细胞

EBF1

EBI3

EBP50

ECGF1

ECH1

ECRG4

EDA

EDA-A2R

EDG1

EDG2

EDG3

EDG6

EEA1

EEF1G

EEF2

EEF2K

EEN

EFEMP1

EFEMP2

Eg5

磷酸化Eg5(Thr927)

EGF

EGF受体

EGF受体(pY1173)

EGF受体(pY845)

EGF受体(pY992)

EGR1

EGR2

EHD1

eIF1

eIF2C2

EIF2S1

eIF3

eIF3D

eIF3D(p66)

eIF3F

eIF3G

eIF3H(p40)

eIF3I(p36)

eIF3J

eIF3K

eIF4B

eiF4E

eIF4E(pS209)

eIF4E2

eIF5A

eIF6

弹性水解酶

Elk1

Elk1(pS383)

ELK3

延伸蛋白B

延伸蛋白C

EMAP II

Embigin

EMG1

Emi1

EMR3

EMSY

Ena/Vasp-like

EndoG

EndoGlyx-1

假粘蛋白

内皮细胞

内皮脂肪酶

内皮微静脉标记物

内皮

Engrailed1

ENO1

醇化酶1

eNOS

eNOS(pS1177)

Entpd2

Eomes

Eos

Epac1

Eph受体A1

Eph受体A2

Eph受体A4

Eph受体B4

Eph受体B6

Ephrin A2

Ephrin A3

EPHX2

EPM2AIP1

EPOR

EPS15R

Epsin 1

Epsin 2

ER-HR3

ER-MP54

ER-TR7

ER81

ERAB

ERCC1

ERG

ERK1

ERK1/2(pT185/pY187)

ERK1/2(pT202/pY204)

ERK1/ERK2

ERK2

ERK5

ERMAP

ERp29

ERp72

红细胞样细胞

Erzin/根蛋白/膜突蛋白

磷酸化

ESAM

雌激素诱导蛋白pS2

雌激素受体

雌激素受体

α雌激素相关受体

ETAR

亚乙烯基腺苷

ETS1

EVI2A

EVI2B

EWSR1

EXD1

EXOSC3

EXOSC7

EYA2

EZH1/2

埃兹蛋白

埃兹蛋白(pY353)

F-actin

F10A1

F4/80

FAA4

FABP4

因子I

因子IX

因子VIII.vWF(删除)

因子XIIIa

FADD

FAHD2A

FAK

FAK(pS910)

FAM119A

FAM175A

FAM84B

FAM91A1

FANCC

FANCD2

磷酸化范可尼贫血D2(Ser222)

FAP

Fascin

FBP1

FBXO21

FBXO31

FBXO42

FBXO43

Fc受体结合抑制剂

Fc受体IgA+IgM

FcR

FcRL6

FcRLA

FDC

FDFT1

FDPS

FE65

FeLV p27

FEN1

FER

铁蛋白重链

铁蛋白轻链

铁蛋白，线粒体的

FES

胎儿血红蛋白

FGF酸性

FGF碱性

FGF21

FGFR1

FGFR2

FGR

FH

FHL1

纤维蛋白

原纤维蛋白

纤维蛋白原

链

纤维蛋白原

链

纤维肤A

纤维肤B

成纤维细胞激活蛋白

成纤维细胞表面蛋白

成纤维细胞/上皮细胞

纤维连接蛋白

纤维连接蛋白受体

纤蛋白5

Ficolin B

丝聚合蛋白

细丝蛋白A

FITC

FITC/俄勒冈绿

FIV

FIV gp120

FIV gp95

FIV p24

FIV p24 gag

FKBP12

FKBP4

FKBP6

FKBPL

FLiC

Flightless1

FLIP

Flt3L

荧光蛋白

FLV gp70

FLYWCH2

FMC7

fMLP受体

FMRP

FNTA

FNTB

卵泡树突状细胞

Fos

FOXA1

FOXA2

FOXC2

FOXD3

FOXI1

FOXJ1

FOXM1

FOXO1

FOXO3A

FOXP1

FOXP3

FPRL1

FR4

Fra2

Fragilis

FRAT1

Frataxin

Frequenin

Frizzled-1

FUK

FUS

FXYD3

FYB

Fyn

Fyn(pY528)/c-Src(pY530)

Fyn相关激酶

FZR1

G-CSF

G3BP

G6PD

GAB1

GAB2

GABA B受体2

GABARAP

GAD65

GAD67

GADD34

半乳糖脑苷酯

半乳凝素1

半乳凝素10

半乳凝素3

半乳凝素4

半乳凝素7

半乳凝素8

半乳凝素9

γ突触核蛋白

神经节苷脂GD2

神经节苷脂GD3

神经节苷脂GM1

癌锚蛋白

GAP

GAP43

GAPDH

GARP

GAS2

GAS7

GAT2

GATA1

GATA2

GATA3

GATA4

GATM

GBA3

GBE1

GBP1

GBP2

GBP5

GC1aR

GCDFP15

GCDH

GCK1

GCLM

GCN2

GCN5

GCTM2

GDAP1L1

GDF15

凝溶胶蛋白

Gemin1

桥尾蛋白

GFAP

GFP

GILZ

GIMAP4

GIPR

GIT2

GITRL

GLAST

Gli1

胶质纤维酸性蛋白

肠高血糖素

GLIPR1L1

胰高血糖素

糖皮质激素受体

α糖皮质激素受体

葡萄糖1脱氢酶

葡萄糖6磷酸异构酶

GLUH1

GLUT1

GLUT2

GLUT4

GLUT5

谷氨酸受体2

谷氨酸受体2/3

谷氨酸受体3

谷氨酸受体4

谷氨酰胺酶

谷氨酰胺合酶

谷氧还蛋白2

谷胱甘肤NEM

谷胱甘肤NEW

谷胱甘肤过氧化酶1

谷胱甘肤过氧化酶4

谷胱甘肤还原酶

谷胱甘S转移酶

谷胱甘肤S转移酶

谷胱甘肤S转移酶

谷胱甘肤合酶

糖元合酶1

糖蛋白IX

糖蛋白VI

GM-CSF

GM130

GM3.2

GNB2

GNB2L1

GNLY

GNMT

GnRHR

高尔基蛋白(58K)

高尔基带

GOLM1

GOLPH2

GOSR1

gp340

gp49R

GPA33

GPCR5C

GPR-120

GPR-143

GPR-151

GPR-18

GPR-30

GPR-40

GPR-48

GPR-49

GPR-50

GPR-56

GPR-73A

GPR-73B

GPR-77

GPR-83

GPR-86

GPR-C5C

GPR-C5D

颗粒体蛋白

颗粒溶素

颗粒酶A

颗粒酶B

颗粒酶K

GRAP2

GRASP1

GRASP65

GRB2

GRB7

GRHPR

GRIM19

GRK1

GRK2

GRK3

GRK5

GRK6

生长激素受体

GRP170

GRP94

GSC

GSPT2

GST

GST表位标签

GSTA4

GTF2D1

GTPase HRAS

GTPBP4

鸟苷酸激酶

H-2

H-2.m31

H-2Db

H-2Dd

H-2Kd

H2-M

H2-M3

H2A.X

磷酸化H2A.X(Ser139)

H2A1J

H60

HA tag

HADHA

HADHA/HADHB

HADHB

HADHSC

HAND1

HAO1

结合珠蛋白

HARS

HARS2

HBF

HCN4

HDAC1

HDAC10

HDAC2

HDAC3

HDAC4

HDAC6

HDAC9

HDHD1A

HDHD2

HDJ2

HDLBP

HE4

HEC1

HEF1

Helios

造血作用相关巨噬细胞

造血系Cocktail

定向造血干细胞

血红蛋白

血红蛋白F

血红蛋白亚基

肝炎B病毒

肝炎B病毒核心抗原

肝炎B病毒E抗原

肝炎B病毒表面抗原(Ad/Ay)

肝炎C病毒

肝炎C病毒核心抗原

肝炎C病毒NS4

Hepsin

HER3

HER4

Hes1

己糖激酶

己糖激酶1

己糖激酶2

HFE1

HGF

HGFA抑制剂1

HHEX

HHV8 GPCR

HIBCH

HID1

HIF1AN

HINT1

HIP2

HIPK2

Hippocalcin

组胺H3受体

组织细胞

组蛋白H1

组蛋白H1.0

组蛋白H2A

组蛋白H2B

组蛋白H2B type 1B

组蛋白H3

磷酸化组蛋白H3(Ser10)

磷酸化组蛋白H3(Ser28)

