CN106544244B - 一种蝉花酒的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种蝉花酒的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤1，在蝉花固体培养阶段，将部分固体培养基连同生长于其中的孢梗束按照置于容器的形状从整体培养基中分离；步骤2，将分离的培养基及生长其中的孢梗束置于容器；步骤3，用支撑物将固体培养基固定于容器底部；步骤4，向容器中注酒；和步骤5，固定30天以上，取出支撑物。本发明制备的蝉花酒不仅有较高的营养价值，且独具艺术美感。
Description
技术领域
本发明涉及一种蝉花酒的制备方法，具体涉及一种利用特定的谷物培养基生产“长在酒坛中的蝉花”酒的方法，属于医药食品领域。
背景技术
蝉花(Isaria cicadae Miquel)属于真菌界、子囊菌门、盘菌亚门、粪壳菌纲、肉座菌目、虫草科、棒束孢属(Isaria)。
蝉花是我国名贵的中药材，是寄生在蝉(俗称“知了”)上的一种虫草菌。其药用已有1000多年历史，是我国传统的名贵药材之一，具有多方面的药用价值。主要成分有：腺苷、虫草多糖、虫草酸(甘露醇)、虫草素、尿嘧啶、甾醇、生物碱、维生素、无机盐、矿物质元素等。
蝉花具有调节人体免疫的功能，提高食欲，促进睡眠，增强自身抗病的能力。在这些成分当中，虫草多糖具有独特的生物活性，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗辐射、抗衰老等功效，免疫调节作用成为研究开发的热点。腺苷能抑制中枢神经元的兴奋性，可以扩张冠状及周围血管、增加冠状动脉血流量、降低血压、减慢心率等作用。腺苷还具有抗血小板聚集、抗辐射和抗肿瘤等作用。不仅如此，蝉花中的活性成分ISP-1具有双向免疫调节活性，可以大大的提高器官移植手术的成功率，对患者的康复也有着明显的积极效果。
将蝉花泡酒是通常采用的营养吸收方法，其泡制过程为：将蝉花(也可以和其他药物一起泡制，如人参、枸杞等)放在容器中并且倒入白酒、密封、放置适当天数即可饮用。采用这种泡制方法，蝉花是利用现成培养的孢梗束放置在容器中的，散乱且有的漂浮在酒表层，其有效成分并未完全浸在酒中，而且并未显示蝉花在酒中生长的良好态势，未突出虫草视觉美的感受。没有呈现出我国古老的酒文化的特色。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蝉花酒的制备方法，其不仅有较高的营养价值，且独具艺术美感。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种蝉花酒的制备方法，该方法包括如下步骤：
步骤1，在蝉花固体培养阶段，将部分固体培养基连同生长于其中的孢梗束按照适于置于容器的形状从整体培养基中分离；
步骤2，将分离的培养基及生长其中的孢梗束置于容器；
步骤3，用支撑物将固体培养基固定于容器底部；
步骤4，向容器中注酒；和
步骤5，固定30天以上，取出支撑物。
进一步，步骤1所述的孢梗束为生长至成熟的孢梗束。
进一步，步骤1所述的固体培养基面积以能够放入容器为准，可以略小于能进入容器所需的面积，形状不限，具体形状以美观为原则。
进一步，步骤2将固体培养基置于盛酒容器前，将培养基削薄，以保证生长于其中的孢梗束不散开为准；更进一步，将培养基削薄至厚度小于2cm；更进一步，将培养基削薄至厚度小于1cm；更进一步，将培养基削薄至厚度小于0.5cm。
进一步，步骤1所述固体培养基为以谷物、农作物秸杆、农作物皮壳、经济林木树枝或植物茎杆为主要成分的培养基；更进一步，所述固体培养基优选谷物培养基；所述谷物选自小麦、玉米、大米、小米、黄豆粉、荞麦、大麦、燕麦、糙米、粳米中的任意一种或几种。
进一步，步骤3所述支撑物为木头、玻璃、不锈钢或其他任何不与基酒发生反应的材质制成的柱形结构，如木棒、玻璃棒、不锈钢棒等；其高度略小于容器底部到容器口的高度。
进一步，步骤4所述注酒的高度应高于孢梗束；更进一步，注酒高度高于孢梗束1cm以上。
进一步，步骤5所述固定时间为35天以上；更进一步，为45天以上。
进一步，步骤5取出支撑物后继续浸泡60天以上；更进一步，继续浸泡80天以上；更进一步，继续浸泡100天。
