CN107320768B - 用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法 - Google Patents

用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107320768B
CN107320768B CN201710526426.4A CN201710526426A CN107320768B CN 107320768 B CN107320768 B CN 107320768B CN 201710526426 A CN201710526426 A CN 201710526426A CN 107320768 B CN107320768 B CN 107320768B
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem cell
dressing
cell extract
wound repair
wound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710526426.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107320768A (zh
Inventor
刘少辉
车七石
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Rainhome Pharm and Tech Co Ltd
Original Assignee
Guangzhou Rainhome Pharm and Tech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Rainhome Pharm and Tech Co Ltd filed Critical Guangzhou Rainhome Pharm and Tech Co Ltd
Priority to CN201710526426.4A priority Critical patent/CN107320768B/zh
Publication of CN107320768A publication Critical patent/CN107320768A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107320768B publication Critical patent/CN107320768B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0023—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0004—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing inorganic materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0057—Ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0061—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L26/0066—Medicaments; Biocides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0061—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L26/009—Materials resorbable by the body
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/10—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing inorganic materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/30—Compounds of undetermined constitution extracted from natural sources, e.g. Aloe Vera
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/404—Biocides, antimicrobial agents, antiseptic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/41—Anti-inflammatory agents, e.g. NSAIDs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
    • A61L2300/414—Growth factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/602—Type of release, e.g. controlled, sustained, slow
