CN107583101A - 一种促进伤口愈合的生物膜制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药产品领域,具体涉及一种促进伤口愈的生物膜制剂及其制备方法。本发明生物膜制剂包括以下成分及其重量份组成:扣囊复膜孢酵母多糖提取物0.20~0.75份,海藻酸钙10~25份,紫丁香苷2~6份,壳聚糖100~150份和丝素蛋白50~80份。与现有技术相比,本发明促进伤口愈合的生物膜制剂具有快速止血、快速愈合的作用;本发明所用成分安全无刺激,并且还具有修复疤痕的作用。本发明生物膜制剂成本低,功效好,无副作用,属于天然产品。
Description
技术领域
本发明属于医药产品领域,具体涉及一种促进伤口愈的生物膜制剂及其制备方法。
背景技术
皮肤是人体的重要器官,具有屏障保护、吸收与代谢、分泌与排泄、体温调节、免疫等各种功能。由于创伤、擦伤、皮肤溃烂和烧伤等原因,可能导致皮肤的大范围伤害,并有可能导致并发症,危及人类生命。伤口愈合过程分为四期:(1)组织液渗出期:由胶原纤维细胞分泌胶原蛋白填充伤口,其中I型胶元蛋白为形成瘢痕的主要胶原。(2)炎症期(清创期):发生在24-48小时,并伴随细菌感染,此时主要有免疫细胞清除受损组织和微生物。(3)增殖分化期:首先是表皮干细胞分化表皮,真皮干细胞分化表皮组织,成纤维细胞,以及毛发、汗腺和皮脂腺等皮肤附属器,造血干细胞中的内皮祖细胞分化新生血管、淋巴管和神经。(4)组织重朔:过度纤维化的瘢痕难以被机体吸收,造成血管以及毛发等皮肤附属器的重建发生严重障碍,形成终身病理性瘢痕。
目前促进伤口愈合的药物多从抑菌、抗炎或者促进伤口组织再生入手,出现了数量众多的药物及药物组合物。如中国发明专利(CN1531939A)提出了一种促进伤口愈合的药,通过配伍具有活血补血、生血生肌功效的中药,对术后伤口、创伤、迟缓愈合的多种伤口都具有促进作用,疗效显著。此外,中国发明专利(CN103143054A)公开了一种具有消炎、促进伤口愈合的胶体敷料,由于是胶体性质,可根据伤口的大小、形状进行变化,使用方便。现有促进伤口愈合的药物及组合物大多具有抗菌、抗炎等作用,虽然可以促进伤口的愈合,但是存在对伤口刺激性较大、涂布不方便、伤口愈合后容易留下疤痕等问题,尤其在比较明显的部位,如手上、脸上等,疤痕的存在给患者工作、生活带来种种不便。
发明内容
本发明的目的是提供一种促进伤口愈的生物膜制剂,本发明膜制剂中含有多种天然生物提取成分,不仅能显著促进伤口愈合的作用,而且对伤口及周围皮肤温和无刺激,并意外发现本发明生物膜制剂还具有祛除疤痕的作用。
本发明的另一个目的是提供一种促进伤口愈合的生物制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现:
所述促进伤口愈合的生物膜制剂,由以下成分及其重量份组成:扣囊复膜孢酵母多糖提取物0.20~0.75份,海藻酸钙10~25份,紫丁香苷2~6份,壳聚糖100~150份和丝素蛋白50~80份。
进一步地,由以下成分及其重量份组成:扣囊复膜孢酵母多糖提取物0.6份,海藻酸钙15份,紫丁香苷4份,壳聚糖120份和丝素蛋白70份。
进一步地,所述扣囊复膜孢酵母多糖提取物的制备方法,分为以下步骤:
S1.将扣囊复膜孢酵母接种到50mL种子培养基中,30℃,200r/min培养24h;所述种子培养基由可溶性淀粉2.0%,蛋白胨2.0%,酵母膏1.0%;
S2.取步骤S1中种子液20mL接种到含有300mL发酵培养基中培养,30℃,200r/min培养48h,收集发酵液;