本发明所述蝉花的培养过程为：将蝉花菌种通过液体培养进行扩增；扩增后的菌种进行固体培养。所述液体培养和固体培养方法可参照现有技术公开的蝉花培养方法。液体培养为以菌种扩增为目的，可采用常规的菌种扩培方法，包括斜面培养、摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养中的任意一种或几种方法的组合；所用培养基为本领域常规的液体培养基，如PSA培养基或酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基，酵母浸出粉-白砂糖-大豆水解蛋白培养基，麸皮煮汁-白砂糖培养基等；进一步优选为PSA培养基或酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基；更进一步，PSA培养基各成分比例为：马铃薯15-25％、蔗糖1-5％、琼脂1-5％；酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基各成分比例为：酵母浸出粉0.5-2％、复合氨基酸0.2-1％、蔗糖2-5％。更进一步，PSA培养基各成分比例为：马铃薯20％、蔗糖2％、琼脂2％；酵母浸出粉-复合氨基酸-蔗糖培养基各成分比例为：酵母浸出粉1％、复合氨基酸0.5％、蔗糖3.5％。固体培养过程中，在菌丝体生长阶段采用遮光培养，培养温度22-24℃，相对湿度为65-70％；从孢梗束始发至采收阶段采用光照培养，培养温度为20-22℃，相对湿度为65-70％，孢梗束始发时保证光照强度为100-200Lx。
本发明所述蝉花广泛分布在我国秦岭-淮河以南的18个省、市、区。在我国长江以南的亚热带和热带地区，且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节，每年的6-8月，按照一般中药材的采集方法都可采到，是现有技术中已知菌种，并可以从商业途径购买获得。发明人还直接从安徽省石台县的竹林中采集并分离到到该菌种，保存于浙江泛亚生物医药股份有限公司研究院菌种库(液氮及冻干保存)，菌株编号AC17-7，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏，保藏号为CGMCC No.3453)。亦可用其它食用菌厂或研究所提供的蝉花菌种。
本发明的有益效果在于：
①本发明将固体培养基与生长于其中的孢梗束一同放入盛酒容器后，用支撑物支撑，防止孢梗束上浮，经月余，待孢梗束与酒的渗透压平衡后，移去支撑物，孢梗束和培养基会稳定待在瓶底，不会上浮，保持优美态势。②营养成分含量高：本发明蝉花酒培养100天左右，其腺苷含量达到37μg/ml(常规方法泡制的蝉花酒100天左右腺苷含量为30μg/ml)，HEA(即N6-(2-羟乙基)腺苷，又名茧草菌素，是虫草的特有成分，已作为虫草制品的质量控制指标之一)含量达到36.0μg/ml(常规方法泡制的蝉花酒100天左右HEA含量为26μg/ml)，可见本发明制备方法制备的蝉花酒有效成分含量显著高于常规方法泡制的蝉花酒。
附图说明
图1用于切割固体培养基的工具
图2本发明方法制备的蝉花酒
图3蝉花酒中腺苷含量随时间的变化图
图4蝉花酒中HEA含量随时间的变化图
实验例1固定时间的考察
1、实验方法
取实施例1扩大培养的蝉花菌种，分别以表1所列材料作为固体培养基，按实施例4的方法进行固体培养，并按照实施例13的方法进行采收及固定(每种培养基实验数为20瓶)，定期去掉支撑物，观察各组孢梗束和培养基的状态。
2、实验结果
结果见表1。
表1不同固定时间培养基和孢梗束状态
结果表明，各固体培养基在固定30天后均可以达到平衡不再上浮。
具体实施方式
实施例1液体培养
斜面培养：将分离纯化的菌种接种于斜面试管中，再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱，培养时间为7天，待菌丝长满试管；
摇瓶培养：在500m1三角瓶中装入200m1液体培养基，在0.11Mpa压力下高压灭菌30分钟，待冷却至室温，将1支斜面试管的菌种接种到500m1三角瓶培养基上，并置于恒温振荡培养箱，温度22±1℃，150转/分钟条件下培养，培养时间为3天；
种子罐培养：在50L气升式发酵罐中装入20L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将4瓶上述培养好的500m1摇瓶菌种接入培养基，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×104Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可，终培养体积为20L。
