CN106544242B - 一种美观的蝉花酒制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种美观的蝉花酒的制备方法,该方法包括如下步骤:步骤1,蝉花菌种在固体培养过程中,用多孔盖板压在培养基表面;步骤2,待孢梗束从小孔中生长至适宜高度,将盖板与培养基接触部分的孢梗束与培养基分离;步骤3,将盖板及生长于其中的孢梗束一起置于容器中;步骤4,向容器中注酒;和步骤5,贮存。本发明制备方法既保证了孢梗束长势均一,也能去除培养基在酒中浸泡久了所造成的酒的混浊现象,保证了蝉花酒的品质。
Description
技术领域
本发明涉及一种蝉花酒制备方法,具体涉及一种用带孔的盖板培养蝉花,再制备蝉花酒的方法。
背景技术
蝉花(Isaria cicadae Miquel)属于真菌界、子囊菌门、盘菌亚门、粪壳菌纲、肉座菌目、虫草科、棒束孢属(Isaria)。
蝉花是我国名贵的中药材,是寄生在蝉(俗称“知了”)上的一种虫草菌。其药用已有1000多年历史,是我国传统的名贵药材之一,具有多方面的药用价值。主要成分有:腺苷、虫草多糖、虫草酸(甘露醇)、虫草素、尿嘧啶、甾醇、生物碱、维生素、无机盐、矿物质元素等。
蝉花具有调节人体免疫的功能,提高食欲,促进睡眠,增强自身抗病的能力。在这些成分当中,虫草多糖具有独特的生物活性,具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗辐射、抗衰老等功效,免疫调节作用成为研究开发的热点。腺苷能抑制中枢神经元的兴奋性,可以扩张冠状及周围血管、增加冠状动脉血流量、降低血压、减慢心率等作用。腺苷还具有抗血小板聚集、抗辐射和抗肿瘤等作用。不仅如此,蝉花中的活性成分ISP-1具有双向免疫调节活性,可以大大的提高器官移植手术的成功率,对患者的康复也有着明显的积极效果。
将蝉花泡酒是通常采用的营养吸收方法,其泡制过程为:将蝉花培养在酒瓶中并且倒入白酒、密封、放置适当天数即可饮用。采用这种泡制方法,培养周期很长,且长势不均匀,高低不一,疏密不一,形态外观都较差。
发明内容
针对现有技术中存在的问题,本发明提供了一种蝉花酒制备方法,该方法在蝉花固体培养过程中,在培养基上压一块带小孔的盖板,让子实体从盖板的小孔中逐步长出。待长到适宜高度时,将盖板下的培养物沿盖板切下,然后切去盖板底部的培养基,放入盛酒的容器中,注酒,贮存。这样既保证了子实体长势均一,也能去除培养基在酒中浸泡久了所造成的酒的混浊现象。保证了蝉花酒的品质。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
一种美观的蝉花酒的制备方法,该方法包括如下步骤:
步骤1,蝉花菌种在固体培养过程中,用多孔盖板压在培养基表面;
步骤2,待孢梗束从小孔中生长至适宜高度,将盖板与培养基接触部分的孢梗束与培养基分离;
步骤3,将盖板及生长于其中的孢梗束一起置于容器中;
步骤4,向容器中注酒;和
步骤5,贮存。
进一步,步骤1所述固体培养过程中,待暗培养结束后将多孔盖板压在培养基表面;更进一步,待菌丝体布满培养基时结束暗培养,转为光照培养;更进一步,多孔盖板选择其表面菌丝体生长良好的培养基下压。
进一步,步骤1所述盖板由密度大于基酒且不与基酒发生反应的材质制成,如石膏板、玻璃板、不锈钢板等;所述盖板形状取决于容器口的形状,其面积略小于容器口面积;所述盖板的小孔孔径为4~6mm,孔间距为1~2mm;更进一步,所述盖板的小孔孔径为4~5mm。
进一步,步骤2所述适宜高度为4~8cm;更进一步,选择其生长茂盛且整齐一致的孢梗束进行分离;更进一步,所选的孢梗束高度以容器高度而定,距容器口距离为2~3cm,孢梗束高度差小于2cm;更进一步,所选的孢梗束高度差小于1cm。
进一步,步骤4注酒量为孢梗束:基酒(w/w)=10-20:80-90。
进一步,步骤4注酒方法为:注入基酒至高出孢梗束1~2cm处,静置30~60min,再次注酒至距离瓶口1~2cm处。
进一步,步骤5贮存条件为:相对湿度50~70%,温度10~30℃。
进一步,步骤5贮存天数为45天以上。