S3.将步骤S2所得发酵液及菌体进行于102kPa条件下高压处理20-30min后进行超声破碎,450功率条件下超声20min;然后进行冻融处理:-40℃下冷冻2h,再置于100℃水中进行融化,反复冻融3次后再次进行超声破碎;
S4.向步骤S3最终得到的超声破碎液中加入3%KOH溶液,100℃下处理1h后,加入醋酸至溶液pH值为6-7,最后按溶液体积比2:1加入95%乙醇,沉淀8-10h后去掉上清,用丙酮洗涤2次,乙醚洗涤1次,30℃下干燥24h即得。
其中,所述步骤S2中发酵培养基由葡萄糖2.0%,葡萄籽粉3.5%,蛋白胨2.0%和酵母浸膏1.0%组成。
进一步地,所述壳聚糖为N,O-羧甲基壳聚糖。
一种促进伤口愈合的生物膜制剂的制备方法,分为以下步骤:
I.将壳聚糖加入到含有0.5%吐温-80的水溶液中,搅拌至完全溶解,加入海藻酸钙,搅拌均匀,得溶液A;
II.将丝素蛋白和扣囊复膜孢酵母多糖提取物溶于水中后搅拌均匀后,加热至60~80℃后加入紫丁香苷和溶液A,搅拌至完全溶解,得溶液B;
III.将溶液B冷却至室温后超声脱气20min,即得。
多糖是一种免疫调节剂,能在多条途径,多个层面对免疫系统发挥调节作用。能够激活T、B淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK)、细胞毒T细胞(CTL)等免疫细胞,还能活化补体,促进细胞因子的生成,增强红细胞免疫功能,参与机体特异性与非特异性免疫,从而提高机体免疫功能。
炎症是机体组织对损伤性刺激的一种防御性反应,它是一个由多细胞(比如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞、内皮细胞等)、多成分(细胞因子,血管活性物质、趋化因子、粘附因子、炎症相关酶类)参与的复杂的过程。在炎症过程中,一方面损伤因子直接或间接造成组织和细胞的破坏,另一方面通过炎症充血和渗出反应,以稀释、杀伤和包围损伤因子。同时通过实质和间质细胞的再生使受损的组织得以修复和愈合。因此炎症是损伤和抗损伤的统一过程。适当的炎症反应对人体抵抗损伤、清除感染,促进伤口的愈合是有益的。酵母多糖可以快速的引起炎症反应,而本发明技术人员意外发现当扣囊复膜孢酵母多糖提取物按0.20-0.75份用量与本发明生物膜制剂中其它成分相互作用,能够显著提高伤口的愈合速度。
海藻酸钙作用与伤口时,会产生海藻酸钙凝胶,这种凝胶是亲水性的,可以使氧气通过而细菌不能通过,并能促进皮肤新组织的生长。
壳聚糖是由甲壳素经脱乙酰化处理得到的产物,具有无毒副作用、无免疫原性,优异的生物相容性,生物可降解性,广谱抑菌性,止血及促进伤口愈合作用;丝素蛋白是由蚕丝脱胶而来,作为一种对人体炎症反应小,透气透氧性好,生物相容性良好的天然材料;紫丁香苷具有止血作用,在本发明生物膜制剂中紫丁香苷附在壳聚糖和蚕丝蛋白混合纤维表面,从而增大了与伤口的接触面积,可以促进伤口快速止血和伤口的愈合。
与现有技术相比,本发明促进伤口愈合的生物膜制剂具有快速止血、快速愈合的作用;本发明所用成分安全无刺激,并且还具有修复疤痕的作用。本发明生物膜制剂成本低,功效好,无副作用,属于天然产品。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明,以便本领域的技术人员更了解本发明,但并不因此限制本发明。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。
实施例1一种促进伤口愈合的生物膜制剂
所述促进伤口愈合的生物膜制剂,由以下成分及其重量份组成:扣囊复膜孢酵母多糖提取物0.6份,海藻酸钙15份,紫丁香苷4份,壳聚糖120份和丝素蛋白70份。
所述扣囊复膜孢酵母多糖提取物的制备方法,分为以下步骤:
S1.将扣囊复膜孢酵母接种到50mL种子培养基中,30℃,200r/min培养24h;所述种子培养基由可溶性淀粉2.0%,蛋白胨2.0%,酵母膏1.0%;
S2.取步骤S1中种子液20mL接种到含有300mL发酵培养基中培养,30℃,200r/min培养48h,收集发酵液;
S3.将步骤S2所得发酵液及菌体进行于102kPa条件下高压处理20-30min后进行超声破碎,450功率条件下超声20min;然后进行冻融处理:-40℃下冷冻2h,再置于100℃水中进行融化,反复冻融3次后再次进行超声破碎;
S4.向步骤S3最终得到的超声破碎液中加入3%KOH溶液,100℃下处理1h后,加入醋酸至溶液pH值为6-7,最后按溶液体积比2:1加入95%乙醇,沉淀8-10h后去掉上清,用丙酮洗涤2次,乙醚洗涤1次,30℃下干燥24h即得。
其中,所述步骤S2中发酵培养基由葡萄糖2.0%,葡萄籽粉3.5%,蛋白胨2.0%和酵母浸膏1.0%组成。
实施例2一种促进伤口愈合的生物膜制剂
所述促进伤口愈合的生物膜制剂,由以下成分及其重量份组成:扣囊复膜孢酵母多糖提取物0.20份,海藻酸钙10份,紫丁香苷2份,壳聚糖100份和丝素蛋白50份。
所述扣囊复膜孢酵母多糖提取物的制备方法,与实施例1相似。
实施例3一种促进伤口愈合的生物膜制剂
所述促进伤口愈合的生物膜制剂,由以下成分及其重量份组成:扣囊复膜孢酵母多糖提取物0.75份,海藻酸钙25份,紫丁香苷6份,壳聚糖150份和丝素蛋白80份。
所述扣囊复膜孢酵母多糖提取物的制备方法,与实施例1相似。
实施例4一种促进伤口愈合的生物膜制剂的制备方法
所述促进伤口愈合的生物膜制剂的制备方法,分为以下步骤:
I.将壳聚糖加入到含有0.5%吐温-80的水溶液中,搅拌至完全溶解,加入海藻酸钙,搅拌均匀,得溶液A;
II.将丝素蛋白和扣囊复膜孢酵母多糖提取物溶于水中后搅拌均匀后,加热至60~80℃后加入紫丁香苷和溶液A,搅拌至完全溶解,得溶液B;
III.将溶液B冷却至室温后超声脱气20min,即得。
对比例1一种促进伤口愈合的生物膜制剂
与实施例1的区别在于,扣囊复膜孢酵母多糖提取物重量份为1.5份,其它均与实施例1类似。
对比例2一种促进伤口愈合的生物膜制剂
与实施例1的区别在于,用地榆粉替换紫丁香苷,其它均与实施例1类似。试验例1生物膜制剂止血效果实验
(一)试验材料:实施例1-3及对比例1-2按实施例方法制备得到的促进伤口愈合的生物膜制剂。
(二)试验方法:在小鼠的后肢制造2x1cm大小的出血创面,用上述生物膜制剂进行止血,同时以医用纱布为对照止血,记录止血时间,每组设6个平行试验,计算平均止血时间。
(三)试验结果:试验结果如表1所示。
表1各组生物膜制剂止血效果
由表1可知,本发明实施例1-3按实施例4方法制备得到的生物膜制剂止血时间均<60s,实施例1生物膜制剂止血时间为30s,为最佳实施例;对比例1止血时间是实施例1止血时间的3倍,说明扣囊复膜孢酵母多糖提取物添加量过多时,可能由于引发过重的炎症反应而影响止血。对比例2止血时间是实施例1止血时间的2.3倍,说明紫丁香苷与本发明生物膜制剂相互作用止血效果更为明显。
试验例2各组伤口愈合率的测定
(一)试验材料:实施例1-3及对比例1-2按实施例方法制备得到的促进伤口愈合的生物膜制剂。
(二)试验方法:选用50只SPF级雌性BALB/c小鼠,体量20±2g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。将实验小鼠随机分为5组,每组10只。小鼠麻醉后背部递毛,于脊柱中部切割一个0.8cm×0.8cm创面,去除皮肤与筋膜,特粘合剂粘合一侧的硅酮夹板,中心夹板的伤口和夹板固定中断6-0尼龙线缝合,以确保定定位,用透明闭塞敷料覆盖伤口,每组小鼠每日早晚2次在创面分别对应涂抹上述各组生物膜制剂,一星期后分别计算愈合率。
