CN107488597A - 一种液态发酵生产金针菇菌种的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种液态发酵生产金针菇菌种的方法:将金针菇母种接种于斜面培养基培养后,接种至摇瓶中进行液体发酵获得菌种液;将菌种液接种至种子罐中搅拌通气发酵获得种子液;将种子液接种至发酵罐中搅拌通气发酵获得发酵液;发酵液过滤后,滤渣干燥得粉末状菌种。本发明的生产方法菌种产量大、生产效率高;未经干燥的发酵液也可直接用于接种,成本低;可适用于各品种黄色及白色金针菇菌种生产,获得的菌种纯净、无杂菌,成本低,便于运输;生产过程中菌丝生长快、金针菇产量大、生物利用率高。
Description
技术领域
本发明涉及一种液态发酵生产金针菇菌种的方法,属于食用菌生产领域。
背景技术
金针菇属于伞菌目口菇科金钱菌属,含有十八种氨基酸,其中人体所必须的八种氨基酸占氨基酸总量的44.5%,高于一般菇类,尤其赖氨酸和精氨酸的含量特别丰富,能促进记忆,开发智力。金针菇既是一种美味食品,又是较好的保健食品,经常食用金针菇能够防治溃疡,金针菇内还含有一种具有很好的抗癌作用的物质,国内外市场日益广阔。
近年来,金针菇工厂化设施栽培发展迅速,在生产中菌种质量成为制约工厂化生产的因素之一。目前栽培生产金针菇所用的菌种多为种植户或种植工厂由母种经多级扩繁后获得,批次间差异较大、接种量差异大,且易有杂菌污染,接种操作不易掌握,接种10次左右菌种退化严重,生产性能下降;若使用母种价格较高、生产成本过高。因此,提供一种产量大、纯度高的低成本菌种生产方法变得十分重要。
发明内容
为了解决当前金针菇栽培菌种批次间差异大、易杂菌污染、成本高的问题,本发明提供了一种产量大、纯度高、低成本的液态发酵生产金针菇菌种的方法。
本发明的另一目的是提供一种金针菇发酵培养基及其制备方法,金针菇菌丝体生长好、产量大。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案。
一种液态发酵生产金针菇菌种的方法,采用以下步骤:
(1)将金针菇母种接种于斜面培养基培养后,接种至摇瓶中进行液体发酵获得菌种液;
(2)将菌种液接种至种子罐中搅拌通气发酵获得种子液;
(3)将种子液接种至发酵罐中搅拌通气发酵获得发酵液,为液体菌种;
(4)发酵液过滤后,滤渣干燥得固体菌种。
步骤(1)中,培养温度为18-23℃;斜面培养基为PDA培养基,斜面培养时间为5-7天;摇瓶中接种量为5-10%(w/v),转速为120-150rpm,摇瓶培养时间为3-7天。
步骤(2)中,接种量为5-10%(v/v),搅拌速度为100-150rpm;培养温度为18-23℃,培养时间为3-8天;发酵期间pH为5.5-6.5,优选为6.0;通气量为0.8-1.2 v/v/min。
步骤(1)和(2)中液体培养基组成为玉米粉50g,红糖20g,磷酸二氢钾1g,七水硫酸镁0.5g,VB2 50mg,水1000mL,调节pH 5.5-6.0;采用以下步骤制备:取500mL水,加热至60℃,加入玉米粉,保持温度在60℃左右约1小时,过滤后加水补足500mL;另取500mL水,加入其他成分,40-60℃加热溶解,补足水至500mL;两液混合后调节pH,灭菌后即得。
步骤(3)中,接种量为10-25%(v/v);培养温度为15-25℃,优选为18-23℃,时间为7-10天;发酵期间控制pH为5.5-6.5,优选为6.0;搅拌速度为80-100rpm;通气量为第1-2天0.8-1.2 v/v/min,1.2-2.5 v/v/min至发酵结束。
步骤(3)中液体培养基组成为每升培养基中含玉米粉20-25g,小麦秸秆粉10-15g,红糖20-25g,麦芽浸膏1-1.5g,磷酸二氢钾0.8-1.5g,七水硫酸镁0.5-1.0g,氯化钙1.0-1.5g,VB1 50-100mg,VB2 100-250mg;其pH为5.5-6.0;采用以下方法制备:
1)取500mL水,加热至60℃,加入玉米粉和小麦秸秆粉,保持温度1小时,加水补足500mL;
2)取500mL水,加入其他成分,40-60℃加热溶解,补足水至500mL;
3)将步骤(1)与(2)中液体混合后调节pH 5.5-6.0,灭菌即得发酵金针菇的液体培养基。
步骤(4)中过滤为板框压滤,干燥为流化床低温干燥。
本发明具有以下优点:
本发明菌种产量大、生产效率高;未经干燥的发酵液也可直接用于接种,成本低;可适用于各品种黄色及白色金针菇菌种生产,获得的菌种纯净、无杂菌,成本低,便于运输;生产过程中菌丝生长快、金针菇产量大。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明,但本发明不受下述实施例的限制。
实施例1 培养基制备
1.1 PDA培养基
(1)称取去皮土豆200g,切小块加1000mL水沸腾20-30min,4层纱布趁热过滤,滤液补至1000mL;
(2)滤液中加入葡萄糖20g,琼脂15g,加热至完全融化,补水至1000mL;
(3)分装至试管,高压灭菌后搁置斜面,备用。
1.2 摇瓶与种子发酵培养基
液体培养基组成为玉米粉500g,红糖200g,磷酸二氢钾10g,七水硫酸镁5g,VB2 0.5g,水1000mL,调节pH 5.5-6.0;采用以下步骤制备:取500mL水,加热至60℃,加入玉米粉,保持温度在60℃左右约1小时,过滤后加水补足500mL;另取500mL水,加入其他成分,加热溶解,补足水至500mL;两液混合后调节pH,灭菌后即得。
(1)取5L水,加热至60℃,加入500g玉米粉,保持温度在60℃左右约1小时,过滤后加水补足5L;
(2)另取5L水,加入红糖200g,磷酸二氢钾10g,七水硫酸镁5g,VB2 2g,40℃加热溶解,补足水至5L;
(3)两液混合后调节pH至5.5,分装后105℃高压灭菌15min后备用。
1.3 发酵培养基
玉米粉2000g,小麦秸秆粉1000g,红糖2.0-2.5%,麦芽浸膏0.1-0.15%,磷酸二氢钾0.08-0.15%,七水硫酸镁0.05-0.1%,氯化钙0.1-0.15%,VB1 50-100mg/L,VB2 100-250mg/L;pH 5.5-6.0;
采用以下方法制备:
1)取50L水,加热至60℃,加入2kg玉米粉和1kg小麦秸秆粉,保持温度1小时,加水补足50L;
2)取50L水,加入红糖2kg,麦芽浸膏150g,磷酸二氢钾100g,七水硫酸镁50g,氯化钙100g,VB1 10g,VB2 10g,40℃加热溶解,补足水至50L;
3)将步骤(1)与(2)中液体混合后调节pH 5.5,灭菌后备用。
实施例2 菌种生产
(1)将金针菇母种金21接种于PDA斜面培养基23℃培养7天后,接种至摇瓶中,接种量为8%(w/v),转速为120rpm进行液体发酵,7天后获得菌种液;
(2)将菌种液接种至种子罐中,接种量为10%(v/v),100rpm搅拌23℃通气发酵5天,通气量为0.8 v/v/min,发酵期间pH为6.0,获得种子液;
(3)将种子液接种至发酵罐中,接种量为15%(v/v),100rpm搅拌23℃通气发酵7天,通气量为第1-2天0.8 v/v/min,然后1.5 v/v/min至发酵结束,发酵期间控制pH为6.0,获得发酵液,为液体菌种S1-1;
(4)发酵液板框压滤,滤渣流化床低温干燥得固体菌种S1-2,真空包装得产品。
实施例3 菌种生产特性
采用培养瓶对同一母种常规方法获得的菌种与S1-1与S1-2栽培金针菇,生长条件、田间管理与操作一致。从接种开始计算时间,对首茬金针菇的各阶段生长时间随机选取5组进行记录,每组10瓶;并记算各茬每组平均产量,结果如表1所示。由表1数据可知,本发明生产的菌种每茬周期在50天以下,常规菌种生产周期在60天左右。菌种S1-1比常规方法获得菌种的生长速度快,出菇时间短;S1-1与S1-2比常规菌种接种的产量大,本发明生产的菌种可比常规菌种多产1茬,转化率高。常规菌种生产的金针菇第3茬菇柄短而粗,易开伞盖,质量差。
表1 不同菌种生长时间与产量比较
实施例4 菌种耐储存性
将菌种S1-1与S1-2分别常温储存3天和5天后,S1-2于常温储存30天、低温0-4℃保存3个月后,进行接种栽培,对首茬生长时期及各茬产量进行观察记录,如表2所示。液体菌种3天内储存的对生长周期及产量影响较小;固态菌种虽然菌丝布满培养瓶的时间略长,但耐储存、热稳定性好、产量高,适于远距离运输。
表2 不同菌种不同储存时间生长时间与产量比较
实施例5 菌种生产
(1)将金针菇母种三明1号接种于PDA斜面培养基18℃培养7天后,接种至摇瓶中,接种量为10%(w/v),转速为130rpm进行液体发酵,5天后获得菌种液;
(2)将菌种液接种至种子罐中,接种量为8%(v/v),120rpm搅拌18℃通气发酵8天,通气量为1.2 v/v/min,发酵期间pH为5.5,获得种子液;
(3)将种子液接种至发酵罐中,接种量为20%(v/v),90rpm搅拌18℃通气发酵10天,通气量为第1-2天1.0 v/v/min,1.8 v/v/min至发酵结束,发酵期间控制pH为5.5,获得发酵液,为液体菌种S2-1;
(4)发酵液板框压滤,滤渣流化床低温干燥得固体菌种S2-2,真空包装得产品。