    • A61L2300/604—Biodegradation

Abstract

本发明属于医用敷料领域，具体涉及一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法。创伤修复含有干细胞提取物的敷料中每100g所述敷料包括：干细胞提取物1‑10g，壳聚糖季铵盐1‑5g，生物活性玻璃粉体5‑10g，荷荷巴油0.3‑0.5g，甘油5.5‑6.5g和蒸馏水65‑82.2g。本发明敷料不仅能有效促进创伤修复，而且杀菌消毒显著；此外本发明敷料为液体敷料，方便用于皮肤各处创伤。

Description

用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法
技术领域
本发明属于医用敷料领域，具体涉及一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法。
背景技术
皮肤是是人体最大的器官，皮肤覆盖全身，并与外界环境接触，起着保护机体的屏障作用，它使体内各种组织和器官免受物理性、机械性、化学性和病原微生物性的侵袭，例如防止水分、电解质和血浆蛋白的丢失，抵御细菌侵入，防止毒物进入，抵挡机械性损伤，防止紫外线照射对人体的伤害等。此外，皮肤还具有感觉、分泌、排泄和体温调节等生理学功能。因此，皮肤无论是溃疡伤口还是各种烧伤、擦伤等都应尽快得到护理，使皮肤恢复组织和功能，在这方面敷料起着重要作用。
成纤维细胞作为创面修复的主要细胞，创伤后出现以活化、增殖、迁移、合成和分泌包括胶原在内的细胞外基质等为特征的生物学行为改变，并参与肉芽组织及瘢痕形成和后期创面重塑。2006年日本京都大学山中伸弥把Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4这四种转录因子引入小鼠胚胎或皮肤纤维母细胞，发现可诱导其发生转化，产生的诱导多能干细胞在形态、基因和蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等都与胚胎干细胞极为相似。因此，以成纤维细胞为母细胞制备得到的诱导多能干细胞在医学上具有广泛的应用前景。
中国专利申请(CN201510193325.0)公开了一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法，所述一种具有生物活性的医用敷料是将人或动物的胚胎干细胞、脐带血干细胞、羊水干细胞、外周血造血干细胞、骨髓间充质干细胞的一种或几种在体外培养，收集对数生长期分泌的干细胞生长因子与与I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠中的一种或几种基质按比例混合制成薄层海绵作为内层，贴合以聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸(PGA)、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)等中的一种或几种形成的混合物制成的多孔高分子材料薄膜外层，冻干裁切后组成具有生物活性的医用敷料，用于覆盖烧、烫伤、手术、创伤、疾病引起的皮肤缺损创面，诱导创面修复。
但是与诱导多能干细胞相比，上述干细胞在体外培养增殖速度慢、易衰老，不易大量获得干细胞生长因子，因而要大批量生产所述具有生物活性的医用敷料，对干细胞的消耗量巨大，生产成本高。
中国专利申请(201510700273.1)提供了一种生物敷料的制备方法及生物敷料，该生物敷料的制备方法，包括：步骤1)将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上，培养，获得真皮层；步骤2)将所获得的真皮层进行冷冻干燥，获得含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层；步骤3)在含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层的上表面涂覆硅胶溶液，静置、凝固，获得生物敷料。
成纤维细胞在上述覆盖有胶原的尼龙膜上培养难道大，并且长时间培养极易染菌，这不仅对生产技术人员操作提出了严格的要求，而且对生产设备的要求也更为严格。而且，敷料上培养的成纤维细胞失活后，则其主要作用的为细胞外基质中活性物质。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，其含有干细胞提取物，抗菌肽和生物活性玻璃等主要成分。本发明敷料不仅能有效促进创伤修复，而且杀菌消毒显著；此外本发明敷料为液体敷料，方便用于皮肤各处创伤。此外，本发明还提供了用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现：
一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，每100g所述敷料包括：干细胞提取物1-10g，壳聚糖季铵盐1-5g，生物活性玻璃粉体5-10g，荷荷巴油0.3-0.5g，甘油5.5-6.5g和蒸馏水65-82.2g。
优选地，每100g所述敷料由以下成分及其重量组成：干细胞提取物8g，壳聚糖季铵盐3g，生物活性玻璃粉体10g，荷荷巴油0.3g，甘油6.2g和蒸馏水68g。
优选地，所述干细胞提取物为诱导多能干细胞提取物。所述IPS细胞提取物的制备方法为：