发酵罐培养：在500L气升式发酵罐中装入200L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将上述培养好的200L种子罐种子全部接入培养，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×104Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可。终培养体积为200L。
斜面试管培养基：每1升液体含有200克土豆煮汁，20克蔗糖，20克琼脂，余补水至1000毫升，pH值为6.5；
摇瓶、种子罐及发酵罐中的液体培养基：含有酵母浸出粉1％，复合氨基酸0.5％，白砂糖3.5％，余量补水至100％，pH值为6.5。
实施例2液体培养
斜面培养：将分离纯化的菌种接种于斜面试管中，再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱，培养时间为7天，待菌丝长满试管；
摇瓶培养：在500m1三角瓶中装入200m1液体培养基，在0.11Mpa压力下高压灭菌30分钟，待冷却至室温，将1支斜面试管的菌种接种到500m1三角瓶培养基上，并置于恒温振荡培养箱，温度22±1℃，150转/分钟条件下培养，培养时间为3天；
种子罐培养：在50L气升式发酵罐中装入20L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将4瓶上述培养好的500m1摇瓶菌种接入培养基，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×104Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可，终培养体积为20L。
斜面试管培养基：每1升液体含有200克土豆煮汁，20克蔗糖，20克琼脂，余补水至1000毫升，pH值为6.5；
摇瓶及种子罐培养基：每1升液体含有30克酵母浸出粉，30克白砂糖，5克大豆水解蛋白，加水补至1000毫升，pH值为6.5。
实施例3液体培养
斜面培养：将分离纯化的菌种接种于斜面试管中，再将接种菌种的斜面试管放入22℃培养箱，培养时间为7天，待菌丝长满试管；
种子罐培养：在50L气升式种子罐中装入20L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％，在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将4瓶上述斜面试管的菌种接入培养基，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×104Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可，终培养体积为20L。
发酵罐培养：在500L气升式发酵罐中装入200L液体培养基，培养基温度大于95℃，加入食用消泡剂，加入量为培养基重量的0.03％,在0.11Mpa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30-45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将上述培养好的200L种子罐种子全部接入培养，培养温度为22±1℃，通气量为1：0.5V/V min，保压4.903-7.0845×104Pa，经3天通气培养，达到对数生长期后即可。终培养体积为200L。
斜面试管培养基：每1升液体含有200克土豆煮汁，20克蔗糖，20克琼脂，余补水至1000毫升，pH值为6.5；
种子罐及发酵罐培养基：每1升液体含有40克麸皮煮汁，30克白砂糖，余补水至1000毫升，pH值为6.5。
实施例4固体培养
接种：接种前培养容器先在超净工作台或百级层流罩内(下)用紫外光照射0.5h；按每个培养容器按7％的接种量将实施例1～3经扩大培养得到的菌种接种到固体培养基上，接种后的容器放入培养室培养。