组蛋白H3.3

组蛋白H4

HIV1核心抗原

HIV1 p17

HIV1 p24

HIV1 p55/p17

HIV1 tat

HL60

HLA级别I

HLA-2Kb/2Db

HLA-2kb/2Dd

HLA-A

HLA-A/B/C

HLA-A1/A11/A26

HLA-A1/A36

HLA-A10/A11

HLA-A10/A28/B75

HLA-A10/B62/B71

HLA-A11

HLA-A2

HLA-A2/A25/A32

HLA-A2/A28

HLA-A2/A3/A29

HLA-A2/A69

HLA-A2/B17

HLA-A2/B5

HLA-A2/B57

HLA-A23/A24

HLA-A24/A11/A2403

HLA-A25

HLA-A25/A26

HLA-A25/A26/A34

HLA-A25/A32

HLA-A26/A34/B71/B62

HLA-A29

HLA-A3

HLA-A30/A31

HLA-A33/B8

HLA-A34/B71/A26

HLA-A9

HLA-A9/A25/A32

HLA-A9/A32/B13

HLA-B

HLA-B12

HLA-B13/B62/B15

HLA-B14

HLA-B17

HLA-B17/B35/B44

HLA-B21/B70/B55

HLA-B27/B44/B47

HLA-B35/B57/B75/B77

HLA-B44/B75/B17

HLA-B48/B60

HLA-B5/B49/B56

HLA-B7

HLA-B8

HLA-B8/B14

HLA-BC

HLA-Bw4/A9/A32

HLA-Bw6

HLA-Bw6/B77

HLA-级别I自由链

HLA-D

HLA-DM

HLA-DO

HLA-DP

HLA-DQ

HLA-DQ/DR

HLA-DQ1/DQ3

HLA-DQ1/DR7

HLA-DQ3

HLA-DQ6

HLA-DQ7

HLA-DQA1

HLA-DQB1

HLA-DQw1

HLA-DR

HLA-DR/DP

HLA-DR/DP/DQ

HLA-DR1

HLA-DR11

HLA-DR3/DR6

HLA-DR4

HLA-DR7

HLA-DR8/DR12

HLA-DR9

HLA-DRA

HLA-E

HLA-G

HLCS

HLF

HLXB9

HMG14

HMG17

HMG4

HMGB1

HMGB2

HMOX1

HMOX2

hnRNPA1

hnRNPC1/C2

hnRNPD

hnRNPK

hnRNPL

hnRNPU

hnRNPUL1

归巢受体

HOXB4

HOXB5

HPa1

HPa2

HPD

HPd1

HPd2

HPi1

HPi2

HPi3

HPi4

HPR1

HPRT1

HPV16 E1/E4

HPx1

HPx2

Hrk

Hsc70

HSD17B1

HSD3B1

HSF1

HSF2

HSF4

HSL

Hsp105

Hsp14

Hsp22

HSP25

Hsp27

Hsp40

Hsp47

Hsp60

Hsp70

Hsp70-2

Hsp90

HspA4

HspA6

HSPA9

HspB2

HspB7

HSV标签

HTLV I gp46

HTLV I p19

HtrA2/Omi

人乳头瘤病毒16(E7)

亨廷素

HUS1

氢钾ATP酶

I-Ak

I-Ak

Ia(B细胞)

IBA1

IBP2

ICAD

IDO

IFABP

IFNA1

IFNAR1

IFT88

Ig

Ig(多特异性)

Ig轻链

Ig轻链

Ig轻链

IgA

IgA(Fab2)

IgA(H)

IgA，

IgA，

IgA1

IgA2

IgD

IgD(

重链)

IgDa

IgDb

IgE

IgE，

IgEa

IgEb

IgG

IgG(Fab H/L)

IgG(Fab)

IgG(Fab2 Fc)

IgG(Fab2 H/L)

IgG(Fab2)

IgG(Fc)

IgG(H/L)

IgG(

链特异性)

IgG Fd

IgG轻链

IgG，

IgG/IgM

IgG/IgM/IgA

IgG/IgM/IgA(Fab2 H/L)

IgG/IgM/IgA(Fab2)

IgG/IgM/IgA(H/L)

IgG/IgY

IgG1

IgG1(重链)

IgG1，

IgG1，

IgG1/2a

IgG1/3

IgG1a

IgG1b

IgG2

IgG2，

IgG2，

IgG2/3

IgG2a

IgG2a，

IgG2a，

IgG2a/b

IgG2b

IgG2b，

IgG2c

IgG2c，

IgG3

IgG3，

IgG3，

IgG4

IgGDa

IgK

IGKC

IgL

IGLC2

IgM

IgM(Fab2)

IgM(Fc)

IgM(H/L)

IgM，

IgM，

IgMa

IgMb

IgY

Ihh

Ikaros

p(S376)

IL-10

IL-12

IL-12(p35)

IL-12(p70)

IL-12

IL-12

IL-12/IL-23(p40)

IL-13

IL-15

IL-15/IL-15R

IL-16

IL-17D

IL-17A

IL-17A/F

IL-17B

IL-17C

IL-17E

IL-17F

IL-18

IL-18BP

IL-19

IL-1RA

IL-1RN

IL-2

IL-20R2

IL-21

IL-22

IL-23(p19)

IL-23R

IL-24

IL-25

IL-27

IL-27(p28)

IL-28

IL-29

IL-3

IL-31

IL-33

IL-34

IL-4

IL-5

IL-6

IL-7

IL-8

IL-9

ILF3

ILK

ILK1

免疫荧光N-

IMP3

输入蛋白9

流感A病毒M2蛋白

流感B病毒核蛋白质

ING1

ING2

ING3

ING4

抑制素

iNOS

INPP4A

INPP4B

胰岛素

胰岛素降解酶(IDE)

胰岛素受体R

整联蛋白

整联蛋白

整联蛋白

整联蛋白

磷酸化整联蛋白

(Tyr783)

磷酸化整联蛋白

(Tyr795)

整联蛋白

整联蛋白

整联蛋白

嵌插的DNA

顶体内蛋白

不变NKT

IP10

IQGA1

IRAK1

IRAK3

IRAK4

IRE1

IRF1

IRF3

IRF4

IRF5

IRF6

IRF7

IRF7(pS477/pS479)

IRF8

IRF9

IRS1

IRS1(pY896)

IRS2

IRS4

ISG15

ISG20

ISL1

Isthmin1

ITCH

整联蛋白

ITK

ITPR1

Jagged2

JAK2

JAK3

JAM2

JAML

日本脑炎病毒NS1糖蛋白

JNK

磷酸化JNK(Thr183/Tyr185)

JNK1/JNK2/JNK3

JNK2

连接粘附分子C

Junctophilin-1(C端)

Junctophilin-1(中部)

Junctophilin-2(C端)

Junctophilin-3(C端)

KAP1

KATNA1

KCNH1

KDEL

KDM4D

Ki-67

KIF22

KIF3A

KIF4A

KIFA3

整合素2

动基体类膜蛋白11(KMP-1))

KIR-2.1

KIR-2D(泛CD158)

KLF4

KLF6

KLH

KLHL11

KLRA3

KLRC1

KLRG1

KMT4

KMT5A

KOR-SA3544

KS1/4

Ksp37

KSR1

Ku70

Ku70/80

Ku80

Kudoa Thyrsites

Kunitz蛋白酶抑制剂

Kv4.2

L/S-MAG

标记检测试剂

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶B

Lambda

核纤层蛋白A

核纤层蛋白A/C

核纤层蛋白B受体

核纤层蛋白B1

核纤层蛋白B2

核纤层蛋白C

层粘连蛋白

层粘连蛋白5

层粘连蛋白受体

层粘连蛋白

LAMP2a

LAMP2b

LAT

LAT(pY171)

LAT(pY226)

LBP

LC3

LC3B

LCAT

Lck

Lck(pY505)

LDH1

LDH1/B/C

LDL(MDA氧化)

LDLR

LEF1

利什曼虫LPG(重复表位)

利什曼虫主要蛋白抑制酶(GP-63)

LEKTI

白血病抑制因子

白三烯A4水解酶

白三烯B4受体

LHX3

LI-钙粘蛋白

LIF

DNA连接酶I

DNA连接酶III

LIM激酶2

LIME1

LIMK1

LIMS1

Lin28

Lineage Cocktail

Lipin 1

LIS1

肝脏羧酸酯酶1

LKB1

LMO2

LOX

LOX1

LRP5/6

LRP6

LRPAP1

LSD1

LSP1

LSS

萤火素酶

Ly-108

Ly-49A

Ly-49A/D

Ly-49AB6

Ly-49C/F/I/H

Ly-49C/I

Ly-49D

Ly-49E/F

Ly-49F

Ly-49G

Ly-49G2

Ly-49G2B6

Ly-49H

Ly-49I

Ly-51

Ly-6A.2/Ly-6E.1

Ly-6A/E

Ly-6b

Ly-6B.2

Ly-6C

Ly-6D

Ly-6G

Ly-6G/C

Ly-6K

Ly-77

淋巴毒素

淋巴毒素

受体

Lyn

LYRIC

溶血磷脂酶1

溶酶体酸脂酶

溶菌酶

Lyve1

M-CSF

M13噬菌体外壳蛋白g8p

M13噬菌体蛋白

MAA

Mac-2BP

macroH2A.1

巨噬细胞

巨噬细胞激活蛋白

巨噬细胞半乳糖凝集素

巨噬细胞/粒细胞

巨噬细胞/单核细胞

MAD2

MadCAM1

MADD

MADH7

MAFB

MAG

MAGE-A

MAGE1

MAIR2

MAIR4

MALT1

乳球蛋白A

MAP1LC3A

MAP2

MAP2B

MAP2K1IP1

MAP3K8

磷酸化MAP4(Ser768)

MAP4K1

MAP4K4

MAPK12

MAPK6

MAPKAP激酶2

磷酸化MAPKAP激酶2(Thr334)

MARCKS

MARCO

缘区B细胞

MARK2

MARK3

MART1

肥大细胞

肥大细胞蛋白酶11

成熟巨噬细胞标记物

MBD1

MBD2

MBL

MCL1

MCM2

MCM3

MCM4

MCM5

MCM6

MCM7

MCP-1

MCP-4

MCP-8

MCSF

MD1

MD2

MDC

MECT1

MEF2A

MEIS1

MEK1

MEK1(p298)

MEK1(pS218)/MEK2(pS222)

MEK1/2(pS222)

MEK2

MEK3

MEK4

MEK5

MEK6

MEK7

MEKK1

MEKK2

MEKK3

MEKK4

黑素瘤

MELK

MEMO1

Mena

Menin

MEOX2

Merlin

MERTK

间皮蛋白

金属硫蛋白

MetRS

mGluR5

MGMT

MHC级别I

MHC级别I(H-2Db)

MHC级别I(H-2Dd)

MHC级别I(H-2Dk)

MHC级别I(H-2Dq/Lq)

MHC级别I(H-2Kb)

MHC级别I(H-2Kb/Db)