S1.诱导多能干细胞的培养：Matrigel基质胶4℃过夜溶解后，用DMEM/F12按体积比1∶100的比例稀释Matrigel基质胶，混匀后加入培养皿中包被30min后弃去培养液，接种诱导多能干细胞，并于37℃的CO2培养箱中培养；
S2.细胞提取物提取：吸出S3培养瓶中培养液，用PBS清洗2～3次，在4℃以下，匀浆3-5次；将匀浆液置于冰箱冻存至完全冻结，然后在不高于隔水42℃的条件下彻底融化，然后收集到离心管中，离心取上清；取上清液置于透析袋中，以4℃PBS溶液透析8小时；将透析袋内溶液冷冻干燥，保存在-80℃冰箱。
优选地，所述壳聚糖季铵盐由壳聚糖和2,3-环氧丙基三甲基氯化铵合成的，取代度为4％～6％。
优选地，所述生物活性玻璃粉体由58S生物活性玻璃粉体与45S生物活性玻璃粉体按质量比2∶3混合而成；其中58S生物活性玻璃粉体粒径＜20μm，45S生物活性玻璃粉体粒径＜40μm。
本发明所用诱导多能干细胞是对人成纤维细胞进行重编程而制备得到的，具有与胚胎细胞功能相似的无限增殖能力和蛋白表达能力，因此，与普通干细胞相比，能分泌更多的生物活性因子，如富含表皮生长因子(EGF)、纤维细胞生长因子(FGF)、神经生长因子(NGF)、肝细胞生长因子(HGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)等。与现有技术中收集到的细胞分泌相比，本发明细胞提取物包含更多的生物活性因子、胶原蛋白，而且还含多种功能蛋白、氨基多糖及维生素等有利于皮肤修复的成分。诱导多能干细胞具有无限增殖的能力，从而保证了所述细胞提取得大量获得。
生物活性玻璃是一类能对机体组织进行修复、替代与再生、具有能使组织合材料之间形成键合作用的材料。生物活性玻璃的降解产物能够促进生长因子的生成、促进细胞的繁衍、增强成骨细胞的基因表达和骨组织的生长。是迄今为止唯一既能够与骨组织成键结合，同时又能与软组织相连接的人工生物材料。此种修复性材料的用途不但极为广泛，而且在众多领域的专业性产品上有着无法替代的神奇功效，如肌肤护理、美白去皱、烧伤烫伤、口腔溃疡、肠胃溃疡、皮肤溃烂、杀灭真菌、骨骼修复、软组织和骨组织的键合等。本发明采用的生物活性玻璃由58S生物活性玻璃粉体与45S生物活性玻璃粉体按质量比2∶3混合而成；其中58S生物活性玻璃粉体粒径＜20μm，45S生物活性玻璃粉体粒径＜40μm，其与干细胞提取物混合具有协同作用，能更好的促进伤口的愈合。
荷荷巴油(Jojoba oil)，是墨西哥原生植物荷荷巴(霍霍巴)的萃取物，具有滋润、收紧皮肤、软化脂肪、消炎的功效。荷荷巴油是渗透性最强的基础油，极易被皮肤吸收，清爽滋润、不油腻，能恢复皮肤pH平衡，同时还含有丰富的维生素A、B、E和钙、镁等矿物质。纯天然荷荷芭油已经应用于保湿剂、防晒霜、香皂、沐浴液、按摩剂、香波、护发素、发胶、摩丝、洗液、眼影剂、医药霜剂等。本发明中采用荷荷巴油的主要作用是其能促进敷料中干细胞细胞提取物、生物活性玻璃及壳聚糖季铵盐与伤口处皮肤的接触，能够使伤口处皮肤快速吸收，从而促进伤口的愈合和恢复。
本发明还提供了一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料的制备方法，其包括以下步骤：
(1)干细胞提取物冻干粉的制备；
(2)准确称取相应重量的荷荷巴油和甘油，二者混合后搅拌10-15min后，加入生物活性玻璃粉体，继续搅拌至均匀，制备得到A液；
(3)将壳聚糖季铵盐溶于蒸馏水中，加入到A液中，混匀后加热至85℃，持续加热5min后，搅拌均匀，得B液；
(4)待B液冷却至35-40℃时，加入干细胞提取物冻干粉，搅拌均匀，即得。
本发明提供的用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，其各成分间相互作用，相互促进。与现有技术相比，本发明敷料促进皮肤创伤修复作用效果极为明显，治愈时间短；并且本发明敷料杀菌消毒作用明显，产品保质期时间长。除此之外，本发明敷料为液体敷料，方便用于皮肤各处创伤。本发明敷料的制备方法简单，易于大批量生产。
具体实施方式
下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。
生物活性玻璃购于昆山华侨科技新材料有限公司，58S生物活性玻璃型号为HQ-BG58-D1，45S生物活性玻璃型号为HQ-BG45s-D2；本发明IPS细胞购于上海斯丹塞(干细胞)生物技术有限公司，CAS号0210-003；人类胚胎干细胞完全培养基，货号HESM-01-500；Ⅳ型胶原酶，货号M-001。抗菌肽购于河南格莱美生物科技有限公司，型号2017GLM108。
实施例1 一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料
所述用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，每100g所述敷料由以下成分及其重量组成：诱导多能干细胞提取物8g，壳聚糖季铵盐3g，生物活性玻璃粉体10g，荷荷巴油0.3g，甘油6.2g和蒸馏水68g。
所述IPS细胞提取物的制备方法为：
S1.诱导多能干细胞的培养：Matrigel基质胶4℃过夜溶解后，用DMEM/F12按体积比1∶100的比例稀释Matrigel基质胶，混匀后加入培养皿中包被30min后弃去培养液，接种诱导多能干细胞，并于37℃的CO2培养箱中培养；
