CN101063086A - 食用菌液体菌种专用母种的制备方法 - Google Patents

食用菌液体菌种专用母种的制备方法 Download PDF

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生产食用菌液体菌种所需的专用母种的制备方法，是将一级摇瓶种接入到固体母种培养基制成专用母种的方法，由一级摇瓶种培养基生产一级摇瓶种，再由专用母种配方生产专用母种。它以木屑、麸皮等分散性好，大小均匀的颗粒性营养物质制成培养基，装在500ml的三角瓶里经灭菌后，将摇瓶种接入培养基而制得的。使用专用母种生产液体菌种，其生产周期为已知生产方法的1/4，使用本菌种生产液体菌种可节省一次投资1万元左右，每生产60升菌种节约成本145元，实现了食用菌生产的工厂化和规模化。

Description

食用菌液体菌种专用母种的制备方法
                    技术领域
本发明涉及生产食用菌液体菌种所需的专用母种及其生产方法。
                    背景技术
目前，食用菌的生产已由传统的固体菌种向液体菌种方向转变，而已知的液体菌种生产均采用“一级斜面母种→一级摇瓶种→二级摇瓶种→培养罐培养(液体菌种)”的方法生产，但用这样的方法生产液体菌种周期长、成本高、投资大、易污染、成功率低；而采用“液体专用母种”→培养罐培养(液体菌种)”的方法进行生产，同已知方法比周期短、成本低、技术简单、成功率高。
                    发明内容
本发明的目的就是为了解决现有液体菌种生产存在的问题而提供生产食用菌液体菌种所需的专用母种。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现，是将一级摇瓶种接入到固体母种培养基制成专用母种的方法，其中：
一、一级摇瓶种及专用母种培养基配方
1、一级摇瓶种培养基：按重量百分比
①木腐菌培养基：土豆20、红糖1.0-1.5、葡萄糖1.0-1.5、麸皮3、蛋白胨0.15-0.3、磷酸二氢钾0.2、硫酸镁0.1、维生素B110毫克/升、余量为水，
PH值6.5-7.0
②草腐菌培养基：土豆20、红糖1.0-1.5、麸皮3.0-5.0、蛋白胨0.1-0.25、酵母膏0.1-0.2、磷酸二氢钾0.2、硫酸镁0.1、维生素B110毫克/升，余量为水，
PH值7.0-7.5
2、专用母种配方：按重量百分比
①木腐菌配方：硬杂木屑67-77、麸皮20-30、红糖2、石膏1，
PH值自然
②草腐菌配方：硬杂木屑42-52、谷粒30-40、麸皮15、红糖2、石膏1，
PH值6.5-7.5。
二、生产一级摇瓶种及专用母种的方法：
1、生产一级摇瓶种：
①分装：把配制好的培养基按每瓶200-400毫升的装量装入1000毫升的三角瓶中，盖上棉塞，绑上牛皮纸，
②灭菌：在121-126℃的条件下灭菌30分钟，
③接种：待培养基温度降至30℃以下时，即可接入经筛选、提纯、活化处理的一级斜面母种，每瓶接入2-3块0.5-1.0cm2的菌块，
④培养：将接完种的菌瓶在130-200转/分的回旋式摇床上振荡培养，在23℃-28℃条件下5-10天后制得一级摇瓶种，
⑤菌种的筛选、提纯、活化：将普通的一级斜面母种接在摇瓶中振荡培养7-10天，挑取悬浮在菌液上层、活力强壮、大小在2-3毫米左右的菌球接在斜面培养基上，待其长到试管的1/3-2/3即可使用，
2、生产专用母种
①原料处理：将颗粒状木屑过20目筛，麸皮过40目筛，再进行混合，
②拌料：把原料按配比加水拌匀，含水量在60-63％，
③装瓶：把上述培养料装入500毫升的三角瓶中，压紧、压平，每瓶装料约450毫升或干料150克，盖上棉塞，绑上牛皮纸，在121-126℃的条件下灭菌90分钟，待温度降至30℃以下时备用，
④接种：用灭好菌的吸管把培养好的一级摇瓶种接入到盛装在三角瓶内灭好菌的固体培养基中，
⑤培养：在23-25℃的条件下避光培养，菌丝长满后即可。
三、液体专用母种的使用
(1)无菌水的制备：取1000ml三角瓶装750-780ml的水在121-126℃的条件下灭菌40分钟。
(2)专用种的并瓶：把长好的专用母种用接种钩在无菌条件下倒入无菌水瓶中制成菌悬液。
(3)接种：把制备好的种子菌悬液在火圈的保护下接入到培养罐中，2-4天可制得液体菌种。
本发明具有如下优点：
1、菌种质量好、纯度高、颗粒均匀、便于检测，便于保藏运输，接种后萌发吃料快。
2、使用本菌种生产液体菌种可节省一次投资10000元左右，且每生产60升菌种节省成本144.56元。
3、使用专用母种生产液体菌种，其生产周期为已知生产方法的1/4。
4、使用专用母种生产液体菌种难度小、成功率高、风险性低。
5、液体专用母种的使用促进了液体菌种技术的推广和普及，有很强的实用价值，这一技术的使用，对促进食用菌的工厂化、规模化生产提供了保证。