MHC级别I(H-2Kb/Dd)

MHC级别I(H-2Kd a3结构域)

MHC级别I(H-2Kd)

MHC级别I(H-2Kd/Dd)

MHC级别I(H-2Kd/Dd/q/u/v)

MHC级别I(H-2Kk)

MHC级别I(H-2Kq)

MHC级别I(H-2Ks)

MHC级别I(H-2Ld)

MHC级别I(H-2Ld/Db)

MHC级别Ib(H2-M3)

MHC级别II

MHC级别II(DQ)

MHC级别II(DR)

MHC级别II(I-A)

MHC级别II(I-A/E)

MHC级别II(I-Ab)

MHC级别II(I-Ab/Ad)

MHC级别II(I-Ab/As)

MHC级别II(I-Ad)

MHC级别II(I-Ak)

MHC级别II(I-Ak/Ad/Ab/Aq/Ar)

MHC级别II(I-Ak/As)

MHC级别II(I-Ap)

MHC级别II(I-Aq)

MHC级别II(I-E)

MHC级别II

MHC级别II(RT1B)

MHC级别II(RT1Bu)

MHC级别II(RT1D)

MHC级别II

MHC Qa1b

MICA

MICA/MICB

MICB

微褶(M)细胞

微管相关蛋白2ab

微管相关蛋白RP/EB 2

Midkine

盐皮质激素受体

MIPEP

线粒体

Mitofilin

线粒体融合蛋白1

线粒体融合蛋白2

有丝分裂细胞

MKK6

MLH1

MLK3

MLL1

MLLT11

MMP1

MMP10

MMP11

MMP12

MMP13

MMP14

MMP15

MMP17

MMP19

MMP2

MMP20

MMP21

MMP26

MMP3

MMP8

MMP9

Mnk1

mNOS

MnSOD

膜突蛋白

单胺氧化酶B

单核细胞/粒细胞

单核吞噬细胞

小鼠胚胎成纤维细胞(mEF)饲养细胞

小鼠谱系

MPP1

MRCL3

MRE11

MRGPR-X2

MRI1

MRP14

MRP2

MRP3

MRP4

MRP5

MRP6

MRP8

MRP8/14

MSC(W8B2)

MSC(W3D5)

MSC(W5C5)

MSC(W7C6)

MSC/NPC

MSH2

MSH6

MSI2H

MSK1

MST1

MST1/MST2

MST3

MST4

MST4/MST3/STK25

mTOR

Muc-16

Muc-2

Muc-3

Muc-4

Muc-7

MULT-1

Munc13-4

Munc18

MUPP1

Mus81

Musashi1

蕈毒碱乙酰胆碱受体2

肌肉肌动蛋白

肌肉结合样1

MVP

MYBBP1A

MYBPC3

Myc tag

MyD88

髓磷脂碱性蛋白

髓鞘少突胶质细胞糖蛋白

髓磷脂PLP

骨髓抗原

髓细胞核分化抗原

髓系

Myocilin

肌细胞生成素

肌凝蛋白重链

肌凝蛋白IIA

肌球蛋白轻链2

肌球蛋白轻链3

肌球蛋白轻链激酶

肌凝蛋白磷酸酶

肌凝蛋白磷酸酶1/2

MYST2

NADH2

Naf1

NAK

Nanog

NAPE-PLD

NAT1

天然脂壁酸

利钠肤受体A

自然杀伤细胞

自然杀伤细胞激活结构

NBS1

NC1.1

NCF4

Nck

NCOA1

NCOA2

NCX1

NDUFAF1

NDUFB4

NDUFS3

NEDD8

NEK2

NEK6

NEK7

NEK9

磷酸化NEK9(Thr210)

巢蛋白

NETO2

Neurabin1

神经调节蛋白1

神经调节蛋白3

神经母细胞瘤

神经D1

神经D2

神经纤维瘤蛋白

高分子量神经丝蛋白

中等分子量神经丝蛋白

神经原素2

神经激肤1受体

神经元特异性醇化酶

神经元生长因子受体

神经紧张素受体1

p50/p105

p65(pS536)

NFATc1

p50

p50/p105

p52/p100

p65

p65(pS529)

NG2

NGF

Nhedc2

NHERF1

Nicastrin

Ninein

硝基酪氨酸

NKG2A/C/E

NKG2AB6

NKp80

NKX3.1

NM23A

NMDA受体2A

NMDA受体2B

NMDE2

NMDZ1

NMNA2

nMyc

nNOS

NNTM

痛敏肤

Nod2

Nodal

Noggin

NONO

非特异性细胞毒性细胞

Notch1

Notch2

Notch3

Notch4

NOX2

NOX4

NOXA2

NPC

NPM-ALK

磷酸化NPM/B23(Thr199)

磷酸化NPM/B23(Thr234/Thr237)

NPY5R

NQO1

NR2E1

NRC2C

Nrf2

NRG3

NSPA/B

NTAL

NTF97

核仁素

磷酸化核仁素(Thr76/Thr84)

核基质蛋白

NUDC

NUMA1

Nur77

O乙酰基GD3

Oct2

Oct3/4

Oct3/4A

Oct4

ODAG

OGDH

OLIG1

OLIG2

少突胶质细胞标记物

少突胶质细胞标记物O1

少突胶质细胞标记物O4

制瘤素M受体

Orai1

OSCAR

OSR1

骨连结蛋白

骨桥蛋白

骨保护素

Otx2

OVA(SIINFEKL)H-2Kb

卵巢细胞标记物

卵清蛋白

卵巢癌相关抗原

OX-62

p120连环蛋白

p120连环蛋白(pS268)

p120连环蛋白(pS288)

p120连环蛋白(pS879)

p120连环蛋白(pT310)

p120连环蛋白(pT916)

p120连环蛋白(pY228)

p13

p130

p130 Cas

p130 Cas(pY249)

p14ARF

p150，95

p19ARF

p21

p22phox

p23

p27Kip1

P2RX4

P2RY8

P2X3

P2X7

P2Y6

p34Cdc-2

p38

p38 MAPK(pT180/pY182)

p400

p53

乙酰化p53(Lys305)

乙酰化p53(Lys382)

磷酸化p53(Ser15)

磷酸化p53(Ser37)

磷酸化p53(Ser392)

p53BP1(Ser1778)

p57Kip2

p60 CAF1

p62

p63

p63(TA)

p70 S6激酶

p90 Rsk

磷酸化p90 Rsk(Thr368/Ser372)

p95 NBS1

p97

PABP1

PABP2

PABPN1

PAC1

PAD2

PAG1

PAK1

PAK2

PAK3

泛肌动蛋白

泛巨噬细胞

泛内皮细胞抗原

PAR1

副流感病毒类型1

副流感病毒类型2

副流感病毒类型3

PARC

PARD3

PARK7/DJ1

PARP，裂解形式

PARP16

PARP4

PARVA

Pax2

Pax5

Pax6

Pax7

Pax8

Pax9

桩蛋白

磷酸化桩蛋白(Tyr118)

磷酸化桩蛋白(Tyr31)

PBEF

PBK

PBP

PBR

PBX3

PCB

PCNA

PCYT1A

PD-1H

PD-ECGF

PDC-TREM

PDCD4

PDCD6

PDE3B

PDECGF

PDGF-AA

PDI

PDK1

PDK2

PDPK1

PDPK1(pS241)

PDX1

PDZK1

PE

PECR

PEI-转铁球蛋白

Pellino 1

凝集素3

PEPD

穿孔素

过氧化物氧化还原酶1

过氧化物氧化还原酶2

过氧化物氧化还原酶6

PEX5

PF4

PGIS

PGP9.5

PGRP-Ia

PGRP-S

PHD1

PHD2

磷脂酰丝氨酸

磷酸化SHIP

磷脂酶A2激活蛋白(PLAP)

磷脂酶C

磷脂酶C

磷脂酶D1

磷丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸

磷酸酪氨酸

PI 3激酶催化亚基

PI 3激酶催化亚基

PI 3激酶p110

PI 3激酶p110

PI 3激酶p150

PI 3激酶p85

PI 4激酶

PIAS1

PIAS3

PICK1

PIM1

PIM2

Pin1

PINK1

PIR-A/B

Pirh2

PIST

PiTX3

PIWIL2

PKA

(pS99)

PKA

(pS114)

PKAR2

PKC

PKCq

(pT497)

(pT638)

PKN

PKN2

PKR

PKX1

PLA2G1B

胎盘碱性磷酸酶

胎盘蛋白14

Plakophilin 3

网素L

血小板

PLAU

(pY783)

(pY759)

网蛋白

多效生长因子

神经丛蛋白A1

神经丛蛋白B2

PLGF

PLK1

磷酸化PLK1(Thr210)

PLK4

PLSCR1

PLVAP

PLZF

PMCA(1-4)

PMCA4

PMEL17/SILV

PMN

PMP70

PMS2

PNAd

PNPH

足糖萼蛋白

平足蛋白

POKEMON

多组氨酸标签

PON1

PON3

PPM1A

PPP1A

PPP5C

PPP6C

PR3

PRA1

PRC1

前BCR

前T细胞受体

链

前清蛋白

早衰蛋白1

早衰蛋白2

朊蛋白PrP

PRKRA

PRLR

PRMT1

PRMT5

原松弛素1/2

原松弛素2

抑制蛋白1

黄体酮受体

抗增殖蛋白

前动力蛋白1

前动力蛋白2

催乳素

ProMBP1

前列腺素D2受体

前列腺素脱氢酶1

前列腺素E受体EP3

前列腺细胞表面抗原

前列腺特异性抗原

前列腺酸性磷酸酶

蛋白酶体20S C2

蛋白酶体20S

蛋白酶体20S

蛋白酶体20S

蛋白酶体20S

蛋白酶体20S

蛋白酶体

A蛋白

G蛋白

蛋白激酶D2

蛋白磷酸酶

蛋白磷酸酶抑制剂1

S蛋白

蛋白酶激活受体4

凝血素

PSA-NCAM

PSD95

绿脓杆菌

PSMA

PSMD14

牛皮癣素

PTAFR

PTBP1

PTEN

PTGER2

PTGER4

PTHLH

PTK7

PTP1B

PTP4A2

PTPS

PTRH2

PU.1

PU60

PUMA

山松醇1

山松醇2

PXR

PYCARD

Pygopus2

Pyk2

Pyk2(pY402)