S2.细胞提取物提取：吸出S3培养瓶中培养液，用PBS清洗2～3次，在4℃以下，匀浆3-5次；将匀浆液置于冰箱冻存至完全冻结，然后在不高于隔水42℃的条件下彻底融化，然后收集到离心管中，离心取上清；取上清液置于透析袋中，以4℃PBS溶液透析8小时；将透析袋内溶液冷冻干燥，保存在-80℃冰箱。
所述壳聚糖季铵盐由壳聚糖和2,3-环氧丙基三甲基氯化铵合成的，取代度为5％。
所述生物活性玻璃粉体由58S生物活性玻璃粉体与45S生物活性玻璃粉体按质量比2∶3混合而成；其中58S生物活性玻璃粉体粒径＜20μm，45S生物活性玻璃粉体粒径＜40μm。
其制备方法分为以下步骤：
(1)干细胞提取物冻干粉的制备；
S1.诱导多能干细胞的培养：Matrigel基质胶4℃过夜溶解后，用DMEM/F12按体积比1∶100的比例稀释Matrigel基质胶，混匀后加入培养皿中包被30min后弃去培养液，接种诱导多能干细胞，并于37℃的CO2培养箱中培养；
S2.细胞提取物提取：吸出S3培养瓶中培养液，用PBS清洗2～3次，在4℃以下，匀浆3-5次；将匀浆液置于冰箱冻存至完全冻结，然后在不高于隔水42℃的条件下彻底融化，然后收集到离心管中，离心取上清；取上清液置于透析袋中，以4℃PBS溶液透析8小时；将透析袋内溶液冷冻干燥，保存在-80℃冰箱。
(2)准确称取相应重量的荷荷巴油和甘油，二者混合后搅拌10-15min后，加入生物活性玻璃粉体，继续搅拌至均匀，制备得到A液；
(3)将壳聚糖季铵盐溶于蒸馏水中，加入到A液中，混匀后加热至85℃，持续加热5min后，搅拌均匀，得B液；
(4)待B液冷却至35-40℃时，加入干细胞提取物冻干粉，搅拌均匀，即得。
实施例2 一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料
所述用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，每100g所述敷料由以下成分及其重量组成：诱导多能干细胞提取物1g，壳聚糖季铵盐5g，生物活性玻璃粉体5g，荷荷巴油0.3g，甘油5.5g和蒸馏水82.2g。
所述IPS细胞提取物的制备方法为：
S1.诱导多能干细胞的培养：Matrigel基质胶4℃过夜溶解后，用DMEM/F12按体积比1∶100的比例稀释Matrigel基质胶，混匀后加入培养皿中包被30min后弃去培养液，接种诱导多能干细胞，并于37℃的CO2培养箱中培养；
S2.细胞提取物提取：吸出S3培养瓶中培养液，用PBS清洗2～3次，在4℃以下，匀浆3-5次；将匀浆液置于冰箱冻存至完全冻结，然后在不高于隔水42℃的条件下彻底融化，然后收集到离心管中，离心取上清；取上清液置于透析袋中，以4℃PBS溶液透析8小时；将透析袋内溶液冷冻干燥，保存在-80℃冰箱。
所述壳聚糖季铵盐由壳聚糖和2,3-环氧丙基三甲基氯化铵合成的，取代度为4％。
所述生物活性玻璃粉体由58S生物活性玻璃粉体与45S生物活性玻璃粉体按质量比2:3混合而成；其中58S生物活性玻璃粉体粒径＜20μm，45S生物活性玻璃粉体粒径＜40μm。
其制备方法与实施例1类似。
实施例3 一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料
所述用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，每100g所述敷料由以下成分及其重量组成：诱导多能干细胞提取物10g，壳聚糖季铵盐1g，生物活性玻璃粉体10g，荷荷巴油0.5g，甘油6.5g和蒸馏水65g。
所述IPS细胞提取物的制备方法为：
S2.诱导多能干细胞的培养：Matrigel基质胶4℃过夜溶解后，用DMEM/F12按体积比1∶100的比例稀释Matrigel基质胶，混匀后加入培养皿中包被30min后弃去培养液，接种诱导多能干细胞，并于37℃的CO2培养箱中培养；
S2.细胞提取物提取：吸出S3培养瓶中培养液，用PBS清洗2～3次，在4℃以下，匀浆3-5次；将匀浆液置于冰箱冻存至完全冻结，然后在不高于隔水42℃的条件下彻底融化，然后收集到离心管中，离心取上清；取上清液置于透析袋中，以4℃PBS溶液透析8小时；将透析袋内溶液冷冻干燥，保存在-80℃冰箱。
所述壳聚糖季铵盐由壳聚糖和2,3-环氧丙基三甲基氯化铵合成的，取代度为6％。
所述生物活性玻璃粉体由58S生物活性玻璃粉体与45S生物活性玻璃粉体按质量比2∶3混合而成；其中58S生物活性玻璃粉体粒径＜20μm，45S生物活性玻璃粉体粒径＜40μm。
其制备方法与实施例1类似。
对比例1 一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料
所述用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，每100g所述敷料由以下成分及其重量组成：干细胞生长因子8g，壳聚糖季铵盐7.5g，生物活性玻璃58S粉体4g，生物活性玻璃45S粉体6g荷荷巴油0.3g，甘油6.2g和蒸馏水68g。
所述生物活性玻璃粉体由58S生物活性玻璃粉体与45S生物活性玻璃粉体按质量比2∶3混合而成；其中58S生物活性玻璃粉体粒径＜20μm，45S生物活性玻璃粉体粒径＜40μm。