本发明所述蝉花的培养过程为:将蝉花菌种通过液体培养进行扩增;扩增后的菌种进行固体培养。所述液体培养和固体培养方法可参照现有技术公开的蝉花培养方法。液体培养为以菌种扩增为目的,可采用常规的菌种扩培方法,包括斜面培养、摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养中的任意一种或几种方法的组合;所用培养基为本领域常规的液体培养基,如PSA培养基或酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基,酵母浸出粉-白砂糖-大豆水解蛋白培养基,麸皮煮汁-白砂糖培养基等;进一步优选为PSA培养基或酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基;更进一步,PSA培养基各成分比例为:马铃薯15-25%、蔗糖1-5%、琼脂1-5%;酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基各成分比例为:酵母浸出粉0.5-2%、复合氨基酸0.2-1%、蔗糖2-5%。更进一步,PSA培养基各成分比例为:马铃薯20%、蔗糖2%、琼脂2%;酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基各成分比例为:酵母浸出粉1%、复合氨基酸0.5%、蔗糖3.5%。
固体培养基在菌丝体生长阶段为暗培养,温度为18~23℃,相对湿度65~85%,至培养基布满菌丝体为止,培养时间一般为6~8天;孢梗束生长阶段转为光照培养,培养温度为18~20℃,相对湿度80~85%,在孢梗束培养后期,逐渐加大室内空气的流通和交换,培养温度提高到23~25℃,至孢梗束长至4-8cm,培养时间一般为35~50天。固体培养基为以谷物、农作物秸杆、农作物皮壳、经济林木树枝或植物茎杆为主要成分的培养基;其中优选谷物培养基;所述谷物可选自小麦、玉米、大米、小米、黄豆粉、荞麦、大麦、燕麦、糙米、粳米中的任意一种或几种。进一步,固体培养基中还包括辅料,如白砂糖、酵母浸出粉、维生素B1、复合氨基酸、大豆蛋白等。
本发明所述蝉花广泛分布在我国秦岭-淮河以南的18个省、市、区。在我国长江以南的亚热带和热带地区,且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节,每年的6-8月,按照一般中药材的采集方法都可采到,是现有技术中已知菌种,并可以从商业途径购买获得。发明人还直接从安徽省石台县的竹林中采集并分离到到该菌种,保存于浙江泛亚生物医药股份有限公司研究院菌种库(液氮及冻干保存),菌株编号AC17-7,在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏,保藏号为CGMCC No.3453)。亦可用其它食用菌厂或研究所提供的蝉花菌种。
本发明的有益效果在于:
①外形美观:本发明利用带孔的盖板固定蝉花,使其呈垂直状态,能保证蝉花酒的性状稳定一致,美观大方。②品质高:由于去掉了固体培养基,在蝉花酒贮存过程中,不会有培养基中的物质析出,保证了酒色剔透、明晰,商业价值更高;③有效成分含量高:本发明方法制备的蝉花酒其腺苷含量达到23.45μg/ml,HEA(即N6-(2-羟乙基)腺苷,又名茧草菌素,是蝉花孢梗束的特有成分,已作为其的质量控制指标之一)含量达到33.72μg/ml,明显高于普通泡酒方法。
附图说明
图1本发明制备的蝉花酒
图2多孔盖板
效果实验例
实验例1本发明盖板方法与常规泡酒方法效果比较
一、实验方法
按如下两种方法制备蝉花酒,每种方法设置5组重复:
方法一,常规泡制方法:取实施例1扩大培养得到的蝉花菌种,直接接种到盛酒容器中按实施例4进行固体培养,待培养结束后,按实施例10的方法注酒并贮存;
方法二,本发明盖板法:取实施例1扩大培养得到的蝉花菌种按实施例4进行固体培养,待暗培养结束后按实施例9进行压板和切割,将盖板及孢梗束一起置于容器中,按实施例10的方法注酒并贮存。
考察不同方法制备的蝉花酒外观及有效成分含量。
二、实验结果
结果见表1。
表1 不同方法制备的蝉花酒效果比较(n=5)
实验例2不同盖板方法效果比较
一、实验方法
按如下两种方法制备蝉花酒,每种方法设置5组重复:
方法一:取实施例1扩大培养得到的蝉花菌种按实施例4进行固体培养,待培养结束后,取生长茂盛且整齐一致的孢梗束进行采收,并插入盖板的小孔中,将盖板及孢梗束置于容器中,按实施例10的方法注酒并贮存;
方法二:取实施例1扩大培养得到的蝉花菌种按实施例4进行固体培养,待暗培养结束后按实施例9进行压板和切割,将盖板及孢梗束一起置于容器中,按实施例10的方法注酒并贮存。
考察不同方法制备效果的差异。
二、实验结果
结果见表2。
表2 不同方法制备的蝉花酒效果比较(n=5)
具体实施方式
实施例1液体培养
斜面培养:将分离纯化的蝉花菌种接种于斜面试管中,再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱,培养时间为7天,待菌丝长满试管;
摇瓶培养:在500m1三角瓶中装入200m1液体培养基,在0.11Mpa压力下高压灭菌30分钟,待冷却至室温,将1支斜面试管的菌种接种到500m1三角瓶培养基上,并置于恒温振荡培养箱,温度22±1℃,150转/分钟条件下培养,培养时间为3天;