丙酮酸脱氢酶

丙酮酸脱氢酶E2

丙酮酸脱氢酶E2/E3bp

q2

Qa1(b)

Qa2

RAB11A

RAB25

RAB27A

RAB4

RAB5a

RAB9

Rac1

Rac1/Cdc42

RAD17

磷酸化RAD17(Ser645)

RAD23A

RAD51

RAD54

RAD9A

根蛋白

RAF1

RAGE

RAIDD

虹鳟鱼Ig

Ra1BP1

RanBP9

RanGAP1

RAP1A/RAP1B

RAP1GAP

Raptor

RAS

RASGAP

RASGRF1

RASSF1A

Rb

Rb(a.a.332-344)

Rb(pS780)

Rb(pS807/pS811)

RbAp46

RbAp48

RBC

RBC(多克隆兔)

RBM35A

RBP4

RBX1

RCC1

RcRL6

红细胞

松弛素1

松弛素1/2

松弛素2

RelB

RELT

肾素

RENT1

Reptin

排斥导向分子C

抵抗素

REST

Ret

成纤维网状细胞和网状纤维

Reticulon1A

网状细胞

视网膜母细胞瘤1

RFLAT1

RFP

RGS6

RGS7

RGS9

RHEB

Rho

RhoA

RHOC

RhoGAP

RhoGDI

RIAM

RICTOR

RIG1

RIP1

RIP2

利妥昔单抗

RLA DQ

RLA DR

RNA聚合酶II

RNA聚合酶II CTD重复YSPTSPS

RNASE-L

RNASE1

RNF144B

RNF168

RNF36

RNPEP

ROCK1

ROR1

ROR2

ROS

RPA32/RPA2

RPA70

RPS6

RSF1

RSK1 p90

RSK2

RSK3

RSK4

RT1A

RT1Aa

RT1Aa，b

RT1Aa，b，1

RT1Ac

RT1Au

RT1B

RT6.1

RT6.2

兰尼碱受体

RYK

RyR

S-Tag

S100A1

S100A10

S100A13

S100A4

S100A6

S100A9

S6(pS235/pS236)

S6(pS240)

S6(pS244)

S6K

SAA4

Sall4

副伤寒沙门氏菌A

鼠伤寒沙门氏杆菌

鲑科Ig(H和L链)

鲑科Ig(H链)

SAM68

SAMD2

SAP

SARA

SATB1

SATB2

SC5A5

SC6A4

SCAI

SCD1

拼接酶1

SCY1样3

SDF1

SDHA

SDHB

分泌组分

Securin

SELP

Sema4A

Sema7A

SENP1

SEPP1

SERCA2

丝氨酸蛋白酶抑制蛋白B1

丝氨酸蛋白酶抑制蛋白B2

丝氨酸蛋白酶抑制蛋白B6

Sestrin1

SFRP2

SGK1

SHC1

波伊德氏志贺氏菌

SHIP1

SHP1

SHP2

SHP2(pY542)

SIAH2

SIGIRR

Siglec-10

Siglec-8

Siglec-9

Siglec-F

Siglec-H

SIK2

SIRT1

SIRT2

SIRT3

SIRT5

SIT1

SIX2

SKP1A

SLA-DR

Slan

SLC1A3

SLC1A7

SLC22A1

SLC22A5

SLC26A6

SLC26A7

SLC30A4

SLC39A11

SLC4A3

SLC6A19

SLC6A6

SLC7A10

SLC7A14

SLC7A3

SLC7A8

SLC8A2

SLC9A6

SLP76

SLP76(pY128)

SMAC

SMAC3

SMAD1

SMAD1(pS463/465)

SMAD1/5

SMAD1/9

SMAD2

SMAD2/3(pS465/467)DELETE

SMAD3

SMAD4

SMAD5

SMAD6

SMC1

SMC1L1

SMN

平滑肌特异性蛋白

SMURF2

SNAP25

SNX1

SOAT1

SOCS1

SOCS2

SOCS3

SOCS6

SOD2

钠钾ATP酶

音猬因子

Sortilin

SOSC3

SOX1

SOX10

SOX17

SOX18

SOX2

SOX2(COOH末端)

SOX2(NH2末端)

SOX9

SP-D

Sp1

Sp3

血影蛋白

SPHK1

Spt16

Src(pY418)

SREBP1

ssDNA

SSEA3

SSEA4

SSEA5

SSH3BP1

SSR2

SSR5

SSRP1

SSX2IP

Stat1

Stat1(N末端)

Stat1(pS727)

Stat1(pY701)

Stat2

Stat3

Stat3(pS727)

Stat3(pY705)

Stat4

Stat4(pY693)

Stat5

Stat5(pY694)

Stat5a

Stat5b

Stat6

Stat6(pY641)

磷酸化Stathmin/Op18(Ser16)

Stathmin1

Stefin B

干细胞因子

STIM1

STK3

STK33

STK39

STOM

STRO1

STUB1

SULT1A1

SULT1A3/SULT1A4

SULT1C2

SULT2A1

SUMO1

SUMO2

SUMO3

SUN1

融合抑制蛋白

SUPT16H

生存蛋白

磷酸化生存蛋白(Thr34)

SV40大T和小t抗原

SWC1a

SWC6

SYBL1

Syk

Syk(pY348)

突触蛋白I

突触蛋白II

Synaptojanin2

突触素

多配体蛋白聚糖4

SynGAP

Synip

突触融合蛋白

突触融合蛋白6

Syntrophin

SYWC

T细胞(泛反应性)

T淋巴细胞

T细胞和B细胞激活抗原

T7 tag

TAB1

TACE

TACI

TAF172

TAF250

TAG72

Talin1

Talin2

Tamm Horsfall(尿类黏蛋白)

TANK1

TAP1

TAP2

TARDBP

TARP

抗酒石酸盐酸性磷酸酶

TAS1R1

Tau

TBA1B

Tbet

TBK1(pS172)

TBX1

TC10

TCF3

TCF7L1

TCF7L2

TCL1

TCR

TCR DO11.10

TCR HY

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCR

TCTP

TdT

Tec

TEF1

TEM8

肌腱蛋白C

TER119

TERF2

末端脱氧核苷酸转移酶

TERT

四连接素

TFF3

TFIIB

TGN38

TGN46

THAP11

THEMIS

硫氧还原蛋白

硫氧还原蛋白还原酶1

ThPOK

凝血酶受体

血小板

凝血酶致敏蛋白

胸苷激酶1

甲状腺球蛋白

TIA-1

TIAM2

Tie1

Tie2(pY1102)

Tie2(pY992)

磷酸化

(Ser473)

TIGIT

Tim1

Tim2

Tim3

Tim3 Fc融合蛋白

Tim4

Tim50

Timeless

TIMP1

TIMP2

TIP49A

TIRAP

TIS11b

TL1A

TLK1

TLR11

TLR12

CD285

TLR7

TLR8

TMEFF2

TMPS2

TMSA

TMTSP

TNAP

TNAP3

TNFR相关蛋白

TNPO3

Tollip

TOMM20

TOMM22

TOP1

TOP2A

TOP2B

TORC2

Torsin A

TOX

TPH1

TPPP

TPTE

TR11B

TRA-1-60

TRA-1-60R

TRA-1-81

TRA-2-49

TRA-2-54

TRADD

TRAF2

TRAF4

TRAF5

TRAF6

TRAM2

转铁蛋白

谷氨酰胺转移酶

谷氨酰胺转移酶2

转酮酶

TRAP1

TRAPPC2

Trem-like 2

Trem-like 4

TRIB2

TRIB3

TRIM

TRIM25

TRIM29

TRK

TrkA

TrkC

Trop2

原肌球蛋白1

TROY

TRPC6

TRPM2

TRPM8

TRX1

布氏锥虫主要溶酶体蛋白

布氏锥虫原周期蛋白(EP)

刚果锥虫原周期蛋白(procyclin)

克氏锥虫LPG

磷酸化TSC2(Ser664)

磷酸化TSC2(Thr1462)

TSG101

TSHR

TSLP

TSLP受体

TSPO

TTF1

Tubb3

结节蛋白

微管蛋白

微管蛋白

微管蛋白

微管蛋白

微管蛋白

微管蛋白

微管蛋白

级别III

微管蛋白

微管蛋白

上皮来源的肿瘤抗原

Twist2

TXNIP

TYK2

TYMS

Tyro3

酪氨酸酶

酪氨酸羟化酶

UACA

UBA52

UBC9

UBE2

UBE2L3

UBE2L6

UBE2M

UBE2N

UBF

UBF1

泛素

UBK63

UCH37

UCK

UCP2

UCP3

UFM1

ULBP1

ULBP2

ULBP4

ULK3

UNC5A

UNC5B

UNG

uPA

UQCRC1

UQCRC2

Urm1

URP2

USF1

USP11

USP13

USP22

USP28

USP7

UTF1

V5标签

VAMP5/8

VAP1

VASA

VASP

VAV1

VAV2

VAV3

VDAC1

VEGF

VEGF-120

VEGF-A

VEGF-R1

VELIS-3

VGLU1

绒毛蛋白

波形蛋白

粘着斑蛋白

Viperin

VIPR1

维生素D结合蛋白

维生素D受体

玻璃粘连蛋白

VMAT2

vMyb/cMyb

von Willebrands因子

VRK1

VSV-G标签

WAPL

WASP

WC14

WC15

wCD44

WIP(pS488)