所述敷料的制备方法，其中，干细胞生长因子的制备为：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基，于37℃、5％CO2的条件下对干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到1-10×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥后备用。
其它步骤均与实施例1制备方法相似。
与实施例1的区别在于，将诱导多能干细胞提取物替换为干细胞生长因子。
试验例1 体表创伤止血护创促愈试验
1、试验方法如下：
新西兰兔，30只，按性别、体重随机分为A、B、C、D以及对照组共五组，每组6只，雌雄各半，先以脱毛剂对家兔背部脱毛，24h后以1％戊巴比妥钠30mg/kg耳缘静脉注射麻醉。无菌条件下使用7号注射器针头在脱毛区皮肤“#”型划伤(以渗血而无明显出血为度)，A、B、C、D四组分别采用上述实施例1-3及对比例1分别制备得到的敷料置于创伤部位，对照组采用传统棉纱敷料，前30s每隔5s观察伤口的流血情况，30s后每隔30秒观察伤口的流血情况，用滤纸条轻轻蘸吸直至血液不再渗出，即滤纸条上不再沾有血液为止，记录所需时间即出血时间。超过15min仍未止血的，按压止血，出血时间以15min计。使用纱布绷带腹部缠绕固定。12小时后去掉外敷物，记录创面情况，用生理盐水清洗，更换外敷物，每日1次，连续3天。3天后去掉外敷受试物，使创面自然恢复，每日观察记录创面情况，连续12天，每天观察动物整理情况及受损区的红肿、结痂、脱痂等情况。
2、试验结果
各组敷料使用效果见表1。
表1 生物创伤敷料效果观察
组别 止血时间 炎症反应 3d伤口愈合情况观察
对照组 200S 中度 伤口红肿，有积液
实施例1 5S 无 伤口愈合良好，无红肿
实施例2 8S 无 伤口愈合良好，无红肿
实施例3 10S 无 伤口愈合良好，无红肿
对比例1 80S 轻度 伤口红肿，轻微炎症反应
从表1中可以看出：实施例1-3组敷料止血、消炎、促愈的效果均显著优于传统创伤敷料；实施例1组止血时间短，无炎症反应，伤口愈合快，为最佳实施例。对比例1组止血时间用80S，有轻度炎症反应，3天后伤口依然红肿并有轻微炎症反应；因此实施例1与对比例1敷料、传统创伤敷料相比，对于创伤修复效果明显。
试验例2 抗菌率测试
将实施例1-3及对比例1制备得到的敷料用于抑菌圈试验：
①将粪肠球菌ATCC29212在LB固体平板上划线，37℃培养过夜。
②挑取单菌落，接种于3～5ml的LB液体培养基中，37℃、220r/min振荡培养过夜。
③按1～2％的体积比率将培养过夜的菌液接种于适量的LB液体培养基中，37℃、250r/min振荡培养3h左右，当OD600≈0.6～0.8时，进行抑菌试验。
④将LB固体培养基加热融化，当培养基温度降至45℃左右时，将对数期的粪肠球菌ATCC29212按2％的接种量与LB培养基混匀，倾倒平板，待平板凝固后放入4℃冰箱中冷却保存。用2.7mm直径打孔器打孔，每孔注入10ul实施例1-3及对比例1制备得到的敷料，对照孔加入无菌水。每处理重复3次，倒置培养皿，37℃培养过夜。根据抑菌圈大小计算抗菌率，具体结果如表2所示。
表2 不同敷料对粪肠球菌ATCC29212的抗菌效果
组别 抗菌率
实施例1 99.4％±2.47
实施例2 98.2％±1.56
实施例3 97.9％±3.84
对比例1 82.5％±4.72
由表2可知，本发明敷料对伤口感染最常见的粪肠球菌ATCC29212的抗菌率均在90％以上，其中实施例1制备得到的敷料抗菌率高达99.4％，高于对比例1。由此可知，本发明敷料还具有显著的抗菌效果。
综上可知，本发明提供的用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，不仅能有效促进创伤修复，而且杀菌消毒显著；此外，本发明敷料的制备方法简单，成本低廉，制备得到的为液体敷料，方便用于皮肤各处创伤。
以上所述仅为本发明的实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (5)

1.一种用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，其特征在于，每100g所述敷料包括：诱导多能干细胞提取物1-10g，壳聚糖季铵盐1-5g，生物活性玻璃粉体5-10g，荷荷巴油0.3-0.5g，甘油5.5-6.5g和蒸馏水65-82.2g；所述IPS细胞提取物的制备方法为：
S1.诱导多能干细胞的培养：Matrigel基质胶4℃过夜溶解后，用DMEM/F12按体积比1:100的比例稀释Matrigel基质胶，混匀后加入培养皿中包被30min后弃去培养液，接种诱导多能干细胞，并于37℃的CO2培养箱中培养；
S2.细胞提取物提取：吸出S1培养皿中培养液，用PBS清洗2～3次，在4℃以下，匀浆3-5次；将匀浆液置于冰箱冻存至完全冻结，然后在不高于隔水42℃的条件下彻底融化，然后收集到离心管中，离心取上清；取上清液置于透析袋中，以4℃PBS溶液透析8小时；将透析袋内溶液冷冻干燥，保存在-80℃冰箱。
2.根据权利要求 1所述用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，其特征在于，每100g所述敷料由以下成分及其重量组成：诱导多能干细胞提取物8g，壳聚糖季铵盐4g，生物活性玻璃粉体10g，荷荷巴油0.3g，甘油6.2g和蒸馏水68g。
