CN103416216B - 玉米秸作基料栽培杏鲍菇液体菌种的配方及其制备方法 - Google Patents

Abstract

目前栽培杏鲍菇的原料多为木屑和棉籽壳，木屑资源越来越枯竭，棉籽壳原料资源也有限，这就严重的影响了杏鲍菇大面积推广。玉米秸资源丰富，可用来栽培杏鲍菇，但生产上表现出产量低、质量差的问题，本项发明研究了玉米秸浸出液做液体菌种的最佳配方，碳源、氮源、无机盐的合理配比，根据微生物进化原理以驯化手段提高了杏鲍菇菌丝对玉米秸培养基的适应性，并以纤维素酶诱导手段，提高了纤维素酶活性。验证了诱导剂的最佳添加量，既起到了最佳诱导作用又不致于反馈抑制。使杏鲍菇菌丝增加了对玉米秸培养基的适应性，达到了玉米秸作基质，栽培杏鲍菇高产优质的目的，使玉米秸资源优势转化成了经济优势。

Description

玉米秸作基料栽培杏鲍菇液体菌种的配方及其制备方法

技术领域：本发明涉及一种工厂化栽培杏鲍菇液体菌种的配方，特别是以玉米秸秆作基料的菌种配方及其制备方法。本项发明属农业微生物领域，食用菌类。

背景技术：众所周知，目前杏鲍菇已成为食用菌产业的主要品种，也是农业种植业中的新品种。已经成为人们日常生活中的一个蔬菜种类。正因为如此，也成为农业结构调整的首选项目。

当前栽培杏鲍菇的主料为木屑或棉籽壳。随着栽培面积的扩大和木材资源的减少，木屑资源越来越紧张，已形成了栽培面积的扩大与资源减少的矛盾。棉籽壳是棉花生产业上的副产品，棉花属农业经济作物，年棉花种植量基本上是稳定的，因而棉籽壳年产量基本上也是稳定的。也存在着资源危机。

为了探索杏鲍菇原料新资源，人们也先后利用玉米秸作栽培杏鲍菇的基料，但终因栽培出的杏鲍菇产量低、质量差而未能大面积推广。

本项发明对玉米秸基料栽培杏鲍菇产量低、质量差的问题进行了深入的研究，发现其中有杏鲍菇菌丝对玉米秸培养基的适应性的问题。玉米秸作为基料从营养角度上是杏鲍菇菌丝分解玉米秸的纤维素，从中获取碳源作为能量，玉米秸表面有层坚硬的腊质层，纤维素酶对腊质层的分解能力差，表现出杏鲍菇菌丝很难穿过这层腊质层，因而影响了发菌速率。发菌慢，发菌期长，造成了发菌期的营养消耗，到了出菇期营养跟不上，这是产量低的根本原因。本项发明以杏鲍菇对玉米秸的适应性入手，进行了人工驯化以提高杏鲍菇纤维素酶的活性。纤维素酶的活性提高了，杏鲍菇菌丝分解玉米秸的速率提高，这样也相应的提高了发菌速率，使杏鲍菇子实体发生阶段，营养供应集中，因而达到了提高产量、提高质量的目的。

发明内容：1.发明了菌种前期玉米秸浸出液驯化培养基配方

2.发明了菌种培养前期玉米秸浸出液配方的制备方法

3.发明了提高纤维素酶活性的诱导方法

具体实施方式：1.玉米秸浸出液驯化培养基配方

其配方是：玉米秸粉200克土豆100克红糖20克葡萄糖10克

棉籽壳50克麦麸子40克蛋白胨2克磷酸二氢钾3克

硫酸镁1克维生素B₁1聚氧丙烯甘油0.3毫升

维生素酶CI酶〔酶活1000(μ)/mg〕3克PH＝6.5

2.玉米秸驯化培养基的制备方法

2.1称玉米秸粉200克，加水1200毫升，在65℃水浴锅中浸渍2小时，2小时后过虑，取过滤液定溶1000毫升。称之为玉米秸浸出液培养基第一阶段浸出液。

2.2制备玉米秸浸出液培养基第二阶段浸出液

称取棉籽壳50克，加玉米秸第一阶段浸出液1000毫升，在65℃水浴锅中浸渍1小时，

过滤，取滤液，定溶1000毫升。称之为玉米秸浸出液培养基第二阶段浸出液。

2.3制备玉米秸浸出液培养基第三阶段浸出液

将土豆洗净、去皮、去芽眼、切成10毫米X10毫米X10毫米的方块，称取100克。加入玉米秸浸出液培养基第二阶段浸出液1000毫升。水沸腾后，在98-100℃条件下，温火水煮。水煮1小时后，过滤，取其滤液定溶1000毫升。称为玉米秸浸出液培养基第三阶段浸出液。

2.4取玉米秸浸出液培养基第三阶段浸出液1000毫升，加热至沸点按下列顺序加入其他物质。

(1)磷酸二氢钾3克充分搅拌溶化

(2)硫酸镁1克充分搅拌溶化

(3)蛋白胨2克充分搅拌溶化

(4)维生素B₁1片捣碎后放入，充分搅拌溶化

(5)葡萄糖10克充分搅拌溶化

(6)红糖20克充分搅拌溶化

(7)麦麸子40克

(8)聚氧丙烯甘油0.3毫升

说明：一定按上述顺序和方法加入各种物质，以防磷酸二氢钾、硫酸镁等结晶体贴附在麦麸子表面造成麦麸子表面局部浓度过高而影响基质的均匀度。

2.5调PH值培养基制成后，要测定培养基的PH值

当PH值＜6.5时用碳酸氢钠调节

当PH值＞6.5时利用磷酸二氢钠调节

2.6培养基灭菌灭菌方法采用高压灭菌法

灭菌压力0.15兆帕，灭菌时间120分钟

3.提高纤维素酶活性的诱导方法

3.1在超净工作台，以无菌操作法称取酶活1000(μ)/mg的CI型纤维素酶3克，加入100毫升无菌水，在60℃恒温水浴锅中活化60分钟，此液称酶活液。

3.2在超净工作台上，以无菌操作将100毫升酶活液加入已经灭菌的玉米秸浸出液中。根据微生物进化理论，微生物有变异和选择原理。例如盛祖嘉的《微生物遗传学》中明确指出，在恒化器中可以对一个微生物群体长期的施加某些选择因素，因此有可能在实验中观察到某种酶活的出现。本项发明将杏鲍菇菌种置于玉米秸浸出液培养基上进行5个继代培养，并添加纤维素酶作为诱导剂。经反复实验，纤维素酶添加的最佳量为1000毫升溶液中添加CI酶〔酶活1000(μ)/mg〕含量剂型的3克。添加少了起不到诱导作用，添加多了反而反馈抑制。

本发明采用玉米秸浸出液作为液体菌种的培养基，经过菌种培养阶段的驯化，杏鲍菇菌丝适应了玉米秸基质。当转入生产栽培袋的固体培养基阶段，玉米秸粉的基质同玉米秸浸出液的基质基本相同，这样玉米秸浸出液的液体菌种培养阶段为玉米秸粉做生产料阶段打下了基础，增强了杏鲍菇菌丝对玉米秸粉的适应性，因而促进了菌丝的茁壮成长，达到优质高产的目的。

Claims (2)

1.一种用于栽培杏鲍菇液体菌种的玉米秸浸出液培养基的制备方法，其特征在于：

培养基配方由玉米秸粉200克、土豆100克、红糖20克、葡萄糖10克、棉籽壳50克、麦麸子40克、蛋白胨2克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1克、维生素B₁1片、聚丙烯甘油0.3毫升、纤维素酶C1酶3克组成，酶活性为1000u/mg；其制备过程如下：

1)、称玉米秸粉200克，加水1200毫升，在65℃水浴锅中浸渍2小时，2小时后过滤，取过滤液定容1000毫升；称之为玉米秸浸出液培养基第一阶段浸出液；

2)、制备玉米秸浸出液培养基第二阶段浸出液：称取棉籽壳50克，加玉米秸第一阶段浸出液1000毫升，在65℃水浴锅中浸渍1小时，过滤，取滤液，定容1000毫升；称之为玉米秸浸出液培养基第二阶段浸出液；

3)、制备玉米秸浸出液培养基第三阶段浸出液；将土豆洗净、去皮、去芽眼、切成10毫米×10毫米×10毫米的方块，称取100克；加入玉米秸浸出液培养基第二阶段浸出液1000毫升；水沸腾后，在98-100℃条件下，温火水煮；水煮1小时后，过滤，取其滤液定容1000毫升；称为玉米秸浸出液培养基第三阶段浸出液；

4)、取玉米秸浸出液培养基第三阶段浸出液1000毫升，加热至沸点按下列顺序加入其他物质；

(1)磷酸二氢钾3克充分搅拌溶化；

(2)硫酸镁1克充分搅拌溶化；

(3)蛋白胨2克充分搅拌溶化；

(4)维生素B₁1片捣碎后放入，充分搅拌溶化；

(5)葡萄糖10克充分搅拌溶化；

(6)红糖20克充分搅拌溶化；

(7)麦麸子40克；

(8)聚氧丙烯甘油0.3毫升；

5)、调PH值培养基制成后，要测定培养基的PH值；当PH值＜6.5时用碳酸氢钠调节；当PH值＞6.5时利用磷酸二氢钠调节；

6)、培养基灭菌采用高压灭菌法；灭菌压力0.15兆帕，灭菌时间120分钟。

2.根据权利要求1所述的制备方法，还包括以下步骤，提高纤维素酶活性的诱导方法如下：

1)、在超净工作台，以无菌操作法称取酶活性为1000u/mg的C1型纤维素酶3克，加入100毫升无菌水，在60℃恒温水浴锅中活化60分钟，此液称酶活液；

2)、在超净工作台上，以无菌操作将100毫升所述酶活液加入已经灭菌的玉米秸浸出液培养基中；之后将杏鲍菇菌种置于加入酶活液的玉米秸浸出液培养基上进行5个继代培养，并添加纤维素酶作为诱导剂；经反复实验，纤维素酶添加量为1000毫升溶液中添加C1酶3克，酶活性为1000u/mg。