WNT1

WNT16

WNT2

WNT5B

WNT6

WSTF

WWOX

黄嘌呤氧化酶

XBP1

XBP1(COOH末端)

XBPs

XCL1

XIAP

XPC

XPNPEP3

XRCC2

XTP4

YAP1

YB1

YES1

YY1

ZAP-70

ZAP-70(pY292)

ZAP-70(pY319)

ZAP-70(pY319)/Syk(pY352)

ZBP-1

ZIPK

ZO-1(中部)

ZONAB(中部)

斑联蛋白

IL-33R

Globo H

CCL8

Siglec-G

CD307e

CLEC6

Snaill

SMAD1(pS463/pS465)/SMAD8(pS465/pS467)

SMAD2(pS465/pS467)/SMAD3(pS423/pS425)

(pY216)

NKX6.1

FAK(pY397)

Btk(pY223)/Itk(pY180)

ERK3

MCP-3

CD238

β2微球蛋白[b，c]

核干细胞因子

GPR-49(中间LRR)

GPR-49(N-末端)

磷脂酶C

螺旋蛋白

三硝基酚

膜联蛋白VII

CD301a

CD301b

mTOR(pS2448)

PI16

MSC(W5C5)

LAMP5

GPR-19

FPRL2

CXCL5

PAR2

ULBP6

ULBP2/5/6

IL-17B受体

ULBP3

精氨酸酶1

碱性磷酸酶

ULBP3

TrkB

骨钙蛋白

APJ

受体亚基2

FGFR3

SR-A1

Rae-1(pan)

CXCL12

TREM2

鼠短尾突变体表型

CLEC5A

整联蛋白

Mer

XCR1

AML2

von Willebrands因子A2

MMP7

GLP-1R

FR1

IL-1RAcP

紧密连接蛋白-6

瘦素受体

Caherin 6

IL-1R II型

结合素4

Delta样蛋白3

ChemR23

GPR-39

CD158b2

LRIG1

神经菌毛素2

GPR-44

Eph受体B2

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3

IL-17C受体

BMPR1B

IL-31RA

OCIL

Frizzled-7

IL-26

GPR-15

神经丛蛋白D1

CD158

FPR1

HBEGF

维生素D3

神经丛蛋白B1

生长抑素受体2

OV-6

CXCL16

Siglec-E

EDG5

Ninjurin-1

整联蛋白

MHC级别II(I-Ed/j/k/p/r/u/v)

ThB

MAP-2(2a&2b)

IgM

MHC级别I(H-2b/p)

MHC级别I(H-2s/p/q/d/u/r)

MHC级别I(H-2s/f)

CDw60

Bad Phospho(Ser112)

裂解的半胱天冬酶3(Asp175)

磷酸化Chk1(Ser345)

磷酸化Chk2(Thr68)

磷酸化细胞周期蛋白D1(Thr286)

磷酸化cFos(Ser32)

FosB

(pSer9)

乙酰化组蛋白H3(Lys9)

磷酸化HS1(Tyr397)

磷酸化Hsp27(Ser82)

ID3

磷酸化-IRAK4(Thr345/Ser346)

磷酸化-cJun(Ser73)

S6(pS240/pS244)

Syk(pY525/pY526)

C23

血红蛋白

p27

磷酸化cJun(Ser63)

ENPP1

Twist1

钙粘蛋白M

CD302

CD66d

CLEC14A

CD242

多配体蛋白聚糖2

CDO

Cryptic

内皮缩血管肤B受体

FR3

IGSF3

CD85f

间质蛋白酶

MCEMP1

mGluR4

Stabilin1

Stabilin2

钙粘蛋白13

GPR-109A

TSPAN8

Reg1A

钙粘蛋白12

ECE1

FABP5

IGSF4C

Trem-like 1

激活素A受体IIA型

ALK7

BCAM

BLAME

CEACAM4

紧密连接蛋白-3

CLP24

CRHR1

DC-STAMP

Eph受体B3

FATP4

FcRL1

FcRL2

FcRL3

FSH-R

Gi24

组胺H1受体

Neu5Gc

Lin28A

ATM(pSer1981)

整联蛋白

整联蛋白

整联蛋白

CD158k

KOR

CD85i

LRIG3

LRP4

MMP16

MS4A4A

NAALADase-like 2

1型神经肤Y受体

制瘤素M受体

MS4A3

PEAR1

PEDF受体

神经丛蛋白A4

原钙粘附蛋白1

ROBO2

ROBO4

EDG8

Scavenger受体A5

Semaphorin 4A

Semaphorin 4B

Semaphorin 6A

Siglec-16

生长抑素受体3

STING

GPBAR1

TM4SF4

TMEM87A

TSPAN2

VEGF-R1，2，3

ADAM15

钙网蛋白2

补体因子H-相关4

CXCL6

CD158a/h/b2/f/g

结合于I-Ab的Ea52-68肤

HLA-Bw4

磷酸化ATF1(Ser63)

表皮调节素

FATP1

纤维调节素

弗林蛋白酶

甘丙肤

IL-11

CD306

MFG-E8

MINA

Oct4A

OLIG1，2，3

制瘤素M

Semaphorin 3E

Slug

SOX3

STYK1

LTBP1

TIMP3

VAP-B

WNT9a

5HT2C

AATK

ACLP

ADAMTS15

α1B肾上腺素受体

APLP1

荧光素/俄勒冈绿

L3MBTL3

CCL1

PRDM4

ACTH

PDZ结合激酶

HuC/HuD神经元蛋白

TDRD3

EP300

碳酸酐酶VI

胆囊收缩素A受体

CCL23

CD1e

软骨凝集蛋白

腱蛋白样2

紧密连接蛋白-10b

紧密连接蛋白-11

紧密连接蛋白-12

紧密连接蛋白-17

CLEC2A

凝血因子VII

CXCL1/2/3

DDR2

DPCR1

二肤基肤酶6

上皮膜蛋白3

Endoglycan

颗粒体蛋白C

FATP2

FATP5

FcRLB

GLP-2R

GLUT3

磷脂酰肌醇蛋白聚糖6

GPR-22

GPR-37

GPR-37L1

INSRR

LINGO1

LINGO2

mGluR2

mGluR7

MMP25

神经介素B受体

NRAGE

骨激活素

Porimin

前动力蛋白受体1

Prominin2

Semaphorin 3A

SLAP-130

生长抑素受体5

SCARF1

STAMP2

TAFA3

TAFA4

TM4SF18

结节性硬化1

TCF8

CMG2

IL-17D受体

巨噬细胞刺激蛋白受体

Siglec-11

多配体蛋白聚糖3

CD85e

SOX7

激活素A受体IA型

碳水化合物磺基转移酶15

CD300b

CELSR3

凝血因子II

DC-SCRIPT

DSCAM-L1

FLRT1

Frizzled-6

磷脂酰肌醇蛋白聚糖1

IGSF4B

IL-1R9

BAZ2B

BRD4

Kell

Kremen2

LAX1

CD85c

MIF

脑啡肤酶2

OBCAM

神经丛蛋白C1

RGM-B

肿瘤蛋白1

Xg

DCBLD2

ASAM

桥粒糖蛋白1

Frizzled-3

MMP24

TOR

WNT3a

磷脂酰肌醇蛋白聚糖5

Jagged1/Jagged2

Pax3

CELSR2

细胞周期蛋白D1/D2

神经丛蛋白A2

TAFA5

FR4

CD315

NKG2I

RAMP2

TNFRH3

蛋白生物素

GPVI

MS4A4B

PIR-B

Semaphorin 4F

IL-1F6

CD39L3

接触蛋白3

CLEC4B

MC3R

PGRP-L

PLET1

ADAM9

AMIGO3

CD99-L2

Eph受体A5

Ephrin B2

CD316

Kremen1

Eph受体B1

神经丛蛋白B3

DMBT1

FcRn

LIMPII

MUCDHL

Patched1

SLC39A4

IGSF4A

PRAT4B

HHV8-ORF74

磷酸化4E-BP1(Thr36/45)

磷酸化4E-BP1(Thr69)

DCAR1

Von Hippel-Lindau

同型对照

颗粒酶M

REA同型对照

CD300LG

MR1

CD327

B7-H6

CLEC4G

BATF3

IL-38

单羧酸转运蛋白1

MC5R

TCF7

TM4SF1

GPR-49(CRL区)

CD156a

ADAM33

ADAMTS13

CCL16

CXCL17

Deltex1

FBXO15

GPR34

GPRC5A

胰岛素原

JAK1

MEP1A

下视丘分泌素受体2

p70S6K

STRA6

胰岛素R/IGF-I R异四聚体

SPARCL1

Spi-B

TRAM

羧肤酶E

胰岛细胞自身抗原1

Patched2

ST8SIA2

AML1(pS249)

(pS182)

BRF1/2

磷酸化组蛋白H3(Thr11)

MEK1(pT286)

MMP16

磷酸化MNK(T197/T202)

NUMB

磷酸化Hsp27(Ser78)

(pT538)

SIRT1(pS47)

ZAP-70(pY493)

ZAP-70(pY315/pY319)

sRAGE

mCherry

PI 3激酶调节亚基

TIMP4

SRC

ZAP-70(pT493)

磷酸化TSC2(S939)

RagC

SHIP2

MKK4(pS257)

CD79a(pY182)

TRAF1

EVI1

SRC3

SOX11

IL-17F同型二聚体

CCRL1

FOXP2

IFNAR2

REA对照

CD228

Muc-13

P2X7R

Btk(pY223/Itk(pY180)

