CN108283648A - 一种促进皮肤痤疮治愈的贴膜制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药产品领域，尤其涉及一种促进皮肤痤疮治愈的贴膜制剂及其制备方法和应用。本发明提供了一种贴膜制剂，由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成。实验结果表明，本发明贴膜制剂能够促进皮肤痤疮治愈。本发明贴膜制剂采用基质胶联合成纤维细胞条件培养基和维生素A对痤疮进行修复，使用时，仅需要敷贴在创口处，即可起到立竿见影的修复效果，避免了对机体造成多次伤害。本发明贴膜制剂在敷贴后，贴膜制剂中的细胞因子和维生素A被释放出来，进而促进形成新生组织，起到定植修复的作用；成纤维细胞条件培养基中含有多种活性因子和大量的胶原蛋白，能提高组织的再生能力、促进原有组织的修复，起到全方位痤疮修复作用。

Description

一种促进皮肤痤疮治愈的贴膜制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药产品领域，尤其涉及一种促进皮肤痤疮治愈的贴膜制剂及其制备方法和应用。
背景技术
目前，痤疮以西药治疗为主，内服药可选用美满霉素(米诺环素)、阿奇霉素等，外用药可选用2.5％～10％过氧化苯甲酰凝胶、0.1％阿达帕林凝胶、克林霉素溶液等。单纯使用西药等敷涂或服用西药，虽然起到一定的伤口修复作用，但是修复速度慢，容易呈现耐药性，并且会对创口造成一定的刺激，体质敏感的人群还会出现过敏反应。
发明内容
本发明提供了一种贴膜制剂，用于解决痤疮使用西药治疗痤疮修复速度慢、对痤疮创口具有刺激等的问题。
本发明的具体技术方案如下：
一种贴膜制剂，由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成。
优选的，所述成纤维细胞条件培养基和所述基质胶的体积比为1：1～3。
优选的，所述维生素A在所述贴膜制剂中的浓度为0.5～2mg/mL。
本发明还提供一种贴膜制剂的制备方法，包括：
a)0～4℃下将所述成纤维细胞条件培养基和所述基质胶混匀，得到混合液；
b)0～4℃下在步骤a)所述混合液中加入维生素A后置于模具中成型，得到所述贴膜制剂。
优选的，所述成纤维细胞条件培养基按照如下方法获得：
将成纤维细胞进行传代培养，获得P2～P3代成纤维细胞，收集所述P2～P3代成纤维细胞的培养上清液，得到所述成纤维细胞条件培养基。
进一步的，将所述成纤维细胞进行传代培养之前，还包括：
将皮肤组织依次进行消化处理和离心分离，得到成纤维细胞。
进一步的，收集所述成纤维细胞的培养上清液之后，得到所述成纤维细胞条件培养基之前，还包括：
离心去除沉淀。
本发明还提供了上述技术方案所述制剂或上述技术方案所述制备方法制得的制剂在治疗皮肤痤疮中的应用。
优选的，所述制剂的存储温度为0～4℃。
优选的，所述制剂的使用温度为4℃以上。
综上所述，本发明提供了一种贴膜制剂，由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成。实验结果表明，本发明贴膜制剂能够促进皮肤痤疮治愈。本发明贴膜制剂采用基质胶联合成纤维细胞条件培养基和维生素A对痤疮进行修复，该贴膜制剂使用时，仅需要敷贴在创口处，即可起到立竿见影的修复效果，避免了对机体造成多次伤害。本发明贴膜制剂在敷贴后，贴膜制剂中的细胞因子和维生素A被释放出来，进而促进形成新生组织，起到定植修复的作用；成纤维细胞条件培养基中含有多种活性因子和大量的胶原蛋白，能提高组织的再生能力、促进原有组织的修复，起到全方位痤疮修复作用。
具体实施方式
本发明提供了一种贴膜制剂，用于解决痤疮使用西药治疗痤疮修复速度慢、对痤疮创口具有刺激等的问题。
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种贴膜制剂，由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成。
基质胶(Matrigel)是一种可溶性的基底膜基质，主要成分包括层黏连蛋白和胶原IV等，同时含有TGF-β成纤维细胞生长因子、组织纤维酶原活化因子以及其它在EHS肿瘤中自然表达的生长因子等。基质胶可以有效帮助上皮细胞等各类细胞的附着和分化，其中，包括神经细胞、肝细胞、哺乳动物上皮细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等。并且，基质胶还会影响鼠乳腺上皮细胞的蛋白表达水平，支持周围神经再生和牛输软管上皮细胞的分化。