其中愈合率=(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积。
(三)试验结果:试验结果如表2所示。
表2各组大鼠创面愈合率
组别 | 愈合率 |
实施例1 | 91% |
实施例2 | 83% |
实施例3 | 87% |
对比例1 | 64% |
对比例2 | 72% |
由表2可知,本发明实施例1-3组大鼠创面愈合率均大于85%,其中实施例1愈合率高达91%,为最佳实施例。通过创面观察,可明显发现个实施例的创面愈合程度均比对比例1要高,说明扣囊复膜孢酵母多糖提取物重量份在0.20-0.75份时对伤口愈合具有显著的促进作用。
除此之外,,从各组动物的外观形态上观察,治疗后实施例1~实施例4组,创面组织出现软化表现,增生块渐呈淡红色,略高出皮面,质地逐渐软化。随后治疗至2周时,疤痕明显软化,颜色及质地接近正常皮肤。而对照组具有增生性疤痕的特点,说明本发明生物膜制剂还具有修复疤痕的作用。
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,但本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (6)
1.一种促进伤口愈合的生物膜制剂,其特征在于,包括以下成分及其重量份组成:扣囊复膜孢酵母多糖提取物0.20~0.75份,海藻酸钙10~25份,紫丁香苷2~6份,壳聚糖100~150份和丝素蛋白50~80份。
2.根据权利要求1所述促进伤口愈合的生物膜制剂,其特征在于,由以下成分及其重量份组成:扣囊复膜孢酵母多糖提取物0.6份,海藻酸钙15份,紫丁香苷4份,壳聚糖120份和丝素蛋白70份。
3.根据权利要求1或2所述促进伤口愈合的生物膜制剂,其特征在于,扣囊复膜孢酵母多糖提取物的制备方法,分为以下步骤:
S1.将扣囊复膜孢酵母接种到50mL种子培养基中,30℃,200r/min培养24h;所述种子培养基由可溶性淀粉2.0%,蛋白胨2.0%,酵母膏1.0%;
S2.取步骤S1中种子液20mL接种到含有300mL发酵培养基中培养,30℃,200r/min培养48h,收集发酵液;
S3.将步骤S2所得发酵液及菌体进行于102kPa条件下高压处理20-30min后进行超声破碎,450功率条件下超声20min;然后进行冻融处理:-40℃下冷冻2h,再置于100℃水中进行融化,反复冻融3次后再次进行超声破碎;
S4.向步骤S3最终得到的超声破碎液中加入3%KOH溶液,100℃下处理1h后,加入醋酸至溶液pH值为6-7,最后按溶液体积比2:1加入95%乙醇,沉淀8-10h后去掉上清,用丙酮洗涤2次,乙醚洗涤1次,30℃下干燥24h即得。
4.根据权利要求3所述促进伤口愈合的生物膜制剂,其特征在于,所述步骤S2中发酵培养基由葡萄糖2.0%,葡萄籽粉3.5%,蛋白胨2.0%和酵母浸膏1.0%。
5.根据权利要求1或2所述促进伤口愈合的生物膜制剂,其特征在于,所述壳聚糖为N,O-羧甲基壳聚糖。
6.一种促进伤口愈合的生物膜制剂的制备方法,其特征在于,分为以下步骤:
I.将壳聚糖加入到含有0.5%吐温-80的水溶液中,搅拌至完全溶解,加入海藻酸钙,搅拌均匀,得溶液A;
II.将丝素蛋白和扣囊复膜孢酵母多糖提取物溶于水中后搅拌均匀后,加热至60~80℃后加入紫丁香苷和溶液A,搅拌至完全溶解,得溶液B;
III.将溶液B冷却至室温后超声脱气20min,即得。
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