CD248

GILT

恢复蛋白

心肌肌钙蛋白I

NKX2.2

HLA-B7/B27

肌球蛋白轻链2a

肌球蛋白轻链2v

上皮细胞抗原

CD92

在一种实施方式中，水凝胶颗粒的群体用于确定在靶细胞群落上检测特定细胞表面标记物或其组合的动态量程和/或灵敏度。例如，可以调节水凝胶颗粒的群落以使其具有靶细胞的SSC和/或FSC波形，且将水凝胶颗粒的子群落用特定数目的细胞表面标记物例如细胞表面受体或其结构域如其表面抗原结合区的拷贝衍生化。例如，可以将水凝胶颗粒的个体子群落各自衍生化以具有独特数目的拷贝，例如，一个子群落将包含100份拷贝的细胞表面标记物，第二子群落将包含1,000份拷贝的同一细胞表面标记物，第三子群落将包含10,000份拷贝的同一细胞表面标记物等。将水凝胶颗粒的群落的各细胞表面标记物荧光染色，并检测各子群落中的水凝胶颗粒。鉴于此，对于具有各细胞标记物的靶细胞，水凝胶颗粒的子群落可用于产生荧光发射的标准曲线。细胞表面标记物可以是其提供的任何细胞表面标记物，或其结合区，或本领域技术人员已知的细胞表面标记物。

本申请的水凝胶颗粒在例如染色和通过流式细胞计数法或FACS进行分析等过程中的行为相似于靶细胞。例如，在一种实施方式中，水凝胶颗粒具有的一种或多种光学性质基本上类似于表1、表2或表3中陈列的细胞类型之一。

在一些实施方式中，靶细胞是免疫细胞。免疫细胞的非限制性实例包括B淋巴细胞，也称为B细胞，T淋巴细胞，也称为T细胞，自然杀伤(NK)细胞，淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞，单核细胞，巨噬细胞，嗜中性粒细胞，粒细胞，肥大细胞，血小板，朗格汉斯细胞，干细胞，树突状细胞，外周血单核细胞，肿瘤浸润(TIL)细胞，基因修饰的免疫细胞，包括杂交瘤，药物修饰的免疫细胞，以及本申请列出的任何细胞类型的衍生物、前体或祖细胞。

在一些实施方式中，靶细胞包括具有共享属性的特定类别细胞的所有细胞。例如，靶细胞可以是淋巴细胞，包括NK细胞、T细胞、和B细胞。靶细胞可以是激活的淋巴细胞。

在一些实施方式中，靶细胞是原代细胞，培养细胞，建成细胞，正常细胞，转化细胞，受感染细胞，稳定转染的细胞，瞬时转染的细胞，增殖细胞，或分化终末细胞。

在一种实施方式中，靶细胞是原代神经元细胞。多种神经元均可以是靶细胞。作为非限制性实例，靶细胞可以是原代神经元；建成神经元；转化神经元；稳定转染的神经元；或运动或感觉神经元。

在其它实施方式中，靶细胞选自：原发性淋巴细胞，单核细胞，和粒细胞。

靶细胞本质上可以是任何类型的细胞，包括原核细胞和真核细胞。

适宜的原核靶细胞包括但不限于，细菌例如大肠杆菌(E.coli)，各种芽孢杆菌属，和极端微生物细菌例如嗜热生物。

适宜的真核靶细胞包括但不限于，真菌例如酵母和丝状真菌，包括以下属种：酵母属(Saccharomyces)，曲霉属(Aspergillus)，木霉属(Trichoderma)，和链孢霉属(Neurospora)；植物细胞，包括来自以下植物的那些：玉米(com)，高粱，烟草，低芥酸油菜，大豆，棉花，番茄，马铃薯，苜蓿，向日葵等；和动物细胞，包括鱼类、鸟类和哺乳动物。适宜的鱼类细胞包括但不限于来自以下物种的那些：鲑鱼，鳟鱼，罗非鱼，金枪鱼，鲤鱼，比目鱼，大比目鱼，旗鱼，鳕鱼和斑马鱼。适宜的鸟类细胞包括但不限于以下动物的细胞：鸡，鸭，鹌鹑，雉和火鸡，和其它丛林竞技或游戏鸟类。适宜的哺乳动物细胞包括但不限于来自以下动物的细胞：马，奶牛，水牛，鹿，绵羊，兔子，啮齿动物如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠，山羊，猪，灵长目动物，海洋哺乳动物，包括海豚和鲸鱼，以及细胞系，例如任何组织或干细胞类型的人细胞系，和干细胞，包括全能和非全能细胞，和非人类受精卵。

适宜的细胞也包括涉及在众多疾病状态(即使还处于非疾病状态)中的那些细胞类型。因此，适宜的真核细胞类型包括但不限于，所有类型的肿瘤细胞(例如，黑色素瘤，骨髓性白血病，肺癌，乳腺癌，卵巢癌，结肠癌，肾癌，前列腺癌，胰腺癌和睾丸癌)，心肌细胞，树突状细胞，内皮细胞，上皮细胞，淋巴细胞(T细胞和B细胞)，肥大细胞，嗜酸性粒细胞，血管内膜细胞，巨噬细胞，自然杀伤细胞，红血球，肝细胞，白细胞(包括单核白细胞)，干细胞例如造血干细胞、神经肝细胞、皮肤肝细胞、肺肝细胞、肾肝细胞、肝肝细胞和心肌干细胞(用于筛选分化因子和去分化因子)，破骨细胞，软骨细胞和其它结缔组织细胞，角化细胞，黑色素细胞，肝细胞，肾细胞，和脂肪细胞。在某些实施方式中，细胞是是原发疾病状态细胞，例如原发肿瘤细胞。适宜的细胞也包括已知的研究细胞，包括但不限于，Jurkat T细胞，NIH3T3细胞，CHO，COS等。参见ATCC细胞系目录，其明确并入本申请以作参考。

在一些实施方式中，靶细胞是肿瘤微囊泡或肿瘤大多孔室脂质体。肿瘤细胞微泡也称为肿瘤分泌的微囊泡或肿瘤分泌的外泌体，其可见于循环血液中并且具有免疫抑制活性。肿瘤细胞微泡的直径尺寸通常为30-200nm。较大的肿瘤微囊泡可以称为肿瘤大囊泡，且直径尺寸可以为3-10μm。

本申请所述的水凝胶颗粒可以用于本领域技术人员已知的任何流式细胞仪。例如，以下表9中给出的一个或多个流式细胞仪可用于本申请所述的水凝胶和试验。

实施例

通过参照以下实施例来进一步说明本发明。但是，应该注意的是，这些实施例与上述实施方式一样是说明性的，并不应以任何方式解释为对本发明的范围进行限制。

实施例1：产生水凝胶颗粒

紫外光刻法的光掩模得自CADart Services Inc.且使用AutoCad(AutoDesk，Inc.)设计。使用校准紫外光源(OAI，Inc.)将SU-8光刻抗蚀剂(Microchem，Inc.)在4″硅片上光交联，以产生微流体装置制造的掩模。PDMS(聚二甲基硅氧烷，Sigma Aldrich，Inc.)使用软光刻法和微流体装置制造的标准公开方法(参见，McDonald JC，et al.，2000，Electrophoresis 21：27-40)制备和成型。

液滴使用流动聚焦几何形成，其中两个油通道汇聚单体水性溶液的中心流，从而打破油包水乳液中的液滴。对于液滴形成，氟碳化合物油(Novec 7500 3M，Inc.)用作外部的连续相液体。为使液滴在聚合前稳定，将表面活性剂以0.5％w/w添加到油相(Krytox 157FSH的羧酸铵盐，Dupont)。为制备碱性聚丙烯酰胺凝胶颗粒，使用单体水性溶液的中心相，该水溶液包含N-丙烯酰胺(1-20％w/v)、交联剂(N，N′-双丙烯酰胺，0.05-1％w/v)、促进剂、和过硫酸铵(1％w/v)。将促进剂(N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(2％vol％)添加到油相中，以便于在液滴形成之后触发水凝胶颗粒聚合。

将几种共聚单体添加到碱性凝胶制剂中以增加官能度。在凝胶形成之后，烯丙基胺为二次标记提供伯胺基团。我们通过添加共聚单体丙烯酸烯丙基酯和甲基丙烯酸烯丙基酯来调节凝胶的折射率，从而调节前向散射。液滴的侧向散射如下调节：在聚合之前将二氧化硅纳米粒子和/或PMMA(聚(甲基丙烯酸甲酯))颗粒(～100nm)的胶状悬浮体添加到中心水相。

水凝胶颗粒的化学计量倍增通过利用共聚单体实现，所述共聚单体包含用于二次标记的化学正交侧基(胺，羧基，马来酰亚胺，环氧化物，炔烃等)。

以5kHz的平均速率形成液滴，将其在氟碳化合物油相中收集。聚合在50℃进行30分钟，将所得水凝胶颗粒从油相洗涤到水性溶液中。

实施例2：12 11m水凝胶颗粒的产生和显像

使包含5％丙烯酰胺、0.25％双丙烯酰胺、0.05％烯丙基胺、和0.1％过硫酸铵的水流过中心通道，并由包含0.1％TEMED的油汇聚穿过10微米喷嘴，以制得10μm水凝胶颗粒，如图3A所示。聚合之后，将颗粒在水中洗涤，如图3B所示，并将其缀合于相关的染料。荧光水凝胶颗粒用荧光显微镜显像，如图3C所示。

实施例3：水凝胶颗粒光学性质的多维调节

如图4所述，在多个维度上调节水凝胶颗粒，以匹配不同于聚苯乙烯小珠的具体细胞类型。使用光学参数例如FSC和SSC(图4A)或二次标记物的组合将细胞去卷积。调节水凝胶颗粒以匹配不同于聚苯乙烯小珠(棕色)的具体细胞类型SSC和FSC，其在尺寸(FSC)和侧向散射上是有限度的(图4B)。水凝胶颗粒用化学计量比调节的具体化学侧基和二次标记物进一步官能化，从而使细胞类型精确匹配，而又不会损害生物噪声，依然与固定细胞系行为一样(图4C)。