培养条件：培养室温度为22-24℃，空气相对湿度65％-70％；首先要将培养室遮光，使发菌室基本黑暗。待菌丝体长满料面时(室内培养3～5天)，转入光照培养。接种后定期检查，及时剔除生长势差、感染杂菌的培养容器。此后为诱导形成孢梗束时期，保持培养室温度为20-22℃，相对空气湿度65％～70％，保证有散射光(100Lx～200Lx)诱导孢梗束形成。培养室要适时通风换气，保持发菌室空气新鲜。
实施例5固体培养基
将小麦清洗控水后，加入适量的水，其重量比为小麦:水为1：1.4，混合均匀；装入密封的聚丙烯盒子中(盒子上方盖打孔，孔上贴中有透气膜)；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。
实施例6固体培养基
将大米清洗控水后，加入适量的水，其重量比为大米:水为1：1.3，混合均匀；拌匀后装入密封的聚丙烯盒子中(盒子上方盖打孔，孔上贴中有透气膜)；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。
实施例7固体培养基
将糙米清洗控水后，加入适量的水，其重量比为糙米：水为1：1.5，混合均匀；拌匀后装入密封的聚丙烯盒子中(盒子上方盖打孔，孔上贴中有透气膜)；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。
实施例8固体培养基
将小米清洗控水后，加入适量的水，其重量比为小米:水为1：1.3，混合均匀；拌匀后装入密封的聚丙烯盒子中(盒子上方盖打孔，孔上贴中有透气膜)；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。
实施例9固体培养基
玉米芯69％、棉籽壳16％、木屑11％、石膏3％、石灰1％，固体物料：水＝1：1.5(视原料含水量而定)混合拌匀，拌匀后装入密封的聚丙烯盒子中(盒子上方盖打孔，孔上贴中有透气膜)；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。
实施例10固体培养基
农作物秸秆培养基：玉米秸粉50％、麦杆粉20％、棉花秸20％、黄豆粉5％、玉米粉5％，固体物料：水＝1：1.5(视原料含水量而定)混合拌匀，拌匀后装入密封的聚丙烯盒子中(盒子上方盖打孔，孔上贴中有透气膜)；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。
实施例11固体培养基
农作物皮壳培养基：麦麸皮35％、稻壳粉20％、菜籽壳粉35％、黄豆粉5％、玉米粉5％，固体物料：水＝1：1.5(视原料含水量而定)混合拌匀，拌匀后装入密封的聚丙烯盒子中(盒子上方盖打孔，孔上贴中有透气膜)；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。
实施例12固体培养基
经济林木树枝或茎秆培养基：桑枝粉70％、榆树枝粉20％、黄豆粉5％、玉米粉5％，固体物料：水＝1：1.5(视原料含水量而定)混合拌匀，拌匀后装入密封的聚丙烯盒子中(盒子上方盖打孔，孔上贴中有透气膜)；将装好培养基的培养容器放置灭菌锅内，121℃下灭菌30-50min；灭菌后，培养容器移置缓冲室内，自然冷却至24℃以下移置接种室内。
实施例13孢梗束采收及固定
将实施例1经液体培养的菌种接种到实施例5制备的小麦培养基上，按实施例4进行固体培养，选择垂直生长，长势均匀，高度一致的孢梗束进行采收。用特制的两头直径约略大于瓶口的不锈钢园筒(一端打磨尖锐，见图1)，沿垂直于培养基的方向将孢梗束和固体培养基一同切割下来，然后用切纸刀将下部的培养基切除，仅余0.5cm左右，此过程不可碰断孢梗束。然后将孢梗束连同固体培养基摆放在酒坛正中，孢梗束向四方散开，用小竹棍将其固定在瓶底。向固定好培养基的酒坛中沿瓶壁徐徐倾入基酒至盖过孢梗束顶端1-1.5cm，放入洁净的暗室浸泡后熟。30天后，去掉支撑物，此时孢梗束和培养基不会再上浮，得到极具观赏性的蝉花酒(见图2)。
实施例14孢梗束采收及固定
将实施例2经液体培养的菌种接种到实施例6制备的大米培养基上，按实施例4进行固体培养，选择垂直生长，长势均匀，高度一致的孢梗束进行采收。采收及固定方法同实施例13，区别在于固体培养基削薄至1.0cm左右，支撑物为玻璃棒；35天后去掉支撑物，孢梗束和培养基不会再上浮，得到极具观赏性的蝉花酒。
实施例15孢梗束采收及固定