种子罐培养:在50L气升式发酵罐中装入20L液体培养基,培养基温度大于95℃,加入食用消泡剂,加入量为培养基重量的0.03%,在0.11Mpa压力下,通入蒸汽加热到121℃,并保压30-45分钟;灭菌后,冷却至20℃时,将4瓶上述培养好的500m1摇瓶菌种接入培养基,培养温度为22±1℃,通气量为1:0.5V/V min,保压4.903-7.0845×104Pa,经3天通气培养,达到对数生长期后即可,终培养体积为20L。
发酵罐培养:在500L气升式发酵罐中装入200L液体培养基,培养基温度大于95℃,加入食用消泡剂,加入量为培养基重量的0.03%,在0.11Mpa压力下,通入蒸汽加热到121℃,并保压30-45分钟;灭菌后,冷却至20℃时,将上述培养好的200L种子罐种子全部接入培养,培养温度为22±1℃,通气量为1:0.5V/V min,保压4.903-7.0845×104Pa,经3天通气培养,达到对数生长期后即可。终培养体积为200L。
斜面试管培养基:马铃薯煮汁20%,白砂糖3.5%、酵母浸粉0.5%;
摇瓶、种子罐及发酵罐中的液体培养基:含有酵母浸出粉0.5%,复合氨基酸1%,白砂糖3.5%,余量补水至100%,pH值为6.5。
实施例2液体培养
斜面培养:将分离纯化的蝉花菌种接种于斜面试管中,再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱,培养时间为7天,待菌丝长满试管;
摇瓶培养:在500m1三角瓶中装入200m1液体培养基,在0.11Mpa压力下高压灭菌30分钟,待冷却至室温,将1支斜面试管的菌种接种到500m1三角瓶培养基上,并置于恒温振荡培养箱,温度22±1℃,150转/分钟条件下培养,培养时间为3天;
种子罐培养:在50L气升式发酵罐中装入20L液体培养基,培养基温度大于95℃,加入食用消泡剂,加入量为培养基重量的0.03%,在0.11Mpa压力下,通入蒸汽加热到121℃,并保压30-45分钟;灭菌后,冷却至20℃时,将4瓶上述培养好的500m1摇瓶菌种接入培养基,培养温度为22±1℃,通气量为1:0.5V/V min,保压4.903-7.0845×104Pa,经3天通气培养,达到对数生长期后即可,终培养体积为20L。
斜面试管培养基:每1升液体含有200克土豆煮汁,20克蔗糖,20克琼脂,余补水至1000毫升,pH值为6.5;
摇瓶及种子罐培养基:每1升液体含有30克酵母浸出粉,30克白砂糖,5克大豆水解蛋白,加水补至1000毫升,pH值为6.5。
实施例3液体培养
斜面培养:将分离纯化的蝉花菌种接种于斜面试管中,再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱,培养时间为7天,待菌丝长满试管;
种子罐培养:在50L气升式种子罐中装入20L液体培养基,培养基温度大于95℃,加入食用消泡剂,加入量为培养基重量的0.03%,在0.11Mpa压力下,通入蒸汽加热到121℃,并保压30-45分钟;灭菌后,冷却至20℃时,将4瓶上述斜面试管的菌种接入培养基,培养温度为22±1℃,通气量为1:0.5V/V min,保压4.903-7.0845×104Pa,经3天通气培养,达到对数生长期后即可,终培养体积为20L。
发酵罐培养:在500L气升式发酵罐中装入200L液体培养基,培养基温度大于95℃,加入食用消泡剂,加入量为培养基重量的0.03%,在0.11Mpa压力下,通入蒸汽加热到121℃,并保压30-45分钟;灭菌后,冷却至20℃时,将上述培养好的200L种子罐种子全部接入培养,培养温度为22±1℃,通气量为1:0.5V/V min,保压4.903-7.0845×104Pa,经3天通气培养,达到对数生长期后即可。终培养体积为200L。
斜面试管培养基:每1升液体含有200克土豆煮汁,20克蔗糖,20克琼脂,余补水至1000毫升,pH值为6.5;
种子罐及发酵罐培养基:每1升液体含有40克麸皮煮汁,30克白砂糖,余补水至1000毫升,pH值为6.5。
实施例4固体培养
固体培养基:按白砂糖3.5%、酵母浸出粉0.5%、维生素B1 10mg/1000ml的比例配成营养液,将大米和营养液按1:1.6的比例配制而成。将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内,121℃下灭菌30-50min;灭菌后,培养容器移置缓冲室内,自然冷却至24℃以下移置接种室内。
接种:接种前培养容器先在超净工作台或百级层流罩内(下)用紫外光照射0.5h;每个培养容器按7%的接种量将实施例1~3经扩大培养得到的菌种接种到固体培养基上,接种后的容器放入培养室培养。