实施例4：流式细胞仪延迟时间与水凝胶颗粒直径的关系

如图5所示，流式细胞仪的液滴间延迟可与水凝胶颗粒直径精确相关。所示数据为当使用流式细胞仪喷嘴尺寸为70至100μm时，直径为3μm、6μm、10μm、32μm、和50μm的水凝胶颗粒。

实施例5：含有包封的DNA的水凝胶颗粒与细胞的比较

为形成含有包封的DNA的水凝胶颗粒，将40μg/mL-1000μg/mL的重组小牛胸腺DNA添加到包含20％在水中的19∶1(丙烯酰胺：双丙烯酰胺)和0.1％烯丙基胺的聚合物混合物中。在液滴形成前，将0.4％过硫酸铵添加到混合物中。水凝胶颗粒按照实施例1所述形成。当使用商业成像细胞仪和使用碘化丙锭显像时，含有200μg/mL包封的小牛胸腺DNA的水凝胶颗粒显示出细胞样的染色，并将其与使用相同过程染色的中国仓鼠卵巢细胞进行比较。图像使用Nexcelom Cellometer^TM获得(图6)。

将得自颊粘膜拭子的细胞在PBS中洗涤并用碘化丙锭染色。平行地，包含一系列DNA浓度的水凝胶颗粒的各群落也以相同方式染色。细胞和颗粒悬浮液都在流式细胞仪(488/590nm激发/发射)上分析。面颊细胞和相同量程的包封的DNA颗粒的流式细胞计数法分析表明，颗粒显示出一系列细胞样的荧光性质(图7，左图)。染色的强度显示与中位强度线性相关，通过流式细胞计数法测得(图7，右图)。

实施例6：调节水凝胶颗粒侧向散射

将硅胶以12.5％、6.25％、3.125％和0％添加到聚合物混合物的水性部分，水凝胶颗粒按照实施例1所述形成。前向散射和侧向散射数据使用流式细胞仪获得。结果表明，侧向散射信号(图8，左图)随着包封的纳米粒子的百分增高会增加，而前向散射(图8，右图)总体保持未变，表明与侧向散射和前向散射的调节无关。

实施例7：调节水凝胶颗粒前向散射

在该实验中，在10至40％的范围内改变丙烯酰胺：双丙烯酰胺在水凝胶组合物中的百分比，以调节水凝胶颗粒的折射率，通过在流式细胞仪中的前向散射测得。如图9所示，前向散射随着丙烯酰胺：双丙烯酰胺相对于的百分比增加而增加。

实施例8：调节水凝胶颗粒光学性质

调节水凝胶颗粒以匹配所需细胞亚型的光学性质的实例。可以将共聚单体与纳米粒子组合以在流式细胞仪中使用被动光学测量调节水凝胶的前向散射和侧向散射两种性质。通过将这些性质与化学不稳定的共聚单体(例如烯丙基胺，丙烯酸)组合，可以增加和标记(如果需要)另外的荧光团/蛋白质/生物侧基，以便于除了散射性质之外还匹配细胞子群落染色。这些是三种主要的可利用流式细胞计数法确定细胞的度量。另外的侧基例如包含重金属的那些可以用于例如Cy-TOF(细胞计数法，飞行时间质谱)标定。最后，可以包封生物相容材料以模拟亚细胞细胞器染色。

实施例9：调节水凝胶颗粒光学性质

将50nm纳米粒子胶状悬浮体结合到水凝胶基质中以模拟淋巴细胞和单核细胞的光学性质(图13A和13B)。改变悬浮体的百分比组成以匹配来自血液样本对照的血细胞子群落(Streck)(图13C)。

特别地，调节水凝胶颗粒的丙烯酰胺单体浓度(0.7-0.8M)以增加颗粒的前向散射，从而匹配血细胞子群落。也可以改变双丙烯酰胺交联剂的百分比来影响前向散射(1-5％)。二氧化硅纳米粒子以5％或10％用于组合物来调节侧向散射。该实验的结果显示于图13。

* * * * * * * *

本申请通篇引用的所有文件、专利、专利申请、出版物、产品说明书、和规程完全并入本申请以作参考，用于所有目的。

本说明书中例证和讨论的实施方式仅意在以发明人所知的最好方式教导本领域技术人员制备和使用本发明。在不背离本发明的情况下，上述本发明实施方式的修改和变型也是可行的，本领域技术人员根据以上教导是可以知晓的。因此应该理解的是，在权利要求及其等价物的范围内，本发明可以按没有具体说明的方式实践。

Claims

1.一种组合物，其包含：

水凝胶颗粒；

水性溶液；

所述水凝胶颗粒悬浮在所述水性溶液中，所述水凝胶颗粒包含聚合的单体并且具有官能化的表面和调节散射的添加剂中的至少一者，使得所述水凝胶颗粒具有基本上相似于靶细胞的对应光学散射性质的光学散射性质，

所述光学散射性质由以下提供：共聚单体、化学侧基、包封材料、胶态二氧化硅或丙烯酰胺与双丙烯酰胺的比率，其中基本上相似表示至少40％相似。

2.权利要求1所述的组合物，其中所述基本上相似于靶细胞的对应光学散射性质的光学散射性质是侧向散射。

3.权利要求1所述的组合物，其中所述基本上相似于靶细胞的对应光学散射性质的光学散射性质是前向散射。

4.权利要求1所述的组合物，其中所述调节散射的添加剂包括共聚单体。

5.权利要求1所述的组合物，其中所述调节散射的添加剂包括纳米粒子的胶态悬浮体。

6.权利要求1所述的组合物，其中所述靶细胞是淋巴细胞、单核细胞、或粒细胞之一。

7.权利要求1所述的组合物，其中所述聚合的单体是可生物降解的单体。

8.权利要求7所述的组合物，其中所述可生物降解的单体是单糖，二糖，多糖，肽，蛋白质，或蛋白质结构域。

9.权利要求7所述的组合物，其中所述可生物降解的单体是结构多糖。

10.权利要求7所述的组合物，其中所述可生物降解的单体是以下之一：琼脂，琼脂糖，海藻酸，微藻多糖酸，α-葡聚糖，支链淀粉，直链淀粉，阿拉伯木聚糖，β-葡聚糖，胼胝质，卡苏兰，角叉菜胶多糖，动物纤维素，纤维素，壳质，壳聚糖，金藻昆布多糖，凝胶多糖，糊精，右旋糖苷，聚蔗糖，果聚糖，岩藻依聚糖，半乳葡甘露聚糖，半乳甘露聚糖，半乳糖胺半乳糖，结冷胶，葡聚糖，葡甘露聚糖，葡萄醛酸木聚糖，糖萼，糖原，半纤维素，同多糖，羟丙甲纤维素，菊粉，开菲尔多糖，海带多糖，蘑菇多糖，果聚糖多糖，地衣多糖，甘露聚糖，混联葡聚糖，裸藻淀粉，果胶酸，果胶，喷他淀粉，植物糖原，平菇葡聚糖，聚葡萄糖，多糖肽，金属卟啉，普鲁兰多糖，裂褶菌多醣，左旋糖，西佐糖，文莱胶，黄原胶，木聚糖，木葡聚糖，酵母聚糖，或其组合。

11.权利要求7所述的组合物，其中所述可生物降解的单体选自纤维糊精和环糊精。

12.权利要求7所述的组合物，其中所述可生物降解的单体是α-环糊精。

13.权利要求7所述的组合物，其中所述可生物降解的单体是艾考糊精。

14.一种组合物，其包含：

悬浮在水性溶液中的水凝胶颗粒，所述水凝胶颗粒包含聚合的单体并且具有衍生化的表面，使得所述水凝胶颗粒具有模拟靶细胞的细胞内组分中的一者或整个靶细胞的对应光学性质的光学性质，所述光学性质由以下提供：共聚单体、化学侧基、包封材料、胶态二氧化硅或丙烯酰胺与双丙烯酰胺的比率。

15.权利要求14所述的组合物，其中所述靶细胞是白细胞。

16.权利要求14所述的组合物，其中所述靶细胞是原核细胞或真核细胞之一。

17.权利要求14所述的组合物，其中所述聚合的单体是可生物降解的单体。

18.权利要求17所述的组合物，其中所述可生物降解的单体是单糖，二糖，多糖，肽，蛋白质，或蛋白质结构域。

19.权利要求14所述的组合物，其中所述水凝胶颗粒的结构性质是二级标记物波形。

20.权利要求19所述的组合物，其中所述二级标记物波形是荧光标记物波形。

21.权利要求14所述的组合物，其中所述聚合的单体是双官能单体。

22.确定样本是否包括淋巴细胞和单核细胞中的一种或多种的方法，其包括：

向细胞计数装置中插入悬浮在水性溶液中的水凝胶颗粒的群体，所述水凝胶颗粒的群体包括：(1)第一部分的水凝胶颗粒，其具有基本上相似于淋巴细胞的前向散射和侧向散射，和(2)第二部分的水凝胶颗粒，其具有基本上相似于单核细胞的前向散射和侧向散射，其中所述水凝胶颗粒的群体的每个水凝胶颗粒包含聚合的单体并且用至少一种光学添加剂官能化；

使用所述细胞计数装置测量所述水凝胶颗粒的群体的每个水凝胶颗粒的前向散射和侧向散射；

基于所述水凝胶颗粒的群体的测量的前向散射和侧向散射标定所述细胞计数装置；

将包含细胞群体的样本添加到所标定的细胞计数装置；和

使用所标定的细胞计数装置测量所述细胞群体的每个细胞的前向散射和侧向散射，以确定所述样本是否包括淋巴细胞和单核细胞中的一种或多种，

其中基本上相似表示至少40％相似。

23.检测样本中的白细胞的方法，其包括：

向细胞计数装置中插入水性溶液中的水凝胶颗粒，所述水凝胶颗粒的光学散射性质基本上相似于白细胞，所述水凝胶颗粒包含聚合的单体并且用至少一种光学添加剂官能化；

使用所述细胞计数装置测量所述水凝胶颗粒的光学散射性质以标定所述细胞计数装置；

将样本插入所述细胞计数装置中，所述样本包含细胞群体；

测量所述细胞群体中的个体细胞的光学散射性质；和

基于光学散射性质的测量结果确定白细胞或其群体是否存在于所述样本中，

其中基本上相似表示至少40％相似。

24.权利要求23所述的方法，其进一步包括：如果确定一个或多个白细胞存在于所述样本中，则将所述白细胞或白细胞群体分选到单独的容器中。

25.权利要求23所述的方法，其进一步包括：向所述细胞计数装置中插入水凝胶颗粒的群体，其中所述水凝胶颗粒的群体的每个水凝胶颗粒具有基本上相似于白细胞亚型的至少一种光学散射性质，其中所述细胞计数装置基于所述水凝胶颗粒的群体的每个水凝胶颗粒的测量的光学散射性质标定。

26.权利要求25所述的方法，其中对于所述水凝胶颗粒的群体中的每一个水凝胶颗粒而言，所述至少一种光学散射性质是相同的。

27.权利要求23所述的方法，其中所述至少一种光学散射性质是侧向散射。

28.权利要求23所述的方法，其中所述至少一种光学散射性质是前向散射。

29.权利要求23所述的方法，其中所述水凝胶颗粒具有基本上相似于白细胞的荧光发射，所述方法进一步包括：

使用所述细胞计数装置测量所述水凝胶颗粒的荧光发射以标定所述细胞计数装置；和

测量所述细胞群体中的个体细胞的荧光发射，其中进一步基于测量的荧光发射确定白细胞或其群体是否存在于所述样本中。

30.权利要求23所述的方法，其中所述至少一种光学散射性质是FSC与SSC的比率。

31.权利要求23所述的方法，其中所述水凝胶颗粒的聚合的单体选自：甲基丙烯酸羟基乙基酯，甲基丙烯酸乙基酯，甲基丙烯酸2-羟基乙基酯，甲基丙烯酸丙二醇酯，丙烯酰胺，N-乙烯基吡咯烷酮，甲基丙烯酸甲基酯，甲基丙烯酸缩水甘油基酯，甲基丙烯酸甘油酯，甲基丙烯酸乙二醇酯，乙二醇，富马酸，甲基丙烯酸2-羟基乙基酯，甲基丙烯酸羟基乙氧基乙基酯，甲基丙烯酸羟基二乙氧基乙基酯，甲基丙烯酸甲氧基乙基酯，甲基丙烯酸甲氧基乙氧基乙基酯，甲基丙烯酸甲氧基二乙氧基乙基酯，聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯，甲氧基-聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸，甲基丙烯酸钠，甲基丙烯酸甘油酯，甲基丙烯酸羟基丙基酯，甲基丙烯酸羟基丁基酯，丙烯酸苯基酯，甲基丙烯酸苯基酯，丙烯酸苄基酯，甲基丙烯酸苄基酯，丙烯酸2-苯基乙基酯，甲基丙烯酸2-苯基乙基酯，丙烯酸2-苯氧基乙基酯，甲基丙烯酸2-苯氧基乙基酯，丙烯酸苯基硫代乙基酯，甲基丙烯酸苯基硫代乙基酯，丙烯酸2,4,6-三溴苯基酯，甲基丙烯酸2,4,6-三溴苯基酯，丙烯酸五溴苯基酯，甲基丙烯酸五溴苯基酯，丙烯酸五氯苯基酯，甲基丙烯酸五氯苯基酯，丙烯酸2,3-二溴丙基酯，甲基丙烯酸2,3-二溴丙基酯，丙烯酸2-萘基酯，甲基丙烯酸2-萘基酯，丙烯酸4-甲氧基苄基酯，甲基丙烯酸4-甲氧基苄基酯，丙烯酸2-苄氧基乙基酯，甲基丙烯酸2-苄氧基乙基酯，丙烯酸4-氯苯氧基乙基酯，甲基丙烯酸4-氯苯氧基乙基酯，丙烯酸2-苯氧基乙氧基乙基酯，甲基丙烯酸2-苯氧基乙氧基乙基酯，N-苯基丙烯酰胺，N-苯基甲基丙烯酰胺，N-苄基丙烯酰胺，N-苄基甲基丙烯酰胺，N,N-二苄基丙烯酰胺，N,N-二苄基甲基丙烯酰胺，N-二苯基甲基丙烯酰胺，N-(4-甲基苯基)甲基丙烯酰胺，N-1-萘基丙烯酰胺，N-4-硝基苯基丙烯酰胺，N-(2-苯基乙基)丙烯酰胺，N-三苯基甲基丙烯酰胺，N-(4-羟基苯基)丙烯酰胺，N,N-甲基苯基丙烯酰胺，N,N-苯基苯基乙基丙烯酰胺，N-二苯基甲基甲基丙烯酰胺，N-(4-甲基苯基)甲基甲基丙烯酰胺，N-1-萘基甲基丙烯酰胺，N-4-硝基苯基甲基丙烯酰胺，N-(2-苯基乙基)甲基丙烯酰胺，N-三苯基甲基甲基丙烯酰胺，N-(4-羟基苯基)甲基丙烯酰胺，N,N-甲基苯基甲基丙烯酰胺，N,N'-苯基苯基乙基甲基丙烯酰胺，N-乙烯基咔唑，4-乙烯基吡啶，2-乙烯基吡啶，或其组合。

32.权利要求23所述的方法，其中所述水凝胶颗粒的聚合的单体是可生物降解的单体。

33.权利要求32所述的方法，其中所述可生物降解的单体是单糖，二糖，多糖，肽，蛋白质，或蛋白质结构域。

34.权利要求33所述的方法，其中所述可生物降解的单体是包含至少一个非天然氨基酸的蛋白质或蛋白质结构域。

35.权利要求32所述的方法，其中所述可生物降解的单体是结构多糖。

36.权利要求32所述的方法，其中所述可生物降解的单体是琼脂，琼脂糖，海藻酸，微藻多糖酸，α-葡聚糖，支链淀粉，直链淀粉，阿拉伯木聚糖，β-葡聚糖，胼胝质，卡苏兰，角叉菜胶多糖，动物纤维素，纤维素，壳质，壳聚糖，金藻昆布多糖，凝胶多糖，糊精，右旋糖苷，聚蔗糖，果聚糖，岩藻依聚糖，半乳葡甘露聚糖，半乳甘露聚糖，半乳糖胺半乳糖，结冷胶，葡聚糖，葡甘露聚糖，葡萄醛酸木聚糖，糖萼，糖原，半纤维素，同多糖，羟丙甲纤维素，菊粉，开菲尔多糖，海带多糖，蘑菇多糖，果聚糖多糖，地衣多糖，甘露聚糖，混联葡聚糖，裸藻淀粉，果胶酸，果胶，喷他淀粉，植物糖原，平菇葡聚糖，聚葡萄糖，多糖肽，金属卟啉，普鲁兰多糖，裂褶菌多醣，左旋糖，西佐糖，文莱胶，黄原胶，木聚糖，木葡聚糖，酵母聚糖，或其组合。

37.权利要求32所述的方法，其中所述可生物降解的单体选自纤维糊精和环糊精。

38.权利要求32所述的方法，其中所述可生物降解的单体是α-环糊精。

39.权利要求32所述的方法，其中所述可生物降解的单体是艾考糊精。

40.权利要求32所述的方法，其中所述可生物降解的单体是壳聚糖或透明质酸。

41.权利要求33所述的方法，其中所述蛋白质是结构蛋白，其结构域，或其组合。

42.权利要求33所述的方法，其中所述蛋白质是蛋白多糖，其结构域，或其组合。

43.权利要求33所述的方法，其中所述蛋白质是细胞外基质组分。

44.权利要求42所述的方法，其中所述蛋白多糖是核心蛋白多糖，双糖链蛋白多糖，睾丸蛋白聚糖，双库尼茨抑制剂，纤维调节素，光蛋白聚糖，其结构域，或其组合。

45.权利要求43所述的方法，其中所述蛋白质是弹性蛋白或蛋白多糖。

46.权利要求43所述的方法，其中所述蛋白质是胶原蛋白。

47.权利要求46所述的方法，其中所述胶原蛋白是胶原蛋白I型，胶原蛋白II型，胶原蛋白III型，其结构域或其组合。

48.权利要求23所述的方法，其中所述水凝胶颗粒的聚合的单体是双官能的。

49.权利要求23所述的方法，其中所述至少一种光学添加剂是表4中列出的细胞表面标记物之一，或其组合。

50.标定用于分析白细胞的细胞计数装置的方法，其包括：

向细胞计数装置中插入悬浮在水性溶液中的水凝胶颗粒的群体，所述水凝胶颗粒的群体的每个水凝胶颗粒具有基本上相似于淋巴细胞、单核细胞、或粒细胞之一的侧向散射和前向散射，每个水凝胶颗粒包含聚合的单体并且用至少一种光学添加剂官能化；

使用所述细胞计数装置测量所述水凝胶颗粒的群体的每个水凝胶颗粒的侧向散射和前向散射；和

基于所述水凝胶颗粒的群体的测量的侧向散射和前向散射标定用于分析白细胞的细胞计数装置，

其中基本上相似表示至少40％相似。