实施例6 菌种生产
(1)将金针菇母种杂19接种于PDA斜面培养基20℃培养5天后,接种至摇瓶中,接种量为10%(w/v),转速为150rpm进行液体发酵,3天后获得菌种液;
(2)将菌种液接种至种子罐中,接种量为10%(v/v),150rpm搅拌20℃通气发酵6天,通气量为1.0 v/v/min,发酵期间pH为6.5,获得种子液;
(3)将种子液接种至发酵罐中,接种量为25%(v/v),100rpm搅拌20℃通气发酵8天,通气量为第1-2天1.2 v/v/min,2.5 v/v/min至发酵结束,发酵期间控制pH为6.5,获得发酵液,为液体菌种S3-1;
(4)发酵液板框压滤,滤渣流化床低温干燥得固体菌种S3-2,真空包装得产品。
实施例7 菌种生产
(1)将金针菇母种FU088接种于PDA斜面培养基23℃培养6天后,接种至摇瓶中,接种量为5%(w/v),转速为120rpm进行液体发酵,7天后获得菌种液;
(2)将菌种液接种至种子罐中,接种量为5%(v/v),120rpm搅拌23℃通气发酵7天,通气量为0.8 v/v/min,发酵期间pH为6.0,获得种子液;
(3)将种子液接种至发酵罐中,接种量为10%(v/v),80 rpm搅拌23℃通气发酵10天,通气量为第1-2天0.8 v/v/min,1.2 v/v/min至发酵结束,发酵期间控制pH为6.0,获得发酵液,为液体菌种S4-1;
(4)发酵液板框压滤,滤渣流化床低温干燥得固体菌种S4-2,真空包装得产品。
Claims (7)
1.一种液态发酵生产金针菇菌种的方法,其特征在于,采用以下步骤:
(1)将金针菇母种接种于斜面培养基培养后,接种至摇瓶中进行液体发酵获得菌种液;
(2)将菌种液接种至种子罐中搅拌通气发酵获得种子液;
(3)将种子液接种至发酵罐中搅拌通气发酵获得发酵液;
(4)发酵液过滤后,滤渣干燥得粉末状菌种。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,培养温度为18-23℃;斜面培养基为PDA培养基,斜面培养时间为5-7天;摇瓶中接种量为5-10%(w/v),转速为120-150rpm,摇瓶培养时间为3-7天。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,接种量为5-10%(v/v),搅拌速度为100-150rpm;培养温度为18-23℃,培养时间为3-8天;发酵期间pH为5.5-6.5;通气量为0.8-1.2 v/v/min。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)和(2)中液体培养基组成为玉米粉50g,红糖20g,磷酸二氢钾1g,七水硫酸镁0.5g,VB2 200mg,水1000mL,调节pH 5.5-6.0;采用以下步骤制备:取500mL水,加热至60℃,加入玉米粉,保持温度在60℃左右约1小时,过滤后加水补足500mL;另取500mL水,加入其他成分,加热溶解,补足水至500mL;两液混合后调节pH,灭菌后即得。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,接种量为10-25%(v/v);培养温度为15-25℃,优选为18-23℃,时间为7-10天;发酵期间控制pH为5.5-6.5;搅拌速度为80-100rpm;通气量为第1-2天0.8-1.2 v/v/min,然后1.2-2.5 v/v/min至发酵结束。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中液体培养基每升中含玉米粉20-25g,小麦秸秆粉10-15g,红糖20-25g,麦芽浸膏1-1.5g,磷酸二氢钾0.8-1.5g,七水硫酸镁0.5-1.0g,氯化钙1.0-1.5g,VB1 50-100mg,VB2 100-250mg;其pH为5.5-6.0;采用以下方法制备:1)取500mL水,加热至60℃,加入玉米粉和小麦秸秆粉,保持温度1小时,加水补足500mL;2)取500mL水,加入其他成分,40-60℃加热溶解,补足水至500mL;3)将步骤(1)与(2)中液体混合后调节pH5.5-6.0,灭菌即得发酵金针菇的液体培养基。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中过滤为板框压滤,干燥为流化床低温干燥。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20171219 |