培养条件:菌丝培养阶段:发菌室温度宜为18~23℃,空气相对湿度65%~85%,遮光;室内培养6~8d,长满菌丝;孢梗束生长阶段:待菌丝布满整个盒面并深扎到盒底,开始见光,但避免太阳光直射,调整培养温度为18~20℃,湿度80%~85%;在孢梗束培养后期,逐渐加大室内空气的流通和交换,培养温度提高到23~25℃。培养阶段若发现污染应立即清除。待孢梗束长至4~8cm,培养结束。
实施例5固体培养
固体培养基:按白砂糖3.5%、酵母浸出粉0.5%、维生素B1 10mg/1000ml的比例配成营养液,将小米和营养液按1:1.6的比例配制而成。将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内,121℃下灭菌30-50min;灭菌后,培养容器移置缓冲室内,自然冷却至24℃以下移置接种室内。
培养条件同实施例4。
实施例6固体培养
固体培养基:将糙米清洗控水后,加入适量的水,其重量比为糙米:水为1:1.5,混合均匀;将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内,121℃下灭菌30-50min;灭菌后,培养容器移置缓冲室内,自然冷却至24℃以下移置接种室内。
培养条件同实施例4。
实施例7固体培养
固体培养基:将小麦清洗控水后,加入适量的水,其重量比为小麦:水为1:1.3,混合均匀;将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内,121℃下灭菌30-50min;灭菌后,培养容器移置缓冲室内,自然冷却至24℃以下移置接种室内。
培养条件同实施例4。
实施例8固体培养
固体培养基:玉米芯69%、棉籽壳16%、木屑11%、石膏3%、石灰1%,固体物料:水=1:1.5(视原料含水量而定)混合拌匀;将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内,121℃下灭菌30-50min;灭菌后,培养容器移置缓冲室内,自然冷却至24℃以下移置接种室内。
培养条件同实施例4。
实施例9压板及切割
将实施例1~3扩大培养的蝉花菌种按实施例4~8任一方法进行固体培养,在暗培养结束后,取多孔石膏板(直径略小于盛酒容器口,孔径4mm,孔间距为1mm,见图2),选择其表面菌丝茂盛、生长良好的固体培养基下压,使孢梗束从小孔中生长。待固体培养结束后,选择其表面孢梗束整齐一致、高度约4~5cm左右的盖板,沿边缘将培养基切下,并沿盖板与培养基的接触面去除盖板下部的培养基,将盖板及生长于其中的孢梗束一起置于容器中。
实施例10注酒及贮存
选择清洁并已消毒的桌面,采用无菌操作的方法,将基酒沿酒瓶内壁徐徐流下,注入基酒至高出孢梗束1~2cm处,静置30~60min,再次注入基酒至距离瓶口1~2cm处。
选择较为干燥、清洁、光亮和通风较好的地方,相对环境湿度在70%左右,温度25℃左右;容器封口要严密,防止漏酒和“跑度”;避免强光直接照射。放入酒窖中贮藏约45天左右至酒色成为橙色至橙黄色,即可出窖为成品(见图1)。
Claims (6)
1.一种美观的蝉花酒的制备方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
步骤1,蝉花菌种在固体培养过程中,待暗培养结束后将多孔盖板选择表面菌丝体生长良好的培养基下压;所述多孔盖板由密度大于基酒且不与基酒发生反应的材质制成,所述小孔孔径为4~6mm,孔间距为1~2mm;
步骤2,待孢梗束从小孔中生长至适宜高度,将盖板与培养基接触部分的孢梗束与培养基分离;
步骤3,将盖板及生长于其中的孢梗束一起置于容器中;
步骤4,向容器中注酒;和
步骤5,贮存;
其中,步骤4注酒方法为:注入基酒至高出孢梗束1~2cm处,静置30~60min,再次注酒至距离瓶口1~2cm处。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述盖板为石膏板、玻璃板或不锈钢板中的任意一种。
3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤2所述适宜高度为4~8cm。
4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤2选择其生长茂盛且整齐一致的孢梗束进行分离,孢梗束高度差小于2cm。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤4注酒量为:按孢梗束与基酒的重量比为(10-20):(80-90)注酒。
6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤5贮存条件为:相对湿度50~70%,温度10~30℃;贮存天数为45天以上。
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