将实施例3经液体培养的菌种接种到实施例7制备的糙米培养基上，按实施例4进行固体培养，选择垂直生长，长势均匀，高度一致的孢梗束进行采收。采收及固定方法同实施例13，区别在于固体培养基削薄至1.5cm左右，支撑物为不锈钢棒；30天后去掉支撑物，孢梗束和培养基不会再上浮，得到极具观赏性的蝉花酒。
实施例16孢梗束采收及固定
将实施例1经液体培养的菌种接种到实施例9制备的谷物培养基上，按实施例4进行固体培养，选择垂直生长，长势均匀，高度一致的孢梗束进行采收。采收及固定方法同实施例13，35天后去掉支撑物，孢梗束和培养基不会再上浮，得到极具观赏性的蝉花酒。
实施例17孢梗束采收及固定
将实施例2经液体培养的菌种接种到实施例10制备的秸秆培养基上，按实施例4进行固体培养，选择垂直生长，长势均匀，高度一致的孢梗束进行采收。采收及固定方法同实施例14，50天后去掉支撑物，孢梗束和培养基不会再上浮，得到极具观赏性的蝉花酒。
实施例18孢梗束采收及固定
将实施例3经液体培养的菌种接种到实施例11制备的皮壳培养基上，按实施例4进行固体培养，选择垂直生长，长势均匀，高度一致的孢梗束进行采收。采收及固定方法同实施例15。60天去掉支撑物，孢梗束和培养基不会再上浮，得到极具观赏性的蝉花酒。
实施例19孢梗束采收及固定
将实施例1经液体培养的菌种接种到实施例12制备的茎秆培养基上，按实施例4进行固体培养，选择垂直生长，长势均匀，高度一致的孢梗束进行采收。采收及固定方法同实施例13。60天去掉支撑物，孢梗束和培养基不会再上浮，得到极具观赏性的蝉花酒。
实施例20后熟
将实施例13～19蝉花酒继续浸泡45～100天，出窖，蝉花中营养成分充分浸出，得到营养成分含量高且极具观赏性的蝉花酒。
实施例21本发明方法与现有技术制备的蝉花酒有效成分含量比较
将实施例1经液体培养的菌种接种到实施例5制备的小麦培养基上，按实施例4进行固体培养，选择垂直生长，长势均匀，高度一致的孢梗束进行采收；
样品1：直接将孢梗束取下，置于酒坛中，制备成蝉花酒；
样品2：按本发明实施例13方法进行采收和固定，制备成蝉花酒；
样品基酒为古井贡50°酒。
定期测定样品1、2中腺苷和HEA的含量(腺苷测定方法参照“《腺苷的高效液相色谱测定方法》，白鸿主编《保健食品功效测定方法》中国中医药出版社，2011年，p214-215”；HEA测定方法参照“《蛹虫草子实体中N6-(2-羟乙基)-腺苷的分离纯化及抗肿瘤作用》，食用菌学报2013.20(1)：62～65”)。结果见图3～4。
从图3可看出样品1腺苷含量在122天左右达到最高并趋于平稳，样品2在96天左右含量达到最高并趋于平稳；
从图4可看出样品1HEA含量在105天左右达到最高并趋于平稳，样品2在在77天左右达到最高并趋于平稳。
由此可见，本发明制备方法在实现观赏效果的同时，能尽快使孢梗束中的有效成分浸出，图3和4能够明显显示出浸泡相同时间，样品2有效成分含量明显高于比样品1；样品2有效成分含量达到平衡的时间相对于常规方法制备的样品1提前近1个月。
Claims (5)
1.一种蝉花酒的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
步骤1，在蝉花固体培养阶段，将部分固体培养基连同生长于其中的孢梗束按照适于置于容器的形状从整体培养基中分离；
步骤2，将分离的培养基及生长其中的孢梗束置于容器；
步骤3，用支撑物将固体培养基固定于容器底部；
步骤4，向容器中注酒；和
步骤5，固定30天，取出支撑物；
其中，步骤1所述固体培养基为小麦培养基；步骤2将固体培养基置于盛酒容器前，将培养基削薄至厚度为0.5cm；步骤5取出支撑物后继续浸泡60天以上。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1所述的孢梗束为生长至成熟的孢梗束。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3所述支撑物为木头、玻璃、不锈钢或其他任何不与基酒发生反应的材质制成的柱形结构，其高度小于容器底部到容器口的高度。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5取出支撑物后继续浸泡100天以上。
5.如权利要求1-4任一项所述方法制备的蝉花酒。
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2015
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