生物可降解高分子材料一般用于生物体内，是非永久性植入材料，在发挥作用之后能被活体吸收或参与正常的代谢而被排出体外，同时其降解产物对生物体无毒。本发明中，基质胶作为一种天然的水溶性的生物可降解高分子材料，其降解产物易被吸收而不产生炎症反应。本发明贴膜制剂由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成，基质胶可被人体降解且对成纤维细胞无毒副作用，并且能起到很好的支架作用；成纤维细胞条件培养基中含有很多成纤维细胞分泌的细胞因子和生长因子，有利于创口的快速愈合；维生素A可参与糖蛋白的合成，对上皮的正常形成、防止皮肤粗糙及皮肤发育与维持起着十分重要的作用。
本发明中，贴膜制剂由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成。该贴膜制剂采用基质胶联合成纤维细胞条件培养基和维生素A对痤疮进行修复，该贴膜制剂使用时，仅需要敷贴在创口处，即可起到立竿见影的修复效果，避免了对机体造成多次伤害。本发明贴膜制剂在敷贴后，贴膜制剂中的细胞因子和维生素A被释放出来，进而促进形成新生组织，起到定植修复的作用。此外，成纤维细胞条件培养基中含有多种活性因子和大量的胶原蛋白，能提高组织的再生能力、促进原有组织的修复，起到全方位痤疮修复作用。
本发明中，成纤维细胞条件培养基和基质胶的体积比为1：1～3。
维生素A在贴膜制剂中的浓度为0.5～2mg/mL。
本发明还提供一种贴膜制剂的制备方法，包括：
a)0～4℃下将成纤维细胞条件培养基和基质胶混匀，得到混合液；
b)0～4℃下在步骤a)混合液中加入维生素A后置于模具中成型，得到贴膜制剂。
本发明中，成纤维细胞条件培养基按照如下方法获得：
将成纤维细胞进行传代培养，获得P2～P3代成纤维细胞，收集P2～P3代成纤维细胞的培养上清液，得到成纤维细胞条件培养基。
进一步的，将成纤维细胞进行传代培养之前，还包括：
将皮肤组织依次进行消化处理和离心分离，得到成纤维细胞。
进一步的，收集成纤维细胞的培养上清液之后，得到成纤维细胞条件培养基之前，还包括：
离心去除沉淀。
本发明还提供了上述技术方案制剂或上述技术方案制备方法制得的制剂在治疗皮肤痤疮中的应用。
本发明中，制剂的存储温度为0～4℃。
本发明中，制剂的使用温度为4℃以上。
本发明提供了一种贴膜制剂，由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成。实验结果表明，本发明贴膜制剂能够促进皮肤痤疮治愈。本发明贴膜制剂采用基质胶联合成纤维细胞条件培养基和维生素A对痤疮进行修复，该贴膜制剂使用时，仅需要敷贴在创口处，即可起到立竿见影的修复效果，避免了对机体造成多次伤害。本发明贴膜制剂在敷贴后，贴膜制剂中的细胞因子和维生素A被释放出来，进而促进形成新生组织，起到定植修复的作用；成纤维细胞条件培养基中含有多种活性因子和大量的胶原蛋白，能提高组织的再生能力、促进原有组织的修复，起到全方位痤疮修复作用。
为了进一步理解本发明，下面结合具体实施例对本发明进行详细阐述。
实施例1
成纤维细胞的分离提取
将皮肤组织依次进行消化处理和离心分离，得到成纤维细胞。
实施例2
成纤维细胞条件培养基的收集
取汇合度80％～90％的P2～P3代的成纤维细胞，用PBS清洗1～3遍后，往成纤维细胞中加入0.015～0.04mL/cm2的0.05％～0.3％的胰酶+0.01％～0.04％EDTA消化1～3min，用5～10倍于消化液的完全培养基终止酶解，200～400g离心5min，用完全培养基重选后，接种于培养皿或培养瓶中，传代密度为8000～15000cell/cm2。培养24h后，更换无酚红1640基础培养基，细胞继续培养48h后，收集培养上清液，200-400g离心5min，取上清，将体积浓缩至50mL，置于4℃保存备用。其中，更换的无酚红1640基础培养基的体积是一定的，即100mL，培养24h后的成纤维细胞的数量则不是一定的，成纤维细胞可为5×106cell/mL、1×107cell/mL或5×107cell/mL。
实施例3
贴膜制剂的制备
贴膜制剂由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成，制备步骤包括：
1)0℃下取出基质胶，待基质胶凝固前，将实施例2收集的成纤维细胞条件培养基与基质胶按体积比为1：1～3充分混匀，得到第一混合液；
2)0℃下在混合液加入药用维生素A，其中药用维生素A在混合液中的浓度为0.5～2mg/mL，得到第二混合液；
3)将第二混合液倒入圆形的模具中，得到贴膜制剂。贴膜制剂置于4℃冰箱保存备用。
实施例4
贴膜制剂的质量控制
对贴膜制剂进行细菌、真菌、内毒素、甲肝、乙肝、丙肝、梅毒和HIV等各类病毒检测，检测结果均为阴性。该制剂在0℃时是液体状态，当温度高于4℃时，会逐渐凝固，形成薄膜结构，能够与皮肤完全贴合。
实施例5
选择皮肤痤疮瘢痕患者60例。患者皮肤类型属于fitzpatricⅣ型，年龄25～59(36.05±8.13)岁；其中男12例，女48例；患者的选择标准包括：⑴患者的皮肤痤疮瘢痕为中度到重度；⑵患者自愿进行本次研究；⑶患者对实验目的以及过程了解；⑷患者接受留取照片以及实施无创皮肤性检测；患者的选择标准包括：患有皮肤肿瘤；妊娠妇女；精神异常；具有暴晒史以及过敏药物服用史。所有患者在准备进行临床实验前，全部签署知情同意书。
实验分为六组，包括阴性对照组1、阴性对照组2、组1～组4，其中阴性对照组1使用的贴膜制剂的成分包括基质胶，阴性对照组2使用的贴膜制剂的成分包括基质胶和维生素A(1mg/mL)，组1～组4使用的贴膜制剂的成分包括基质胶、维生素A(1mg/mL)和成纤维细胞条件培养基，但组1～组4使用的贴膜制剂的成分中成纤维条件培养基的含量不同，各组使用的贴膜制剂的成分详见表1。
使用贴膜制剂对患者进行3个月的治疗，实验结果如表2所示。其中使用协议疗效判断标准选择0～4级分类法对临床疗效进行评价。0分表示未获得任何的改善；1分表示改善程度在0％～25％之间；2分表示改善程度在25％与50％之间；3分表示改善程度在50％～75％之间；4分表示改善程度在75％～100％之间。数据进行了统计学处理，使用统计学软件SPSS 16.0进行数据分析统计，临床评分等计量资料用x-±s表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
从表2可知，阴性对照组1和阴性对照组2的治愈率均为10.0％，组1～组4和阴性对照组1相比，P<0.001，具有极显著性差异；组1～组4和阴性对照组2相比，P<0.001，具有极显著性差异；组2～组4的治愈率均在70.0％以上，优于组1的治愈率。
表1各组使用的贴膜制剂的成分
表2各组的皮肤痤疮治愈结果
*与阴性对照组1相比，P<0.05，具有显著性差异；**与阴性对照组1相比，P<0.001，具有极显著性差异；#与阴性对照组2相比，P<0.05，具有显著性差异；##与阴性对照组2相比，P<0.001，具有极显著性差异。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种贴膜制剂，其特征在于，由成纤维细胞条件培养基、维生素A和基质胶制成。
2.根据权利要求1所述的贴膜制剂，其特征在于，所述成纤维细胞条件培养基和所述基质胶的体积比为1：1～3。
3.根据权利要求1所述的贴膜制剂，其特征在于，所述维生素A在所述贴膜制剂中的浓度为0.5～2mg/mL。
4.一种贴膜制剂的制备方法，其特征在于，包括：
a)0～4℃下将所述成纤维细胞条件培养基和所述基质胶混匀，得到混合液；
b)0～4℃下在步骤a)所述混合液中加入维生素A后置于模具中成型，得到所述贴膜制剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述成纤维细胞条件培养基按照如下方法获得：
将成纤维细胞进行传代培养，获得P2～P3代成纤维细胞，收集所述P2～P3代成纤维细胞的培养上清液，得到所述成纤维细胞条件培养基。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，将所述成纤维细胞进行传代培养之前，还包括：
将皮肤组织依次进行消化处理和离心分离，得到成纤维细胞。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，收集所述成纤维细胞的培养上清液之后，得到所述成纤维细胞条件培养基之前，还包括：
离心去除沉淀。
8.权利要求1～3任意一项所述制剂或权利要求4～7任意一项所述制备方法制得的制剂在治疗皮肤痤疮中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述制剂的存储温度为0～4℃。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述制剂的使用温度为4℃以上。
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