3.根据权利要求1或2所述用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，其特征在于，所述生物活性玻璃由58S生物活性玻璃与45S生物活性玻璃按质量比2:3混合而成；其中58S生物活性玻璃粉体粒径＜20μm，45S生物活性玻璃粉体粒径＜40μm。
4.根据权利要求1或2所述用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料，其特征在于，所述壳聚糖季铵盐由壳聚糖和2,3-环氧丙基三甲基氯化铵合成的，取代度为4％～6％。
5.根据权利要求1-4任一所述用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)干细胞提取物冻干粉的制备；
(2)准确称取相应重量的荷荷巴油和甘油，二者混合后搅拌10-15min后，加入生物活性玻璃粉体，继续搅拌至均匀，制备得到A液；
(3)将壳聚糖季铵盐溶于蒸馏水中，加入到A液中，混匀后加热至85℃，持续加热5min后，搅拌均匀，得B液；
(4)待B液冷却至35-40℃时，加入干细胞提取物冻干粉，搅拌均匀，即得。
CN201710526426.4A 2017-06-30 2017-06-30 用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法 Active CN107320768B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710526426.4A CN107320768B (zh) 2017-06-30 2017-06-30 用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710526426.4A CN107320768B (zh) 2017-06-30 2017-06-30 用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107320768A CN107320768A (zh) 2017-11-07
CN107320768B true CN107320768B (zh) 2019-03-22

Family

ID=60198623

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710526426.4A Active CN107320768B (zh) 2017-06-30 2017-06-30 用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107320768B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108324926B (zh) * 2018-03-23 2021-12-28 高志涛 干细胞提取物和抗菌肽的组合物及其用途
CN109224124B (zh) * 2018-11-21 2021-05-25 广州润虹医药科技股份有限公司 一种止血促愈合的液体敷料
CN111012792B (zh) * 2019-12-30 2022-04-19 江苏开源康达医疗器械有限公司 一种适用于骨科手术中的生物多糖冲洗液及其制备方法
CN111569145A (zh) * 2020-06-08 2020-08-25 浙江博纳生物科技有限公司 一种体表创面抗菌修复的液体敷料及其制备方法、应用
CN112156222B (zh) * 2020-09-22 2021-10-26 华南理工大学 一种止血抗菌促愈合的冷冻凝胶海绵制备方法
CN112245653B (zh) * 2020-11-13 2022-07-01 杭州伊瑟奇生物科技有限公司 一种基于三种生物活性支架材料协同细胞营养因子助于伤口愈合的蛋白膜敷料

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003017826A2 (en) * 2001-08-27 2003-03-06 Regeneration Technologies, Inc. Processed soft tissue for topical or internal application
CN101935364A (zh) * 2009-09-15 2011-01-05 上海交通大学医学院附属第九人民医院 一种壳聚糖季铵盐及其应用
CN103520764A (zh) * 2013-10-29 2014-01-22 成都迪康中科生物医学材料有限公司 功能性敷料及其制备方法和用途
CN103736135A (zh) * 2013-12-12 2014-04-23 深圳先进技术研究院 一种医用复合敷料及其制备方法
CN105056286A (zh) * 2015-07-15 2015-11-18 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心 液体创可贴及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003017826A2 (en) * 2001-08-27 2003-03-06 Regeneration Technologies, Inc. Processed soft tissue for topical or internal application