                    附图说明
图1是本发明的液体专用母种生产工艺流程图，表示液体菌种两种不同生产工艺。
①用摇瓶种的生产工艺：一级斜面母种→一级摇瓶种→二级摇瓶种→二级摇瓶种并瓶→培养罐培养(液体菌体)，
②用液体专用母种的生产工艺：液体专用母种→培养罐培养(液体菌种)。
                    具体实施方式
          黑木耳、双孢菇液体菌种的生产过程
A、生产专用母种
一、一级摇瓶种及专用母种培养基配方
I、一级摇瓶种培养基：按重量百分比
①木腐菌培养基：土豆20、红糖1.0-1.5、葡萄糖1.0-1.5、麸皮3、蛋白胨0.15-0.3、磷酸二氢钾0.2、硫酸镁0.1、维生素B110毫克/升、余量为水，
PH值6.5-7.0
②草腐菌培养基：土豆20、红糖1.0-1.5、麸皮3.0-5.0、蛋白胨0.1-0.25、酵母膏0.1-0.2、磷酸二氢钾0.2、硫酸镁0.1、维生素B110毫克/升，余量为水，
PH值7.0-7.5
II、专用母种配方：按重量百分比
①木腐菌配方：硬杂木屑67-77、麸皮20-30、红糖2、石膏1，
PH值自然
②草腐菌配方：硬杂木屑42-52、谷粒30-40、麸皮15、红糖2、石膏1，
PH值6.5-7.5；
二、生产一级摇瓶种及专用母种的方法
I、生产一级摇瓶种：
①分装：把配制好的培养基按每瓶200-400毫升的装量装入1000毫升的三角瓶中，盖上棉塞，绑上牛皮纸，
②灭菌：在121-126℃的条件下灭菌30分钟，
③接种：待培养基温度降至30℃以下时，即可接入经筛选、提纯、活化处理的一级斜面母种，每瓶接入2-3块0.5-1.0cm2的菌块，
④培养：将接完种的菌瓶在130-200转/分的回旋式摇床上振荡培养，在23-28℃条件下5-10天后制得一级摇瓶种，
⑤菌种的筛选、提纯、活化：将普通的一级斜面母种接在摇瓶中振荡培养7-10天，挑取悬浮在菌液上层、活力强壮、大小在2-3毫米左右的菌球接在斜面培养基上，待其长到试管的1/3-2/3即可使用。
II、生产专用母种
①原料处理：将颗粒状木屑过20目筛，麸皮过40目筛再进行混合，
②拌料：把原料按配比加水拌匀，含水量在60-63％，
③装瓶：把上述培养料装入500毫升的三角瓶中，压紧、压平，每瓶装料约450毫升或干料150克，盖上棉塞，绑上牛皮纸，在121-126℃的条件下灭菌90分钟，
④接种：用灭好菌的吸管把培养好的一级摇瓶种接入到盛装在三角瓶内灭好菌的固体培养基中，
⑤培养：在23-25℃的条件下避光培养，菌丝长满后即可。
B、用专用母种生产黑木耳、双孢菇液体菌种的方法
一、培养罐液体菌种的配方
1、黑木耳：
土豆10％、红糖1.5％、葡萄糖1％、麦麸4％、蛋白胨0.2％、KH2PO40.2％、MgSO40.1％、VB10mg/l、泡敌0.03％、酵母膏0.1％，余量为水，PH值7.5。
2、双孢菇：
土豆10％、红糖1.5％、葡萄糖1％、麦麸4％、蛋白胨0.2％、KH2PO40.2％、MgSO40.1％、VB10mg/l、泡敌0.03％、酵母膏0.1％，余量为水，PH值7.5。
二、培养基的配制
1、土豆：挖芽、去皮洗净后切0.2-0.4cm的条或片煮至酥而不烂时，用6-8层纱布过滤取滤液。
2、麦麸：加水搅拌自煮沸持续20分钟后用6-8层纱布过滤取滤液。
3、红糖、葡萄糖：溶水后过滤取滤液。
4、KH2PO4、MgSO4：直接加水搅拌溶化。
5、蛋白胨：直接加入或在其它容器中溶后加入。
6、VB1：碾成细末加入搅匀。
7、泡敌：直接加入。
三、上料
关闭进气阀和接种阀，将漏斗插入进料口，用小锅将料液分批分次倒入或用水泵抽入处理好的培养罐中，之后加入自来水调整料液至标准线(55～75升之间)，55升约在空气分布器上面4～5cm处，最多可加料至距上封头焊烽15-17cm的水平线，约75升，拧紧接种盖，即可灭菌。
四、灭菌
启动加热棒加热开关，当温度达到121-126℃时维持35分钟，在维持温度的35分钟的开始、中间、最后时间点分别放料一次，每次放料3-5分钟，三次共排料3-5升。当灭菌时间到，报警器自动报警，接上进气管。
五、降温
当灭菌时间到，马上通过冷水管向夹层内通冷水降温，当温度降到30℃以下时，即可准备接种。
六、专用种的并瓶
用1000ml的三角瓶盛装750ml的水，在121-126℃的条件下灭菌40分钟，待水温降至30℃以下时在无菌室内将专用母种在无菌条件下捣碎并倒入到无菌水瓶中，制成菌悬液。
七、接种
将火圈浸足酒精套在接种口上，点燃火圈，把接种口打开，在火焰上方拨掉菌种瓶棉塞，把菌悬液倒入到培养罐内，盖好接种盖，调整罐压在0.02-0.03MPa即可。
八、培养
接种后即可进入培养状态，一般说来2-4天可长好。
九、接种
将培养好的液体菌种通过接种管接种枪注入式接种，菌袋表面喷洒一薄层，每袋接入15-20ml菌种。

Claims (2)

1、生产食用菌液体菌种所需专用母种的制备方法，其特征是将一级摇瓶种接入到固体母种培养基制成专用母种的方法，其中：
一、一级摇瓶种及专用母种培养基配方
I、一级摇瓶种培养基：按重量百分比
①木腐菌培养基：土豆20、红糖1.0-1.5、葡萄糖1.0-1.5、麸皮3、蛋白胨0.15-0.3、磷酸二氢钾0.2、硫酸镁0.1、维生素B110毫克/升、余量为水，
PH值6.5-7.0
②草腐菌培养基：土豆20、红糖1.0-1.5、麸皮3.0-5.0、蛋白胨0.1-0.25、酵母膏0.1-0.2、磷酸二氢钾0.2、硫酸镁0.1、维生素B110毫克/升，余量为水，
PH值7.0-7.5
II、专用母种配方：按重量百分比
①木腐菌配方：硬杂木屑67-77、麸皮20-30、红糖2、石膏1，
PH值自然
②草腐菌配方：硬杂木屑42-52、谷粒30-40、麸皮15、红糖2、石膏1，
PH值6.5-7.5；
二、生产一级摇瓶种及专用母种的方法
I、生产一级摇瓶种：
①分装：把配制好的培养基按每瓶200-400毫升的装量装入1000毫升的三角瓶中，盖上棉塞，绑上牛皮纸，
②灭菌：在121-126℃的条件下灭菌30分钟，
③接种：待培养基温度降至30℃以下时，即可接入经筛选、提纯、活化处理的一级斜面母种，每瓶接入2-3块0.5-1.0cm2的菌块，
④培养：将接完种的菌瓶在130-200转/分的回旋式摇床上振荡培养，在23-28℃条件下5-10天后制得一级摇瓶种，
⑤菌种的筛选、提纯、活化：将普通的一级斜面母种接在摇瓶中振荡培养7-10天，挑取悬浮在菌液上层、活力强壮、大小在2-3毫米左右的菌球接在斜面培养基上，待其长到试管的1/3-2/3即可使用。
II、生产专用母种
①原料处理：将颗粒状木屑过20目筛，麸皮过40目筛再进行混合，
②拌料：把原料按配比加水拌匀，含水量在60-63％，
③装瓶：把上述培养料装入500毫升的三角瓶中，压紧、压平，每瓶装料约450毫升或干料150克，盖上棉塞，绑上牛皮纸，在121-126℃的条件下灭菌90分钟，
④接种：用灭好菌的吸管把培养好的一级摇瓶种接入到盛装在三角瓶内灭好菌的固体培养基中，
⑤培养：在23-25℃的条件下避光培养，菌丝长满后即可。
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