CN101935364A (zh) * 2009-09-15 2011-01-05 上海交通大学医学院附属第九人民医院 一种壳聚糖季铵盐及其应用
CN103520764A (zh) * 2013-10-29 2014-01-22 成都迪康中科生物医学材料有限公司 功能性敷料及其制备方法和用途
CN103736135A (zh) * 2013-12-12 2014-04-23 深圳先进技术研究院 一种医用复合敷料及其制备方法
CN105056286A (zh) * 2015-07-15 2015-11-18 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心 液体创可贴及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107320768A (zh) 2017-11-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107320768B (zh) 用于创伤修复含有干细胞提取物的敷料及其制备方法
Mir et al. Synthetic polymeric biomaterials for wound healing: a review
CN103520764B (zh) 功能性敷料及其制备方法和用途
Sultan et al. Silk fibroin in wound healing process
Jiang et al. Breathable, antifreezing, mechanically skin-like hydrogel textile wound dressings with dual antibacterial mechanisms
CN103083713A (zh) 一种无菌聚合创面覆盖物敷料
CN107308494A (zh) 一种注射用胶原蛋白、制备方法及填充剂
CN104888265B (zh) 温敏型胶原基复合止血凝胶的制备方法
CN103212108B (zh) 一种胶原蛋白创伤修复膜及其制备方法
CN106377791A (zh) 一种竹原藻酸盐功能敷料及其制备方法
Alizadeh et al. PDGF and VEGF-releasing bi-layer wound dressing made of sodium tripolyphosphate crosslinked gelatin-sponge layer and a carrageenan nanofiber layer
CN109731130A (zh) 一种低温生物3d打印技术制备水凝胶创面敷料的方法
Yan et al. Preparation and applications of keratin biomaterials from natural keratin wastes
Pu et al. Injectable human decellularized adipose tissue hydrogel containing stem cells enhances wound healing in mouse
Gokarneshan Application of natural polymers and herbal extracts in wound management
Rivero et al. Nanofibrous scaffolds for skin tissue engineering and wound healing applications
CN107823699A (zh) 止血防粘连膜及其制备方法
Huang et al. Combination therapy of hydrogel and stem cells for diabetic wound healing
CN104474573A (zh) 一种生物敷膜及制备方法
CN109771694A (zh) 自组装多肽纳米纤维水凝胶支架材料的制备方法及应用
Bhoopathy et al. Haemostatic potency of sodium alginate/aloe vera/sericin composite scaffolds–preparation, characterisation, and evaluation
Tavakoli et al. Keratin-and VEGF-Incorporated Honey-Based Sponge–Nanofiber Dressing: An Ideal Construct for Wound Healing
Mukherjee et al. Silk fibroin and silk sericin in skin tissue engineering and wound healing: Retrospect and prospects
Zhang et al. Advanced function, design and application of skin substitutes for skin regeneration
CN102552323A (zh) 加速皮肤修复与再生的药物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant